JPH06315629A - 除タンパク用充填剤およびこれを充填したカートリッジ - Google Patents
除タンパク用充填剤およびこれを充填したカートリッジInfo
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- B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
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Abstract
(57)【要約】
【目的】生体試料等の分析において目的成分を定量する
際に定量の妨害となるタンパク質を除去処理するための
充填剤およびこれを充填したカ−トリッジを提供する。 【構成】ヒドロキシアパタイト繊維の三次元網目状集合
体であって、平均孔半径０.０２〜０.０８μｍ、比表面
積２５〜６５ｍ2／ｇ，平均粒径１〜３０μｍである充
填剤およびこれを充填したカ−トリッジおよび無水リン
酸第２カルシウムとアルカリを２０〜６０％のスラリ−
濃度で反応させて得られる充填剤。
際に定量の妨害となるタンパク質を除去処理するための
充填剤およびこれを充填したカ−トリッジを提供する。 【構成】ヒドロキシアパタイト繊維の三次元網目状集合
体であって、平均孔半径０.０２〜０.０８μｍ、比表面
積２５〜６５ｍ2／ｇ，平均粒径１〜３０μｍである充
填剤およびこれを充填したカ−トリッジおよび無水リン
酸第２カルシウムとアルカリを２０〜６０％のスラリ−
濃度で反応させて得られる充填剤。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、生体試料等の分析、例
えば高速液体クロマトグラフィ−等において目的成分を
定量する際に定量の妨害あるいは測定機器の寿命低下の
原因となるタンパク質を予め除去処理するための充填剤
およびこれを充填したカ−トリッジに関するものであ
る。
えば高速液体クロマトグラフィ−等において目的成分を
定量する際に定量の妨害あるいは測定機器の寿命低下の
原因となるタンパク質を予め除去処理するための充填剤
およびこれを充填したカ−トリッジに関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術とその問題点】従来より生体試料中のアミ
ノ酸の分析や薬物代謝をトレ−スするための分析におい
ては高速液体クロマトグラフィ−による分析が進歩を遂
げ、医療等の分野において有効な手段となってきている
が、大量の試料を正確にかつ簡便に短時間で処理するこ
とは容易でなかった。
ノ酸の分析や薬物代謝をトレ−スするための分析におい
ては高速液体クロマトグラフィ−による分析が進歩を遂
げ、医療等の分野において有効な手段となってきている
が、大量の試料を正確にかつ簡便に短時間で処理するこ
とは容易でなかった。
【０００３】この原因の第１は、生体試料中に大量に含
まれるタンパク質にある。すなわち目的成分の定量の妨
害となったり、あるいは測定機器の寿命低下の原因とな
るために分析に先だって、このタンパク質を除去する必
要がある。この除去方法としては、薬物代謝において
は、トリクロル酢酸を添加して遠心分離をおこなうか、
有機溶媒を用いて抽出をおこなう方法等が一般的であ
る。いずれにしてもその操作が煩雑であり、短時間での
処理がおこなえないという問題があった。また、近年血
液からの感染等、衛生面からも非接触、使い捨てでの処
理が望まれている。
まれるタンパク質にある。すなわち目的成分の定量の妨
害となったり、あるいは測定機器の寿命低下の原因とな
るために分析に先だって、このタンパク質を除去する必
要がある。この除去方法としては、薬物代謝において
は、トリクロル酢酸を添加して遠心分離をおこなうか、
有機溶媒を用いて抽出をおこなう方法等が一般的であ
る。いずれにしてもその操作が煩雑であり、短時間での
処理がおこなえないという問題があった。また、近年血
液からの感染等、衛生面からも非接触、使い捨てでの処
理が望まれている。
【０００４】かかる点に着目して、限外ろ過膜を用いた
フィルタ−を容器に設置した使い捨てのカ−トリッジが
提案されている。この方法では確かに操作は簡便になる
が、比較的高価な限外ろ過膜を使用するため簡便さを追
求すると使い捨てにすればコストが高くなる。また処理
時間も比較的長いため短時間処理という点からも十分な
ものではなかった。
フィルタ−を容器に設置した使い捨てのカ−トリッジが
提案されている。この方法では確かに操作は簡便になる
が、比較的高価な限外ろ過膜を使用するため簡便さを追
求すると使い捨てにすればコストが高くなる。また処理
時間も比較的長いため短時間処理という点からも十分な
ものではなかった。
【０００５】ヒドロキシアパタイトはその吸着性能を利
用して高速液体クロマトグラフィ−のカラム充填剤とし
て使用されている。リン酸と水酸化カルシウムとの反応
により得られる反応スラリ−を噴霧乾燥して得られるヒ
ドロキシアパタイトを圧縮成型後焼結成形体を除タンパ
クのフィルタ−として用いる方法が知られている（特願
平２−４５２９７号）が、このものはタンパク質の除去
性能が必ずしも十分でない。また、リン酸第二カルシウ
ムとアルカリとの反応で得られるヒドロキシアパタイト
の三次元網目状集合体をクロマトグラフィ−のカラム充
填剤として用いることが特開平１−２０１０１５号に記
載されており、この中で溶液中でタンパク質の吸着性能
が示されているが、タンパク質を分析用試料の前処理と
して極めて短時間にほぼ完全に除去する必要のある除タ
ンパク性能については記載がない。
用して高速液体クロマトグラフィ−のカラム充填剤とし
て使用されている。リン酸と水酸化カルシウムとの反応
により得られる反応スラリ−を噴霧乾燥して得られるヒ
ドロキシアパタイトを圧縮成型後焼結成形体を除タンパ
クのフィルタ−として用いる方法が知られている（特願
平２−４５２９７号）が、このものはタンパク質の除去
性能が必ずしも十分でない。また、リン酸第二カルシウ
ムとアルカリとの反応で得られるヒドロキシアパタイト
の三次元網目状集合体をクロマトグラフィ−のカラム充
填剤として用いることが特開平１−２０１０１５号に記
載されており、この中で溶液中でタンパク質の吸着性能
が示されているが、タンパク質を分析用試料の前処理と
して極めて短時間にほぼ完全に除去する必要のある除タ
ンパク性能については記載がない。
【０００６】
【問題点を解決するための具体的手段】本発明者らは、
かかる現状に鑑み鋭意検討した結果、本発明に到達し
た。すなわち本発明は、ヒドロキシアパタイト繊維の三
次元網目状集合体であって、該集合体が平均孔半径０．
０２〜０．０８μｍ、比表面積が２５〜６５ｍ2／ｇ、
平均粒径が１〜３０μｍである除去タンパク用充填剤お
よびこれを充填したカ−トリッジである。
かかる現状に鑑み鋭意検討した結果、本発明に到達し
た。すなわち本発明は、ヒドロキシアパタイト繊維の三
次元網目状集合体であって、該集合体が平均孔半径０．
０２〜０．０８μｍ、比表面積が２５〜６５ｍ2／ｇ、
平均粒径が１〜３０μｍである除去タンパク用充填剤お
よびこれを充填したカ−トリッジである。
【０００７】図１は本発明のヒドロキシアパタイト繊維
の三次元網目状集合体の表面状態を拡大した図面代用写
真であり、ヒドロキシアパタイトの約０．０２〜０．０
７μｍの細長い繊維が複雑に三次元に絡み合った状態と
なっている。
の三次元網目状集合体の表面状態を拡大した図面代用写
真であり、ヒドロキシアパタイトの約０．０２〜０．０
７μｍの細長い繊維が複雑に三次元に絡み合った状態と
なっている。
【０００８】この集合体は繊維と繊維との間隙に形成さ
れる空孔を有しており、水銀圧入法で測定した平均孔半
径は０．０２〜０．０８μｍの範囲である。本発明の充
填剤の製造方法としては、次の方法が例示できる。
れる空孔を有しており、水銀圧入法で測定した平均孔半
径は０．０２〜０．０８μｍの範囲である。本発明の充
填剤の製造方法としては、次の方法が例示できる。
【０００９】無水のリン酸第二カルシウム（ＣａＨＰＯ
4）と水の系にアルカリ源としてＮＨ3 、ＮＨ4ＯＨ、Ｎ
ａＯＨ、ＫＯＨのうち少なくとも１種を加え、ＣａＨＰ
Ｏ4／Ｈ2Ｏスラリ−濃度を２０〜６０％にて反応をおこ
なう。ＣａＨＰＯ4／Ｈ2Ｏスラリ−濃度が２０％未満で
は繊維状結晶が粗く綿状に絡み合った凝集多結晶体とな
り、比表面積が大きくならず、吸着能力を十分に発揮さ
せるためには２５ｍ 2／ｇ以上が好ましく、この濃度以
上での反応が好ましい。
4）と水の系にアルカリ源としてＮＨ3 、ＮＨ4ＯＨ、Ｎ
ａＯＨ、ＫＯＨのうち少なくとも１種を加え、ＣａＨＰ
Ｏ4／Ｈ2Ｏスラリ−濃度を２０〜６０％にて反応をおこ
なう。ＣａＨＰＯ4／Ｈ2Ｏスラリ−濃度が２０％未満で
は繊維状結晶が粗く綿状に絡み合った凝集多結晶体とな
り、比表面積が大きくならず、吸着能力を十分に発揮さ
せるためには２５ｍ 2／ｇ以上が好ましく、この濃度以
上での反応が好ましい。
【００１０】また、スラリ−濃度は上限６０％程度まで
が好ましい。この範囲を越えると反応液の粘度が高くな
り、操作性が悪くなって均質なヒドロキシアパタイトを
得ることができない。 かかる製造法により得られるヒ
ドロキシアパタイトのＣａ／Ｐモル比は１．４〜１．６
の範囲である。また、平均粒径は１〜３０μｍの範囲が
好ましい。この範囲より小さいとハンドリングに問題が
あり、この範囲より大きいと密に充填することができな
い。
が好ましい。この範囲を越えると反応液の粘度が高くな
り、操作性が悪くなって均質なヒドロキシアパタイトを
得ることができない。 かかる製造法により得られるヒ
ドロキシアパタイトのＣａ／Ｐモル比は１．４〜１．６
の範囲である。また、平均粒径は１〜３０μｍの範囲が
好ましい。この範囲より小さいとハンドリングに問題が
あり、この範囲より大きいと密に充填することができな
い。
【００１１】本発明の除タンパク用充填剤は、種々のタ
ンパク質について有効であるが、人体、動物の体液が最
も一般的に対象となるものであり、かかる観点からは、
平均孔半径が０．０２〜０．０８μｍの範囲のものが好
ましく、特に、アルブミン、グロブリンに対する除去性
能を考慮すると平均孔半径が０．０４〜０．０６μｍの
範囲のものが好ましく、このためにもスラリ−濃度は２
０％以上が好ましい。
ンパク質について有効であるが、人体、動物の体液が最
も一般的に対象となるものであり、かかる観点からは、
平均孔半径が０．０２〜０．０８μｍの範囲のものが好
ましく、特に、アルブミン、グロブリンに対する除去性
能を考慮すると平均孔半径が０．０４〜０．０６μｍの
範囲のものが好ましく、このためにもスラリ−濃度は２
０％以上が好ましい。
【００１２】また、比表面積が６５ｍ2／ｇ以上を越え
ると有効な平均孔半径の範囲からはずれるため好ましく
ない。本発明の除タンパク用充填剤は、使い捨てを原則
とするものであり、かかる観点から所定の量をカ−トリ
ッジに充填して用いることが好ましい。そのカ−トリッ
ジの形状、材質等は、特に限定されないが、一般的には
図４に示すような形状のものを用いる。
ると有効な平均孔半径の範囲からはずれるため好ましく
ない。本発明の除タンパク用充填剤は、使い捨てを原則
とするものであり、かかる観点から所定の量をカ−トリ
ッジに充填して用いることが好ましい。そのカ−トリッ
ジの形状、材質等は、特に限定されないが、一般的には
図４に示すような形状のものを用いる。
【００１３】図４は一部断面を示すカ−トリッジ組立図
であり、カ−トリッジ１は全体に円筒状のものを組み立
てて構成されるもので、充填用円筒部２、原液注入口
３、除タンパク試料出口４からなる。５は充填されたヒ
ドロキシアパタイトであり、６はろ紙等のフィルタ−で
ある。材料としては、使い捨てであり、プラスチック材
料を用いるのが一般的である。
であり、カ−トリッジ１は全体に円筒状のものを組み立
てて構成されるもので、充填用円筒部２、原液注入口
３、除タンパク試料出口４からなる。５は充填されたヒ
ドロキシアパタイトであり、６はろ紙等のフィルタ−で
ある。材料としては、使い捨てであり、プラスチック材
料を用いるのが一般的である。
【００１４】ここで、充填部分の径と長さの関係は通
常、長さ／径の比が約１〜３の範囲である。また、充填
部分のボリュウムは、一般に分析用試料として最低限必
要な量６００μｌを考慮して、もとの注入液量との関係
から決定すればよいが、充填部分の量が１ｍｌ程度が標
準となる。この量が少ないと吸着能力が十分ではなく、
所定の必要試料量を確保できず、また多すぎると充填剤
の間隙に滞留する液量が多くなるため必要試料量を確保
するのに要する注入液量が多くなるので、これらを考慮
して決定する。
常、長さ／径の比が約１〜３の範囲である。また、充填
部分のボリュウムは、一般に分析用試料として最低限必
要な量６００μｌを考慮して、もとの注入液量との関係
から決定すればよいが、充填部分の量が１ｍｌ程度が標
準となる。この量が少ないと吸着能力が十分ではなく、
所定の必要試料量を確保できず、また多すぎると充填剤
の間隙に滞留する液量が多くなるため必要試料量を確保
するのに要する注入液量が多くなるので、これらを考慮
して決定する。
【００１５】充填剤の充填密度は特に限定されないが、
小さい方が注入に要する圧力が少なくなる。従って、所
定の必要試料量を確保するために要する時間の制限等を
考慮してこの充填密度は決定すればよいが、一般的には
１ｇ／ｍｌ程度が好ましい。
小さい方が注入に要する圧力が少なくなる。従って、所
定の必要試料量を確保するために要する時間の制限等を
考慮してこの充填密度は決定すればよいが、一般的には
１ｇ／ｍｌ程度が好ましい。
【００１６】本発明の除タンパク用充填剤は、除タンパ
ク能力に優れ、分析に必要な試料量においてほぼ１００
％除去することが可能であるとともに目的成分であるア
ミノ酸等に対しては、ほとんど吸着性能を示さず、極め
て高い回収率で回収が可能である。
ク能力に優れ、分析に必要な試料量においてほぼ１００
％除去することが可能であるとともに目的成分であるア
ミノ酸等に対しては、ほとんど吸着性能を示さず、極め
て高い回収率で回収が可能である。
【００１７】
【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。 製造例１ ６０ｌ反応槽（ＳＵＳ）にて、内部に無水ＣａＨＰＯ4
７．５Ｋｇ、水２５Ｋｇを仕込んだのち加温し、７５℃
で２８％ＮＨ4ＯＨを２．５Ｋｇ，ｐＨ８．０〜８．２
に保ちながら添加し、８時間反応をおこなったのち、生
成物を濾別し十分な水でアルカリを洗浄除去し乾燥した
（Ｎｏ．１）。反応条件を変えて、Ｎｏ．２〜４の製造
をおこなった。
る。 製造例１ ６０ｌ反応槽（ＳＵＳ）にて、内部に無水ＣａＨＰＯ4
７．５Ｋｇ、水２５Ｋｇを仕込んだのち加温し、７５℃
で２８％ＮＨ4ＯＨを２．５Ｋｇ，ｐＨ８．０〜８．２
に保ちながら添加し、８時間反応をおこなったのち、生
成物を濾別し十分な水でアルカリを洗浄除去し乾燥した
（Ｎｏ．１）。反応条件を変えて、Ｎｏ．２〜４の製造
をおこなった。
【００１８】表１に反応条件及び結果を示す。なお、Ｎ
ｏ．１のものについてその表面状態を示したのが図１の
図面代用写真である。
ｏ．１のものについてその表面状態を示したのが図１の
図面代用写真である。
【００１９】
【表１】
【００２０】製造例２ リン酸溶液に水酸化カルシウムスラリ−液を常温で添加
してスラリ−濃度５％にて反応をおこない、２時間、６
０℃で熟成した。この生成スラリ−を噴霧乾燥して得ら
れる造粒品を８００℃で焼成した。
してスラリ−濃度５％にて反応をおこない、２時間、６
０℃で熟成した。この生成スラリ−を噴霧乾燥して得ら
れる造粒品を８００℃で焼成した。
【００２１】この結果得られたヒドロキシアパタイトは
比表面積が２２ｍ2／ｇ、平均粒径が２０μｍであり、
その表面の状態は図２に示す図面代用写真のようであ
り、繊維状ヒドロキシアパタイトが三次元に絡み合った
製造例１のものとは明らかに異なり棒状の一次粒子が粒
成長したものであった。
比表面積が２２ｍ2／ｇ、平均粒径が２０μｍであり、
その表面の状態は図２に示す図面代用写真のようであ
り、繊維状ヒドロキシアパタイトが三次元に絡み合った
製造例１のものとは明らかに異なり棒状の一次粒子が粒
成長したものであった。
【００２２】製造例３ 無水リン酸第二カルシウム（ＣａＨＰＯ4）と水のスラ
リ−溶液に反応温度８０℃でｐＨを１０以下に保ちなが
ら水酸化カルシウムスラリ−溶液を添加し反応をおこな
った。
リ−溶液に反応温度８０℃でｐＨを１０以下に保ちなが
ら水酸化カルシウムスラリ−溶液を添加し反応をおこな
った。
【００２３】この結果得られたヒドロキシアパタイトは
比表面積が７ｍ2／ｇ、平均粒径が１５μｍであり、そ
の表面の状態は図３で示す図面代用写真のように六角柱
状の結晶の集合体であり、製造例１のものとは明らかに
異なったものであった。
比表面積が７ｍ2／ｇ、平均粒径が１５μｍであり、そ
の表面の状態は図３で示す図面代用写真のように六角柱
状の結晶の集合体であり、製造例１のものとは明らかに
異なったものであった。
【００２４】実施例１ 表１のＮｏ．１のヒドロキシアパタイトを概略図４で示
すカ−トリッジ（充填部分９ｍｍΦ×１５ｍｍＬ）にミ
クロスパ−テルで少量ずつ入れ、９ｍｍΦの押し棒を用
いて充填を行い、０．３９ｇを充填した（上下面は濾紙
Ｎｏ．５Ｃで保持）。
すカ−トリッジ（充填部分９ｍｍΦ×１５ｍｍＬ）にミ
クロスパ−テルで少量ずつ入れ、９ｍｍΦの押し棒を用
いて充填を行い、０．３９ｇを充填した（上下面は濾紙
Ｎｏ．５Ｃで保持）。
【００２５】牛血清を純水（逆浸透膜、イオン交換処
理）で２倍に希釈後、０．４５μｍメンブレンフィルタ
−でろ過した液を２ｍｌの硝子製シリンジに２ｍｌ測り
取り、カ−トリッジに接続後静かに押し出した。この結
果１分２０秒後に１滴、以下１０秒に１滴の割合で採取
できるように送液し、合計２分５０秒後に送液を中止し
た。このそれぞれの１滴についてタンパク質の除去率を
測定した。
理）で２倍に希釈後、０．４５μｍメンブレンフィルタ
−でろ過した液を２ｍｌの硝子製シリンジに２ｍｌ測り
取り、カ−トリッジに接続後静かに押し出した。この結
果１分２０秒後に１滴、以下１０秒に１滴の割合で採取
できるように送液し、合計２分５０秒後に送液を中止し
た。このそれぞれの１滴についてタンパク質の除去率を
測定した。
【００２６】除去率は次のように測定した。タンパク質
と色素が結合すると色調変化をおこすことを利用した色
素結合法により、Ｂｉｏｒａｄ社のプロテインアッセイ
試薬を使用し、５９５ｎｍの吸光度を測定することによ
り求めた。
と色素が結合すると色調変化をおこすことを利用した色
素結合法により、Ｂｉｏｒａｄ社のプロテインアッセイ
試薬を使用し、５９５ｎｍの吸光度を測定することによ
り求めた。
【００２７】この結果、８滴までは除去率が９８％を示
しており、アミノ酸分析に必要な量０．２ｍｌ（約５
滴）を十分に達成していることを確認した。 実施例２〜４ 実施例１と同様にしてＮｏ．２〜４の各ヒドロキシアパ
タイトについても同様の測定をおこなった結果、実施例
１と同様にいずれも８滴までは除去率９８％を示してい
た。
しており、アミノ酸分析に必要な量０．２ｍｌ（約５
滴）を十分に達成していることを確認した。 実施例２〜４ 実施例１と同様にしてＮｏ．２〜４の各ヒドロキシアパ
タイトについても同様の測定をおこなった結果、実施例
１と同様にいずれも８滴までは除去率９８％を示してい
た。
【００２８】比較例１、２ 製造例２（比較例１）および製造例３（比較例２）で製
造したヒドロキシアパタイトを充填剤として使用し、実
施例１と同様にして測定した結果、製造例２のものにつ
いては、２滴目で除去率９７％、３滴目で除去率９１％
であった。製造例３のものは、３滴目で除去率９７％、
４滴目で除去率９４％であり、いずれも除タンパク性能
が十分でなかった。
造したヒドロキシアパタイトを充填剤として使用し、実
施例１と同様にして測定した結果、製造例２のものにつ
いては、２滴目で除去率９７％、３滴目で除去率９１％
であった。製造例３のものは、３滴目で除去率９７％、
４滴目で除去率９４％であり、いずれも除タンパク性能
が十分でなかった。
【００２９】実施例５ アミノ酸標準液（２ｍｇ／ｄｌ）＋１０ｍＭリン酸ナト
リウム緩衝液（ｐＨ７．７）（１＋３）２ｍｌを用い実
施例１と同じ要領でカ−トリッジを通液させた。
リウム緩衝液（ｐＨ７．７）（１＋３）２ｍｌを用い実
施例１と同じ要領でカ−トリッジを通液させた。
【００３０】この通過液をＡｓａｈｉｐａｋ Ｇ−５２
０（５０×０．７ｃｍ ｉ．ｄ．）、検出２５０ｎｍ、
移動相（３０ｍＭリン酸ナトリウムと１５０ｍＭ硫酸ナ
トリウム含有のｐＨ７．０水溶液）、流速１ｍＭ／ｍｉ
ｎの条件で通常のアミノ酸分析（ニンヒドリン法）によ
りアミノ酸の回収率を測定した。この結果を表２に示し
た。
０（５０×０．７ｃｍ ｉ．ｄ．）、検出２５０ｎｍ、
移動相（３０ｍＭリン酸ナトリウムと１５０ｍＭ硫酸ナ
トリウム含有のｐＨ７．０水溶液）、流速１ｍＭ／ｍｉ
ｎの条件で通常のアミノ酸分析（ニンヒドリン法）によ
りアミノ酸の回収率を測定した。この結果を表２に示し
た。
【００３１】
【表２】
【００３２】実施例６ 製造例１のＮｏ．１の充填剤を用い、実施例１と同様に
してカ−トリッジに充填し、人の血漿について除タンパ
ク性能を測定した。この条件と結果を表３に示した。
してカ−トリッジに充填し、人の血漿について除タンパ
ク性能を測定した。この条件と結果を表３に示した。
【００３３】
【表３】
【００３４】実施例７ 血清５０μｌに蒸留水４５０μｌ、生理食塩水５００μ
ｌ、Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（気管支喘息薬）２０μ
ｌ（５０ｐｐｍ）、７−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙ
ｌ）ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（１Ｓ）１０μｌ（１０
０ｐｐｍ）（内部標準物質）を添加混合し、実施例１で
調整充填したカ−トリッジに通液した。この通過液を用
いて高速液体クロマトグラフィ−により分析をおこない
検量線法によりＴｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅの回収率を測
定した結果、９２．９％であった。なお、高速液体クロ
マトグラフィ−の操作条件は次のとおりである。
ｌ、Ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（気管支喘息薬）２０μ
ｌ（５０ｐｐｍ）、７−（２−Ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙ
ｌ）ｔｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅ（１Ｓ）１０μｌ（１０
０ｐｐｍ）（内部標準物質）を添加混合し、実施例１で
調整充填したカ−トリッジに通液した。この通過液を用
いて高速液体クロマトグラフィ−により分析をおこない
検量線法によりＴｈｅｏｐｈｙｌｌｉｎｅの回収率を測
定した結果、９２．９％であった。なお、高速液体クロ
マトグラフィ−の操作条件は次のとおりである。
【００３５】波長 ２８０ｎｍ カラム Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ、０．４６ ｉ．
ｄ．Ｘ １５ｃｍ 移動相 アセトニトリル＋水（１０＋９０） 流量 １ｍｌ／ｍｉｎ 注入量 ２０μｌ
ｄ．Ｘ １５ｃｍ 移動相 アセトニトリル＋水（１０＋９０） 流量 １ｍｌ／ｍｉｎ 注入量 ２０μｌ
【００３６】
【発明の効果】本発明の充填剤は、生体試料の分析用試
料中に含まれるタンパク質を効率よく除去できるもので
あり、カ−トリッジに充填して使用することで簡単に除
タンパクでき、使い捨て方式により衛生的にかつ効率よ
く目的成分の分析が可能となるものである。
料中に含まれるタンパク質を効率よく除去できるもので
あり、カ−トリッジに充填して使用することで簡単に除
タンパクでき、使い捨て方式により衛生的にかつ効率よ
く目的成分の分析が可能となるものである。
【図１】本発明の製造例１によるヒドロキシアパタイト
の表面状態を示す図面代用写真である。
の表面状態を示す図面代用写真である。
【図２】本発明とは異なる製造例２によるヒドロキシア
パタイトの表面状態を示す図面代用写真である。
パタイトの表面状態を示す図面代用写真である。
【図３】本発明とは異なる製造例３によるヒドロキシア
パタイトの表面状態を示す図面代用写真である。
パタイトの表面状態を示す図面代用写真である。
【図４】本発明の充填剤を充填するためのカ−トリッジ
の一例を示す一部断面図である。
の一例を示す一部断面図である。
【符号の説明】１ ．カ−トリッジ ２．充填用円筒部 ３．原液注入口 ４．除タンパク試料出口 ５．ヒドロキシアパタイト ６．フィルタ−
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成４年１１月２７日
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１
【補正方法】変更
【補正内容】
【図１】
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図２
【補正方法】変更
【補正内容】
【図２】
【手続補正３】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図３
【補正方法】変更
【補正内容】
【図３】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 川崎 力 東京都杉並区下高井戸１−３−11 (72)発明者 小林 亘 山形県鶴岡市みどり町33−４ (72)発明者 権藤 慶子 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社中央研究所内 (72)発明者 岩瀬 廣 神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の 素株式会社中央研究所内
Claims (3)
- 【請求項１】 ヒドロキシアパタイト繊維の三次元網目
状集合体であって、該集合体が平均孔半径０．０２〜
０．０８μｍ、比表面積が２５〜６５ｍ2／ｇ、平均粒
径が１〜３０μｍであることを特徴とする除タンパク用
充填剤。 - 【請求項２】 ヒドロキシアパタイト繊維の三次元網目
状集合体が無水のリン酸第二カルシウム（ＣａＨＰ
Ｏ4）と水の系にアルカリ源としてＮＨ3、ＮＨ4ＯＨ、
ＮａＯＨ、ＫＯＨのうち少なくとも１種を加え、ＣａＨ
ＰＯ4／Ｈ2Ｏスラリ−濃度を２０〜６０％にて反応をお
こなうことにより得られるＣａ／Ｐモル比１．４〜１．
６の範囲である請求項１記載の除タンパク用充填剤。 - 【請求項３】 ヒドロキシアパタイト繊維の三次元網目
状集合体であって、該集合体が平均孔半径０．０２〜
０．０８μｍ、比表面積が２５〜６５ｍ2／ｇ、平均粒
径が１〜３０μｍである充填剤を充填してなる除タンパ
ク用カ−トリッジ。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3300867A JPH06315629A (ja) | 1991-11-15 | 1991-11-15 | 除タンパク用充填剤およびこれを充填したカートリッジ |
| US07/974,733 US5360544A (en) | 1991-11-15 | 1992-11-13 | Deproteinization filler and cartridge containing same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3300867A JPH06315629A (ja) | 1991-11-15 | 1991-11-15 | 除タンパク用充填剤およびこれを充填したカートリッジ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06315629A true JPH06315629A (ja) | 1994-11-15 |
Family
ID=17890067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3300867A Pending JPH06315629A (ja) | 1991-11-15 | 1991-11-15 | 除タンパク用充填剤およびこれを充填したカートリッジ |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5360544A (ja) |
| JP (1) | JPH06315629A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8620059B2 (en) | 2007-12-13 | 2013-12-31 | Fpinnovations | Characterizing wood furnish by edge pixelated imaging |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07198701A (ja) * | 1993-11-26 | 1995-08-01 | Ngk Insulators Ltd | 低圧高速液体クロマトグラフィー用カラム、低圧高速液体クロマトグラフィー用カラム装置及び同カラム装置の使用方法 |
| US6177008B1 (en) * | 1996-08-01 | 2001-01-23 | Merck & Co., Inc. | Dual compartment solid phase extraction cartridge |
| EP0943619B1 (en) * | 1998-03-19 | 2004-11-10 | Hitachi, Ltd. | Chip for use in nucleic acid separation, structural element and process for forming the structural element |
| JP3490329B2 (ja) * | 1999-03-04 | 2004-01-26 | 株式会社日立製作所 | 核酸分離容器、核酸分離容器の製造方法及び核酸の分離方法 |
| US6565745B2 (en) * | 2001-08-01 | 2003-05-20 | Isco, Inc. | Disposable chromatographic columns |
| US20050242018A1 (en) * | 2001-08-01 | 2005-11-03 | Teledyne Isco, Inc. | Disposable chromatographic columns |
| US7351332B2 (en) * | 2003-10-17 | 2008-04-01 | Varian, Inc. | Chromatography cartridge and method for manufacturing a chromatography cartridge |
| US20070181479A1 (en) * | 2005-11-21 | 2007-08-09 | Pentax Corporation | Column and method of manufacturing the column |
| JP5724050B2 (ja) * | 2009-09-28 | 2015-05-27 | Hoya株式会社 | 粉体、粉体の製造方法、吸着装置 |
| JP2018531210A (ja) * | 2015-09-25 | 2018-10-25 | クリーン ワールド テクノロジーズ リミテッドＣｌｅａｎ Ｗｏｒｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ． | リン酸カルシウム組成物を生産すること |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5039408A (en) * | 1986-07-05 | 1991-08-13 | Asahi Kogaku Kogyo K.K. | Packing material for liquid chromatography |
| US3737516A (en) * | 1971-03-05 | 1973-06-05 | Du Pont | Calcium-deficient hydroxylapatite for use in column chromatography |
| US4798886A (en) * | 1986-03-24 | 1989-01-17 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Mutual separation of proteins |
| EP0239970A3 (en) * | 1986-03-31 | 1988-04-20 | Toa Nenryo Kogyo Kabushiki Kaisha | Assemblage of hydroxyl apatite particles and liquid chromatography column using the same |
| US5171440A (en) * | 1987-09-17 | 1992-12-15 | Asahi Kogaku Kogyo K.K. | Column for liquid chromatography |
| EP0313090B1 (en) * | 1987-10-22 | 1994-03-02 | Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Porous ceramic material |
| JPH01201015A (ja) * | 1988-02-05 | 1989-08-14 | Central Glass Co Ltd | クロマトグラフィー用ヒドロキシアパタイトの製造法 |
| US5205928A (en) * | 1988-03-11 | 1993-04-27 | Kanto Kagaku Kabushiki Kaisha | Process for the preparation of microspherical sintered bodies of hydroxyapatite and a chromatographic packing material comprising the microspherical sintered bodies of hydroxyapatite |
| US4880610A (en) * | 1988-04-20 | 1989-11-14 | Norian Corporation | In situ calcium phosphate minerals--method and composition |
| JPH03249911A (ja) * | 1990-02-26 | 1991-11-07 | Central Glass Co Ltd | 除タンパク用セラミックフィルター |
-
1991
- 1991-11-15 JP JP3300867A patent/JPH06315629A/ja active Pending
-
1992
- 1992-11-13 US US07/974,733 patent/US5360544A/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8620059B2 (en) | 2007-12-13 | 2013-12-31 | Fpinnovations | Characterizing wood furnish by edge pixelated imaging |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5360544A (en) | 1994-11-01 |
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