JPH06237761A - 抗寄生体化合物製造用ストレプトミセス株とそれによる製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】新規アベルメクチン−産生菌、ストレプトミセ
ス・アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００
５に関する。 【構成】純粋培養したストレプトミセス・アベルミチリ
ス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５又はそのアベル
メクチン−産生突然変異体又は変種を同化可能な炭素、
窒素及び無機塩源を含む水性培養倍地中でアベルメクチ
ン類１種又はそれ以上が産生されるまで培養し、そのア
ベルメクチン又はアベルメクチン類を回収することから
なるアベルメクチン類１種又はそれ以上を生産する製
法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【従来の技術】抗寄生体活性を持つ関連化合物の複合体
であるアベルメクチン類は、ストレプトミセス・アベル
ミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ・ａｖｅｒｍｉｔ
ｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ３１２６７、３１２７１と３１２７
２株の好気性発酵で製造されることが知られている。た
とえば、米国特許第４３１０５１９号と第４４２９０４
２号参照。前述の後２株は各々Ｓ．アベルミチリスＡＴ
ＣＣ３１２６７の紫外線照射により得た菌の凍結バイア
ルおよび凍結乾燥管である。

【０００２】前記米国特許が記載するＳ．アベルミチリ
スの株は一般的にＣ−０７６（アベルメクチン類、下記
式Ｉ）と呼ばれる一群の物質を産生する。この群はアベ
ルメクチンＡ１ａ、Ａ１ｂ、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、Ｂ１ａ、
Ｂ１ｂ、Ｂ２ａとＢ２ｂとして記載される別個であるが
近縁な８化合物よりなる。これらの化合物の「ａ」の系
統は２５位の置換基が（Ｓ）−二級−ブチルである天然
アベルメクチン類を示し、これらの天然アベルメクチン
類の「ｂ」の系統は２５位の置換基がイソプロピルであ
る。符号「Ａ」と「Ｂ」は５−位の置換基が各々でメト
キシまたはヒドロキシであるアベルメクチン類を示す。
最後に、数字「１」は２２〜２３位に二重結合が存在す
るアベルメクチン類を示し；数字「２」は２２位に水素
を２３位にヒドロキシを持つアベルメクチン類を示す。

【０００３】それで、アベルメクチン類は式Ｉの化合物
である：

【化１】 ［ここに、破線は一重または二重結合を示し；Ｒ¹はＨ
またはヒドロキシであるが、ヒドロキシは破線が一重結
合である時にのみ存在しうる；Ｒ²はイソプロピルまた
は２級ブチルであり；そしてＲ³はメトキシまたはヒド
ロキシである］

【０００４】Ｓ．アベルミチリスの他の株は一種または
それ以上の２５−位の置換基がイソプロピルまたは
（Ｓ）−二級−ブチル（１−メチルプロピル）である既
知または「天然」のアベルメクチン類を産生するか、ま
たは２５−位の置換基がイソプロピルでも（Ｓ）−二級
−ブチルでもない「非−天然」アベルメクチン類を産生
することが知られている。例えば、Ｓ．アベルミチリス
ＡＴＣＣ３１７８０は米国特許第４３７８３５３号に開
示され；ＡＴＣＣ５３５６７とＡＴＣＣ５３５６８は欧
州特許出願（ＥＰ）２７６１３１に記載され；ＡＴＣＣ
５３６９２はＥＰ２７６１０３で議論され；そしてＮＣ
ＩＢ１２１２１の記載はＥＰ２１４７３１に見出され
る。けれども、これらのストレプトミセス・アベルミチ
リス株の各々はＳ．アベルミチリス・ＡＴＣＣ３１２６
７株の直接または間接の子孫である。それで、アベルメ
クチン化合物１種またはそれ以上を産生できる前記引用
Ｓ．アベルミチリス株はその親株とその子孫のみを含
む。もう一つのＳ．アベルミチリスの株であるＡＴＣＣ
５３８１４は文献（米国特許第５０１５６６２号）に記
載された。この株は一連のミルベマイシン型化合物の生
物変換能とアベルメクチン類の実質的な量を産生できな
いことによって識別される。

【発明が解決しようとする課題】

【０００５】本発明は新規アベルメクチン−産生菌、ス
トレプトミセス・アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲ
ＲＬ２１００５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ・ａｖｅｒ
ｍｉｔｉｌｉｓ・亜種・ｎｉｇｅｒ・ＮＲＲＬ２１００
５）に関する。本発明はさらにストレプトミセス・アベ
ルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５を用い
るアベルメクチン類生産のための新規製法に関する。

【課題を解決するための手段】

【０００６】本発明は微生物ストレプトミセス・アベル
ミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５またはそ
のアベルメクチン−産生突然変異体または変種の生物学
的に純粋な培養物に関する。本発明はさらにストレプト
ミセス・アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１
００５またはそのアベルメクチン−産生突然変異体また
は変種を同化可能な炭素、窒素および無機塩源を含む水
性培養培地中で好気的液中培養条件下にアベルメクチン
類１種またはそれ以上が産生されるまで培養し、そして
そのアベルメクチンまたはアベルメクチン類を回収する
ことからなるアベルメクチン類１種またはそれ以上を生
産する製法に関する。

【０００７】図１はストレプトミセス・アベルミチリス
・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５（Ａ５８２６７．
２）と他のストレプトミセス・アベルミチリス種との樹
状図を示すグラフである。図２はＡ５８２６７．２とス
トレプトミセス・アベルミチリス種との間の関係を示す
脂肪酸分析からの主成分分析のプロットを示すグラフで
ある。

【０００８】本発明の一面は生物学的に純粋な微生物ス
トレプトミセス・アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲ
ＲＬ２１００５（以下、ＮＲＲＬ２１００５株）または
そのアベルメクチン−産生突然変異体または変種の菌に
関する。本発明のアベルメクチン類を産生する新規微生
物を便宜的にＡ５８２６７．２菌とも呼ぶ。Ａ５８２６
７．２菌はＡ５８２６７菌の天然の変種であるＡ５８２
６７．２１菌の改良株である。Ａ５８２６７菌はイタリ
ーで採集した土壌標本から単離された。

【０００９】Ａ５８２６７．２培養物はブタペスト条約
に従ってＮｏｒｔｈｅｒｎ・Ｒｅｇｉｏｎａｌ・Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ・Ｃｅｎｔｅｒ、Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
・Ｒｅｓｅａｒｃｈ・Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎｏｒｔｈ・Ｃ
ｅｎｔｒａｌ・Ｒｅｇｉｏｎ・Ｕｎｉｔｅｄ・Ｓｔａｔ
ｅｓ・Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ・ｏｆ・Ａｇｒｉｃｕｌｔ
ｕｒｅ、１８１５・Ｎｏｒｔｈ・Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
・Ｓｔｒｅｅｔ、Ｐｅｏｒｉａ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ・６
１６０４に寄託され、受託番号ＮＲＲＬ２１００５を指
定され、ここの保管菌株の一部をなしている。この出願
に付与されるどの特許でも有効な間はＰｅｏｒｉａ、Ｉ
ｌｌｉｎｏｉｓのＮｏｒｔｈｅｒｎ・Ｒｅｇｉｏｎａｌ
・Ｒｅｓｅａｒｃｈ・Ｃｅｎｔｅｒにおけるこの寄託菌
株の永続性および公衆による容易な入手が与えられてい
る。その培養物は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．１．１４条と３５
Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１２条の下で、この出願の係属期間には
入手できる。この菌の公衆の入手に関する全制限は特許
付与後は必然的に除かれる。

【００１０】Ａ５８２６７．２菌（ＮＲＲＬ２１００５
株）の分類学的研究はＬｉｌｌｙ・Ｒｅｓｅａｒｃｈ・
ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＦｒｅｄｅｒｉｃｋ・Ｐ．
Ｍｅｒｔｚが行った。これらの研究に基づき、この新微
生物はストレプトミセス属、アベルミチリス種の新規亜
種（株）として分類され、ストレプトミセス・アベルミ
チリス・亜種・ニガーの名称が提案された。この分類は
直接の研究所分類および類似種の刊行物記載の検討に基
づく。

【００１１】使用した方法 分類学的研究は国際ストレプトミセス・プロジェクト
（ＩＳＰ）がストレプトミセス種の特性解析のために推
薦する方法［Ｓｈｉｒｌｉｎｇ，Ｅ．Ｂ．とＧｏｔｔｌ
ｉｅｂ，Ｄ．、「Ｍｅｔｈｏｄｓ・ｆｏｒ・ｃｈａｒａ
ｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ・ｏｆ・Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ・ｓｐｅｃｉｅｓ」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌ．、１６：３１３〜３４０（１９６
６）］およびノカルデイア種の特性解析のために推薦す
るもの［Ｇｏｒｄｏｎ，Ｒ．Ｅ．、Ｂａｒｎｅｔｔ，
Ｄ．Ａ．、Ｈａｎｄｅｒｈａｎ，Ｊ．Ｅ．とＰａｎｇ，
Ｃ．Ｈ．、「Ｎｏｃａｒｄｉａ・ｃｏｅｌｉａｃａ、Ｎ
ｏｃａｒｄｉａ・ａｕｔｏｔｒｏｐｈｉｃａ・ａｎｄ・
ｔｈｅ・Ｎｏｃａｒｄｉｎ・ｓｔｒａｉｎ」、Ｉｎｔ．
Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、２４（１）：５
４〜６３（１９７４）］を用いて行った。

【００１２】ＩＳＣＣ−ＮＢＳのセントロイド色彩表、
標準標本番号２１０６（Ｎａｔｉｏｎａｌ・Ｂｕｒｅａ
ｕ・ｏｆ・Ｓｔａｎｄａｒｄｓ、１９５８、Ｕ．Ｓ．Ｄ
ｅｐａｒｔｍｅｎｔ・ｏｆ・Ｃｏｍｍｅｒｃｅ，Ｗａｓ
ｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．）を色彩名を決めるために用
いた。形態学は可視光線顕微鏡と走査型電子顕微鏡（Ｓ
ＥＭ）を用いて行った。

【００１３】ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）の異性体お
よび全細胞加水分解物中の炭水化物はＢｅｃｋｅｒな
ど、「Ｒａｐｉｄ・Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ・
ｂｅｔｗｅｅｎ・Ｎｏｃａｒｄｉａ・ａｎｄ・Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ・ｂｙ・Ｐａｐｅｒ・Ｃｈｒｏｍａｔ
ｏｇｒａｐｈｙ・ｏｆ・Ｗｈｏｌｅ−ｃｅｌｌ・Ｈｙｄ
ｒｏｌｙｓａｔｅｓ」、Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ．、１２：４２１〜４２３（１９６４）とＬｅｃｈｅ
ｖａｌｉｅｒなど、Ａ・Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ・Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ・Ａｐｐｒｏａｃｈ、ＤｉｅｔｚとＴｈ
ａｙｅｒ（編）、Ｓｏｃｉｅｔｙ・ｆｏｒ・Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉａｌ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｐｅｃｉａ
ｌ・Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ・Ｎｏ．６、Ａｒｌｉｎｇ
ｔｏｎ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ、２２７〜２３３頁のクロマ
トグラフィー法によって確証した。抗生物質に対する耐
性は接種したＩＳＰ・Ｎｏ．２寒天板の表面に抗生物質
感受性ディスクを貼付して測定した。耐性は阻止帯が観
察されない時は（＋）と、阻止帯が観察された時は
（−）と評価した。

【００１４】メナキノンの組成はＫｒｏｐｐｅｎｓｔｅ
ｄｔ，Ｒ，Ｍ，、「Ｃｈｅｍｉｃａｌ・Ｍｅｔｈｏｄｓ
・ｉｎ・Ｂａｃｔｅｒｉａｌ・Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
ｓ」、Ｍ．ＧｏｏｄｆｅｌｌｏｗとＤ．Ｅ．Ｍｉｎｎｉ
ｋｉｎ（編）、１７３〜１９６頁（１９８５）；および
Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｍ．Ｄ．、前出、２６７〜２８５頁の
操作に従って測定した。脂肪酸分析はＭｉｌｌｅｒ，
Ｌ．など、「Ｂａｃｔｅｒｉａｌ・Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ・ｂｙ・Ｇａｓ・Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐ
ｈｙ・ｏｆ・Ｗｈｏｌｅ−Ｃｅｌｌ・Ｆａｔｔｙ・Ａｃ
ｉｄｓ」、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ・Ａｐｐｌ
ｉｃａｔｉｏｎ・Ｎｏｔｅ・２２８〜４１、８頁（１９
８５）のＨＰ５８９８Ａ微生物確認システムを用いて行
った。

【００１５】脂肪酸メチルエステルは同じ条件下に生育
した凍結乾燥全細胞から作った。ＮａＣｌ耐性はＩＳＰ
２番の寒天に所望濃度になるようにＮａＣｌを加えて測
定した。図１に示した樹状図はユークリッド距離に基づ
き、コンピュータで作製した。図２に示した主成分分析
は２次元で、コンピュータで作製した。

【００１６】菌の特徴 Ａ５８２６７．２菌は殆どの培地でよく生育せず、複合
培地または合成培地のどちらでも気中菌糸を造らない。
裏側の色は黄褐色であるが、Ｂｅｎｎｅｔｔｓ寒天に生
育した時だけは明瞭な黒色色素が生成する。ＩＳＰ培地
２では淡い明褐色の可溶性色素が、Ｂｅｎｎｅｔｔｓ寒
天中には帯赤褐色の可溶性色素が生成する。表１はこれ
らの菌の特徴を示す。

【００１７】

【表１】 ¹３０℃１８日間インキュベート² ＮＰＢＭ＝ヌトリソイフラワー５ｇ、ピーナッツミー
ル１５ｇ、ブラックストラップ糖蜜 ５ｇ、ディスティ
ラーズグレインズ５ｇ、オートミール５ｇ、グリセリン
１ｇ、馬鈴薯デキストリン５０ｇ、ツァペックミネラル
ミックス２ｍＬ、脱イオン水１Ｌ。

【００１８】形態学的特徴 Ａ５８２６７．２菌は気中菌糸は作らない。その結果、
形態学的および胞子表面の研究は不可能であった。胞子
嚢、不動毛と菌核は観察されなかった。Ａ５８２６７．
２菌は固体または液体培地で生育する間に分裂しなかっ
た。

【００１９】生理学的特徴 Ａ５８２６７．２菌は基本培地ＩＳＰ培地９では下記炭
水化物を利用した：Ｄ及びＬ−アラビノース、セロビオ
ース、Ｄ−果糖、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−葡萄糖、グリ
セリン、グリコーゲン、イソ−イノシトール、イヌリ
ン、Ｄ−マルトース、Ｄ−マンニトール、Ｄ−マンノー
ス、メレビオース、Ｄ−ラフィノース、Ｌ−ラムノー
ス、Ｄ−リボース、トレハロース、キシリトールおよび
Ｄ−キシロース。Ａ５８２６７．２菌は基本培地ＩＳＰ
培地９では下記炭水化物を利用できなかった：アドニト
ール、セルロース、デキストリン、ズルシトール、エタ
ノール、イソ−エリスリトール、Ｄ−乳糖、メリジトー
ス、ａ−メチル−Ｄ−グルコシド、サリシン、ソルビト
ール、Ｌ−ソルボースおよび蔗糖。

【００２０】Ａ５８２６７．２はアデニン、マレイン酸
カルシウム、カゼイン、澱粉および尿素を分解した。Ａ
５８２６７．２はカタラーゼ、Ｈ₂Ｓおよび液状ゼラチ
ンを作り、５０℃８時間の接触でも生存できた。Ａ５８
２６７．２は６％およびそこまでの濃度のＮａＣｌに耐
性であった。Ａ５８２６７．２はアラントイン、エラス
チン、エスクリン、グアニン、馬尿酸塩、ヒポキサンチ
ン、テストステロン、Ｌ−チロシンまたはキサンチンを
加水分解できなかった。Ａ５８２６７．２はメラノイド
色素を産生せず、硝酸塩を還元せず、またホスファター
ゼを産生せず、また５０ｍｇ／ｍＬの濃度でリゾチーム
に耐性ではなかった。

【００２１】Ａ５８２６７．２菌はリンコマイシン２μ
ｇ［マイクログラム］、ナリジキシン酸３０μｇ、ペニ
シリンＧ１０単位、ポリミキシンＢ３００単位、トリメ
トプリム５μｇに耐性であった。Ａ５８２６７．２はバ
チトラシン１０単位、セファロチン３０μｇ、クロロマ
イセチン３０μｇ、エリスロマイシン１５μｇ、ゲンタ
マイシン１０μｇ、ネオマイシン３０μｇ、ノボビオシ
ン３０μｇ、オレアンドマイシン１５μｇ、リファンピ
ン５μｇ、ストレプトマイシン１０μｇ、テトラサイク
リン３０μｇ、トブラマイシン１０μｇおよびバンコマ
イシン３０μｇに感受性であった。Ａ５８２６７．２菌
は１５から３７℃の温度範囲で生育した。至適生育温度
は約３０℃であると思われる。

【００２２】細胞壁の分析 親株Ａ５８２６７．２１の細胞壁の分析は加水分解され
た全細胞はＬＬ−ジアミノピメリン酸（ＤＡＰ）を含む
ことを示した。全細胞の抽出物中に存在する糖類はグル
コースとリボースであった。脂肪酸の型は２Ｃで、主な
メナキノンはＭＫ−９（Ｈ６）であった。測定ではスト
レプトミセス属の典型的な細胞壁型を示し、Ａ５８２６
７．２株も同様であると期待される。

【００２３】Ａ５８２６７．２株の確認 Ａ５８２６７．２菌はＩ型の細胞壁、全糖パターンＮＣ
型、および主としてＭＫ−９（Ｈ６）のメナキノン組成
を持つと信じられる。Ａ５８２６７．２のこれらの化学
分類学的性質および培養および形態学的特徴はこの分離
株のストレプトミセス属への帰属［Ｌｅｃｈｅｖａｌｉ
ｅｒなど、「Ｃｈｅｍｉｃａｌ・Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏ
ｎ・ａｓ・ａ・Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ・ｉｎ・ｔｈｅ・Ｃ
ｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ・ｏｆ・Ａｅｒｏｂｉｃ・
Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ」、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ
ｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、２０：４３５〜４４３（１
９７０）参照］を支持する。

【００２４】ＡＴＣＣの「Ｃａｔａｌｏｇｕｅ・ｏｆ・
Ｂａｃｔｅｒｉａ・ａｎｄ・Ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇ
ｅｓ」、１８版（１９９２）にはストレプトミセス・ア
ベルミチリスの１１株が記載されているが、Ｓ．アベル
ミチリスＡＴＣＣ３１２６７はこの１１株の中の１０株
の直接または間接の親株として全文献に確認されてい
る。ＡＴＣＣ３１２６７（Ａ５４５０８）が直接の親株
でない時、多くは第一世代の子孫であるＡＴＣＣ３１２
７２（Ａ５４５０８．３）が直接の親株である。ＡＴＣ
Ｃ３１２６７または３１２７２の子孫の文献記載は子孫
一般は親株の特徴を持つが、いくつかのマイナーな独特
な特徴も含むことを指摘している（たとえば、ＥＰ２７
６１３１中のＡＴＣＣ５３５６７および５３５６８の分
類学的記載参照）。それで、Ｓ．アベルミチリスの１株
ＡＴＣＣ３１２６７／Ａ５４５０８およびその第一世代
子孫の一つ（ＡＴＣＣ３１２７２／Ａ５４５０８．３）
を除く全部の直接または間接の親株をＡＴＣＣ２１００
５（Ａ５８２６７．２）株を比較するための株として選
択した。

【００２５】一つの高度に決定的な比較として、脂肪酸
分析をＡ５８２６７．２菌、Ａ５４５０８菌およびＡ５
４５０８．３菌について行った。表２は各株に見出され
た特定の脂肪酸の百分率を示す。

【００２６】

【表２】 表２ Ａ５８２６７．２およびストレプトミセス・アベルミチリス２株の脂肪酸 組成¹ ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 脂肪酸 A58267.2 A54508 A54508.3 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 14:0 イソ（イソパルミチ 3.36 7.95 4.67 ン酸） 15:0 イソ 22.30 11.11 11.24 15:0 アンテイソ 19.29 21.41 22.99 15:0 （ペンタデカン酸） 2.45 2.08 2.17 16:1 イソＨ 4.23 4.68 1.96 16:0 イソ（イソパルミチ 14.02 19.85 16.43 ン酸） 16:1 シス９（パルミトー 3.93 3.31 2.82 ル酸） 16:0 （パルミチン酸） 4.53 3.26 5.14 17:1 イソＦ 7.57 6.07 6.27 17:1 アンテイソＣ 3.42 3.56 3.07 17:0 イソ（イソマルガリ 5.51 5.12 7.83 ン酸） 17:0 アンテイソ 5.88 8.23 11.93 ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━¹ 細胞は２８℃のＴＢＳ中で４日間で生育した。

【００２７】コンピュータで作製した脂肪酸プロファイ
ルから構成した樹状図を図１に示す。この樹状図はユー
クリッド距離によって示したＡ５８２６７．２の他のス
トレプトミセス・アベルミチリス株に対する関係を示
す。水準１０．００以下の関連性を示す菌は同義、すな
わち、同種であるとして解釈される。Ａ５８２６７．２
はストレプトミセス・アベルミチリスに対して水準１
０．００以上の水準で関連がある。

【００２８】主成分分析は変数の組の内部関係を扱う多
変数統計学の一分野である。この分析では、原データま
たは検査結果内の最大量の変位を主成分として表す［Ａ
ｌｄｅｒｓｏｎ、Ｇ．、「Ｔｈｅ・Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎ・ａｎｄ・Ｒｅｌｅｖａｎｃｅ・ｏｆ・Ｎｏｎｈｉ
ｅｒａｒｃｈｉｃ・Ｍｅｔｈｏｄｓ・ｉｎ・Ｂａｃｔｅ
ｒｉａｌ・Ｔａｘｏｎｏｍｙ」、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ａ
ｓｓｉｓｔｅｄ・Ｂａｃｔｅｒｉａｌ・Ｓｙｓｔｅｍａ
ｔｉｃｓ、Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ，Ｍ．など（編）、Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ・Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ・Ｙｏｒｋ（１９
８５）］。それで、分散または変動を示すプロットが構
成される。そこでこの変位を検査して関連性を評価し、
微生物を特徴付けることができる。脂肪酸に基づく２次
元主成分プロットを構成し、Ａ５８２６７．２菌とその
親株Ａ５８２６７．２１との他のストレプトミセス・ア
ベルミチリス種に対す関連性を示した。これらのデータ
を図２に示す。

【００２９】デンドログラムと主成分プロットで、二つ
の明確な集団が形成された。Ａ５８２６７．２とＡ５８
２６７．２１が一つの集団を作り、一方Ａ５４５８０と
Ａ５４５８０．３は別の集団を作った。これらの二つの
集団は二つの集団内のこれらの株が関連していることを
示すに十分に類似しているが、しかしまた各集団間およ
び各株間が同一でないことを示すに十分に異なっている
ことを示している。

【００３０】

【表３】Ａ５８２６７．２とＡ５４８４０．３との間の
差の概括を表３に示す。表３ Ｓ．アベルミチリス・Ａ
５８２６７．２株とＡ５４５８０．３株との間の相違

【００３１】前記のように、Ｓ．アベルミチリスＡ５８
２６７．２株とＡ５４５０８／Ａ５４５０８．３株との
間にはＡ５８２６７．２を別個の種として確立するため
に十分な差はない。けれども、これらの株の間には既知
のストレプトミセス・アベルミチリス株とはＡ５８２６
７．２を明瞭であって別個の亜種（株）として確定する
のに十分な差がある。それで、Ａ５８２６７．２をＳ．
アベルミチリスの亜種と確定し、ストレプトミセス・ア
ベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５とし
て分類した。この亜種名ニガーはベンネット寒天上で出
現する明瞭な色を示すものである。

【００３２】本発明の別の面は同化可能な炭素、窒素お
よび無機塩源を含む水性培地中で好気的液中培養条件下
にアベルメクチン類１種またはそれ以上が生産されるま
でストレプトミセス・アベルミチリス・亜種・ニガー・
ＮＲＲＬ２１００５またはそのアベルメクチン−生産性
突然変異体または変種を培養し、そして前記アベルメク
チン類を回収することを含むアベルメクチン類１種また
はそれ以上を製造する方法を提供する。生産されたアベ
ルメクチン類はこの技術分野で公知の種々の単離および
精製操作を用いて回収することができる。

【００３３】他の微生物がそうであるように、本発明の
アベルメクチン−生産菌、ストレプトミセス・アベルミ
チリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５、の特徴は
変化する。この株の突然変異体はこの技術で公知の方
法、例えば、紫外線、Ｘ線、ガンマ線およびＮ−メチル
−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンのような化学
物質によるなど、種々の物理的および化学的突然変異誘
発による処理によって得られる。この株の天然変種も、
例えば、親株のスクリーニング培養など、公知方法によ
って得られるであろう。アベルメクチン産生の特性を保
持しているＳ．アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲ
Ｌ２１００５の天然変種および誘発突然変異体は本発明
の一部と理解される。

【００３４】本発明のＳ．アベルミチリス菌の生育に用
いる培養培地は多数ある培地のどれか一つであることが
できる。それで、例えば、大量発酵に好適な炭水化物源
はグルコース、マンノースおよび、特に、馬鈴薯デキス
トリンである。けれども、リボース、キシロース、果
糖、ガラクトース、マンニトールなどのような他の炭水
化物源も使うことができる。好適な窒素源は大豆粉であ
るが、酵素またはカゼインの酸加水分解物、酵母、肝臓
ミール、肉ペプトン、魚肉のようなものも使用される。
培養培地に加えることができる栄養無機塩には亜鉛、ナ
トリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニウム、
塩化物、炭酸塩、硫酸塩、硝酸塩などのイオンを与える
ことのできる通常の溶解性塩を含む。

【００３５】この生物の生育と発達のために必要な必須
微量元素も培養培地に加えるべきである。このような微
量元素は通常その生物の生育要件に合うに十分な量が培
地の他成分中の不純物として存在する。発泡が問題であ
るなら、必要なら大量発酵培地に分子量約２０００を持
つポリプロピレングリコールのような消泡剤少量（たと
えば、０．２ｇ／Ｌ）を加えうる。培養培地成分の好適
な濃度の例は下記実施例１に記載される。アベルメクチ
ン類の相当量を生産するためには、タンク中の好気的液
中培養発酵が好適である。少量のＡ５８２６７．２培養
物は振とうフラスコ培養によっても製造しうる。通常、
胞子の型の生物を大きいタンクに接種することに伴うア
ベルメクチン生産中に現れる誘導期のために、生育イノ
キュラムを用いるのが好ましい。生育イノキュラムは少
量の培養培地にこの生物の胞子型または菌糸断片を接種
して新鮮で活発に生育している生物の培養体を得るもの
である。この生育イノキュラムを次に大きい容器に移
し、アベルメクチン類の生産段階を開始する。生育イノ
キュラム用培地は大量発酵のために用いるのと同じであ
ることもできるが、他の培地も適当である。

【００３６】本発明の製法において、アベルメクチン類
は約１５℃から約３７℃の間の温度で生育した時にＡ５
８２６７．２菌によって製造される。アベルメクチン生
産用の至適温度は約２９℃から約３１℃であると思われ
る。好気的液中培養法では通例であるが、無菌空気を容
器に底部から吹き込み、培地は通常の動力撹拌機で撹拌
する。これまでに用いた条件下の発酵の最高酸素消費は
約０．１６ｍＭ／Ｌ／分を超えなかった。ブロス約１０
７Ｌを入れた十分にバッフルされた１１５Ｌの発酵器中
では、通気速度と撹拌速度は溶存酸素の水準を容器内圧
５．０気圧の空気飽和での少なくとも４５％を保持する
に十分なものとした。アベルメクチン類の生産は発酵の
間にＨＰＬＣのような種々の方法によりブロスの標本を
既知の標準に対してテストして追跡することができる。

【００３７】好気的液中培養発酵条件下の生産に続き、
アベルメクチン類は発酵液から発酵技術分野で公知の方
法により回収することができる。一般にＡ５８２６７．
２菌またはそのアベルメクチン−生産性突然変異体また
は変種の発酵の間に生産されたアベルメクチン類は濾過
したブロス内、特に菌糸の中にある。それで、アベルメ
クチン類を動物に直接与えるなら全発酵ブロスを乾燥
し、その動物用の餌と混合する。

【００３８】より好ましくは、アベルメクチン類は全発
酵ブロスから分離し、各アベルメクチン化合物の回収を
溶媒抽出および種々のクロマトグラフィー技術および溶
媒系でのクロマトグラフィー分別の適用により実施す
る。アベルメクチンの分離および回収のための技術は米
国特許第４４２９０４２号；およびＭｉｌｌｅｒ，Ｔ．
Ｗ．など、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ・Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ．、１５（３）：３６８〜３７１（１９
７９）に記載されている。この分離と回収に好適な技術
は下記実施例に記載する。

【００３９】一度生産され、単離されると、アベルメク
チン類は寄生体感染症を持つ動物の処置用に殊に有用
で、特に駆虫剤、殺虫剤およびダニ駆除剤として有用で
ある。この抗寄生体用の使用は動物の健康分野ではよく
知られており、よい記載がある（たとえば、米国特許第
４４２９０４２号および４３１０５１９号参照）。

【００４０】加えるに、還元されたアベルメクチンＢ１
ａおよびＢ１ｂの組合せのよく知られた誘導体イベルメ
クチンは、要すれば、ここに参考として引用する米国特
許第４１９９５６９号にＣｈａｂｕｌａなどが教示した
方法を経て製造される。

【実施例】

【００４１】本発明の操作をより完全に説明するため
に、下記実施例を提供する。けれどもこれらの実施例は
本発明の範囲を如何なる面でも限定すべき意図はなくま
たそのように理解すべきではない。下記実施例で、重ク
ロロホルム中でのアベルメクチン化合物Ａ１ａ、Ａ１
ｂ、Ａ２ａ、Ａ２ｂ、Ｂ１ａ、Ｂ１ｂ、Ｂ２ａおよびＢ
２ｂの¹³Ｃ核磁気共鳴スペクトルデータはＧｅｎｅｒａ
ｌ・Ｅｌｅｃｔｒｉｃ・ＱＥ３００型スペクトロメータ
ー（Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ）で得た。各標本の溶液は容
積約０．７ｍＬであった。アベルメクチン化合物の重ク
ロロホルムに対する化学シフトはｐｐｍで示す（７７ｐ
ｐｍ）。ＦＡＢＭＳデータはＺＡＢＩＩ−ＳＥスペクト
ロメータ（ＶＧ・Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ，Ｍａｎｃｈｅ
ｓｔｅｒ，英国）を用いて作製した。

【００４２】実施例１ Ａ５８２６７．２の発酵

【００４３】Ａ．振とうフラスコ 液体窒素中に保存したストレプトミセス・アベルミチリ
ス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５菌を次の組成を
持つ第一段階栄養培地に接種（０．５ｍＬ）するために
用いた：

【表４】 脱イオン水 適量を加えて５０ｍＬとする。 未調整ｐＨ＝７．０；ｐＨは滅菌後は調整しなかった；
滅菌後ｐＨ＝６．９。

【００４４】接種した栄養培地を２５０ｍＬ広口エルレ
ンマイヤーフラスコ中、毎分２５０回２インチ（５．０
８ｃｍ）の円軌道を描く振とう機上３０℃で４６時間イ
ンキュベートした。フラスコはバイオシールドフィルタ
ー２つで保護し、振とう板の角度は０°であった。

【００４５】Ｂ．Ａ５８２６７．２のタンク発酵 大容量のイノキュラムを得るために、前Ａ節に記載した
ようにして製造したインキュベート済第一段階培地１０
ｍＬを第一段階培地と同一組成を持つ第二段階栄養培地
４００ｍＬに接種するために用いた。この第二段階培地
を２Ｌ広口エルレンマイヤーフラスコ中、毎分２５０回
２インチ（５．０８ｃｍ）の円軌道を描く振とう機上３
０℃で４８時間インキュベートした。このフラスコもバ
イオシールドフィルター２つで保護し、振とう板の角度
は０°であった。

【００４６】この第二段階栄養培地（４００ｍＬ）を次
の組成を持つ無菌の生産培地１０７Ｌに接種するために
用いた：

【表５】 脱イオン水 適量を加えて１０７Ｌとする。 未調整ｐＨ＝６．５；５Ｎ−ＮａＯＨ約３０ｍＬでｐＨ
７．３に調整；滅菌後ｐＨ＝７．０。添加消泡剤：ＳＡ
Ｇ４７１（Ｕｎｉｏｎ・Ｃａｒｂｉｄｅ、Ｓｉｓｔｅｒ
ｓｖｉｌｌｅ，Ｗｅｓｔ・Ｖｉｒｇｉｎｉａ）０．２ｇ
／Ｌ。

【００４７】接種した生産培地を１１５Ｌ撹拌発酵タン
ク中、１０から１１日間温度３０℃で発酵させた。空気
飽和での約４５％に当る溶解酸素濃度ならびに撹拌容器
内の低速毎分回転数（約１３７から約２５５）を維持し
た。

【００４８】実施例２ アベルメクチン類の一般的な単
離 実施例１の記載と同様な方法で製造した１１５Ｌからの
全発酵ブロスを５Ｎ−ＨＣｌでｐＨ６．５に調整した。
等容のＭｅＯＨを溶液に加えて溶液をＭｅｍｂｒａｌｏ
ｘセラミックフィルター（Ｕ．Ｓ．フィルター／ＳＣ
Ｔ、Ｂａｚｅｔ，フランス）を通して濾過した。濾液を
次にＨＰ−２０ＳＳ（ダイアイオン）（三菱化成工業
社、東京、日本）１０Ｌを含むカラムを通した。カラム
を次に直線傾斜の５０〜１００％ＭｅＯＨ水で溶出し
た。集めた画分をＤｙｎａｍａｘＣ₁₈（Ｒａｉｎｉｎ・
Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）を含む４．６ｍ
ｍ（ｉ．ｄ．）×３０ｃｍカラム上でのＨＰＬＣによっ
て分析した。カラムをＭｅＯＨ：ＣＨ₃ＣＮ：（０．２
％ＨＯＡｃ、ＮａＯＨでｐＨを５．０に調整）４４：４
４：１２の無勾配傾斜を用いて流速１．５ｍＬ／分で溶
出した。画分をＨＰＬＣ分析に基づいて集めて二つのプ
ールとした。各プールを減圧濃縮して約５００ｍＬ水性
とした。各プールをＣＨＣｌ₃で抽出、抽出物を蒸発し
て油１８．２５ｇ（プールＡ）および油６．４８ｇ（プ
ールＢ）を得た。

【００４９】実施例３ プールＡの処理 実施例２からのプールＡ（１８．２５ｇ）をＭｅＯＨ４
５ｍＬに溶かし、セファデックスＬＨ−２０（Ｐｈａｒ
ｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎｅｗ・Ｊｅｒｓ
ｅｙ）を含む５ｃｍ（ｉ．ｄ．）×１．１ｍカラム上ク
ロマトグラフした。カラムをＭｅＯＨで溶出し、各画分
をＨＰＬＣで分析した。アベルメクチン類を含む画分を
集めてプール二つとし、蒸発してプールＣ（１０．９６
ｇ）とプールＤ（１．４５ｇ）を得た。

【００５０】実施例４ プールＣの処理 プールＣからの物質（実施例３から２ｇ）をＭｅＯＨ
４．５ｍＬに溶かし、Ｄｙｎａｍａｘ−６０Ａ・Ｃ
₁₈（Ｒａｉｎｉｎ，Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓ
ｅｔｔｓ）を含む４１．４ｍｍ（ｉ．ｄ．）×２５ｃｍ
カラム上でクロマトグラフした。カラムをＣＨ₃ＣＮ：
ＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏの４０：４０：２０から４６：４６：
８までの直線傾斜を用いて１００分にわたって流速１５
ｍＬ／分で溶出した。ＨＰＬＣ分析に基づいてプール四
つを得た：プールＥ（４８９ｍｇ）、プールＦ（６２４
ｍｇ）、プールＧ（６５６ｍｇ）とプールＨ（１７７ｍ
ｇ）。

【００５１】実施例５ アベルメクチンＡ１ａの単離 実施例２からのプールＢをＭｅＯＨ３０ｍＬにとかし、
実施例３に記載のようにクロマトグラフした。カラムを
ＭｅＯＨで溶出し、各画分をＨＰＬＣで分析した。アベ
ルメクチン類を含む画分を集め、蒸発して残渣（６５８
ｍｇ）とした。残渣の一部（２００ｍｇ）をＣｈｒｏｍ
ｅｇａｂｏｎｄ・ＭＣ１８（ＥＳ・Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ
ｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｎｅｗ・Ｊｅｒｓｙ）を含む２．５
ｃｍ（ｉ．ｄ．）×３０ｃｍカラム上でＣＨ₃ＣＮ：Ｍ
ｅＯＨ：Ｈ₂Ｏの４０：４０：２０から４２：４２：１
６までの傾斜を用いて９０分にわたって流速５ｍＬ／分
でクロマトグラフした。この方法はアベルメクチンＡ１
ａ６３ｍｇを与えた。ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ＝９０９［Ａ
ｖｅｒ_A1a＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ
Ｃｌ₃）δ１１．９６，１２．８８，１５．０３，１
６．３０，１７．６２，１８．３２，１９．８２，２
０．１８，２７．４４，３０．５０，３４．１８，３
４．４３，３５．１３，３６．５２，３９．６６，４
０．４１，４５．６１，５６．３２，５６．４１，５
７．６９，６７．１８，６８．０７，６８．１５，６
８．３２，７４．８３，７６．０１，７６．８９，７
７．４１，７８．１５，８０．４３，８０．５０，８
１．９２，１１８．２５，１１８．３１，１１９．５
８，１２４．７９，１３５．１０，１３５．９８，１３
６．０８，１３７．５８，１３９．８５，１７３．８
１，９４．８８，９８．４４，６８．３３，１２７．７
４。

【００５２】実施例６ アベルメクチンＡ２ａおよびＢ
１ｂの単離 実施例４のプールＦからの物質をＭｅＯＨ２．５ｍＬに
とかし、実施例４に記載したようなカラム上クロマトグ
ラフした。カラムは無勾配のＭｅＯＨ：Ｈ₂Ｏ８５：１
５を用いて流速１５ｍＬ／分で溶出し、純粋なアベルメ
クチンＡ２ａ（２０２ｍｇ）：ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ＝９
２７［Ａｖｅｒ_A2a＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１７３．４，１３９．８３，１３
７．４８，１３５．７９，１３５．６０，１２４．８
０，１１９．６５，１１８．４３，１１７．４７，９
９．５６，９８．４１，９４．７８，８１．６７，８
０．５０，８０．３６，７９．２４，７８．１５，７
７．５０，７６．８０，７５．９０，７０．６７，６
９．７９，６８．２５，６８．１２，６８．０６，６
７．５５，６７．１８，５７．６０，５６．３８，４
５．５４，４１．０６，４０．７０，３９．６２，３
６．２７，３５．６１，３５．０４，３４．４１，３
４．２６，３４．０７，２７．１８，２０．２０，１
９．８６，１８．３１，１７．６５，１５．０６，１
３．７２，１２．３７，１１．７５；とアベルメクチン
Ｂ１ｂ（７９ｍｇ）；ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ＝８８１［Ａ
ｖｅｒ_B1b＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ
Ｃｌ₃）δ１７３．５６，１３９．５４，１３７．９
５，１３７．８０，１３５．９７，１３５．０７，１２
７．７２，１２４．７０，１２０．３１，１１８．２
８，１１８．００，９８．４３，９５．６３，９４．８
８，８１．８３，８０．３８，８０．３２，７９．３
２，７９．２２，７８．２２，７７．２６，７５．９
６，６８．３２，６８．２８，６８．２４，６８．１
０，６７．６７，６７．２１，５６．４６，５６．３
６，４５．６６，４０．４５，３９．７２，３６．６
３，３４．５２，３４．２２，３０．８８，２８．３
１，２１．０３，２０．１８，１９．８８，１８．３
７，１７．６８，１６．５１，１５．０８，１４．８６
を与えた。

【００５３】実施例７ アベルメクチンＡ１ｂおよびＢ
１ａの単離 実施例４のプールＧからの物質はＣＨ₃ＣＮ３ｍＬに溶
かし、Ｃｈｒｏｍｅｇａｂｏｎｄ・ＭＣ１８（ＥＳ・Ｉ
ｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｎｅｗ・Ｊｅｒｓ
ｙ）を含む２．５ｃｍ（ｉ．ｄ．）×３０ｃｍカラム上
でＣＨ₃ＣＮ：Ｈ₂Ｏの７３：２７から８０：２０までの
直線傾斜を用いて１００分にわたって流速５ｍＬ／分で
合計３回クロマトグラフして純粋なアベルメクチンＡ１
ｂ（１４５ｍｇ）；ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ＝８９５［Ａｖ
ｅｒ_A1b＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣ
ｌ₃）δ１７３．３９，１３９．６１，１３７．３５，
１３５．６０，１３４．８７，１２７．５８，１１９．
４５，１１８．２９，１１８．０７，９８．２２，９
４．４１，９４．６９，８１．６８，８０．２９，８
０．２２，７９．１０，７７．９９，７７．２８，７
７．００，７６．６５，７５．７３，６８．０８，６
８．０５，６７．９１，６６．９８，５７．４３，５
６．２１，５６．１８，４５．３９，４０．２４，３
９．４５，３６．３６，３４．３０，３４．０５，３
０．６５，２８．０９，２０．８２，２０．０３，１
９．６６，１８．１５，１７．４８，１６．３１，１
４．８７，１４．６４，１２４．６３；およびアベルメ
クチンＢ１ａ（２４５ｍｇ）；ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ＝８
９５［Ａｖｅｒ_B1a＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１７３．４０，１３９．５３，１３
７．８４，１３７．７０，１３６．０８，１３５．０
８，１２７．７４，１２４．６９，１２０．２３，１１
８．２３，１１７．９４，９８．４２，９５．６９，９
４．８７，８１．６９，８０．２３，８０．１５，７
９．１３，７８．０５，７５．６９，７４．６１，６
８．１２，６８．０３，６７．９３，６７．４６，６
７．０１，５６．２６，５６．１７，４５．４３，４
０．２８，３９．５１，３６．３３，３４．９３，３
４．２３，３４．０５，３０．３２，２７．２５，１
９．９９，１９．６６，１８．１４，１７．５０，１
６．１５，１４．８５，１２．７４，１１．８１を与え
た。

【００５４】実施例８ アベルメクチンＡ２ｂ、Ｂ２ａ
およびＢ２ｂの単離 実施例４のプールＥからの物質をＣＨ₃ＣＮ１．９ｍＬ
に溶かし、実施例７に記載のようなカラム上クロマトグ
ラフした。カラムをＣＨ₃ＣＮ：Ｈ₂Ｏの６５：３５から
７５：２５までの直線傾斜を用いて、１００分にわたっ
て流速５ｍＬ／分で合計２回展開して純粋なアベルメク
チンＡ２ｂ（８０ｍｇ）；ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ＝９１３
［Ａｖｅｒ_A2b＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ ₃）δ１７３．６０，１３９．８３，１３７．
４７，１３５．９２，１３５．５４，１２４．７５，１
１９．５２，１１８．２１，１１７．４４，９９．５
３，９８．３７，９４．６９，８１．５３，８０．４
３，８０．３０，７９．２１，７８．１０，７７．３
４，７６．８１，７５．９２，７２．２４，６９．７
５，６８．２４，６８．１０，６８．０５，６７．４
５，６７．１４，５７．６５，５６．３８，５６．３
１，４５．５２，４０．９９，４０．６３，３９．６
０，３６．３７，３５．９５，３４．４７，３４，１
４，２７．８６，２０．６８，２０．１６，１９．８
０，１８．２９，１７．５９，１５．０５，１３．８
５，１３．５５；とアベルメクチンＢ２ａ（１２５ｍ
ｇ）；ＭＳ：ＦＡＢ ｍ／ｚ＝９１３［Ａｖｅｒ_B2a＋
Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１
７３．６３，１３９．６８，１３８．０１，１３５．６
２，〜１３５，１２４．７２，１２０．３４，１１７．
９２，１１７．５４，９９．６３，９８．４７，９４．
７７，８１．５５，８０．３５，７９．３１，７９．０
８，７８．１７，７６．０７，７２．３５，６９．８
６，６８．４３，６８．３２，６８．１０，６７．６
８，６７．５１，６７．２５，〜５６．３，〜５６．
３，４５．６７，４１．１１，４０．７２，３９．７
５，３６．５５，３６．０７，３４．５７，３４，２
４，３４．１７，３４．１７，２７．９６，２０．８
０，２０．２１，１９．９７，１８．４１，１７．６
８，１５．１７，１３．９５，１３．６７；およびアベ
ルメクチンＢ２ｂ（１４５ｍｇ）；ＭＳ：ＦＡＢｍ／ｚ
＝８９９［Ａｖｅｒ_B2b＋Ｎａ］⁺；¹³Ｃ−ＮＭＲ（７５
ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ１７３．０９，１３９．４４，
１３７．６５，１３７．５７．１３５．４４，１２４．
５０，１２０．９０，１１７．７６，１１７．３４，９
９．４１，９８．２６，９４．６３，８１．４７，８
０．１９，７９．２０，７９．１０，７８．０４，７
５．７２，７０．５７，６９．６６，６８．１０，６
８．０３，６７．９７，６７．４５，６７．３６，６
７．０５，５６．２８，５６．２４，４５．４５，４
０．５７，３９．５２，３６．１７，３５．４６，３
４．９０，３４．２６，３４．０９，３３．９１，２
７．０４，２０．００，１９．６９，１８．１６，１
７．５１，１４．９１，１３．５６，１２．３３，１
１．５９；を与えた。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１はストレプトミセス・アベルミチリス・
亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５（Ａ５８２６７．
２）と他のストレプトミセス・アベルミチリス種との樹
状図を示すグラフである。

【図２】 図２はＡ５８２６７．２とストレプトミセス
・アベルミチリス種との間の関係を示す脂肪酸分析から
の主成分分析のプロットを示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 オーティス・ウェブスター・ゴッドフリ ー・ジュニア アメリカ合衆国46142インディアナ州グリ ーンウッド、セレニティ・ウェイ222番 (72)発明者 ティム・アレン・スミッカ アメリカ合衆国46220インディアナ州イン ディアナポリス、イースト・シックスティ セカンド・ストリート2918番 (72)発明者 レイモンド・チェ−フォン・ヤオ アメリカ合衆国46033インディアナ州カー メル、ウッドゲイト・ドライブ1189番

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 微生物ストレプトミセス・アベルミチリ
   ス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１００５（Ｓｔｒｅｐｔ
   ｏｍｙｃｅｓ・ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ・亜種・ｎｉｇ
   ｅｒ・ＮＲＲＬ２１００５）またはそのアベルメクチン
   −生産性突然変異体または変種の生物学的に純粋な菌。
2. 【請求項２】 同化しうる炭素、窒素および無機塩源を
   含む水性培養基中で好気的液中培養条件下にアベルメク
   チン化合物少なくとも１種が産生されるまでストレプト
   ミセス・アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ２１
   ００５またはそのアベルメクチン−生産性突然変異体ま
   たは変種を培養することを含むアベルメクチン化合物少
   なくとも１種を製造する方法。
3. 【請求項３】 同化しうる炭素、窒素および無機塩源を
   含む水性培養基中で好気的液中培養条件下にアベルメク
   チン化合物Ｂ１ａおよびＢ１ｂが産生されるまでストレ
   プトミセス・アベルミチリス・亜種・ニガー・ＮＲＲＬ
   ２１００５またはそのアベルメクチン−生産性突然変異
   体または変種を培養し、そして前記Ｂ１ａおよびＢ１ｂ
   化合物を還元することを含むイベルメクチンを製造する
   方法。