JPH06160724A - フラッシュフォトリシス用顕微鏡 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 観察又は測光する領域と、フラッシュ光を照
射してフォトリシス反応を起こさせる領域とを、容易に
独立して規定可能なフラッシュフォトリシス用顕微鏡を
提供することである。 【構成】 照明用視野絞りとフラッシュ用視野絞りとを
独立に設け、照明光の照射範囲とフラッシュ光の照射範
囲とを個別に規定可能とした。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はフラッシュフォトリシス
用顕微鏡に関するものである。更に詳しくはケージドカ
ルシウム、ケージドフルオレセイン（caged fluorescei
n）などのケージド化合物（caged compounds）をロード
した標本の観察および測定に用いられるフラッシュフォ
トリシス用顕微鏡に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】紫外光（ＵＶ光）が照射されると光化学
反応を起こして、種々の化学物質やイオンが解離する試
薬を「ケージドコンパウンド（Caged Compounds)）」と
称している。この試薬を生体細胞内に入れ、紫外光を数
ミリ秒〜数十ミリ秒の間照射すると、試薬より特定の化
学物質またはイオンが解離し、細胞内にあらかじめ注入
されている蛍光試薬と選択的に結合し、その結果蛍光を
発する。この蛍光強度を測定することにより、細胞内に
おける目的物質の瞬間的な濃度や過渡的変化を測定した
り、運動の状態や変化を調べることができる。ケージド
コンパウンドとしては、ＡＴＰ（アデノシントリホフフ
ァタ−ゼ）を解離させるケージドＡＴＰやカルシウムイ
オンを解離させるケージドカルシウム等が知られてい
る。

【０００３】ケージドコンパウンドに光化学反応を起こ
させるためにフラッシュ光を用いる手法を、フラッシュ
フォトリシス（Flash Photolysis) と称している。フォ
トリシス用の波長域と、標本観察および測光のための照
明用の波長域とを異ならせることによって、フラッシュ
光が測光に悪影響を及ぼしたり、標本の褪色を促進させ
ないように工夫されている。一般にはフォトリシス用と
してＵＶ光が、照明用として可視光が使用される。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかし、顕微鏡を使用
した従来のフラッシュフォトリスでは、顕微鏡の外部か
ら標本にダイレクトにフラッシュ光を照射していた。し
かし従来の照射方法ではフラッシュ光を標本上の目的の
位置に正確に導くことが難しく、目的の位置から外れて
照射してしまうことがしばしばあった。特に正立顕微鏡
の場合、対物レンズが標本の直上に極めて接近して存在
するために、対物レンズの真下の標本にフラッシュ光を
照射することが困難であるという問題点があった。さら
にこの従来の照射方法では、フォトリシス反応を起こし
たい微小領域にビ−ムを絞ることができないため、目的
の位置の周辺部分も感光させてしまうという問題もあっ
た。また、フラッシュ照射範囲を予め確認することも困
難であった。

【０００５】この解決手段として、フラッシュのランプ
ハウスからオプティカルファイバでフラッシュ光を取り
出し、ファイバ先端を標本に接近させる手法が最近では
用いられているが、照射範囲はファイバのバンドル径よ
り小さくはならず、細胞の一部分にミクロンオーダのス
ポットでフラッシュ光を当てる事は困難である。

【０００６】一方、フラッシュの代わりに紫外線レーザ
を使用することも従来用いられていたが、レーザ光の強
度の調整と位置合わせが難しく、ビ−ムの径を小さくす
ることはできても任意のビ−ム径を得ることができず、
フレキシブルな応用は期待できない。また装置自体が大
型して扱い難い上に高価格であった。

【０００７】フォトリシス反応を起こさせるＵＶ光照射
領域と観察または測光しようとしている領域が一致して
いる場合には、フラッシュ光を照明光学系に導き入れる
と共に標本照明光とフラッシュ光の照射範囲を標本上で
同一になるように規定する視野絞りを備えた顕微鏡が有
効である。

【０００８】一方フラッシュフォトリシスの手法は、細
胞や組織の動態的変化の観察または測定にも用いられ
る。例えば、細胞や組織の一部分にフラッシュ光を照射
してケージド試薬を反応させ、変化の伝播をフラッシュ
光照射部位３９とは別の観察・測光部位４０で観察また
は測光したり（図６（ａ））、照射スポットを包含する
範囲の経時的変化を観察や測定するような場合である
（図６（ｂ））。このようなケースでは、観察または測
定のための照射領域とケージド試薬を反応させるための
フラッシュ光を照射する領域が互に独立に規定可能であ
り、個別に移動し、また大きさを変えられることが必要
である。

【０００９】本発明は上記の課題に鑑み、観察又は測光
する領域と、フラッシュ光を照射してフォトリシス反応
を起こさせる領域とを、容易に独立して規定可能なフラ
ッシュフォトリシス用顕微鏡を提供することを目的とす
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、照明光源から
射出される照明光を標本に照射するための照明光学系
と、フラッシュ光源から射出される、照明光とは異なる
波長域のフラッシュ光を標本に照射するためのフラッシ
ュ光学系と、フラッシュ光を照明光学系に同軸に導入す
るためのダイクロイックミラーと、照明光の照射範囲を
標本上で規定する照明用視野絞りと、フラッシュ光の照
射範囲を標本上で規定するフラッシュ用視野絞りと、標
本からの光学情報を受ける観察光学系とを備え、照明光
の照射範囲とフラッシュ光の照射範囲とが独立に規定可
能であるフラッシュフォトリシス用顕微鏡を構成した。

【００１１】本発明の一つの態様において、上記観察光
学系はフラッシュ光の波長域をカットする光学手段を有
する。

【００１２】

【作用】標本照明用の照明光とフォトリシス用のフォト
リシス光とを同軸で標本上に照射することができる。そ
してフォトリシス光の照射位置および範囲と標本照明位
置および範囲を互に独立に規定できる。

【００１３】

【実施例】本発明における一実施例を図１乃至図８によ
り説明する。図１、図２及び図３はそれぞれ本発明にか
かる倒立顕微鏡に適用した一実施例の光路図、図４は一
実施例のダイクロイックミラーの透過・反射率特性を示
すグラフ、図５は一実施例の他のダイクロイックミラー
の透過・反射率特性を示すグラフ、図６は一実施例の標
本とフラッシュ光照射部位と範囲、観察光照射部位と範
囲を示すの関連図、図７は一実施例の別形態の光路図、
図８は一実施例のコンフォーカルを応用した別形態の光
路図である。

【００１４】図１において、観察および測光用の励起照
明光Ｂを供給する照明光学系１は、照明用の光源２、集
光レンズ３、励起フィルタ４、照明範囲を規定する視野
絞り１２からなっている。光源２は水銀、キセノン、ハ
ロゲン、タングステンランプ等から選ばれ、可視光を放
射する。集光レンズ３は光軸方向に移動可能に設けら
れ、光源２のピント出しのために調整可能である。励起
フィルタ４は後述する蛍光試薬（Fluo３）の励起波長で
ある４７０〜４９０ｎｍの光のみを通過させる特性を有
する。視野絞り１２には、開閉または照射範囲の切換え
機能と心出し機能を有し、標本１０上の照明範囲を規定
する。

【００１５】フォトリシス用の紫外線のフラッシュ光Ｕ
Ｖを供給するフラッシュ光学系５は、キセノン管によっ
て構成されるフラッシュ用の光源６、石英集光レンズ
７、バンドパスフィルタ８、フラッシュ光照射範囲を規
定する視野絞り１９、視野絞り１９を照明するランプ３
１と照明用レンズ３２からなっている。石英集光レンズ
７は光軸方向に移動可能に設けられ、フラッシュ光源６
のピント出しのために調整可能である。

【００１６】バンドパスフィルタ８はフォトリシスに使
用する紫外線波長域すなわち２８０〜３８０ｎｍの光の
みを通過させる特性を有する。またバンドパスフィルタ
８は光路から挿脱可能に設けられ、光路から退避するこ
とにより、視野絞り１９を可視光で照明し、視野絞り１
９の位置および大きさを標本観察用の接眼レンズ１６を
通して確認することができる。視野絞り１９は、絞り羽
根による視野径の開閉またはスライダ上に並べた絞りの
切換えによる照射範囲の切換え機能と心出し機能を有
し、フォトリシス用のフラッシュ光ＵＶの標本１０上へ
の照射範囲を規定する。

【００１７】フラッシュ光学系５’はフラッシュ光学系
５と異なった態様の例である。図２に示すように、光源
６、石英集光レンズ７、バンドパスフィルタ８、フラッ
シュ光照射範囲を規定する視野絞り１９、視野絞り１９
を照明するランプ３１と照明用レンズ３２はフラッシュ
光学系５と同様である。石英バンドルファイバやリキッ
ドファイバなどＵＶ光の透過率の高い材質よりなるファ
イバ３３を通過した光は、ピント出しのために調節可能
な石英集光レンズ３４によりフラッシュ光ＵＶの標本１
０上への照射範囲を規定する為の視野絞り１９上へ照射
される。視野絞り１９は、単独で心出し可能であっても
かまわないが、石英集光レンズ３４と視野絞り１９とか
らなるユニット３５全体の移動で心出し可能としても良
い。

【００１８】フラッシュ光学系５’では、ファイバ３３
を長くすることによりにより、フラッシュ光源６を顕微
鏡から離して設置できるため、フラッシュ発光時にフラ
ッシュ光源６から発せられる振動の影響を防止できると
共に、フラッシュ発光時の電磁ノイズから顕微鏡系を隔
離する方策を施すことが可能になる。

【００１９】またランプ３１の代わりに照明光源２より
発する可視光成分を導くオプティカルファイバ３６に置
き換えても良い。ＵＶカットフィルタ３７がオプティカ
ルファイバ３６の照明光学系１側の先端部に設けられて
いる。

【００２０】ダイクロイックミラー９は、照明光学系１
から射出した長波長の励起照明光Ｂを透過し、フラッシ
ュ光学系５またはフラッシュ光学系５’から射出したフ
ラッシュ光ＵＶおよびランプ３１またはファイバ３６に
よる視野絞りの照明光を反射する。このダイクロイック
ミラー９によって照明光学系１にフラッシュ光学系５か
らのフラッシュ光ＵＶが同軸に導入される。なお、ダイ
クロイックミラー９の透過・反射率特性の例を図４に示
す。図４は一実施例のダイクロイックミラーの透過・反
射率特性を示すグラフである。

【００２１】標本１０は図示なきステージ上に載置さ
れ、その下方には対物レンズ１１が配置されている。こ
の対物レンズ１１に関して標本１０と共役な位置に配置
された視野絞り１２は、観察および測光の視野を限定す
るものである。一方フラッシュ光学系５またはフラッシ
ュ光学系５’からのフラッシュ光ＵＶは標本１０と共役
に配置された視野絞り１９により照射領域が限定され
る。

【００２２】ダイクロイックミラー１３は、前述のダイ
クロイックミラー９とは異なった特性を有し、励起照明
光Ｂとフラッシュ光ＵＶとの何れも対物レンズ１１およ
び標本１０に向けて反射し、標本から発せられた蛍光Ｆ
Ｌをフィルタ１４および観察光学系１５に向けて透過す
る。このダイクロイックミラー１３の透過・反射率特性
は図５の（ａ）または（ｂ）に示す如くである。図５は
一実施例の他のダイクロイックミラーの透過・反射率特
性を示すグラフである。

【００２３】フィルタ１４は、観察および測光に必要な
標本由来の蛍光ＦＬのみを透過し、励起照明光Ｂやフラ
ッシュ光ＵＶによる迷光や、標本から発生される不要な
波長域の光を吸収するために設けられている。観察光学
系１５は、標本観察用の接眼レンズ１６、フォトメータ
等の測光装置１７、およびフィルタ１４からの蛍光ＦＬ
を接眼レンズ１６と測光装置１７とにそれぞれ向けるた
めのビームスプリッタ１８を含む。

【００２４】視野絞り１２により範囲が規定される励起
照明光Ｂによる標本上の照明領域と視野絞り１９により
フラッシュ光ＵＶによる標本上の照射領域とを観察光学
系１５を用いてフォトリシスの実行前に確認する時に
は、図３に例示するように、ダイクロイックミラー１３
とフィルタ１４を一体的に光路外に退避操作し、代わり
にダイクロイックミラー１３の位置にハーフミラー２３
を配置させるか、ダイクロイックミラー１３を残しフィ
ルタ１４のみを３７とは別なＵＶカットフィルタ３８と
入れ換えることにより観察できる。

【００２５】後者のフィルタ１４と３８を切換える方式
は、視野絞り１９の像が前者の方式と比べて暗くなる欠
点はあるが、ダイクロイックミラー１３が固定のためフ
ラッシュ光ＵＶの標本上の照射位置精度は向上する。

【００２６】次に、本実施例で用いる試薬について説明
する。本実施例ではケージドコンパウンドとしてのケー
ジドカルシウム（Caged Calcium）試薬 Nitr５と、カル
シウムイオン測定用の蛍光試薬 Fluo３とが用いられ
る。ケージドカルシウム試薬Nitr５が注入された細胞組
織にＵＶ光を照射すると、光化学反応によってカルシウ
ムイオンが Nitr５から瞬時に細胞内に放出される。蛍
光試薬 Fluo３はカルシウムイオンに結びついて、波長
４７０〜４９０ｎｍの励起光の照射によって波長５２０
〜５６０ｎｍの蛍光が発せられる。したがってこれら２
種類の試薬が注入された細胞標本に、励起照明光の照射
のもとでフラッシュ光ＵＶを瞬時照射すれば、ＵＶ光に
応答して放出されたカルシウムイオンからの蛍光を観察
・測光することが可能になる。

【００２７】次に、本実施例の動作を説明する。顕微鏡
のステージに載置された標本１０は上記２種類の試薬が
予め注入された細胞組織である。照明光源２を点灯する
と、照明光学系１から射出した励起照明光Ｂはダイクロ
イックミラー９を透過しダイクロイックミラー１３で反
射して、対物レンズ１１を介して標本１０を照明する。
ダイクロイックミラー１３とフィルタ１４とを光路から
退避させ、ハーフミラー２３を光路内に挿入すると、標
本１０で反射した励起照明光Ｂはハーフミラー２３を透
過して観察光学系１５に到達するようになり、励起照明
光Ｂで照明された標本１０の像を接眼レンズ１６を通し
て観察可能になる。

【００２８】またはダイクロイックミラー１３を光路中
に残したまま、フィルタ１４を光路から退避させ、代わ
りにＵＶカットフィルタ３８を行路内に挿入しても、眼
を紫外線にさらすことなく同様の効果が得られる。そこ
で標本１０上に投影された視野絞り１２の像を観察しな
がら絞り径を調節し、照明領域を所望の範囲に限定して
おく。また、光源２の像が対物レンズ１１の瞳上に投影
された、いわゆるケーラー照明が得られるように集光レ
ンズ３の位置を調節しておく。

【００２９】フラッシュ光学系５の調整は、まずバンド
パスフィルタ８を光路から退避させ、ランプ３１を点灯
させて可視光で視野絞り１９を照明すると、視野絞り１
２同様標本１０上に投影され、反射した視野絞り像はハ
ーフミラー２３又はダイクロイックミラー１３とＵＶカ
ットフィルタ３８を透過して接眼レンズ１６を通して４
００ｎｍ近辺の可視光で観察できる。標本１０上に投影
された絞り像を観察しながら、絞りの中心位置と絞り径
を調整することにより、フラッシュ光ＵＶの照射位置と
照射範囲が限定できる。

【００３０】フラッシュ光学系５’の場合では、照射位
置を心出しユニット３５で調整し、ファイバ端面のフォ
ーカス出しを石英集光レンズ３４を前後に調整すること
で行う。

【００３１】これらの調節が完了したら、ダイクロイッ
クミラー１３とフィルタ１４およびバンドパスフィルタ
８とを再び光路内に戻す。この状態でフラッシュ光源６
をトリガーすることによってキセノン管が放電し、フラ
ッシュ光学系５または５’からフラッシュ光ＵＶが照射
される。フラッシュ光ＵＶはバンドパスフィルタ８で紫
外線成分のみを選択した後、ダイクロイックミラー９、
１３で反射され、視野絞り１９で規定された照明領域と
同一領域内にある標本１０上の部分に、対物レンズ１１
を介して照射される。このＵＶ光の照射に反応してケー
ジドカルシウム試薬は標本１０の細胞組織内にカルシウ
ムイオンを放出し、そのカルシウムイオンと蛍光試薬と
が結びつき、励起照明光Ｂの照射を受けて蛍光が励起さ
れる。

【００３２】発生した蛍光ＦＬは、対物レンズ１１を通
り、ダイクロイックミラー１３を透過し、フィルタ１４
を透過して観察光学系１５に導かれる。従って接眼レン
ズ１６を通して肉眼でカルシウムイオンの発生状態を観
察することが可能であり、接眼レンズの代わりにテレビ
カメラを配置すればＴＶモニターを通して観察したり、
画像処理装置につなげて像を加工したりすることができ
る。また、フォトメータ１７を動作して蛍光強度を測定
すれば、カルシウムイオンの濃度変化を知ることができ
る。

【００３３】以上本実施例を図に従って説明したが、同
じ倒立顕微鏡に適用するにあたり、図７に示す態様に構
成することもできる。照明用の光源２を点灯すると、照
明光学系１から射出した励起照明光Ｂは視野絞り１２に
より照射領域を規定し、ダイクロイックミラー１３で反
射し、ダイクロイックミラー９を透過し対物レンズ１１
を介して標本１０を照明する。接眼レンズ１６を通して
観察し、励起照明光Ｂの照射範囲とフラッシュ光照射範
囲を決める。

【００３４】次いで、フラッシュ光源６からフラッシュ
光ＵＶを放射する。フラッシュ光ＵＶはバンドパスフィ
ルタ８で紫外線成分のみを選択した後、視野絞り１９で
照射領域を規定し、ダイクロイックミラー９で反射さ
れ、視野絞り１９で規定された照明領域と同一領域内に
ある標本１０上の部分に、対物レンズ１１を介して照射
される。

【００３５】励起された蛍光ＦＬは、対物レンズ１１を
通り、ダイクロイックミラー９、ダイクロイックミラー
１３を透過し、フィルタ１４を透過して観察光学系１５
に導かれ、接眼レンズ１６を通して肉眼で観察すること
ができる。

【００３６】また図８は図７の構成の変形した一形態
で、照明光学系１はレーザ光源とスキャニング系を内蔵
するコンフォーカルユニット４３と励起フィルタ４、視
野絞り１２、ダイクロイックミラー１３により構成され
ている。照明光学系１により射出した励起ビームＢは、
全反射ミラー４２により標本１０上を、例えば図６
（ｃ）に四角形により示すように、スキャニング機構ま
たは視野絞り１２で規定される範囲でスキャニングし、
標本より蛍光ＦＬが発光する。蛍光ＦＬは同じ光路を戻
り、全反射ミラー４２で反射され、再び照明光学系１の
一部を通過するが、ダイクロイックミラー１３およびフ
ィルタ１４を通過してコンフォーカルディテクタ部４４
に入射し、４３に含まれるスキャニング系と同期して図
示なきモニタ上に画像が形成される。フラッシュ光ＵＶ
の調整は、全反射ミラー４２を光路から退避させ、観察
光学系１５を通して行う。

【００３７】次に本発明を正立顕微鏡に適用した他の実
施例について説明する。図９は正立顕微鏡の透過光側に
フラッシュ光学系５を配置した実施例の概念的構成図で
ある。照明用の光源２を点灯すると、照明光学系１から
射出した励起照明光Ｂは視野絞り１２により照射領域を
規定し、ダイクロイックミラー１３で反射し、対物レン
ズ１１を介して標本１０を照明する。接眼レンズ１６を
通して観察し、励起照明光Ｂの照射範囲とフラッシュ光
照射範囲を決める。

【００３８】次いで、フラッシュ光源６からフラッシュ
光ＵＶを放射する。フラッシュ光ＵＶはバンドパスフィ
ルタ８で紫外線成分のみを選択した後、視野絞り１９で
照射領域を規定し、ＵＶ透過コンデンサレンズ４１を介
して標本１０を照明する。励起された蛍光ＦＬは、対物
レンズ１１を通り、ダイクロイックミラー１３を透過
し、フィルタ１４を透過して観察光学系１５に導かれ、
接眼レンズ１６を通して肉眼で観察することができる。

【００３９】尚、本実施例とは異なる別の蛍光試薬およ
びケージド試薬を用いた場合でも同様に実施可能である
ことは言うまでもない。

【００４０】又視野絞り１２および１９は標本１０と共
役関係を有する位置であれば各々照明光学系１内、フラ
ッシュ光学系５又フラッシュ光学系は５’中のどの部分
に配置してもよい。フラッシュ光学部位３９が、観察測
光部位４０に包含される図６（ｂ）の場合であれば、図
１に想像線示すように、視野絞り１２の代わりに視野絞
り１２′を、標本１０と共役関係を有する位置に視野絞
り１９に対して直列に配置してもよい。

【００４１】本実施例により、フォトリシス用のフォト
リシス光を対物レンズやコンデンサレンズのワーキング
ディスタンス（ストローク）や配置に制限されることな
く標本上に照射可能になると共に、顕微鏡の接眼レンズ
またはＴＶモニタを通して、標本照明用の照明範囲とフ
ラッシュ光の照射範囲を、予め同一視野内で確認可能に
なった。

【００４２】そして、フォトリシス光の照射位置および
範囲と標本照明位置および範囲を互に独立に規定できる
ことからフラッシュ光により引き起こされた局部的なフ
ォトリシス反応の伝播を経時的に２次元情報として得る
ことができ、又フラッシュ光を標本の必要範囲のみに照
射することが可能になったため、標本のフラッシュが不
要な部分での反応や褪色を防止できるようになった。

【００４３】

【発明の効果】本発明により、観察又は測光する領域
と、フラッシュ光を照射してフォトリシス反応を起こさ
せる領域とが、容易に独立して規定可能で、フォトリシ
ス反応の伝播が、経時的２次元情報として得られるフラ
ッシュフォトリシス用顕微鏡が得られた。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明にかかる倒立顕微鏡に適用した一実施例
の光路図である。

【図２】本発明にかかる倒立顕微鏡に適用した一実施例
の光路図である。

【図３】本発明にかかる倒立顕微鏡に適用した一実施例
の光路図である。

【図４】一実施例のダイクロイックミラーの透過・反射
率特性を示すグラフである。

【図５】一実施例の他のダイクロイックミラーの透過・
反射率特性を示すグラフである。

【図６】一実施例の標本とフラッシュ光照射部位と範
囲、観察光照射部位と範囲を示す関連図である。

【図７】一実施例の別形態の光路図である。

【図８】一実施例のコンフォーカルを応用した別形態の
光路図である。

【図９】本発明にかかる正立顕微鏡に適用した他の実施
例の光路図である。

【符号の説明】

１．照明光学系 ２、６．光源 ３．集光レンズ ４．励起フィルタ ５、５’．フラッシュ光学系 ７、３４．石英集光レンズ ８．バンドパスフィルタ ９．ダイクロイックミラー １０．標 本 １１．対物レンズ １２、１９．視野絞り １３．ダイクロイックミラー １４．フィルタ １５．観察光学系 １６．接眼レンズ １７．測光装置 １８．ビームスプリッタ ２３．ハーフミラー ３１．ランプ ３２．照明用レンズ ３３、３６．オプティカルファイバ ３５．ユニット ３７、３８．ＵＶカットフィルタ ３９．フラッシュ光照射部位 ４０．観察・測光部位 ４１．ＵＶ透過コンデンサレンズ ４２．全反射ミラー ４３．コンフォーカルユニット ４４．コンフォーカルディテクタ部

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 照明光源から射出される照明光を標本に
   照射するための照明光学系と、フラッシュ光源から射出
   される、前記照明光とは異なる波長域のフラッシュ光を
   標本に照射するためのフラッシュ光学系と、前記フラッ
   シュ光学系からのフラッシュ光を前記照明光学系に同軸
   に導入するためのダイクロイックミラーと、前記照明光
   の照射範囲を前記標本上で規定する照明用視野絞りと、
   前記フラッシュ光の照射範囲を前記標本上で規定するフ
   ラッシュ用視野絞りと、前記標本からの光学情報を受け
   る観察光学系とを備え、前記照明光の照射範囲と前記フ
   ラッシュ光の照射範囲とが独立に規定可能であることを
   特徴とするフラッシュフォトリシス用顕微鏡。
2. 【請求項２】 前記観察光学系は前記フラッシュ光の波
   長域をカットする光学手段を有することを特徴とする請
   求項１に記載の顕微鏡。