JPH06128298A - 特異的鶏卵抗体及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄から、超臨界
ガス抽出により脂質等の不純物を除去してなる、特定抗
原に対する抗体活性を実質的に有する特異的鶏卵抗体、
その製造方法、およびさらに超臨界ガス抽出により得ら
れる脱脂卵黄粉末中の卵黄水溶性タンパク質を緩衝液で
抽出し、塩析法により精製する高純度特異的鶏卵抗体の
製造方法。 【効果】本発明によれば、特定抗原で免疫された産卵鶏
より得られる卵黄粉末より、実質的に特異的抗体活性を
失活させることなく、抗体活性を実質的に有しかつ卵黄
の色、臭い、風味の少ない特異的鶏卵抗体を簡単に、か
つ安価に製造することができる。また、本発明の特異的
鶏卵抗体は、保存中の酸化に対する安定性も良好であ
り、流動性にも優れている。また、超臨界ガス抽出脱脂
卵黄粉末を出発原料として、高純度特異的鶏卵抗体が高
回収率で精製される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、食品、化粧品及び医薬
品素材として、あるいは、家畜、養殖魚用飼料及び動物
薬素材として、あるいは研究試薬及び臨床検査薬用素材
としての利用に適する特異的鶏卵抗体及びその製造方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】動物は体内に侵入してきた細菌、ウイル
ス、異種タンパク質等の異物（抗原）に対し、特異的に
結合し、その感染力あるいは毒性を消去する免疫たんぱ
く質（特異的抗体）を血液中に産生する。産卵鶏の場
合、血液中の特異的抗体は鶏卵中へ濃縮移行することが
知られている（D.T.Fraserら；J.Immunol., 26巻，347
ページ，1934年）。これは、自己のみならず、抗原から
子孫を防衛する目的で卵性動物のみが有する優れた免疫
機能である。この産卵鶏の免疫機能を利用すれば、人為
的に選ばれた抗原（特定抗原）に対する特異的抗体を鶏
卵卵黄中に得ることが可能である（R.Patterson ら；J.
Immunol., 89巻，272 ページ，1962年）。卵黄中に得ら
れる特異的抗体は血液中の特異的抗体と区別する目的
で、特異的鶏卵抗体と呼ばれている。

【０００３】従来、特異的抗体はウサギ、ヤギ等の動物
を特定抗原で免疫し、その血液中より得られていた。産
卵鶏の免疫機能を利用し、その鶏卵より得られる特異的
鶏卵抗体は、ウサギ、ヤギ等の血液から得られる特異的
血液抗体と比較し、量産が可能である、生産コストが安
い、動物生命の犠牲を必要としない等の利点を有し、現
在、その応用研究が活発に進められている。特異的鶏卵
抗体の用途分野としては、その特異的抗原認識力を利用
し、臨床検査試薬及び研究試薬として、抗原成分の同
定、定量に利用される。また、アフィニティークロマト
グラフィーのリガンドとして対応する抗原物質の精製に
利用することも可能である。

【０００４】また、特に特異的鶏卵抗体は、古来より人
類が食してきた鶏卵より得られる為、これを食品素材等
として利用し、口腔内、腸管内あるいは皮膚表面等でお
こる細菌、またはウイルス感染症の予防及び治療に役立
てる試みが成されている（T.Ebina ら；Microbiol.Immu
nol., 34巻，617 ページ，1990年：S.Otake ら；J.Dent
al.Res.(abstract),69巻，239 ページ，1990年）。この
場合、特異的鶏卵抗体は経口的または経皮的に投与さ
れ、細菌またはウイルス等の病原体が、口腔内、腸管
内、皮膚表面等の体外局所に付着感染することを阻害
し、感染症を予防及び治療する。特異的抗体は、体外局
所において対応する病原体に選択的に結合し、該病原体
の付着感染力、毒性等を中和する作用を有する。このよ
うな特異的抗体の利用法は受動免疫と呼ばれている。

【０００５】受動免疫には比較的大量の特異的抗体が必
要である。また、特異的抗体を経口的または経皮的に投
与する場合、用いる抗体の安全性等が大切である。この
ような視点から、食品である鶏卵から調製される特異的
鶏卵抗体は受動免疫への利用に最も適するものである。
従って、当業者の間では、コスト面あるいは衛生面、機
能面等において、食品素材等として有効に利用できる特
異的鶏卵抗体の開発が強く望まれ、さらに高純度かつ高
回収率に、しかも工業的に大量調製できる特異的鶏卵抗
体の製造方法の開発が強く望まれている。

【０００６】卵黄は水分48.0％，タンパク質17.8％，及
び脂質30.5％よりなる。卵黄脂質は、その殆どが遊離の
形では存在せず、種々の割合でタンパク質と結合した巨
大複合体すなわちリポタンパク質として存在する。卵黄
中には脂質と結合していないタンパク質，すなわち水溶
性タンパク質も存在する。鶏卵抗体は卵黄水溶性タンパ
ク質の１種であり、卵黄中ではリポタンパク質と混在し
卵黄エマルジョンを形成している。

【０００７】特異的鶏卵抗体を食品等へ応用する場合、
まず該鶏卵抗体を含有する卵黄粉末の利用が考えられ
る。しかしながら、この場合、卵黄の有する独特の風
味、臭い、色等が食品によっては好ましくない場合が多
い。また、卵黄粉末はその約60％が脂質であり、保存中
の脂質の酸化劣化が問題となる。また、脂質を多く含む
高カロリー食品素材では、食品用途も限定されてしま
う。脂質を多く含む粉末は流動性も悪く、食品加工上も
好ましくない。

【０００８】従って、特異的鶏卵抗体の応用としては、
該鶏卵抗体含有卵黄より、不純物として、脂質を除去す
ることが好ましく、現在、公知となっている特異的鶏卵
抗体の精製方法は、以上の観点から開発されたものとし
て、超遠心分離法（L.F.Mcbee ら；J.Food Sci.,44巻，
656 ページ，1979年）、有機溶剤による脱脂法（H.Bade
ら；J.Immunol.Methods ，72巻，421 ページ，1984
年）、ポエチレングリコール（A.Polsonら；Immunol.Co
mmun.,９巻，475 ページ，1980年）あるいはデキストラ
ン硫酸ナトリウム（J.C.Jensenius ら；J.Immunol.Meth
ods ，46巻，63ページ，1981年）を利用する卵黄リポタ
ンパク分離方法及びカラギナン等の天然多糖類を利用す
る方法（特開昭64−38098 ）等が挙げられる。

【０００９】しかし、特異的鶏卵抗体を食品素材として
応用する場合、従来の精製方法では種々の問題点を有す
る。例えば、超遠心分離法では設備的に大量調製が不可
能である。有機溶剤による脱脂法は卵黄脂質の除去に多
量の有機溶剤を必要とする。また有機溶剤による抗体活
性の失活が問題となる。リポタンパク質沈澱剤として、
ポリエチレングリコールやデキストラン硫酸ナトリウム
を用いる方法は、リポタンパク質沈澱剤が化学合成品で
あるため、得られる鶏卵抗体を食品素材として用いる目
的には好ましくない。また用いるリポタンパク質沈澱剤
が高価である。さらには、鶏卵抗体の精製操作も複雑
で、大量調製には適さないという問題点を有する。一
方、カラギナン等の天然多糖類を利用する方法は大量調
製も可能で、得られる鶏卵抗体を食品用途へ安全に利用
できるため、比較的優れた方法である。しかしながら、
特異的鶏卵抗体を受動免疫用途として、例えば食品等へ
添加し大量に用いる場合は、さらに低コスト化が望まれ
ている。

【００１０】以上のように、現在、特異的鶏卵抗体の応
用分野が数多く開発されているにもかかわらず、該特異
的鶏卵抗体を食品、化粧品及び医薬品素材として、ある
いは家畜、養殖魚用飼料及び動物薬素材として、あるい
は研究試薬及び臨床検査薬用素材として実用的に利用す
る為に、高純度かつ高回収率に、しかも大量に製造する
有効な方法がなく、近年、その開発が強く望まれてい
る。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、食
品、化粧品及び医薬品素材として、あるいは家畜、養殖
魚用飼料及び動物薬素材として、あるいは研究試薬及び
臨床検査薬用素材として実用的に利用可能な特異的鶏卵
抗体を提供することにある。本発明の他の目的は、その
ような特異的鶏卵抗体の製造方法を提供することにあ
る。

【００１２】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決するために特異的鶏卵抗体含有卵黄粉末を超臨界
ガス抽出により脂質等の不純物を除去した結果、特異的
抗体活性に何ら影響を与えることなく、卵黄独特の風
味、臭い、色等を効果的に抽出除去し、流動性の優れた
脱脂卵黄粉末を特異的鶏卵抗体として調製できることを
見い出した。また、特異的抗体活性を含有する該脱脂卵
黄粉末から、緩衝液により卵黄水溶性タンパク質を抽出
し、次いで、塩析操作により特異的鶏卵抗体を高純度に
精製できることを見い出し、本発明を完成するに至っ
た。即ち、本発明は、（１）特定抗原で免疫した産卵鶏
の卵黄から、超臨界ガス抽出により脂質等の不純物を除
去してなる、特定抗原に対する抗体活性を実質的に有す
る特異的鶏卵抗体、（２）特定抗原で免疫した産卵鶏の
卵黄から、有機溶剤抽出および超臨界ガス抽出により脂
質等の不純物を除去してなる、特定抗原に対する抗体活
性を実質的に有する特異的鶏卵抗体、（３）特定抗原で
免疫した産卵鶏の卵黄を粉末化し、次いで超臨界ガス抽
出により脂質等の不純物を除去することを特徴とする、
特定抗原に対する抗体活性を実質的に有する特異的鶏卵
抗体の製造方法、（４）特定抗原で免疫した産卵鶏の卵
黄を粉末化し、次いで有機溶剤抽出後、超臨界ガス抽出
により脂質等の不純物を除去することを特徴とする、特
定抗原に対する抗体活性を実質的に有する特異的鶏卵抗
体の製造方法、（５）特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄
を粉末化し、次いで少なくとも、超臨界ガス抽出により
脂質等の不純物を除去する工程、前記工程により得られ
る脱脂卵黄粉末中の卵黄水溶性タンパク質を緩衝液で抽
出する工程、および該抽出液中の鶏卵抗体を塩析法によ
り精製する工程を有することを特徴とする高純度特異的
鶏卵抗体の製造方法に関する。

【００１３】超臨界ガス抽出は公知の方法であり、従
来、鶏卵卵黄への応用としては、低コレステロール卵黄
粉末の調製（特開昭59−135847）あるいは、卵黄油の調
製（特開昭59−140299）に利用する方法が公知となって
いるが、特異的鶏卵抗体に着目し応用した例はなく、本
発明によりはじめて、特異的鶏卵抗体含有卵黄粉末へ超
臨界ガス抽出を応用し、抗体活性を何ら損なうことなく
食品素材としても好ましい特異的鶏卵抗体が得られた。

【００１４】本発明において特定抗原とは、細菌、ウイ
ルス、異種タンパク質、毒素、糖脂質、核酸、精子等、
産卵鶏に対し免疫活性を有する抗原のうち、人為的に選
ばれた１種以上の抗原をいう。

【００１５】具体的には、ストレプトコッカス・ミュー
タンスあるいはストレプトコッカス・ソブリヌス等のむ
し歯菌あるいは、該菌体から精製された菌体表層タンパ
ク質、グルコシルトランスフェラーゼ等の酵素等が、特
定抗原として、むし歯予防を目的とした特異的鶏卵抗体
の調製に選ばれる。

【００１６】あるいは、ロタウイルス、腸性アデノウイ
ルス等の下痢症原因ウイルス及びそれらの感染抗原等が
特定抗原として、ウイルス性下痢症予防を目的とした特
異的鶏卵抗体の調製に選ばれる。

【００１７】あるいは、病原性大腸菌、サルモネラ菌、
コレラ菌、カンピロバクター等の下痢症誘発細菌及びそ
れらの感染抗原等が特定抗原として、細菌性下痢症予防
を目的とした特異的鶏卵抗体の調製に選ばれる。

【００１８】あるいは、インフルエンザウイルス及びイ
ンフルエンザ菌等のインフルエンザ病原体が特定抗原と
して、インフルエンザ予防を目的とした特異的鶏卵抗体
の調製に選ばれる。

【００１９】あるいは、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球
菌、化膿連鎖球菌、サルモネラ菌、アイロゲネス菌、緑
膿菌、大腸菌、ジフテリア菌、座瘡菌、インフルエンザ
菌等の皮膚細菌が特定抗原として、ニキビあるいは体臭
発生の予防を目的とする特異的鶏卵抗体の調製に選ばれ
る。

【００２０】あるいは、カンピロバクター菌、毒素産生
病原性大腸菌等の食中毒菌が特定抗原として、食中毒予
防を目的とした特異的鶏卵抗体の調製に選ばれる。

【００２１】また、研究用及び臨床検査試薬用の目的と
しては、特定抗原として、例えばヒトの体液成分あるい
は各種ウイルス等が挙げられる。ヒトの体液成分として
は、例えばヒトＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＧ，ＩｇＥ，Ｉｇ
Ｄ等の免疫クロブリンが、Ｃ反応性タンパク質，アンチ
トリプシン，ハプトグロブリン等の炎症マーカーが、Ｃ
₃ ，Ｃ₄ ，Ｃ₁ ｑ等の補体成分が挙げられる。また、ウ
イルスとしては、例えばロタウイルス，アデノウイル
ス，ヒト免疫不全ウイルス，Ｂ型肝炎ウイルス等が挙げ
られる。その他にも特定抗原としては、リウマチ因子，
アポリポタンパク質，ＬＤＬ、トランスフェリン、イン
シュリン等も挙げられる。

【００２２】産卵鶏への免疫は特定抗原あるいは特定抗
原と免疫増強活性を有する水酸化アルミニウムゲルある
いはフロイントアジュバンドとの混合液を産卵鶏へ筋肉
注射、皮下注射、静脈注射、腹腔注射等の方法で投与す
ることにより行われる。免疫は週１回、あるいは隔週１
回で合計２〜５回繰り返せば、鶏卵卵黄中に目的とする
特異的鶏卵抗体を高濃度に蓄積させることができる。産
卵鶏１羽当たりの抗原量は、用いる特定抗原の種類によ
り異なるが、産卵鶏に対し充分な特異的鶏卵抗体を産生
させ得る抗原量が選ばれる。一般的には、タンパク質抗
原の場合、産卵鶏１羽当たり数μg から数十mgの抗原量
が、あるいは細菌抗原の場合は10⁵ 個から10⁹ 個の抗原
量が選ばれる。

【００２３】超臨界ガス抽出を行う卵黄は、生卵黄，凍
結解凍卵黄，あるいはそれらの卵黄液を噴霧乾燥あるい
は凍結乾燥等の公知の乾燥方法により粉末化した卵黄粉
末であればよい。特に、脂質の抽出効率を考えれば、本
発明においては卵黄粉末を用いるのが好ましい。超臨界
ガス抽出を行う卵黄粉末は、特異的鶏卵抗体を含有する
卵黄液あるいは、免疫産卵鶏をカロチノイド系色素が少
ないか、あるいは含まない飼料で飼育し得られる特異的
鶏卵抗体を含有する白色卵黄液（特願平2 −223061号）
を噴霧乾燥あるいは凍結乾燥することにより得られる。
乾燥条件は含有される特異的抗体の活性低下をおこさな
い条件であれば良く、例えば、噴霧乾燥の場合、入口熱
風温度140 〜160 ℃、排風温度75〜85℃の条件が好まし
い。また乾燥の程度は水分含量が10％以下、好ましくは
２〜５％であることが本発明において好ましい。

【００２４】本発明において超臨界ガス抽出により脂質
等の不純物を除去する工程とは、ある一定温度、圧力以
上の条件下で超臨界状態とされたガスと、特異的鶏卵抗
体含有卵黄粉末を接触させることにより脂質等の不純物
を除去する工程をいい、公知の超臨界ガス抽出装置を用
いて行うことが出来る。超臨界ガスとしては、二酸化炭
素、窒素、プロパン等の公知のものであればよく、特に
安全性及び経済性の面から本発明においては二酸化炭素
の使用が好ましい。例えば、二酸化炭素を用いる場合、
31.0℃の臨界温度以上及び72.80 気圧の臨界圧力以上で
二酸化炭素は超臨界ガス状態となり、本発明にいう卵黄
粉末中の不純物除去に用いられる。超臨界ガス抽出の条
件としては、温度は通常25〜55℃、好ましくは35〜45℃
で、通常100 〜400 気圧、好ましくは150 〜350 気圧の
条件にある超臨界二酸化炭素が本発明において用いられ
る。

【００２５】本発明においては、特異的鶏卵抗体含有卵
黄粉末と超臨界ガスの接触により、抗体活性を実質的に
失活させることなく、特異的鶏卵抗体の精製に阻害的に
働く卵黄脂質成分が効率的に抽出除去される。また、本
発明においては、特異的鶏卵抗体含有卵黄粉末と超臨界
ガスを接触させ、卵黄脂質成分を抽出除去した後、さら
に、抗酸化剤として例えばα−トコフェロールを溶解状
態とした超臨界ガスを抽出槽内に導入し、脱脂卵黄粉末
に該α−トコフェロールを吸着させることができる。こ
の操作により、脱脂卵黄粉末中の残存脂質の酸化を有効
に防止することができる。

【００２６】本発明において卵黄中の脂質成分を完全に
除去する場合は、予め有機溶剤抽出を行った卵黄を超臨
界ガス抽出することにより行うことが出来る。この場
合、卵黄重量に対し５〜15倍重量の有機溶剤が抽出に使
用され、有機溶剤抽出操作は通常１〜３回行えばよい。
しかしながら、有機溶剤抽出により、特異的抗体活性の
低下が生じるため、好ましくは卵黄重量の５〜15倍重量
で有機溶剤抽出を１回行い、直ちに抽出残渣卵黄粉末を
超臨界ガスと接触させることにより、特異的抗体活性の
失活を最小限にすることができる。

【００２７】用いられる有機溶剤としては、エタノー
ル，イソプロピルアルコール，アセトン，クロロホル
ム，ヘキサン等が用いられるが、抗体活性の失活を最小
限におさえる為には、エタノール，あるいはイソプロピ
ルアルコールが最も望ましい。

【００２８】超臨界ガス抽出を利用し、脂質が抽出除去
された脱脂卵黄から、特異的鶏卵抗体を含む、卵黄水溶
性タンパク質を抽出する為には、緩衝液が用いられる。
即ち、本発明において脱脂卵黄粉末中の卵黄水溶性タン
パク質を緩衝液で抽出する工程とは、緩衝液を用いてな
される抽出工程をいい、本発明における緩衝液とは、塩
濃度が0.1 Ｍ以上好ましくは0.15〜1.5 ＭでかつｐＨが
中性付近に調製されたものであればよく、例えばリン酸
緩衝液，トリス緩衝液等が用いられる。塩濃度は、通常
ＮａＣｌ，ＫＣｌ等の中性塩を添加することにより調整
される。

【００２９】卵黄水溶性タンパク質の抽出においては、
超臨界ガス抽出により脱脂された脱脂卵黄粉末を10〜40
倍重量の緩衝液に懸濁させ、室温で１〜４時間攪拌した
後、不溶性成分を遠心分離、濾過等の公知の方法で分離
し、その液性画分として得ることができる。

【００３０】以上のようにして得られた卵黄水溶性タン
パク質画分からの特異的鶏卵抗体の精製には、硫酸ナト
リウムあるいは硫酸アンモニウムを利用した塩析法が用
いられる。即ち、本発明において鶏卵抗体を塩析法によ
り精製する工程とは、各種の塩析法により鶏卵抗体を精
製する工程をいい、例えば卵黄水溶性タンパク質画分に
最終濃度が12.5〜25％（ｗ／ｗ）となるよう硫酸ナトリ
ウム，あるいは硫酸アンモニウムを添加し、室温で30分
〜２時間攪拌することにより、鶏卵抗体のみが選択的に
塩析される。生ずる塩析物を遠心分離あるいは濾過等で
回収した後、適当な緩衝液に再溶解し、同緩衝液に対し
充分透析後、凍結乾燥あるいは噴霧乾燥等の方法によ
り、粉末化すれば、高純度の特異的鶏卵抗体を得ること
ができる。

【００３１】特異的鶏卵抗体の純度をさらに高める必要
がある時は、上記塩析操作を数回くり返し行うか、また
は、あらかじめ卵黄水溶性タンパク質画分より、陰イオ
ン交換体等を用い、卵黄リベチンのみを精製した後、塩
析操作を行うことで実施される。卵黄リベチンとは、卵
黄水溶性タンパク質の主成分であり、鶏卵抗体もこの画
分に含まれる。

【００３２】現在、超臨界ガス抽出技術は確立されてお
り、その操作も簡単である為、本発明の方法によれば、
従来の有機溶剤脱脂法，リポタンパク質沈澱除去法を用
いた鶏卵抗体精製方法に比較し特異的鶏卵抗体の大量精
製が可能であり、その工程及び作業性も簡単でかつ安全
である。しかも、本発明の方法によれば特異的鶏卵抗体
を高純度にかつその抗体活性をほとんど失活させること
なく、抗体活性を実質的に有するものを高回収率に得る
ことができる。また、本発明の方法を用いれば、卵黄の
脱質工程においてタンパク質の変性がほとんどない為、
鶏卵抗体以外の卵黄水溶性タンパク質の精製にも適す
る。また、本発明の方法において、その工程中に残査と
して得られる卵黄脂質からは、ホスファチジルコリン，
ホスファチジルイノシトール等の有用脂質が副産物とし
て得られる利点も有する。

【００３３】本発明においては、特異的鶏卵抗体含有卵
黄粉末と超臨界ガスの接触により、抗体活性を実質的に
失活させることなく、抗体活性を実質的に有する特異的
鶏卵抗体を、越臨界ガス抽出脱脂卵黄粉末として得るこ
とができる。即ち、本発明において特定抗原に対する抗
体活性を実質的に有する特異的鶏卵抗体とは、前記のよ
うな特異的鶏卵抗体の精製に阻害的に働く卵黄脂質成分
を除去する精製段階で、抗体活性の実質的な失活がない
ことから、各種用途に必要な抗体活性を実質的に有して
いる特異的鶏卵抗体であることを意味する。該特異的鶏
卵抗体では卵黄風味、臭い及び色の主体となる卵黄脂質
の内、主に非極性脂質が効率的に不純物として抽出除去
される。従って本発明により得られる特異的鶏卵抗体
は、卵黄風味、臭い、色が少なく、かつ特異的抗体活性
が充分量保持されているため、食品素材等として有利に
利用される。

【００３４】このように本発明により得られる特異的鶏
卵抗体は、卵黄独特の風味、臭い、色が殆ど除去されて
おり、かつ特異的鶏卵抗体の活性を殆ど失活させること
なく抗体活性を実質的に有している。また粉末物性とし
て流動性が優れ、食品等の加工面からも好ましいもので
ある。超臨界ガス抽出は操作が簡単で、かつ抽出に用い
たガスは常温、常圧下で直ちに飛散するため、粉末中に
残存する危険性が全く無い。また、本発明により得られ
る特異的鶏卵抗体は、卵黄粉末と比較し酸化による臭い
の変化が非常に少なくなっている。これは、卵黄粉末中
の酸化を受けやすい物質、おそらくは非極性脂質等が効
率よく超臨界ガス抽出により抽出除去されているためと
思われる。以上のことは、特異的鶏卵抗体を食品素材と
して利用する場合、特に好ましい利点である。

【００３５】本発明によれば、特異的鶏卵抗体含有卵黄
粉末と超臨界ガスの接触により、抗体活性を実質的に失
活させることなく、高純度特異的鶏卵抗体の精製に阻害
的に働く卵黄脂質成分が効率的に抽出除去される。従っ
て、本発明により得られる特異的鶏卵抗体、すなわち、
超臨界ガス抽出脱脂卵黄粉末を出発原料として、鶏卵抗
体の抽出操作、塩析操作等を組み合わせることにより、
高純度の特異的鶏卵抗体を高回収率で精製することがで
きる。得られる高純度特異的鶏卵抗体は、研究試薬、臨
床検査薬のみならず、動物薬及び医薬品素材として利用
することができる。

【００３６】

【実施例】以下、実施例、比較例および試験例により本
発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの実施
例等によりなんら限定されるものではない。 実施例１．特異的鶏卵抗体含有卵黄粉末の調製 特定抗原として、ストレプトコッカス・ミュータンス
ＭＴ８１４８（以下Ｓ．ｍｕｔａｎｓという）菌体を用
い、産卵鶏を免疫した。抗原の調製はＳ．ｍｕｔａｎｓ
を５％砂糖を含むブレインハートインフュージョン培地
で増殖させ、3000×ｇ，10分間の遠心分離操作で集菌
後、菌体を生理食塩水で充分に洗浄し、その１ml当たり
約10⁸ 個のＳ．ｍｕｔａｎｓが含まれる様調製した。産
卵鶏１羽に対し該抗原１mlを１週間に一度、合計４回筋
肉注射した。最終の筋肉注射より３ケ月間にわたり、鶏
卵を集め、その卵黄を分離した。卵黄はホモミキサーに
より均質化した後、63℃、３分間の殺菌を行い、熱風乾
燥法（入口温度150 ℃、出口温度80℃）で粉末化した。
免疫鶏の鶏卵卵黄20kgからＳ．ｍｕｔａｎｓに対する特
異的鶏卵抗体を含有する卵黄粉末9.8 kgが得られた。

【００３７】実施例２．超臨界ガス抽出による特異的鶏
卵抗体の調製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgを超臨界抽出装置の抽
出槽（４リットル容量）に入れ、300 kg／cm² ，40℃の
条件下で超臨界ガス状態とした二酸化炭素と接触させ、
不純物の除去操作を行った。抽出された不純物は分離槽
内において、超臨界二酸化炭素ガスを60kg／cm² ，40℃
の条件に減圧し分離した。以上の不純物の除去操作を、
１時間当たり10リットルの超臨界ガス流量で６時間行っ
た後、除圧し抽出槽内より580 ｇの超臨界ガス抽出脱脂
卵黄粉末が、特異的鶏卵抗体の粉末として得られた。

【００３８】実施例３．超臨界ガス抽出による特異的鶏
卵抗体の調製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgを超臨界抽出装置の抽
出槽（４リットル容量）に入れ、300 kg／cm² ，40℃の
条件で超臨界ガス状態とした二酸化炭素と接触させ、不
純物の除去操作を行った。抽出された不純物は分離槽内
において、超臨界二酸化炭素ガスを60kg／cm² ，40℃の
条件に減圧し分離した。以上の不純物の除去操作を１時
間当たり10リットルの超臨界ガス流量で６時間行った
後、除圧し分離槽内にα−トコフェロールを1.0 ｇ含ま
せた脱脂綿を入れ、再度抽出槽、分離槽を100 kg／c
m² ，40℃の条件で超臨界二酸化炭素ガスを１時間当た
り10リットルのガス流量で２時間循環させ、α−トコフ
ェロールを抽出槽内の特異的鶏卵抗体粉末に均質分散さ
せた。除圧後、抽出槽内より580 ｇの超臨界ガス抽出脱
脂卵黄粉末が、特異的鶏卵抗体の粉末として得られた。

【００３９】実施例４．超臨界ガス抽出による特異的鶏
卵抗体の調製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgを未変性エタノール５
kg中に懸濁させ、室温30分間攪拌後、吸引ろ過によりエ
タノールと卵黄粉末を分離した。この残渣卵黄粉末を直
ちに超臨界ガス抽出装置の抽出槽（４リットル容量）に
入れ、300 kg／cm² ，40℃の条件で超臨界ガス状態とし
た二酸化炭素と接触させ、エタノール及び卵黄粉末中不
純物の除去操作を行った。抽出されたエタノール及び不
純物は分離槽内において、超臨界二酸化炭素ガスを60kg
／cm² ，40℃の条件に減圧し分離した。エタノール及び
不純物の除去操作は、１時間当たり10リットルの超臨界
ガス流量で４時間行った後、除圧し分離槽内より460 ｇ
の超臨界ガス抽出脱脂卵黄粉末が、特異的鶏卵抗体の粉
末として得られた。

【００４０】実施例５．特異的鶏卵抗体の抽出及び精製 実施例２で得られた特異的鶏卵抗体粉末580 ｇを20倍重
量の20ｍＭリン酸緩衝液（0.30ＭＮａＣｌ，ｐＨ8.0 ）
にけん濁させ、室温で２時間攪拌抽出した後、遠心分離
（3,000 ×ｇ，10分間）で不溶物を分離除去した。その
上清液に対し、15重量％濃度となるよう、硫酸ナトリウ
ムを添加溶解し、室温で30分間攪拌し塩析操作を行っ
た。塩析物は遠心分離（3,000 ×ｇ，10分間）で回収
し、20ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）に溶解後、同緩衝
液に対し充分透析した後、凍結乾燥し、凍結乾燥粉末と
して24.7ｇの精製された特異的鶏卵抗体を得た。

【００４１】実施例６．特異的鶏卵抗体の抽出及び精製 実施例４で得られた特異的鶏卵抗体粉末を用いて、実施
例５と同様の抽出及び精製操作を行い、凍結乾燥粉末と
して25.2ｇの精製された特異的鶏卵抗体を得た。

【００４２】実施例７．抗ＣＲＰ鶏卵抗体の調製 特定抗原としてヒト血中のＣ反応性タンパク質（ＣＲ
Ｐ）で過免疫された鶏の卵より卵黄を分離し、凍結乾燥
により卵黄粉末を得た。該卵黄粉末80ｇとエタノール80
0 ｇを混合し、室温30分攪拌した後、吸引濾過により、
卵黄残査を分離した。該卵黄残査を超臨界抽出装置の抽
出槽（300 ｍｌ容量）へ充填し、350 kg／cm² ，40℃の
条件下で超臨界ガス状態とした二酸化窒素と接触（1.2
ｋｇガス／時間×３時間）させ、残留エタノール及び卵
黄脂質の抽出操作を行った。

【００４３】本操作により41ｇの脱脂卵黄粉末を得た。
これを20ｍＭリン酸緩衝液（0.3 ＭＮａＣｌ含む，ｐＨ
8.0 ）400 ｍｌ中にけん濁させ、室温で２時間攪拌した
後、遠心分離により（3,000 ×ｇ，10分間）不溶物を分
離した。得られた上清に対し硫酸ナトリウムを15重量
（％）となる様、溶解し、室温で30分間攪拌し塩析操作
を行った。塩析物を遠心分離（3,000 ×ｇ，10分間）で
回収し、20ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）200 ｍｌに再
溶解した。この溶液に対し、同上の硫酸ナトリウムによ
る塩析操作を再度行い、回収された塩析物を20ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）に溶解し、同緩衝液に対し充分透
析した。透析内液を凍結乾燥し、抗ＣＲＰ鶏卵抗体1.9
ｇを得た。得られた抗ＣＲＰ鶏卵抗体のタンパク質純度
（鶏卵抗体として）は97％であった。また、免疫卵黄液
からの抗体活性（ＣＲＰ結合活性）回収率をＥＬＩＳＡ
法で測定した結果、91％であった。

【００４４】実施例８．仔豚下痢症予防鶏卵抗体の調製 特定抗原として、仔豚下痢症の病原体である大腸菌Ｋ８
８株、大腸菌Ｋ９９株、大腸菌９８７Ｐ株、及びブタロ
タウィルスＳ８０株の混合抗原で過免疫された鶏の卵よ
り卵黄を分離し、熱風乾燥により、卵黄粉末を得た。該
卵黄粉末１ｋｇを超臨界抽出装置の抽出槽（４リットル
容量）に入れ、３００ｋｇ／ｃｍ² ，４０℃の条件下で
超臨界ガス状態とした二酸化炭素と接触させ、不純物の
除去操作を行った。抽出された不純物は分離槽内におい
て、超臨界二酸化炭酸ガスを６０ｋｇ／ｃｍ² ，４０℃
の条件に減圧し分離した。以上の不純物の除去操作を１
時間当たり10リットルの超臨界ガス流量で６時間行った
後、除圧し抽出槽内より、572 ｇの超臨界ガス抽出脱脂
卵黄粉末が、仔豚下痢症予防鶏卵抗体の粉末として得ら
れた。

【００４５】実施例９．仔豚下痢症予防鶏卵抗体配合代
用初乳の調製 実施例８で調製した仔豚下痢症予防鶏卵抗体の粉末500
ｇ、脱脂粉乳7,000 ｇ、分離大豆蛋白質500 ｇ、ブドウ
糖500 ｇ、粉末油脂1,000 ｇ、及びビタミン、ミネラル
混合物500 ｇを混合し、仔豚下痢症予防鶏卵抗体配合代
用初乳を調製した。

【００４６】実施例１０．ウナギパラコロ病予防鶏卵抗
体の調製 特定抗原として、ウナギのパラコロ病病原体であるエド
ワードジェラ・タルダ菌を抗原として過免疫された鶏の
卵より、卵黄を分離し、熱風乾燥により卵黄粉末を得
た。該卵黄粉末１ｋｇを超臨界抽出装置の抽出槽（４リ
ットル容量）に入れ、３００ｋｇ／ｃｍ² ，４０℃の条
件下で超臨界ガス状態とした二酸化炭素と接触させ、不
純物の除去操作を行った。抽出された不純物は分離槽内
において、超臨界二酸化炭酸ガスを６０ｋｇ／ｃｍ² ，
４０℃の条件に減圧し分離した。以上の不純物の除去操
作を１時間当たり10リットルの超臨界ガス流量で６時間
行った後、除圧し抽出槽内より586 ｇの超臨界ガス抽出
脱脂卵黄粉末が、ウナギパラコロ病予防鶏卵抗体の粉末
として得られた。

【００４７】実施例１１．ウナギパラコロ病予防鶏卵抗
体配合ウナギ飼料の調製 実施例１０で調製したウナギパラコロ病予防鶏卵抗体50
0 ｇ、魚粉7,000 ｇ、小麦粉1,000 ｇ、コーンスターチ
800 ｇ、ビール酵母200 ｇ、食塩30ｇ、ビタミン、ミネ
ラル混合物470 ｇを混合し、ウナギパラコロ病予防鶏卵
抗体配合ウナギ飼料を調製した。

【００４８】実施例１２．小児ロタウィルス性下痢症予
報鶏卵抗体の調製 特定抗原として、小児ロタウィルス性下痢症の病原体で
あるヒトロタウィルスＷａ株（セロタイプ１型）及びヒ
トロタウィルスＭｏ株（セロタイプ３型）を抗原として
過免疫された鶏の卵より卵黄を分離し、熱風乾燥により
卵黄粉末を得た。該卵黄粉末１ｋｇを未変性エタノール
５kg中に懸濁させ、室温30分間攪拌後、吸引ろ過により
エタノールと卵黄粉末を分離した。この残渣卵黄粉末を
直ちに超臨界ガス抽出装置の抽出槽（４リットル容量）
に入れ、300 kg／cm² ，40℃の条件で超臨界ガス状態と
した二酸化炭素と接触させ、エタノール及び卵黄粉末中
不純物の除去操作を行った。抽出されたエタノール及び
不純物は分離槽内において、超臨界二酸化炭素ガスを60
kg／cm² ，40℃の条件に減圧し分離した。エタノール及
び不純物の除去操作は、１時間当たり10リットルの超臨
界ガス流量で４時間行った後、除圧し分離槽内より430
ｇの超臨界ガス抽出脱脂卵黄粉末が小児ロタウィルス性
下痢症予防鶏卵抗体の粉末として得られた。

【００４９】実施例１３．小児ロタウィルス性下痢症予
防鶏卵抗体配合粉乳の調製 実施例１２で調製した小児ロタウィルス性下痢症予防鶏
卵抗体100 ｇと、市販の調製粉乳900 ｇと混合し、小児
ロタウィルス性下痢症予防鶏卵抗体配合乳幼児調製粉乳
を調製した。

【００５０】比較例１．エタノール抽出による特異的鶏
卵抗体の調製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgを未変性エタノール５
kgに懸濁させ、室温30分間攪拌後、吸引ろ過によりエタ
ノールろ液と残渣粉末を分離した。この残渣粉末を再
度、未変性エタノール５kgに懸濁させ、上記と同様の操
作でエタノールろ液と残渣粉末を分離した。この残渣粉
末を減圧乾燥でエタノール除去することにより470 ｇの
特異的鶏卵抗体の粉末を得た。

【００５１】比較例２．カラギナンを用いた特異的鶏卵
抗体の調製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgをλ−カラギナン水溶
液（0.15重量％）９kgに溶解し、室温、30分間攪拌後、
生じたリポタンパク質−カラギナン凝集体をバスケット
型遠心分離機（3,000 ×ｇ，10分間）で沈澱物として分
離した。得られた上清液をセライトろ過した後、凍結乾
燥することにより110 ｇの特異的鶏卵抗体の粉末を得
た。

【００５２】比較例３．卵黄粉末からの特異的鶏卵抗体
の抽出及び精製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgを20倍（重量）の20ｍ
Ｍリン酸緩衝液（0.3ＮａＣｌ，ｐＨ8.0 ）にけん濁さ
せ、室温で２時間攪拌後、遠心分離（3,000 ×ｇ，10分
間）で不溶解物を除去した。その上清液に硫酸ナトリウ
ムを15重量％となるよう溶解し、室温で30分間攪拌し、
塩析操作を行った。塩析物は、遠心分離（3,000 ×ｇ，
10分間) で回収し、20ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）に
溶解後、同緩衝液に対し充分透析した後、凍結乾燥し、
精製された特異的鶏卵抗体36.4ｇを得た。

【００５３】比較例４．カラギナンを用いたリポタンパ
ク沈澱法による特異的鶏卵抗体の抽出及び精製 実施例１で得られた卵黄粉末１kgを、λ−カラギナン水
溶液（0.15重量％）９kgにけん濁させ、室温で30分間攪
拌後、生じた卵黄リポタンパク質−カラギナン凝集体を
遠心分離（3,000 ×ｇ，10分間) で沈澱物として除去し
た。得られた上清液をセライトを用いて濾過した後、そ
の濾液１kgに対し硫酸ナトリウム150 ｇを溶解し、塩析
操作を行った。生じた塩析物を遠心分離（3,000 ×ｇ，
10分間）で回収し、20ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ8.0 ）に
溶解し、同緩衝液に対し充分透析した後、凍結乾燥によ
り、精製された特異的鶏卵抗体12.6ｇを得た。

【００５４】比較例５．有機溶剤を用いた卵黄脂質除去
法による特異的鶏卵抗体の抽出及び精製 卵黄脂質の抽出に用いる有機溶剤としては、エチルアル
コール，イソプロピルアルコール，アセトン，クロロホ
ルム，及びヘキサンを用いた。実施例１で得られた卵黄
粉末１kgをそれぞれの有機溶剤，10kgにけん濁し、室温
で１時間攪拌後、吸引濾過により脱脂卵黄粉末を残査と
して回収した。これを室温，減圧下で溶剤を留去し、そ
れぞれの有機溶剤による脱脂卵黄粉末，546 ｇ（エチル
アルコール），438 ｇ（イソプロピルアルコール），57
2 ｇ（アセトン），456 ｇ（クロロホルム）及び508 ｇ
（ヘキサン）を得た。それぞれの脱脂卵黄粉末に対し、
実施例５と同様の抽出及び精製操作を行い、各有機溶剤
脱脂法による精製された特異的鶏卵抗体を、凍結乾燥粉
末として、それぞれ、19.8ｇ（エチルアルコール），2
0.3ｇ（イソプロピルアルコール），19.5ｇ（アセト
ン），22.1ｇ（クロロホルム）及び22.7ｇ（ヘキサン）
を得た。

【００５５】試験例１．特異的抗体力価回収率の比較 実施例１〜４及び比較例１，２で得られた卵黄粉末及び
特異的鶏卵抗体粉末を試料とし、それぞれに含まれる
Ｓ．ｍｕｔａｎｓに対する特異的抗体力価を酵素免疫測
定法（以下ＥＬＩＳＡという）により測定した。各試料
を0.5 ％Ｔｗｅｅｎ20を含む生理的リン酸緩衝液ｐＨ7.
2 （以下ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎという）に溶解し、１mg粉
末重量／ｍｌ濃度とした。これら試料液を100 μｌ／ウ
エルの割合で抗原として用いたＳ．ｍｕｔａｎｓを固相
へコーティングしたＥＬＩＳＡプレート（96穴，ヌンク
社製）へ添加し、37℃，１時間放置することにより抗原
と特異的抗体の反応を行った。各ウエルをＰＢＳ−Ｔｗ
ｅｅｎで充分洗浄した後、抗ニワトリＩｇＧウサギＩｇ
Ｇ−アルカリホスファターゼコンジュゲート（ザイメッ
ト社製）のＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ希釈液（2,000 倍）を10
0 μｌ／ウエルの割合で添加した。37℃で１時間放置す
ることにより、抗原と反応した特異的抗体と上記コンジ
ュゲートの反応を行った。各ウエルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅ
ｎで充分洗浄した後、0.1 ％ｐ−ニトロフェニルホスフ
ェート・２ナトリウム溶液（0.1 Ｍ炭酸ナトリウム緩衝
液ｐＨ9.6 に溶解）を基質として100 μｌ／ウエルの割
合で添加し、37℃，30分間酵素反応を行った。反応の停
止は２Ｍ水酸化ナトリウム溶液（50μｌ／ウエル）を添
加することにより行い、405 nmにおける各ウエルの吸光
度をプレートリーダーにより測定した。なお、対照とし
ては試料の代わりにＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いた。各試
料につき、４ウエルを用い、各試料の示す吸光度平均値
から対照の示す吸光度平均値を引き、それぞれの試料重
量を乗じた値（総吸光度）を各試料の総抗体力価として
比較した。結果を表１に示す。

【００５６】

【表１】

【００５７】表１の結果より、特異的鶏卵抗体調製法と
して公知であるエタノール（有機溶剤）による脂質抽出
除去法（比較例１粉末）では12％の抗体力価しか回収さ
れなかった。種々のリポタンパク質除去法の中で、最も
抗体の回収率が高く、かつ、食品用鶏卵抗体としても安
全に用いられるカラギナンを用いた方法（比較例２粉
末）では、60％の抗体力価が回収された。これら公知の
方法に比べ、本発明による特異的鶏卵抗体粉末（実施例
２〜４粉末）では、約90％の抗体力価の回収が達成され
た。

【００５８】試験例２．特異的鶏卵抗体粉末中の脂質含
量及びその組成の比較 実施例１〜４で得られた卵黄粉末及び特異的鶏卵抗体粉
末のそれぞれ１ｇを試料とし、その20倍重量のクロロホ
ルム−メタノール混液（２：１）で合計３回、脂質を抽
出し、溶剤を減圧下ロータリーエバポレーターで除去し
た後、残渣重量をそれぞれの試料が含有する総脂質量と
して比較した。また、それぞれの試料から得られた脂質
に占める非極性脂質及び極性脂質の割合をイヤトロスキ
ャン（ヤトロン社製）を用い測定した。イヤトロスキャ
ンのシリカゲルロッドに各試料を適当量アプライし、展
開溶媒としてクロロホルム：メタノール：アンモニア水
＝65：25：４の割合で混合した溶液を用い展開した。分
離した各成分を水素炎によって検出し、非極性脂質、極
性脂質及びその他の成分の含有量を計算した。結果を表
２に示す。

【００５９】

【表２】

【００６０】表２の結果より、卵黄粉末を超臨界ガス抽
出することにより、非極性脂質が選択的に除去されるこ
とが示された（実施例２、３粉末）。また、実施例４の
粉末では、おそらくエタノールと超臨界ガスの相乗作用
により、非常に効果的に、非極性脂質の除去が達成でき
た。

【００６１】試験例３．特異的鶏卵抗体粉末の酸化安定
性についての比較 実施例１〜４で得られた卵黄粉末及び特異的鶏卵抗体粉
末のそれぞれを試料とし、37℃，10,000ルクスの明所に
360 時間保存した。保存前と後の各試料について、試験
例２と同様の方法で粉末中の脂質を抽出し、それらの過
酸化物価（ＰＯＶ値）を測定することにより、各試料の
酸化性について比較した。過酸化物価の測定は、Asakaw
a らの方法（Lipids，15巻，965 ページ，1980年）を用
い、試料脂質１kg当たりのヨウ化カリウムより遊離され
るヨウ素のミリ当量数をＰＯＶ値として算出した。結果
を表３に示す。

【００６２】

【表３】

【００６３】表３の結果より、本発明の特異的鶏卵抗体
の粉末は、その明所保存時の酸化が非常に少ないという
結果が得られた。これは表２の結果より非極性脂質の除
去に由来すると考えられる。また、実施例３および実施
例４の粉末では保存中の酸化をほぼ完全に抑制できるこ
とが示された。これは前者では添加したトコフェロール
の効果によるものと思われる。後者では予めエタノール
抽出した後に超臨界ガス抽出されているため、実施例２
の粉末と比べて、卵黄脂質がより多く除去されているこ
とに基づくものと思われる。

【００６４】試験例４．特異的鶏卵抗体粉末の官能テス
ト 実施例１〜４で得られた卵黄粉末及び特異的鶏卵抗体の
それぞれについて、任意に選ばれた10人のパネラーを用
い、その色、臭い、風味について官能テストを実施し
た。評価方法については、表４に示す基準を用い行っ
た。その結果を表５に示す。

【００６５】

【表４】

【００６６】

【表５】

【００６７】表５の結果により、本発明の特異的鶏卵抗
体の粉末は、卵黄特有の色、臭い及び風味がかなり除去
されていることがわかった。表２の結果を考え合わせる
と、各特異的鶏卵抗体粉末中の残液中の脂質量と本試験
の官能テスト各スコアーは相関性が見られることから、
卵黄特有の色、臭い、風味は、非極性脂質量に由来する
と推測される。

【００６８】試験例５．特異的鶏卵抗体粉末添加チョコ
レートの官能テスト 市販のチョコレートを40℃で溶解し、この中へ実施例１
〜４で得られた卵黄粉末及び特異的鶏卵抗体粉末のそれ
ぞれを試料として、２重量％添加し、よく混練した後、
５℃で固型化し、各試料を添加したチョコレートを作成
した。任意に選ばれた10人のパネラーを用い、それぞれ
のチョコレートについて食した時に卵風味を感じるか否
かの官能テストを行った。結果を表６に示す。

【００６９】

【表６】

【００７０】表６の結果より、本発明の特異的鶏卵抗体
の粉末はチョコレートに２重量％添加しても、実質的に
その風味を損なうことがないと示された。

【００７１】試験例６．精製された特異的鶏卵抗体の抗
体力価回収率及び純度の比較 実施例１で得られたＳ．ｍｕｔａｎｓに対する特異的鶏
卵抗体含有卵黄粉末、実施例５，６、比較例３〜５で精
製された特異的鶏卵抗体について、抗体活性（抗原との
結合活性）を、抗原として用いたＳ．ｍｕｔａｎｓ全菌
体をコーティングした９６穴ポリスチレンプレート（ヌ
ンク社製）を用い、試験例１と同様の酵素免疫測定法に
より調べた。ＥＬＩＳＡプレートへ抗原として用いた
Ｓ．ｍｕｔａｎｓ全菌体をコーティングした。各ウエル
をＴｗｅｅｎ２０含有リン酸緩衝液（２０ｍＭリン酸，
0.15ＭＮａＣｌ，0.5 ％ Ｔｗｅｅｎ２０，ｐＨ7.4 、
以下ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎと呼ぶ）で３回洗浄し、オボア
ルブミンでブロッキング操作（１ｍｇ／ウエル，37℃，
１時間）を行った後、各ウエルをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで
洗浄した。実施例１で得られたＳ．ｍｕｔａｎｓに対す
る特異的鶏卵抗体含有卵黄粉末，実施例５，６，比較例
３〜５で得られたＳ．ｍｕｔａｎｓに対する特異的鶏卵
抗体のそれぞれをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎにけん濁，あるい
は溶解し、各ウエルに添加した。37℃，１時間，抗原と
抗体を反応させた後、ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで各ウエルを
洗浄した。

【００７２】２次抗体としてザイメット社製の抗ニワト
リＩｇＧウサギＩｇＧ−アルカリホスファターゼコンジ
ュゲートを用いた。２次抗体をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎで希
釈（2,000 倍）し、各ウエルへ添加した。37℃，１時
間，鶏卵抗体と２次抗体を反応させた後、ＰＢＳ−Ｔｗ
ｅｅｎで各ウエルを洗浄した。基質としては、シグマ社
製のｐ−ニトロフェニルホスフェート・２ナトリウム塩
を用いた。基質を0.1 Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ9.6 に溶解し、
各ウエルへ添加した。37℃，30分間，酵素反応を行った
後、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液を各ウエルへ添加し、酵
素反応を止めた。各鶏卵抗体サンプルの示す発色は405
ｎｍにおける吸光度を測定し、ブランク値を差し引いた
値をＥＬＩＳＡ値として計算した。それぞれの鶏卵抗体
サンプル１ｍｇ粉末の示すＥＬＩＳＡ値より、抗体活性
の回収率を算出した。

【００７３】鶏卵抗体のタンパク質純度をゲル濾過分析
法により行った。ゲル濾過カラムは、スーパーロース12
ＨＲ 10／30（ファルマシア社製）を用い、ファルマシ
ア社、高速液体クロマトグラフィーシステム（ＦＰＬ
Ｃ）で行った。展開溶媒は50ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ8.0
（0.15ＭＮａＣｌ含む）で0.5 ｍｌ／分の流速で行っ
た。実施例５，６及び比較例３〜５で得られた特異的鶏
卵抗体を展開溶媒に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）その50μｌ
をゲル濾過カラムへアプライした。カラム通過液はシン
グルパスモニター（ＵＶ−１，ファルマシア社）によ
り、波長280 ｎｍの値を測定した。また、得られたピー
クのインテグレート値により、全タンパク質ピーク面積
に対する鶏卵抗体の示すピーク面積の割合を算出し鶏卵
抗体のタンパク質純度とした。尚、鶏卵抗体の標準品と
しては、シグマ社製ニワトリ血清ＩｇＧを用いた。

【００７４】表７に実施例１の卵黄粉末及び、実施例
５，６、比較例３〜５で得られた精製鶏卵抗体の特異的
抗体活性回収率及び抗体純度を示す。卵黄粉末より鶏卵
抗体を抽出し、塩析法で高純度鶏卵抗体を精製する為に
は、まず卵黄の脱脂が必要であると示された（比較例
３）。脱脂方法として公知である有機溶剤脱脂を用いる
ことにより、抗体純度は、61〜76％まで上昇した。しか
しながら、特異的抗体の活性回収率は25〜52％であっ
た。この原因としては有機溶剤による抗体の変性失活及
び有機溶剤脱脂卵黄粉末からは鶏卵抗体が抽出されにく
いのではないかと考えられる（比較例５）。もう１つの
脱脂法としてリポタンパク質を凝集させ、卵黄水溶性タ
ンパク質と分離する方法がある。種々の卵黄リポタンパ
ク質凝集剤が公知化されてはいるがその中で最も効果の
あるλ−カラギナンを用いた場合、抗体純度は93％であ
り、高純度抗体を得ることが可能であったが、その特異
的抗体活性回収率は、68％であった。これは、抗体の変
性失活ではなく、リポタンパク質凝集物の方へ鶏卵抗体
がかなり混在し、残存するものと思われる（比較例
４）。本発明の方法によれば、抗体純度、及び抗体活性
回収率ともに90％以上で特異的鶏卵抗体の精製が行なわ
れる（実施例５，６）。これは超臨界ガス抽出法を利用
することにより、抗体の変性をおこすことなく、卵黄脂
質が効率よく抽出除去された為と思われる。また、超臨
界ガス抽出後の脱脂粉末は、有機溶剤抽出後の脱脂粉末
に比較し緩衝液等でより抽出されやすい状態として、特
異的鶏卵抗体を含有しているものと思われる。

【００７５】

【表７】

【００７６】

【発明の効果】本発明によれば、特定抗原で免疫された
産卵鶏より得られる卵黄粉末より、実質的に特異的抗体
活性を失活させることなく、抗体活性を実質的に有しか
つ卵黄の色、臭い、風味の少ない特異的鶏卵抗体を簡単
に、かつ安価に製造することができる。また、本発明の
特異的鶏卵抗体は、保存中の酸化に対する安定性も良好
であり、流動性にも優れている。また、本発明によれ
ば、高純度鶏卵抗体の精製において、阻害的に働く卵黄
脂質成分が効率的に抽出除去される。従って、本発明に
より得られる特異的鶏卵抗体、すなわち、超臨界ガス抽
出脱脂卵黄粉末を出発原料として、高純度特異的鶏卵抗
体が高回収率で精製される。このような特徴を有する本
発明の特異的鶏卵抗体は、特に食品素材用としての特異
的鶏卵抗体の応用を実用的なものとし、実際に食品へ添
加しても、その食品の風味を損なうことなく、特異的鶏
卵抗体の実際的な食品への付与が可能となった。このよ
うな特異的鶏卵抗体添加食品は、受動免疫分野への応用
に適し、口腔内、皮膚表面あるいは腸管内細胞上の局所
における付着感染を特徴とする種々の病原体に対して、
その感染予防に役立つものである。また、本発明の特異
的鶏卵抗体の粉末は、食品素材としてのみならず、家畜
や養殖魚の飼料素材、及び化粧品、医薬品分野において
も衛生的、かつ安価な特異的鶏卵抗体として幅広く利用
できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 八田 一 三重県四日市市赤堀新町９番５号 太陽化 学株式会社内 (72)発明者 西元 勝也 三重県四日市市赤堀新町９番５号 太陽化 学株式会社内 (72)発明者 金 武祚 三重県四日市市赤堀新町９番５号 太陽化 学株式会社内 (72)発明者 山本 武彦 三重県四日市市赤堀新町９番５号 太陽化 学株式会社内

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄から、
   超臨界ガス抽出により脂質等の不純物を除去してなる、
   特定抗原に対する抗体活性を実質的に有する特異的鶏卵
   抗体。
2. 【請求項２】 特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄から、
   有機溶剤抽出および超臨界ガス抽出により脂質等の不純
   物を除去してなる、特定抗原に対する抗体活性を実質的
   に有する特異的鶏卵抗体。
3. 【請求項３】 特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄を粉末
   化し、次いで超臨界ガス抽出により脂質等の不純物を除
   去することを特徴とする、特定抗原に対する抗体活性を
   実質的に有する特異的鶏卵抗体の製造方法。
4. 【請求項４】 特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄を粉末
   化し、次いで有機溶剤抽出後、超臨界ガス抽出により脂
   質等の不純物を除去することを特徴とする、特定抗原に
   対する抗体活性を実質的に有する特異的鶏卵抗体の製造
   方法。
5. 【請求項５】 特定抗原で免疫した産卵鶏の卵黄を粉末
   化し、次いで少なくとも、超臨界ガス抽出により脂質等
   の不純物を除去する工程、前記工程により得られる脱脂
   卵黄粉末中の卵黄水溶性タンパク質を緩衝液で抽出する
   工程、および該抽出液中の鶏卵抗体を塩析法により精製
   する工程を有することを特徴とする高純度特異的鶏卵抗
   体の製造方法。