JPH0579A - シユードモナス属微生物の培養方法 - Google Patents
シユードモナス属微生物の培養方法Info
- Publication number
- JPH0579A JPH0579A JP3027723A JP2772391A JPH0579A JP H0579 A JPH0579 A JP H0579A JP 3027723 A JP3027723 A JP 3027723A JP 2772391 A JP2772391 A JP 2772391A JP H0579 A JPH0579 A JP H0579A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- ppm
- decarboxylase
- culturing
- medium
- Prior art date
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- Pending
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-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性の高いシュ
ードモナス属微生物の培養法の提供。 【構成】シュードモナス属に属し、アスパラギン酸β−
脱炭酸酵素活性を有する微生物、例えばシュードモナス
・ダクネーＡＴＣＣ２１１９２を、培地の溶存酸素濃度
が０.５ｐｐｍを越えないように調節して培養する。
ードモナス属微生物の培養法の提供。 【構成】シュードモナス属に属し、アスパラギン酸β−
脱炭酸酵素活性を有する微生物、例えばシュードモナス
・ダクネーＡＴＣＣ２１１９２を、培地の溶存酸素濃度
が０.５ｐｐｍを越えないように調節して培養する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、シュードモナス属に属
し、アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性を有する微生物
の培養方法に関するものである。アスパラギン酸β−脱
炭酸酵素は、Ｌ−アラニンの製造に広く用いられてお
り、有用な酵素である。
し、アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性を有する微生物
の培養方法に関するものである。アスパラギン酸β−脱
炭酸酵素は、Ｌ−アラニンの製造に広く用いられてお
り、有用な酵素である。
【０００２】
【従来の技術】従来、シュードモナス属に属し、アスパ
ラギン酸β−脱炭酸酵素活性を有する微生物の培養法と
しては、培地中に乳酸やピルビン酸を添加する方法（特
公昭60-19997号公報）、Ｌ−グルタミン酸を添加する方
法（特公昭53-27355号公報）などが提案されている。
ラギン酸β−脱炭酸酵素活性を有する微生物の培養法と
しては、培地中に乳酸やピルビン酸を添加する方法（特
公昭60-19997号公報）、Ｌ−グルタミン酸を添加する方
法（特公昭53-27355号公報）などが提案されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】これら従来公知の方法
は、培地に添加される乳酸、ピルビン酸およびＬ−グル
タミン酸が比較的高価であるため、工業的製法としては
有利な方法であるとは言い難い。本発明は、工業的に安
価にシュードモナス属に属しアスパラギン酸β−脱炭酸
酵素活性を有する微生物を培養し、該脱炭酸酵素活性高
含量菌体を得る方法を提供することを目的とするもので
ある。
は、培地に添加される乳酸、ピルビン酸およびＬ−グル
タミン酸が比較的高価であるため、工業的製法としては
有利な方法であるとは言い難い。本発明は、工業的に安
価にシュードモナス属に属しアスパラギン酸β−脱炭酸
酵素活性を有する微生物を培養し、該脱炭酸酵素活性高
含量菌体を得る方法を提供することを目的とするもので
ある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、シュー
ドモナス属に属し、アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性
を有する微生物を培養するに際し、培地の溶存酸素濃度
が０.５ｐｐｍを越えないように調節して該微生物を培
養することを特徴とするシュードモナス属微生物の培養
方法が提供される。
ドモナス属に属し、アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性
を有する微生物を培養するに際し、培地の溶存酸素濃度
が０.５ｐｐｍを越えないように調節して該微生物を培
養することを特徴とするシュードモナス属微生物の培養
方法が提供される。
【０００５】本発明で使用されるシュードモナス属に属
し、アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含量する微生物菌
体としては、該酵素活性を有しシュードモナス属に属す
るものであればいかなる菌体をも用いることができる。
代表的なものを例示すれば、シュードモナス・ダクネー
（Pseudomonas dacunhae）ＩＡＭ １１５２、同ＡＴＣ
Ｃ ２１１９２、シュードモナス・プチダ（Psudomonas
putida）ＡＴＣＣ２１８１２、同ＩＡＭ１５０６、シ
ュードモナス・フルオレッセンス（psudomonas fluores
ens）ＩＦＯ ３０８１、シュードモナス・アエルギノ
ーザ（Psudomonas aeruginosa）ＩＡＭ １０５４など
である。
し、アスパラギン酸β−脱炭酸酵素を含量する微生物菌
体としては、該酵素活性を有しシュードモナス属に属す
るものであればいかなる菌体をも用いることができる。
代表的なものを例示すれば、シュードモナス・ダクネー
（Pseudomonas dacunhae）ＩＡＭ １１５２、同ＡＴＣ
Ｃ ２１１９２、シュードモナス・プチダ（Psudomonas
putida）ＡＴＣＣ２１８１２、同ＩＡＭ１５０６、シ
ュードモナス・フルオレッセンス（psudomonas fluores
ens）ＩＦＯ ３０８１、シュードモナス・アエルギノ
ーザ（Psudomonas aeruginosa）ＩＡＭ １０５４など
である。
【０００６】本発明方法において重要なことは、上記微
生物の培養の際に培地中の溶存酸素濃度が０.５ｐｐｍ
を越えないように調節することである。即ち、培養中は
通気撹拌を調整して、培養開始数時間のうちに溶存酸素
濃度を０.５ｐｐｍ以下となるようにし、以後該濃度を
０.５〜０.０１ｐｐｍに維持することである。
生物の培養の際に培地中の溶存酸素濃度が０.５ｐｐｍ
を越えないように調節することである。即ち、培養中は
通気撹拌を調整して、培養開始数時間のうちに溶存酸素
濃度を０.５ｐｐｍ以下となるようにし、以後該濃度を
０.５〜０.０１ｐｐｍに維持することである。
【０００７】本発明に使用される培地の炭素源は、特に
限定されるものではなく、例えばフマル酸、コハク酸、
リンゴ酸等が用いられるが、中でもフマル酸が好適であ
る。培地の窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等を
単独または混合して用いることができる。
限定されるものではなく、例えばフマル酸、コハク酸、
リンゴ酸等が用いられるが、中でもフマル酸が好適であ
る。培地の窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニ
ウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素等を
単独または混合して用いることができる。
【０００８】無機塩としては、リン酸一水素カリウム、
リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられ
る。この他に、菌の生育に必要であれば、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、コーンスティ−プリカー、カザミ
ノ酸、各種ビタミン等の栄養素を培地に添加してもよ
い。
リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられ
る。この他に、菌の生育に必要であれば、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、コーンスティ−プリカー、カザミ
ノ酸、各種ビタミン等の栄養素を培地に添加してもよ
い。
【０００９】培養は通気撹拌、振盪等の好気的条件下で
行い、培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２８〜３２
℃である。培養中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜８
付近であり、その調節は酸またはアルカリを添加して行
われる。
行い、培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２８〜３２
℃である。培養中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜８
付近であり、その調節は酸またはアルカリを添加して行
われる。
【００１０】培養開始時の培地中の炭素源の濃度は、
０.０５〜１０wt/vol％が用いられ、例えばフマル酸を
使用する場合、その濃度は好ましくは０.１〜５wt/vol
％、より好ましくは０.５〜２wt/vol％である。培養期
間は１０時間〜４日間、最適期間は１〜３日間である。
０.０５〜１０wt/vol％が用いられ、例えばフマル酸を
使用する場合、その濃度は好ましくは０.１〜５wt/vol
％、より好ましくは０.５〜２wt/vol％である。培養期
間は１０時間〜４日間、最適期間は１〜３日間である。
【００１１】
【実施例】以下の実施例において、％はいずれもwt/vol
％を意味する。 実施例 培地（フマル酸ナトリウム０.５％、フマル酸アンモニ
ウム１.０％、コーンスティ−プリカー１.０％、リン酸
第一カリウム０.０５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０.０５
％、ｐＨ７.０）１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラス
コに分注、滅菌した後、シュードモナス・ダクネーＡＴ
ＣＣ２１１９２を植菌し、３０℃にて１日間振盪培養を
行った（前培養）。次に、上記培地１０００ｍｌを２ｌ
容通気撹拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）
後、上記前培養物の２０ｍｌを添加して、回転数４００
ｒｐｍ、通気量０.５ｖｖｍ、温度３０℃、ｐＨ７.３に
て２４時間培養を行った。
％を意味する。 実施例 培地（フマル酸ナトリウム０.５％、フマル酸アンモニ
ウム１.０％、コーンスティ−プリカー１.０％、リン酸
第一カリウム０.０５％、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ０.０５
％、ｐＨ７.０）１００ｍｌを５００ｍｌ容三角フラス
コに分注、滅菌した後、シュードモナス・ダクネーＡＴ
ＣＣ２１１９２を植菌し、３０℃にて１日間振盪培養を
行った（前培養）。次に、上記培地１０００ｍｌを２ｌ
容通気撹拌槽に仕込み、滅菌（１２０℃、２０分間）
後、上記前培養物の２０ｍｌを添加して、回転数４００
ｒｐｍ、通気量０.５ｖｖｍ、温度３０℃、ｐＨ７.３に
て２４時間培養を行った。
【００１２】この培養中の培地の溶存酸素レベルはＤＯ
電極［オリエンタル電気社製Ｓ−１型 ２ｍｉｌ膜使
用］にて測定したが、培養開始後６時間で０.５ｐｐｍ
以下となり、以降０.５〜０.０１ｐｐｍに維持した。
電極［オリエンタル電気社製Ｓ−１型 ２ｍｉｌ膜使
用］にて測定したが、培養開始後６時間で０.５ｐｐｍ
以下となり、以降０.５〜０.０１ｐｐｍに維持した。
【００１３】なお、比較例として、通気量を１ｖｖｍ、
撹拌回転数１０００ｒｐｍにて、培地の溶存酸素レベル
を０.０５〜７ｐｐｍに維持した以外は実施例と同様に
培養した。（これら実施例および比較例における溶存酸
素濃度の経過を図１に示した。）
撹拌回転数１０００ｒｐｍにて、培地の溶存酸素レベル
を０.０５〜７ｐｐｍに維持した以外は実施例と同様に
培養した。（これら実施例および比較例における溶存酸
素濃度の経過を図１に示した。）
【００１４】培養終了後、これらの培養液１００ｍｌか
ら集菌した菌体を用いて、下記のようにしてアスパラギ
ン酸β−脱炭酸酵素活性を測定した。結果を第１表に示
す。なお、該活性は比較例での活性を１００とする相対
値で表した。
ら集菌した菌体を用いて、下記のようにしてアスパラギ
ン酸β−脱炭酸酵素活性を測定した。結果を第１表に示
す。なお、該活性は比較例での活性を１００とする相対
値で表した。
【００１５】
【表１】 第１表 アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性 実施例 １３５ 比較例 １００
【００１６】（アスパラギン酸β−脱炭酸酵素活性の測
定）培養液１００ｍｌから回収した菌体を反応液（アス
パラギン酸１５００ｍＭ、ピリドキサールリン酸０.０
４ｍＭ、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート
０.１容量％アンモニア０.４Ｍ含有；ｐＨ４.７）２０
ｍｌに懸濁し、３０℃にて１時間振盪した後の生成アラ
ニン量を、ペーパークロマトグラフィーまたは高速液体
ペーパークロマトグラフィーにて測定して、酵素活性を
求めた。
定）培養液１００ｍｌから回収した菌体を反応液（アス
パラギン酸１５００ｍＭ、ピリドキサールリン酸０.０
４ｍＭ、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート
０.１容量％アンモニア０.４Ｍ含有；ｐＨ４.７）２０
ｍｌに懸濁し、３０℃にて１時間振盪した後の生成アラ
ニン量を、ペーパークロマトグラフィーまたは高速液体
ペーパークロマトグラフィーにて測定して、酵素活性を
求めた。
【００１７】
【発明の効果】本発明によれば、シュードモナス属に属
する微生物を、培地の溶存酸素濃度を０.５ｐｐｍを越
えないように調節して培養することにより、アスパラギ
ン酸β−脱炭酸酵素活性の高い菌体を得ることができ
る。
する微生物を、培地の溶存酸素濃度を０.５ｐｐｍを越
えないように調節して培養することにより、アスパラギ
ン酸β−脱炭酸酵素活性の高い菌体を得ることができ
る。
【図１】本発明の実施例および比較例における、培養時
の溶存酸素濃度の経過と菌体の相対生育度を示した説明
図である。
の溶存酸素濃度の経過と菌体の相対生育度を示した説明
図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 13/06 Ｃ１２Ｒ 1:38） (72)発明者 湯川 英明 茨城県稲敷郡阿見町中央８丁目３番１号 三菱油化株式会社筑波総合研究所内
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 【請求項１】 シュードモナス属に属し、アスパラギン
酸β−脱炭酸酵素活性を有する微生物を培養するに際
し、培地の溶存酸素濃度が０.５ｐｐｍを越えないよう
に調節して該微生物を培養することを特徴とするシュー
ドモナス属微生物の培養方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3027723A JPH0579A (ja) | 1991-01-30 | 1991-01-30 | シユードモナス属微生物の培養方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3027723A JPH0579A (ja) | 1991-01-30 | 1991-01-30 | シユードモナス属微生物の培養方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0579A true JPH0579A (ja) | 1993-01-08 |
Family
ID=12228942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3027723A Pending JPH0579A (ja) | 1991-01-30 | 1991-01-30 | シユードモナス属微生物の培養方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0579A (ja) |
-
1991
- 1991-01-30 JP JP3027723A patent/JPH0579A/ja active Pending
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