JPH05500375A - ９―ベータ―ｄ―アラビノフラノシル―２―フルオロアデニン ５’―ホスフェートの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ９−ベーターＤ−アラビノフラノシル−２一本出願は１９８９年１２月４日出願 の米国特許出願第４４５，４４６号の一部継続出願である。

本発明は９−ベータークーアラビノフラノシル−２−フルオロアデニン　５′− ホスフェート（ｎ）の改良された製造法に関する。特に、本発明は９−ベーター クーアラビノフラノシル−２−フルオロアデニン（Ｉ）との燐酸化反応を本質的 に無水の条件下で行ってその５′−ホスフェートを製造する方法に関する。

（２）従来技術 ２−Ｆ−ｘｒａ−Ａ　（ＮＳ　Ｃ１１８２１８）として知られる９−ベーターク ーアラビノフラノシル−２−フルオロアデニンの製造と白血病の治療のだめの及 び抗ウィルス剤としての使用は濁知であって、モントゴメリー（Ｍｏｎｆｇｏｍ ｅｒｙ）に付与された米国特許第４，１８８，３７８号明細書に記載される。問 題は２−Ｆ−ｓｒ！−Ａの細胞毒性が非常に強いということである。この細胞毒 性を低下させる１つの努力において、９−ベーターＤ−アラビノフラノシル−２ −フルオロアデニン５′−ホスフェート（ＮＳＣ３１２８８７；　２−Ｆ−ａｒ ａ−ＡＭＰ）が製造された。通常の燐酸化反応では、生成した２−Ｆ−＆ｒａＡ −ＡＭＰの収率と純度が非常に貧弱であった。２−Ｆ−ａｒｉＡ−ＡＭＰを良好 な収率と許容できる純度で製造する能力に欠けることが医薬品のコストを高めた 。

＋ｈ（Ｋｉｍ）等のＪ、　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ　Ｎｅｃｌｅａｓｉｄｅ ｓ−ＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＳ６（３）、２２９−２３６（１９７９）、ヨシカ ワ（Ｙｏｓｈｉｋｓｖａ）等のＴｅｌ　ＬｅＬＬｔｒｓ、　５０．５０６５−　 ｓ　Ｏ６８（１９ｓ　７）、Ｂａ１１．　ｏ（ｔｈｅ　Ｃｂｅｍ、　Ｓａｃ、　 Ｊａｐａｎ、旦、３５０５−３５０８（１９６９）及びソーク（Ｓａｗｓ）等の Ｂａ１ｌ、ａｆ　ｔｈｅ　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、　ＪＪＰＪＩ＋、４８．２０８ ４−２０９０（１９７５）は各種ヌクレオシドの５′−ホスフェートの形成につ いて記載する。第一の文献においては、反応をジエステルの形成を最少限に抑え るために少量の水の添加と共に行うことが提案されている。本発明者は２−ｐ− ＊ｒａ−ＡＭＰの製造にはこの知見は不要であることを発見した。つまり、本発 明者は反応混合物に水を加えない場合にその反応は最も良く進行することを観察 したのである。

目的 従って、本発明の目的は２−Ｆ−ａｒａ−Ａから２−Ｆ−ａｒａＡ−ＡＭＰを良 好な収率と高純度で製造する改良された方法を提供することである。これらの及 び他の目的は次の説明を参照することによって次第に明らかになるだろう。

一般的説明 本発明は９−ベータークーアラビノフラノシル−２−フルオロアデニン５′−ホ スフェート（Ｉ［）の製造法に関する。この方法は９−ベーターＤ−アラビノフ ラノシル−２−フルオロアデニン（Ｉ）を真空乾燥し；真空乾燥された（Ｉ）を モル過剰の無水のトリー低級アルキルホスフェート及び燐オキシハライド（ハラ イドは臭素と塩素から選択される）と反応混合物中で本質的に無水の条件下、低 温において反応させて反応混合物中に（ｎ）の中間体を生成させ；この反応混合 物に水を加えてその中間体を加水分解し、かつ反応を停止させて水に溶解した（ ■）を得；その反応混合物を処理して反応混合物から（Ｉ［）を沈澱させ；そし て沈澱した（１１）を反応混合物から分離する工程を含んで成る。

２−Ｆ−ｓｒａ−Ａは真空下で強力に乾燥しなければならないこと、及び反応は 本質的に無水の条件下で行わなければならないことが見いだされた。２−Ｆ−ｓ ｒｓ−Ａは、完全に無水でない場合であるが、真空下で加熱して水和水の大部分 を除いた結果として本質的に無水である。トリー低級アルキルホスフェートも乾 燥される。

この低級アルキルホスフェートはトリメチルホスフェートであるのが好ましい。

アルキル基が炭素原子数１〜２個である場合のトリー低級アルキルホスフェート が使用できる。

２−Ｆ−毫ｒａ−ＡＭＰ　（ＩＩ）の生成反応が完了したら、水を添加してその 中間体（Ｓ′−ホスホロジクロリデート）を加水分解し、かつ反応を停止させる 。２−Ｆ−ｓｒａ−ＡＭＰ　（ＩＩ）は水中で溶解し、次いで水から分離される 。２−Ｆ−ａｒａ−ＡＭ　Ｐ（ＩＩ）を沈澱させるのに２−Ｆ−ａｒａ−ＡＭ　 Ｐの本質的に非溶剤である非極性有機溶剤を使用するのが好ましい。その溶剤を 除去し、そして好ましくは２−Ｆ　−ａｒａ−ＡＭＰ　（Ｉ［）を水に溶解させ 、その水から再結晶させる。その溶剤からは少量の２−Ｆ−ａｒａ−ＡＭＰ　（ ＩＩ）が回収される。

具体的説明 ９−ベーター〇−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン５′−ホスフェ− ｌ−（ＩＩ）ＮＳＣ３１２８８７ 調査研究に当たり、ヌクレオシド（１）を風乾後室温で数８間真空乾燥して１水 和物を生成させた。このＪ水和物は反応が進行するにつれて反応媒体中で容易に 溶解しく〜２０分）、また過剰の燐オキシクロライドは水和水を破壊するのに十 分のようであっｌ：が、収率は許容できないほど低かった。更なる研究において 、ヌクレオシド（Ｉ）を０．３３ｍｍＨｇ及び９０℃において２４時間乾燥して 本質的に無水の物質を得た。反応溶剤のトリメチルポス７エートを蒸留し、蒸留 画分と後留画分を捨てｊ；。これらの変更と共に、均一反応系を得るための時間 を４〜６時間に延ばすと、収率には再現性があり、同時に、室温及び０　、３　 ｍ　ｍ　Ｈｇにおいて４時間乾燥した後の１水和物としての生成物（Ｉ［）を基 準として、顕著な改良がなされた（７５〜７９％、平均７６％）。

７８５ｇの中間体（Ｉ）を処理するのに用いた典型的な１００ｇ実験について説 明する。燐オキシクロライド（８０，０ｇ、４９ｍＬ１５２３ミリモル）を冷た い（０℃、水浴）、無水の、再蒸留されたトリメチルホスフェート（ＩＬ）に加 え、その溶液を０℃で１時間保持した。乾燥された９−ベータークーアラビノフ ラノシル−２−フルオロアデニン（Ｉ）（ｘｏｏ、ｏｇ、３５０．６ミリモル） を撹拌しながらいっぺんに加えた。反応混合物は４〜６時間後に均一になった（ 淡黄色の溶液）。この反応混合物を次に冷蔵庫（〜１°Ｃ）に１５分間入れた。

ｔｌｃによれば、出発物質は存在していなかった。水（７０ｍＬ）を加え、その 溶液を０°Ｃで３時間撹拌した。その混合物を次に冷（−０°Ｃ１水浴）塩化メ チレン（８Ｌ）に撹拌しながら注ぎ込み、そして水浴中で撹拌しながら澄明な塩 化メチレン相が得られるまで（１時間）保持した。塩化メチレンをデカンテーシ ョンで除去し、残った黄色がかった、ねばねばしたかたまりを温水（〜５０’Ｏ ）（７０Ｏｍ　Ｌ　）に溶解させた。この溶液に種結晶を入れ、室温で一晩放置 した。得られた結晶性生成物を濾過により集め、水（５０ｍＬ）及びエタノール （２Ｘ　５０ｍＬ）で洗浄した。この生成物（ｎ）を室温及び０　、３　ｍ　ｍ 、　Ｈｇで４時間乾燥して第一生成物質７８．５ｇ　（ｔ　１　ｃによれば、痕 跡の不純物を含む）を得た。ｍｐは２００〜２０５℃（分解）で、〜１８５°Ｃ において前発泡があった。

ねばねばした粗生成物の単離後に残った塩化メチレンの上澄み液を水（３×５０ ０ｍＬ）で抽出した。水抽出物を合わせ、ダウエックス（Ｄｏｖｅｘ）　−５０ （酸形）樹脂が入っているカラム（５６０ｘ　８０ｍｍ）に浸み込ませた。この カラムを水で溶離し、生成物を含む両分（ＵＶモニター及びｔｉｃによる）を合 わせた。

この水性溶液を次に濃縮（アスピレータ−）してもっと少容量となしく約２５０ ｍＬ’）、−晩かけて周囲温度まで冷却させた。得られた結晶性固体（ＩＩ）を 濾過により取り出し、少量部の水で、次いでエタノールで洗浄し、そして上記の ように乾燥して（ＩＩ）の第一生成物と同じ純度（ｔｉｃによる）の生成物（Ｉ ［）を１１．０ｇ得た。同様の方法で（Ｉ［）の第一生成物からの母液を上記の ように処理して他の生成物と同じ純度（ｔｉｅ）の生成物ＩＱ、５ｇを得た。合 計収量は１００ｇであった（１水和物として計算して７０％）。

こうして、よく乾燥（２４時間、９０℃、ｏ、３ｍｍＨｇ）された本質的に無水 の出発ヌクレオシド（Ｉ）７８５ｇを処理して良質の目標化合物（Ｉ［）を７９ ９ｇ（１水和物として計算して７６％）得た。しかし、初めの実験系列では、１ 水和物としてのヌクレオシド５１０ｇを処理したが、収量は３５１ｇ（５４％） ５回の実験から得られた上記の物質（ＩＩ）１１３４ｇを予熱した脱イオン水（ ８２℃、１５ｍＬ／ｇ）に溶解させた。この化合物は７３〜７５℃において３〜 ５分で溶解した。この溶液を紙で濾過し、その濾液を２２Ｌのフラスコに移した 。この溶液を撹拌し、そして生成物（ＩＩ）の分解を最少限に抑えるべく４５〜 ５０°Ｃまで急速に冷却した。この時点で、生成物（ＩＩ）は結晶化し始めた。

この混合物を一晩ゆっくり冷却して沈澱を完結させた。温度を３２〜３３°Ｃに 下げてから沈澱を完結させると、生成物は望ましくないゲルとして沈澱する。前 記溶液を次に２時間冷却した（水浴）。得られた（ＩＩ）の沈澱を濾布で濾過す ることによって集めた。（ｎ）のフィルターケーキを冷脱イオン水（１，２５Ｌ ）とエタノール（１，８Ｌ）で連続的に洗浄した。

生成物（ｎ）を室温及びＯ−３ｍｒｎＨｇで２４時間乾燥し、秤量すると、この 時点で０．８水和物として９１６ｇであった。生成物（ＩＩ）を更に５５〜６０ ℃及び０．３ｍｍＨｇで７２時間乾燥して無水の物質ｇｓｔｇ　（回収率８２％ ）を得た。（ＩＩ）の前駆体ヌクレオシド（１）からの平均収率は６７％であっ た。母液は再処理することができ、それにより純粋な生成物（■）（約１０％） を更に単離することができる。

最後の工程における大規模な取り扱いに鑑みて、（ｎ）の最終再結晶化は不注意 によって導入された水不溶性の不純物を全て除去するのに必要であった。この酸 性生成物は、しかし、熱水中では不安定である。この再結晶化の際に若干の分解 が起こり、従って純度には真の改善は得られない。最後の工程で注意深く取り扱 うことによって、最終の再結晶化を回避することが可能である。

燐オキシクロライド（ｄ−１−６４５）塩化メチレン ダウエックス５０Ｗ−Ｘ２．５０〜１００メ／シユアルコール、３Ａ１特に変性 アルコール物理的データー及び分析データー ２−フルオロ−ａｒａ−アデノシン５′−ホスフェート、ＮＳＣ３１２８ｇ７融 点：２０２〜２０３°Ｃ（分解）、１９０°Ｃで発泡分析：　Ｃ１６Ｈ１３ＦＮ ＳＯ７Ｐ（３６５，２１）について計算計算値　測定値 Ｃ３２，８９３２，７７ Ｈ３，５９３，７４ Ｎ　１９．１７　１９．０４ Ｆ　５．２０　４．９６ Ｐ　８．４８　８．４０ 紫外線スペクトルのデータ （０−ＩＮ　Ｈｃｌ）　ランブダ（ｌａｍｂｄａ）最大（［１２０）　２６２ｎ ｍ　１３，５００（０，１Ｎ　Ｎａ０Ｈ）　ランブダ最大（Ｉｌ１２０）　２６ １ｎｍ　１５，６０Ｇ薄層クロマトグラフ　：　ＥＭ　シリカゲル６０Ｆ−２５ ４，２４０（ソーＦｒｏトＨ２Ｏ−ＮＨ４ＯＨ（７：２：Ｉ）、Ｒｆ−０，２４ 、痕跡量の不純物ａ−ＰｒＯｆ［−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ−ＮＨａＱＨ（４：　３　 ：　２　：　ｌ）、Ｒｆ−０，４１，痕跡量の不純物Ｍｅ０１１［−１１［２Ｏ −ＮＨａＯｌｌ　（７５：２５：ｌ）、Ｒｆ＝０．７０．痕跡量の不純物溶解度 のデーター：２５℃、加熱なしくＲｅｆ　１）遊離酸： 水：　９　ａｔ／ｍＬ　（８，７及び９．３　ｍｇ／ｍＬ）　、２　ｄｅｔ’ｎ ｓ％ｊｉｌｔ−２エタノール：不溶 ナトリウム塩： 水：）１００ｍｇ／ｍＬ　（上限は測定せず）以上の説明は本発明の単なる例示 であり、本発明は後記の添付請求の範囲だけによって限定されるものである。

！教員 ９−ベーターＤ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン（Ｉ）から燐酸化 反応により９−ベーターローアラビノフラノシル〜２−７Ｊレオロアデニン５゛ −ホスフェート（ＩＩ）を製造する方法が記載される。反応はく特にＣＩ）を真 空下で強く乾燥する場合に、無水の条件下で行われる。化合物（ＩＩ）は抗白血 病薬及び抗ウィルス薬である。

国際調査報告

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. １．９−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン５′−ホスフ ェート（ＩＩ）を改良された収率で製造する方法にして、次の（ａ）９−ベータ −Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン（Ｉ）を真空乾燥し； （ｂ）真空乾燥された（Ｉ）を本質的に無水の条件の下、反応混合物中でモル過 剰の無水のトリ−低級アルキルホスフェート、及びハライドが臭素と塩素から選 択されたものである燐オキシハライドと低温で反応させて反応混合物中に中間体 （ＩＩ）を生成させ； （ｃ）反応混合物に水を加えて中間体を加水分解し、かつ反応を停止さて水に溶 解した（ＩＩ）を得； （ｄ）反応混合物を処理して（ＩＩ）を反応混合物から沈殿させ；そして（ｅ） 沈澱した（ＩＩ）を反応混合物から分離する工程を含んで成る前記方法。
2. ２．トリ−低級アルキルホスフェートがトリメチルホスフェートである、請求の 範囲第１項に記載の方法。
3. ３．燐オキシハライドが燐オキシクロライドである、請求の範囲第１項に記載の 方法。
4. ４．トリ−低級アルキルホスフェートがトリメチルホスフェートであり、燐オキ シハライドが燐オキシクロライドである、請求の範囲第１項に記載の方法。
5. ５．温度が約−２〜０℃である、請求の範囲第１項に記載の方法。
6. ６．工程（ａ）の反応を反応混合物が淡黄色の溶液として均一になってから少な くとも約１６〜１８時間行う、請求の範囲第５項に記載の方法。
7. ７．（ＩＩ）を溶剤として塩化メチレンを用いて反応混合物から沈澱させる、請 求の範囲第６項に記載の方法。
8. ８．（ＩＩ）を水に溶解させ、そして再結晶させる、請求の範囲第７項に記載の 方法。
9. ９．（Ｉ）を工程（ａ）で乾燥し、約０．２ｍｍＨｇ以下の真空度において８５ 〜９０℃の温度に少なくとも２４時間加熱することによって生成させる、請求の 範囲第１項に記載の方法。
10. １０．溶剤を水で抽出して水中に（ＩＩ）を得；（ＩＩ）を有する水をイオン性 のクロマトグラフカラムに通して溶離させて（ＩＩ）を含有する水性画分を得； それらの水性画分を真空を使用し、かつ加熱して水の一部を除去することによっ て濃縮し；（ＩＩ）を含有する濃縮された水性画分の混合物を冷却して（ＩＩ） をその濃縮された溶液から結晶化させ；そして（ＩＩ）を水から分離する、請求 の範囲第７項に記載の方法。
11. １１．工程（ｄ）の分離された（ＩＩ）を加熱された水に溶解させ、その加熱さ れた水を次に冷却して（ＩＩ）を沈澱させ、その沈澱を水から分離する、請求の 範囲第１項に記載の方法。
12. １２．９−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン５′−ホス フェート（ＩＩ）を改良された収率で製造する方法にして、次の（ａ）９−ベー タ−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン（Ｉ）を真空乾燥し； （ｂ）真空乾燥された（Ｉ）を本質的に無水の条件の下、反応混合物中でモル過 剰の無水のトリメチルホスフェート及び燐オキシクロライドと約−２〜０℃の温 度で反応させて反応混合物中に（ＩＩ）の中間体を生成させ；（ｃ）反応混合物 に水を加えて中間体を加水分解し、かつ反応を停止さて水に溶解した（ＩＩ）を 得； （ｄ）反応混合物を塩化メチレンで処理して（ＩＩ）を反応混合物から沈澱させ ；そして （ｅ）沈澱した（ＩＩ）を反応混合物及び塩化メチレンから分離する工程を含ん で成る前記方法。
13. １３．温度が約０℃である、請求の範囲第１２項に記載の方法。
14. １４．反応を反応混合物が淡黄色の溶液として均一になってから少なくとも約１ ６〜１８時間行う、請求の範囲第１３項に記載の方法。
15. １５．（ＩＩ）を工程（ｄ）の後に加熱された水に溶解させ、そして再結晶させ る、請求の範囲第１２項に記載の方法。
16. １６．（Ｉ）を工程（ａ）で乾燥し、約０．２ｍｍＨｇ以下の真空度において８ ５〜９０℃の温度に少なくとも２４時間加熱することによって生成させる、請求 の範囲第１２項に記載の方法。
17. １７．工程（ｄ）の塩化メチレンを水で抽出して水中に（ＩＩ）を得；（ＩＩ） を有する水をイオン性のクロマトグラフカラムに通して溶離させて（ＩＩ）を含 有する水性画分を得；それらの水性画分を真空を使用し、かつ加熱して水の一部 を除去することによって濃縮し；（ＩＩ）を含有する濃縮された水性画分の混合 物を冷却して（ＩＩ）をその濃縮された溶液から結晶化させ；そして（ＩＩ）を 水から分離する、請求の範囲第１２項に記載の方法。
18. １８．工程（ｄ）の分離された（ＩＩ）を加熱された水に溶解し、その加熱され た水を次いで冷却して（ＩＩ）を沈澱させ、その沈澱を水から分離する、請求の 範囲第１２項に記載の方法。