JPH05500219A

JPH05500219A - 酸化窒素生成又は内皮誘導弛緩因子に関連した全身系低血圧の阻害のためのアルギニン拮抗剤

Info

Publication number: JPH05500219A
Application number: JP2513075A
Authority: JP
Inventors: キルボーン，ロバート　ジー．; グロス，スチーブン　エス．; レビ，ロベルト; グリフィス，オーウェン　ダブリュ．; ロダト，ロバート
Original assignee: Cornell Research Foundation Inc; University of Texas System
Current assignee: Cornell Research Foundation Inc; University of Texas System
Priority date: 1989-09-13
Filing date: 1990-09-13
Publication date: 1993-01-21
Anticipated expiration: 2012-11-19
Also published as: JP2679873B2; DE69034206D1; ES2256913T3; WO1991004024A1; EP0922454A2; EP0597831B1; EP0922454B1; ATE309799T1; SG48203A1; EP0922454A3; ATE175871T1; AU634826B2; DK0922454T3; KR920703042A; US5028627A; ES2132070T3; KR100230514B1; HK1011287A1; CA2065040A1; EP0597831A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】酸化窒素生成又は内皮誘導弛緩因子に関連した全身系低血圧の阻害のためのアルギニン拮抗剤本願は共通の発明者と譲受人を有しかつここで参照として挿入する、Ｏｗｅｎ　Ｗ、　Ｇｒｉｆｆｉｔｈによる名称がＩｓｏｌａｔｉｎｇ　Ａｍｉｎｏａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｕｓｅ　ｔｏ　Ｂｌｏｃｋ　Ｎ１ｔｒｉｃＯｘｉｄｅ　Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｂｏｄｙ　”の１９８９年９月１３日出願の米国特許出願５ｅｒｉａｌ　Ｎｏ、　０７／　４０６．９０９の部分継続である。

本発明の開発に関する特定の研究は米国公衆衛生総局助成金により援助され、これは本発明において米国当局に特定の権利を生ずる。

本発明は酸化窒素生成により誘起される低血圧症の予防と緩和に関する。

１９８０にＦｕｒｃｈｇｏｔｔ及びＺａｗａｄｓｋｉ　（Ｎａｔｕｒｅ　２８８　：　３７３−３７６）は血管の内側を覆う内皮細胞が刺激されて血管平滑筋を弛緩する、即ち血管拡張を引起こす物質を放出することを示した。この物質の性質は完全に未知であったので、単純に内皮誘導弛緩因子（ＥＤＲＦ）と名付けられた。現在、生理的血管拡張剤として作用する天然起源の物質がＥＤＲＦの放出を刺激することによってこの作用のすべて又は一部に介在することが広く認められている；これらの物質はアセチルコリン、ヒスタミン、ブラジキニン、ロイコトリエン、ＡＤＦ、ＡＴＦ、物質Ｐ、セロトニン、スロンビン等を含む。ＥＤＲＦの極めて短い寿命（数秒）によりこの分子を化学的に確定する努力が阻止されたが、１９８７年には幾つかの実験室はＥＤＲＦは酸化窒素（Ｎｏ）であり、これか硝酸塩及び亜硝酸塩に自発的に分解することを示唆した。このＮＯ仮説を受け入れることで基本的な問題は、ＮＯを合成できる酵素経路を含む哺乳類システムか未知であること；更にＮｏ生合成に対して可能性のある前駆体が未知であることであった。アルギニン類似体Ｌ−Ｎ’−メチルアルギニン（Ｌ−ＮＭＡ）がアセチルコリン及びヒスタミンにより誘導される血管ＥＤＲＦ／Ｎｏ合成を阻害すること、モしてＥＤＲＦ／Ｎｏ合成が過剰のし一アルギニンを加えると回復されることが観察された後に、本願発明者のある者はアルギニンがＥＤＲＦ／Ｎｏ生合成の生理的前駆体であることを提案した（Ｓａｋ’ｕｍａ等、ＰＮＡＳ　８５：８６６４−８６６７゜１９８８）。この提案を支持する別の証明が殆ど同時に報告された。本願発明者のある者は後に麻酔したモルモットでＥＤＲＦ／Ｎｏ合成の阻害は血圧を上昇させることを示し、ＥＤＲＦ／Ｎｏが血圧の重要な生理的調節剤であることを示唆した（Ａｉｓａｋａ等、ＢＲＲＣ３６０：８８１−８８６．１９８９）。ＮＯの合成を支持する証拠の蓄積にもかかわらず、他の窒素酸化物が存在すること、そして血圧を減することに活性であること、が当業者に理解されている。本明細書では頭字語ＮＯは酸化窒素及び他の血管に作用する何れの窒素酸化物も表わすものとして了解されよう。

他の実験室はマクロファージ細胞がガンマインターフェロン、バクテリア内毒素（エンドトキシン）及び種々のサイトカインの１２−３６時間処理により　“活性化”されることを示した。この“活性化”は、腫瘍細胞を殺すことの開始及びＬ−アルギニンから硝酸塩及び亜硝酸塩の生成に関連する。活性化されたマクロファージはＬ−アルギニンからＮｏを実際に作ること（丁度内皮細胞のように）そしてこのＮｏは続いて酸素と反応して生理的に不活性であるように思われる更に酸化された窒素代謝産物を形成することか観察された（Ｓｔｕｅｈｒ　等、Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６９　：　１０１１−１０２０．１９８９）。

ＮＯ合成の原因となる酵素（酸化窒素シンセターゼ）は一部には本願発明者のある者により特性化され（Ｓｔｕｅｈｒ等、ＢＢＲＣ１６１：４２０−４２８．１９８９）そしてアルギニンの末端アミノ基を酸化するように作用してＮｏとシトルリンの生成を生ずる。現在、マクロファージ誘導ＮＯは重要な膜層瘍剤及び殺菌剤であると思われる。バクテリア内毒素、ガンマインタフエロン及び他のサイトカインはマクロファージ細胞によるＮＯ生成をトリが−できるので、１）内皮細胞Ｎｏ生成は類似の刺激物により刺激されモして　２）蔽血病性ショック（即ち、バクテリア内毒素により誘起される全身系血管拡張）はＮｏ生合成の大きな活性化から生ずると思われる。

後者の仮説か正しいとの推測は尿硝酸塩レベルかバクテリア内毒素でラットの処理により大きく上昇する従来の報告により援護された（　Ｗａｇｎｅｒ　等、ＰＮＡＳ　８０：４５１８−４５２１．１９８３）。

サイトカイン（Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　）は“内皮細胞活性化“として記載される内皮細胞で形態的かつ機能的な変質を引起こすことで公知である。明白な免疫介在体、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）　、インターロイキン−１（ＩＬ−１）及びガンマインターフェロン（ＩＦＮ又はＩ）は増大した凝血促進活性（Ｂｅｖｉｌａｑｕａ　、１９８２）、ＰＣＩ２生成（Ｒｏｓｓｉ　、Ｉ　９８５　５ｃｉｅｎｃｅ　２２９゜１７４）ＨＬＡ抗原発現（Ｐｏｂｅｒ　１９８７）及びリンパ球付着分子（Ｈａｒｌａｎ　１９８５　；Ｃａｖｅｎｄｅｒ　１９８７）を含めて内皮細胞活性化の異なるが一部重なるパターンを誘起するように思われる。これらのサイトカインは低血圧、血管出血及び虚血を引起こすと報告されているが、変質した血管活性の根底にある機構は明らかでない（Ｇｏｌｄｂｌｕｍ　等、１９８９　：Ｔｒａｃｅｙ　等、　５ｃｉｅｎｃｅ２３４：４７０，１９８６）。変質した血管活性の可能な介在体はＥＤＲＦである。

生物学的応答変性剤の効果に関して治療上かつ動物の（Ｄｖｏｒａｋ、１９５９　）研究の両方において、主要な投与量制限毒性は低血圧及び血管漏洩であった。

本発明はサイトカイン、ＩＦＮＳＴＮＦ、ＩＬ−１及びＩＬ−２のような生物学的応答変性剤により誘起される全身系低血圧に対する予防と動物の治療の方法を含む。

この方法はアルギニンからの酸化窒素生成の阻害剤の治療上有効な量を好ましくは血管内に投与することを含む。

好ましい投与は血管内であるが、他の非経口投与経路、例えば、腹膜内、筋肉内又は皮下の注射が有用であると思われる。また腸又は局所の投与も特定の治療条件に対して有益である。

一具体例において、阻害剤はＮ’−置換アルギニン又はＮ’、Ｎ’−ジ置換アルギニンであり、これをＮＯ誘起全身系低血圧を多分発現し又は経験する動物に投与する。本発明のアルギニン拮抗剤は好ましくはＬ構造のものでありそして計画された治療に釣り合ったものとして何れの治療上受入れられる付加塩をも含む。

本発明の方法の特別な用法は腫瘍壊死因子又はインターロイキン−２又はこの両方を用いた化学療法処置により患者に誘起される全身系低血圧の予防又は治療に対するものである。この面で本方法は治療上有効量のＮ’　−置換アルギニン又はＮ’　、Ｎ’−ジ置換アルギニンを化学療法患者に血管内に投与することを含む。

本発明の重要な一面は内毒素により誘起される全身系低血圧、即ち敗血症ショックに対する動物の治療法としてである。ここでは予防は不適当であるが、治療は必須であり、この治療は治療上有効な量のアルギニン拮抗剤、例えば、Ｎｏ−置換アルギニン、Ｎ’、Ｎ’−ジ置換アルギニン、Ｎｏ−アミノアルギニン又はＮｏ−ニトロアルギニンをこの低血圧動物に血管内に投与することを含む。

敗血症ショックはバクテリア内毒素への暴露から生ずる生命を脅かす状態である。これは心臓血管の崩壊により明示されかつ腫瘍壊死因子のようなサイトカインの放出により介在される。これらサイトカインのあるものは血管活性物質の放出を引起こす。現在の研究では、犬にバクテリア内毒素４０μｇ／ｋｇの投与は３０から９０分以内に末梢血管抵抗で３３％の減少及び平均動脈圧で５４′％の低下を生じた。血管抵抗及び全身系動脈圧は、Ｎ’−メチル−Ｌ−アルギニン（２０ｍｇ／ｋｇ）　、酸化窒素合成の有能かつ選択的阻害剤の血管内投与後１．５分以内に正常化した。Ｎ’−メチル−Ｌ−アルギニン注入は対照の犬で血圧を上昇させたが、低血圧効果は内毒素による犬においてずっと大きかった（　２４．８±４．７　ｍｍＨｇ対４７．８±６．８ｍｍＨｇ、　ｎ＝４）　ｏ　Ｎ’−メチル−Ｌ−アルギニンはニトログリセリンの連続した血管内注入により低血圧を作った犬で血圧に適度の上昇のみを生じた。

＜　１７．１±５．０ｍｍＨｇ、　ｎ−＝３）　ｏこれらの知見は酸化窒素の過度の生成が内毒素ショックに対して重要な原因であることを示唆する。更に、本願の知見は第一に内毒素ショックに酸化窒素合成阻害剤の使用を示しそしてこの阻害剤か敗血症ショックの処置に治療価値を存するものであることを示唆する。

ここに記載するような用途に対してＬ構造の好適なＮｏ−置換アルギニン拮抗剤はＮｏ−アミノアルギニン、Ｎｏ−ニトロアルギニン、及びＮ’−アルキルアルギニン、例えば、Ｎ’−メチルアルギニン、Ｎ’−エチルアルギニン、Ｎｏ−プロピルアルギニン又はＮｏ−ブチルアルギニンである。治療上有効な量の置換又はジ置換アルギニン拮抗剤は動物又は患者にアルギニンから酸化窒素の生成を阻害し、かくしてその低血圧効果を緩和する。

更に一般的な意味で、本発明は酸化窒素の誘導された生成に関する全身系低血圧に対して動物の予防又は治療の方法に関する。この方法はアルギニンから酸化窒素の生成を阻害するために治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を動物に血管内に投与することを含む。有効なアルギニン拮抗剤は非常に種々の化合物、特に酸化窒素生成を阻害するアルギニン誘導体を含む。例えば、アルギニンのグアニジノ基又は類似のシトルリン官能基上の多くの置換体がその外に役立つ。低血圧生成酸化窒素の合成はＩＦＮＳＴＮＦｌ　ＩＬ−１、ＩＬ−２及び内毒素の少なくとも一つにより直接に又は間接に誘起される。好適な面では、ここで記載されるような使用できるアルギニン拮抗剤はＮｏ−置換アルギニン又はＮ’、Ｎ’−ジ置換アルギニンである。−具体例では、これらの拮抗剤は好ましくはメチル、エチル、プロピル及びブチルからなる群から選択されたアルキル置換基を有する。類似の拮抗剤はヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル及びアミノアルキルからなる群から選択された誘導アルキル置換体を含む。本発明の実施に使用できるアルギニン拮抗剤はアルキル、ヒドロキシアルキル及びアルケニルからなる群から選択された少な（とも一つのＮ０置換基を有するアルギニンを含む。本発明のアルギニン拮抗剤の治療上有効な量はアルギニンから酸化窒素の生成を阻害するのに十分な量である。酸化窒素は酸素の存在で硝酸塩及び（主として）亜硝酸塩イオン（一定した比で）に急速に減成する：それ故に亜硝酸塩は酸化窒素生成を示すものとして治療上測定される。

犬に治療上有効な量のＮＭＡ又はＮ’−メチルアルギニン（Ｎ’−モノメチル− Ｌ−アルギニン又はＮＭＭＡと同一）を血管内に投与する時には、この治療上有効な量は約４から約１００　ｍｇ／ｋｇである。人に対してＮＭＭＡ及び／又は他のアルギニン拮抗剤の適当な投与量は約０．１から約１００　ｍｇ／ｋｇであるべきである。

図面及び本願の他の場所で使用した略号は下記のものを含む。他のものは本文中で定義する。

Ａｃｈ　＝アセチルコリンＣＯ＝心臓心臓血液量出量ＲＦ＝内皮誘導弛緩因子ＥＴ＝内毒素（エンドトキシン）ＧＰ＝モルモットＨＩＳＴ＝ヒスタミンＩＦＮ＝１＝ガンマインターフェロンＩＶ＝静脈内Ｌ−Ａｒｇ＝Ｌ−アルギニンＬ−ＮＭＡ　（又はＮＭＭＡ）＝Ｎ’〜メチルーＬ−アルギニン＝Ｎ’−モノメチル−Ｌ−アルギニンＬＰＳ＝リン酸塩緩衝塩水中の内毒素ＬＴＤ、＝ロイコトリエンＤ４ＭＢＥＣ＝ハッカネズミ脳内皮細胞ＭＤＰ＝ムラミルジペプチドＮＥ＝ノルエピネフリンＮＭＡ＝Ｌ−ＮＭＡ＝ＮＭＭＡ＝Ｎ’−モノメチル−Ｌ−アルギニンＮＯ＝酸化窒素ＰＡＦ＝血小板活性化因子５ＡＰ＝全身系動脈圧５ＮＰ＝ナトリウムニトロプルシド５ＶＲ＝全身系血管抵抗ＴＮＦ＝腫瘍壊死因子第１図は脳内皮細胞（ＭＢＥＣ）による亜硝酸塩の生成に対して種々のサイトカインと組合わせたＩＦＮの効果を示す。

第２ａ図は一定の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）濃度及び一定範囲のＩＦＮ濃度でＭＢＥＣと関連した亜硝酸塩濃度を示す。

第２ｂ図は一定のＩＦＮ濃度及び一定範囲のＴＮＦ濃度でＭＢＥＣと関連した亜硝酸塩濃度を示す。

第３図はＴＮＦ及びＩＦＮにより誘起されたＭＢＥＣと関連した亜硝酸塩濃度を示す（時間の関数として）。

第４図はアルギニン濃度の関数としてＴＮＦ及びＩＦＮに露出させたＭＢＥＣに関連した亜硝酸塩濃度を示す。

第５図はＭＢＥＣに関連したＴＮＦ及びＩＦＮ誘導亜硝酸塩濃度のＮＭＭＡによる減少を示す。

第５ａ図は亜硝酸塩濃度のＮＭＭＡ阻害のアルギニン反転を示す。

第６図は内毒素濃度の関数として１００Ｕ　ＩＦＮ／ａｌｌを有するＭＢＥＣと関連した亜硝酸塩濃度を示す。

第７図はＴＮＦＳＮＭＭＡ及びＬ−アルギニンの連続投与の後に時間の関数として犬の全身系血圧（ＢＰ）及び６搏度数（ＨＲ）の変動を示す。

第７ａ図はまたＴＮＦ、ＮＭＭＡ及びＬ−アルギニンの連続投与の後に時間の関数として犬の全身系ＢＰ及びＨＲの変動を示す。

第７ｂ図はＮＭＭＡが予め未処置の犬に投与された対照実験を示す。

第７Ｃ図はニトログリセリン誘起穴低血圧に対するＮＭＭＡの効果を示す。

第８図はＡＣｈ　、　Ｌ　Ｔ　Ｄ　Ｄ　４及びＨＩＳＴに応じてモルモット（テンジクネズミ）肺動脈リングの内皮依存性弛緩及びＳＮＰにより引起こされる内皮非依存性弛緩に対するＮＭＭＡの効果を示す。

第９図は特定のＮ’置換アルギニン誘導体に対する動脈リングアセチルコリン誘起弛緩投与量一応答阻害曲線を示す。

第９ａ図は幾つかのモノ及びジ置換アルギニン類似体による牛の大動脈内皮細胞におけるＡ２３１８７刺激亜硝酸塩放出の阻害を示す。

第９ｂ図は幾つかのモノ及びジ置換アルギニン類似体による単離されたウサギ大動脈リング中のＡｃｈ誘起弛緩の阻害を示す。

第１θ図は様々な種から血管リングでＮＭＭＡ、Ｌ−シトルリン、Ｄ−アルギニン及びＬ−アルギニンによるＡｃｈ−誘起弛緩の変性を示す。

第１１図はＬ−ＮＭＡ、Ｄ−アルギニン（Ｄ−ａｒｇ）、Ｌ−シトルリン（Ｌ− ｃｉｔ）及びＬ−アルギニン（Ｌ−ａｒｇ　）により変性されたＮＥ−子め収縮されたウサギ大動脈及び入内部乳房動脈のＡｃｈ誘起弛緩を示す。

第１２図は牛の大動脈内皮細胞（ＢＡＥＣ’ｓ）からカルシウムイオノフオア誘起亜硝酸塩放出のＮＭＭＡによる阻害を示す。

第１３図はモルモットの心臓からヒスタミン誘起亜硝酸塩放出：ＮＭＭＡによる遮断及びＬ−アルギニンによる回復を示す。

第１４図は麻酔したモルモットでＮＭＭＡの昇圧剤効果に対する投与量一応答関係を示す。

第１５図はモルモットにおいてＮＭＭＡ高血圧の時間経過及び投与量依存性を示す。

第１６図はモルモットにおいてＬ−Ｎ’−アミノアルギニン誘起高血圧の時間経過及び投与量依存性を示す。

第１７図はモルモットにおいて濃度の関数としてＬ−Ｎｏ−アミノアルギニン及びＮＭＭＡの昇圧剤効果を示す。

第１８図は細胞中でサイトツル亜硝酸塩濃度に関してＥＭＴ６細胞のＴＦＮ及びＥＴ刺激の効果を示す。

第１９図はＩＦＮ及びＥＴにより刺激されるＥＭＴ６細胞のサイトツル中の亜硝酸生成がアルギニン及びＮＡＤＰＨに依存していることを示す。

第２０図は刺激されたＥＭＴ６サイトソル（ＩＦＮ及びＥＴで刺激された）中に存在する酵素活性によるＬ−アルギニン依存性亜硝酸塩合成に対するＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ　−Ｂｕｒｋｅプロットである。

第２１図はＮＭＭＡが第２０図に記載した酵素の競争的阻害剤であることを示す。

第２２図はＮｏ−モノエチルアルギニン（Ｌ−ＮＥＡ）が第２０図に示した酵素活性の競争的阻害剤であることを示すＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ　−Ｂｕｒｋｅプロットを示す。

第２３図は内毒素（ＥＴ）　、Ｎ’−メチル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ＨＭＡ）　、及びＬ−アルギニン（Ｌ　−Ａｒｇ）の静脈内投与を続けてベンドパルビタール麻酔した犬で平均全身系動脈圧（ＳＡＰ）で変化の時間経過を示す。

第２４図は内毒素、Ｌ−ＨＭＡ及びＬ−ＡＲＧの静脈内投与を続けてベンドパルビタールで麻酔した犬で平均全身系動脈圧（ＳＡＰ）で変化の時間経過を示す。

第２５図はＮｏ−アミノアルギニンによるＴＮＦ介在犬全身系低血圧と反転の時間経過を示す。

第２６図はＮ’−アミノアルギニンによる内毒素誘起全身系低血圧の反転を示す。

第２７図はＮＧ−アミノアルギニンによるインターロイキン−１介在低血圧の反転を示す。

特定のサイトカインのような生物学的応答変性剤の治療研究により主要な投与量制限毒性が低血圧であることが示された。これらのサイトカインはまたマクロファージを活性化することが判り、即ち腫瘍細胞に対してマクロファージを細胞毒性にするプロセスである。最近の研究によればマクロファージ誘起酸化窒素が腫瘍細胞の細胞毒性の原因となるエフェクタ分子として示唆された。

酸化窒素（Ｎｏ）は培地で硝酸塩及び亜硝酸塩に自発的に分解する極めて活性な化合物である。亜硝酸塩、即ちＮｏの主要な自発的酸化生成物が容易に分析され、ここでＮＯ生成の分析のため使用される。またＮＯは血管内皮細胞により作られることが示されているが、従来内皮誘導弛緩因子（ＥＤＲＦ）として知られている。ＥＤＲＦはブラジキニン又はアセチルコリンの低血圧剤の注入に応じて血管の平滑筋の弛緩を引起こすことが見出されている。

本発明はＴＮＦ　（５００Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ−１（ＩＯＵ／ｍ１）又は内毒素（ｌμｇ　／ｍｌ）の何れかと組合わせたＩ　ＦＮ　（１００Ｕ／ｍｌ）か培地中に亜硝酸塩を蓄積するように（４８時間で１５から８０μＭ　）　ＭＢＥＣ’ｓを誘起することの知見を含む。このレベルは活性化されたマクロファージにより生じたものに匹敵する。ＴＮＦ、ＩＬ−１又は内毒素のみは亜硝酸塩の最小のレベルの生成を誘起した（ｌ−３μＭ）。

内皮細胞によるＮｏのような血管活性因子の放出はこれらの試剤を生体内で投与することに関連した低血圧の発現に役割を果たす。本発明は培養したＭＢＥＣ’ ｓはサイトカインの種々の組合わせに応じてＮｏを生ずることそして血管内皮細胞傷害の病因におけるＮＯの可能な役割を示すことに関する。

これらの例は本発明の最良の方式、好適な具体例及び利用を記述するために提示されそしてここに付加する請求項に述べた特記なしに本発明を限定するつもりはない。

びＴＮＦ　（Ｇ酵素）。ＮＭＭＡはＤｒ、　Ｍｏｎｃａｄａ、　ロンドン、イギリスから寄贈された。内毒素（Ｅ、　Ｃｏ１１８１２６）及びすべての他の試剤をＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社（Ｓｉｇｍａ　）から得た。

内皮細胞　ＭＢＥＣ’ｓをハツカネズミ脳ミクロベッセル（ｍ１ｃｒｏｖｅｓｓｅｌｓ）から分離し、そして前記のような（Ｂｅｌｌｏｎｉ　等　１９８９）２　％ＰＰＰＨ３，５％ＦＢＳ（Ｈｙｏｌｏｕｅ　）　、５０　ａｇ　／ｍ１ＥｃＧＦ　（Ｂｉｏｍｅｄ　Ｔｅｃｈ　）及びＩＯＵ／ｍｌヘパリン（Ｓｉｇｍａ　）を補ったＤＭＥ／Ｆ１２培地にゼラチン被覆組織培養皿で培養した。

ＭＢＥＣ’ｓの内皮導出は血小板に対する血栓形成面の存在及び因子ｖｍ関連抗原に対する免疫けい光染色により確定された。すべての実験に対して６−９の継代接種でＭＢＥＣ’ｓを使用した。

亜硝酸塩分析培地１００μにゼラチン被覆ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ　）でＭＢＥ細胞を培養しそして集積後３日にサイトカインで処理した。４８時間後に、比色計分析で亜硝酸塩生成を測定した。要約すると、各培養から培地５０μｌを取出しそしてＧｒｅｉｓｓ試剤（２％ｎ５ｐｏａ中の１％スルファニルアミド及び０．１％ナフチエチレンジアミンジヒドロクロリド）５０μｌと混合し、２５℃でふりまぜながら１０分間インキュベートし、ミクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｄｅｖｉｃｅｓ　Ｃｏｒｐ−）で吸光度（ＯＤ）を測定し、水中のＮａＮ０．の標準溶液と比較して濃度を測定した。サイトカインを受けない対照培養のバックグラウンド亜硝酸塩レベルを実験値から引いた。特定の実験ではサイトカイン添加の時に成長培地にＮＭＭＡを加え、−力値にアルギニンを含まない培地に成長培地を補った。すべての処理を３回行ないそしてデータを平均値上標準偏差として示した。

ＭＢＥＣによる亜硝酸塩生成にサイトカインの効果ＭＢＥＣによる亜硝酸塩の生成に関して種々のサイトカイン又は免疫調節剤と組合わせたＩＦＨの効果を第１図に示す。Ｉ　ＦＮ　（１００Ｕ／ｍｌ）のみに内皮細胞を暴露しても亜硝酸塩生成に何の効果もないが、ＴＮＦ（５００Ｕ／ｍｌ）、Ｉ　１−１　（ｌ　ＯＵ／ｍｌ）又は内毒素（１μｇ／ｍｌ）とインターフェロンの組合わせはこれらの試剤のみの効果と比較して亜硝酸塩生成に相乗効果を生じた。ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）又はＴ　Ｉ−２のみ又はＩＮＦと組合わせの何れもかＭＢＥＣによる亜硝酸塩生成に効果がなかった。応答のこの欠除はＭＤＰ及びＩＦＮに暴露後、著しい量の亜硝酸塩を生ずる活性化マクロファージからＭＢＥＣ’ｓを区別する（Ｏｒａｐｉｅｒ等１９８８）。ＩＦＮプラスＴＮＦが亜硝酸塩生成を最も存効に誘起することが判ったサイトカイン組合わせであった（　１９．５　ｍＭ± ５）、ＴＮＦ及びＩＦＨに対する投与量応答曲線を第２ａ図と第２ｂ図に示す。

亜硝酸塩の蓄積はＩＦＮが１００　Ｕ／ｍｌの濃度で存在した時に加えたＴＮＦの濃度に比例した（第２ｂ図）。

培地中の亜硝酸塩の蓄積はＴＮＦ及びＩＦＮの添加後８時間で最初に検出可能に増加して時間依存性の方式で起こることか判明した（第３図）。最大の蓄積は４８時間で観察され、それ故にすべての続く研究では、ＴＮＦ（５００Ｕ／ｍｌ）及びＩ　ＦＮ　（１００Ｕ／ｍｌ）の添加後４８時間で硝酸塩測定を行なった。

ＴＮＦ及びＩＦＮの両方は人の屑帯内皮細胞で形態学的変性を生ずることが報告されているが、これらのハツカネズミ毛細管内皮細胞の肉眼的形態にはこれらの条件下で何の変化も検出されなかった。

アルギニンが亜硝酸塩の生成に必要である亜硝酸塩の増加した蓄積は、アルギニンを含まない培地中でＴＮＦ及びＩＦＨに暴露させたＭＢＥＣと関連しない；亜硝酸塩濃度は、培地にＬ−アルギニンを添加すると、投与量依存性方式で増大した（第４図）。亜硝酸塩生成は、また、アルギニン誘導体ＮＭＭＡの添加により阻害された（第５図）。この阻害はＮＭＭＡの濃度に比例し、そして１ｍＭ　ＮＭＭＡの存在で最大であった（Ｅ、Ｄ、５０％＝０．３３　ｍｍ）　ｏ更に、ＮＭＭＡの阻害効果は過剰のアルギニンの添加により反転され、８ｍＭのＬ−アルギニンは１ｍＭのＮＭＭＡの効果を完全に反転した（第５ａ図）。これらの結果から微細管内皮細胞が生理的前駆体としてＬ−アルギニンを使用する新しい合成によって特定のサイトカインに応じてＮｏを生ずることが示唆される。類似の代謝経路がブラジキニン及びアセチルコリンのような低血圧剤に応じて大きな血管内皮細胞によるＮｏの生成に対して確認されている（Ｐａｌｍｅｒ等１９８８　ＢＢＲＣ１５３：１２５１−１２５６；Ｋｅ１ｍ等１９８８）。

第６図に示すように内毒素は１００ユニツトＩＦＮ／［［ｌｌの存在でＭＢＥＣで亜硝酸塩生成の投与量依存性刺激を生じた。

犬にＴＮＦの投与に関連した低血圧はその遊離塩基形で下記を有するＮＭＭＡの続く投与により阻止できる二更に低血圧のこの阻止は過剰のアルギニンの投与により反転できる。これらの結果は、ＮｏがＴＮＦにより誘起される低血圧の介在体であることを示す。更に、Ｎｏ合成の活性化は、敗血症ショックの病理に含まれる。

試薬組換えの人のＴＮＦ特異活性度２Ｘ１０’ユニット／ｍｇはＮ１ｐｏｓｎ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社、東京、日本からのものであった。犬アルブミン２　ｍｇ／　ｍｌを含有するリン酸塩緩衝塩水１０ｍ１の容量に１０　ｍｃｇ　／　ｋｇの投与量でＴＮＦを投与した。Ｃｏｒｂｉｎ及びＲｅｐＯｒｔｅ！ｒの方法の適合によりＮＭＭＡを合成しくＡｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、５ユニ３１０−３１２゜１９７４）そして１５　ｍｇ／　ｋｇの投与量で投与のためにリン酸塩緩衝塩水５ｍｌに溶解させた。アルギニンはＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａ１社、Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ　、　Ｍｏから得られた。

動物４匹の調整された雑種の犬、２８から３０ｋｇの重さの２匹の雄と２匹の雌を使用した。動物の世話はＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌｓの勧告に従った（ＤＨＥＷ　（ＤＨＨ３）刊行番号（ＮＩＨ）７８−２３．改訂１９７８）。実験の当日には、犬を夜通し断食させた。これらをフエノバルビタール（１０ｍｇ／　ｋｇ）で麻酔した。次に８１０　ｆｒ、気管内管を口腔内に挿管しそして分当り１２呼吸の速度と１５ａｌｌ／ｋｇの換気容量でＨａｒｖａｒｄポンプベンチレータで換気した。実験の日に大腿部動脈中に動脈ラインを経皮的に動脈ラインに接続した応力ゲージモノメーター（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄモデル１２９ＯＡ）を使用してＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ記録システム（モデル７７５８Ｂ）に平均（エレクトロニック）及び位相全身系動脈圧（ＳＡＰ）を連続的に記録した。６搏度数（ＨＲ）をＥＫＧ）レーシングから測定しそしてＨｅｗｌｅｔｔ　−Ｐａｃｋａｒｄ記録システム上に連続的に記録した。パルスオキシメーター（Ｂ　ＩＯＸ　１１１．　Ｂｏｕｌｄｅｒ　Ｃｏ）を使用してオキシヘモグロビン飽和（ＳａＬ）を得た。５５μｇで試料化しそして磁気ディスクに６秒平均値を記憶するＬａｂ　Ｍａｓｔｅｒアナログ対デジタルコンバーター（１６チヤンネル、１２ビツト、３０　ｋＨｇ　；　５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　５ｏｕｔｉｏｎｓ社）を使用してＳＡＰ、ＨＲ及びＳａＯ□の連続時間シリーズ記録を得た。

ＮＭＭＡはＴＮＦの投与に関連した低血圧を反転することが判った。ＮＭＭＡの昇圧剤効果は迅速に（２分以内に）生じそして過剰のアルギニンの投与により拮抗される。ＮＭＭＡ昇圧剤の拮抗作用はアルギニンのＬ型に対する立体特異性であった。

第７図に示すデータは幾つかの動物実験を示している。

低血圧の程度並びにＴＮＦ投与後に、低血圧の開始に若干の変動が示される。１０分の時点でｌＯμｇ／身体重量ｋｇのＴＮＦを静脈内に投与し；約５２分で４．４　ｍｇＮＭＭＡ／ｋｇ；そして約６３分で３ｇのし一アルギニンを投与した。低血圧の開始はＴＮＦ後３０から６０分で起こることが判った。犬の番号３では、ＳＡＰは１０６から３６に急速に低下した。ＮＭＭＡの投与は１１６のＳＡＰに血圧の急速な増加を生じた。ＴＮＦに対する残りの犬の応答は第７図に記載したものに類似していた。

未処理の犬（ｎ＝３）にＮＭＭＡのみの投与も試験した。ＮＭＭＡ注人後１．７分以内に、血圧が最初に増大した。これにベースラインにＢＰの戻りと共にＨＲに補償的な減少が続いた。ＮＭＭＡ誘起徐脈が３１分続いた。

この応答はＴＮＦで予め処理しである動物では観察されなかった。次の実験では（第７ａ図）、ＴＮＦに対する低血圧応答は特に厳しく、ＢＰで１２５から３６ｍｍＨｇへ減少した。ＮＭＭＡの投与は血圧で１１５　ｍｍへ７９　ｍｍＨＨの上昇を生じた。血圧のこの上昇はＬ−アルギニンの投与により完全に反転されて血圧か再び３７ｍｍＨｇ低下することを引起こす。未処理式へＮＭＭＡを投与する対照実験を第７ｂ図に示す。２分以内に血圧は１２ｍｍＨｇだけ上昇することか観察された。これはＨＲで１０１から９２ヒ一ト／分の減少と関連する。Ｌ− アルギニンの続く投与は全身系動脈圧て観察されるこれらの小さい変化を反転させた。第２の対照研究ではニトログリセリンを２８μｇ／ｋｇ／分の割合で注入して血圧を腫瘍壊死因子で観察されたものと同一のレベルに下げた（第７Ｃ図）。ニトログリセリン注入穴にＮＭＭＡの投与後に、血圧は１４ｍｍのみ増加した。Ｌ−アルギニンの続く投与はこの適度の効果を反転させた。

ＮＭＭＡ処理した犬へＬ−アルギニンの投与は血圧に急速な減少を生じた。予め未処理の犬へＬ−アルギニンの投与により血圧は影響されなかった。

患者へ投与したＴＮＦの投与量制限毒性は低血圧である。これらの実験はＥＤＲＦとしてまた知られるＮｏが低血圧の介在体であることを意味する。更に、この血行力学的変化はＮ’−置換アルギニン誘導体により拮抗されそして続いて過剰のアルギニンの添加により回復され、Ｎｏ合成に対する基質としてアルギニンの役割を支持する。本発明者はＮＭＭＡがモルモットで静止している血圧を増大できることを示した。それ故に、ＮＯは正常な動脈圧ホメオスタシスに役割を果たす。これはまた犬でも本当であると思われる。

ＮＭＭＡに対する昇圧剤応答は正常血圧の犬におけるより、ＴＮＦ誘起低血圧を有する犬においてずっと更に劇的である。これはＴＮＦ誘起低血圧が正常に静止している血圧を調節するように作用する血管作用因子（即ち、Ｎｏ）によることを示唆する。

ＴＮＦはまた、敗血症ショックに見られる毒性の発現に含まれる。敗血症ショックは内毒素、グラム陰性有機体の細胞壁の成分により引起こされる。ＴＮＦ暴露後抗ＴＮＦ抗原の投与は低血圧に対して保護しない。これはＴＮＦが低血圧の別の介在体を誘起することを意味する。

ここに示した結果はＮＯがこの応答の真の介在体であるＬ−Ｎ’−置換アルギニン類似体はアルギニンからＮＯ合成を阻止する。ＮＭＭＡはＥＤＲＦ／Ｎｏ放出を介して作用する種々の拡張剤に応じて内皮依存性弛緩を阻止する。第８図は内皮依存性及び内皮非依存性血管拡張剤によるモルモット肺動脈リングの弛緩に対する濃度一応答曲線及びＮＭＭＡの効果を示す。血管リングを１μＭのノルエピネフリンで予め収縮させそしてアセチルコリン（Ａｃｈ、パネルＡ）、ロイコトリエンＤ４（ＬＴＤ４．パネルＢ）、ヒスタミン（ＨＩＳＴ、パネルＣ）、ナトリウムニトロプルシド（ＳＮＰ、パネルＤ）、単独（対照）の蓄積的添加によりそしてＨＭＡの存在で弛緩を導いた。点は平均信士ＳＥＭ（ｎ＝４〜８）である。

ＮＭＭＡはＡｃｈ、ＬＴＤ４及びＨＩＳＴ、即ちＥＤＲＦの放出を導くことによって血管拡張する試剤の作用を阻止し、一方ＮＭＭＡはＳＮＰ　（これは血管平滑筋に直接に作用する）による血管拡張を阻止しない。かくして、ＮＭＭＡはＥＤＲＦ介在血管拡張に特異的作用を有する。Ｌ−アルギニンがＮＭＭＡの存在で弛緩を回復することそしてＤ−立体異性体がＥＤＲＦ／Ｎｏ合成の阻害剤でないことに注目すべきである。

モルモット肺動脈のこの調製品では、メチル以外のＮ’置換を有するアルギニン類似体もＥＤＲＦ／Ｎｏ合成の阻害剤として役立つ。試験したものは次のものを含む：　ＮＯ２−１ＮＨ，−１ＣＨｓ及びジメチル−（これらのあるものに対する投与量一応答曲線を第９図に示す）。第９図はＬ−Ｎ’−置換アルギニン類似体によるモルモット肺動脈リングのＡｃｈ誘起弛緩の阻止に対する濃度一応答曲線を示す。リングを１μＭのＮＥで予め収縮させ、次にＡｃｈ　、単独（対照）、の蓄積的添加により、そして次に種々の濃度のアルギニン誘導体Ｎ’−アミノアルギニン、ＮＯ−ニトロアルギニン及びＮＭＭＡの存在で弛緩させた。弛緩の阻害％を不存在下におけるものに対するアルギニン類似体の存在下で見られる最大のＡｃｈ誘起弛緩から計算する。点は平均値±ＳＥＭ　（ｎ＝４〜６）を表わす。これまでこのように試験した化合物の中て、Ｎｉ１□置換誘導体が最大の活性を存するようであった。誘起される亜硝酸塩放出の阻害に対して試験した別のＮ’置換はアルギニングアニジノ窒素の一つに二つのメチル基を存した。牛の大動脈内皮細胞（ＢＡＥＣ）によるＡ２３１８７刺激亜硝酸塩放出の阻害に対する濃度一応答ＩＡ係を幾つかのモノ置換誘導体と比較してＮ。

Ｎ−ジ置換誘導体に対して第９ａ図に示す。酸化窒素は自発的に亜硝酸塩に減成するので酸化窒素合成の指示として亜硝酸塩生成を測定した。２時間でＢＡＥＣによる亜硝酸塩をＬ−アルギニンを含まない培地のみで又は指示した濃度のアルギニン類似体の存在で査定した。ブロットシた点は平均土工つの個々のＢＡＥＣ培地ウェルつ“に見られた亜硝酸塩生成の阻害９６のＳ、Ｅ、を表わす。

第９ａ図上のキーはＬ−アルギニンのグアニジノ窒素に置換された基を示す。Ｍｅ、　Ｍｅ−は試験したジ置換類似体を示し；この化合物はＬ−Ｎ’−メチルアルギニンに大体等しい能力を有することに注目されたい。

第９ｂ図は第９ａ図と同一セットのモノ及びジ置換アルギニン類似体プラス異なるグアニジノ窒素上に二つのメチル基を存する別のジメチル類似体に対して濃度一応答関係を比較する。この試験は分離されたウサギ大動脈リングでＡｃｈ誘起血管弛緩の阻害に対するものである。

プロットされた点は平均上爪された濃度の類似体（ｎ＝４）の存在下で見られるＡｃｈに対する最大応答のＳ、Ｅ。

を表わす。一つのグアニジノ窒素上の二つのメチル基（Ｍｅ、Ｍｅ−）が活性阻害剤であり、一方グアニジノ窒素の各々の上の一つのメチル基（Ｍｅ、　Ｍｅ’ −）を育する化合物が良好な阻害剤ではないことに注目されたい。

Ｌ−ＨＭＡはモルモット、ラット、ウサギ、犬及び最も特に人を含む一連の種から血管調製品でＥＤＲＦ／Ｎｏのアルギニン反転性阻害剤として作用することが判明した（第１０図及び第１１図を見よ）。第１Ｏ図は種種の血管床と種からの動脈てＮＭＭＡによるＡｃｈ誘起弛緩の阻害及びＬ−アルギニンによる立体特異性反転を示す。モルモット肺動脈（ＧＰＰＡ）　、ラット及びウサギ大動脈（Ａｏ）、及び犬冠状動脈（ＣＡ）及び大腿動脈（ＦＡ）をＮＥ（１μＭ）で予め収縮させそして単一濃度のＡｃｈで弛緩させた。Ａｃｈの濃度：ＧＰＰＡ　１μＭ。

ラットＡｏ０．３μＭ、ウサギＡｏ０．３、犬ＣＡＯ０３μＭ及び犬ＰＡ０．１ μＭ、５μ間であったラットＡｏ以外にはＮＭＭＡの濃度は１００μＭであった。Ｌ−シトルリン（Ｌ−ｃｉｔ）、Ｄ−アルギニン（Ｄ−ａｒｇ）及びＬ−アルギニン（Ｌ−ａｒｇ）の濃度はすべて０．５　ａ＋Ｍであった。バーは平均信士ＳＥＭ（ｎ＝４〜６）である。

第１１図はウサギ大動脈（上方パネル）及び入内部乳房動脈（下方パネル）から調製したＮＥ−子め収縮したリングのＡｃｈ誘起弛緩を示す代表的なフィジオグラフトレーシングを含む。両方の組織で、ＮＭＭＡはＡｃｈ誘起血管弛緩を減することを示し；過剰のし一アルギニンの添加は弛緩を回復する。

Ｌ−ＨＭＡはまた内皮依存性血管拡張剤を投与した時に培地中で成長させた牛肉皮細胞から（第１２図）及び分離されたモルモット心臓から（第１３図）ＥＤＲＦ／ＮＯ放出を阻害する。

第１２図は細胞培地中で成長させた半天動脈内皮細胞からカルシウムイオノフオア刺激亜硝酸塩放出のＮＭＭＡによる阻害を示す。培地へ単独で及び種々の濃度のＮＭＭＡの存在下で３μｇ／ｍｌのイオノフオア（Ａ２３１８７）の添加により細胞を刺激してＮｏを放出させた。３７℃で４時間のインキュベーションの間、亜硝酸塩（Ｎｏの安定な酸化生成物）の蓄積的放出をＮＭＭＡＩＩ度の関数として示す。点は平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）である。

第１３図は分離された心臓潅流モルモット心臓からヒスタミン誘起亜硝酸塩放出のＮＭＭＡによる阻害及びＬ−アルギニンによるその回復を示す。トロンボキサンＡ２類似体（Ｕ−４６６１９，８６ｎＭ）を含存するＫｒｅｂｓ−Ｈｅｎ５ｅｌｅｉｔ緩衝液を用いて一定圧で（４０ａｍ　ＨｔＯ）・心臓を潅流して心臓血管収縮を誘起した。大動脈へ急速塊注入としてヒスタミンを投与し、そして続＜２．５分の間正味の亜硝酸塩放出を測定した。バーは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝４〜６）を表わす。ここにはヒスタミンがＬ−ＮＭＡにより減少される心臓フローで投与量依存性増加（血管拡張）を導（ことは示されないが過剰のアルギニンの添加により回復される。かくして、Ｌ−アルギニンからＮｏ合成は、少なくとも一部にはモルモット心臓において、ヒスタミン誘起冠状動脈血管拡張を仲介すると思われる。

麻酔したモルモットへのＤ−ＮＭＡではなくＬ−ＮＭＡの投与は（１−１０ｍｇ／ｋｇ、静脈内に）静止しているレベルのＥＤＲＦ／Ｎｏ合成の阻害により拡張期ＢＰに持続された上昇を導く（第１４図及び第１５図）。

同様に、しかし更に強い作用がＬ−Ｎｏ−アミノアルギニンで観察された（第１６図及び第１７図）。第１５図及び第１６図はフエノバルビタール麻酔モルモットでＮＭＭＡ　（ＮＭＡ；第１５１１１）　及びＬ−Ｎ’　−７ミ／フルギニン（ＮＡＡ　、第１６図）により導かれる昇圧剤効果の時間経過を示す。点は拡張期動脈圧の平均変化上ＳＥＭ　（ｎ＝４〜５）である。対照の拡張期及び収縮期のＢＰは各々７５±３及び５１±３　ｍｍＨｇであった。同様にＬ−Ｎ’−エチルアルギニン（Ｌ−ＮＥＡ）を生体で試験すると、またモルモットに持続される昇圧剤効果を引起こすことが判った。

ネズミ腫瘍細胞系統ＥＭＴ６はバクテリアＥＴ１１ＦＮ及び種々のサイトカインにより活性化される時に培地の中に多量の亜硝酸塩を放出することが観察されている。かくしてＥＭＴ６サイトソル調製品（即ち、細胞を含まない溶液）を調製しそして酵素活性を特性化し、これはアルギニンからＮｏ及びシトルリンを形成する。

この反応はＮＡＤＰＨ（第１８図及び第１９図）及び共同因子を必要とする。

第１８図は未処理（対照）及びＩＦＮ及び内毒素で刺激される何れかのＥＭＴ６細胞からサイトツル調製品による３７℃で亜硝酸塩生成の時間経過を示す。インキュベーション混合物は下記のものを含む全容量１００μｌであった：サイトツル４０μｌ　（１００，０００Ｘｇ上澄み液）、Ｌ−アルギニン２［１１Ｍ、　ＮＡＤＰＨ２ｍＭ、　ＴＲ１３２０ｍＭ（ｐＨ８，０）及びプロテアーゼ阻害剤の“カクテル”。刺激された細胞から調製されたサイトツルでは亜硝酸塩合成は観察されたが、対照細胞から観察されなかった。

動力学的研究から酵素によりＬ−アルギニン使用に対する見掛けのＭｊｃｈａｅｌｉｓ−Ｍｅｎｔｏｎ定数を推定した。第２０図は刺激されたＥＭＴ６細胞からサイトツルによるＬ−アルギニンから亜硝酸塩の合成に対してＬｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅプロットである。亜硝酸塩合成の速度を第１８図に記載したものに類似の条件下で一定範囲のＬ−アルギニン（ＡＲＧ）濃度にわたって（０，０３から２．０　ｍＭ）査定したが、ただしインキュベートは８０μｌの全容量サイトツル５０μｌを含んだ。開いた及びつぶした円は二つのサイトツル調製品の各々で得られた結果を表わす。

これらの結果から６１．６μＭのＫｍ値がＮＯを合成する酵素経路によるＡＲＧの使用に対して外挿できる。ＥＭＴ６酵素システムによるアルギニン依存性ＮＯ生成を阻害する能力の正確な定量化のためＮ’−置換アルギニン類似体をスクリーンした。かくして、第２１図に示すもののようなデータからＮＭＭＡが５〜１０μＭの見掛けのＫｉを育するアルギニン使用の競争的阻害剤であることを計算できる。エチル置換化合物はこの分析では約１０倍率さい活性である（第２２図）。

これらの研究からＬ−アルギニンからＮｏ合成は一連の種から、非常に種々の試験管内調製品で提示できることが結論された。ＮＯは生体内で血管拡張の重要な介在体であり、多分血管ホメオスタシスにおいて重要な役割を果たす。最後に、Ｎ’　−１１換アルギニン類似体をＮＯ生成の酵素経路の特異的阻害剤として使用できる。か（して、この種のアルギニン拮抗剤を例１及び例２に示したもののような過剰のＮＯ生成を引起こす状態から生ずる低血圧を特異的に軽減することができる。

例　４敗血症ショック、バクテリア感染の生命を脅かす合併病に米国で年間１５０．０００から３０（１，０００人の患者が襲われる（Ｐａｒｒｉｌｌｏ、　Ｊ、　Ｅ、１９８９．５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋｉｎ　Ｈｕｍａｎｓ　：　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　、　Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ。

ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　Ａｐｐｒｏａｃｈ、　Ｉｎ　Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｃｒ１ｔｉｃａｌＣａｒｅ、第２版、−’　Ｓｈｏｅｍａｋｅｒ等編、　５ａｕｎｄｅｒｓ　ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ、　、　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ　ＰＡ、第１００６頁）。敗血症ショックに関連する心臓血管虚脱及び多様な代謝混乱は主としてバクテリアＥＴによるものであり、これは動物に投与された時に敗血症ショック様状態を導くことが示されている（Ｎａｌａｓｏｎ等、１９８９゜Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　ａｎｄ　ＴｕｍｏｒＮｅｃｒｏｓｉｓ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ　ｉｎ　Ｄｏｇｓ　Ｓｔｉｍｕｌａｔｅ　ｔｈｅＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｐｒｏｆｉｌｅ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ、　Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、１６９：８２３）、ＥＴは低血圧活性を存する幾つかのサイトカイン及び生物学的介在体の合成と放出を刺激することで知られ、放出される因子の中で、ＴＮＦ、ＰＡＦ、プロスタサイクリン及び補体誘導Ｃ５ａアナフイラトキシンが敗血症ショックの心臓血管虚脱に重要な誘因として提案されている（　Ｈｅ５ｓｅ　等。

１９８８　、　Ｃｙｔｏｋｉｎｅ　Ａｐｐｅａｒａｎｃｅ　ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎａｎｄ　Ｐｒｉｍａｔｅ　Ｂａｃｔｅｒｅｍｉａ、　Ｓｕｒｇ、Ｇｙｎｅｃｏｌ、　０ｂｓｔｅｔ。

１６６　：　ｌ　４７　；　Ｅｔｉｅｎｎｅ等、１９８６．　Ｔｈｅ　Ｒｅ１ａｔｉｖｅＲｏｌｅｏｆ　ＰＡＦ−ａｃｅｔｈｅｒａｎｄｌｃｏｓａｎｏｉｄｓｉｎＳｅｐｔｉｃＳｈｏｃｋ　、　Ｐｈａｒｃａｃｏｌ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｕｎ、　１８　：　７１　；　Ｈａｌｕｓｈｋａ等、１９８５　、Ｅｌｅｖａｔｅｄ　Ｐｌａｓｍａ６−ｋｅｔｏｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎＦ　１　ａｌｐｈ　ｉｎ　Ｐａｔｉｅｎｔ　ｉｎ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ　、　Ｃｒ１ｔ、　ＣａｒｅＭｅｄ、　ｌ　３　：　４５１　：　Ｓｍｅ″ｄｅｇａｒｄ　、等、１９８９゜Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ　−１ｎｄｕｃｅｄ　５ｈｏｃｋ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｒａｔ　；　Ａ　Ｒｏｌｅ　ｆｏｒＣ５ａ　、　Ａｍ、　Ｊ、　Ｐａｔｈｏｌ、　１３５　：　４８９　）　。抗ＴＮＦ抗原（Ｂｅｕｔｌｅｒ等＋　Ｐａ５ｓｉｖｅ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ　ａｇａｉｎｓｔｃａｃｈｅｃｔｉｎ　／ＴＮＦ　ｐｒｏｔｅｃｔｓ　ｍ１ｃｅ　ｆｒｏｍ　１ｅｔｈａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆ　ＥＴ、　５ｃｉｅｎｃｅ、２２９　：　８６９）、ＰＡＦレセプタ拮抗剤（Ｃａｓａｌｓ−３ｔｅｎｚｅｌ　、１９８７゜Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ｏｆ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　Ｅｎｄｏ−ｔｏｘｉｎ　５ｈｏｃｋ　、Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｌ　３５　：１１７）及びプロスタサイクリン合成阻害剤（Ｗｉｓｅ等。

１９８５　、Ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ　、　Ｍｅｔｈｙｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ　、　ａｎｄＧｅｎｔａｍｙｃｉｎ　ａｓ　Ｃｏｊｏｉｎｔ　Ｔｈｅｒａｐｙ　ｉｎ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ　。

Ｃ１ｒｃ、　５ｈｏｃｋ　１７　：　５９　）で予め処理した動物は敗血症ショックに対して著しく保護されることが示されていたが、敗血症ショックの病理学においてこれらの介在体の相対的重要性は現在不確かである。またこれらの介在体のあるものは二次的介在体の放出を介して間接に作用する証拠もある。かくしてＥＴ露出後に与えた時には抗ＴＮＦ抗原は保護効果を殆ど又は全く有しないとの知見（Ｂｅｕｔｌｅｒ等、１９８５．　Ｐａ５ｓｉｖｅ　ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎａｇａｉｎｓｔ　ｃａｃｈｅｃｔｉｎ　／　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ｐｒｏｔｅｃｔｓｍｉｃｅ　ｆｒｏｍ　１ｅｔｈａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ、　５ｃｉｅｎｃｅ　。

２２９：８６９）はＴＮＦは真の低血圧剤である別の因子の生成を刺激し；一度開始するとこの因子の合成と放出は検出可能なＴＮＦレベルの不存在下でさえ明確に続けられることを示唆する。

本願発明者は培養したネズミ内皮細胞を免疫調節剤及び内毒素に暴露させた時に亜硝酸塩が蓄積することを示した（　Ｋ１１ｂｏｕｒｎ　等、１９９０．　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｉｔ？ｏｇｅｎｏｘｉｄｅｓ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　１ｎｔｅｒ−ｆｅｒｏｎ　ｇａｍｍａ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ、　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ　−１、ｏｒ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ、　Ｊ、　Ｎａｔｌ。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、８２　：　７２２　）　ｏ酸化窒素（ＮＯ）合成経路からこの亜硝酸塩か生ずることは、その蓄積がＬ−アルギニン依存性であること、そしてＮｏシンセターセの選択的阻害剤であるＮ’−メチル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ＨＭＡ）に阻害されることの観察により示される（　Ｈｉｂｂｓ等、１９８８．　Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ　；Ｒｏｌｅ　ｆｏｒ　Ｌ−Ａｒｇｉｎｉｎｅ　Ｄｅｉｍｉｎａｓｅ　ａｎｄ　１ｍ１ｎｏ　Ｎｉｔｒｏ−ｇｅｎ　０ｘｉｄａｔｉｏｎ　ｔｏ　Ｎ１ｔｒｉｔｅ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｕｎ、１５７：８７）、ＮＯは強い内皮誘導弛緩因子（ＥＤＲＦ）であるので、これらの研究はＮＯの過保護は内毒素及びサイトカイン投与に関連した心臓血管変化の原因であることを示唆する。この見解と一致して、本願発明者は犬にＴＮＦにより導かれた低血圧応答はＬ−ＨＭＡの投与に完全に反転できることを見出した（Ｋｉｌｂｏｕｒｎ　等、１９９０．　Ｎ’　−ｍｅｔｈｙｌ−Ｌ　 −ａｒｇｉ−ｎｉｎｅ　１ｎｈｉｂｉｔｓ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　１ｎｄｕｃｅｄ　ｈｙｐｏ−ｔｅｎｓｉｏｎ　：　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ。

８７：３６２９）。現在の研究では犬で内毒素誘起ショックに対するＬ−ＮＭＡの効果を調べた。現在の知見はＮＯが内毒素誘起低血圧の重要な介在体であること、そしてＮｏ合成の阻害剤か敗血症ショックの処置に有用であることを示す。

試剤：前記のようにＮｏ−メチル−し−アルギニンを合成しくＣｏｒｂｉｎ　等、１９７４．　Ｎ’　−ＭｅｔｈｙｌａｔｅｄＡｒｇｉｎｉｎｅｓ　；　Ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎ’　−Ｍｅｔｈｙｌａｒｇｉｎｉｎｅｓ、Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　５　７．　３　１　０　−　３１２）そしてモノフラビアネート塩として結晶化により精製した。遊離アミノ酸の溶液がＤｏｗｅｘ　−１（ＯＨ）で塩の懸濁液をかきまぜることによって得られ、Ｆ（Ｃ１て中和後に、基準として結晶性モノフラビアネート塩を使用してアミノ酸分析によりＬ−ＮＭＡの濃度を測定した。

内毒素（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　；　Ｂ　Ｏ１２８：　Ｂ　１２　）及びすべての他の試剤をＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｉｓ。

Ｍｉｓｓｏｕｒｉから購入した。ニトログリセリンをＤｕＰｏｎｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ　、　Ｗｉｌｌｍｉｎｇｔｏｎ　、　Ｄ、Ｅ、から購入した。

動物８重さ２２−３２ｋｇ（平均＝２５．３ｇ）の１２匹の調整された雑種犬（雄９匹と鯨３匹）で研究を行なった。動物の世話はＡｍｅｒｉｃａｎ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ａｃｃｒｅｄｉ−ｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌ　Ｃａｒｅの勧告に従いそしてＧｕｉｄｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｃａｒｅ　ａｎｄ　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉｍａｌｓ。

１９７８　、　Ｄｅｐｔ、　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ　、　ｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｗｅｌｆａｒｅ　。

Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、　Ｄ、Ｃ，（Ｐｕｂｌ、　Ｎｏ、７８−２３　）に記載するすべての規準に合致した。動物プロトコールはＴｈｅＬｌｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｅｘａｓ　Ａｎｉｍａｌ　Ｗｅｌｆａｒｅ　Ｃｏｍｍ１ｔｔｅｅにより承認された。実験の日の前に夜通し犬を断食させた。犬をベンドパルビタール（２５ｍｇ／ｋｇ　１．Ｖ、）で麻酔した。

次に犬の気管内に挿管しそして２０ｍ１／ｋｇの一回換気量と分当り１０から１２呼吸の割合で室の空気を使用して換気し、正常な動脈ｐＨとｐＣＯ□を得るように調節した（Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　ｌ　Ｌ　１　３０２　ｐＨ／血液ガス分析器）。大腿動脈及び肺動脈に経皮的にカテーテルを入れた：後者には、フロー指向性、熱拡張カテーテルを使用した（Ａｂｂｏｔｔ　Ｃｒ１ｔｉｃａｌ　Ｃａｒｅ　Ｓｙｓｔｅｍ　）。

生理学的測定：平均ＳＡＰ及び６搏度数を連続的にモニタしくＰａｒａｍｅｔｒｏｎ　７０４８　Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍ　。

Ｒｏｃｈｅ　）そしてアナログ対デジタルコンバータ（５ｃｉｅｎ−ｔｉｆｉｃ　５ｏｕｌｔｉｏｎｓ　、　Ｉｎｃ、）を使用して磁気ディスクに記憶させた。

心臓血液搏出量（ＣＯ）を熱稀釈により６測定の平均として測定した。全身系血管抵抗を（ＳＡＰＸ８０）／Ｃｏとして計算しそしてダイン−秒／ａｍ”として表わした。

プロトコール：血圧と６搏度数を安定させた後に内毒素（リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）１０ｍｌ中に４０μｇ／ｋｇ、　ｐＨ７，４）を静脈内に注入した。この投与量の内毒素は代表的には犬に厳しいそしてしばしば致死的な心臓血管崩壊を誘起する。血圧をモニタし、モしてＳＡＰが６０ｍｍＨｇ以下に低下するか又は全身系動脈圧（ＳＡＰ）で安定した最下点を１０分間保つ何れかの時にＬ−ＨＭＡを投与した（ＰＢＳ５［１１１中に２０ｍｇ／ｋｇ、１分にわたって静脈内に）。殆どの実験において、２分にわたって内毒素に予め暴露なしに犬にＬ−ＮＭＡのみを受けさせた。内毒素を受ける犬に見られる低血圧に類似させるために犬の一つのグループは６０−７０　ｍｍＨｇにＳＡＰを保つように調節された割合でニトログリセリン（２ｍｇ／ｍｌ）の連続した静脈内注入を受けた。次にニトログリセリン処理穴はＬ−ＮＭＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）を受けそして２０分後にＬ−アルギニンを投与した＃　（＋ｏＯ”ｙ／％ｌ）。

統計：　５ｔｕｄｅｎｔ試験を使用して統計的存意を評価しそして比較に適したものとして片側又は両側検定を行なった。

麻酔した犬の全身系動脈圧に内毒素の効果を示す代表的な血圧トレーシングを第２３図に示す。これと余分の３匹の犬に対す心臓血管パラメータを第１表に要約する（研究Ｉ）。

第１表低血圧中Ｌ−ＨＭＡの血行力学効果評価の　全身系　６搏度数　心臓血液　全身系型式　動脈圧　（ビート　持出量　血管抵抗（＋ｔ＋ｔ（ｇ）　／分）　（１７分）（ダイン−研究Ｉ：内毒素処理（ｎ＝４）ベースライン　１２８．３±　１１９．５±　２．９９±　３５６４±９．４　６．０　０．３２　４５４内毒素後　５９．５±　１２４．０±　２，１７±　２４０３±３．１”　７．６　０．４４　３５２Ｌ　−Ｎ　Ｍ　Ａ後　１０７．３±　１２３．３±　２．０３±　４４６２±９．６°　４．８　０．３２　５５２”Ｌ　−アルギニン　後　５２．７±　１１６．７±　２．３１±　１８５１±８．８”　１８．８　０．４３　１７１″″ 研究２：二１−〇グリセリン処理（ｎ＝３）ベースライン　１２８．３±　１４３．７±　３．１４±　３２９４±１０．２　１２．１　０．２１　７４二１゛ログリ　６４．７±　１３７．３±　２．７２±　１９２４±セリン中　２．７°”　５．０　０．２７　１３２”Ｌ−ＮＭＡ後　８１．８±　１９１．７±　３．８５±　１８５１±３．５”　３５．０　０，８　３９９Ｌ−アルギニン　後　５６．９±　１４８．７±　５．１５±　１０８８．２± １３．０　１９．９　１．９８　４９１研究ｌに対して、犬を麻酔し、器具を付けそしてベースライン心臓血管測定を記録した（前処理）。次に内毒素（４０μ ｇ／ｋｇ）を投与しそして心臓血管パラメータをモニタした。血圧か安定な最下点に達するか又は６０ｍｍＨｇ以下に減少した時に（内毒素後’）　、Ｌ−ＨＭＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与し、そして心臓血管パラメータを再び測定した（Ｌ −ＮＭＡ後）。更に１０分後にＬ−アルギニン（４００ｍｇ／ｋｇ）を投与しそして心臓血管測定を２分後に行なった（Ｌ−アルギニン後）結果を平均上Ｓ、Ｅ、（ｎ＝４）として報告する。研究を同様に行なったが、たたし内毒素を投与しなかった。代りに、犬はＳＡＰを６５ｍｍＨｇ（ｎ＝３）に保つように滴定したニトログリセリン（２ｍｇ／ｍｌ）の連続注入を受けた。星印は即時に進行する状態とは統計上有意な差を示す（＊Ｐくｏ、ｏ　Ｏ５，＊＊ｐ＜ｏ、ｏ　ｏ　１）。

ＥＴ（４０μｇ／ｋｇ）は１２０分以内で血圧に著しい減少を生じた（△５ＡＰ＝−６９±１６　ｍｍＨｇ　、　Ｐ＜０．０５）。未処理ではこの投与量の内毒素は代表的には犬に致死的な心臓血管崩壊を引起こす。Ｌ−ＨＭＡは１．５分以内にこの低血圧を大きく反転し、ＳＡＰを４７．８±６．８　ｍｍＨｇ　（Ｐ＜０．０１）そしてＳＶＲを２０６０±３３８ダイン−秒／ｃｍ’　ｃｐ　＜Ｑ、０１　）だけ増加し：ＨＲ及びＣＯは変化しなかった（第１表）。Ｌ−アルギニンはＬ−ＮＭＡの効果を反転し、そして内毒素誘起低血圧を回復し、ＳＡＰ　（Ｐ＜０．００１）及びＳＶＲ（Ｐ＜０．０１）の両方をＬ−ＮＭＡの投与前に見られたものに類似した数値に減少させる。第２３図に示すように、Ｌ−アルギニン後、血圧はＬ−ＨＭＡ投与前に見られたものより低いレベルに減少し、ＮＯを過生成する能力はＮｏ生成がＬ−ＮＭＡにより阻害される間に進行することを示唆する（Ｐ＝ＮＳ）。第２３図は内毒素（ＥＴ）、Ｎ’−メチル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ＮＭＡ）、及びＬ−アルギニン（Ｌ−Ａｒｇ）の静脈内投与を続けて、ペンドパルビタール麻酔犬での平均全身系動脈圧（ＳＡＰ）における変化の時間経過を示す。この実験及び付加の実験からのデータを第工表（前記）に要約する。

内毒素及びサイトカイン誘起ショックにＮｏ合成阻害剤の可能な治療用途を考えるとＬ−ＨＭＡが低血圧の長期間反転を供し得ることを確立することが重要である。

Ｌ−ＨＭＡの単一静脈内投与量（２０ｍｇ／　ｋｇ）は３〇−６０分間正常な血圧を回復した。血圧が再び減少し始めた時にＬ−ＨＭＡの付加投与量（２０ｍｇ／　ｋｇ）を与えると、内毒素結合剤で少なくとも２時間正常な血圧を保持てきた。代表的な研究の結果を第２４図に示す。正常な血圧の保持は２時間後でさえＬ−ＨＭＡに依存性であり続け、その理由はＬ−アルギニンはこの時でも内毒素の低血圧をなお回復できるからである（即ち、血圧で＜　４５　ｍｍＨＨの減少）。第２４図は内毒素の静脈内投与を続けたベンドパルビタール麻酔犬で平均全身系動脈圧（ＳＡＰ）における変化の時間経過を示す。５３分後血圧は４７ｍｍＨｇに減少した（△５ＡＰ＝　−６１ｍｍＨｇ）　、Ｌ−ＮＭＡの投与は厳しい低血圧の急速な反転を生じた（１０分以内にＳＡＰに７３ｍｍＨＨの増加）。最初の投与量のＬ−ＮＭＡにより血圧を４８時間保ち、次に減少し始めた。第二の投与量のＬ−ＮＭＡが第一の投与量に等しいレベルに血圧を回復しそして２時間１００　ｍｍＨｇより太きく　ＳＡＰを保った。低血圧に対する能力がなお残ることを示すためにＬ−ＮＭＡの効果を過剰のし一アルギニン（４００ｍｇ／ｍｌ）で反転した。これは血圧を４３ｍｍＨｇへの減少を生じた（△ＳＡＰ＝−７７ｍｍＨｇ）。

第２表に示すように、Ｌ−ＮＭＡ単独では内毒素で処理しない対照の犬で著しいが適度の高血圧効果を育した；　Ｌ−ＮＭＡｉ；！ＳＶＲで関連した増加（Ｐ、０．０１）、６搏度数（ＨＲ）で減少、そして統計的有意に達しなかった心臓血液搏出量（ＣＯ）と共にＳＡＰを２４．８±１．７ｍｍＨｇ（Ｐ、　０．０１）だけ増加した。Ｌ−アルギニン（４００ｍｇ／ｋｇ）はＬ−ＮＭＡの昇圧剤効果を十分に反転させた。

第２表対照の犬てＬ−ＮＭＡの血行力学的効果動脈圧　（ビート　搏出量　管抵抗ベースライン　１２９．０±　１２１±　３．５４±　３１１５±１０．９　１７．９　０．６８　３４７Ｌ−ＮＭＡ後　１５３．８±　８２．５±　２．１２ ±　５９６７±１１．４°　６．１　０．２６　５２３”実験は第２３図に示した通りであるが、ただし内毒素を投与しなかった。結果を平均±Ｓ、Ｅ、（ｎ＝４）として報告する。星印はベースラインから有意の差を示す（＊Ｐ、　０．００５．　＊＊Ｐ、　０．００１）。Ｌ−ＨＭＡ＝Ｎ０−モノメチル−Ｌ−アルギニン。

実験の追加シリーズでは、ニトログリセリン、即ちＬ−アルギニン及びＮｏシンセターゼ非依存性機構によりＮＯを生成する低血圧剤の連続した静脈内注入により血圧を６５　ｍｍＨｇに下げた。これらの犬にＬ−ＮＭＡ（２０ｍｇ／ｋｇ）を投与したところ、ＨＲ，ＣＯ又はＳＶＲに顕著な変更なしに１７．１±５．　ＯｍｍＨｇの変化のみを生じた（第１表、研究２）。

敗血症ショック中上ずる心臓血管虚脱の病因はあまりよく理解されていない。現今の処置は末梢血管抵抗及び心臓血液搏出量を増加するように昇圧剤の静脈内流体投与と使用を含む。ごく最近では、ポリマイキシンＢ（Ｈａｎａｓａｗａ等、］９８９、Ｎｅｗ　Ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ　Ｅｎｄｏｆｏｘｉｃａｎｄ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　Ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ　Ｂ（ｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　Ｆｉｂｅｒ　Ｓｕｒｇ、Ｇｇｎｅｃｏｌ、０ｂｓｅｔ、　Ｉ　６　８　：２３２）及びＴＮＦを中和する抗体（Ｔｒａｃｅｙ等、１９８７、Ａｎｔｉ−ｃａｃｈｅｃｔｉｎ／　Ｔ　Ｎ　Ｆ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｐｒｅｖｅｎｔ　５ｅｐｔｉｃ　５ｈｏｃｋ　ｄｕｒｉｎｇ　１ｅｔｈａｌ　ｂａｃｔｅｒｅｍｉａＮａｔｕｒｅ３３０　；　６６２−６６４）を含む内毒素結合剤が敗血症ショックの余病を調節する試みに使用されている。

後者のアプローチは予防的価値を有するが、敗血症ショックが内毒素又はＴＮＦの除去により容易に又は急速に反転できるとの証拠はない。既に敗血症ショックの患者の治療は内毒素により開始された事象の継続の中で第二及び第三の段階で介入を必要とする。敗血症ショックに関連する低血圧及び他の変化の発現はサイトカイン、エイコサノイド、ＰＡＦ、活性化補体成分及び他の因子の同に複雑な相互作用に依存しているので、幾つかの介入が幾つかのモデルで少なくとも部分的に有効であることが判明しているのは驚くべきことではない。プロスタグランジン合成の阻害剤及びＰＡＦレセプタ拮抗剤は治療可能性を有する二つの主要な種類の化合物である（８−９）。これらの試剤は有効であると思われるが、これらは主として動物に非常に大量の投与量の内毒素で試験されている（例えば、ｌから４０ｍｇ／ｋｇ又はここで使用した投与量より約１００倍大きい）。低血圧の開始はこの動物で数分以内に起こり、そして臨床上の敗血症ショックのサイトカイン介在プロセス特性を正確に反映してはいない。内毒素に関する本研究及び臨床上の敗血症ショックに関する従来の研究、内毒素に関する本研究及びＴＮＦに関する従来の研究（Ｋｉｌｂｕｒｎ等、１９９０．、Ｎ’−ｍｅｔｈｙｌ−Ｌ　−ａｒｇｉｎｉｎｅ　１ｎｈｉｂｉｔｓ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｊｓ　ｆａｃ−ｔｏｒ　１ｎｄｕｃｅｄ　ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｏｎ　；　［ｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅＩｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎ１ｔｒｉｃ　０ｘｉｄｅ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、８７：３６２９）では、ＥＴ又はＴＮＦのマイクロダラム投与量を投与し、そして低血圧応答は３０から９０分の遅延で起こった。

ＴＮＦを与えられた犬はＬ−ＨＭＡの投与により実質上反転できる厳しい低血圧を示す本願発明者の開示（Ｋｉｌｂｕｒｎ等、１９９０、Ｎ’　−ｍｅｔｈｙｌ −Ｌ　−ａｒｇｉｎｉｎｅｉｎｈｉｂｉｔｓ　ｆｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　１ｎｄｕｃｅｄ　ｈｙｐｏｔｅｎｓｉｏｎ；　ｒｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎｏ、　Ｐｒｏｃ。

Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、Ｕ、　Ｓ、　Ａ、８７　：　３６２９）はＮＯの過剰生成がＴＮＦ誘起ショックの主要因子であることを示唆した。第１表に示すデータはＬ−ＮＭＡか内毒素中毒の犬で迅速かつ強い抗低血圧効果を有することを示す。

４匹の対照の犬で心臓血液搏出量とＳＶＲに対するＬ−ＮＭＡの効果は著しい変動を示した。２匹の犬では、心臓血液搏出量は著しく減少しく△≧１．５Ｌ／分）そして計算したＳＶＲは劇的に増加した（△≧３５００ダインー秒／ｃｍ’）。対照的に、Ｌ−ＨＭＡ投与後に心臓血液搏出量で主要な変化はＥＴ処理犬の何れにも又は他の二つの対照の犬にも見られなかった：後者では、ＳＶＲは単に約１４００ダイン−秒／ｃｍ’だけ増加した。これらの結果はＬ−ＨＭＡが調整条件下で心臓血液搏出量に直接の効果を存する可能性を示唆するが、付加的研究を必要とする。動脈バロレセプタリフレックス機構の活性化（Ｌｏｄａｔｏ　、　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉａｃ　０ｕｔｐｕｔ　、　Ｉｎ　：Ｄａｎｔｚｅｒ　、　Ｄ、　Ｒ，（編）　Ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ　Ｃｒ１ｔｉｃａｌＣａｒｅ　、Ｗ、Ｂ、　５ａｕｎｄｅｒｓ　、　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ　、ＰＡ　（印刷中））は調整条件下でＨＲとＣＯにおけるＬ−ＨＭＡ誘起減少を説明することがありそうである。この見解を支持して、Ｌ−ＨＭＡのみにより作られたものに類似するレベルにＳＡＰを上昇させた投与量で、フェニレフリンを与えた対照の犬はＨＲ及びＣＯで同様な減少を示すことが観察された。低血圧の犬でＨＲＲｅＯにＬ−ＮＭＡの効果の欠除は低血圧のレベルがバロレセブタリフレックス感度の範囲より下であるためであり得る（Ｌｏｄａｔｏ　。

Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉａｃ　０ｕｔｐｕｔ　、　Ｉｎ　＋　Ｄａｎｔｚｅｒ　、　Ｄ、　Ｒ。

（編）　Ｃａｒｄｉｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ　Ｃｒ１ｔｉｃａｌ　Ｃａｒｅ　、Ｗ、　Ｂ。

５ａｕｎｄｅｒｓ　、　Ｐｈ１ｌａｄｅｌｐｈｉａ　、ＰＡ　（印刷中））。

敗血症ショックの一因となると報告される多数の介在体の点では、ＮＯ生成の完全な阻害はＥＴ誘起ショックの低血圧を十分に反転できないことが予想された。

実際に、血圧か２０ｍｇ／ｋｇ　Ｌ−ＨＭＡにより前処理数値に十分に回復しなかったことは内毒素による犬においてＮＯ以外の介在体が低血圧に適度に寄与することを示唆する。Ｎｏ合成が投与量のＬ−ＨＭＡにより十分に阻害されなかった可能性は前処理レベルへ血圧を十分に回復できないための別の説明を供する。

Ｎｏ合成阻害の程度の直接測定は生体内では不可能であるが、制限投与量応答研究により２０　ｍｇ／ｋｇ以上のＬ−ＨＭＡ投与量は著しくより大きな昇圧剤効果を有しないことが示される。２０ｍｇ／ｋｇ　Ｌ−ＨＭＡによるＥＴ誘起低血圧回避遮断はＮＯ以外の介在体によるであろう。多分Ｌ−ＨＭＡによる長期間阻害はＬ−アルギニンへ転換によりみずからの性質により制限されるが（Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ等、■９９０、ｒｔｎｍｅｄｉａｔｅ　Ｒｅ１ｅａｓｅ　ｏｆ　ａ　Ｎ１ｔｒｉｃ　０ｘｉｄｅ　Ｌｉｋｅ　Ｆａｃｔｏｒｆｒｏｍ　Ｂｏｖｉｎｅ　Ａｏｒｔｉｃ　Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　Ｃｅ１ｌｓ　ｂｙ　Ｅｓｃｈｅｒｉ− ｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ。

Ｓｃｉ、８７：２５９３）、この代謝はＬ−ＨＭＡの短期間昇圧剤の効果を減することが予期されず、これを第２３図に示す。それにもかかわらず、Ｌ−ＨＭＡが血圧を正常値又は正常値近くに回復することの知見はＮＯの過生成が内毒素性ショックで低血圧の一つのそして確かに主要な原因であることを示す。

一つの実験では、Ｌ　−ＨＭＡ　（２０ｍｇ／ｋｇ）の単一注入は３０から６０分間内毒素導出低血圧を反転することができた。第２４図に示すように、続く投与量のＬ−ＮＭＡにより少なくとも２時間常圧を保つことかできた。

Ｌ−ＨＭＡによる内毒素誘起低血圧の長期間反転はこの試薬の有能な臨床上の使用を示す。結論として、これらの結果によいＮＯ合成阻害剤が敗血症ショックの処置に著しく価値があるものであることが示唆される。

例　５犬へＥＴの投与はＴＮＦ投与よりも明らかに毒性であり、かつ予想もてきない。

この実験シリーズでは、小投与量のＥＴ　（１ｕ　ｇ／ｋｇ）で血圧は６０−９０分以内に減することか観察された。血圧の最下点に到達した後に、ＮＭＭＡ　（５ｍｇ／ｋｇ）を投与した。１．５分以内に血圧は３３±２．５　ｍｎ＋Ｈｇだけ増加した。血圧のこの増加はＬ−アルギニンの続く投与（１００ｍｇ／　ｋｇ）により反転しそして血圧は前ＮＭＭＡレベル以下に急に下がることが観察された。内毒素による犬へＮＭＭＡの投与は未処理動物に対するものと比較した時に血圧に著しくより大きな増加を生じた（　３３　ｍｇＨｇ対１２ｍｇＨｇ）。

致死的内毒素誘起ショックがＮＭＭＡに反転できるかどうか、内毒素誘起ショックがＮＭＭＡで反転できるかどうかを示すために、内毒素１００μｇ／ｍｌを受入れた内毒素による犬をＮＭＭＡ　２０　ｍｇ／ｋｇで処理した（第２３図）。

これは正常の未処理犬での３５闘Ｈｇに比較して血圧の顕著な６５ｍｍの増加を生じた。更に、ＮＭＭＡの再投与で血圧を保持できた（第２４図）。

ＮＭＭＡはＮｏ合成を特異的に阻害するので、これらの観察は免疫調節剤誘起ショック及び敗血症ショックでのＮＯに対する役割を示唆する。Ｌ−アルギニンの投与はＮＯ合成に対する過剰な必要前駆体を供することによりＬ−ＮＭＭＡにより影響される競争的阻害に打勝つので、この仕事はまたこれらの二つのプロセスに関連する低血圧の形成におけるアルギニンの役割を示唆する。

ＮＭＭＡによる低血圧の反転はＴＮＦ及びＥＴ誘起低血圧に対して選択的であるようで、その理由はニトログリセリンによる低血圧の類似レベルに血圧の減少がＮＭＭＡ投与により拮抗されなかったからである。これは更にこれらのプロセスでＮｏの役割に対する支持となり、その理由は低血圧がアルギニン非依存性経路により作用する試薬により誘起される時にＮＭＭＡにより拮抗されなかったからである。

ＴＮＦ及びＥＴに対する犬の応答は人で見られるものに類似する。ＴＮＦを癌患者に投与した臨床試験では低血圧は投与できるＴＮＦの投与量を限定する投与量制限毒性である。患者に見られるように、低血圧の開始の時間及び厳しさは犬においても様々である。犬へのＥＴの投与はＴＮＦの塊り注入より厳しくかつ調整し難い型式の低血圧に関連している。これはＴＮＦが循環で短い半寿命（５分）を有することによっているが、ＥＴの投与後に内生的供源によって連続的に生成される。これはＴＮＦに比較してＥＴに応答してより大きな量のＮｏを生ずるように誘起推進性の増加を導く。この仮説はＥＴ誘起ショックに比較してＴＮＦ誘起ショックを反転させるため、より低い量のＮＭＭＡが必要である事実によって確認される。

ＮＭＭＡは生体外でＴＮＦ及びＩＬ−２の抗癌活性を示さない。ＴＮＦの対生物活性は生体外でハッカネズミＬ９２９細胞に対する細胞毒性により測定された。

ＮＭＭＡ又はＮ’−アミノアルギニンの添加は生体外で癌細胞に対してＴＮＦの細胞融解効果を変更しなかった（第３表）。

第３表アクチノマイシンＤ−処理し９２９細胞に対するｒｈ−ＴＮＦの細胞融解活性へのＮＭＭＡの効果（ＮＭＭＡ）　ＴＮＦ活性（ｍＭ）　（単位／ｍ１）０　５９４．５０．１２５　５３６．９０．２５０　５３８．２０．５００　５６２．４０．７５０　４０４．７同様に、ＮＭＭＡは生体外でＩＬ−２に暴露させた人のＬＡＫ細胞の増殖相（図示せず）又は溶解相の何れをも変えなかった（第４表）第４表生体外でのＩＬ−２介在リンホカイン活性化キラー細胞活性に対するＮＭＭＡの効果ＣＮＭＭＡ）　％ターゲット細胞溶解０（ｍｌ）０　６６．１±９．５０、２５　６３．３±１１．８ “６１Ｃｒラベル化Ｒａｊｉターゲツトから放射能の放出マイナス自然の放出の％から計算した溶解。エフェクタ細胞はＩＬ−２４００／ｍｌの存在で４日間培養した人血液のリンパ球であった（Ｅ：Ｔ＝８０　：　１）アミノアルギニンはこれまで測定した酸化窒素生成の最も強い阻害剤である。ＮＭＭＡはシトルリンに代謝され、これが続いてアルギニン生合成のための前駆体として役立つので、酸化窒素生成を阻害するその性能に対して他のアルギニン誘導体を試験した（第５表）。

第５表Ｎｏ−置換アルギニン類似体のＥＤｓｏ＊”値の比較類似体　ＥＤｓｏ＊ＮＭＭＡ　３３６．７アミノアルギニン　１０９．５ニトロ−Ｌ−アルギニン　２１１５ニトロ−Ｄ−アルギニン　＞４５００ニトロ−Ｌ−アルギニンベンジルエステル　＞１２００ ”ＥＤ＠ｏｗ生体外でガンマインタフエロン（１００Ｕ／ｍｌ）及びＴＮ　Ｆ　（５００Ｕ／ｍｌ）に暴露させたハッカネズミ内皮細胞による亜硝酸塩生成の５０％阻害された薬剤の有効投与量。

試験した最も強い誘導体はＮｏ−アミノアルギニンであった。生体内で続く試験では犬でＴＮＦ投与に関連した低血圧を反転することでアミノアルギニンがＮＭＭＡより更に有効であることが示された（第２５図）。

複数の投与量のアミノアルギニン（ＮＡＡ）を使用して４時間３８分Ｎ’−アミノアルギニン（ＮＡＡ）のＥＴショック（致死投与量）の反転を示した。第２６図は全身系動脈圧（ＳＡＰ）対時間（分）を示す。ＥＴ（２ｍｇ／　ｋｇ）　、致死投与量を６０分にわたって注入しそして９７．１６５及び３７４分にＮＡＡを投与して血圧を保った。動物を２４時間生存させそして次に剖検した。

病理学的変化は肝、肺、心、脳、腸及び腎に見られなかった。

第２７図はインターロイキン−１により介在された全身系低血圧を反転するＮ’ −アミノアルギニンの性能を示す。Ｌ−アルギニンの続く投与はこの反転を除去した。

下記の請求項の範囲と精神から逸脱することなく本発明のアルギニン拮抗剤と類似体又は方法工程を変更することかできる。

亜硝酸塩（ｙ邑）処置Ｆ■０．１亜硝酸塩ｉ）ｊＭｌ時間　（時間）　Ｆ■（〕−３亜硝酸塩　（岬）亜硝酸塩　（剛）ＴＮＦ　（Ｕ／ｍｌｌ亜硝酸塩　〔＃ＪＭ＋亜硝酸塩　１）ｊＭｌＯ，００，２０，４０，６０，８１，０＋、２ＮＭＭＡ（ｍａｌ亜硝酸塩１ｐＭｌアルギニン　ｈＭＩＦＩＧ、Ｓ［Ｌ亜硝酸塩　（ｐＭＪＥＴ　ｐｇ／ｍｌＦ■（、＠Ｏ平均動脈血圧（ｍｍＨｇ）平均動脈血圧（ｍｍＨｇ）Ｆ■（，７［時間　（分）平均動脈血圧（ｍｍＨｇ）時間　（分）ＮＥ誘起収縮　（％）［Ａｃｈ］　（１，ＩａｌＦ−〔，８［ＮＥ誘起収縮（％）［ＬＴＤ４］　（ｎＭ）Ｆ曹（，８１］ＮＥ誘起収縮　（％）［ＨＩＳＴ］　（ｐＭＩＦＩＧ、ｆ３■：ＮＥ誘起収縮　（％）［ＳＮＰ］（ｎＭｌ「飄Ｇ、Ｉ３０置弛緩の阻害％＋　１０　１００　＋０００「アルギニン類似体］　（ｐＭＩＦ■（，１Ａ、２３１８７誘起亜硝酸塩放出　（％）〔Ｎ　−■換アルギニン］　（ＩＪＭＩ（Ｎゞ置換アルギニン）　ＩｐＭＩＦＩＧ、’）ｌ＋犬ＣＡ％変化　◆しく１會◆Ｄ−ａｒｇ◆し一α「９大ＦＡ％変化　◆し〔１ｔ４Ｄ−α「９礼１「９ムＦ議Ｇ、Ｉｌｌ］中に」拡張期圧（ｍｍＨｇで変化）拡張期圧（ｍｍＨｇで変化）ＦＩＧ、ＩＳ　時間　（分）拡張期圧　（ｍｍＨｇで変化）− 拡張期圧（ｍｍＨｇ）亜硝酸塩（１，１Ｍ）時間（分））時間　（分）１／亜硝酸塩生成 −２０−１ｏ　０　１０　２０　３０ＦＩＧｓｅ２（）　”［ＡＲ６１（ｍ”２０　ＩＳ　ＴＯＳ　ＯＳ　＋０　＋５　２０ｌ／亜硝酸塩生成 −２０−Ｉｓ　−１０−５ＯＳ　１０　Ｉｓ　２０Ｆ■Ｇ、２２　１／１ＡＲＧ］ｉｍＭ＋平均動脈血圧（ｍｍＨｇ）Ｆ箇（，２３時間　（分）全身系動脈圧　ＦＩＧ、２４＋５　３０　４５　６０　７５　９０　１０５　１２０　１’１５　１５０　＋６５　１８０　１９５内毒素投与後の時間（分）平均動脈組圧（ｍｍＨｇ） −１０１０３ＯＳｏ　７０　９０　１１０　１３０　１５０時間　（分）ＦＩＧ、２６ＳＡＰ、ｍｍＨｇ時間　（分）平均全身系動脈圧（ｍｍ）（ｇ）Ｆ纏（，７１時間　（分）補正書の翻訳文提出書　（特阿第１８４条＋７）８Ｘ）平成４年３月１３日匹

Claims

【特許請求の範囲】

１．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起された全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−置換アルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンを静脈内に投与することを含み、ここでこのＮＧ置換又はＮＧ，ＮＧ− ジ置換アルギニンがグアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有する、誘起された全身系低血圧に対する動物の予防と処置の方法。
２．腫瘍壊死因子又はインターロイキン−２での化学療法処置により全身系低血圧が誘起された患者に、治療上有効な量のＮＧ−置換アルギニン又はＮＧ，ＮＧ −ジ置換アルギニンを静脈内に投与することを含み、ここでこのＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンがグアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有する、患者の全身系低血圧の予防と処置の方法。
３．内毒素に暴露させたことにより誘起された全身系低血圧を有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンを静脈内に投与することを含み、ここでこのＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンがグアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有する、誘起された全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
４．ＮＧ−置換アルギニンがＮＧ−アミノアルギニン、ＮＧ−ニトロアルギニン、ＮＧ−メチルアルギニン、ＮＧ−エチルアルギニン、ＮＧ−プロピルアルギニン又はＮＧ−ブチルアルギニンである、請求項１、２又は３の方法。
５．ＮＧ−置換アルギニンがＮＧ−アルキルアルギニンである、請求項１、２又は３の方法。
６．ＮＧ−置換アルギニンがＮＧ−置換Ｌ−アルギニンでありそしてＮＧ，ＮＧ −ジ置換アルギニンがＮＧ，ＮＧ−ジ置換Ｌ−アルギニンである、請求項１、２又は３の方法。
７．前記の治療上有効な量の置換又はジ置換アルギニンが動物又は患者でアルギニンから酸化窒素の生成を阻害する、請求項１、２又は３の方法。
８．酸化窒素がアルギニングアニジノ基からの窒素を有する、請求項７の方法。
９．全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を投与することを含む、酸化窒素の誘起された生成により引起こされる全身系低血圧に対する動物の予防と処置の方法。
１０．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインタ−ロイキン−２により誘起される酸化窒素により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
１１．内毒素への暴露により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
１２．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起された全身系低血圧を多分発現し又は有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
１３．ＮＧ−アルキルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニンがメチル、エチル、プロピル及びブチルからなる群から選択されるアルキル置換基を有する、請求項１２の方法。
１４．ＮＧ−アルキルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニンがヒドロキシアルキル、カルボキシアルキル及びアミノアルキルからなる群から選択される誘導されたアルキル置換基を有する、請求項１２の方法。
１５．内毒素への暴露により誘起された全身系低血圧を有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ −アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
１６．腫瘍壊死因子又はインターロイキン−２での抗癌化学療法により誘起された全身系低血圧を有し又は発現する可能性のある患者に、治療上有効な量のＮＧ −アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを静脈内に投与することを含む、抗癌化学療法を受けている患者で全身系低血圧の予防又は処置の方法。
１７．酸化窒素の誘起された生成により引起こされた全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する患者に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の予防又は処置の方法。
１８．腫瘍壊死因子、ガンマーインターフェロン、インターロイキン−１又はインターロイキン−２での治療により誘起された全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する患者に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の予防又は処置の方法。
１９．内毒素への暴露により誘起された全身系低血圧を有する患者に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ −アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の処置の方法。
２０．腫瘍壊死因子、ガンマーインターフェロン、インターロイキン−１又はインターロイキン−２及び酸化窒素の結果の生成により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する患者に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の予防又は処置の方法。
２１．内毒素への前記の患者の暴露及び酸化窒素の結果の生成により引起こされる全身系低血圧を有する患者に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の処置の方法。
２２．腫瘍壊死因子、ガンマーインターフェロン、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起された酸化窒素により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する患者に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の予防又は処置の方法。
２３．内毒素への暴露により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を有する患者に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の処置の方法。
２４．腫瘍壊死因子での治療により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する患者に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する患者の処置の方法。
２５．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を胆止する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含み、このアルギニン拮抗剤がアミノ、ニトロ、アルキル、ヒドロキシアルキル及びアルケニルからなる群から選択されたＮＧ置換基を有するアルギニンである、全身系低血圧に対する患者の予防又は処置の方法。
２６．内毒素への暴露により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を静脈内に投与することを含み、このアルギニン拮抗剤がアミノ、ニトロ、アルキル、ヒドロキシアルキル及びアルケニルからなる群から選択されたＮＧ置換基を有するアルギニンである、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
２７．治療上有効な量はアルギニンから酸化窒素の生成を阻害するのに十分な量である、請求項１、２、３、９、１１、１２、２０又は２６の方法。
２８．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起された全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
２９．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２での治療により引起こされる酸化窒素の生成による全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
３０．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２での治療により誘起された全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
３１．内毒素への暴露により誘起された全身系低血圧を有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを静脈内に投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
３２．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２で動物の治療により誘起された酸化窒素の生成により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、治療上有効な量のＮＯ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを静脈内に投与することを含み、前記の治療上有効な量が前記の酸化窒素の生成を減少させ又は阻害する、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
３３．内毒素への動物の暴露により誘起された酸化窒素の生成により引起こされる全身系低血圧を有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを静脈内に投与することを含み、前記の治療上有効な量は前記の酸化窒素の生成を減少させ又は阻害する、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
３４．治療上有効な量が約０．１から約１００ｍｇ／ｋｇの間である、請求項２８−３３の何れかの方法。
３５．ＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンがＮＧ−メチルＬ−アルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルＬ−アルギニンである、請求項２８−３３の何れかの方法。
３６．腫瘍壊死因子又はインターロイキン−２で化学療法処置により誘起された全身系低血圧の患者に、治療上有効な量のＮＧ−置換アルギニン又はＮＧ，ＮＧ −ジ置換アルギニンを投与することを含む、ここでＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ− ジ置換アルギニンがグアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有する、全身系低血圧に対する患者の予防又は処置の方法。
３７．内毒素への暴露により誘起された全身系低血圧を有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−置換アルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンを投与することを含み、ここでＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンがグアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有する、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
３８．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２での治療により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
３９．内毒素への暴露により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧を有する動物に、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害する治療上有効な量のアルギニン拮抗剤を投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の処置の方法。
４０．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２での治療により誘起される全身系低血圧を発現する可能性のある又は有する動物に、治療上有効な量のＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを投与することを含む、全身系低血圧に対する動物の予防又は処置の方法。
４１．投与が非経口的である、請求項３６、３７、３８又は３９の方法。
４２．投与が脈管内である、請求項４１の方法。
４３．投与が腸内である、請求項３６、３７、３８又は３９の方法。
４４．投与が局所的、腹腔内、皮内又は筋肉内である、請求項３６、３７、３８又は３９の方法。
４５．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起される全身系低血圧に対する動物の予防又は処置に使用のための、グアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有するＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンを含む薬剤組成物。
４６．内毒素への暴露により誘起された全身系低血圧に対する動物の処置に使用のための、グアニジノアミノ基の水素に置換するニトロ、アミノ、アルキル、ヒドロキシアルキル又はアルケニル置換基を有するＮＧ−置換又はＮＧ，ＮＧ−ジ置換アルギニンを含む薬剤組成物。
４７．酸化窒素の誘起された生成によって引起こされる全身系低血圧に対する動物の予防又は処置に使用のための、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害するアルギニン拮抗剤を含む薬剤組成物。
４８．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により引起こされる全身系低血圧に対する動物の予防又は処置に使用のための、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害するアルギニン拮抗剤を含む薬剤組成物。
４９．内毒素への暴露により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧に対する動物の処置に使用のための、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害するアルギニン拮抗剤を含む薬剤組成物。
５０．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起される全身系低血圧に対する動物の予防又は処置に使用のための、ＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＴ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを含む薬剤組成物。
５１．内毒素への暴露により誘起される全身系低血圧に対する動物の処置に使用のための、ＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを含む薬剤組成物。
５２．腫瘍壊死因子又はインターロイキン−２で抗癌化学療法を受ける患者で全身系低血圧の予防又は処置に使用のための、ＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＣ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを含む薬剤組成物。
５３．腫瘍壊死因子で治療により誘起された酸化窒素生成により引起こされる全身系低血圧に対する患者の予防又は処置に使用のための、アルギニンからの酸化窒素の生成を阻害するアルギニン拮抗剤を含む薬剤組成物。
５４．腫瘍壊死因子、ガンマ−インターフェロン、インターロイキン−１、又はインターロイキン−２での治療により誘起される全身系低血圧に対する患者の予防又は処置に使用のための、ＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを含む薬剤組成物。
５５．内毒素への暴露により誘起される全身系低血圧に対する患者の処置に使用のための、ＮＧ−アルキルアルギニン、ＮＧ，ＮＧ−ジアルキルアルギニン、ＮＧ−アミノアルギニン又はＮＧ−ニトロアルギニンを含む薬剤組成物。
５６．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２により誘起される全身系低血圧に対する動物の処置の使用のための、ＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを含む薬剤組成物。
５７．ガンマーインターフェロン、腫瘍壊死因子、インターロイキン−１又はインターロイキン−２での治療により誘起された酸化窒素の生成により引起こされる全身系低血圧に対する動物の予防に使用のための、ＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを含む薬剤組成物。
５８．内毒素への暴露により誘起される全身系低血圧に対する動物の処置に使用のための、ＮＧ−メチルアルギニン又はＮＧ，ＮＧ−ジメチルアルギニンを含む薬剤組成物。