KR20190072011A

KR20190072011A - 나토키나제와 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물

Info

Publication number: KR20190072011A
Application number: KR1020170173015A
Authority: KR
Inventors: 김윤배; 최은경; 서다움
Original assignee: 충북대학교 산학협력단; 주식회사 디자인셀
Priority date: 2017-12-15
Filing date: 2017-12-15
Publication date: 2019-06-25
Also published as: KR102008826B1

Abstract

본 발명은 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물 및 나토키나제와 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 혈전용해제 보조용 의약 조성물은 덱사메타손을 유효성분으로 포함함으로써 종래 혈전용해제 사용에 따른 출혈 부작용을 효과적으로 감소시킬 수 있는바, 혈전용해제 보조용 의약 소재로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 나토키나아제와 덱사메타손을 유효성분으로 포함하는 의약 조성물은 나토키나아제 단독 성분 대비 두드러진 혈전용해 시너지 효과를 보임에 따라 나토키나아제의 저용량 사용으로도 우수한 혈전용해 활성을 이끌어낼 수 있는바, 저용량 사용을 통한 인체 안전성을 증대시킬 수 있으며, 이와 더불어 출혈 부작용을 효과적으로 감소시킬 수 있는 이점을 갖는다.

Description

나토키나제와 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물{Pharmaceutical composition for inhibiting platelet aggregation or for thrombolysis comprising nattokinase and anti-inflammatory agents}

본 발명은 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물 및 나토키나제와 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물에 관한 것이다.

혈소판응집 시스템의 비정상적인 활성화는 혈관 내 혈전생성의 원인이 되며, 동맥, 정맥 또는 미세혈관 등 폐쇄혈관 내에 생성되는 혈전은 혈관 내 혈액의 원활한 흐름을 방해한다. 혈소판 부착 및 응집은 혈관 내 혈전증의 주요한 요인이며, 혈전은 동맥혈관을 막을 만큼 충분한 크기로 성장할 수 있다. 혈전은 또한 정맥 내의 정체 또는 저혈류 속도 지역에서 형성될 수 있다. 정맥혈전은 그 자체의 위치에서 쉽게 분리되어 순환계를 통해 이동할 수 있고 폐동맥 같은 다른 혈관의 폐색을 초래할 수 있다. 따라서, 동맥혈전은 국소폐색에 의한 심각한 질환을 야기하며, 정맥혈전은 주로 원거리 폐색, 또는 색전을 야기한다.

따라서, 혈소판 응집억제 또는 혈전용해 작용을 하는 의약은 혈전, 색전과 관련이 있는 질병들 즉, 심근경색, 협심증, 혈전성 정맥염, 동맥색전증, 관상동맥 및 뇌동맥혈전증, 말초혈관 또는 심부정맥혈전증, 임의 혈관의 동맥혈전증, 정맥혈전증, 허혈성 뇌경색, 동맥경화, 고혈압, 폐고혈압, 뇌경색, 뇌졸증, 만성동맥폐색증, 폐경색, 뇌색전증, 신장색전증, 혈전색전증 및 지주막하 출혈 후의 병적 증상, 경피적 관상동맥 성형술(PTCA) 및 스텐트(stent) 삽입 시의 혈전 생성, 스텐트 설치 후의 재협착, 카테터 혈전성 폐색 또는 재폐색, 급성 관상동맥증후군, TIA (일과성 뇌허혈 발작 또는 급성 뇌혈관 증후군), 심부전증, 허혈성 병인에 의한 가슴통증, X 증후군, 진성당뇨병의 예방 및 치료에 사용될 수 있다.

특히, 혈전증은 사람의 건강을 위험하게 하는 주요한 질병 중의 하나이다. 예컨대, 뇌혈전증과 급성 심근경색증으로 인한 사망률이 40%를 초과하여, 혈전증은 사망률이 가장 높은 질병이 되었다. 혈전 용해는 이러한 질병을 치료하는 중요한 방법이다. 그러나, 스트렙토키나아제(streptokinase, SK), 유로키나아제(uroknase, UK) 및 조직형 플라스미노겐 활성제(tissue-type plasminogen activator, 이하 간략하게 ‘t-PA’라 약칭함)와 같은, 임상 시험 관리 기준에 따라 혈전증을 치료하는데 현재 사용되는 혈전용해 약은 모두 독성이 강하고, 출혈과 같은 부작용이 심각하며, 생체 내에서의 반감기가 짧고, 고가인 점 등의 단점을 가진다. 실제로, 조직형 플라스미노겐 활성제(t-PA)의 정맥 주사를 통한 혈전 용해는 급성 허혈성 뇌졸중에서만 승인된 의학적 치료이며, 6.8%의 환자가 t-PA 주사 후 뇌출혈을 보이는 것으로 보고된 바 있다.

한편, 나토키나아제(nattokinase)는 동양의 전통식품인 낫토에 풍부한 섬유소용해 세린분해효소(profibrinolytic serine protease)로서 대두 발효 중에 낫또균(Bacillus subtilis Natto)에 의해 생산된다. 나토키나아제는 혈압을 낮추고 혈전증을 예방할 수 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 나토키나아제는 혈전증을 억제함으로써 혈류량을 보전할 수 있으며, 이러한 효과는 트롬복산(thromboxane) 형성 및 혈소판 응집(platelet aggregation) 억제 활성을 통해 이루어지는 것으로 제안된 바 있다. 나토키나아제는 식품의약품안전처(Korea Food and Drug Administration, KFDA)에서 혈행 개선을 위한 건강기능식품으로 승인된 바 있다.

그러나, 다른 혈전용해제 대비 비교적 안전한 나토키나아제의 경우도 혈전증 치료 효과를 도출하기 위해서 많은 용량을 사용하여야 하며, 이렇게 고용량의 사용 시 출혈성 부작용이 따르는 문제점이 있다.

이에, 본 발명자는 종래 사용되는 혈전용해제의 사용에 따른 출혈성 부작용을 개선할 수 있는 방법을 찾고자 노력하였으며, 그 결과 종래 사용되는 혈전용해제에 항염증제인 덱사메타손(dexamethasone)을 병용 사용하는 경우, 혈전용해 활성을 증진시킴과 동시에 출혈 부작용을 감소시키는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.

한국공개특허 제10-2008-0008393호 한국공개특허 제10-2017-0029755호

따라서 본 발명의 목적은 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시킬 수 있는 혈전용해제 보조용 의약 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 출혈 부작용이 감소된 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 출혈 부작용이 감소된 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 제제를 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여,

본 발명은 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 항염증제는 덱사메타손(dexamethasone)일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 혈전용해제는 나토키나아제(nattokinase), 조직형 플라스미노겐 활성제(tissue-type plasminogen activator), 스트렙토키나아제(streptokinase) 또는 유로키나아제(uroknase)일 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 조성물은 혈전용해제의 혈전용해 활성을 증대시키고 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시킬 수 있다.

또한, 본 발명은 혈전용해제 및 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물을 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 덱사메타손(dexamethasone)은 혈전용해제의 혈전용해 활성을 증대시키고 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시킬 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 조성물로 제조된 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 제제를 제공한다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 제제는 경질 및 연질 캅셀제, 정제, 당의정, 필름코팅정, 나정, 장용정, 산제, 현탁제, 시럽제 및 주사제로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 따른 혈전용해제 보조용 의약 조성물은 덱사메타손을 유효성분으로 포함함으로써 종래 혈전용해제 사용에 따른 출혈 부작용을 효과적으로 감소시킬 수 있는바, 혈전용해제 보조용 의약 소재로 유용하게 사용될 수 있다. 또한, 나토키나아제와 덱사메타손을 유효성분으로 포함하는 의약 조성물은 나토키나아제 단독 성분 대비 두드러진 혈전용해 서너지 효과를 보임에 따라 나토키나아제의 저용량 사용으로도 우수한 혈전용해 활성을 이끌어낼 수 있는바, 저용량 사용을 통한 인체 안전성을 증대시킬 수 있으며, 이와 더불어 출혈 부작용을 효과적으로 감소시킬 수 있는 이점을 갖는다.

도 1a는 FeCl₃에 의해 유도된 경동맥 혈전증에 대한 나토키나아제의 처리(정맥 주사)에 따른 혈류속도(%)를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다 (○: 용매 PBS 투여군, ▽: 25 mg/kg 나토키나아제 투여군, □: 50 mg/kg 나토키나아제 투여군, ◇: 75 mg/kg 나토키나아제 투여군, △: 100 mg/kg 나토키나아제 투여군).
도 1b는 FeCl₃에 의해 유도된 경동맥 혈전증에 대한 조직형 플라스미노겐 활성제(t-PA)의 처리(정맥 주사)에 따른 혈류속도(%)를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다 (○: 용매 PBS 투여군, ▽: 5 mg/kg t-PA 투여군, □: 7.5 mg/kg t-PA 투여군, ◇: 10 mg/kg t-PA 투여군).
도 2a는 FeCl₃에 의해 유도된 경동맥 혈전증에 대한 나토키나아제(25 mg/kg) 단독 또는 나토키나아제와 덱사메타손 병용 처리(정맥 주사)에 따른 혈류속도(%)를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다 (○: 용매 PBS 투여군, ●: 덱사메타손(2 mg/kg) 단독 투여군, ▽: 나토키나아제(25 mg/kg) 단독 투여군, ▼: 나토키나아제(25 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군).
도 2b는 FeCl₃에 의해 유도된 경동맥 혈전증에 대한 나토키나아제(50 mg/kg) 단독 또는 나토키나아제와 덱사메타손 병용 처리(정맥 내 주사)에 따른 혈류속도(%)를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다 (○: 용매 PBS 투여군, ●: 덱사메타손(2 mg/kg) 단독 투여군, □: 나토키나아제(50 mg/kg) 단독 투여군, ■: 나토키나아제(50 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군).
도 2c는 FeCl₃에 의해 유도된 경동맥 혈전증에 대한 t-PA (5 mg/kg) 단독 또는 t-PA와 덱사메타손 병용 처리(정맥 주사)에 따른 혈류속도(%)를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다 (○: 용매 PBS 투여군, ▽: t-PA (5 mg/kg) 단독 투여군, ▼: t-PA (5 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군).
도 2d는 FeCl₃에 의해 유도된 경동맥 혈전증에 대한 t-PA (7.5 mg/kg) 단독 또는 t-PA와 덱사메타손 병용 처리(정맥 주사)에 따른 혈류속도(%)를 측정하여 그래프로 나타낸 것이다 (○: 용매 PBS 투여군, ●: 덱사메타손(2 mg/kg) 단독 투여군, □: t-PA (7.5 mg/kg) 단독 투여군, ■: t-PA (7.5 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군).
도 3은 FeCl₃에 의해 유도된 동맥 혈전증 동물모델에 약물 투여(정맥 주사)에 따른 조직 내 혈전으로 인한 동맥 차단 정도를 조직염색법을 통해 관찰한 결과이다(인산염 완충 생리 식염수(PBS), 덱사메타손(Dexa; 2 mg/kg), 나토키나아제(Natto; 25 mg/kg) 또는 조직형 플라스미노겐 활성제(t-PA; 5 mg/kg).
도 4는 동맥 혈전증 동물모델에 나토키나아제 100-300 mg/kg 투여(정맥 주사)에 따른 조직 내 출혈성 병변을 육안 및 조직염색법을 통해 관찰한 결과이다(A: 폐, B: 흉선, 화살표: 출혈).
도 5는 동맥 혈전증 동물모델에 t-PA 10-30 mg/kg 투여(정맥 주사)에 따른 조직 내 출혈성 병변을 육안 및 면역조직화학염색법을 통해 관찰한 결과이다(A: 폐, B: 흉선, 화살표: 출혈).

본 발명은 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 항염증제에 해당하는 덱사메타손(dexamethasone)이 종래 알려진 혈전용해제의 활성을 증대시키고 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시키는 것을 밝힌 것을 기초로 한다.

본 발명의 발명자들은 동맥 혈전증 동물모델에 혈전용해제로서 나토키나아제(nattokinase) 또는 조직 플라스미노겐 활성제(tissue-type plasminogen activator, t-PA)를 단독으로 정맥 주사하였을 때와 비교하여, 덱사메타손을 함께 병용 처리하였을 때 출혈 반응이 약화되며, 안전역(safety margin)이 증대되는 것을 실험을 통해 확인하였다(도 4-5 및 표 1 참조). 뿐만 아니라, 동맥 혈전증 동물모델에 나토키나아제(nattokinase)를 단독으로 투여한 실험군 대비 덱사메타손을 병용 투여한 실험군에서 두드러지게 혈류속도가 개선되는 것을 확인하였다(도 2a 및 2b 참조).

본 발명의 혈전용해제 보조용 의약 조성물은 유효성분인 덱사메타손(dexamethasone) 이외에, 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

또한, 상기 의약 조성물은 투여를 위해서 유효성분인 덱사메타손(dexamethasone) 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 의약 조성물(약제학적 조성물)로 바람직하게 제제화할 수 있다.

또한, 본 발명은 혈전용해제 및 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물(약제학적 조성물)에 관한 것이다.

본 발명의 일구체예에서, 상기 혈전용해제는 나토키나아제(nattokinase), 조직형 플라스미노겐 활성제(tissue-type plasminogen activator), 스트렙토키나아제(streptokinase) 또는 유로키나아제(uroknase)일 수 있다.

본 발명의 다른 구체예에서, 상기 항염증제는 아스피린(aspirin), 디클로페낙(diclofenac), 인도메타신(indomethacin), 술린닥(sulindac), 케토프로펜(ketoprofen), 플루로비프로펜(flurbiprofen), 아이보르푸로펜(iborprofen), 나프로쎈(naproxen), 파이로씨캠(piroxicam), 테노시켐(tenoxicam), 톨메틴(tolmetin), 케토로랙(ketorolac), 옥사프로씬(oxaprosin), 메페나믹산(mefenamic acid), 펜프로펜(fenprofen), 남뷰메톤(nambumetone: Relafen), 아세타미노펜(acetaminophen: Tylenol), 니메술라이드(nimesulide), NS-398, 플루술리드(flosulid), L-745337, 쎄레콕시브(celecoxib), 로페콕시브(rofecoxib), SC-57666, DuP-697, 파레콕씨브 나트륨(parecoxib sodium), JTE-522, 발데콕씨브(valdecoxib), SC-58125, 에토리콕씨브(etoricoxib), RS-57067, L-748780, L-761066, APHS, 토도락(etodolac), 메로씨캄(meloxicam), S-2474, 하이드로콜티죤(hydrocortisone), 콜티죤(cortisone), 프레드니죤(prednisone), 프레드니솔론(prednisolone), 메틸프레드니솔론(methylprednisolone), 메프레드니손(meprednisone), 트리앰씨노론(triamcinolone), 파라메타손(paramethasone), 프루프레드니쏘론(fluprednisolone), 덱사메타손(dexamethasone), 플루드로콜티죤(fludrocortisone) 및 데속시콜티코스테론(desoxycorticosterone) 등을 예시할 수 있으나, 바람직하게는 덱사메타손(dexamethasone)일 수 있다.

본 발명에서는, 항염증제로 덱사메타손(dexamethasone)을 혈전용해제와 함께 병용 사용하는 경우 혈전용해제의 혈전용해 활성을 증대시키고 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시킬 수 있음을 실험을 통해 확인하였다.

한편, 본 발명에서 제공하는 의약 조성물은 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물로서, 혈전성 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 의약 조성물(약제학적 조성물)일 수 있다.

본 발명에서 "혈전성 질환"은 혈전에 의해 유발되거나 촉진되는 질환을 의미하며, 예를 들어 심근경색, 협심증, 혈전성 정맥염, 동맥색전증, 관상 및 뇌동맥혈전증, 말초혈관 또는 심부정맥혈전증, 동맥 혈전증, 정맥혈전증, 허혈성 뇌경색, 동맥경화, 고혈압, 폐고혈압, 뇌경색, 뇌졸증, 만성동맥폐색증, 폐경색, 뇌색전증, 신장색전증, 혈전색전증 및 지주막하 출혈 후의 병적 증상, 경피적 관상동맥 성형술(PTCA) 및 스텐트(stent) 삽입 시의 혈전 생성, 스텐트 설치 후의 재협착, 카테터 혈전성 폐색 또는 재폐색, 급성 관상동맥증후군, TIA (일과성 뇌허혈 발작 또는 급성 뇌혈관 증후군), 심부전증, 허혈성 병인에 의한 가슴통증, X 증후군, 진성당뇨병으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 특별히 그 종류를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에서 "치료"란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는 "치료하는"이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 혈전성 질환의 "치료" 또는 "치료요법"은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:

(1) 혈전성 질환의 발달을 저지시킴,

(2) 혈전성 질환의 확산을 예방함,

(3) 혈전성 질환을 경감시킴,

(4) 혈전성 질환의 재발을 예방함, 및

(5) 혈전성 질환의 증상을 완화함(palliating)

본 발명의 약제학적 조성물은 유효성분 이외에, 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.

또한, 상기 의약 조성물(약제학적 조성물)은 투여를 위해서 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 의약 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

상기 의약 조성물(약제학적 조성물)의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.

본 발명의 의약 조성물은 각각의 약물을 단독으로 제형화하여 병용하거나 각각의 약물을 혼합하여 복합제제 형태로 제형화 할 수 있다. 약제학적인 분야에서 통상적인 방법에 따라 경구투여에 적합한 단위투여형의 제제로 제형화시켜 투여한다. 이러한 목적에 적합한 경구투여용 제형에는 경질 및 연질 캅셀제, 정제, 당의정, 필름코팅정, 나정, 장용정, 산제, 현탁제, 시럽제 등이 포함된다. 이러한 경구투여용 제제에는 두 가지 약물학적 활성성분 이외에 하나 또는 그 이상의 약제학적으로 불활성인 통상적인 담체, 예를 들면 전분, 락토오즈, 카복시메틸셀룰로오즈, 카올린 등의 부형제, 물, 젤라틴, 알코올, 글루코오즈, 아라비아고무, 트라가칸타고무 등의 결합제, 전분, 덱스트린, 알기네이트 등의 붕해제, 탈크, 스테아르산, 마그네슘 스테아레이트, 유동 파라핀 등의 활탁제와 같은 추가의 성분제들이 포함될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 용해를 위한 용해보조제 등을 첨가할 수도 있다.

또한, 본 발명의 의약 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 혈관(정맥 및 동맥)내주사, 근육내주사 또는 흉부내주사 등의 주입방식에 의하며 이로 제한되는 것은 아니다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 혈전용해제 및 항염증제를 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 있어서, 본 발명의 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 95중량%로 포함될 수 있다.

본 발명의 의약 조성물(약제학적 조성물)은 유효성분을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 약제학적으로 유효한 양으로 포함할 수 있다.

본 발명에서 "약제학적으로 유효한 양"이란, 치료하고자 하는 질환에 대해 완화, 억제, 호전 및/또는 완치효과를 나타내는 유효성분의 양을 말한다. 본 발명의 유효성분의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 예를 들면, 치료적으로 유효한 투여량은, 초기에는 세포배양을 통한 시험관내 분석을 사용하여 결정할 수 있다. 당 분야에서 과도한 실험을 거치지 않고도 치료에 유효한 양을 결정할 수 있을 것이며, 이러한 정보를 이용하여 인간에서 유용한 투여량을 더욱 정확하게 결정할 수 있다.

본 발명은 또한, 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 의약의 제조를 위한 상기 혈전용해제 및 항염증제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 용도를 제공한다. 혈전용해제 및 항염증제를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 혈전증 질환의 예방 또는 치료용 의약의 제조를 위한 용도로 이용될 수 있다.

본 발명은 또한, 포유동물에게 치료상 유효량의 본 발명의 의약 조성물(약제학적 조성물)을 투여하는 것을 포함하는 혈전증 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다.

여기에서 사용된 용어 "치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

<실시예>

실험재료의 준비

나토키나아제는 WAKO (Richmond, USA)에서 구입하였다. Wako 나토키나아제(360 IU/g)의 활성은 나토키나아제에 의해 특이적으로 분해되는 합성 아미도 기질(S-2222)을 이용하여 정확하게 측정되었다. t-PA (Actilyse^®)은 Boehringer Ingelheim (Mannheim, Germany)에서 구입하였으며, 텍사메타손은 Ilsung Pharmaceuticals (Seoul, Korea)로부터 구입하였다. 나토키나아제, t-PA 및 텍사메타손은 생리식염수 용액으로 용해시켜 쥐의 정맥내로 주입하였다.

실험동물의 준비

생후 7주된 수컷 Sprague-Dawley 랫드(체중 200-220 g)는 Daehan-Biolink (Eumseong, Korea)로부터 수득하여 실험실 환경에 1주간 순응시킨 후 실험하였다. 동물은 일정한 환경 조건(온도 22±2℃, 상대 습도 40-70%, 12시간 명암주기, 밝기 150-300 lux) 하에서 사료와 물을 자유급이하였다. 모든 동물실험은 충북대학교 동물시험윤리위원회의 승인 하에 충북대학교 실험동물센터의 표준작업절차에 따라 수행되었다.

통계분석

시험결과는 평균 ± 표준편차로 표시하였고, 모든 결과의 통계적 유의성은 SPSS 버전 12.0 (SPSS, Chicago, USA)을 사용하여 Dunnett의 다중 범위 시험 교정에 이어 일원 분류 분산분석(one-way Analysis of Variance)에 의해 분석하였다. P value<0.05 미만일 때 통계학적으로 유의성이 있다고 판단하였다.

<실시예 1>

항혈전 효과 평가

본 실험에서는 나토키나아제 및 t-PA (tissue-type plasminogen activator) 단독 및 이와 덱사메타손 병용 사용에 따른 항혈전 효과를 평가하였다.

랫드(n=8 per group)는 Zoletil (Virbac, Carros cedex, France; 1 mL/kg)을 근육 내 주사하여 마취시켰다. 히트 패드를 이용하여 체온을 36-37℃로 유지하였으며, 우측 경동맥을 노출시키고, 미주신경과 주변조직으로부터 분리시켰다. 대동맥 혈류 속도는 laser Doppler flowmeter (AD Instruments, Colorado Springs, USA)를 이용하여 모니터링하였다. 동맥 혈전증은 혈류측정계 프로브(flowmeter probe) 근처에서 25% FeCl₃ 용액으로 적신 와트맨 No. 1 여과지로 동맥을 10분간 감싸서 유도하였다. 5분 후, 혈전이 유발된 랫드에 나토키나아제(25-400 mg/kg) 및 t-PA (5-30 mg/kg)을 단독으로 투여하거나, 또는 덱사메타손(2 mg/kg)을 함께 정맥 내로 투여하고, 혈류를 40분 동안 모니터링하였다. 약물 투여 방법은 정맥 주사하였다. 마취 상태에서 랫드를 희생시키고 눈에 보이는 혈전 동맥을 잘라내었다. 조직염색을 위하여 잘라낸 동맥을 4% 파라포름알데하이드에 고정시키고, 파라핀으로 포매한 절편을 헤마톡실린/에오신(hematoxylin/eosin)으로 염색한 후 광학현미경으로 분석하였다.

그 결과 도 1a에서 나타낸 바와 같이, 경동맥의 외부 표면에 25% FeCl₃를 10 분간 적용하였을 때 혈류가 감소되었으며, 40-50분 내에 혈류가 거의 완전히 멈추는 것으로 나타났다. 그러나 FeCl₃를 투여한 다음 5분 후 나토키나아제를 정맥 투여한 실험군에서는 나토키나아제 투여 용량에 의존적으로 혈전 형성이 억제됨으로써 혈류가 보존되는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 75 mg/kg 이상의 나토키나아제를 투여하는 실험군에서 혈류 감소가 완전히 억제되는 것을 확인하였다(○: 용매 PBS 투여군, ▽: 25 mg/kg 나토키나아제 투여군, □: 50 mg/kg 나토키나아제 투여군, ◇: 75 mg/kg 나토키나아제 투여군, △: 100 mg/kg 나토키나아제 투여군).

또한, 도 1b에서 나타낸 바와 같이, FeCl₃를 투여한 다음 5분 후 t-PA를 정맥 내로 투여했을 때 용량에 의존적으로 혈전 형성이 억제됨으로써 10 mg/kg 용량의 경우 거의 완벽하게 혈전 형성이 억제되는 것을 확인하였다. 계산된 최대 유효용량은 약 8.5 mg/kg이었다(○: 용매 PBS 투여군, ▽: 5 mg/kg t-PA 투여군, □: 7.5 mg/kg t-PA 투여군, ◇: 10 mg/kg t-PA 투여군).

한편, 도 2a 및 2b에서 나타낸 바와 같이, 나토키나아제를 단독으로 투여한 실험군 대비, 덱사메타손과 나토키나아제를 병용으로 투여한 실험군의 경우 동맥 혈전증의 혈류 개선 효과가 더욱 우수한 것으로 나타났으며, 이러한 병용 사용을 통해 나토키나아제의 유효 용량을 효과적으로 낮출 수 있었다(○: 용매 PBS 투여군, ●: 덱사메타손(2 mg/kg) 단독 투여군, ▽: 나토키나아제(25 mg/kg) 단독 투여군, ▼: 나토키나아제(25 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군, □: 나토키나아제(50 mg/kg) 단독 투여군, ■: 나토키나아제(50 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군).

이에 비해, 도 2b에서 나타낸 바와 같이, t-PA를 단독으로 투여한 실험군 대비, 덱사메타손과 t-PA를 병용으로 투여한 실험군의 경우 동맥 혈전증의 혈류 개선 효과에는 크게 영향을 미치지 않는 것으로 타나났다(○: 용매 PBS 투여군, ●: 덱사메타손(2 mg/kg) 단독 투여군, ▽: t-PA (5 mg/kg) 단독 투여군, ▼: t-PA (5 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군, □: t-PA (7.5 mg/kg) 단독 투여군, ■: t-PA (7.5 mg/kg) 및 덱사메타손(2 mg/kg) 병용 투여군).

상기와 같은 결과를 통해, 덱사메타손은 나토키나아제와 병용 사용한 경우에 동맥 혈전증 혈류 개선에 우수한 시너지 효과를 보이는 데에 비해, t-PA와 병용 사용한 경우에는 혈류 개선에 크게 시너지 효과를 부여하지는 못하는 것을 확인할 수 있었다.

또한, 동맥 혈전증 동물모델에 약물 투여(정맥 주사)에 따른 조직 내 혈전으로 인한 동맥 차단 정도를 조직염색법을 통해 관찰한 결과, 도 3에서 나타낸 바와 같이 FeCl₃를 적용하여 동맥 혈전증 유발 후 PBS 또는 덱사메타손(2 mg/kg)만을 투여한 경우 40분이 경과한 시점에 혈전으로 동맥이 완전히 막힌 것을 확인할 수 있었다. 반면에, 나토키나아제(25 mg/kg) 또는 t-PA (5 mg/kg)를 병용 투여한 실험군에서는 동맥 내강이 완전히 차단되지 않고 혈전이 작고 느슨해지는 것으로 나타났다.

<실시예 2>

출혈성 부작용 평가

본 실험에서는 동맥 혈전증을 유발시킨 동물모델에 나토키나아제 및 t-PA 단독 투여, 또는 이들과 더불어 덱사메타손 병용 투여 시의 출혈성 부작용을 평가하기 위하여 약물 투여(정맥 주사)에 따른 조직 내 출혈 정도를 육안 및 조직염색법을 통해 관찰하였다.

상기 실시예 1을 통해 동맥 혈전증을 유발시킨 후 약물을 투여한 랫드를 희생시키고, 희생된 랫드를 인산염 완충 식염수의 심실 내 주입을 통해 관류시켰다. 모든 기관을 해부하여 표면의 출혈성 소견을 검사하였다. 파라핀 포매된 절편은 헤마톡실린-에오신으로 염색하고 광학 현미경 하에서 관찰하였다.

그 결과 나토키나아제의 경우 300 mg/kg 용량으로 투여한 실험군에서 폐(A) 및 흉선(B)에서 출혈(화살표)이 보이는 것을 확인할 수 있었다(도 4 참조). 또한, t-PA의 경우 폐(A) 및 흉선(B) 모두에서 투여 용량에 의존적으로 출혈성 병변이 증가되는 것을 확인하였으며, 특히, 10 mg/kg의 낮은 용량을 투여한 실험군에서도 출혈성 병변이 관찰되었다(도 5 참조).

한편, 동맥 혈전증 동물모델에 나토키나아제 및 t-PA의 단독 투여 또는 덱사메타손과의 병용 투여에 따른 혈류 개선 정도, 출혈 정도 및 안전역(safety margin)을 측정하여 하기 표 1에 자세히 나타내었다.

동맥 혈전증 동물모델에 나토키나아제 및 t-PA의 단독 투여 또는 덱사메타손과의 병용 투여에 따른 혈류개선효과, 출혈 정도 및 안전역(safety margin)

처리	용량(mg/kg)	혈류개선 효과(%)	출혈 정도(score)	안전역(safety margin)
나토키나아제	25	59	-	4.0
	50	86	-
	75	94	-
	100	96	-
	200	100	-
	300	100	+
덱사메타손 + 나토키나아제	25	75	-	8.0
	50	94	-
	300	100	-
	400	100	+
t-PA	5	63	-	1.2
	7.5	76	-
	10	100	+
	20	100	+
	30	100	++
덱사메타손 + t-PA	5	68	-	2.4
	7.5	78	-
	10	100	-
	20	100	+

1) -: 정상, +: <5% 출혈, ++: <10% 출혈; +++: <50% 출혈; ++++: >50% 출혈.

2) 혈행개선효과(blood flow improvement): 40분간 유지되는 혈류속도

3) 출혈 정도(score) 판정: 출혈범위 기준 병리학적 임상소견(최대 ++++)

4) 안전역(safety margin) =

* 실제적 유효용량(ED₉₀): 40분간 혈류를 90% 이상 유지하는 용량

5) 상기 표에서 용량은 나토키나아제 또는 t-PA의 처리 용량을 의미하며, 이와 병용 처리되는 덱사메타손은 2 mg/kg 용량으로 처리됨

그 결과 나토키나아제 및 t-PA와 같은 혈전 용해제에 대한 출혈 반응은 덱사메타손(2 mg/kg)의 병용 사용에 의해 약화되는 것을 확인할 수 있었으며, 나토키나아제와 t-PA의 출혈 반응이 일어나기 시작하는 용량을 각각 400 mg/kg과 20 mg/kg으로 증대시키는 것으로 나타났다. 즉, 덱사메타손의 병용 투여 없이 나토키나아제 또는 t-PA을 단독 투여하는 경우 각각 300 mg/kg 및 10 mg/kg에서부터 출혈 반응이 일어나는 것으로 나타났으나, 덱사메타손을 병용 투여하는 경우 각각 400 mg/kg과 20 mg/kg에서부터 출혈 반응이 일어나는 것을 확인할 수 있었다.

특히, 혈전 용해제 나토키나아제와 t-PA의 독성(출혈)용량에 대한 혈류개선 효과(유효용량)의 비율을 기준으로 산출한 표준 안전역(safety margin)은 각각 4.0과 1.2로 추산되었고, 덱사메타손은 나토키나아제와 t-PA의 안전성을 향상시켜 안전역(safety margin)을 각각 8.0과 2.4로 두 배 증가시키는 것으로 나타났다.

따라서, 상기와 같은 결과를 통해 덱사메타손의 병용 사용이 나토키나아제 및 t-PA와 같은 혈전 용해제의 출혈 부작용을 효과적으로 감소시키는 것을 알 수 있었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물.
제1항에 있어서,
상기 항염증제는 덱사메타손(dexamethasone)인 것을 특징으로 하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물.
제1항에 있어서,
상기 혈전용해제는 나토키나아제(nattokinase), 조직형 플라스미노겐 활성제(tissue-type plasminogen activator), 스트렙토키나아제(streptokinase) 또는 유로키나아제(uroknase)인 것을 특징으로 하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 혈전용해제의 혈전용해 활성을 증대시키고 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시키는 것을 특징으로 하는 혈전용해제 보조용 의약 조성물.
혈전용해제 및 항염증제를 유효성분으로 포함하는 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 조성물.
제5항에 있어서,
상기 혈전용해제는 나토키나아제(nattokinase), 조직형 플라스미노겐 활성제(tissue-type plasminogen activator), 스트렙토키나아제(streptokinase) 또는 유로키나아제(uroknase)인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
제5항에 있어서,
상기 항염증제는 덱사메타손(dexamethasone)인 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
제7항에 있어서,
상기 덱사메타손(dexamethasone)은 혈전용해제의 혈전용해 활성을 증대시키고 혈전용해제의 사용에 따른 출혈 부작용을 감소시키는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
제5항 내지 제8항 중 어느 한 항의 조성물로 제조된 혈소판 응집 억제용 또는 혈전용해용 의약 제제.
제9항에 있어서,
상기 제제는 경질 및 연질 캅셀제, 정제, 당의정, 필름코팅정, 나정, 장용정, 산제, 현탁제, 시럽제 및 주사제로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 의약 제제.