JPH0540120A - クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 - Google Patents
クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法Info
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- JPH0540120A JPH0540120A JP3296702A JP29670291A JPH0540120A JP H0540120 A JPH0540120 A JP H0540120A JP 3296702 A JP3296702 A JP 3296702A JP 29670291 A JP29670291 A JP 29670291A JP H0540120 A JPH0540120 A JP H0540120A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 免疫グロブリンのサブクラスの測定において
リューマチ性因子の妨害を避けることのできる測定法を
提供する。 【構成】 測定すべき試料をＩｇＧクラスの免疫グロブ
リンと複合体を形成しうる抗体で処理し、その免疫グロ
ブリン抗体ＩｇＧが特異性を示す抗原を固体担体に被覆
して成るクラス特異的な抗体試剤と、上記の処理をして
得られた試料とを接触させ、その固体担体上に抗原−Ｉ
ｇＧ−ＩｇＧクラスの免疫グロブリンと複合体を形成し
うる抗体との複合体とを形成させ、次に未結合試料を除
き、この抗原−ＩｇＧ−ＩｇＧクラス免疫グロブリンと
複合体を形成しうる抗体複合体を、ＩｇＧクラスの免疫
グロブリンと複合体を形成しうる抗体に対する抗体で処
理し、次に抗原−ＩｇＧ−ＩｇＧクラスの免疫グロブリ
ンと複合体を形成しうる抗体複合体に結合したＩｇＧク
ラスの免疫グロブリンと複合体を形成しうる抗体に対す
る抗体を試料中のＩｇＧの尺度としてＩｇＧクラスの免
疫グロブリン抗体を測定する。
リューマチ性因子の妨害を避けることのできる測定法を
提供する。 【構成】 測定すべき試料をＩｇＧクラスの免疫グロブ
リンと複合体を形成しうる抗体で処理し、その免疫グロ
ブリン抗体ＩｇＧが特異性を示す抗原を固体担体に被覆
して成るクラス特異的な抗体試剤と、上記の処理をして
得られた試料とを接触させ、その固体担体上に抗原−Ｉ
ｇＧ−ＩｇＧクラスの免疫グロブリンと複合体を形成し
うる抗体との複合体とを形成させ、次に未結合試料を除
き、この抗原−ＩｇＧ−ＩｇＧクラス免疫グロブリンと
複合体を形成しうる抗体複合体を、ＩｇＧクラスの免疫
グロブリンと複合体を形成しうる抗体に対する抗体で処
理し、次に抗原−ＩｇＧ−ＩｇＧクラスの免疫グロブリ
ンと複合体を形成しうる抗体複合体に結合したＩｇＧク
ラスの免疫グロブリンと複合体を形成しうる抗体に対す
る抗体を試料中のＩｇＧの尺度としてＩｇＧクラスの免
疫グロブリン抗体を測定する。
Description
【０００１】免疫グロブリン分子は、４個のポリペプチ
ド鎖と約５３，０００ドルトンの分子量をもつ２個の重
い鎖と約２２，０００ドルトンの分子量をもつ２個の軽
い鎖との、ジサルファイド結合によって結合している、
１つまたはそれ以上のセットから成る。
ド鎖と約５３，０００ドルトンの分子量をもつ２個の重
い鎖と約２２，０００ドルトンの分子量をもつ２個の軽
い鎖との、ジサルファイド結合によって結合している、
１つまたはそれ以上のセットから成る。
【０００２】免疫グロブリンは一般にＧ、Ｍ、Ａ、Ｄお
よびＥの５種のクラスに小分類される。これらのクラス
の免疫グロブリンは一般にＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、Ｉ
ｇＤおよびＩｇＥによってそれぞれ表わされる。５種の
クラスの免疫グロブリンは重い鎖の抗原決定要素の存在
によって区別され、これらは免疫グロブリンに適用され
るローマ字に対応するギリシャ小文字によって命名され
る。
よびＥの５種のクラスに小分類される。これらのクラス
の免疫グロブリンは一般にＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、Ｉ
ｇＤおよびＩｇＥによってそれぞれ表わされる。５種の
クラスの免疫グロブリンは重い鎖の抗原決定要素の存在
によって区別され、これらは免疫グロブリンに適用され
るローマ字に対応するギリシャ小文字によって命名され
る。
【０００３】
【０００４】また、他の抗原決定要素を基準とするＩｇ
Ｇ、ＩｇＡおよびＩｇＭのサブクラスもあり、これらは
数字（たとえばγ１、α１、μ１）によって命名され
る。ＩｇＧに対する４つのサブクラスが認められる、す
なわち２個のＩｇＡおよび２個のＩｇＭである。すべて
のサブクラスは正常なすべての人間の血清中に見出され
る。
Ｇ、ＩｇＡおよびＩｇＭのサブクラスもあり、これらは
数字（たとえばγ１、α１、μ１）によって命名され
る。ＩｇＧに対する４つのサブクラスが認められる、す
なわち２個のＩｇＡおよび２個のＩｇＭである。すべて
のサブクラスは正常なすべての人間の血清中に見出され
る。
【０００５】ＩｇＧは正常な人間の血清中における最も
豊富な免疫グロブリンである。それはまた組織流体中に
も見出され、そしてそれは胎盤を横切って胎児の血液循
環に入いることができる。それは生体内および試験管内
において抗菌活性、抗ビールス活性および抗毒活性をも
つ。それは応答のおそい抗体である。
豊富な免疫グロブリンである。それはまた組織流体中に
も見出され、そしてそれは胎盤を横切って胎児の血液循
環に入いることができる。それは生体内および試験管内
において抗菌活性、抗ビールス活性および抗毒活性をも
つ。それは応答のおそい抗体である。
【０００６】ＩｇＭは抗原決定要素μを規定するアミノ
酸連鎖を伴なう重い鎖の所有によって特徴づけられる。
ＩｇＭ機能の顕著な特徴はその強い細胞分解および補体
固定の活性であり、その活性はＩｇＧのそれを遥かに越
える。ＩｇＭは通常、免疫後の動物および人間にあらわ
れる最初の抗体である。それは次にＩｇＧによって徐々
に置き換えられる。
酸連鎖を伴なう重い鎖の所有によって特徴づけられる。
ＩｇＭ機能の顕著な特徴はその強い細胞分解および補体
固定の活性であり、その活性はＩｇＧのそれを遥かに越
える。ＩｇＭは通常、免疫後の動物および人間にあらわ
れる最初の抗体である。それは次にＩｇＧによって徐々
に置き換えられる。
【０００７】ＩｇＡは人間の血清中の第２の最も豊富な
免疫グロブリンであり、そして主要な分泌免疫グロブリ
ンである。それは抗菌性および呼吸ビールス防護におい
て有用である。ＩｇＥは最も少ない免疫グロブリンであ
る。それは皮膚敏感性をもち、気管支、胃腸、皮膚およ
びその他の種々のアレルギー反応に応答する。ＩｇＤの
構造および生物学的機能についてはごくわずかなことし
か知られていない。ＩｇＤ抗体は自家中毒症に、および
牛乳敏感患者や体組織狼そう紅斑患者に見出された。
免疫グロブリンであり、そして主要な分泌免疫グロブリ
ンである。それは抗菌性および呼吸ビールス防護におい
て有用である。ＩｇＥは最も少ない免疫グロブリンであ
る。それは皮膚敏感性をもち、気管支、胃腸、皮膚およ
びその他の種々のアレルギー反応に応答する。ＩｇＤの
構造および生物学的機能についてはごくわずかなことし
か知られていない。ＩｇＤ抗体は自家中毒症に、および
牛乳敏感患者や体組織狼そう紅斑患者に見出された。
【０００８】上記の免疫グロブリンのクラスの分離法は
周知である。免疫グロブリンに対する抗体の作成法も周
知であり、そして免疫グロブリンを固定担体に結合させ
る方法も周知である。抗体の分離法、抗体を螢光分子、
放射性分子または酵素で標識して結合抗体を測定する方
法も周知である。結合抗体をその抗体に特異的な標識
（放射性、螢光、酵素）抗体と反応させるというよう
な、その結合抗体の間接測定法もある。
周知である。免疫グロブリンに対する抗体の作成法も周
知であり、そして免疫グロブリンを固定担体に結合させ
る方法も周知である。抗体の分離法、抗体を螢光分子、
放射性分子または酵素で標識して結合抗体を測定する方
法も周知である。結合抗体をその抗体に特異的な標識
（放射性、螢光、酵素）抗体と反応させるというよう
な、その結合抗体の間接測定法もある。
【０００９】ある特定クラスの抗原特異的な免疫グロブ
リンの測定は特定の臨床的意義をもつ。米国特許第４，
０２０，１５１号には血清中のＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩ
ｇＭ濃度の免疫分析法が記載されており、その方法は固
体担体を試験試料とまず反応させてＩｇＧ、ＩｇＡおよ
びＩｇＭを吸収させ、次いでＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇ
Ｍに対する標識抗体と反応させてその結合抗体を測定す
ることから成る。抗原特異的な免疫グロブリンも、測定
または検出すべて抗体に対する結合親和性をもつ免疫成
分を用いる免疫技術を利用して、測定することができ
る。このような技術によれば、測定すべき抗体に対する
結合親和性をもつ免疫成分を、固体担体に結合させら
れ、別の特異的な免疫成分は、たとえば螢光性、発色
性、放射性の基または酵素で標識されている。
リンの測定は特定の臨床的意義をもつ。米国特許第４，
０２０，１５１号には血清中のＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩ
ｇＭ濃度の免疫分析法が記載されており、その方法は固
体担体を試験試料とまず反応させてＩｇＧ、ＩｇＡおよ
びＩｇＭを吸収させ、次いでＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇ
Ｍに対する標識抗体と反応させてその結合抗体を測定す
ることから成る。抗原特異的な免疫グロブリンも、測定
または検出すべて抗体に対する結合親和性をもつ免疫成
分を用いる免疫技術を利用して、測定することができ
る。このような技術によれば、測定すべき抗体に対する
結合親和性をもつ免疫成分を、固体担体に結合させら
れ、別の特異的な免疫成分は、たとえば螢光性、発色
性、放射性の基または酵素で標識されている。
【００１０】然しながら、このような技術には、血清中
に見出されうるリューマチ性因子が試料中に存在すると
誤まった陽性の結果がえられるという欠点が同伴する。
リューマチ性因子（ＲＦ）は一般にＩｇＧクラスの抗体
に親和力をもつ。ＲＦはＩｇＧ分子の重い鎖の一定区域
を介して結合する。たとえばルベラ・ビールス種に特異
的なＩｇＭクラスの免疫グロブリンの分析においては、
そのリューマチ性因子それ自体もまたＩｇＭクラスの免
疫グロブリンである。リューマチ性因子には通常ＩｇＭ
クラスの性質があるため、この因子もまた抗ＩｇＭ免疫
グロブリンによって結合され、それによって誤まった陽
性の結果を生じる。このようなリューマチ性因子の妨害
を避ける１つの方法は分析前に異なった免疫グロブリン
クラスの抗体の分離を必要とする。然しながら、異なっ
たクラスの免疫グロブリンの分離、特に異なった種の抗
原特異的な免疫グロブリンの分離のための方法は一般に
煩雑であり時間を非常に消費する。このような方法に
は、クロマトグラフ、電気泳動、および密度傾斜配置が
包含される。
に見出されうるリューマチ性因子が試料中に存在すると
誤まった陽性の結果がえられるという欠点が同伴する。
リューマチ性因子（ＲＦ）は一般にＩｇＧクラスの抗体
に親和力をもつ。ＲＦはＩｇＧ分子の重い鎖の一定区域
を介して結合する。たとえばルベラ・ビールス種に特異
的なＩｇＭクラスの免疫グロブリンの分析においては、
そのリューマチ性因子それ自体もまたＩｇＭクラスの免
疫グロブリンである。リューマチ性因子には通常ＩｇＭ
クラスの性質があるため、この因子もまた抗ＩｇＭ免疫
グロブリンによって結合され、それによって誤まった陽
性の結果を生じる。このようなリューマチ性因子の妨害
を避ける１つの方法は分析前に異なった免疫グロブリン
クラスの抗体の分離を必要とする。然しながら、異なっ
たクラスの免疫グロブリンの分離、特に異なった種の抗
原特異的な免疫グロブリンの分離のための方法は一般に
煩雑であり時間を非常に消費する。このような方法に
は、クロマトグラフ、電気泳動、および密度傾斜配置が
包含される。
【００１１】米国特許第４，２７３，７５６号には特定
の抗体ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤの
免疫分析法が記載されており、この方法は特定の免疫グ
ロブリンクラスに対する抗体を被覆した固体担体をある
種のクラス特異的な抗体を含む試料と接触させてまず反
応を行ない、次いでえられた複合体を標識抗原と反応さ
せ、そして結合した標識抗原を測定することから成る。
の抗体ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤの
免疫分析法が記載されており、この方法は特定の免疫グ
ロブリンクラスに対する抗体を被覆した固体担体をある
種のクラス特異的な抗体を含む試料と接触させてまず反
応を行ない、次いでえられた複合体を標識抗原と反応さ
せ、そして結合した標識抗原を測定することから成る。
【００１２】米国特許第４，２９２，４０３号にはＩｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥのクラスの抗原特異的
な免疫グロブリンを測定するための免疫分析法が記載さ
れており、この方法はその特定の抗原特異的な免疫グロ
ブリンをこの特定の抗原特異的な免疫グロブリンに対す
る不溶化抗体、あるいはこの抗免疫グロブリンの抗原結
合性断片と接触させ、次いでその免疫グロブリンが特異
な親和性をもつところの抗原でもって上記の混合物を処
理し、そして最後にこの混合物を該抗原に対する抗体の
標識化した抗原結合性の断片で処理してからこの標識断
片を測定することからなっている。この米国特許はリュ
ーマチ性因子の妨害を避けうることを示唆している。
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥのクラスの抗原特異的
な免疫グロブリンを測定するための免疫分析法が記載さ
れており、この方法はその特定の抗原特異的な免疫グロ
ブリンをこの特定の抗原特異的な免疫グロブリンに対す
る不溶化抗体、あるいはこの抗免疫グロブリンの抗原結
合性断片と接触させ、次いでその免疫グロブリンが特異
な親和性をもつところの抗原でもって上記の混合物を処
理し、そして最後にこの混合物を該抗原に対する抗体の
標識化した抗原結合性の断片で処理してからこの標識断
片を測定することからなっている。この米国特許はリュ
ーマチ性因子の妨害を避けうることを示唆している。
【００１３】ＶｏｌｌｅｒらのＢｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｔｈ
ｏｌｏｇｙ（１９７５）５６，３３８；Ｇｒａｖｅｌｌ
らのＴｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｖｏｌ １３６，Ｓｕｐｐｌｅ
ｍｅｎｔ（１９７７）５３００；およびＣｌｅａｒｙら
のＲｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ｉ
ｎ ＣｈｅｍｉｃａｌＰａｔｈｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ １９，Ｎｏ．２（１９
７８）２８１；にはルベラ・ビールスに対する抗体を検
出するための酵素免疫分析法が記載されている。
ｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐａｔｈ
ｏｌｏｇｙ（１９７５）５６，３３８；Ｇｒａｖｅｌｌ
らのＴｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｖｏｌ １３６，Ｓｕｐｐｌｅ
ｍｅｎｔ（１９７７）５３００；およびＣｌｅａｒｙら
のＲｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ｉ
ｎ ＣｈｅｍｉｃａｌＰａｔｈｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ １９，Ｎｏ．２（１９
７８）２８１；にはルベラ・ビールスに対する抗体を検
出するための酵素免疫分析法が記載されている。
【００１４】本発明は試料中のＩｇＸクラス（ＸはＭ、
Ａ、ＤおよびＥから成る群からえらばれる）の免疫グロ
ブリン抗体を測定するための方法に関し、その改良点は
ＩｇＧに対し特異性のある且つＩｇＧへのリューマチ性
因子の混合を防ぐに十分な免疫試剤の有効量で試料を処
理することから成る。特に本発明は試料中のＩｇＸクラ
ス（ＸはＭ、Ａ、ＤおよびＥから成る群からえらばれ
る）の免疫グロブリン抗体の測定法であって次の工程か
ら成るものに関する。
Ａ、ＤおよびＥから成る群からえらばれる）の免疫グロ
ブリン抗体を測定するための方法に関し、その改良点は
ＩｇＧに対し特異性のある且つＩｇＧへのリューマチ性
因子の混合を防ぐに十分な免疫試剤の有効量で試料を処
理することから成る。特に本発明は試料中のＩｇＸクラ
ス（ＸはＭ、Ａ、ＤおよびＥから成る群からえらばれ
る）の免疫グロブリン抗体の測定法であって次の工程か
ら成るものに関する。
【００１５】（ａ） 試料を有効量の抗ＩｇＧで処理
し、（ｂ） そのＩｇＸ抗体が特異性を示す抗原を固体
担体に被覆して成るクラス特異的な抗体試剤と上記の処
理した試料とを接触させてその固体担体上に抗原−Ｉｇ
Ｘ複合休を形成させ、（ｃ） 未結合の試料を除き、
（ｄ） この抗原−ＩｇＸ複合体を抗ＩｇＸで処理し、
そして（ｅ） 抗原−ＩｇＸ複合体に結合した抗ＩｇＸ
を試料中のＩｇＸの尺度として測定する。
し、（ｂ） そのＩｇＸ抗体が特異性を示す抗原を固体
担体に被覆して成るクラス特異的な抗体試剤と上記の処
理した試料とを接触させてその固体担体上に抗原−Ｉｇ
Ｘ複合休を形成させ、（ｃ） 未結合の試料を除き、
（ｄ） この抗原−ＩｇＸ複合体を抗ＩｇＸで処理し、
そして（ｅ） 抗原−ＩｇＸ複合体に結合した抗ＩｇＸ
を試料中のＩｇＸの尺度として測定する。
【００１６】ここで使用する“免疫試剤”なる用語は、
抗原、好ましくは抗体で、ＩｇＧクラスの免疫グロブリ
ンがそれに対し特異性を示しそれはリューマチ性因子が
ＩｇＧに結合するのをさまたげるのに十分な仕方でＩｇ
Ｇを複合体化するものをいう。本発明の方法において免
疫試剤として抗ＩｇＧを使用するのが最も好ましい。ま
た、ＩｇＸの免疫分析を行なう前に、関心のある免疫グ
ロブリン抗体ＩｇＸを含む試料を処理するのが好まし
い。ＩｇＸの種々の型の免疫分析が本発明の改良法の範
囲内で使用しうるが、免疫グロブリン抗体ＩｇＸがそれ
に対し特異性を示す抗原を使用して抗原−ＩｇＸ複合体
を形成させる免疫分析法を使用するのが好ましい。この
ようにして形成させた抗原ＩｇＸ複合体を次いで、たと
えば免疫沈澱法、サンドイッチ法または競合分析法を使
用して、測定することができる。
抗原、好ましくは抗体で、ＩｇＧクラスの免疫グロブリ
ンがそれに対し特異性を示しそれはリューマチ性因子が
ＩｇＧに結合するのをさまたげるのに十分な仕方でＩｇ
Ｇを複合体化するものをいう。本発明の方法において免
疫試剤として抗ＩｇＧを使用するのが最も好ましい。ま
た、ＩｇＸの免疫分析を行なう前に、関心のある免疫グ
ロブリン抗体ＩｇＸを含む試料を処理するのが好まし
い。ＩｇＸの種々の型の免疫分析が本発明の改良法の範
囲内で使用しうるが、免疫グロブリン抗体ＩｇＸがそれ
に対し特異性を示す抗原を使用して抗原−ＩｇＸ複合体
を形成させる免疫分析法を使用するのが好ましい。この
ようにして形成させた抗原ＩｇＸ複合体を次いで、たと
えば免疫沈澱法、サンドイッチ法または競合分析法を使
用して、測定することができる。
【００１７】免疫試剤は抗ＩｇＸ複合体を形成させるの
に使用する抗原処理前に、又は後に、あるいはこれと同
時に使用しうるけれども、試料を抗原で処理する前に免
疫試剤を使用するのが好ましい。ここに使用する“抗
原”なる用語は、人間またはその他の生物に免疫反応を
誘起しうる生物学的に活性な分子をいう。このような抗
原の例としてたとえば血清蛋白、組織蛋白、抗体、ビー
ルス蛋白、バクテリア・リポポリサッカライドなどがあ
げられる。
に使用する抗原処理前に、又は後に、あるいはこれと同
時に使用しうるけれども、試料を抗原で処理する前に免
疫試剤を使用するのが好ましい。ここに使用する“抗
原”なる用語は、人間またはその他の生物に免疫反応を
誘起しうる生物学的に活性な分子をいう。このような抗
原の例としてたとえば血清蛋白、組織蛋白、抗体、ビー
ルス蛋白、バクテリア・リポポリサッカライドなどがあ
げられる。
【００１８】本発明の好ましい具体例によれば、ＩｇＸ
クラスの免疫グロブリン抗体を含む試料を緩衝液中で有
効量の抗ＩｇＧでもって処理する。えられた混合物を十
分な時間インキュベートして試料中のＩｇＧクラスの免
疫グロブリンの実質的にすべてを抗−ＩｇＧと複合体化
させる。インキュベーション期間の後に、処理試料を、
関心のあるＩｇＸ抗体に特異的な抗原を固体担体に被覆
して成るクラス特異的な抗体試剤、と接触させる。えら
れた混合物を十分な時間インキュベートして固体担体上
に抗原−ＩｇＸ複合体を形成させる。固体担体上の抗原
−ＩｇＸ複合体を水洗して未結合試料を除き、次いで抗
ＩｇＸで処理する。えられた混合物を次いで十分な時間
培養して固体担体上に抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ複合体を
生成させる。固体担体上に被覆されている抗原−ＩｇＸ
−抗ＩｇＸ複合体を水洗してから、抗原−ＩｇＸ複合体
に結合した抗ＩｇＸの量を試料中の特定のＩｇＸの尺度
として測定する。
クラスの免疫グロブリン抗体を含む試料を緩衝液中で有
効量の抗ＩｇＧでもって処理する。えられた混合物を十
分な時間インキュベートして試料中のＩｇＧクラスの免
疫グロブリンの実質的にすべてを抗−ＩｇＧと複合体化
させる。インキュベーション期間の後に、処理試料を、
関心のあるＩｇＸ抗体に特異的な抗原を固体担体に被覆
して成るクラス特異的な抗体試剤、と接触させる。えら
れた混合物を十分な時間インキュベートして固体担体上
に抗原−ＩｇＸ複合体を形成させる。固体担体上の抗原
−ＩｇＸ複合体を水洗して未結合試料を除き、次いで抗
ＩｇＸで処理する。えられた混合物を次いで十分な時間
培養して固体担体上に抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ複合体を
生成させる。固体担体上に被覆されている抗原−ＩｇＸ
−抗ＩｇＸ複合体を水洗してから、抗原−ＩｇＸ複合体
に結合した抗ＩｇＸの量を試料中の特定のＩｇＸの尺度
として測定する。
【００１９】本発明によれば、本発明の方法によって測
定しうるＩｇＸクラスの免疫グロブリンはＩｇＭ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥおよびＩｇＤを包含する。固体担体とは抗原
に対して吸収性のある不溶性重合体物質をいう。この種
の周知物質にはポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリブチレン、ブチルゴムおよびその他の合成
ゴム類などの炭化水素ポリマーが包含される。他の好適
な有機ポリマーとしては、シラン系ゴム、ポリエステ
ル、ポリアミド、セルロース、セルロース誘導体、アク
リレート、メタクリレート、塩化ビニルのようなビニル
ポリマーおよびポリ塩化ビニルがあげられる。ポリスチ
レンのグラフトコポリマーのようなコポリマー類も有用
である。上記物質の他に、固体担体の表面はシリカゲ
ル、シリコンウエファース、ガスラ不溶蛋白メタルから
成ることができ、また固体担体はビーズ、チューブ、ス
トリップ、デイスク、マイクロテトレーションプレーな
どの形体でありうる。
定しうるＩｇＸクラスの免疫グロブリンはＩｇＭ、Ｉｇ
Ａ、ＩｇＥおよびＩｇＤを包含する。固体担体とは抗原
に対して吸収性のある不溶性重合体物質をいう。この種
の周知物質にはポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリブチレン、ブチルゴムおよびその他の合成
ゴム類などの炭化水素ポリマーが包含される。他の好適
な有機ポリマーとしては、シラン系ゴム、ポリエステ
ル、ポリアミド、セルロース、セルロース誘導体、アク
リレート、メタクリレート、塩化ビニルのようなビニル
ポリマーおよびポリ塩化ビニルがあげられる。ポリスチ
レンのグラフトコポリマーのようなコポリマー類も有用
である。上記物質の他に、固体担体の表面はシリカゲ
ル、シリコンウエファース、ガスラ不溶蛋白メタルから
成ることができ、また固体担体はビーズ、チューブ、ス
トリップ、デイスク、マイクロテトレーションプレーな
どの形体でありうる。
【００２０】クラス特異的な抗体試剤に使用する抗原は
クラス特異的な抗体ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤお
よびＩｇＥを結合しうるものであり、人間またはその他
の動物から得ることができる。抗原を増殖させるために
は組織培養技術を使用することができる。抗原は固体担
体上に、好ましくはポリスチレンビーズ上に、被覆され
る。抗原は種々の技術を使用して固体担体上に被覆され
ることができる。操作を容易にするために、被覆すべき
固体担体を抗原含有溶液中にある期間入れておき次いで
固体担体を水洗および風乾することによって、固体担体
上に抗原を被覆するのが好ましい。
クラス特異的な抗体ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤお
よびＩｇＥを結合しうるものであり、人間またはその他
の動物から得ることができる。抗原を増殖させるために
は組織培養技術を使用することができる。抗原は固体担
体上に、好ましくはポリスチレンビーズ上に、被覆され
る。抗原は種々の技術を使用して固体担体上に被覆され
ることができる。操作を容易にするために、被覆すべき
固体担体を抗原含有溶液中にある期間入れておき次いで
固体担体を水洗および風乾することによって、固体担体
上に抗原を被覆するのが好ましい。
【００２１】“抗ＩｇＧ”なる用語は人間のＩｇＧに特
異的であり且つウサギ、山羊、馬、羊、モルモットなど
の人間以外の動物中で生成される抗体をいう。有効量の
抗ＩｇＧを試料に添加すると、試料中に存在するいかな
るＩｇＧ免疫グロブリンもこれに結合する。クラス特異
的な抗体試剤を試料に接触させる前に抗ＩｇＧによりＩ
ｇＧを結合せしめると、それによりＩｇＧ上のリューマ
チ性因子結合部位は複合体化されてリューマチ性因子が
ＩｇＧに結合するのを妨げる。それ故、試料中のＩｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ免疫クロブリンのみ、
ならびにＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体のみが固体担体上の抗
原に結合しうる。処理した試料およびクラス特異的な抗
体試剤をインキュベートし、次いで水洗して試験試量中
の未結合免疫グロブリン類を除く。このようにして、感
染のためそして感染物質に対する抗体を含有する血清中
に存在するものをも含むクラス特異的な免疫グロブリ
ン、ＩｇＸ、抗原−ＩｇＸ複合体を形成しそして固体担
体に付着する。また、あらかじめ作ったＩｇＧ−抗Ｉｇ
Ｇ複合体は抗原−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体を形成しそし
てそれにより固体担体に付着しうる。
異的であり且つウサギ、山羊、馬、羊、モルモットなど
の人間以外の動物中で生成される抗体をいう。有効量の
抗ＩｇＧを試料に添加すると、試料中に存在するいかな
るＩｇＧ免疫グロブリンもこれに結合する。クラス特異
的な抗体試剤を試料に接触させる前に抗ＩｇＧによりＩ
ｇＧを結合せしめると、それによりＩｇＧ上のリューマ
チ性因子結合部位は複合体化されてリューマチ性因子が
ＩｇＧに結合するのを妨げる。それ故、試料中のＩｇ
Ｍ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ免疫クロブリンのみ、
ならびにＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体のみが固体担体上の抗
原に結合しうる。処理した試料およびクラス特異的な抗
体試剤をインキュベートし、次いで水洗して試験試量中
の未結合免疫グロブリン類を除く。このようにして、感
染のためそして感染物質に対する抗体を含有する血清中
に存在するものをも含むクラス特異的な免疫グロブリ
ン、ＩｇＸ、抗原−ＩｇＸ複合体を形成しそして固体担
体に付着する。また、あらかじめ作ったＩｇＧ−抗Ｉｇ
Ｇ複合体は抗原−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体を形成しそし
てそれにより固体担体に付着しうる。
【００２２】抗原−ＩｇＸ複合体は周知の抗ＩｇＸと反
応し、固体担体上に抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ複合体を形
成する。抗原−ＩｇＸ複合体に結合した抗ＩｇＸを、試
料中のＩｇＸを、試料中のＩｇＸの尺度として測定す
る。抗ＩｇＸは通常の螢光染料、酵素または放射性の標
識によって直接に標識され結合量の測定をすることがで
き、あるいはまた抗ＩｇＸは更なる反応、たとえば抗Ｉ
ｇＸに対して特異的なそして通常の方法で螢光染料、酵
素、または放射性の標識で標識されている抗体と反応さ
せて、間接に標識することができる。使用する抗ＩｇＸ
は一般に、測定すべきＩｇＸに対して特異的なそして人
間以外の動物中で生成せられたＩｇＧ免疫グロブリンで
ある。
応し、固体担体上に抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ複合体を形
成する。抗原−ＩｇＸ複合体に結合した抗ＩｇＸを、試
料中のＩｇＸを、試料中のＩｇＸの尺度として測定す
る。抗ＩｇＸは通常の螢光染料、酵素または放射性の標
識によって直接に標識され結合量の測定をすることがで
き、あるいはまた抗ＩｇＸは更なる反応、たとえば抗Ｉ
ｇＸに対して特異的なそして通常の方法で螢光染料、酵
素、または放射性の標識で標識されている抗体と反応さ
せて、間接に標識することができる。使用する抗ＩｇＸ
は一般に、測定すべきＩｇＸに対して特異的なそして人
間以外の動物中で生成せられたＩｇＧ免疫グロブリンで
ある。
【００２３】抗ＩｇＸの直接酵素標識法を使用するのが
好ましい。酵素の例としてはカタラーゼ、ペルオキシダ
ーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ、ホスフア
ターゼなどがあげられる。抗ＩｇＸの直接標識法を使う
とき、抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ＊複合体（抗ＩｇＸ＊は
標識抗ＩｇＸを表わす）の形成後に、酵素基質を反応混
合物の液相および（または）固相に加え、そして酵素反
応を通常の技術たとえば比色分析、螢光分析または分光
分析により測定して、結合した標識抗ＩｇＸを測定す
る。間接標識の場合には、すなわち抗ＩｇＸが末標識で
あるときは、抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ複合体を洗浄して
未結合の抗ＩｇＸを除き、次いで抗ＩｇＸに対する標識
抗体と反応させ、その後に結合した標識抗体を測定す
る。また、本発明はリューマチ性因子を含む試量中のＩ
ｇＧを測定する方法をも提供する。上述の方法において
固体担体上に形成させた抗原−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体
は次いで抗−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体上に結合している
抗ＩｇＧに対して特異的な標準抗ＩｇＧ＊と反応させる
ことができ、そして結合した標識抗ＩｇＧ＊は次いで試
料中に存在するＩｇＧの尺度として測定することができ
る。
好ましい。酵素の例としてはカタラーゼ、ペルオキシダ
ーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼ、ホスフア
ターゼなどがあげられる。抗ＩｇＸの直接標識法を使う
とき、抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ＊複合体（抗ＩｇＸ＊は
標識抗ＩｇＸを表わす）の形成後に、酵素基質を反応混
合物の液相および（または）固相に加え、そして酵素反
応を通常の技術たとえば比色分析、螢光分析または分光
分析により測定して、結合した標識抗ＩｇＸを測定す
る。間接標識の場合には、すなわち抗ＩｇＸが末標識で
あるときは、抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ複合体を洗浄して
未結合の抗ＩｇＸを除き、次いで抗ＩｇＸに対する標識
抗体と反応させ、その後に結合した標識抗体を測定す
る。また、本発明はリューマチ性因子を含む試量中のＩ
ｇＧを測定する方法をも提供する。上述の方法において
固体担体上に形成させた抗原−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体
は次いで抗−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体上に結合している
抗ＩｇＧに対して特異的な標準抗ＩｇＧ＊と反応させる
ことができ、そして結合した標識抗ＩｇＧ＊は次いで試
料中に存在するＩｇＧの尺度として測定することができ
る。
【００２４】ここに使用する“抗ＩｇＧの有効量”なる
用語は、分析すべき試料中のＩｇＧのすべてを結合し、
それによってＩｇＧおよびＲＦのいかなる結合をも防ぐ
に足る抗ＩｇＧの量をいう。次の実施例は本発明を説明
するものであって、本発明の精神および範囲を限定しよ
うとするものではない。
用語は、分析すべき試料中のＩｇＧのすべてを結合し、
それによってＩｇＧおよびＲＦのいかなる結合をも防ぐ
に足る抗ＩｇＧの量をいう。次の実施例は本発明を説明
するものであって、本発明の精神および範囲を限定しよ
うとするものではない。
【００２５】
実施例１．ルベラ・ビールス抗原被覆ビーズの製造 ルベラ・ビールス、ギルチレスト菌株を栄養培地中のＢ
ＨＫ２１ Ｃｌｏｎｅ１３セル中で製造した。このビー
ルス抗原を培地の超遠心分離によって単離した。この懸
濁液をｐＨ８．６の０．１Ｍトリスを用いて１：５０に
希釈した。この希釈溶液を使用して室温で一夜かけて６
ｍｍのポリスチレンビーズを被覆し、そして各セットの
ビーズを洗浄および風乾した。 ルベラ・ビールスに対するＩｇＭ抗体の測定
ＨＫ２１ Ｃｌｏｎｅ１３セル中で製造した。このビー
ルス抗原を培地の超遠心分離によって単離した。この懸
濁液をｐＨ８．６の０．１Ｍトリスを用いて１：５０に
希釈した。この希釈溶液を使用して室温で一夜かけて６
ｍｍのポリスチレンビーズを被覆し、そして各セットの
ビーズを洗浄および風乾した。 ルベラ・ビールスに対するＩｇＭ抗体の測定
【００２６】１．血清試料、及び陰性、高陽性ならびに
３種の低度に陽性の対照標準を、０．１Ｍのトリス、
０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のトウイーン２
０および１ｍｇ／ｍｌの牛の血清アルブミンを含む溶液
中にｐＨ７．６で１：２１に希釈した。
３種の低度に陽性の対照標準を、０．１Ｍのトリス、
０．５Ｍの塩化ナトリウム、０．０１％のトウイーン２
０および１ｍｇ／ｍｌの牛の血清アルブミンを含む溶液
中にｐＨ７．６で１：２１に希釈した。
【００２７】２．２０μｌづつの量の希釈試料およびそ
れぞれの希釈対照標準を反応トレイの適切なウエルに加
えた。
れぞれの希釈対照標準を反応トレイの適切なウエルに加
えた。
【００２８】３．対照標準の希釈試料を含むそれぞれの
ウエル中に、１．５％の山羊の抗ヒトＩｇＧ、５３．５
％の仔牛血清、０．０１％のトウイーン２０および４
４．９％の混合物（０．１Ｍのトリスおよび０．５Ｍの
塩化ナトリウムから成り、最終ｐＨ７．６に調整したも
の）を含む混合液２００μｌを加えた。
ウエル中に、１．５％の山羊の抗ヒトＩｇＧ、５３．５
％の仔牛血清、０．０１％のトウイーン２０および４
４．９％の混合物（０．１Ｍのトリスおよび０．５Ｍの
塩化ナトリウムから成り、最終ｐＨ７．６に調整したも
の）を含む混合液２００μｌを加えた。
【００２９】４．反応トレイをふたをして４５℃で６０
分間インキューベートした。
分間インキューベートした。
【００３０】５．インキュベーション期間の後に、ルベ
ラ・ビールス抗原で被覆したビーズを、試料または対照
標準を含むそれぞれのウエルに加え、反応トレイを再び
ふたをして４５℃で９０分間インキュベートした。
ラ・ビールス抗原で被覆したビーズを、試料または対照
標準を含むそれぞれのウエルに加え、反応トレイを再び
ふたをして４５℃で９０分間インキュベートした。
【００３１】６．この第２のインキュベーション後に、
未結合の試料または対照標準を各ウエルから除き、ビー
ズを水で２回洗浄した。
未結合の試料または対照標準を各ウエルから除き、ビー
ズを水で２回洗浄した。
【００３２】７．洗浄したビーズを含むウエルに、ホー
スラデイッシュペルオキシダーゼ（酵素）を共有結合さ
せた山羊の抗ヒトＩｇＭの０．０５〜３μｇ／ｍｌ及び
１０％血清を含む０．１Ｍのトリスおよび０．１５Ｍの
塩化ナトリウムの溶液２００μｌを加えた。
スラデイッシュペルオキシダーゼ（酵素）を共有結合さ
せた山羊の抗ヒトＩｇＭの０．０５〜３μｇ／ｍｌ及び
１０％血清を含む０．１Ｍのトリスおよび０．１５Ｍの
塩化ナトリウムの溶液２００μｌを加えた。
【００３３】８．反応トレイのふたをして４５℃で９０
分間インキュベートした。
分間インキュベートした。
【００３４】９．このインキュベーション後、未結合の
山羊の抗ヒトＩｇＭ−ホースラディシュペルオキシダー
ゼを除き、このビーズを５ｍｌの水で２回洗浄した。
山羊の抗ヒトＩｇＭ−ホースラディシュペルオキシダー
ゼを除き、このビーズを５ｍｌの水で２回洗浄した。
【００３５】１０．試料および対照標準を始めに含んで
いたウエルからのビーズを分析管に移し、次いでこれに
クエン酸塩−リン酸塩緩衝液（ｐＨ５．５）５ｍｌ中に
約２７ｍｇのＯ−フェニレンジアミン・２ＨＣｌをクエ
ン酸塩−リン酸塩緩衝液（ｐＨ５．５）５ｍｌ中に含む
新しく調製した基質溶液３００μｌを加えた。次いでこ
の分析管を室温で３０分間インキュベートした。
いたウエルからのビーズを分析管に移し、次いでこれに
クエン酸塩−リン酸塩緩衝液（ｐＨ５．５）５ｍｌ中に
約２７ｍｇのＯ−フェニレンジアミン・２ＨＣｌをクエ
ン酸塩−リン酸塩緩衝液（ｐＨ５．５）５ｍｌ中に含む
新しく調製した基質溶液３００μｌを加えた。次いでこ
の分析管を室温で３０分間インキュベートした。
【００３６】１１．このインキュベーション後に、２ｍ
ｌの１Ｎ塩酸をそれぞれの分析管に加え、えられた試料
溶液および対照標準溶液の吸収値を分光分析器中で４９
２ｍｍにおいて読んだ。
ｌの１Ｎ塩酸をそれぞれの分析管に加え、えられた試料
溶液および対照標準溶液の吸収値を分光分析器中で４９
２ｍｍにおいて読んだ。
【００３７】１２．３種の低水準の対照標準の平均値よ
りも１．０９倍大きい試料の吸収値を陽性の結果の限界
値とし、それより０．９１倍小さい試料吸収値を陰性の
結果の限界値としてとった。３種の低水準の対照標準の
平均値の１．０９倍と０．９１倍との間の吸収値はルベ
ラ感染があると思われるが、それは確認していない。
りも１．０９倍大きい試料の吸収値を陽性の結果の限界
値とし、それより０．９１倍小さい試料吸収値を陰性の
結果の限界値としてとった。３種の低水準の対照標準の
平均値の１．０９倍と０．９１倍との間の吸収値はルベ
ラ感染があると思われるが、それは確認していない。
【００３８】実施例１に記載された分析の感度は使用さ
れた低水準の陽性対照標準のレベルによって決定され
る。上記において、Ｐａｌｍｅｒ，Ｄ．Ｆ．らのＲｕｂ
ｅｌｌａ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ−Ｉｎｈ
ｉｂｉｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ．２（ｒｅｖｉｓｅｄ）Ｃｅｎｔｅ
ｒ Ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ａｌｔ
ａｎｔａ，１９７７に記載のヘマグルチン化抑制サクロ
ース密度勾配試験法に述べられている感度限界値と一致
するところのＩｇＭに対する値をもつ低水準の陽性対照
標準が使用せられた。
れた低水準の陽性対照標準のレベルによって決定され
る。上記において、Ｐａｌｍｅｒ，Ｄ．Ｆ．らのＲｕｂ
ｅｌｌａ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ−Ｉｎｈ
ｉｂｉｔｉｏｎ Ｔｅｓｔｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ．２（ｒｅｖｉｓｅｄ）Ｃｅｎｔｅ
ｒ Ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ａｌｔ
ａｎｔａ，１９７７に記載のヘマグルチン化抑制サクロ
ース密度勾配試験法に述べられている感度限界値と一致
するところのＩｇＭに対する値をもつ低水準の陽性対照
標準が使用せられた。
【００３９】実施例２．ルベラ以外のビールス感染をう
けている患者から、および背ずい炎患者から、えた種々
の試料、ならびに抗−核抗体および（または）リューマ
チ性因子に対して陽性の試料を、本発明の方法に従って
分析した。ビールス感染、背ずい炎、抗−核抗体または
リューマチ性因子に起因するいかなる誤まった陽性結果
も認められなかった。
けている患者から、および背ずい炎患者から、えた種々
の試料、ならびに抗−核抗体および（または）リューマ
チ性因子に対して陽性の試料を、本発明の方法に従って
分析した。ビールス感染、背ずい炎、抗−核抗体または
リューマチ性因子に起因するいかなる誤まった陽性結果
も認められなかった。
【００４０】上述の方法から注目されるように、本発明
の方法はリューマチ性因子を含む試料中のクラス特異的
な免疫グロブリン類を測定するための免疫分析を提供す
る。本発明は更に、クラス特異的な抗体試剤への免疫グ
ロブリンの結合の前に、試料からの種々の免疫グロブリ
ンの分離またはリューマチ性因子の除去を必要としな
い、リューマチ性因子含有試料中のクラス特異的な免疫
グロブリン類を測定するための免疫分析法を提供する。
本発明を特定の具体例に関して述べたが、その詳細は限
定条件と解釈すべきではない。種々の均等法、変化およ
び変性が本発明の精神および範囲から逸脱することなし
に実施しうることが明らかであり、このような均等の具
体例も本発明に包含されるものと解釈されるからであ
る。
の方法はリューマチ性因子を含む試料中のクラス特異的
な免疫グロブリン類を測定するための免疫分析を提供す
る。本発明は更に、クラス特異的な抗体試剤への免疫グ
ロブリンの結合の前に、試料からの種々の免疫グロブリ
ンの分離またはリューマチ性因子の除去を必要としな
い、リューマチ性因子含有試料中のクラス特異的な免疫
グロブリン類を測定するための免疫分析法を提供する。
本発明を特定の具体例に関して述べたが、その詳細は限
定条件と解釈すべきではない。種々の均等法、変化およ
び変性が本発明の精神および範囲から逸脱することなし
に実施しうることが明らかであり、このような均等の具
体例も本発明に包含されるものと解釈されるからであ
る。
Claims (7)
- 【請求項１】 試料中の１ｇＧクラスの免疫グロブリン
抗体の測定法であって、 （ａ） 試料をＩｇＧクラスの免疫グロブリンと複合体
を形成しうる抗体の有効量で処理し、 （ｂ） その免疫グロブリン抗体ＩｇＧが特異性を示す
抗原を固体担体に被覆して成るクラス特異的な抗体試剤
と、上記の処理した試料とを接触させて、その固体担体
上に抗原−ＩｇＧ−１ｇＧクラスの免疫グロブリンと複
合体を形成しうる抗体の複合体を形成させ、 （ｃ） 未結合試料を除き、 （ｄ） この抗原−ＩｇＧ−ＩｇＧクラスの免疫グロブ
リンと複合体を形成しうる抗体の複合体を、ＩｇＧクラ
スの免疫グロブリンと複合体を形成しうる抗体に対する
抗体で処理し、そして （ｅ） 抗原−ＩｇＧ−ＩｇＧクラスの免疫グロブリン
と複合体を形成しうる抗体の複合体に結合したＩｇＧク
ラスの免疫グロブリンと複合体を形成しうる抗体に対す
る抗体を試料中のＩｇＧの尺度として測定する、ことを
特徴とする方法。 - 【請求項２】 試料中のＩｇＧクラスの免疫グロブリン
抗体の測定法であって、 （ａ） 試料を抗ＩｇＧの有効量で処理し、 （ｂ） その免疫グロブリン抗体ＩｇＧが特異性を示す
抗原を固体担体に被覆して成るクラス特異的な抗体試剤
と上記の処理した試料とを接触させてその固体担体上に
抗原−ＩｇＧ・抗ＩｇＧ複合体を形成させ、 （ｃ） 未結合試料を除き、 （ｄ） この抗原−ＩｇＧ−抗ＩｇＧ複合体を抗ＩｇＧ
に対する抗体で処理し、そして （ｅ） 抗原−ＩｇＧ−抗−ＩｇＧ複合体に結合した抗
ＩｇＧに対する抗体を試料中のＩｇＧの尺度として測定
する、ことを特徴とする請求項第１項記載の方法。 - 【請求項３】 工程（ａ）の抗ＩｇＧの量が試料中のＩ
ｇＧの量よりも免疫化学的に多い請求項第２項記載の方
法。 - 【請求項４】 抗ＩｇＧに対する抗体が酵素で標識され
ている請求項第２項記載の方法。 - 【請求項５】 工程（ｃ）を未結合試料のアスピレーシ
ョン吸引および固体担体ビーズの洗浄によって行なう請
求項第２項記載の方法。 - 【請求項６】 試料中の結合した抗ＩｇＧに対する抗体
の量を測定する前に、工程（ｅ）の未結合のＩｇＧに対
する標識抗体を除く請求項第４項記載の方法。 - 【請求項７】 未結合のＩｇＧに対する標識抗体を固体
担体のアスピレーション吸引および洗浄によって除く請
求項第６記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/346,662 US4434227A (en) | 1982-02-08 | 1982-02-08 | Immunoassay for class specific immunoglobulin antibodies |
| US346662 | 1994-11-30 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58018275A Division JPS58147653A (ja) | 1982-02-08 | 1983-02-08 | 種類特異性免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0540120A true JPH0540120A (ja) | 1993-02-19 |
| JP2599058B2 JP2599058B2 (ja) | 1997-04-09 |
Family
ID=23360468
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58018275A Granted JPS58147653A (ja) | 1982-02-08 | 1983-02-08 | 種類特異性免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
| JP3296702A Expired - Lifetime JP2599058B2 (ja) | 1982-02-08 | 1991-08-28 | クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58018275A Granted JPS58147653A (ja) | 1982-02-08 | 1983-02-08 | 種類特異性免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4434227A (ja) |
| JP (2) | JPS58147653A (ja) |
| BE (1) | BE895848A (ja) |
| CA (1) | CA1215644A (ja) |
| DE (1) | DE3303793C2 (ja) |
| FR (1) | FR2521303B1 (ja) |
| GB (1) | GB2114289B (ja) |
| IT (1) | IT1163083B (ja) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4539292A (en) * | 1982-12-29 | 1985-09-03 | Reid Michael J | Immunoassay technique for specific immunoglobulin E |
| CA1256795A (en) * | 1983-12-28 | 1989-07-04 | Dennis A. Carson | Anti-idiotype antibodies induced by synthetic polypeptides |
| US4727037A (en) * | 1984-02-15 | 1988-02-23 | Cetus Corporation | Assay kit and method for the determination of antibody class and subclass |
| US4668620A (en) * | 1984-02-22 | 1987-05-26 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing background interference activity in enzyme-label immunoassays |
| CA1261257A (en) * | 1984-09-19 | 1989-09-26 | Helgi Valdimarsson | Prognostic value of rheumatoid factor isotypes and their association with disease activity |
| EP0189389B1 (fr) * | 1985-01-24 | 1989-04-05 | Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire | Procédé de dosage immunologique d'anticorps de diverses classes dans un échantillon liquide |
| JPS62500049A (ja) * | 1985-02-26 | 1987-01-08 | アメリカ合衆国 | ヒトｔ↓−細胞白血病ウイルスタイプ３の検出 |
| JPS61205862A (ja) * | 1985-03-08 | 1986-09-12 | Shionogi & Co Ltd | アレルゲン特異ＩｇＧ抗体測定用試薬 |
| JPS6270764A (ja) * | 1985-03-08 | 1987-04-01 | Sanko Junyaku Kk | 血清中の免疫抗体測定方法 |
| DE3603085C1 (en) * | 1986-02-01 | 1987-04-23 | Medac Klinische Spezialpraep | Immunological method for detecting antigen-specific antibodies and test kit for carrying out the method |
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