JPS58147653A - 種類特異性免疫グロブリン抗体の免疫分析法 - Google Patents
種類特異性免疫グロブリン抗体の免疫分析法Info
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- JPS58147653A JPS58147653A JP58018275A JP1827583A JPS58147653A JP S58147653 A JPS58147653 A JP S58147653A JP 58018275 A JP58018275 A JP 58018275A JP 1827583 A JP1827583 A JP 1827583A JP S58147653 A JPS58147653 A JP S58147653A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
免疫グロブリン分子は、４１１ＩＩＯポリベグ六ド鎖と
約Ｂｏｏｏドルトンの分子量をもつ２ｔｄの重い鎖と約
２２、０００ドルトンの分子量をもつ２ｔｌｌｏ＠い鎖
との、ジサルファイド結合によって結合している、１つ
またはそれ以上のセットから成る。
約Ｂｏｏｏドルトンの分子量をもつ２ｔｄの重い鎖と約
２２、０００ドルトンの分子量をもつ２ｔｌｌｏ＠い鎖
との、ジサルファイド結合によって結合している、１つ
またはそれ以上のセットから成る。
免疫グロブリンは一般にＧＳＭ、Ａ、Ｄ′ｊ６よび１の
５４１１に小分類される。これらの種類の免疫グロブリ
ンは一般にＩ、Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤｇよび■１
によってそれぞれ表わされる。
５４１１に小分類される。これらの種類の免疫グロブリ
ンは一般にＩ、Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤｇよび■１
によってそれぞれ表わされる。
５４［の免疫グロブリンは直い鎖の抗原決定ｇｌ素の存
在によって区別され、これらは免疫グロブリンに適用さ
れるローマ字に対応するギリシャ小文字によって命名さ
れる。
在によって区別され、これらは免疫グロブリンに適用さ
れるローマ字に対応するギリシャ小文字によって命名さ
れる。
Ｉ、Ｇ ７ （ガフ？）
■、ム α（アルファ）
ＩＭ μ（ミュー）Ｉ、Ｄ
δ（デルタ） Ｉｇｌ ｔ （イプシロン）また、池の抗
原決定要素を基準とするＩｇＧ、ＩｇＡｇよびＩｇＭの
小分類もあり、これらは数字（たとえばγ１、α１、μ
ｍ）によって命名される。ＩｇＧの４つの小分類は２圏
のＩ ＡＮよび２個のＩ、Ｍを認識した。丁べての小分
類は正常な丁べての人間の血清中に見出される。
δ（デルタ） Ｉｇｌ ｔ （イプシロン）また、池の抗
原決定要素を基準とするＩｇＧ、ＩｇＡｇよびＩｇＭの
小分類もあり、これらは数字（たとえばγ１、α１、μ
ｍ）によって命名される。ＩｇＧの４つの小分類は２圏
のＩ ＡＮよび２個のＩ、Ｍを認識した。丁べての小分
類は正常な丁べての人間の血清中に見出される。
Ｉ、ＧはＬＥ盾な人間の血清中に８ける鐘も豊ｇな免疫
グロブリンである。それはまた組峨流体中にも見出され
、そしてそれは胎盤を横切ってその＠質から胎児の血液
循環を行なうことができる。それは生庫内ｇよび試験・
ｄ内に８いて抗１活注、抗ビールス活注Ｘよひ抗毒活注
をもつ。それ祉応答の２そい抗原である。
グロブリンである。それはまた組峨流体中にも見出され
、そしてそれは胎盤を横切ってその＠質から胎児の血液
循環を行なうことができる。それは生庫内ｇよび試験・
ｄ内に８いて抗１活注、抗ビールス活注Ｘよひ抗毒活注
をもつ。それ祉応答の２そい抗原である。
ＩｇＭは抗原決定要素μを規定するアミノ酸遵−を拍な
うムい鎖の所有によって特偵づけられる。ＩｇＭ慎噛の
顕著な特徴はその強い細胞分解χよび側体固ずの活性で
あシ、その活性はＩｇＧのそれを遥かに越える。ＩｇＭ
は通常、免疫鎌の勧＠８よひ人間にあられれる最初の抗
原である。それは次に工ｇＧによって徐々に置き笑えら
れる。
うムい鎖の所有によって特偵づけられる。ＩｇＭ慎噛の
顕著な特徴はその強い細胞分解χよび側体固ずの活性で
あシ、その活性はＩｇＧのそれを遥かに越える。ＩｇＭ
は通常、免疫鎌の勧＠８よひ人間にあられれる最初の抗
原である。それは次に工ｇＧによって徐々に置き笑えら
れる。
ＩｇＡは入間の血清中の第２の最も豊５な免疫グロブリ
ンでＴｏシ、そして王装な分泌免役グロブリンである。
ンでＴｏシ、そして王装な分泌免役グロブリンである。
それは抗菌性χよび呼吸ビールス防護において有用であ
る。
る。
Ｉ、Ｒは最も少ない免疫グロブリンである。それは皮膚
敏感性をもち、気ｇ支、胃腸、皮膚ｇよぴその池の種々
のアレルギー反応に応ｔｒＴる。
敏感性をもち、気ｇ支、胃腸、皮膚ｇよぴその池の種々
のアレルギー反応に応ｔｒＴる。
Ｉ、Ｄの＃遣８よび生切学ｃＦ］愼ばＣについてはごく
わづかなことしか知られていなし）。ＩｇＤＭ、体は目
家’ｆＪ症に、によひ牛乳敏感患者や本組織狼そう紅斑
患者に見出された。
わづかなことしか知られていなし）。ＩｇＤＭ、体は目
家’ｆＪ症に、によひ牛乳敏感患者や本組織狼そう紅斑
患者に見出された。
上記の免疫グロブリンの種類の分４法は周知である。免
疫グロブリンに対する抗原の増噛法も周知であり、そし
て免疫グロブリンを一体担淳に結合させる方法も周知で
ある。抗原の分備法、抗体を螢九分子、放射性分子また
は酵素で標識して結合抗体を測定する方法も周知である
。結合抗体を七の抗体に時異性のＭ（放射性、螢光、酵
素）抗体と反Ｃａさせるような、結合抗体の間接−ｊ定
法もある。
疫グロブリンに対する抗原の増噛法も周知であり、そし
て免疫グロブリンを一体担淳に結合させる方法も周知で
ある。抗原の分備法、抗体を螢九分子、放射性分子また
は酵素で標識して結合抗体を測定する方法も周知である
。結合抗体を七の抗体に時異性のＭ（放射性、螢光、酵
素）抗体と反Ｃａさせるような、結合抗体の間接−ｊ定
法もある。
ある特定４＄の免疫グロブリンに荷異注の抗原の決定は
付定の臨床的意義をもつ。米国特許＠４．ｏ２ｏ、ｔｓ
１号には血清中のＩｇＧ、ＩｇＡＸよびＩｇＭａＩＫの
免疫分析法が記載されてＳ見上の方法はｉ、！ｉｌｌ坏
担庫を試−試料とまず反応させて 、ＩｇＧ、Ｉ、ムχ
工ひニーをａ収させ、次いでＩ、Ｇ、Ｉ、Ａ８よびＩ、
Ｍに対する標識抗体と反応させてその結合抗体を測定す
ることから成る。完投グロブリンに褥異注の抗原も、測
定または検出子べき抗原に対Ｔる結合親和性をもつ免役
成分を用いる免疫孜術を利用して、測定することができ
る。このような技術によれは、測定子べき抗体に対する
結合親和性をもつ免疫成分を、固本担捧に結合させ、別
の時異性免疫成分を、たとえば螢尤注、発色性、放射性
の基または＃卓で襟、ｉｔする。
付定の臨床的意義をもつ。米国特許＠４．ｏ２ｏ、ｔｓ
１号には血清中のＩｇＧ、ＩｇＡＸよびＩｇＭａＩＫの
免疫分析法が記載されてＳ見上の方法はｉ、！ｉｌｌ坏
担庫を試−試料とまず反応させて 、ＩｇＧ、Ｉ、ムχ
工ひニーをａ収させ、次いでＩ、Ｇ、Ｉ、Ａ８よびＩ、
Ｍに対する標識抗体と反応させてその結合抗体を測定す
ることから成る。完投グロブリンに褥異注の抗原も、測
定または検出子べき抗原に対Ｔる結合親和性をもつ免役
成分を用いる免疫孜術を利用して、測定することができ
る。このような技術によれは、測定子べき抗体に対する
結合親和性をもつ免疫成分を、固本担捧に結合させ、別
の時異性免疫成分を、たとえば螢尤注、発色性、放射性
の基または＃卓で襟、ｉｔする。
然しながら、このような技術には、血清中に見出されつ
るリューマチ性因子が試料中に存在すると誤まった陽の
結果かえられるという欠点が同伴する。リューマチ性因
子（ＲＦ）は一般にＩｇＧ櫨の抗原に親和力をもつ。Ｒ
ＦＦｉＩｇＧ分子の貞い鎖の一定区域を介して粘合する
。たとえｔｆＩｇＭａｌの免疫グロブリンに＃異性のあ
るルベラ・ビールス檀の分析に２いて、リューマチ性因
子それ目体もＩｇＭｄｉの免疫グロプリンである。リュ
ーマチ性因子には通常ニー櫨の陸軍があるため、この因
子も抗１、麗免疫グロブリンによって結合され、それに
よって誤まった陽の結果が生じる。このようなりューマ
テ鮎子の妨害を避ける１つの方法は分析前に異なっ九櫨
の抗体の分−を必要とする。然しながら、異なった櫨の
免疫グロブリンの分備特に異なった樵の抗原特異性免疫
グロブリンの分−のための方法線一般に煩雑であ少時間
を非常に消費する。このような方法には、りａマドグラ
フ、嘔気泳動、寞よび！１ｆｌｆ［斜装置が包含される
。
るリューマチ性因子が試料中に存在すると誤まった陽の
結果かえられるという欠点が同伴する。リューマチ性因
子（ＲＦ）は一般にＩｇＧ櫨の抗原に親和力をもつ。Ｒ
ＦＦｉＩｇＧ分子の貞い鎖の一定区域を介して粘合する
。たとえｔｆＩｇＭａｌの免疫グロブリンに＃異性のあ
るルベラ・ビールス檀の分析に２いて、リューマチ性因
子それ目体もＩｇＭｄｉの免疫グロプリンである。リュ
ーマチ性因子には通常ニー櫨の陸軍があるため、この因
子も抗１、麗免疫グロブリンによって結合され、それに
よって誤まった陽の結果が生じる。このようなりューマ
テ鮎子の妨害を避ける１つの方法は分析前に異なっ九櫨
の抗体の分−を必要とする。然しながら、異なった櫨の
免疫グロブリンの分備特に異なった樵の抗原特異性免疫
グロブリンの分−のための方法線一般に煩雑であ少時間
を非常に消費する。このような方法には、りａマドグラ
フ、嘔気泳動、寞よび！１ｆｌｆ［斜装置が包含される
。
米国特許第４．２７１７５６号には否定の抗体Ｉ、Ｇ、
Ｉ、Ｍ、Ｉ８ム、Ｉ、ＩｇＸよぴＩ、Ｄの免疫分析法が
記載されてｚ９、この方＊ａ特定の免疫グロブリン櫨用
の抗体を被覆した固体担体をある４０ｆ定抗体を含む試
料と接触させてまず反応を行ない、次いでえられた一体
を標識抗原と反応させ、そして結合し九標繊抗原を測定
することから成る。
Ｉ、Ｍ、Ｉ８ム、Ｉ、ＩｇＸよぴＩ、Ｄの免疫分析法が
記載されてｚ９、この方＊ａ特定の免疫グロブリン櫨用
の抗体を被覆した固体担体をある４０ｆ定抗体を含む試
料と接触させてまず反応を行ない、次いでえられた一体
を標識抗原と反応させ、そして結合し九標繊抗原を測定
することから成る。
米国待ＩＦＦ弗４．２９２．４０５号にはＩｇＭ、 Ｉ
、ム、Ｉ、Ｉ） ｊｄよびＩ、Ｉｃ）種類の抗原特異性
免疫グロブリンを測定するための免疫分析法が記載され
てｘシ、この方法はその時定の抗原を異注兇疫グロブリ
ンをこの特定の抗原持異注免疫グロブリンに対Ｔる不溶
性抗体あるいはこの抗免疫グロブリンの断片を結合する
抗原と接触させ、次いで免疫グロブリンが特異の親和性
をもつ抗原で上記の混合偕を処理し、そして最後にこの
混合物を該抗原に対する抗体の断片を結合するＩＩａ抗
原で処理してからこの４ａ４片を測定する。仁の米国時
針はリューマチ性因子の妨害を避けることを示唆してい
る。
、ム、Ｉ、Ｉ） ｊｄよびＩ、Ｉｃ）種類の抗原特異性
免疫グロブリンを測定するための免疫分析法が記載され
てｘシ、この方法はその時定の抗原を異注兇疫グロブリ
ンをこの特定の抗原持異注免疫グロブリンに対Ｔる不溶
性抗体あるいはこの抗免疫グロブリンの断片を結合する
抗原と接触させ、次いで免疫グロブリンが特異の親和性
をもつ抗原で上記の混合偕を処理し、そして最後にこの
混合物を該抗原に対する抗体の断片を結合するＩＩａ抗
原で処理してからこの４ａ４片を測定する。仁の米国時
針はリューマチ性因子の妨害を避けることを示唆してい
る。
ＶｏｌｌｅｒらのＢｒ１ｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｔｈｏｌｏｇｙ
（１９７５）５６．５３８ ；Ｇｒａｖｅｌｌ らの
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｕｓ Ｄｉｓｅａｓ＠、 Ｖｏｌｌ ５６ 、Ｓｕｐｐ
ｌｅｍｅｎｔ（ｔ ９７７）５５００ ；ｊｄよび０１
ｅａｒｙらのＲｅ５ｅａｒｃｈ Ｏｏｍｍｕｎｉｃａｔ
ｉｏｎ １ｎＯｈ＠ｍ１ｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｅｏｌｏｇｙ、Ｖｏ１１９、醜
２（１９７８）２ＥＮ ；に扛ルベラ・ビールスに対す
る抗体を検出するためＯ＃素結合免疫分析法が紀戦され
ている。
ｏｆ ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＰａｔｈｏｌｏｇｙ
（１９７５）５６．５３８ ；Ｇｒａｖｅｌｌ らの
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｕｓ Ｄｉｓｅａｓ＠、 Ｖｏｌｌ ５６ 、Ｓｕｐｐ
ｌｅｍｅｎｔ（ｔ ９７７）５５００ ；ｊｄよび０１
ｅａｒｙらのＲｅ５ｅａｒｃｈ Ｏｏｍｍｕｎｉｃａｔ
ｉｏｎ １ｎＯｈ＠ｍ１ｃａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｅｏｌｏｇｙ、Ｖｏ１１９、醜
２（１９７８）２ＥＮ ；に扛ルベラ・ビールスに対す
る抗体を検出するためＯ＃素結合免疫分析法が紀戦され
ている。
本発明は試料中のＩｇＸ４（Ｘ鉱Ｍ、Ａ、Ｄ ｊｄよひ
Ｅから成る鮮からえらばれる）の免疫グロブリン抗体を
測定するための方法に関し、その略曳点はＩ、Ｇに特異
性のある且つ工、Ｇへのりューマテ注因子の一合を防ぐ
に十分な免疫試剤の有効量で試料を処理することから成
る。籍に本発明は試料中のＩ、Ｘ櫨（ＸはＭ１ム、Ｄｊ
ｄよびＥから成る群からえらばれる）の免疫グロブリン
抗体の測定法であって次の１根から成るものに関する。
Ｅから成る鮮からえらばれる）の免疫グロブリン抗体を
測定するための方法に関し、その略曳点はＩ、Ｇに特異
性のある且つ工、Ｇへのりューマテ注因子の一合を防ぐ
に十分な免疫試剤の有効量で試料を処理することから成
る。籍に本発明は試料中のＩ、Ｘ櫨（ＸはＭ１ム、Ｄｊ
ｄよびＥから成る群からえらばれる）の免疫グロブリン
抗体の測定法であって次の１根から成るものに関する。
（ｍ） 試料を有効量の抗ＩｇＧで処理し、ｔｂ）
このＩ、Ｘ抗体が特異性を示す抗原をｌｉ！ｉ１体担
体に被覆して成る櫨ｗＡ％異注抗体試剤を上記の処理し
た試料と接触させて固体５１不上に抗原−ＩｇＸｉＪ体
を形成させ、（ｅ） 未結合の試料を除き、 （ｄ） この抗原−ｒｇｘ＠４を抗ＩｇＸで処理し、
そして（・） 試料中のＩｇＸの尺度として抗原−Ｉ、
Ｘ錯体に結合した抗Ｉ、Ｘを測定する。
このＩ、Ｘ抗体が特異性を示す抗原をｌｉ！ｉ１体担
体に被覆して成る櫨ｗＡ％異注抗体試剤を上記の処理し
た試料と接触させて固体５１不上に抗原−ＩｇＸｉＪ体
を形成させ、（ｅ） 未結合の試料を除き、 （ｄ） この抗原−ｒｇｘ＠４を抗ＩｇＸで処理し、
そして（・） 試料中のＩｇＸの尺度として抗原−Ｉ、
Ｘ錯体に結合した抗Ｉ、Ｘを測定する。
ここで使用する°免疫試剤”なる用語社抗原待に、Ｉ、
０種の免疫グロブリンが特異性を示しリューマチ性因子
のＩ、Ｇへの結合を防ぐに十分な仕方でＩｇＧを錯体化
する抗原をいう。本発明の方法に８いて免疫試剤として
抗Ｉ、Ｇを使用するのが最も好ましい。また、ＩｇＸの
免疫分析を行なう藺に、関心のめる免疫グロブリン抗体
Ｉ、Ｘを含む試料を処理するのが好ましい。ｒｇｘ ｏ
種々の型の免疫分析が本発明の改良法の範囲内で使用し
つるが、免疫グロブリン抗体Ｉ、Ｘが特−異性を示す抗
原を便用して抗原−Ｉ、Ｘ錯゛体を形成させる免疫分析
法を使用するのが好ましい。このようにして形成させ九
抗原１．Ｘ一体を次いで、たとえば免疫沈殿、サンドイ
ッテまたは競合分析の技術を使用して、測定すること力
勘きる。
０種の免疫グロブリンが特異性を示しリューマチ性因子
のＩ、Ｇへの結合を防ぐに十分な仕方でＩｇＧを錯体化
する抗原をいう。本発明の方法に８いて免疫試剤として
抗Ｉ、Ｇを使用するのが最も好ましい。また、ＩｇＸの
免疫分析を行なう藺に、関心のめる免疫グロブリン抗体
Ｉ、Ｘを含む試料を処理するのが好ましい。ｒｇｘ ｏ
種々の型の免疫分析が本発明の改良法の範囲内で使用し
つるが、免疫グロブリン抗体Ｉ、Ｘが特−異性を示す抗
原を便用して抗原−Ｉ、Ｘ錯゛体を形成させる免疫分析
法を使用するのが好ましい。このようにして形成させ九
抗原１．Ｘ一体を次いで、たとえば免疫沈殿、サンドイ
ッテまたは競合分析の技術を使用して、測定すること力
勘きる。
廊疫試剤は抗Ｉ、Ｘ１ｉｉ体を形匡させるのに使用する
抗原の面に、後に、あるいはこれと同時に使用しつるけ
れども、試料を抗原で処理する前に免疫試剤を使用する
のが好ましい。
抗原の面に、後に、あるいはこれと同時に使用しつるけ
れども、試料を抗原で処理する前に免疫試剤を使用する
のが好ましい。
ここに使用する°抗原”なる用語は、入閣またはその他
の生１に免疫を一起しうる生豐字的に活性な分子をいう
。このような抗原の例としてたとえは血清蛋白、岨鐵蛋
白、抗体、ビールス蛋白、バクテリア・リポポリサッカ
ライドなどがあげられる。
の生１に免疫を一起しうる生豐字的に活性な分子をいう
。このような抗原の例としてたとえは血清蛋白、岨鐵蛋
白、抗体、ビールス蛋白、バクテリア・リポポリサッカ
ライドなどがあげられる。
本発明の好ましい具体例によれば、Ｉ、Ｘ樵の免疫グロ
ブリン抗体を富む試料を緩衝液中の有効量の抗Ｉ、Ｇで
処理する。ンられた混合豐を十分な時間培養して試料中
のＩｇＧ檀の免疫グロブリンの実質的に丁べてを抗−Ｉ
ｇＧと錯体化させる。培養期間の後に、処理試料を、関
心のあるＩｇＸ抗体に特異性のある抗原を１本担体に被
覆して成る橿訓持異注抗体試剤、と接触させる。えられ
た混合切を十分な時間培養してｔ５不担不上に抗原−Ｉ
ｇＸ錯体を形成させる。固体担体上の抗原−ＩｇＸＩＭ
坏を水洗して未結合試料を除き、次いで尻重ｇＸで処理
する。えられた混合物を次いで十分な時間培養して固体
担体上に抗原−ＩｇＸ−尻重ｇＸ錯体を生成させる。
ブリン抗体を富む試料を緩衝液中の有効量の抗Ｉ、Ｇで
処理する。ンられた混合豐を十分な時間培養して試料中
のＩｇＧ檀の免疫グロブリンの実質的に丁べてを抗−Ｉ
ｇＧと錯体化させる。培養期間の後に、処理試料を、関
心のあるＩｇＸ抗体に特異性のある抗原を１本担体に被
覆して成る橿訓持異注抗体試剤、と接触させる。えられ
た混合切を十分な時間培養してｔ５不担不上に抗原−Ｉ
ｇＸ錯体を形成させる。固体担体上の抗原−ＩｇＸＩＭ
坏を水洗して未結合試料を除き、次いで尻重ｇＸで処理
する。えられた混合物を次いで十分な時間培養して固体
担体上に抗原−ＩｇＸ−尻重ｇＸ錯体を生成させる。
固体担体上に被覆した抗原−ＩｇＸ−抗ＩｇＸ錯体を水
洗してから、試料中の特定ＩｇＸの尺度として抗原−Ｉ
ｇＸ錯体に結合した抗ＩｇＸを測定する。
洗してから、試料中の特定ＩｇＸの尺度として抗原−Ｉ
ｇＸ錯体に結合した抗ＩｇＸを測定する。
本発明によれは、本発明の方法によって測定しうるＩ、
Ｘ橿の免疫グロブリンはＩｇＭ、ＩｇＡ、Ｉｇｌｘよび
ＩｇＤを包含する。
Ｘ橿の免疫グロブリンはＩｇＭ、ＩｇＡ、Ｉｇｌｘよび
ＩｇＤを包含する。
固体担体とは抗原に対して吸収性のある不溶注東合体備
質をいう。この檀の周知＃貞にはポリスチレン、ポリエ
チレン、ボリブ自ピレン、ポリスチレン、ブチルゴム８
よひその他の合成ゴム類などの炭化水素ポリマーが包含
される。他の好適な有機ポリマーとしては、シラン系ゴ
ム、ポリエステル、ポリアミ 、セルロース、セルロー
ス誘導体、アクリレート、メタクリレート、塩化ビニル
のようなビニルポリマー８よひポリ塩化ビニルがあげら
れる。ポリスチレンのグラフトコポリマーのようなコポ
リマー類も有用である。上記物貞の他に、固体透体の表
面はシリカゲル、シリコンウェアアース、ガラス不溶蛋
白メタルから成ることができ、また固本也体はビーズ、
チューブ、ストリップ、ディスク、マイクロテトレ−ジ
ョンプレートなどの形体でありうる。
質をいう。この檀の周知＃貞にはポリスチレン、ポリエ
チレン、ボリブ自ピレン、ポリスチレン、ブチルゴム８
よひその他の合成ゴム類などの炭化水素ポリマーが包含
される。他の好適な有機ポリマーとしては、シラン系ゴ
ム、ポリエステル、ポリアミ 、セルロース、セルロー
ス誘導体、アクリレート、メタクリレート、塩化ビニル
のようなビニルポリマー８よひポリ塩化ビニルがあげら
れる。ポリスチレンのグラフトコポリマーのようなコポ
リマー類も有用である。上記物貞の他に、固体透体の表
面はシリカゲル、シリコンウェアアース、ガラス不溶蛋
白メタルから成ることができ、また固本也体はビーズ、
チューブ、ストリップ、ディスク、マイクロテトレ−ジ
ョンプレートなどの形体でありうる。
櫨ｌＨＪ％注抗体試剤に使用する抗原は檎類特異注抗体
Ｉ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｉ、ム、Ｉ、ＤｇよびＩ、ｌを結合し
つるものであシ、人間またはその他のＩｍ＠から得るこ
とができる。抗原を増燻させるために組繊培養技術を使
用することができる。抗原紘ｍ体担体上に、好ましくは
ポリスチレンビーズ上に、破−する。抗原り櫨々のｆｆ
１ｙ＃ｉを使用して固体担体上に被覆することができる
。操作を存易にするために、［種子べき固体担体を抗原
含有溶液中にある期間式れてＳき次いで固体担体を水洗
８よび外転することによって、固体担体上に抗原を被覆
するのが好ましい。
Ｉ、Ｇ、Ｉ、Ｍ、Ｉ、ム、Ｉ、ＤｇよびＩ、ｌを結合し
つるものであシ、人間またはその他のＩｍ＠から得るこ
とができる。抗原を増燻させるために組繊培養技術を使
用することができる。抗原紘ｍ体担体上に、好ましくは
ポリスチレンビーズ上に、破−する。抗原り櫨々のｆｆ
１ｙ＃ｉを使用して固体担体上に被覆することができる
。操作を存易にするために、［種子べき固体担体を抗原
含有溶液中にある期間式れてＳき次いで固体担体を水洗
８よび外転することによって、固体担体上に抗原を被覆
するのが好ましい。
”抗Ｉ、Ｇ−なる用語は人聞のＩｇＧに４異注があシ且
つウサギ、山羊、馬、羊、ギニア豚などの人間以外の！
１Ｉｌｆ中で増大される抗体をいう。有効量の抗ＩｇＧ
を試料に添加すると、試料中に存在するＩｇＧ免疫グロ
ブリンがこれに結合する。
つウサギ、山羊、馬、羊、ギニア豚などの人間以外の！
１Ｉｌｆ中で増大される抗体をいう。有効量の抗ＩｇＧ
を試料に添加すると、試料中に存在するＩｇＧ免疫グロ
ブリンがこれに結合する。
４類特異注の抗体試剤ａ体を試料に接触させる前に抗Ｉ
、ＧによるＩｇＧの結合を行なうと、ＩｇＧ上の９ユ一
マテ注因子結合の場所はこれによってリューマチ注因子
がＩ、Ｇに結合するのを妨げる。それ故、試料中のＩｇ
Ｍ、Ｉｇム、Ｉ、Ｄ ′ｔたはＩ、ｌ免疫グロブリンの
み、表らびにＩｇＧ−抗Ｉ、Ｇ錯体のみが固体担体上の
抗原に＃！ｉ合する。処理し九試料ｇよび橿１ｌｌｉ特
異性抗体試剤を培養し、次いで水洗して試験試料中の未
結合免疫グロブリン類を除く。このようにして、感染の
ため血清中に存在するものを包きする且つ感染剤に対す
る抗体を含む免疫グロブリンＩ、ＸＶｉ抗原−Ｉ、Ｘ錯
体を形成して固体担体に付層する。また、あらかじめ乍
ったＩｇＧ−尻重ｇＧ錯体は抗原−Ｉ、Ｇ−抗Ｉ、Ｇ錯
体を形成して固体担体にＩｔ４してもよい。
、ＧによるＩｇＧの結合を行なうと、ＩｇＧ上の９ユ一
マテ注因子結合の場所はこれによってリューマチ注因子
がＩ、Ｇに結合するのを妨げる。それ故、試料中のＩｇ
Ｍ、Ｉｇム、Ｉ、Ｄ ′ｔたはＩ、ｌ免疫グロブリンの
み、表らびにＩｇＧ−抗Ｉ、Ｇ錯体のみが固体担体上の
抗原に＃！ｉ合する。処理し九試料ｇよび橿１ｌｌｉ特
異性抗体試剤を培養し、次いで水洗して試験試料中の未
結合免疫グロブリン類を除く。このようにして、感染の
ため血清中に存在するものを包きする且つ感染剤に対す
る抗体を含む免疫グロブリンＩ、ＸＶｉ抗原−Ｉ、Ｘ錯
体を形成して固体担体に付層する。また、あらかじめ乍
ったＩｇＧ−尻重ｇＧ錯体は抗原−Ｉ、Ｇ−抗Ｉ、Ｇ錯
体を形成して固体担体にＩｔ４してもよい。
抗原−Ｉ、Ｘ錯体はｎ矧の抗ＩｇＸと反応させて固体担
体上に抗原−Ｉ、Ｘ−抗ＩｇＸｆｌｉｌｌを形成させる
。抗原−ＩｇＸ ４体に結合した抗ＩＸを試料中の−Ｉ
ｇＸの尺度として測定する。
体上に抗原−Ｉ、Ｘ−抗ＩｇＸｆｌｉｌｌを形成させる
。抗原−ＩｇＸ ４体に結合した抗ＩＸを試料中の−Ｉ
ｇＸの尺度として測定する。
抗Ｉ、Ｘは通常の螢光染色、酵素また放射性の標識によ
って直接にＩｊｓ＃シて結合量の−ｊ定をすることがで
き、あるいはまた抗Ｉ、Ｘｔｉ史なる反応たとえば抗Ｉ
、ＸＫ特異注を示す抗体との反応の後に通常の方法で螢
光染料、＃素、または放射性の１１４で標識することに
よって、間接に４１截することができる。ば用するｆｙ
ｒ、ＩｇＸＩｄ一般に、測定子べきＩ、Ｘに特異注のＩ
、Ｇ免役グロブリンであシ、人間以外の＃寄中で増燻さ
せつる。
って直接にＩｊｓ＃シて結合量の−ｊ定をすることがで
き、あるいはまた抗Ｉ、Ｘｔｉ史なる反応たとえば抗Ｉ
、ＸＫ特異注を示す抗体との反応の後に通常の方法で螢
光染料、＃素、または放射性の１１４で標識することに
よって、間接に４１截することができる。ば用するｆｙ
ｒ、ＩｇＸＩｄ一般に、測定子べきＩ、Ｘに特異注のＩ
、Ｇ免役グロブリンであシ、人間以外の＃寄中で増燻さ
せつる。
抗ＩｇＸの直接酵素標識を吏用するのが好ましい。酵素
の例としてはカタラーゼ、パーオキシダーゼ、フレアー
ゼ、グルコースオキシダーゼ、ホスファターゼなどがあ
げられる。
の例としてはカタラーゼ、パーオキシダーゼ、フレアー
ゼ、グルコースオキシダーゼ、ホスファターゼなどがあ
げられる。
抗Ｉ、Ｘの直接標識を便うとき、抗原−ＩｇＸ−抗Ｉ、
Ｘ” 一体（抗ＩｇＸ”は標鐵抗Ｉ、Ｘを表わＴ）の
形成後に、酵素基質を反応混合蜀の液相Ｓよび（または
）固相に加え、そして酵素測定を通常の技術たとえに比
色分析、螢光分析または分光分析によシ測定して結合し
たａ織抗ＩｇＸを＃ｊ定する。間接ｌＩ識の場合には、
すなわち抗ＩｇＸが未標識であるときは、抗原−ｔｘ−
抗、ＩｇＸ錯体を洗浄して未結合の抗ＩｇＸを除き、次
いで尻重ｇＸに対するＩ！城抗体と反応させ、その−に
結合し九４４抗俸を測定する。また、本発明はりューマ
を注因子を言む試料中のＩｇＧを測定する方法をも提供
する。上述の方法に８いて固俸徂体上に形成させた抗原
−Ｉ、Ｇ−抗Ｉ、Ｇ錯俸は次いで抗原−ＩｇＧ−抗Ｉｇ
Ｇ錯体上に結合、している抗Ｉ、ＧＫ特異注を示す標識
抗Ｉ、Ｇ”と反応させることができ、そして結合し九＊
ａ抗１ｇＧ”は次いで試料中に存在する！１Ｇの尺度と
して測定することができる。
Ｘ” 一体（抗ＩｇＸ”は標鐵抗Ｉ、Ｘを表わＴ）の
形成後に、酵素基質を反応混合蜀の液相Ｓよび（または
）固相に加え、そして酵素測定を通常の技術たとえに比
色分析、螢光分析または分光分析によシ測定して結合し
たａ織抗ＩｇＸを＃ｊ定する。間接ｌＩ識の場合には、
すなわち抗ＩｇＸが未標識であるときは、抗原−ｔｘ−
抗、ＩｇＸ錯体を洗浄して未結合の抗ＩｇＸを除き、次
いで尻重ｇＸに対するＩ！城抗体と反応させ、その−に
結合し九４４抗俸を測定する。また、本発明はりューマ
を注因子を言む試料中のＩｇＧを測定する方法をも提供
する。上述の方法に８いて固俸徂体上に形成させた抗原
−Ｉ、Ｇ−抗Ｉ、Ｇ錯俸は次いで抗原−ＩｇＧ−抗Ｉｇ
Ｇ錯体上に結合、している抗Ｉ、ＧＫ特異注を示す標識
抗Ｉ、Ｇ”と反応させることができ、そして結合し九＊
ａ抗１ｇＧ”は次いで試料中に存在する！１Ｇの尺度と
して測定することができる。
ここＫｍ用する１抗Ｉ、Ｇの有効量”なる用語は、分析
すべき試料中のＩ、Ｇの丁べてを結合し、それによって
ＩｇＧｊｄよびＲ′１１の結合を防ぐに足る抗ＩｇＧの
量をいう。
すべき試料中のＩ、Ｇの丁べてを結合し、それによって
ＩｇＧｊｄよびＲ′１１の結合を防ぐに足る抗ＩｇＧの
量をいう。
次の実施例は本発明を説明Ｔるものであって、本発明の
檀神８よび範囲を限定しようとするものではない。
檀神８よび範囲を限定しようとするものではない。
実施ｔ＃１１
ルベラ・ビールス抗原被覆ビーズの製造ルベラ・ビール
ス、ギルテレスト１株を栄養培質中の１１ＨＫ２１０１
ｏｎｅ １３セル中で製造した。このぐ−ルス抗原を媒
質の超遠心分離によって単離した。この懸濁液をｐＨａ
、６のα１Ｍトリスを用いて１：５０に希釈し友。この
希釈溶液を使用して室温で一夜かけて６園のポリスチレ
ンビーズを被覆し、そして各セットのビーズを洗浄オよ
び風乾し丸。
ス、ギルテレスト１株を栄養培質中の１１ＨＫ２１０１
ｏｎｅ １３セル中で製造した。このぐ−ルス抗原を媒
質の超遠心分離によって単離した。この懸濁液をｐＨａ
、６のα１Ｍトリスを用いて１：５０に希釈し友。この
希釈溶液を使用して室温で一夜かけて６園のポリスチレ
ンビーズを被覆し、そして各セットのビーズを洗浄オよ
び風乾し丸。
ルベラビールスに対するＩｇＭ抗体の測定ｔ 血清試料
ならびに＠注、高陽ａおよび３樵の低陽性の対照標準を
、α１Ｍのトリス、１５Ｍの塩化力トリウム、α０１％
のトクイーン２０′Ｍよび１■／−の牛の血清アルブミ
ンを含む溶液中にｐＨ７，６で１：２１に希釈した。
ならびに＠注、高陽ａおよび３樵の低陽性の対照標準を
、α１Ｍのトリス、１５Ｍの塩化力トリウム、α０１％
のトクイーン２０′Ｍよび１■／−の牛の血清アルブミ
ンを含む溶液中にｐＨ７，６で１：２１に希釈した。
２、２０μノの分別量の希釈試料ｇよびそれぞれの希釈
対照標準を反応トレイの遍切な区画に加えた。
対照標準を反応トレイの遍切な区画に加えた。
五 対照標準の希釈試料を含むそれぞれの区画に、ｔ５
≦の山羊の抗ヒトＩｇＧ、５＆５％の仔牛血清、α０１
％のトクイーン２０および４４９％の混合智（１１Ｍの
トリス８よびα５ＭＯ塩化力トリクムから成シ、最終ｐ
Ｈ７，６に綱壷し九もの）を含む１合液２００μノを加
えた。
≦の山羊の抗ヒトＩｇＧ、５＆５％の仔牛血清、α０１
％のトクイーン２０および４４９％の混合智（１１Ｍの
トリス８よびα５ＭＯ塩化力トリクムから成シ、最終ｐ
Ｈ７，６に綱壷し九もの）を含む１合液２００μノを加
えた。
４ 反応トレイをふたをして４５℃で６０分間培養した
。
。
＆ 培養期間の後に、ルベラ・ビールスで被覆したビー
ズを、試料または対照＊＊を含むそれぞれの区画に加え
、反応トレイを再びふたをして４５℃で９０分間培養し
た。
ズを、試料または対照＊＊を含むそれぞれの区画に加え
、反応トレイを再びふたをして４５℃で９０分間培養し
た。
瓜 このｉ！＄２の培養後に、未結合の試料または対照
標準を各区画から除き、ビーズを水で２回洗浄した。
標準を各区画から除き、ビーズを水で２回洗浄した。
ｌ 洗浄したビーズを富む区画に、ホルセラデイツシュ
パーオキシダ−４（＠素）に共有結合した山羊の抗ヒト
ＩｇＭの１０５〜３μ９７ｄ、α１Ｍのトリスｇよびα
゛１５Ｍの塩化ナトリクム中の１０％血清を含むＳ液２
００μノを加えた。
パーオキシダ−４（＠素）に共有結合した山羊の抗ヒト
ＩｇＭの１０５〜３μ９７ｄ、α１Ｍのトリスｇよびα
゛１５Ｍの塩化ナトリクム中の１０％血清を含むＳ液２
００μノを加えた。
＆ 反応トレイをふたをして４５℃で９０分間培養した
。
。
θ この培養後、未結合の山羊の抗ヒトＩｇＭ−ホルセ
ラデイツシュバーオキシダーゼを除き、このビーズを５
艷の水で２１洗浄した。
ラデイツシュバーオキシダーゼを除き、このビーズを５
艷の水で２１洗浄した。
１α 試料２よび対照標準を始めに含んでい九区−から
のビーズを分析管に移し、次いでこれに約２７１１９０
０−フェレンジアミン・２ｋｌＣ１をクエン酸塩−リン
酸塩緩嚢液（ｐＨＳ、５）Ｓ−中に含む耕しく調製した
基質溶液３００μノを加えた。次いでこの分析管を室温
で３０分間培養し九１ｔ この培１１Ｉ後に、２−の１
Ｎ塩酸をそれぞれの分析管に加え、えられた試料溶液に
よび対ｌｔＡ標準溶液の吸収値を分光分析器中で４９２
鴎にｇいて読んだ。
のビーズを分析管に移し、次いでこれに約２７１１９０
０−フェレンジアミン・２ｋｌＣ１をクエン酸塩−リン
酸塩緩嚢液（ｐＨＳ、５）Ｓ−中に含む耕しく調製した
基質溶液３００μノを加えた。次いでこの分析管を室温
で３０分間培養し九１ｔ この培１１Ｉ後に、２−の１
Ｎ塩酸をそれぞれの分析管に加え、えられた試料溶液に
よび対ｌｔＡ標準溶液の吸収値を分光分析器中で４９２
鴎にｇいて読んだ。
１２、５種の低水準の対照標準の平均値よシも１０９倍
大きいか父はα９１倍小さい試料吸収値をそれぞれ陽性
ｇよび陰性の結果の限界値としてとった。３４の低水準
の対照照準の平均値の１０９倍とα９１倍との間の吸収
値はルベラ感染と思われるが、それは［認していない。
大きいか父はα９１倍小さい試料吸収値をそれぞれ陽性
ｇよび陰性の結果の限界値としてとった。３４の低水準
の対照照準の平均値の１０９倍とα９１倍との間の吸収
値はルベラ感染と思われるが、それは［認していない。
実施例１に記載した分析の感度は使用する低いＩＩ注の
対照標準の水準によって測定される。上記に８いて、Ｐ
ａ１ｍ＠ｒ。
対照標準の水準によって測定される。上記に８いて、Ｐ
ａ１ｍ＠ｒ。
Ｄ、Ｆ、らのＲｕｂ＠ｌｌａ Ｈｅｍａｇｇｌｕｔｉｎ
ａｔｉｏｎ−ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＴ＠ｓｔｓ、 Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ ８ｅｒｉｅｓ、 Ｎ１２ （ｒｅｖ
ｉｓｅｄ）Ｏｓｎｔ＊ｒ Ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｃｏｎｔｒｏｌ、Ａｌｔａｎｔａ。
ａｔｉｏｎ−ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＴ＠ｓｔｓ、 Ｉｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ ８ｅｒｉｅｓ、 Ｎ１２ （ｒｅｖ
ｉｓｅｄ）Ｏｓｎｔ＊ｒ Ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ
Ｃｏｎｔｒｏｌ、Ａｌｔａｎｔａ。
１９７７に記載のへマグルチン化抑制サクａ−ス＠イ頑
糾試験法に述べられている感度限界値と一致するＩｇＭ
Ｃ）値をもつ低い陽性対ｐｉＡ＃Ａ準を使用した。
糾試験法に述べられている感度限界値と一致するＩｇＭ
Ｃ）値をもつ低い陽性対ｐｉＡ＃Ａ準を使用した。
実施例２
ルベラ以外のビールス感染をうけている患者から、ｇよ
び背ずい炎患者から、えた櫨々の試料、ならびに抗−被
抗体および（ｔたは）リューマチ注因子に対して陽性の
試料を、本発明の方法に従って分析した。ビールス感染
、背すい炎、抗−被抗体またはリューマチ注因子による
娯まった陽性結果は暉められなかった。
び背ずい炎患者から、えた櫨々の試料、ならびに抗−被
抗体および（ｔたは）リューマチ注因子に対して陽性の
試料を、本発明の方法に従って分析した。ビールス感染
、背すい炎、抗−被抗体またはリューマチ注因子による
娯まった陽性結果は暉められなかった。
上述の方法から注目されるように、本発明の方法はりュ
ーマデ昧因子を含む試料中の４蘭脅Ａ注免疫グロブリン
類を測定するための免疫分析を提供する。本発明は更に
、６１＠秀異注抗体試刑への免疫グロブリンの結合の面
に、試料からの樵々の免疫グロブリンの分子ｉ＆またｌ
ｄリューマチ注因子の除去を必要としない、リューマチ
注因子含有試料中の種類特異注免疫グロブリン類を測定
するための免疫分析法を提供する。
ーマデ昧因子を含む試料中の４蘭脅Ａ注免疫グロブリン
類を測定するための免疫分析を提供する。本発明は更に
、６１＠秀異注抗体試刑への免疫グロブリンの結合の面
に、試料からの樵々の免疫グロブリンの分子ｉ＆またｌ
ｄリューマチ注因子の除去を必要としない、リューマチ
注因子含有試料中の種類特異注免疫グロブリン類を測定
するための免疫分析法を提供する。
本発明を特定の具体例に関して述べたが、その詳細は限
定条件と解釈すべきではない。種々の均等法、変化ｇよ
び変性が本発明の精神Ｓよび範囲から逸脱するξとなし
に実施しうろことが明らかであり、このような均等の具
体例も本発明に包含されるものと解釈されるからである
。
定条件と解釈すべきではない。種々の均等法、変化ｇよ
び変性が本発明の精神Ｓよび範囲から逸脱するξとなし
に実施しうろことが明らかであり、このような均等の具
体例も本発明に包含されるものと解釈されるからである
。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 試料中のＩＸ橿（ＸはＭＳＡ、ＤＸよびＥから成る
群からえもはれる）の免疫グロブリン抗体の測定法であ
って、偵）試料を抗ＩｇＧの有効量で処理し、（ｂ）
この免疫グロブリン抗体ＩｇＸが特異性を示す抗原を
固体担体に被覆して成る種類特異性抗体試剤を上記の処
理した試料と接触させて固不担体上に抗原−■、Ｘ錯体
を形成させ、 （ｃ） 未結合の試料を除き、 ｆｄ） この抗原−Ｉ Ｘ４本を抗ＩｇＸで処理し
、そして（ｅ）試料中のＩＸの尺度として抗原−Ｉ、Ｘ
錯体に結合した抗Ｉｇｘｆｉ：６１１１定丁ル、 ことを特徴とする方法。 ２、工程ｔａ）の抗ＩｇＧの量が試料中のＩｇＧの量よ
りも免疫化学的に多い時、ｆｆ祠求の１１１ｇ囲第１項
記載の方法。 ６、抗工ｇＸが酵素で標識されている時計請求の範囲第
２項記載の方法。 ４、抗原−ＩＸＸ錯体結合した標織抗■ｇｘを測定する
薊に、未結合の標ａ￥５Ｔｊ：ｇＸを砿く特許請求の範
囲第３項記戦の方法。 ５、 ＩｇＸがルベラ・ビールスに対するＩｇＭ抗体
である待！ｆＦ１１１！求の範囲第１項〜弔４項のいづ
れかに記載の方法。 ＆ 工５ｅｃｔを未結合試料のアスビレーション吸引ｇ
よび固体担体の水洗によって行なう＃ｆｆ請求の範囲第
１項記載の方法。 ７、 Ｋｆ＋＋ｏｒｇｘ ＋＊（ｘはＭ、Ａ、Ｄｇ
よぴＢから成る群からえらばれる）の免疫グロブリン抗
体の測定法であって、慣）試料を抗ＩｇＧの有効量で処
理し、（ｂ） この免疫グロブリン抗体ＩｇＸが特異
性を示す抗原を固体担体に被覆して成る１類特異注抗坏
試剤を上記の処理した試料と接触させて固体担不上に抗
原−ＩｇＸ錯俸を形成させ、 （ｅ） 未結合試料を除き、 （ｄ） この抗原−ＩｇＸ錯体を１＠識抗Ｉ、Ｘで処
理し、（・）未結合の標鐵抗ＩｇＸを除き、そして（ｆ
） 試料中のＩｇＸの尺度として抗原−ＩｇＸ錯体に
結合した標鐵抗ＩｇＸを測定する、 ことを！像とする方法。 ＆ 標繊抗ＩｇＸが＃素で標識されている特許請求の範
囲第７項記載の方法。 ９、 Ｉ、Ｘがルベラ・ビールスに対する■−抗体で
ある特［Ｆｌ−請求の範囲第８項記載の方法。 １ａ 工程（Ｃ）′Ｊ６よひｔａｔを未結合試料８よび
標繊抗Ｉ、Ｘのそれぞれのアスビレーション吸引ｇよひ
固体担体の洗浄によって行なう時ｆｆ請求の範囲第７項
記載の方法。 １１ 試料中のＩｇＸ撞（ＸはＭ、Ａ、ＤＸよび肪ら成
る群からえらばれる）の免疫グロブリン抗体の測定法で
あって、 ｔａｒ 試料を技工ｇＧの有効量で処理し、（ｂ）
この免疫グロブリン抗体工ｇｘが特異性を示す抗原を
１本担体に被覆して成る檀類特異注抗体試剤を上記の処
理した試料と接触させて一体担本上に抗原−Ｉ、Ｘ６１
体を形成させ、 （ｅ） 未結合試料を除き、 ｌｄ） この抗原−工ｇＸ錯体を抗ＩｇＸで処理し、
（＠）未結合の抗ＩｇＸを除き、 ｉｆ） 抗原−ＩｇＸ−技工ｇｘを抗ＩｇＸに対する
４處抗俸で処理し、 瞳） 抗Ｉ、Ｘに未結合の標識抗体を除き、そして偽）
試料中ＯＩ Ｘの尺度として抗原−ＩｇＸ−抗Ｉ、Ｘ
錯体に結合した！ＩＡ織抗体を測定する、ことを待機と
する方法。 １２、工程（１）の抗ＩＧの倉が＃ｊ：、科中のＩ、Ｇ
の量よシも免疫化学的に多い！１ｆｆｄ求の範囲第１１
項記載の方法。 １五 抗ＩｇＸに対する標識抗体が酵素で標識されてい
る特ｌ１ｆｔＩＩ求の範囲第１１項記載の方法。 １４、ＩＸがルベラ・ビールスに対するＩ、Ｍ抗体であ
る特許請求の範囲ｌ８１５項記載の方法。 １＆ 工程ｔｅ）、（ｅ）および（ｇ）を未結合試料、
未結合の標識抗ＩＸ、Ｍよび抗ＸｇＸＫ対する未結合の
ｇ＊抗体のそれぞれの７スピレ一シヨン吸引ｇよひ固体
担体の洗浄によって行なう肴＃ＩｌＩ求の範囲８１１項
記載の方法。 １＆ 試料中のＩＧ橿の免疫グロブリン抗体の測定法で
おって、 ｔａ）試料を抗Ｉ、Ｇの有効量で処理し、（ｂｌ こ
の免疫グロブリン抗体ＩｇＧが藷異注を示す抗原を固体
用体に被覆して成るｄｉ類特異注抗体に剤を上記の処理
しｆｃ試柵と接触させて固俸担−上に抗原−Ｉ、Ｇ・抗
Ｉ、Ｇ錯体を形成させ、 （ｅ） 未結合試料を除き、 （ｄ） この抗原−■ｇＧ−抗Ｉ、Ｇ錯体を抗ＩｇＧ
に対する抗体で処理し、そして試料中のＩｇＧの尺度と
して抗原−ＩＧ−抗−ＩＧ錯体に結合した抗ＩｇＧに対
する抗体をｇ ｇ 測定する、 ことを特徴とする方法。 １Ｚ 工程＋ａ）の技工ｇＧの量が試料中のＩ、Ｇの量
よシも免疫化学的に多い籍杼ｄ求の範囲第１６項記載の
方法。 １＆ 抗Ｉ、Ｇに対する抗体が＃木でＩＩＫ繊されてい
る時計請求の範囲第１６項記載の方法。 １９ 工程ｆｅ、ｌを未結合試料のアスビレーション吸
引Ｓよび固体担体ビーズの洗浄によって行なう時計請求
の範囲第１６項記載の方法。 ２α 試料中の抗ＩヨＧへの結合抗体の量を測定する前
に、工Ｓ（＠）のＩ、Ｇへの未結合標識抗体を除く籍ｆ
Ｆ請求の範囲第１８項紀戦の方法。 ２１ Ｉ、Ｇへの未結合標處抗棒を固体担体のアスビ
レーション吸引ｇよび洗浄によって除く時計請求の範囲
′ｌＩ＆２０項記戦の方記数 ２２ 試料中の工、Ｘ檜（ＸはＭＳＡ、ＤχよびＥから
成る群からえらばれる）の免疫グロブリン抗体を測定−
ｒるための改良分析法であって、その改良点がＩｇＧに
特異性の且っＩ、Ｇへの９ユーマテ注因子の結合を防ぐ
に十分な免疫試剤の有効量で試料を処理することから成
ることを替像とする方法。 ２五 免疫試剤が抗■ｇＧである４ｉｆｆ−請求の範囲
第２２項記載の方法。 ２４、次の工程から成る岳、ｆＦ請求の範囲第２２項記
数の方法。 （ａ） 試量を有効量の免疫試剤、ｇよびＩｇＸ抗体
が特異性を示す抗原、で＋６理して抗原−ＩｇＸ錯坏を
形成させ、そして （ｂ） 生成した抗原−ＩｇＸｍ体を測定する。 ２５、生成した抗原−ＩｇＸ、ｉｉｉ体を免疫沈殿、チ
ンドイツｆま九は満会分析のＩ′！ｉ膚を使用して測定
する特許請求の範囲第２４項記載の方法。 ２６ 免疫試剤が抗Ｉ、−Ｇ″′Ｃめる時計請求の範囲
第２５項記載の方法。 ２７、 １根ｉａＪが（り試料を有効量の免疫試剤で処
理し、次いで（２）処理した試料をＩ、Ｘか特異性を示
す抗原と接触させる、ことから成る時計請求の範囲４２
６項記載の方法。 ２・＆ Ｉ、Ｘが特異性を示す抗原を固体担体に被榎
する符ＩＩ！Ｆ−求の範囲第２７項記載の方法。 ２９ 抗原−１□Ｘ一体を次の工程によって測定する特
許請求の範囲第２８項記数の方法。 （１） 宋−合試料を除き、 （２） 抗ＩＸ内で抗原−■ｇＸ錯体を＠理し、そし
て（３）試料中のＩＸの尺度として抗原−Ｉ、Ｘｌｌｉ
ｌ本に結合し九抗１．Ｘを測定する。 ３α 抗Ｉ、Ｘが酵素で！ＩＡ繊されている特許請求の
範囲第２９項記載の方法。 ３ｔ 抗原−Ｉ Ｘ４体に結合した標鐵抗ＩｇＸを測
定する＠Ｋ、未結合ＯＶａ抗ＩｇＸｒｉ−除＜％奸請求
ノ範囲＄３ｃｌ記戦の１沃。 ３２、 ＩｇＸがルベラ・ビールスに対するＩｇＭ抗
体である時ｅａｔ求の範囲第６１ＪＡ記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/346,662 US4434227A (en) | 1982-02-08 | 1982-02-08 | Immunoassay for class specific immunoglobulin antibodies |
| US346662 | 1982-02-08 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3296702A Division JP2599058B2 (ja) | 1982-02-08 | 1991-08-28 | クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58147653A true JPS58147653A (ja) | 1983-09-02 |
| JPH0381099B2 JPH0381099B2 (ja) | 1991-12-27 |
Family
ID=23360468
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58018275A Granted JPS58147653A (ja) | 1982-02-08 | 1983-02-08 | 種類特異性免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
| JP3296702A Expired - Lifetime JP2599058B2 (ja) | 1982-02-08 | 1991-08-28 | クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3296702A Expired - Lifetime JP2599058B2 (ja) | 1982-02-08 | 1991-08-28 | クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4434227A (ja) |
| JP (2) | JPS58147653A (ja) |
| BE (1) | BE895848A (ja) |
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