JPH05331036A

JPH05331036A - メラニン生成抑制剤及びこれを含有する化粧料

Info

Publication number: JPH05331036A
Application number: JP4136738A
Authority: JP
Inventors: Sachiko Shirota; 幸子代田; Koji Miyazaki; 幸司宮崎; Minoru Ichioka; 稔市岡; Teruo Yokokura; 輝男横倉
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 1992-05-28
Filing date: 1992-05-28
Publication date: 1993-12-14

Abstract

(57)【要約】【構成】ビフィドバクテリウム属に属する微生物の菌
体抽出物を有効成分とするメラニン生成抑制剤。【効果】本発明のメラニン生成抑制剤は、優れたチロ
シナーゼ阻害活性を有し、かつ安全である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はメラニン生成抑制剤に関
し、更に詳細には優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有
するメラニン生成抑制剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】日焼け等によりヒトの肌が黒く変色する
のは、表皮の基底層に存在する色素細胞中でメラニンが
合成されることが原因とされている。メラニンは、酸化
酵素であるチロシナーゼがアミノ酸の一種であるチロシ
ンを酸化重合させることにより合成される。

【０００３】従来、このチロシナーゼ活性を阻害するこ
とによりメラニンの生成を抑制する物質としては、ビタ
ミンＣ、システイン、アルブチン、コウジ酸、グルタチ
オン、ハイドロキノンなどが知られている。また、天然
物由来のメラニン生成抑制物質としては、セリ科植物抽
出物、胎盤抽出物などが知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
従来のメラニン生成抑制剤は一般に安定性が悪く、また
その効果が充分でなかったり、安全性に問題がある場合
もあり、必ずしも充分満足できるものではなかった。

【０００５】従って、安定性が良く、しかも安全性が高
く、強力なメラニン生成抑制作用を有し、かつ化粧料へ
の配合性の良好なメラニン生成抑制剤の開発が望まれて
いた。

【０００６】

【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは鋭意検討してきた結果、ビフィドバクテリウ
ム属の微生物の菌体抽出物が、極めて優れたメラニン生
成抑制作用を有し、かつ安全性も高く、広く化粧料に配
合できることを見出し、本発明を完成した。

【０００７】すなわち、本発明はビフィドバクテリウム
属に属する微生物の菌体抽出物を有効成分とするメラニ
ン生成抑制剤及びこれを含有する化粧料を提供するもの
である。

【０００８】本発明のメラニン生成抑制剤は、ビフィド
バクテリウム属に属する微生物の菌体より例えば水又は
アルコールで抽出することにより製造される。

【０００９】本発明に用いられる微生物としては、ビフ
ィドバクテリウム属に属する微生物であれば特に制限さ
れず、例えばビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフ
ィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・
インファンティス、ビフィドバクテリウム・ロンガム、
ビフィドバクテリウム・アドレッセンティスがあるが、
ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４００６株又は
ビフィドバクテリウム・ビフィダムＹＩＴ４００７株が
特に好ましい。

【００１０】ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４
００６株及びビフィドバクテリウム・ビフィダムＹＩＴ
４００７株は、それぞれ微工研条寄第７５２号及び同第
７９１号として寄託済みである。

【００１１】これらの微生物の菌体は、当該微生物の増
殖に適した条件で培養した後、例えば遠心分離などによ
り培養上清と分離することにより得られる。

【００１２】以下に、ビフィドバクテリウム属に属する
微生物のうち、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ
４００６株及びビフィドバクテリウム・ビフィダムＹＩ
Ｔ４００７株に関する菌学的性質について記載する。

【００１３】（Ｉ）ビフィドバクテリウム・ブレーベＹ
ＩＴ４００６株：（１）分類学的性状グラム陽性無芽胞桿菌で、細胞内部にメチレンブルーに
親和性を有する顆粒が存在する。顕微鏡で観察すると桿
棒状の短桿菌でしばしば分岐したものが認められる。コ
ロニーは、円筒状、凸状、レンズ状を示す。１２％還元
脱脂乳で培養すると、主に酢酸と乳酸を産生する。

【００１４】カタラーゼ活性（−）、ミルク凝固性
（＋）、ゼラチン液化性（−）、硫化水素産生（−）、
インドール産生（−）、硝酸還元性（−）、炭酸ガス産
生（−）である。

【００１５】糖発酵性は、グルコース、フラクトース、
ラクトース、ガラクトース、サリシン、メレジトース、
セロビオース、マルトース、リボース、マンノースの各
糖が陽性、アラビノース、キシロース、マンニトール、
ソルビトール、イヌリン、トレハロース、ラムノース、
ソルボースの各糖が陰性である。

【００１６】（２）増殖しうる条件２５〜４２℃、pH５〜９（至適条件：３６〜３８℃，pH
６〜７）

【００１７】（II）ビフィドバクテリウム・ビフィダム
ＹＩＴ４００７株：（１）分類学的性状グラム陽性無芽胞桿菌で、細胞内部にメチレンブルーに
親和性を有する顆粒が存在する。顕微鏡で観察すると、
細胞の先端が分岐して、Ｙ字状、湾曲状の多形性を示
す。重層法で形成させたコロニーは、円筒状、凸状、レ
ンズ状を示す。

【００１８】カタラーゼ活性（−）、炭酸ガス産生
（−）、ミルク凝固性（＋）、ゼラチン液化性（−）、
硝酸塩還元性（−）、インドール産生（−）、硫化水素
産生（−）である。

【００１９】糖発酵性は、グルコース、フラクトース、
ラクトース、ガラクトースの各糖が陽性、アラビノー
ス、キシロース、サリシン、マンノース、マンニトー
ル、メレジトース、セロビオース、ソルビトール、イヌ
リン、トレハロース、マルトース、リボース、ソルボー
スの各糖が陰性である。

【００２０】（２）増殖しうる条件２５〜４５℃、pH５〜７（至適条件：３６〜３８℃，pH
６〜７）

【００２１】（３）胆汁酸耐性デオキシコール酸３００μg ／mlを含有する培地で増殖
する。

【００２２】本発明メラニン生成抑制剤の抽出に用いら
れる溶媒は、水又はメタノール、エタノール、プロパノ
ール、ブタノールなどのアルコールであるが、特に水、
メタノール又はこれらの混合溶媒が好ましい。抽出は、
菌体を溶媒に懸濁し、室温〜８０℃、好ましくは、５０
〜７０℃で５分〜１時間静置又は攪拌することにより行
われる。抽出後不溶物を除去し、溶媒を留去すれば、本
発明メラニン生成抑制剤が得られる。

【００２３】本発明の化粧料には、上記メラニン生成抑
制剤を、単独で、又は二種以上を組み合わせて配合する
ことができ、その配合量は、化粧料中に菌体抽出物乾燥
重量換算で０．００１〜１０重量％、特に０．１〜５重
量％が好ましい。

【００２４】本発明の化粧料には、前記の成分のほか、
通常の化粧料に用いられる成分、例えば油剤、界面活性
剤、緩衝剤、水、低級アルコール、多価アルコール、粉
体、保湿剤等の美容成分、増粘剤、防腐剤、色素、酸化
防止剤、紫外線吸収剤、香料、キレート剤等を、本発明
の効果を損なわない範囲で配合することができる。

【００２５】本発明の化粧料は、その形態には限定され
ず、例えば乳液、クリーム、パック、化粧水、ファンデ
ーション等として好適に使用することができる。

【００２６】

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明す
る。

【００２７】実施例１

【表１】ＩＬＳ培地トリプチケース１．０％イーストエキス０．５％トリプトース０．３％リン酸一カリウム０．３％リン酸二カリウム０．３％クエン酸二アンモニウム０．２％酢酸ナトリウム０．１７％ツィーン８００．１％Ｌ−システイン塩酸塩０．０２％無機塩溶液０．５％ラクトース２．０％

【００２８】上記組成のＩＬＳ培地を水酸化ナトリウム
でpHを６．８に調整し、１２１℃、１５分間高圧滅菌
し、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４００６又
はビフィドバクテリウム・ビフィダムＹＩＴ４００７を
接種し、３７℃で２４時間炭酸ガスを吹き込みながら培
養した。

【００２９】培養後、遠心分離機を用いて菌体と培養上
清に分離し、菌体（乾燥重量：０．１重量％）を得た。

【００３０】菌体をメタノール溶液に懸濁し、室温で１
０分間、３回抽出を行った後、菌体を除き更に減圧下で
溶媒を除去し、これを抽出物とした。ビフィドバクテリ
ウム・ブレーベＹＩＴ４００６及びビフィドバクテリウ
ム・ビフィダムＹＩＴ４００７の凍結乾燥菌体１ｇか
ら、メタノール抽出物が各々２６mg及び５５mg得られ
た。

【００３１】試験例１実施例１で製造したメタノール抽出物のメラニン生成抑
制作用を、メラニン生成の酸化酵素であるチロシナーゼ
活性の阻害作用を指標として検討した。

【００３２】試験方法試料溶液：菌体１ｇから得られたメタノール抽出物を蒸
留水５mlに溶解し、これを適当に希釈して用いた。酵素溶液：チロシナーゼ（４３００単位／mg）０．１mg
を蒸留水１mlに溶解した。基質溶液：Ｌ−チロシンを１０mMになるように溶解し
た。緩衝液：０．４Ｍリン酸緩衝液（pH６．８）を用い
た。

【００３３】試験管に緩衝液０．７５ml、酵素溶液０．
５ml及び被験試料１mlを入れ３７℃で１０分間インキュ
ベートした後、あらかじめ３７℃でインキュベートして
おいた基質溶液０．７５mlを添加し１５分間反応させ
た。反応終了後、直ちに分光光度計によって４７５nmに
おける吸光度（Ｂ）を測定した。また被験試料無添加
（蒸留水添加）の場合の吸光度（Ａ）を測定し、次式か
らチロシナーゼ活性の阻害率を算出した。

【００３４】

【数１】

【００３５】試験結果抽出物のチロシナーゼ阻害活性の濃度依存性を図１に示
した。試料濃度は測定系３mlに含まれるメタノール抽出
物量で表わした。

【００３６】図１より、チロシナーゼ活性５０％阻害を
示したメタノール抽出物量はビフィドバクテリウム・ブ
レーベＹＩＴ４００６は０．０３mg、ビフィドバクテリ
ウム・ビフィダムＹＩＴ４００７は０．６mgであった。

【００３７】次に、チロシナーゼ活性を５０％阻害する
量を１AUとした場合の上記メタノール抽出液の阻害活性
及びメタノール抽出物の比活性を算出し、表２に示し
た。なお、メタノール抽出液中のタンパク質、糖質及び
核酸について定量した結果も併せて示した。

【００３８】

【表２】

【００３９】ａ）ＢＣＡ法で定量した。ｂ）フェノール硫酸法で定量した。ｃ）オルシノール塩酸法で定量した。

【００４０】実施例２化粧水

【表３】（組成）ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４００６菌体メタノール抽出物（実施例１）１．０重量％エタノール１０．０重量％１，３−ブチレングリコール２．０重量％ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（５０Ｅ．Ｏ．）０．０５重量％パラオキシ安息香酸メチル０．１重量％香料０．１重量％精製水全体で１００となる量得られた化粧水は、美白効果に優れ、かつさっぱりとし
た使用感を有していた。

【００４１】実施例３乳液

【表４】（組成）ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４００６菌体メタノール抽出物（実施例１）５．０重量％ステアリン酸２．０重量％流動パラフィン６．０重量％スクワラン２．０重量％ソルビタンモノステアレート１．５重量％ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）２．０重量％パラオキシ安息香酸ブチル０．０５重量％１，３−ブチレングリコール３．０重量％パラオキシ安息香酸メチル０．１重量％香料０．１５重量％精製水全体で１００となる量得られた乳液は、美白効果に優れ、かつしっとりとした
使用感を有していた。

【００４２】実施例４クリーム

【表５】（組成）ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４００６菌体メタノール抽出物（実施例１）５．０重量％流動パラフィン２３．０重量％ワセリン７．０重量％ベヘニルアルコール１．０重量％ステアリン酸２．０重量％ミツロウ２．０重量％ソルビタンモノステアレート２．０重量％ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）２．５重量％パラオキシ安息香酸ブチル０．０５重量％１，３−ブチレングリコール３．０重量％パラオキシ安息香酸メチル０．１重量％香料０．１５重量％精製水全体で１００となる量得られたクリームは、美白効果に優れ、かつ使用感も良
好であった。

【００４３】

【発明の効果】本発明のメラニン生成抑制剤は、優れた
チロシナーゼ阻害活性を有し、かつ安全であり、これを
配合した化粧料は優れた美白効果と良好な使用感を有す
るものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】ビフィドバクテリウム属に属する微生物の菌体
抽出物のチロシナーゼ阻害活性の濃度依存性を示す図で
ある。

【図２】ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４００
６の菌体抽出物及びビフィドバクテリウム・ビフィダム
ＹＩＴ４００７の菌体抽出物のＵＶスペクトルを示す図
である。

フロントページの続き (72)発明者横倉輝男東京都港区東新橋１丁目１番19号株式会社ヤクルト本社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ビフィドバクテリウム属に属する微生物
の菌体抽出物を有効成分とするメラニン生成抑制剤。
【請求項２】請求項１記載のメラニン生成抑制剤を含
有する化粧料。