FR2915898A1 - Procede de preparation d'actifs sur eau thermale et compositions les contenant - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un procédé de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique comprenant la culture d'au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique et non fructifiante sur un milieu comprenant au moins une eau minérale et/ou thermale non sulfureuse.Elle concerne également une composition cosmétique ou dermatologique contenant au moins une bactérie du genre Vitreoscilla ou l'un de ses extraits.

Description

La présente invention concerne de nouveaux procédés de culture de

microorganismes utiles en particulier dans le domaine cosmétique ou pharmaceutique, qui leur confèrent des propriétés améliorées. Elle concerne également l'utilisation de bactéries susceptibles d'être obtenues par ces procédés, ou de leurs extraits, pour la préparation de compositions, en particulier à usage cosmétique ou dermatologique.

L'invention concerne en particulier la culture de bactéries filamenteuses non photosynthétiques et non fructifiantes, telles que définies selon la classification du Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (vol. 3, sections 22 et 23, 9 édition, 1989), parmi lesquelles on peut citer les bactéries appartenant à l'ordre des Beggiatoales, et plus particulièrement les bactéries appartenant aux genres Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix ou Leucothrix. La culture de telles bactéries de la famille des Beggiatoacées a été décrite dans la demande FR2283223, par multiplication en fermenteur dans un milieu faiblement agité.

La demande WO94/02158 enseigne la préparation de compositions immunomodulatrices à partir d'enveloppes de bactéries du genre Beggiatoa ou Vitreoscilla. Les bactéries sont cultivées sur un milieu préparé avec de l'eau distillée et un ose, en particulier du glucose, comme source de carbone. Par ailleurs, les bactéries filamenteuses ainsi obtenues, ou des fractions présentent des propriétés avantageuses, qui ont été décrites par exemple pour lutter contre les signes du vieillissement dans EP681831 ou pour traiter les peaux sensibles dans EP761204.

Il existe toujours un besoin de trouver des procédés améliorés de production de tels microorganismes.

Il a été trouvé dans le cadre de la présente invention, que le remplacement en tout ou partie de l'eau distillée classiquement présente dans le milieu de culture des bactéries filamenteuses par de l'eau minérale permet d'obtenir une masse bactérienne présentant des propriétés améliorées.

C'est pourquoi la présente invention a pour objet un procédé de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique comprenant la culture d'au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique et non fructifiante sur un milieu comprenant au moins une eau minérale et/ou thermale non sulfureuse. 30 35 Comme indiqué plus haut, les bactéries filamenteuses non photosynthétiques comprennent notamment les bactéries appartenant à l'ordre des Beggiatoales, et plus particulièrement les bactéries appartenant aux genres Beggiatoa, Vitreoscilla, Flexithrix ou Leucothrix.

Le procédé selon l'invention convient particulièrement pour la culture de bactéries appartenant au genre Vitreoscilla, en particulier pour les bactéries de l'espèce Vitreoscilla filiformis.

Les bactéries qui viennent d'être définies et dont plusieurs ont déjà été décrites ont généralement un habitat aquatique et peuvent être trouvées notamment dans des eaux marines ou dans des eaux thermales. Parmi les bactéries utilisables, on peut citer par exemple :

Vitreoscilla filiformis (ATCC 15551) Vitreoscilla beggiatoïdes (ATCC 43181) Beggiatoa alba (ATCC 33555) Flexithrix dorotheae (ATCC 23163) Leucothrix mucor (ATCC 25107) Sphaerotilus natans (ATCC 13338) De préférence, le procédé selon l'invention est appliqué à la culture de bactérie correspondant à la souche déposée à l'ATCC sous le n 15551.

Par eau thermale on entend une eau chaude ou froide qui est utilisée pour ses vertus thérapeutiques ou pour un usage balnéaire. La présente invention peut utiliser une eau thermale ou une eau minérale. En général, une eau minérale est propre à la consommation, ce qui n'est pas toujours le cas d'une eau thermale. Chacune de ces eaux contient, entre autre, des minéraux solubilisés et des oligoéléments. Ces eaux sont connues pour être employées à des fins de traitement spécifique selon les oligo-éléments et les minéraux particuliers qu'elles contiennent.

De préférence, dans le procédé selon l'invention, on utilise une eau thermale et/ou minérale qui présente une minéralisation supérieure ou égale à 400 mg/I. On entend, dans l'invention, par "minéralisation", la somme des concentrations en anions et en cations présents dans l'eau thermale ou minérale. Dans les eaux thermales ou minérales utiles selon l'invention, la minéralisation est généralement comprise entre 400 et 900 mg/I.

L'eau thermale et/ou minérale utilisée selon l'invention peut avoir une minéralisation d'au moins 700 mg/I et, en particulier, une concentration totale en carbonates et en bicarbonates d'au moins 150 mg/I et plus préférentiellement d'au moins 360 mg/I et notamment en carbonate et bicarbonate de sodium supérieure à 2 mg/I. La concentration en oxyde de silicium dans l'eau utilisée dans la composition selon l'invention peut être de préférence d'au moins 6 mg/I et plus préférentiellement d'au moins 9 mg/I.

L'eau thermale ou l'eau minérale utilisée selon l'invention peut être choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy, l'eau d'Uriage, l'eau de la Roche Posay, l'eau de la Bourboule, l'eau d'Enghien-les-bains, l'eau de Saint-Gervais-les bains, l'eau de Néris-lesbains, l'eau d'Allevard-les-bains, l'eau de Digne, l'eau des Maizières, l'eau de Neyrac-les- bains, l'eau de Lons le Saunier, les Eaux Bonnes, l'eau de Rochefort, l'eau de Saint Christau, l'eau des Fumades et l'eau de Tercis-les-bains.

Parmi ces eaux, celles qui présentent une concentration totale en carbonates ou bicarbonates supérieure à 360 mg/I sont l'eau de Vittel, l'eau de la Bourboule, l'eau des Fumades, l'eau d'Enghien-les-bains, l'eau de la Roche-Posay, l'eau du bassin de Vichy, l'eau d'Uriage.

Parmi ces eaux celles qui présentent une concentration en carbonates ou bicarbonates comprise entre 150 mg/I et 360 mg/I sont l'eau de Digne, l'eau de Maizières, l'eau de Rochefort, l'eau de Saint-Gervais-les-bains.

Parmi ces eaux, celles qui contiennent au moins 2 mg/I de carbonate ou bicarbonate de sodium sont l'eau de la Roche Posay, l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy, l'eau d'Uriage Les eaux contenant au moins 9 mg/I d'oxyde de silicium sont l'eau de la Roche Posay, l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy, l'eau d'Uriage.

Les eaux thermales ou minérales convenant particulièrement à la mise en oeuvre de 35 l'invention ont une concentration en ions calcium supérieure ou égale à 100mg/I, voire à 140 mg/I.30 Selon un mode de réalisation avantageux, l'eau thermale ou minérale a une concentration en ions hydrogénocarbonates supérieure ou égale à 300 mg/I. Les hydrogénocarbonates, aussi appelés bicarbonates, sont notamment présents à une concentration supérieure ou égale à 350 mg/l. Selon un mode de réalisation avantageux, les bactéries sont cultivées sur un milieu comprenant au moins une eau thermale. Celle-ci peut en particulier être choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy, l'eau d'Uriage, l'eau de la Roche-Posay, l'eau de la Bourboule, l'eau des Fumades, l'eau d'Enghien-les-bains, les Eaux Bonnes. 10 Les eaux permettant d'obtenir un résultat particulièrement avantageux selon l'invention sont notamment choisies parmi l'eau de la Roche Posay et l'eau de Vittel, ou une eau de composition similaire. L'eau de la Roche Posay est extraite de la source du même nom, il s'agit d'une eau 15 bicarbonatée calcique, silicatée et séléniée. Elle comprend généralement environ 387 mg/I d'ions bicarbonates, environ 140 mg/l d'ions calcium et au moins 40 mg/l de sulfates. L'eau de Vittel est riche en calcium et sels minéraux (841 mgll) et contient notamment 202 mg/l de calcium, 402 mg/l de bicarbonates et 336 mg/l de sulfates. On peut en particulier effectuer une culture dans le milieu suivant: 20 Composition Concentration Extrait autolytique de levure 0,5 à 5 g/l Peptone 0,5 à 5 g/l Glucose anhydre 0,5 à7g/l Micro-éléments de Heller 0,5 à 5ml/I CaCl2, 10 H2O 0,010 à 0,200 g/l On complète à 1 000 ml par de l'eau distillée et/ou de l'eau minérale ou thermale. Parmi les peptones utilisables, on peut citer par exemple la peptone papaïnique de soja. Ce milieu se distingue des milieux généralement utilisés par l'absence de catalase et de 25 sulfure. Les micro-éléments de Heller ont été décrits par Heller, Ann Sci. Nat. Biol. Veg. 14 : 1-223 (1953). Il s'agit de mélanges de divers éléments minéraux qui ont été recommandés par Heller, non pas pour la culture des bactéries, mais pour la nutrition des tissus végétaux cultivés in vitro. La culture peut être effectuée à la température appropriée convenant pour l'espèce 30 bactérienne cultivée. Généralement cette température est comprise entre 18 et 40 C5 suivant les souches. Le pH du milieu de culture est de préférence compris entre 5,5 et 8.

La composition des micro-éléments de Heller, pour 1 l d'eau, est la suivante: ZnSO4,7 H2O 1g MnSO4iH2O 0,076 g CuSO4i5H2O 0,003 g KI 0,010 g H3BO3 1 g AICI3i6H2O 0,050 g NiCl2,6H2O 0,030 g

Lesdites eaux thermales ou minérales peuvent remplacer tout ou partie de la phase aqueuse du milieu de culture. Elles peuvent ainsi se trouver en mélange en toute proportion avec l'eau, en particulier distillée ou osmosée, présente dans le milieu de culture. Après mélange de tous les éléments du milieu, on procède avantageusement à une stérilisation du milieu de culture contenant l'eau thermale et/ou minérale; cette étape est effectuée par des méthodes connues de l'homme du métier telles que la stérilisation par filtration ou par la chaleur.

Le milieu de culture est ensuite ensemencé par les bactéries.

L'invention a donc également pour objet un procédé de culture de microorganisme ou de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique tel que défini précédemment, caractérisé en ce que le milieu de culture contient un mélange (i) d'eau osmosée ou distillée et (ii) d'eau thermale, dans un ratio compris entre 1 et 100, notamment de 1 à 50, en particulier de 1 à 25.

De manière inattendue, il a été trouvé dans le cadre de l'invention que l'incorporation d'eau thermale et/ou minérale dans le milieu de culture en proportion relativement faible peut conférer au microorganisme des propriétés avantageuses, distinctes de celles d'un microorganisme cultivé sur un milieu dans lequel l'eau incorporée est exclusivement de l'eau distillée et/ou osmosée. Ainsi, dans des milieux convenant à la mise en oeuvre de l'invention, l'eau thermale ou minérale représente de préférence au moins 0,1% de la quantité d'eau introduite pour la préparation du milieu, notamment de 0,1 à 99,9%. De bons résultats sont obtenus avec des concentrations d'eau thermale d'environ 1% par rapport à l'eau osmosée et/ou distillée, par exemple de 0,5 à 20%, voire de 0,5 à 50%, mais ces concentrations peuvent être augmentées sans inconvénient.

De façon connue, le procédé comprend au moins une étape dans laquelle on récupère les bactéries à la fin de la culture, en particulier en les séparant du milieu de culture.

Après culture des bactéries, on peut isoler la biomasse par diverses méthodes connues, par exemple par filtration, par coagulation avec un alcool (éthanol, isopropanol, isobutanol), par séchage sur cylindre à précouche (amidon, diatomées...) raclée, ou par lyophilisation. Une concentration préalable, par exemple à 80 C sous pression réduite, améliore cette séparation. On peut procéder à une opération de rupture des enveloppes, par exemple par l'action des ultrasons. On peut en outre préparer des extraits à l'aide d'un alcool tel que l'éthanol ou le propanol.

On peut également préparer des extraits lipopolysaccharidiques selon les méthodes connues, voir par exemple Noris et Ribbons, Methods in Microbiology, Vol. 5B, Academic Press (1971). La méthode généralement utilisée est la méthode bien connue dite de Westphal (ou une méthode apparentée), qui consiste à faire l'extraction avec des mélanges phénol-eau à 65 C. On soumet ensuite l'extrait à une dialyse pour éliminer le phénol.

L'invention se rapporte en particulier à un procédé de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique tel que défini précédemment, caractérisé en ce qu'il comprend une étape au cours de laquelle (i) on cultive au moins une bactérie appartenant à l'ordre des Beggiatoales sur un milieu comprenant un ose comme source principale de carbone et au moins une eau minérale ou thermale, puis (ii) après fermentation, on sépare les bactéries du milieu de culture, pour récupérer ladite masse des bactéries.

Les bactéries récupérées à l'issue de l'étape de fermentation peuvent notamment être soumises à un traitement de stabilisation et/ou d'extraction. C'est l'extrait de bactéries filamenteuses ainsi obtenu qui sera généralement utilisé dans ou pour la préparation de compositions cosmétiques ou dermatologiques. De manière connue en soi, l'extrait pourra ainsi être stérilisé en particulier par filtration ou par autoclavage.

Par extrait de bactéries filamenteuses non photosynthétiques, on entend aussi bien le surnageant de culture desdites bactéries, la biomasse obtenue après culture desdites bactéries ou encore les extraits de la biomasse obtenus par traitement de cette biomasse. Pour préparer l'extrait selon l'invention, on peut cultiver lesdites bactéries selon le procédé selon l'invention, puis les séparer de la biomasse obtenue, par exemple par filtration, centrifugation, coagulation et/ou lyophilisation.

Ainsi, après culture, les bactéries sont concentrées par centrifugation. La biomasse obtenue est autoclavée. Cette biomasse peut être lyophilisée pour constituer ce que l'on appelle l'extrait lyophilisé. Toute méthode de lyophilisation connue de l'homme du métier est utilisable pour préparer cet extrait. La fraction surnageante de cette biomasse peut également être filtrée dans un récipient stérile pour éliminer les particules en suspension. Cette fraction surnageante peut également être transvasée stérilement dans un récipient stérile. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la fraction surnageante ainsi obtenue est utilisée à titre d'actif cosmétique ou dermatologique.

De manière inattendue, il a été trouvé dans le cadre de la présente invention que la culture d'une bactérie sur un milieu comprenant au moins une eau thermale ou minérale, notamment constituant de 1 à 100% de l'eau présente dans le milieu de culture, conférait à la bactérie obtenue à l'issue des différentes étapes de fermentation et d'isolement des propriétés particulières, distinctes de celles de la même bactérie cultivée sur un milieu non supplémenté en eau thermale et/ou minérale mais contenant uniquement de l'eau osmosée ou distillée.

Selon un autre aspect de l'invention, la substitution de tout ou partie du l'eau du milieu de culture de la bactérie par de l'eau minérale ou thermale permet d'augmenter la vitesse de croissance de la bactérie et donc d'améliorer le rendement de production.

C'est pourquoi l'invention a également pour objet l'utilisation d'au moins une eau thermale ou minérale non sulfureuse telle que définie dans ce qui précède, comme agent pour améliorer l'activité et/ou la croissance d'une bactérie du genre Vitreoscilla, en particulier Vitreoscilla filiformis.

L'invention concerne aussi un procédé pour améliorer la croissance et/ ou les propriétés d'une bactérie du genre Beggiatoa ou Vitreoscilla consistant à ajouter à au moins une étape de la culture une eau thermale et/ou minérale dans le milieu de culture.

Un autre objet de l'invention est un milieu de culture adapté à la culture de bactéries filamenteuses non photosynthétiques telles que définies dans ce qui précède, l'eau présente dans ledit milieu comprenant au moins 1% d'eau minérale et/ou thermale, en particulier de 1 à 99,9%, de préférence de 1 à 25%.

L'invention a également pour objet les bactéries, en particulier Vitreoscilla filiformis, susceptibles d'être obtenues par le procédé selon l'invention, de même que leurs extraits et leurs utilisations dans des compositions, les bactéries, leurs extraits ou les compositions étant utiles pour améliorer l'état de la peau et/ou des phanères.

Un autre objet de l'invention est donc une composition, en particulier cosmétique ou dermatologique caractérisée en ce qu'elle contient au moins une bactérie du genre Vitreoscilla susceptible d'être obtenue par le procédé décrit dans ce qui précède, ou un extrait de celle-ci, dans un milieu physiologiquement acceptable. Les compositions utilisées selon l'invention peuvent se présenter sous toutes les formes adaptées aux applications envisagées, notamment par voie orale ou topique, dans les domaines cosmétique et dermatologique. Par voie topique, on entend de préférence une utilisation par application topique sur la peau ou les phanères; par peau on englobe également, sauf indication contraire, le cuir chevelu ou les muqueuses.

La composition selon l'invention peut ainsi être appliquée sur toute zone cutanée du corps, les cheveux les ongles ou les muqueuses et se présenter sous toute forme galénique adaptée par l'homme du métier. Elle peut se présenter notamment sous forme d'une solution ou d'une suspension aqueuse ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, d'une émulsion siliconée, d'une microémulsion ou nanoémulsion, d'un gel aqueux ou huileux ou d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide.

Pour une application topique sur la peau, la composition peut avoir la forme notamment de solution aqueuse ou huileuse ou de dispersion du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou de suspensions ou émulsions de consistance molle du type crème ou gel aqueux ou anhydre, ou encore de microcapsules ou microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Elle peut également être présentée sous forme de patch ou de système à libération contrôlée. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.

Elles peuvent être également utilisées pour les cheveux sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques, ou sous forme de crèmes, de gels, d'émulsions, de mousses ou encore sous forme de compositions pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression.

Pour les yeux, la composition peut se présenter sous forme de gouttes et pour l'ingestion, elle peut se présenter sous forme de capsules, de granulés, de gels, de pâtes à mâcher, de sirops ou de comprimés.

Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.

Ces compositions constituent notamment des crèmes de nettoyage, de protection, de traitement ou de soin pour le visage, pour les mains, pour les pieds, pour les grands plis anatomiques ou pour le corps, (par exemple crèmes de jour, crèmes de nuit, crèmes démaquillantes, crèmes de fond de teint, crèmes anti-solaires), des masques à laisser poser sur la peau ou les cheveux, des fonds de teint fluides, des laits de démaquillage, des laits corporels de protection ou de soin, des laits anti-solaires, des lotions, gels ou mousses pour le soin de la peau, comme des lotions de nettoyage, des lotions antisolaires, des lotions de bronzage artificiel, des compositions pour le bain, des compositions désodorisantes comprenant un agent bactéricide, des gels ou lotions après-rasage, des crèmes épilatoires, des compositions contre les piqûres d'insectes, des compositions anti-douleur, des compositions pour traiter certaines maladies de la peau comme l'eczéma, la rosacée, le psoriasis, les lichens, les prurits sévères.

Les compositions selon l'invention peuvent également consister en des préparations solides constituant des savons ou des pains de nettoyage.

Les compositions peuvent aussi être conditionnées sous forme de composition pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression.

La composition selon l'invention peut aussi être une composition pour soins capillaires, et notamment un shampooing, une lotion de mise en plis, une lotion traitante, une crème ou un gel coiffant, une composition de teintures (notamment teintures d'oxydation) éventuellement sous forme de shampooings colorants, des lotions restructurantes pour les cheveux, une composition de permanente (notamment une composition pour le premier temps d'une permanente), une lotion ou un gel antichute, un shampooing antiparasitaire, etc.

La composition peut aussi être à usage bucco-dentaire, par exemple une pâte dentifrice. Dans ce cas, la composition peut contenir des adjuvants et additifs usuels pour les compositions à usage buccal et notamment des agents tensioactifs, des agents épaississants, des agents humectants, des agents de polissage tels que la silice, divers ingrédients actifs comme les fluorures, en particulier le fluorure de sodium, et éventuellement des agents édulcorants comme le saccharinate de sodium.

Lorsque la composition est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 % à 80 % en poids, et de préférence de 5 % à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les huiles, les cires, les émulsionnants et les coémulsionnants utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine cosmétique. L'émulsionnant et le coémulsionnant sont présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3 % à 30 % en poids, et de préférence de 0,5 à 20 % en poids par rapport au poids total de la composition. L'émulsion peut, en outre, contenir des vésicules lipidiques.

Lorsque la composition est une solution ou un gel huileux, la phase grasse peut représenter plus de 90 % du poids total de la composition.

De façon connue, la composition cosmétique peut contenir également des adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les additifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine cosmétique, et par exemple de 0, 01 % à 10 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse et/ou dans les sphérules lipidiques.

Comme huiles ou cires utilisables dans l'invention, on peut citer les huiles minérales (huile de vaseline), les huiles végétales (fraction liquide du beurre de karité, huile de tournesol), les huiles animales (perhydrosqualène), les huiles de synthèse (huile de Purcellin), les huiles ou cires siliconées (cyclométhicone) et les huiles fluorées (perfluoropolyéthers), les cires d'abeille, de carnauba ou paraffine. On peut ajouter à ces huiles des alcools gras et des acides gras (acide stéarique).

Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60 et le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de TefoseR 63 par la société Gattefosse.

Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol.

Comme gélifiants hydrophiles utilisables dans l'invention, on peut citer les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides tels que l'hydroxypropylcellulose, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les Bentones , les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, éthylcellulose, polyéthylène.

Dans un mode de réalisation avantageux, les compositions selon l'invention sont des compositions huile dans eau (H/E), en particulier des compositions contenant des actifs lipophiles. De telles compositions sont en particulier à base de globules huileux pourvus d'un enrobage cristal liquide lamellaire, tels que décrites dans la demande EP 641557. La composition, cosmétique ou dermatologique est constituée par une émulsion du type huile dans eau formée de globules huileux pourvus d'un enrobage cristal liquide lamellaire dispersés dans une phase aqueuse; chaque globule huileux contenant au moins un composé actif lipophile au plan cosmétique ou dermatologique est unitairement enrobé d'une couche monolamellaire ou oligolamellaire obtenue à partir d'au moins un agent tensioactif lipophile, d'au moins un agent tensioactif hydrophile et d'au moins un acide gras, les globules huileux enrobés ayant un diamètre moyen inférieur à 500 nanomètres et la phase aqueuse contient à l'état dissous un agent basique. Lorsque les compositions selon l'invention sont utilisées pour le traitement cosmétique de la matière kératinique, l'actif contenu dans la phase huileuse est, par exemple, choisi parmi les agents mélanorégulateurs, liporégulateurs, antiséborrhéiques, anti-vieillissement, anti-UV, kératolytiques, antibactériens, antifungiques, antipelliculaires, anti-chute des cheveux, colorants capillaires, décolorants capillaires, conditionneurs.

On peut citer comme exemples d'actifs pour le traitement de la peau et/ou des cheveux, utilisables dans le cadre de la présente invention les composés suivants : D a-tocophérol, DL a-tocophérol, acétate de D a-tocophérol, acétate DL a-tocophérol, palmitate d'ascorbyle, glycérides de vitamine F, vitamines D, vitamine D2, vitamine D3, rétinol, esters de rétinol, palmitate de rétinol, propionate de rétinol, 13-carotène, D panthénol, farnesol, acétate de farnesyle, huiles de jojoba, de cassis riches acides gras essentiels, acide n octanoyl-5 salicylique, acide salicylique, alkylesters d' ahydroxyacides tels que acide citrique, acide lactique, acide glycolique, acide asiatique, acide madécassique, asiaticoside, extrait total de centella asiatica, acide 13-glycyrrhétinique, a-bisabolol, céramides comme le 2 oleoylamino-1,3 octadécane, phytanetriol, sphingomycline de lait, phospholipides d'origine marine riches en acides gras essentiels polyinsaturés, éthoxyquine, extrait de romarin, extrait de mélisse, quercetine, extrait de microalgues séchées (algoxan red de Algatec), octylmethoxycinnamate (Parsol MCX -Givaudan - Roure), butylméthoxydibenzoylméthane (Parsol 1789 - Givaudan -Roure), octyl triazone (Uvinul T150 - BASF), oxydes de fer jaune, brun, noir, rouge, oxydes de titane, pouvant se présenter sous forme micrométrique ou nanométrique ou sous forme enrobée.

La quantité de biomasse cultivée sur eau thermale ou des ses extraits présents dans les compositions selon l'invention sera adaptée par l'homme du métier pour obtenir l'activité recherchée, selon le type d'extrait utilisé. A titre indicatif, la quantité dans les compositions sera comprise entre 0,001% et 10% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence de 0,01 à 5%; en particulier elle sera d'au moins 0,1%.

L'invention comprend également un procédé pour améliorer l'état de la peau et/ou des phanères, dans lequel on applique sur la peau et/ou les phanères au moins une bactérie susceptible d'être obtenue par culture sur un milieu contenant une eau thermale ou minérale tels que définis précédemment, un de ses extraits ou une composition les contenant.

Selon l'un des aspects de l'invention, elle concerne un procédé de préparation d'une composition, en particulier cosmétique oudermatologique, dans lequel on mélange au moins une bactérie susceptible d'être obtenue par culture sur un milieu contenant une eau thermale ou minérale tels que définis précédemment, un de ses extraits, avec au moins un milieu physiologiquement acceptable et des adjuvants adaptés au mode d'administration.

L'invention sera illustrée plus en détail dans les exemples qui suivent Exemple 1: Préparation de la biomasse Préparation du milieu de culture :

Composition : * Extrait de levure 2g * Peptone Papaïnique de soja 2g * Glucose 2g * Micro élément de Heller 2 ml * CaCl2, 2H2O 66.21 mg * Eau thermale La Roche Posay QSP 1 litres.

Le pH du milieu est ajusté à 5,00 par d'une solution molaire H3PO4. Le milieu est stérilisé par autoclavage à 121 C pendant 30 minutes. Après refroidissement à température ambiante, le pH est réajusté à 7,20 par rajout d'une solution molaire de KOH.

Culture : Après ensemencement à 1% du milieu, la culture est mise en agitation orbitale à 100 tours / min et à 26 C. Après 48 heures de croissance, la culture est centrifugée à 8000 g pendant 15 minutes. Les culots sont récupérés puis autoclavés à 121 C pendant 30 minutes. Cette biomasse peut être utilisée pour des tests d'évaluation.

Exemple 2: Comparaison de l'effet d'une biomasse obtenue avec ou sans eau thermale Le but de cette étude est de rechercher les effets de la biomasse obtenue par culture sur milieu de culture reconstitué à l'eau osmosée, de la biomasse obtenue par culture sur milieu reconstitué à l'eau thermale de La Roche Posay et de l'Eau Thermale de La Roche Posay sur l'expression différentielle de gènes dans des cultures de kératinocytes humains. Ké rati n ocyte LEP16 Produit testé Corneodesmosine Biomasse +130% +128% Biomasse LRP Eau thermale - LRP

Dans une culture de kératinocytes, seule la biomasse cultivée sur eau thermale de la Roche Posay stimule les expressions de la cornéodesmosine et du LEP16. La biomasse cultivée sur eau osmosée ou l'eau thermale de La Roche Posay n'ont pas d'effet sur l'expression de ces gènes marqueurs des kératinocytes. En parallèle, l'eau ultra pure Merck, utilisée comme témoin, n'a aucun effet sur l'expression des gènes considérés.

Exemple 3 : Différences d'expression entre les cultures de Vitreoscilla filiformis sur eau de La Roche Posay vs eau osmosée : L'électrophorèse bidimensionnelle a été utilisée comme outil de séparation et de visualisation des protéines exprimées dans la biomasse Vitreoscilla filiformis, dans un cas cultivée sur eau de La Roche Posay et de l'autre cultivée sur eau osmosée. Cette méthode d'analyse consiste à effectuer une séparation des protéines en fonction de leur pHi, dans une première dimension dite horizontale (c'est l'isoélectrofocalisation ou IEF). Celle-ci s'effectue par l'intermédiaire d'un gel contenant un gradient de pH immobilisé, encore appelé IPG strips. Les protéines sont ensuite séparées en fonction de leurs poids moléculaires dans une deuxième dimension de migration, dite verticale . Les résultats montrent que les gels 2D sont très riches en protéines, celles-ci sont réparties dans une gamme de poids moléculaire comprise entre 6 kDa et 100 kDa, avec une abondance de protéines dans la zone des pH acides. L'analyse rapide de l'image montre 6 spots différents. D'un côté la sur-expression de deux protéines dans la biomasse cultivée sur eau de La Roche Posay et de l'autre, 4 protéines qui semblent être davantage exprimées dans la biomasse cultivée sur eau osmosée. Ces résultats montrent qu'il existe une différence de niveau d'expression des protéines dans les biomasses cultivées sur eau osmosée par rapport à celle cultivée sur eau de la Roche Posay.

Exemple 4: Augmentation de la croissance par l'eau de Vittel

Des essais de culture de Vitreoscilla filiformis en fermenteur de 10 litres en mode continu ont été réalisés à partir de milieux en partie reconstitués à l'eau osmosée (essai témoin) et à l'eau minérale de Vittel (à 2%) . Le taux de croissance imposé par le mode de 14 10 15 culture en continua été fixé à 0,12 h-1 et les conditions de culture ont été identiques dans les 2 essais. La biomasse a été concentrée par centrifugation d'un volume de culture récoltée en continu. La mesure de l'absorbance à 600 nm permet de suivre la croissance de la culture Les boues obtenues ont été stabilisée par autoclavage à 121 C pendant 30 minutes. L'extrait sec et la quantité de boues récoltées permettent à partir du volume de culture centrifugé de déterminer la concentration cellulaire (en g/I) de la culture correspondante.

Tableau de synthèse des essais : Solvant de Q Extrait [cellulaire] Absorbanc reconstitution du Vol sec % g/I e(600 nm) milieu de culture boues concentré culture (I) (g) Eau osmosée 10,98 220 5,41 1,08 3,17 Eau minérale 7,938 415 2,37 1,24 4,39 Vittel Conclusion : comparativement à la culture témoin sur milieu reconstitué à l'eau osmosée l'utilisation de l'eau de Vittel améliore la croissance de la bactérie, le rendement cellulaire est augmenté de 13 %.

Exemple 5: Composition contenant un extrait de Vitreoscilla filiformis On prépare les phases A, B, C et D et on les mélange successivement: Phase Quantité (g) A PEG/PPG-18/18 Diméthicone 10 A Polysorbate 20 0,5 A Cyclopentasiloxane 17 A Céthyl diméthicone 6 A Tocophérol 0,1 A Conservateurs 0,7 B Eau 25 B Sulfate de magnésium 1 B Glycérine 7 B Propylène glycol 3 16 C Eau 18,4 D Eau 10 D Extrait de Vitreoscilla filiformis * 1 * cultivée selon l'exemple 1, mais sur un milieu contenant 1% d'eau de La Roche Posay, le complément étant de l'eau osmosée.

La composition ainsi obtenue peut être appliquée matin et/ou soir sur le visage, le cou, 5 les mains et/ou l'ensemble du corps

Claims (15)

Revendications

1- Procédé de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique comprenant la culture d'au moins une bactérie filamenteuse non photosynthétique et non fructifiante sur un milieu comprenant au moins une eau minérale et/ou thermale non sulfureuse.

2- Procédé selon la revendication précédente caractérisé en ce qu'au moins une bactérie appartient au genre Vitreoscilla.

3- Procédé selon l'une au moins des revendications précédentes, caractérisé en ce que la bactérie appartient à l'espèce Vitreoscilla filiformis.

4- Procédé selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la bactérie est la souche déposée à l'ATCC sous la référence ATCC15551.

5- Procédé de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'eau thermale et/ou minérale présente une minéralisation supérieure ou égale à 400 mg/I.

6- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'on cultive la bactérie sur un milieu comprenant une eau thermale.

7- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'eau thermale ou minérale a une concentration en ions calcium supérieure ou égale à 100 mg/I.

8- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'eau thermale ou minérale a une concentration en hydrogénocarbonates supérieure ou égale à 300 mg/I.

9- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la bactérie est cultivée sur un milieu comprenant au moins une eau thermale choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy, l'eau d'Uriage, l'eau de la Roche-Posay, l'eau de la Bourboule, l'eau des Fumades, l'eau d'Enghien-les-bains, les Eaux Bonnes.

10- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'eau thermale est choisie parmi l'eau de la Roche Posay et l'eau de Vittel.

11- Procédé de préparation d'un actif cosmétique ou dermatologique selon l'une des revendications précédentes caractérisé en ce qu'il comprend une étape au cours de laquelle (i) on cultive au moins une bactérie appartenant à l'ordre des Beggiatoales sur un milieu comprenant un ose comme source principale de carbone et au moins une eau minérale ou thermale, puis (ii) après fermentation,on sépare les bactéries du milieu de culture, pour récupérer ladite masse des bactéries.

12- Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'on soumet la masse des bactéries récupérée à l'issue de l'étape de fermentation à un traitement de stabilisation.

13- Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le milieu de culture contient un mélange (i) d'eau osmosée ou distillée et (ii) d'eau thermale, avec un ratio (i)/(ii) compris entre 1 et 100, notamment de 1 à 50.

14- Utilisation d'au moins une eau thermale ou minérale non sulfureuse telle que définie dans l'une des revendications précédentes, comme agent pour améliorer l'activité et/ou la croissance d'une bactérie du genre Vitreoscilla.

15- Composition cosmétique ou dermatologique caractérisée en ce qu'elle contient au moins une bactérie du genre Vitreoscilla susceptible d'être obtenue par le procédé selon l'une des revendications 1 à 14, ou un extrait de celle-ci, dans un milieu physiologiquement acceptable.