FR3007650A1 - Utilisation cosmetique et/ou dermatologique, d'un lysat de bacteries du genre vitreoscilla sp., notamment de l'espece vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet, pour prevenir et/ou traiter le vieillissement cutane. - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation cosmétique et/ou dermatologique d'un lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes, non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané. En particulier la composition la contenant est destinée à prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané et notamment à prévenir et/ou lutter contre les effets du stress oxydatif sur la peau. L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique et/ou dermatologique de la peau, caractérisé en ce que l'on applique sur la peau une composition contenant un extrait dudit lysat.

Description

« Utilisation cosmétique et/ou dermatologique, d'un lysat de bactéries du genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet, pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané » La présente invention a pour objet l'utilisation cosmétique et/ou dermatologique d'un lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes, non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané.

En particulier la composition la contenant est destinée à prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané et notamment à prévenir et/ou lutter contre les effets du stress oxydatif sur la peau. L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique et/ou dermatologique de la peau, caractérisé en ce que l'on applique sur la peau une composition contenant un extrait dudit lysat. La peau humaine est constituée de deux compartiments à savoir un compartiment superficiel, l'épiderme, et un compartiment profond, le derme. L'épiderme humain naturel est composé principalement de trois types de cellules qui sont les kératinocytes, très majoritaires, les mélanocytes et les cellules de Langerhans. Chacun de ces types cellulaires contribue par ses fonctions propres au rôle essentiel joué dans l'organisme par la peau. Le vieillissement de la peau est une des modifications les plus visibles du processus de sénescence. De plus, la peau se retrouve exposée à de nombreux facteurs susceptibles d'accélérer ce processus physiologique. Les signes cliniques du vieillissement cutané résultent essentiellement d'un dysfonctionnement des principaux mécanismes biologiques intervenant au niveau de la peau. Parmi ces mécanismes biologiques, le stress oxydatif contribue largement au phénomène de vieillissement cutané. Le stress oxydatif est le résultat de facteurs externes comme les UV essentiellement, la fumée de cigarette, la pollution, etc. à l'origine du vieillissement extrinsèque mais aussi d'un déséquilibre entre d'une part la production d'espèces d'oxygène réactives (DRO, en anglais reactive oxygen species, ROS), telles que l'anion superoxyde, le peroxyde d'hydrogène et le radical hydroxyle, et d'autre part les mécanismes antioxydants de défense cellulaire, mettant en oeuvre des enzymes (superoxyde dismutase, catalase, glutathion peroxydase) ou encore des systèmes antioxydants non-enzymatiques. Dans notre organisme, les ROS sont formées en permanence par les réactions biochimiques physiologiques, principalement par la mitochondrie, la centrale énergétique de la cellule et sont à l'origine du vieillissement intrinsèque. Pour contrôler la formation des ROS produites in vivo, la cellule dispose d'un système de défense et de réparation intrinsèque : antioxydants cellulaires, enzymes, apoptose,... Mais lorsqu'ils sont produits en trop grande quantité et ne peuvent être éliminés par la cellule « débordée » ils attaquent la membrane cellulaire, l'ADN, les protéines, ce qui se traduit notamment par un vieillissement accéléré de la peau, avec un teint manquant d'éclat et une formation précoce de rides et de ridules avec en particulier un teint terne et/ou gris, un teint inhomogène, une perte de douceur, de souplesse et d'élasticité de la peau. Les mitochondries sont des organites cellulaires essentiels dans les fonctions bioénergetiques cellulaires et leur nombre et fonctionnement sont fondamentaux dans le contrôle de la sénescence cellulaire. La fonction première des mitochondries est double: produire de l'énergie sous forme d'ATP et consommer l'oxygène pour produire de l'eau, essentiels à la survie cellulaire. Dans un tissu fonctionnel, environ 10% des mitochondries présentent un dysfonctionnement qui engendre notamment un déséquilibre oxydatif par déficit de la consommation d'oxygène. Cette proportion augmente lors du vieillissement et la protection des fonctions mitochondriales est un moyen efficace de correction des effets de l'âge.

Ainsi, il est important de pouvoir utiliser des actifs biologiques capables de contrôler ce mécanisme afin de limiter la formation de radicaux libres excessifs, à l'origine des désordres cellulaires liés au vieillissement. Il existe donc le besoin de compositions permettant de protéger et/ou traiter la peau des effets nocifs ou inesthétiques du stress oxydatif et en particulier le vieillissement cutané, et de manière préféré le vieillissement cutané intrinsèque et c'est ce que propose de résoudre la présente invention.

Il est clairement admis que la production d'espèces réactives de l'oxygène au sein des cellules est l'un des phénomènes à l'origine du vieillissement cutané, accélérant ce dernier. D'ailleurs, l'utilisation de composés destinés à lutter contre les signes du vieillissement cutané en diminuant la production d'espèces réactives de l'oxygène est connue.

Ainsi, le brevet EP1841404 décrit une composition contenant un extrait de Vaccinium uliginosum pour l'amélioration de l'aspect des rides, en diminuant et/ou piégeant les espèces réactives de l'oxygène. De même, le brevet US2007253944 décrit une méthode permettant de protéger le tissu cutané des dommages causés par l'âge ou par les facteurs externes tels que les radiations UV, le stress ou la fatigue grâce à l'utilisation de créatine ou de dérivés de créatine protégeant les cellules de la production de radicaux libres et de stress oxydant. Enfin, le brevet FR9708607 décrit l'utilisation d'acide gamma linolénique pour prévenir et/ou combattre les effets du stress oxydatif sur la peau et/ou le vieillissement cutané. Par ailleurs, l'utilisation d'extraits de Vitreoscilla sp. dans diverses applications cosmétiques est connue, on peut citer le brevet W02012127170 qui concerne l'utilisation cosmétique d'un actif dérivé du micro-organisme appartenant au genre Vitreoscilla sp., plus particulièrement Vitreoscilla filiformis, à titre d'actif pour prévenir et/ou traiter les états pelliculaires du cuir chevelu, y compris les états pelliculaires associés à une prolifération de micro-organismes pathogènes et/ou un déséquilibre de l'écoflore du cuir chevelu. Egalement le brevet EP1974720 qui décrit l'utilisation d'une fraction lipopolysaccharidique de Vitreoscilla filiformis en tant qu'agent stimulant de la synthèse de peptides cutanés anti- microbiens, afin de prévenir et/ou traiter les désordres cutanés liés au développement de micro-organismes cutanés tels que des bactéries, des levures ou encore des champignons inférieurs. Enfin, le brevet EP0681831 décrit l'utilisation d'extraits de bactéries filamenteuses non photosynthétiques et non fructifiantes dont les bactéries du genre Vitreoscilla sp. comme agents anti-âge notamment par leur capacité à améliorer les échanges gazeux des peaux vieillissantes. Il existe cependant le besoin d'actifs permettant de protéger la peau des effets nocifs ou inesthétiques du stress oxydatif et en particulier du vieillissement cutané intrinsèque de façon plus efficace que les actifs déjà existants.

Il existe le besoin d'actifs permettant de protéger la peau des effets nocifs ou inesthétiques du stress oxydatif et en particulier du vieillissement cutané intrinsèque à des concentrations significativement réduite par rapport aux actifs déjà existants pour une efficacité au moins similaire voir augmentée afin de limiter les effets secondaires tels que les réaction d'hypersensibilité. Ainsi, de manière surprenante et inattendue, la Demanderesse a découvert que le lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques et en particulier celles appartenant au genre Vitreoscilla sp, notamment l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet permet d'inhiber et de diminuer de manière particulièrement efficace la production mitochondriale d'espèces réactives de l'oxygène, et donc de diminuer les effets physiologiques cutanés néfastes du stress oxydant, tels que le vieillissement cutané et plus particulièrement le vieillissement cutané intrinsèque. Ainsi, l'application cutanée d'une composition comprenant une quantité efficace de lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp. (Notamment l'espèce: Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet permet de prévenir et/ou traiter les effets cutanés des espèces réactives de l'oxygène sur la peau. L'invention a donc pour objet l'utilisation à titre de principe actif d'un lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce: Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet, au sein d'une composition cosmétique et/ou dermatologique, cette composition étant destinée à prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané et de manière préféré le vieillissement cutané intrinsèque.

Avantageusement, l'invention a pour objet l'utilisation à titre de principe actif d'un lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment l'espèce: Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet, au sein d'une composition cosmétique et/ou dermatologique cette composition étant destinée à prévenir et/ou lutter contre les effets du stress oxydatif sur la peau, tels que le vieillissement cutané et de manière préféré le vieillissement cutané intrinsèque.

Avantageusement, l'invention a pour objet l'utilisation à titre de principe actif d'un lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment l'espèce: Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet, au sein d'une composition cosmétique et/ou dermatologique cette composition étant destinée à prévenir et/ou lutter contre les effets du stress oxydatif sur la peau, tels que le vieillissement cutané et de manière préféré le vieillissement cutané intrinsèque. L'invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique et/ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané, consistant en l'application sur la peau d'une composition cosmétique et/ou dermatologique contenant le lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce: Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet.

L'invention a aussi pour objet un procédé de traitement cosmétique et/ou dermatologique pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané, consistant en l'application sur la peau d'une composition cosmétique et/ou dermatologique contenant le lysat de bactéries filamenteuses non fructifiantes non photosynthétiques, en particulier du genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce: Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet. Par « vieillissement cutané » au sens de l'invention, on entend, un teint terne et/ou gris, un teint inhomogène, une perte de radiance et/ou de transparence de la peau, la formation précoce de rides ou ridules, une perte de douceur, de souplesse et d'élasticité de la peau.

On distingue deux types différents de vieillissement cutané. Au sens de l'invention, on entend par « vieillissement intrinsèque », le vieillissement lié au passage du temps. Au sens de l'invention on entend par « vieillissement extrinsèque », le vieillissement provoqué par l'interaction de facteurs environnementaux tels que le tabac, les UVs, la 30 pollution.

Par « peaux âgées » on entend au sens de l'invention, une peau présentant un teint terne et/ou gris, un teint inhomogène, une perte de radiance et/ou de transparence de la peau, la formation précoce de rides ou ridules, une perte de douceur, de souplesse et d'élasticité de la peau.

Par le terme « peau » et/ou « cutané », on fait particulièrement référence à la peau du visage, du cou, du décolleté et de façon plus large à l'ensemble du corps et des muqueuses. Au sens de la présente invention, l'expression « lysat dans un milieu de fermentation complet » signifie que le lysat est mis en oeuvre et est présent, dans la composition cosmétique ou dermatologique le contenant, formulé dans son milieu de culture complet d'origine tel que défini ci-après, lequel milieu de culture complet est le milieu dans lequel les bactéries ont été cultivées jusqu'après la phase de croissance microbienne ayant conduit à l'utilisation des substrats nutritifs présents initialement dans le milieu de culture. Au sens de la présente invention, l'expression « milieu de fermentation complet » entend désigner un milieu issu du procédé de culture ayant été utilisé pour la croissance et la lyse cellulaire du microorganisme, ledit milieu n'ayant subi par ailleurs aucune manipulation additionnelle visant à séparer et/ou éliminer tout ou partie de ses constituants non aqueux. Au sens de la présente invention, on entend par « prévenir » le fait de supprimer totalement ou de diminuer partiellement le risque de manifestation d'un phénomène donné, c'est-à-dire dans la présente invention la manifestation de signes du vieillissement cutané.

Au sens de la présente invention on entend par « quantité efficace », une quantité suffisante et nécessaire du composé considéré pour obtenir l'effet attendu. Une telle quantité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, par exemple au moyen d'essais expérimentaux préliminaires.

Milieu de fermentation complet Comme énoncé précédemment, l'expression « milieu de fermentation complet » entend désigner un milieu de fermentation ou encore de culture possédant la même composition, au moins en termes de constituants non aqueux voire dans sa totalité, que le milieu de fermentation dans lequel il a été procédé successivement à la fermentation et à la lyse cellulaire du microorganisme dédié à former le lysat requis parallèlement selon l'invention. En d'autres termes, ce milieu n'a subi par ailleurs aucune manipulation annexe visant à séparer et/ou éliminer tout ou partie de ses constituants non aqueux.

Plus particulièrement, l'actif considéré selon l'invention est formé du lysat de microorganismes et de tout ou partie, en terme de quantité, du milieu de culture ayant servi à la fermentation de ladite bactérie et dans lequel il a été procédé consécutivement à sa lyse cellulaire (i.e. milieu de fermentation complet). Au regard de ce qui précède, il ressort que l'actif formé selon l'invention à partir du lysat et du milieu de fermentation dit complet contient les fractions cytoplasmique et cytosolique , les fragments de paroi cellulaire et les métabolites formés et/ou libérés lors de la lyse cellulaire dudit microorganisme, l'intégralité des entités biologiques susceptibles d'être générées et libérées spontanément par la bactérie lors de son processus de fermentation et donc déjà présentes dans le milieu de fermentation avant la lyse cellulaire de celle-ci.

En conséquence, un actif selon l'invention c'est-à-dire formé d'un lysat de bactéries dans un milieu de fermentation complet selon l'invention est clairement différent du surnageant d'un milieu de fermentation de ladite bactérie, comme cela est illustré dans les exemples avec une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment espèce: Vitreoscilla filiformis).

En effet, l'actif considéré selon l'invention, par opposition au surnageant, contient des fragments cellulaires de ladite bactérie figurés par le lysat. Un actif selon l'invention c'est-à-dire formé d'un lysat de bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment espèce: Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet selon l'invention, apte à diminuer la production d'espèces réactives de l'oxygène, est également différent de la biomasse ou fraction de biomasse, voire d'un lysat ou fraction de lysat isolé d'un milieu de fermentation de ladite bactérie, comme cela est illustré dans les exemples avec une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment espèce: Vitreoscilla filiformis). En effet l'actif considéré selon l'invention par opposition à cette biomasse, ou fraction de biomasse, ce lysat ou fraction de lysat contient une quantité significative de métabolites hydrosolubles libérés naturellement dans le milieu de culture lors de la prolifération de ladite bactérie. En outre un tel milieu complet présente l'avantage par rapport à l'utilisation du culot du lysat bactérien de supprimer du procédé de préparation du lysat, l'étape de centifugation, ayant pour conséquence une économie de temps et d'argent pour une efficacité au moins similaire voir augmentée grâce à la présence métabolites hydrosolubles dans ce milieu complet. Au sens de la présente invention, l'expression « constituants non aqueux » sous entend que l'eau, qui est un constituant majoritaire des milieux de fermentation conventionnels ne fait pas partie des constituants devant demeurer en tant que tels, c'est-à- dire à quantité égale, dans le milieu de culture complet selon l'invention. Ainsi, l'expression « milieu complet » s'étend également à une forme de milieu complet dite concentrée au regard du fait qu'elle est obtenue à l'issue d'une évaporation partielle de l'eau constituant un milieu de fermentation dans lequel ont été réalisées consécutivement la culture du microorganisme correspondant et la lyse cellulaire de celui-ci. Bien entendu, cette évaporation est conduite dans des conditions opératoires ajustées pour ne pas altérer l'intégrité des constituants non aqueux formant ce milieu complet Composition milieu de fermentation Par définition, un milieu de fermentation ou encore de culture est un support qui permet la culture et donc selon le cas, le développement de cellules, de bactéries, de levures... En principe, les cellules trouvent dans ce milieu les composants indispensables pour leur multiplication en grand nombre rapidement, mais aussi parfois des éléments qui permettront de privilégier le développement d'un genre bactérien spécifique ou d'une famille particulière, en l'occurrence une bactérie dont le lysat dans son milieu de fermentation complet est apte à diminuer la production d'espèces réactives de l'oxygène, y compris une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp., notamment, l'espèce: Vitreoscilla filiformis. Sa composition doit donc satisfaire les exigences nutritives du micro-organisme considéré et nécessaire à la prolifération de celui-ci.

Plus précisément, la composition de ce milieu de culture doit : - couvrir les besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance, apporter la source de carbone et d'énergie ; - présenter un pH voisin du pH optimal et; - présenter une force ionique optimale (le milieu peut être isotonique mais ce n'est pas obligatoire). Ainsi, la composition d'un milieu de fermentation convenant à l'invention comprend au moins : - une source de carbone et d'énergie, généralement figurée par un sucre et avantageusement le glucose, - une source de potassium et de phosphore à l'image par exemple du K2HPO4, - une source d'azote et de soufre pouvant être représentée par le composé (NH4)2 S 04 ; - une source de magnésium telle que par exemple MgC12, - une source de calcium telle que par exemple CaC12, - une source de fer et plus particulièrement du citrate de fer, le citrate ayant pour rôle de maintenir le fer en solution, - une source d'oligo-éléments choisis notamment parmi les sels de Cu, Zn, Co, Ni, B, Ti, - une source d'eau, généralement stérile, indispensable à toute forme de vie, - un tampon pH pouvant être figuré par le KH2PO4. A défaut de présence de l'un de ces composants, les bactéries ne se développent pas, car elles ne peuvent par elles-mêmes suppléer à son absence. A titre illustratif d'un milieu de fermentation convenant au développement d'un microorganisme conforme à l'invention, il peut notamment être fait mention du milieu figurant en exemple 1 ci-après.

Une quantité efficace du microorganisme considéré selon l'invention y est introduite et l'ensemble est placé dans des conditions propices à sa prolifération. Pour obtenir un lysat de bactéries concernées par l'invention, par exemple un lysat d'une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. dans un milieu de fermentation complet, selon un procédé comprenant une étape de culture desdites bactéries, l'homme du métier peut se référer notamment à l'exemple 1. Avantageusement, pour obtenir un actif selon l'invention, c'est-à-dire un lysat de bactéries concernées par l'invention, par exemple un lysat de bactéries appartenant au genre Vitreoscilla sp., dans un milieu de fermentation complet, la biomasse (cellules bactériennes après la phase de croissance, présentes dans le milieu dans lequel elles ont été cultivées) est congelée, par exemple à une température de -20°C, puis est stérilisée, de préférence par la chaleur, en particulier en soumettant la biomasse préalablement congelée à une étape de chauffage à une température supérieure à 100°C. A titre illustratif, l'étape de stérilisation de la biomasse peut être réalisée par autoclavage, par exemple à une température de 121°C.

Comme il ressort de ce qui précède, à l'issue de cette culture dudit microorganisme celui est transformé à l'état de lysat directement au sein du milieu de fermentation ayant servi à sa culture. Lyse des bactéries pour l'obtention d'un actif selon l'invention Un lysat désigne communément un matériau obtenu à l'issue de la destruction ou dissolution de cellules biologiques par un phénomène dit de lyse cellulaire provoquant ainsi la libération des constituants biologiques intracellulaires et cellulaires naturellement contenus dans les cellules biologiques considérées. Au sens de la présente invention, le terme lysat désigne l'intégralité du lysat obtenu par lyse du microorganisme concerné, à savoir une bactérie dont le lysat dans son milieu de fermentation complet est apte à induire diminuer la production d'espèces réactives de l'oxygène, y compris une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp., notamment de l'espèce: Vitreoscilla filiformis.

Le lysat mis en oeuvre est donc formé de l'intégralité de ses constituants biologiques intracellulaires notamment ses métabolites et les constituants des parois et membranes cellulaires générés lors de sa lyse cellulaire. Au sens de l'invention, le terme « métabolite » désigne toute substance issue du métabolisme du microorganisme considéré selon l'invention. Cette lyse cellulaire peut être accomplie par différentes technologies, telles que par exemple un choc osmotique, un choc thermique, par ultrasons, ou encore sous contrainte mécanique de type centrifugation. Plus particulièrement, ce lysat peut être obtenu selon la technologie décrite dans le brevet US 4, 464,362, et notamment selon le protocole suivant. Il est procédé à une désintégration aux ultra-sons du milieu de fermentation ayant servi à la culture de microorganisme considéré et contenant donc ledit microorganisme afin d'y libérer les fractions cytoplasmiques et cytosoliques, les fragments de paroi cellulaire et les produits issus du métabolisme de ce microorganisme. Tous ces composants y sont ensuite préservés dans leur distribution naturelle sous une forme stabilisée dans le milieu de fermentation dit complet. En conséquence, l'actif considéré selon l'invention peut être obtenu via un procédé consistant en : -la culture d'au moins une bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment espèce: Vitreoscilla filiformis) sur un milieu de fermentation dans des conditions propices à la prolifération de ladite bactérie, et - la lyse cellulaire desdites bactéries dans ledit milieu de fermentation.

Bactéries appartenant au genre Vitreoscilla sp., notamment especes: Vitreoscilla filiformis Comme précisé ci-dessus, le microorganisme considéré selon l'invention à l'état de lysat est une bactérie filamenteuse non synthétique telle que définie selon la classification de Bergey's Manual of Systematic Bacteriology (Vol. 3, sections 22 et 23, 9ème édition, 1989), et appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment espece: Vitreoscilla filiformis). Selon une variante préférée de l'invention, il s'agit de la bactérie Vitreoscilla filiformis.

Parmi les bactéries utilisables, on peut citer par exemple, Vitreoscilla filiformis (ATCC souche 15551). Applications Comme signifié précédemment, l'actif considéré selon la présente invention est particulièrement intéressant au regard de son efficacité à l'égard des signes du vieillissement cutané, engendrés par un stress oxydatif excessif notamment par une trop forte production d'espèces réactives de l'oxygène. Un actif conforme à l'invention est avantageusement utilisé en vue de prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané, engendrés par un stress oxydatif et la production excessive d'espèces réactives de l'oxygène. Ainsi, une peau ayant subi un fort stress oxydatif suite à l'exposition à divers agents extérieurs tels que les rayonnements ultraviolets, la pollution, un stress thermique ou encore diverses toxines telles que des agents chimiques (tabac, métaux lourds, pollution atmosphérique...), peut présenter un vieillissement cutané accéléré et des signes de vieillissement cutané. Les signes du vieillissement cutané peuvent se traduire notamment par : un teint terne et/ou gris, un teint inhomogène, une perte de radiance et/ou de transparence de la peau, la formation précoce de rides ou ridules, une perte de douceur, de souplesse et d'élasticité de la peau, l'apparition de tâches pigmentaires, en particulier de lentigo actiniques.

Comme il ressort des exemples ci-après, la présente invention permet avantageusement de disposer d'un nouvel actif particulièrement efficace à l'égard de ces signes du vieillissement cutané, causés par une génération excessive de stress oxydant. Avantageusement, un actif conforme à l'invention est susceptible de prévenir l'apparition des signes du vieillissement cutané.

L'actif considéré selon l'invention permet encore avantageusement de traiter la peau endommagée par le stress oxydatif et présentant notamment des signes de vieillissement cutané. En conséquence, les utilisations cosmétiques, procédés cosmétiques et compositions selon l'invention, s'avèrent tout particulièrement efficaces : - pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané teint terne et/ou gris, teint inhomogène, perte de radiance et/ou de transparence de la peau, formation précoce de rides ou ridules, perte de douceur, de souplesse et d'élasticité de la peau, apparition de tâches pigmentaires) - pour prévenir et/ou traiter les désordres, notamment esthétiques, des peaux âgées, associés à un excès de stress oxydatif notamment d'espèces réactives de l'oxygène - pour conférer une sensation de bien être cutané - pour améliorer et/ou rétablir un équilibre de la production d'espèces réactives de l'oxygène - pour préserver et/ou renforcer l'intégrité des fonctions barrières de la peau De manière générale, la présente invention vise une composition comprenant, comme principal agent actif, un lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment l'espèce : Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet.

Toutefois, la composition comprenant, outre un lysat conforme à l'invention dans un milieu de fermentation complet, peut comprendre au moins un actif cosmétique additionnel distinct.

Actif cosmétique additionnel Avantageusement, un tel actif cosmétique additionnel peut être destiné à exercer un effet cosmétique de la peau.

Il peut notamment s'agir d'un microorganisme probiotique, et/ou une de ses fractions, et/ou un de ses métabolites, distinct de ladite bactérie considérée dans l'actif selon l'invention et/ou de la culture complète de ce microorganisme. a) Microorganisme probiotique Au sens de la présente invention, on entend par « microorganisme probiotique », un microorganisme vivant qui, lorsqu'il est consommé en quantité adéquate, a un effet positif sur la santé de son hôte (« Joint FAO/WHO Expert Consultation on Evaluation of Health and Nutritional Properties of Probiotic in Food Including Powder Milk with Live Lactic Acid Bacteria, 6 octobre 2001 »), et qui peut en particulier améliorer l'équilibre microbien intestinal. Selon un mode de réalisation, un microorganisme probiotique convenant à l'invention peut être choisi parmi des Lactobacillus sp., des Bifidobacterium sp., des Cocci, des levures, des bactéries sporulées, et leurs mélanges. Selon un mode de réalisation, un microorganisme convenant à l'invention est préférentiellement choisi parmi : - les bactéries lactiques : qui produisent par fermentation du sucre de l'acide lactique. Suivant leur morphologie on les divise en deux groupes : Lactobacillus species : Lactobacillus acidophilus, amylovorus, casei, rhamnosus, brevis, crispatus, delbrueckii (subsp bulgaricus, lactis), fermentum, helveticus, gallinarum, 20 gasseri, johnsonii, plantarum, reuteri, salivarius, alimentarius, curvatus, casei subsp. casei, sake, et Cocci : Enterococcus (faecalis, faecium), Lactococcus lactis (subsp lactis ou cremoris), Leuconostoc mesenteroides subsp dextranicum, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Streptococcus salvarius subsp. thermophilus, Streptococcus 25 thermophilus, Staphylococccus carnosus, Staphylococcus xylosus, - les bifidobactéries ou Bifidobacterium species : Bifidobacterium adolescentis, animalis, bifidum, breve, lactis, longum, infantis, pseudocatenulatum, - les levures : Saccharomyces (cerevisiae ou encore boulardii), - les autres bactéries sporulées : Bacillus (cereus var toyo ou subtilis), Bacillus coagulans, Bacillus licheniformis, Escherichia cou strain nissle, Propionibacterium freudenreichii, - et leurs mélanges.

Un microorganisme convenant à l'invention peut être choisi notamment parmi les ascomycètes telles que Saccharomyces, Yarrowia, Kluyveromyces, Torulaspora, Schizosaccharomyces pombe, Debaromyces, Candida, Pichia, Aspergillus et Penicillium, des bactéries du genre Bifidobacterium, Bacteroides, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus, Oenococcus et Lactobacillus, et leurs mélanges. Un tel microorganisme peut être formulé dans une composition à raison d'au moins 0,0001 % exprimé en poids sec, en particulier à raison de 0,0001 à 20 % et plus particulièrement à raison de 0,001 à 15 % en poids, en particulier de 0,01 à 10 % en poids, et notamment de 0,1 % à 2 % en poids par rapport au poids total de la composition le contenant. Formulation galénique Une composition contenant l'actif selon l'invention peut être administrée par voie orale ou topique.

Une composition selon l'invention comprend avantageusement une quantité de lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment l'espèce Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet allant de 0,001% à 10% en poids, par rapport au poids total d'extrait sec de ladite composition. Dans certains modes de réalisation, une composition selon l'invention comprend avantageusement une quantité de lysat de bactérie (s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment l'espèce Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet allant de 0,01% à 5% en poids, par rapport au poids total d'extrait sec de ladite composition. Dans d'autres modes de réalisation, une composition selon l'invention comprend avantageusement une quantité de lysat de bactérie (s) appartenant au genre Vitreoscilla sp. (Notamment l'espèce Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet allant de 0, 1% à 1% en poids, par rapport au poids total d'extrait sec de ladite composition.

Elle peut donc se présenter sous toutes les formes galéniques normalement disponibles pour le mode d'administration retenu. Le support peut être de nature diverse selon le type de composition considérée. En ce qui concerne plus particulièrement les compositions destinées à une administration par voie topique externe, il peut s'agir de solutions aqueuses, hydroalcooliques ou huileuses, de solutions ou dispersions du type lotion ou sérum, d'émulsions de consistance liquide ou semi-liquide du type lait, obtenues par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou de suspensions ou émulsions, de consistance molle, semi-solide ou solide, du type crème, de gel aqueux ou anhydre, de microémulsions, de microcapsules, de microparticules, ou de dispersions vésiculaires de type ionique et/ou non ionique. Une composition par voie topique selon l'invention peut avantageusement être formulée sous toute forme galénique convenant au soin de la peau, notamment sous forme d'une lotion cutanée, d'une crème ou d'un gel cutané, d'un produit de soin de la peau notamment anti-âge. Comme émulsionnants utilisables dans l'invention, on peut citer par exemple le stéarate de glycérol, le polysorbate 60, le mélange alcool cétylstéarylique/alcool cétylstéarylique oxyéthyléné à 33 moles d'oxyde d'éthylène vendu sous la dénomination Sinnowax AO° par la société HENKEL, le mélange de PEG-6/PEG-32/Glycol Stéarate vendu sous la dénomination de Tefose° 63 par société GATTEFOSSE, le PPG-3 myristyl éther, les émulsionnants silicones tels que le cétyldiméthicone copolyol et le mono- ou tristéarate de sorbitane, le stéarate de PEG-40, le monostéarate de sorbitane oxyéthyléné (200E). Comme solvants utilisables dans l'invention, on peut citer les alcools inférieurs, notamment l'éthanol et l'isopropanol, le propylène glycol.

La composition de l'invention peut également contenir de façon avantageuse une eau thermale et/ou minérale, notamment choisie parmi l'eau de Vittel, les eaux du bassin de Vichy et l'eau de la Roche Posay. Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer les polymères carboxyliques tel que le carbomer, les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides et notamment le mélange de polyacrylamide, C13-14-Isoparaffine et Laureth-7 vendu sous le nom de Sepigel 305 par la société SEPPIC, les polysaccharides comme les dérivés cellulosiques tels que les hydroxyalkylcelluloses et en particulier les hydroxypropylcellulose et hydroxyéthylcellulose, les gommes naturelles telles que les guar, caroube et xanthane et les argiles.

Comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras comme les stéarates d'aluminium et la silice hydrophobe, ou encore l'éthylcellulose et le polyéthylène. Procédé de traitement cosmétique Comme indiqué précédemment, un procédé selon l'invention peut être mis en oeuvre, par voie topique, notamment par application sur la peau d'au moins un lysat de bactérie appartenant au genre Vitreoscilla sp. (notamment, espèce: Vitreoscilla filiformis) dans un milieu de fermentation complet à titre d'actif pour prévenir et/ou traiter les signes du vieillissement cutané notamment associés à un stress oxydatif et une production excessive d'espèces réactives de l'oxygène, et plus particulièrement d'une composition cosmétique telle que définie précédemment. Avantageusement, un procédé de l'invention par voie topique peut comprendre l'application d'une composition conforme à l'invention, par exemple sous la forme de crèmes de nettoyage, des lotions, ou des gels. Selon une variante de réalisation, le procédé de l'invention peut comprendre l'application topique sur la peau d'au moins un actif selon l'invention par exemple sous forme de crème, de gels, de sérums, de lotions. Un procédé cosmétique topique selon l'invention peut être mis en oeuvre de façon journalière par exemple, à raison par exemple d'une administration unique par jour ou d'une administration deux fois par jour, par exemple une fois le matin et une fois le soir.

Un procédé cosmétique topique selon l'invention peut être mis en oeuvre sur une période de temps variant d'une semaine à plusieurs semaines, voire plusieurs mois, cette période pouvant par ailleurs être répétée après des périodes de non traitement, pendant plusieurs mois voire plusieurs années. A titre d'exemple, l'administration par voie topique d'un composé selon l'invention peut être répétée, par exemple, 2 à 3 fois par jour, ou plus, et généralement sur une durée prolongée d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption. Dans la description et dans les exemples suivants, sauf indication contraire, les pourcentages sont des pourcentages en poids et les plages de valeurs libellées sous la forme « entre ... et ... » incluent les bornes inférieure et supérieure précisées. Les exemples ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif du domaine de l'invention. Légende des figures : Figure 1 : Mesures de l'oxydation mitochondriale après induction, en présence ou non du principe actif (R0000415R001 P003) Figure 2: Effet du R0000415R001P003 sur le % des cellules epidermiques ROS+ Figure 3 : Comparaison du lysat de bactéries de l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet (tel que invention 415R) au surnageant d'un milieu de fermentation de Vitreoscilla filiformis(415A). Exemples EXEMPLE 1 Préparation d'un actif conforme à l'invention Le milieu complet de fermentation est obtenu au moyen d'une culture de la souche Vitreoscilla filiformis, dans son milieu de culture complet. Le milieu de culture initial pour l'obtention du milieu de fermentation complet est de composition décrite dans le Tableau 1 ci-dessous.

Tableau 1 Nom chimique [c] Extrait autolytique de levure 4 g/1 Peptone papainique de soja F 3 g/1 Glucose - Roférose 3 g/1 KH2PO4 0.088 g/1 CaC12 0.050 g/1 CuSO4, 5 H2O 60 p. g/1 MnSO4, 1H20 152 p. g/1 KI 20 1.1g/1 ZnSO4, 7H20 200 lag/1 AlC13, 6H20 100 p. g/1 eau osmosée qsp 1 1 Pour obtenir un actif cosmétique selon l'invention, c'est-à-dire dans cet exemple un lysat de bactéries Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet, on a procédé comme décrit ci-après. La souche Vitreoscilla filiformis a été obtenue auprès de l'ATCC (souche 15551).

Cette souche est cultivée dans un milieu de culture particulier 2BHG2, dont la composition est donnée ci-dessus. La biomasse est obtenue par une culture continue dans un bioréacteur de 3500 litres utiles. Un taux de croissance d'environ 60% du iamax (la = 0.12 11-1) est enregistré durant la phase de production en continu. Durant cette étape, nous contrôlons le pH (7.00 ± 0.2), la température (26°C ± 1) et l'oxygène dissous (0/5%). L'extraction et la séparation des cellules est obtenu par centrifugation (10 000 g/ 20mn). La biomasse est congelée à -20°C puis la biomasse une fois décongelée est conditionnée en poches (rupture de stérilité) et est stabilisée par stérilisation à 121°C pendant 30mn. La biomasse est ensuite appelée Vfe. Les analyses de spécification de la biomasse sont les suivantes : - Résidu fixe à 105°C (g/100g) : 4.0 à 4.5% - Teneur en azote total sur MA : 10.0 à 14.0% - Microbiologie : 0 germe/g - Teneur en acide 3-hydroxybutyrique : 2 à 10 g/1 (<10 g/1) - pH de la solution en état : 4 à 5. Le milieu de fermentation est la culture complète, obtenue durant la fermentation en continu. Le glucose du milieu de départ a été consommé par les p.-organismes (p.-contrôlé par la source de carbone), ainsi que divers éléments des peptones et extrait de levure apportés au départ. Le milieu de fermentation actuellement testé est prélevé directement du fermenteur, puis subit le barème de stérilisation. Le MF qui est la culture complète non concentrée (0.7 à 0.9% de MS) est autoclavée (30 mn 121°C), ainsi que le lysat (4.0 à 4.5% de MS). EXEMPLE 2 : Mesures de l'oxydation mitochondriale après induction, en présence ou non du principe actif (R0000415R001 P003) (Figures 1 et 2) La méthode pour mesurer l'oxydation dans la cellule consiste à mesurer celle-ci au niveau de la mitochondrie de cellules épidermiques. Cette méthode repose sur la cytométrie en flux et l'utilisation de traceurs fluorescents des espèces réactives de l'oxygène (ROS). Ces traceurs sont différentiellement sensibles à l'oxydation mitochondriale. L'oxydation induite par les extraits de lysats bactériens testés (R0000415R001 P003) a été mise en évidence (Figures let 2) au niveau des mitochondries par la mesure conjointe des marqueurs "mitotracker Green" (non sensibles à l'oxydation) et "mitotracker Deep Red" (sensibles à l'oxydation). Dans le but de mesurer l'efficacité de l'actif sur la production de ROS, ceux-ci doivent être préalablement induits dans la cellule cible. Le découplage de la chaine respiratoire de la mitochondrie va entrainer la production de ROS. Ainsi, la roténone, nigericine qui inhibe le complexe I de la chaine respiratoire de la mitochondrie va engendrer le découplage de la chaîne respiratoire, et permettre d'augmenter la production de ROS.

Le LPS entraîne aussi une libération de ROS Dès lors, l'efficacité de l'extrait bactérien sur la production de ROS peut être déterminée.

La production de ROS est induite en présence de roténone grâce au découplage de la chaîne respiratoire mitochondriale. L'effet de l'extrait bactérien R0000415R001 P003 à dose croissante sur la production de ROS est observé (Figures let 2). On observe une diminution de la quantité de ROS en présence de l'extrait bactérien R0000415R P003. Cela signifie que l'extrait de lysat bactérien tel que décrit dans la présente invention est capable de diminuer la quantité de ROS au sein des mitochondries des cellules épidermiques, permettant ainsi de limiter et/ou diminuer les effets néfastes tels que le vieillissement cutané engendrés par le stress oxydant (Figures 1 et 2). EXEMPLE 3 : Comparaison du lysat de bactéries de l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet (tel que invention 415R) au surnageant d'un milieu de fermentation de Vitreoscilla filiformis(415A). Dans une cellule normale stressée par les diverses manipulations 10% des mitochondries 20 produisent des ROS Cette production a été accrue par différents découplants de la fonction mitochondriale: nigericin et rotenone ou bien LPS de E.coli Le lysat de bactéries de l'espèce Vitreoscilla filiformis dans un milieu de fermentation complet (415R) inhibe de façon significativement plus efficace la production de ROS 25 comparé au surnageant d'un milieu de fermentation de Vitreoscilla filiformis(415A).

Claims (7)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation cosmétique. non thérapeutique, à titre de principe actif u'un lysat de bactéries du genre Vitreescilla sp. dans un milieu de fermentation complet. au sein d'une. composition, destinée à prévenir etiou traiter le vieillissement cutané.
2. 2. Utilisation selon la revendication 1 dans laquelle - le milieu de fermentation complet contient les fractions cytoplasmiques, les fragments de paroi cellulaire et les métabolites formés et/ou libérés lors de fa lyse cellulaire de ladite bactérie et les métabolites hydrosolubles générées et libérées spontanément par la bactérie lors de son processus de fermentation.
3. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2 dans laquelle le vieillisse cutané est du au stress oxydatif.
4. 4. Utilisation selon l'une quelconque. des revendications précédente dans laquelle ledit vieillissement cutané est le vieillissement cutané intrinsèque de la peau du au stress oxydatif.
5. 5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle ladite bactérie est la souche f 7treoscilla
6. 6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes dans laquelle ladite bactérie est la souche Vitreas-cilla (ATCC 15551).
7. 7..Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes dans lacp.iellc la composition est sous forme de crine, de gels, de sérums, de. lotions.Procédé cosmétique, non thérapeutique, de la peau pour prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané d'un individu comprenant au moins une étape d'administration audit individu d'au moins un lysat de bactérie(s) appartenant au genre Vitreoseilla sp. dans un milieu de fermentation complet. Procédé selon la revendication 8 caractérisé en ce que ladite administration io est mise en 1.'uvre par voie topique.