JPH05310668A

JPH05310668A - 新規ロイシン誘導体並びにそれを含有する抗アレルギー剤及び抗炎症剤

Info

Publication number: JPH05310668A
Application number: JP11490992A
Authority: JP
Inventors: Toshimasa Yasuhara; 利正安原; Yoko Higaki; 洋子檜垣; Yoshiro Sato; 吉朗佐藤
Original assignee: Meiji Milk Products Co Ltd
Current assignee: Meiji Dairies Corp
Priority date: 1992-05-07
Filing date: 1992-05-07
Publication date: 1993-11-22

Abstract

(57)【要約】【構成】下記一般式（１）で表わされる〔（２Ｓ，３
Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタ
ノイル〕−Ｌ−ロイシンのエステル化物並びに該化合物
を有効成分とする抗アレルギー剤及び抗炎症剤。【化１】（式中、Ｒはアルキル基を示す。）【効果】生体内でＬＴＢ₄生成を抑制し、気管支喘息
などのアレルギー疾患、各種炎症、虚血−再灌流障害等
の治療・予防に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規ロイシン誘導体に
関し、さらに詳しくは生体内のロイコトリエンＡ₄（Ｌ
ＴＡ₄）からロイコトリエンＢ₄（ＬＴＢ₄）への反応を
触媒するＬＴＡ ₄ヒドロラーゼの活性阻害作用を有する
新規ロイシン誘導体とそれを有効成分とする抗アレルギ
ー剤及び抗炎症剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】気管支喘息などのアレルギー性疾患や各
種炎症には、ヒスタミン、セロトニン、プロスタグラン
ジン（ＰＧ）、ロイコトリエン（ＬＴ）、トロンボキサ
ン（ＴＸ）、リボキシン（ＬＸ）、血小板活性化因子、
リゾレシチン、各種リンホカインなど多数の因子が関与
している。

【０００３】生体内のアラキドン酸代謝系に異常が起こ
ると、細胞内においてＰＧ、ＬＴ、ＴＸなどのアラキド
ン酸代謝産物の過不足が生じて血管透過性亢進、気管支
収縮、血小板凝集促進反応等が生じ、各種炎症やアレル
ギー性疾患の原因となる。

【０００４】そこで、アラキドン酸代謝系に異常をもた
らす種々の酵素の活性を阻害する薬剤が種々開発されて
いる。例えばシクロオキシゲナーゼ活性を阻害し、その
結果ＰＧ生成を抑制することにより抗炎症作用を示す薬
剤として、アスピリンやインドメタシンなど非ステロイ
ド系抗炎症剤がある。しかし、これらはＰＧ系が関与す
る炎症には有効であるものの、ＬＴに起因する炎症を抑
制する作用は有しない。

【０００５】ＬＴ生成系においては、初発酵素である５
−リポキシゲナーゼによってアラキドン酸よりＬＴＡ₄
が生成される。ＬＴＡ₄はＬＴＣ₄シンセターゼによって
ペプチドＬＴであるＬＴＣ₄、ＬＴＤ₄、ＬＴＥ₄等へと
導かれる。ペプチドＬＴは、気管支喘息の原因物質ＳＲ
Ｓ−Ａ（アナフィラキシーの遅反応性物質：ｓｌｏｗｒ
ｅａｃｔｉｎｇｓｕｂｓｔａｎｃｅｏｆａｎａｐ
ｈｙｌａｘｉｓ）の本体であり、気管支平滑筋の収縮、
粘膜の腫脹、粘液分泌の亢進を引き起こす。

【０００６】一方、ＬＴＡ₄ヒドロラーゼが作用すると
ＬＴＡ₄はＬＴＢ₄に変換される。ＬＴＢ₄は極めて強力
な白血球誘引作用と白血球活性化作用を有するため、生
体内の局所でＬＴＢ₄が生成すると血流中の白血球を強
力に誘引し、その結果血管外へ浸潤した白血球によって
炎症反応が引き起こされる。実際、関節リュウマチ患者
や痛風発作中の関節液、乾癬の皮膚組織中などに高濃度
のＬＴＢ₄が検出される。

【０００７】また、各種臓器における虚血−再灌流障害
においても再灌流心筋組織中に明らかな白血球の浸潤及
びアラキドン酸リポキシゲナーゼ代謝物質産生が観察さ
れており（例えばＫｕｚｕｙａ，Ｔ．，Ｈｏｓｈｉｄ
ａ，Ｓ．ら、Ｊｐｎ．Ｃｉｒｃ．Ｊ．，５１，４６５，
（１９８９））、虚血−再灌流心筋組織障害に対するＬ
Ｔの関与が示唆されている。

【０００８】このように気管支喘息、各種炎症反応及び
虚血−再灌流障害へのＬＴの関与が注目され、ＬＴ生成
の初発酵素である５−リポキシゲナーゼ活性阻害能を有
する化合物の研究開発が盛んになされている。

【０００９】ところで、ＬＴＢ₄の生合成を触媒する酵
素であるＬＴＡ₄ヒドロラーゼ活性阻害能を有する物質
の検索は、現在まで殆どなされていない。わずかに、最
近ＬＴＡ₄ヒドロラーゼが、そのアミノ酸配列の解析の
結果、種々のアミノペプチダーゼと高い相同性を有する
ことが見いだされ（Ｖａｌｌｅｅ，Ｂ．Ｌ．、Ａｕｌ
ｄ，Ｄ．Ｓ．、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２９，５６
４７．（１９９０））、実際ＬＴＡ₄ヒドロラーゼはア
ミノペプチダーゼ活性を有することが証明された（例え
ば、Ｈａｅｇｇｓｔｒｏｍ，Ｊ．Ｚ．，Ｗｅｔｔｅｒｈ
ｏｌｍ，Ａ．，Ｖａｌｌｅｅ，Ｂ．Ｌ．，Ｓａｍｕｅｌ
ｓｓｏｎ，Ｂ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１７３，４３１．（１９９
０））。このことから、アミノペプチダーゼの活性を阻
害する物質として知られるものが、同時にＬＴＡ₄ヒド
ロラーゼ活性を阻害し得ると考えられた。

【００１０】このようなアミノペプチダーゼ阻害物質の
１つとしてストレプトマイセスオリボレティキュリ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｏｌｉｖｏｒｅｔｉｃｕ
ｌｉ）培養液の上澄から見出された〔（２Ｓ，３Ｒ）−
３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタノイ
ル〕−Ｌ−ロイシン（以下ウベニメクスということがあ
る）が試みられ（Ｕｍｅｚａｗａ，Ｈ．，Ａｏｙａｇ
ｉ，Ｔ．，Ｓｕｄａ，Ｈ．，Ｈａｍａｄａ，Ｍ．，Ｔａ
ｋｅｕｃｈｉ，Ｔ．ら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，２
９，９７．（１９７６））、ウベニメクスがＬＴＡ₄ヒ
ドロラーゼ活性阻害すなわちＬＴＢ₄生成阻害を示すこ
とが確認された（Ｏｒｎｉｎｇ，Ｌ．，Ｋｒｉｖｉ，
Ｇ．，Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，Ｆ．Ａ．ら、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１３７５．（１９９１））。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記Ｏ
ｒｎｉｎｇらの報告にあるように、ウベニメクスは、精
製ＬＴＡ₄ヒドロラーゼの活性は強く阻害するものの、
無傷好中球によるＬＴＢ₄の生成はそれほど阻害しない
（最大４０％）。好中球は、マクロファージとともに生
体内におけるＬＴＢ₄生成の主要細胞をなす（Ｒｏｂｅ
ｒｔ，Ａ．Ｌ．，Ａｕｓｔｅｎ，Ｋ．Ｆ．ら、Ｊ．Ｃｌ
ｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７３，８８９．（１９８４））
ものであるため、細胞レベルすなわち好中球等によるＬ
ＴＢ₄生成に対するウベニメクスの阻害作用が不十分な
ものであるという事実は、該物質を医薬用途に供しよう
とするとき大いに問題となる。

【００１２】そこで、好中球等によるＬＴＢ₄生成に対
しても十分な阻害作用を発揮し得る新規物質の開発が望
まれていた。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、かかる実
情に鑑み鋭意検討した結果、ウベニメクスのエステル化
物が、驚くべきことに、好中球によるＬＴＢ₄生成を効
率的に抑制することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。

【００１４】すなわち、本発明は、下記一般式（１）

【００１５】

【化２】

【００１６】（式中、Ｒはアルキル基を示す。）で表わ
される〔（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ
−４−フェニルブタノイル〕−Ｌ−ロイシンのエステル
化物を提供するものである。

【００１７】本発明は、さらに、上記化合物（１）を有
効成分とする抗アレルギー剤及び抗炎症剤を提供するも
のである。

【００１８】本発明の化合物（１）のアルキル基Ｒは炭
素数１〜６のものが好ましく、なかでもメチル基、エチ
ル基等が特に好ましい。

【００１９】本発明の化合物（１）はウベニメクスにエ
ステル化反応を施すことにより得られる。エステル化
は、公知の方法により行なうことができる。例えばウベ
ニメクスを酸塩化物とした後アルコールと反応させる方
法、ウベニメクスとアルコールとを少量の酸の存在下で
反応させる方法等が挙げられる。高収率で目的のエステ
ル化物が得られる点で前者は優れ、反応を、大過剰のア
ルコール中、一段階で容易になしうる点で後者は優れ
る。

【００２０】さらに、高純度の化合物（１）を得るに
は、上記反応による生成物を、例えば逆相カラム等を用
いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン
交換クロマトグラフィー等で精製分取すればよい。

【００２１】本発明の化合物（１）を有効成分とする抗
アレルギー剤又は抗炎症剤は、該化合物（１）をそのま
ま又は公知の担体、賦形剤等を用いることにより錠剤、
カプセル剤、液剤、注射剤、座剤等の剤型として経口的
に又は非経口的に投与することができる。

【００２２】投与量は、その対象、径路、症状等により
異なるが、例えば成人の気管支喘息に対し投与する場合
には通常１日０．１〜５０mg／kg（体重）程度投与す
る。

【００２３】なお、本発明の化合物（１）は、モルモッ
ト腹腔内において刺激剤で遊走浸出させ、採取分離した
好中球を用いた細胞毒性試験により、有効濃度（５０μ
Ｍ）以上でも細胞障害をひき起さないことが確認されて
いる。

【００２４】

【発明の効果】本発明の化合物は、生体内のアラキドン
酸カスケード中でＬＴＡ₄ヒドロラーゼの活性を効率的
に阻害することにより、その代謝産物であるＬＴＢ₄の
生成を抑制することができる。従って、本発明の化合物
を有効成分とする抗アレルギー剤又は抗炎症剤は気管支
喘息などのアレルギー疾患、各種炎症、虚血−再灌流障
害等の治療・予防に極めて有用なものである。

【００２５】

【実施例】以下に本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明はこれに限定されるものではない。

【００２６】実施例１ウベニメクス（日本化薬社製）３mgを５％塩酸−メタノ
ール溶液０．２mlと６０℃で３時間反応させ、反応終了
後真空乾固してウベニメクスメチルエステルを得た。

【００２７】上記５％塩酸−メタノール溶液を５％塩酸
−エタノール溶液に替え、他は同様にしてウベニメクス
エチルエステルを得た。

【００２８】ウベニメクスのエステル化は、逆相オクタ
デシル（ＯＤＳ）カラムを用いたＨＰＬＣ及び質量分析
により確認した。結果を図１及び図２に示す。図１〜３
は、ＯＤＳ−カラム（ＣｏｓｍｏｓｉｌＣ₁₈，６×２
５mm、ナカライテスク社製）を用いたＨＰＬＣによる分
析結果を示す。

【００２９】溶出は１０％アセトニトリル−０．１％ト
リフルオロ酢酸（ＴＦＡ）から５０％アセトニトリル−
０．１％ＴＦＡへの３０分間の直線濃度勾配で行った。
流速は１．５ml／分としλ＝２２０ｎｍでウベニメクス
及びウベニメクスのエステル化物をモニターした。リテ
ンションタイム１２分のウベニメクス（図１）がエステ
ル化され、それぞれウベニメクスメチルエステル（１
３．５分、図２）、ウベニメクスエチルエステル（１
４．８分、図３）へ溶出位置が移動した。収率はそれぞ
れ９３％、８８％であった。

【００３０】図４〜６は質量分析の結果を示すものであ
り、分子量３０８（実測値はＭｒ＋１で示される）のウ
ベニメクス（図４）がエステル化によりウベニメクスメ
チルエステル（分子量３２２、図５）及びウベニメクス
エチルエステル（分子量３３６、図６）に変換されたこ
とが確認された。

【００３１】試験例１（ウベニメクスのエステル化物による好中球ＬＴＢ₄生
成阻害−濃度依存性）ＬＴＢ₄生成細胞としてモルモッ
ト腹腔内において刺激剤で遊走浸出させ、採取分離した
好中球を用いた。すなわち、体重５００ｇ前後のモルモ
ットの腹腔内に５％カゼイン−ナトリウム溶液５０mlを
投与して約１６時間後腹腔内浸出液を採取し、遠心分離
や低張処理による赤血球の溶血除去により好中球を分離
した。１．４ｍＭＣａ²⁺、０．８ｍＭＭｇＣｌ₂を
含むハンクス液−２０ｍＭＨＥＰＥＳ（pH７．２）に
懸濁した好中球（０．５ml中１×１０⁷細胞数）を０〜
５０μＭの各試剤と１０分間、２５℃で保持し、前処理
とした。続いて基質として最終濃度１００μＭのアラキ
ドン酸、刺激剤として５μＭのカルシウムイオノフォア
Ａ２３１８７（シグマ社製）を加え、２５℃で１０分間
ロイコトリエン生成反応を行った。１ＮＨＣｌ５０
μｌを添加して反応を停止させた後、内部標準として１
５０ｐｍｏｌ．のプロスタグランジンＢ₂（ＰＧＢ₂）を
加え、１mlの酢酸エチルによりロイコトリエンを抽出し
た。抽出操作は２回行い、得られた抽出液を窒素ガスに
より吹き付け乾固後、３０μｌのメチルアルコールに溶
解しＨＰＬＣ分析の試料に供した。

【００３２】ＨＰＬＣはＯＤＳ−カラムを用い展開溶媒
を３６％アセトニトリル−１４％メタノール１５ｍＭ酢
酸−アンモニア（pH６．６）として溶出液をλ＝２７０
ｎｍで検出し、ＰＧＢ₂を内部標準として各出現ピーク
の積分値より定量した。図７〜８にその結果を示す。

【００３３】図７に示される結果より明らかなように、
ＬＴＢ₄の生成はウベニメクスにより阻害を受け５０μ
Ｍ濃度でその生成は３７％になり、又、５０％阻害濃度
ＩＣ ₅₀は３０μＭであった。ウベニメクスのエステル化
物はより強くＬＴＢ₄の生成を阻害し、５０μＭのメチ
ルエステル、エチルエステルで各々ＬＴＢ₄の生成を２
１％、１５％まで減少させた。ＩＣ₅₀は各々６μＭ及び
５μＭでありウベニメクスのエステル化物はウベニメク
スに比べ５〜６倍強く好中球によるＬＴＢ₄生成を阻害
することが示された。

【００３４】一方、コントロールとして用いたウベニメ
クスに類似した構造を持つＰｈｅ−Ｌｅｕメチルエステ
ルは５０μＭ添加しても全く阻害作用を示さず、ウベニ
メクスのエステル化物のＬＴＢ₄生成阻害能がエステル
化ジペプチド様物質に由来するものではないことがわか
った。

【００３５】さらに、図８に示されるように、ＬＴＡ₄
ヒドロラーゼを阻害する結果蓄積することが期待される
ＬＴＡ₄量（ＨＰＬＣ分析においてはその分解物６−ト
ランス−ＬＴＢ₄及び５，６−ジ−ＨＥＴＥとして同定
定量される）は、ＬＴＢ₄の生成量に逆比例しており、
ウベニメクスのエステル化物は白血球内のＬＴＡ₄ヒド
ロラーゼを特異的に、しかもウベニメクスよりも効果的
に阻害することがわかった。

【００３６】試験例２（ウベニメクスのエステル化物による好中球ＬＴＢ₄生
成阻害−前処理時間依存性）エステル化ウベニメクスに
よる白血球ＬＴＢ₄生成阻害における前処理時間の影響
を検討した。試験例１の条件下で各阻害剤（５μＭ）と
好中球を２５℃、１０〜６０分間保持した後アラキドン
酸及びカルシウムイオノフォアＡ２３１８７を加え、１
０分間ロイコトリエン生成反応を行った。図９に結果を
示す。ウベニメクスによる前処理では６０分後において
も６３ｐｍｏｌ．（６０分後におけるコントロールとの
比では８１％）のＬＴＢ₄が依然生成された。

【００３７】一方、ウベニメクスメチルエステル及びウ
ベニメクスエチルエステルは、６０分後にはＬＴＢ₄生
成量をそれぞれ１７ｐｍｏｌ．及び１６ｐｍｏｌ．（６
０分後におけるコントロールとの比ではそれぞれ２２％
及び２１％）まで減少させた。ウベニメクスのエステル
化物、特にウベニメクスエチルエステルの白血球ＬＴＢ
₄生成阻害は速やかであり、１０分以内に強い阻害作用
を示した。

【図面の簡単な説明】

【図１】ウベニメクスのＨＰＬＣ分析結果を示す図であ
る。

【図２】ウベニメクスメチルエステルのＨＰＬＣ分析結
果を示す図である。

【図３】ウベニメクスエチルエステルのＨＰＬＣ分析結
果を示す図である。

【図４】ウベニメクスの質量分析結果を示す図である。

【図５】ウベニメクスメチルエステルの質量分析結果を
示す図である。

【図６】ウベニメクスエチルエステルの質量分析結果を
示す図である。

【図７】ウベニメクス、ウベニメクスメチルエステル、
ウベニメクスエチルエステル等による好中球ＬＴＢ₄生
成阻害の濃度依存性を示すグラフである。

【図８】ウベニメクス、ウベニメクスメチルエステル、
ウベニメクスエチルエステル等によるＬＴＡ₄蓄積の濃
度依存性を示すグラフである。

【図９】ウベニメクス、ウベニメクスメチルエステル、
ウベニメクスエチルエステル等による好中球ＬＴＢ₄生
成阻害の前処理時間依存性を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式（１）で表わされる〔（２
Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニ
ルブタノイル〕−Ｌ−ロイシンのエステル化物。【化１】（式中、Ｒはアルキル基を示す。）
【請求項２】請求項１記載の化合物（１）を有効成分
とする抗アレルギー剤。
【請求項３】請求項１記載の化合物（１）を有効成分
とする抗炎症剤。