JPS60228414A - １２−リポキシゲナ−ゼ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は１２−１ポキシゲナーゼ阻害活性を有するトロ
ポロン又はその誘導体を含有してなるＩ２−リポキシゲ
ナーゼ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤に関するも
のである。

更に詳しくは、本発明は一般式（１） 〔式中、Ｒ３−Ｒ７は水素、低級アルキル基、水酸基、
アミノ基、低級アルコキシ基、ハロゲン。

モノもしくはジ低級アルキルアミノ基、カルボキシル基
又は低級アルキルオキシカルボニル基を示す。）で示さ
れるトロポロン又はその誘導体〔以下、化合物（Ｉ）と
いう〕を有有効分として含有してなる１２−リポキシゲ
ナーゼ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤に関する。

１２−リポキシゲナーゼは、アラキドン酸のＣ−１２位
に酸素を添加する酵素であり、最初血小板で発見されて
以来、白血球、リンパ球をはじめ平滑筋などの種々の組
織でその活性が見出されている。その代謝産物には、１
２−ヒドロキシエイコサテトラエン酸（１２−ｈｙｄｒ
ｏｘｙｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃａｃｉｄ）　
（以下、ｌ　２−ＨＥＴＥという）や１２−ヒドロキシ
パーオキシエイコサテトラエン酸や５Ｓ、１２５−ジヒ
ドロキシエイコサテトラエン酸などが知られており、こ
れらの代謝産物は白血球遊走作用、好中球誘引作用、血
小板のトロンボキサン合成酵素阻害作用、プロスタサイ
クリン合成酵素阻害作用、冠動脈収縮作用、平滑筋細胞
遊走作用などの多彩な生理作用を示す。特に１２−ＨＥ
ＴＥの大動脈平滑筋細胞遊走誘起作用は、至適濃度６　
Ｘｌ０−１５ｇ　／ｍｌという非常な低濃度で発現し、
著しく強力であることが最近明らかにされているＩ：Ｊ
、　Ｎａｋａｏ　ら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ
、　４４．３３９−３４２　（１９８２）　］。平滑筋
細胞は動脈硬化形成の中心的役割を担う細胞であり、内
皮傷害により本細胞が中膜より内皮下控へ遊走・侵入し
、内膜にて分裂・増殖し結合組織蛋白を合成・分泌する
。内皮傷害に対する平滑筋細胞のこれら一連の反応がく
り返されることによって動脈硬化病巣が形成されるとい
われているｌ：ＲｏＲｏｓｓ　ａｎｄ　Ｊ、　Ａ、Ｇｌ
ｏｍｓｅｔ。

５ｃｉｅｎｃｅ、　１８０．１３３２−１３３９（１９
７３）　）　、従って動脈硬化形成の初期において平滑
筋細胞の遊走は重要なプロセスであり、この平滑筋細胞
遊走因子として血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）や１２
−ＨＥＴＥが見い出され、これら因子は動脈硬化の原因
物質の１つと考えられている。更に最近になりＰＩ）Ｇ
Ｆの平滑筋細胞遊走作用は主に１１−ＨＥＴＥを介して
いることが明らかとなり［：Ｊ、　Ｎａｋａｏら。

８ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏ
ｍｍｕｎ、、　１１２．８６６（１９８３）　）動脈硬
化形成におけるメディエータとして１２−リポキシゲナ
ーゼ代謝産物が更に注目される結果となった。

本発明者らは、１２−リポキシゲナーゼ代謝産物に起因
する疾患に対する予防治療薬を探索した結果化合物（１
）が１２−リポキシゲナーゼをきわめて強力に阻害し、
その代謝産物の産成を抑制することにより、１２−リポ
キシゲナーゼ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤とし
て有用であることを見い出し、本発明を完成した。

本願発明に使用される化合物（Ｉ）は、既知化合物であ
るか、文献記載の方法によって製造することができる。

化合物（Ｉ）およびその製造法が記載された文献の例を
第１表に示したが、本願発明はこれらによって限定され
るものではない。化合物（１）の製造法として、例えば
化合物２および３はＲ，Ｎｏｙｏｒｉ等ＣＪ、Ａｍ、　
ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、、　１００゜１７７ｇ　（１９７
８）　）の方法により合成することができるし、化合物
４はＨ，Ａ、　Ｋｉｒｓｔ等［Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔ
ｉｃｓ３５、１６５１　（１９８２）　〕の方法により
合成ができる。

化合物５はＵＳ、　４，０５７，５５６　（１９７９）
の方法により合成することができる。また、化合物５お
よび２５はＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｈａｄａｎｏｎ
ｅｎｓｅの培養液中より単離精製することにより製造す
ることもできる（特開昭５３−１３６５８８　＞。

化合物（Ｉ）は、１２−リポキシゲナーゼ活性を強力に
阻害し、動脈硬化症や炎症等の１２−！Ｉポキシゲナー
ゼ代謝産物に起因する疾患の治療・予防に有用であり、
一方毒性も低い。例えばマウス経口投与におけるＬＤ、
。はトロポロンで３００■／ｋｇ、ヒノキチオールで５
１３ｍｇ／ｋｇである。

上記目的のために用いる投与量は、目、的とする治療効
果、投与方法、治療期間、年令、体重、などにより決め
られるが、経口もしくは非経口（例、注射、塗布、吸入
等）のルートにより、通常成人１日当り化合物（１）と
して０．１〜５０　ｍｇ／ｋｇである。投与には、化合
物（Ｉ）自体をそのまま用いることもできるが、一般に
は錠剤、丸薬、散剤、顆粒剤、カプセル剤、半開、注射
剤等が挙げられる。また医薬組成物に使用される担体と
しては、例えばラクトース、デキストロース、シューク
ロース、ソルビトール、マンニトール、ブドウ糖、セル
ロース、シクロデキストリン、タルク、でん粉、メチル
セルロース、ゼラチン、アラビヤゴム、ポリエチレング
リコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプ
ロピルセルロース、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナ
トリウム、ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マ
グネシウム、鉱油、植物油、白色ワセリン、流動パラフ
ィン等が挙げられ、これらは製剤の種類に応じて適宜選
択される。

実験例１゜ 化合物１．３．４および５の１２−リポキシゲナーゼ、
５−リポキシゲナーゼ、サイクロオキシゲナーゼ各酵素
に対する阻害作用を試験管内試験により以下に示す方法
によって測定した。

ａ）　血小板１２−リポキシゲナーゼに対する阻害作用
の測定法： 口、Ｈ，Ｎｕｇｔｅｒｎらの方法１：Ｂｉｏｃｈｅｍ、
ロ１ｏｐｈｙｓ。

＾ｃｔａ、　３８０．２９９（１９７５）　］に準じて
測定した。即ちウシ血小板より調製した標品を酵素源と
して用いた。この血小板リポキシゲナーゼ標品と化合物
１．３．４または５を０．　ＯＩ　Ｍ　）リス塩酸緩衝
液（ｐＨ７，４）中で予め３０℃、５分接触させた後、
〔１４Ｃ〕−アラキドン酸３５μＭを加えて３０℃、１
０分間反応させた。反応生成物を酢酸エチル／メタノー
ル１０．２Ｍ　クエン酸（３０／４／１）で抽出してか
ら薄層クロマトグラフィーで分離して（展開ソルベント
系：リグロイン／エチルエーテル／酢酸、５０／　５０
／１）、生成物中の１２’−ＨＥＴＥのスポットをかき
とり液体シンチレーションカウンターで１４Ｃを測定し
た。

ｂ）　血小板サイクロオキシゲナーゼに対する阻害作用
の測定法： Ｔ、ＹｏｓｈｉｍｏＬｏらの方法［Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　
Ｃｈｅｍ、。

２５２、５８７１（１９７７）　：］に準じて測定した
。即ちウシ血小板より調製したミクロゾームを酵素源と
して用いた。この血小板ミクロゾーム標品と化合物１．
３．４または５を０．０１　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（ｐ
　Ｈ７，４）中で、５ｍＭＬ−）ラットファン、２μＭ
ヘモグロビン、３５．４μＭ［”’Ｃ］−アラキドン酸
とともに２４℃、５分間反応させた。反応生成物を酢酸
エチル／メタノール７０．２Ｍクエン酸（３０／４／１
）で抽出してから薄層クロマトグラフィーで分離して〔
展開ソルベント系：酢酸エチル／石油エーテル／酢酸（
８５／１５１０．１））　、生成物中のトロンボキサン
Ｂ２および１２−ヒドロキシ−５、８，１０−へブタデ
カトリエン酸のスポットをかきとり液体シンチレーショ
ンカウンターで１４ｃを測定した。

Ｃ）白血球５−リポキシゲナーゼに対する阻害作用の測
定法 Ｂ、Ａ、Ｊａｋｓｃｈｉｋら　［Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ。

９５、１０３（１９８０）　）の方法を改変して測定し
た。

即ちラットのＬｅｕｋｅｍｉｃ　ｂａｓｏｐｈｉｌｉｃ
　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ（ＲＢＬ−１，ＡＴＣＣＮｏ
、ＣＲＬ　１３７８　）細胞を５−リポキシゲナーゼ酵
素源として用い、本甲胞と化合物１．３．４または５を
０．７　ｍ　Ｍ強化カルシウム存在下０．０７　Ｍ　）
　ＩＪス塩酸緩衝液中で３７℃５分間接触後、［”Ｃ）
−アラキドン酸２０μＭを加えて３７℃、５分間反応さ
せた。反応生成物を酢酸エチル／メタノール１０．２Ｍ
クエン酸（３０／４／１）で抽出してから薄層クロマト
グラフィーで分離して〔展開ソルベント系：石油エーテ
ル／エチルエーテル／酢酸（５’０１５０／１）：］生
成物中の５−ヒドロキシエイコサテトラエン酸のスポッ
トをかきとり、液体シンチレーションカウンターで”Ｃ
を測定した。

その結果、第２表に示すように化合物１．３．４および
５はいずれも１２−リポキシゲナーゼに対して低濃度に
おいて阻害作用を示すことが明らかになった。それらの
阻害強度を公知化合物ＢＷ−７５５Ｃと比較すると本化
合物の方が顕著に優れていることが認められた。更に、
化合物１．３．４　Ｊよび５は、５−リポキシゲナーゼ
やサイクロオキシゲナーゼを高濃度においても阻害せず
、１２−リポキシゲナーゼにきわめて特異性の高い阻害
剤であることが明らかになった。

このように１２−リポキシゲナーゼのみに特異性を示す
化合物の報告はいままでにみられない。

第　２　表 １）酵素活性を５０％阻害するに要する化合物の濃度実
験例２゜ ＰＤＧＦによる平滑筋遊走誘起作用に対する化　□合物
１の影響を中尾らの方法［Ｊ、　Ｎａｋａｏら、　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ。

口１ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１１２．
８６６（１９８３）　〕に従って調べた。

雄ウィスター系ラット胸部大動脈中膜切片よりＲｏｓｓ
の方法［Ｒ，Ｒｏｓｓ、　Ｊ、　Ｃｃｌ　ｌＢｉｏｌ、
、　５０．１７２（１９７１）　］により中膜平滑筋細
胞を分離・培養し、継代培養１０代以下の細胞を遁走実
験に供した。

１１２滑筋細胞の遊走能はボイデンチャンバー（Ｂｏｙ
ｄｅｎ　ｃｈａｍｂｅｒ）を用いて測定した。直径８μ
ｍＤ孔（ｐｏｒｅ　）を有するミリポアフィルタ−を用
いた。チャンバーの下室に５％牛血清とＰＤＧＦ　（最
終震度１．３３μｇ　／ｍｌ　）を含むイーグル最小培
地（Ｅａｇｌｅ’ｓ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｅｓｓｅｎｔｉ
ａｌ　ｍｅｄｉｕｍ）　（栄研社。

日本）を０．８ｍｌ、チャンバー上室に５％牛血清と５
　ＸＩＯ３の平滑筋細胞を含むイーグル最少培地を１ｍ
ｌ入れた。９５％空気−５％炭酸ガス下で３７℃にて８
時間インキニーベートした後、フィルターの表面から３
０μｍの深さに走った細胞数を顕散鏡下に１０視野数え
、１０視野あたりの平均値として平滑筋細胞の遊走能を
表示した。化合物ＩＤ平滑筋遊走に対する影響は、平滑
筋細胞を予め化合物１と３７℃２分間接触させた後、上
記の方法でその遊走能を測定し、無処理平滑筋細胞の遊
を能と比較することにより判定した。その結果、化合物
１は、ＰＤＧＦによる平滑筋遊走を、低濃宣（１０−５
〜１０−’）において顕著に、また濃度衣存的に抑制す
ることが明らかになった（第３表）。

第３表　ＰＩ）ＧＦによる平滑筋細胞遊走の化合物１に
よる抑制 実施例１　錠剤 化合物１　１００ｇ ラクトース　４０ｇ コーンスターチ　１８ｇ カルボキシメチルセルロースカルシウム　１０ｇ上記混
合物に１０％ヒドロキシプロピルセルロース溶液を加え
て練合する。この練合液を１．０ｍｍのバスケットを取
り付けた押し出し造粒機で造粒し６０℃で乾燥する。得
られた乾燥物を１６メツシユ篩で整粒し、ステアリン酸
マグネシウムを加えて打錠用顆粒とし、常法によりｌ製
剤中（１７０ｍｇ）に化合物１１００ｍｇを含む８ｍｍ
径の錠剤とした。

実施例２　カプセル剤 化合物３　５０ｇ　′ ラクトース　８０３ ポテトスターチ　３８ｇ からなる混合物に、１０％ヒドロキシプロピルセルロー
ス溶液を加えて練合する。実施例１と同様に造粒、顆粒
化し、ステアリン酸マグネシウムを加え常法により一錠
剤中（１７０ｍｇ）化合物３５０ｍｇを含むカプセル剤
とした。

実施例３　軟カプセル剤 化合物４１０ｇを大豆油１００ｇに溶解し常法により１
カプセルとして化合物４１０ｍｇあてこの溶液を充填し
軟カプセル剤とした。

手　続　補　正　書 昭和５９年６月１１Ｊ日 １、事件の表示 昭和５９年特許願第８５３３５号 ２、発明の名称 １２−リポキシゲナーゼ代謝産物に起因する疾患の予防
治療剤 ３゜補正をする者 事件との関係　特許出願人 郵便番号　１００ 住　所　東京都千代田区大手町−丁目６番１号名　称　
（１０２）協和醗酵工業株式会社（ＴＩＩＩＬ　：　０
３−２０１−７２１１　内線２７５１）代表者　加　藤
　幹　夫 正する。

（２）４頁６行の「メディエータＪを「メディエータ−
」に訂正する。

（３）１０頁３行の「強化カルシウム」を「塩化カルシ
ウム」に訂正する。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（Ｉ） （式中、Ｒ３−Ｒ１は水素原子、低級アルキル基、水酸
   基、アミノ基、低級アルコキシ基、ハロゲン原子、モノ
   もしくはジ低級アルキルアミノ基、カルボキシル基又は
   低級アルキルオキシカルボニル基である。）で示される
   トロポロン又はその誘導体を有効成分として含有してな
   る１　２−　ＩＪポキシゲナーゼ代謝産物に起因する疾
   患の予防治療剤。
2. （２）Ｒ，〜Ｒ７のずべてか水素であるか、又は少なく
   とも１つが水酸基、低級アルキル基又は低級アルコキシ
   基である特許請求の範囲第１項記載の予防治療剤。
3. （３）一般式（Ｉ）で示される化合物がトロポロン。 ヒノキチオール、７−ヒドロキシトロポロン又は３−メ
   トキシトロポロンである特許請求の範囲第２項記載の予
   防治療剤。