JPH05284992A - 神経成長因子産生促進剤及びその製造法 - Google Patents
神経成長因子産生促進剤及びその製造法Info
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- JPH05284992A JPH05284992A JP4119532A JP11953292A JPH05284992A JP H05284992 A JPH05284992 A JP H05284992A JP 4119532 A JP4119532 A JP 4119532A JP 11953292 A JP11953292 A JP 11953292A JP H05284992 A JPH05284992 A JP H05284992A
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- methanol
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 式（Ｉ）
【化１】
で示されるトリペプチドを有効成分とする神経成長因子
（ＮＧＦ）産生促進剤。 【効果】 該トリペプチドは脳内および末梢でのＮＧＦ
の分泌を促進し、痴呆症、各種末梢神経障害等の予防治
療等に有効である。
（ＮＧＦ）産生促進剤。 【効果】 該トリペプチドは脳内および末梢でのＮＧＦ
の分泌を促進し、痴呆症、各種末梢神経障害等の予防治
療等に有効である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、神経成長因子（以下、
ＮＧＦと称す。）産生促進剤及びその製造法に関する。
ＮＧＦと称す。）産生促進剤及びその製造法に関する。
【０００２】
【従来技術】ＮＧＦは、試験管内で神経細胞を分化させ
て神経突起の伸長を促したり、神経細胞の生存を維持す
るほか、動物実験においてＮＧＦを脳内に投与すると、
記憶や学習能力が高まり、また脳虚血によってニューロ
ンが死滅するのを防ぐ効果があることが知られている
〔J. Neurosci., 6, 2155(1986)、 Brain Res., 293,30
5(1985) 、 Science, 235, 214(1986) 、 Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 83,9231(1986)、 Annals of Neurolog
y, 120, 275(1986)〕。
て神経突起の伸長を促したり、神経細胞の生存を維持す
るほか、動物実験においてＮＧＦを脳内に投与すると、
記憶や学習能力が高まり、また脳虚血によってニューロ
ンが死滅するのを防ぐ効果があることが知られている
〔J. Neurosci., 6, 2155(1986)、 Brain Res., 293,30
5(1985) 、 Science, 235, 214(1986) 、 Proc. Natl.
Acad. Sci. USA, 83,9231(1986)、 Annals of Neurolog
y, 120, 275(1986)〕。
【０００３】また、アルツハイマー型老年性痴呆症にお
いては、記憶や思考を司る神経細胞であるマイネルト核
のコリン作動性ニューロンの殆どが死滅し失われている
ことが多くの症例で確認されているが、この神経細胞の
生存や分化に、ＮＧＦが必須であることが最近多くの研
究者らによって明らかにされている。〔ファルマシア,
22, 147(1986)、老年精神医学, 3, 751(1986)〕。ま
た、ランス・オルソンらの報告（1991年アルツハイマー
病治療のシンポジウム) では、実際にアルツハイマー病
で痴呆症状の出ている患者の脳にネズミから取ったＮＧ
Ｆを３ヶ月で計６．６mg直接注入したところ、症状が改
善されたことが確認されている。
いては、記憶や思考を司る神経細胞であるマイネルト核
のコリン作動性ニューロンの殆どが死滅し失われている
ことが多くの症例で確認されているが、この神経細胞の
生存や分化に、ＮＧＦが必須であることが最近多くの研
究者らによって明らかにされている。〔ファルマシア,
22, 147(1986)、老年精神医学, 3, 751(1986)〕。ま
た、ランス・オルソンらの報告（1991年アルツハイマー
病治療のシンポジウム) では、実際にアルツハイマー病
で痴呆症状の出ている患者の脳にネズミから取ったＮＧ
Ｆを３ヶ月で計６．６mg直接注入したところ、症状が改
善されたことが確認されている。
【０００４】また、ハンチントン舞踏症患者の脳の線条
体では、ＧＡＢＡ作動性神経細胞の脱落と共にコリン作
動性神経細胞の脱落が著しく、ＮＧＦが線条体の内因性
コリン作動性神経細胞にも作用することが知られている
〔Science, 234, 1341(1986)〕。
体では、ＧＡＢＡ作動性神経細胞の脱落と共にコリン作
動性神経細胞の脱落が著しく、ＮＧＦが線条体の内因性
コリン作動性神経細胞にも作用することが知られている
〔Science, 234, 1341(1986)〕。
【０００５】さらに、ＮＧＦは中枢神経のみならず末梢
の知覚、交感神経系の栄養因子として働き神経の再生に
必須の因子である。すなわち、脊髄損傷、末梢神経損
傷、糖尿病性神経障害および筋萎縮性側索硬化症等の治
療に使用できると考えられている。
の知覚、交感神経系の栄養因子として働き神経の再生に
必須の因子である。すなわち、脊髄損傷、末梢神経損
傷、糖尿病性神経障害および筋萎縮性側索硬化症等の治
療に使用できると考えられている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＮＧＦ
を実際にヒトの治療に用いるには、ＮＧＦの大量生産手
段が確立されておらず、また、ＮＧＦは分子量が大きい
ために、血管を通して脳内に送り込みがたく、蛋白分解
酵素により分解されるなどの問題点がある。
を実際にヒトの治療に用いるには、ＮＧＦの大量生産手
段が確立されておらず、また、ＮＧＦは分子量が大きい
ために、血管を通して脳内に送り込みがたく、蛋白分解
酵素により分解されるなどの問題点がある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者は、ＮＧ
Ｆを産生する細胞を活性化し、脳内および末梢でＮＧＦ
の産生を促がす物質を探索した結果、ペニシリウム・フ
ェルタナムより生産される後記式（Ｉ）で表わされるト
リペプチドがＮＧＦの産生を促進することを見出し、本
発明を完成するに至った。
Ｆを産生する細胞を活性化し、脳内および末梢でＮＧＦ
の産生を促がす物質を探索した結果、ペニシリウム・フ
ェルタナムより生産される後記式（Ｉ）で表わされるト
リペプチドがＮＧＦの産生を促進することを見出し、本
発明を完成するに至った。
【０００８】本発明は、式（Ｉ）
【０００９】
【化２】
【００１０】で示されるトリペプチドを有効成分とする
ＮＧＦ産生促進剤である。上記式（Ｉ）で示されるトリ
ペプチドは、ペニシリウム・フェルタナム菌が生産する
物質〔Tetrahedron, 47, 8529(1991) 〕であり、癌細胞
に対して増殖抑制作用を有することが知られている。
ＮＧＦ産生促進剤である。上記式（Ｉ）で示されるトリ
ペプチドは、ペニシリウム・フェルタナム菌が生産する
物質〔Tetrahedron, 47, 8529(1991) 〕であり、癌細胞
に対して増殖抑制作用を有することが知られている。
【００１１】本発明者は、上記式（Ｉ）のトリペプチド
をペニシリウム・フェルタナム（Penicillium fellutan
um）ＳＣＲＣ−ｆ２５の培養により得た。該菌株は、微
生物寄託番号「微工研菌寄第１２３８５号」として、工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。
をペニシリウム・フェルタナム（Penicillium fellutan
um）ＳＣＲＣ−ｆ２５の培養により得た。該菌株は、微
生物寄託番号「微工研菌寄第１２３８５号」として、工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。
【００１２】以下に式（Ｉ）のトリペプチドの製造法に
ついて述べるが、一般的に醗酵生産物を生産する場合に
準じ、各種の栄養物質を含む培地でペニシリウム・フェ
ルタナムＳＣＲＣ−ｆ２５を好気的条件下で培養するこ
とができる。この培養においては、静置条件、すなわち
振盪培養による菌体の分散がおこらないよう留意するこ
とが必須であり、又空気との接触面積を大きくする積極
的な好気的培養を行う事により、後記式（ＩＩ）のNo.1
0位炭素原子に結合する水酸基が水素原子となった化合
物の生産を抑え、式（Ｉ）のトリペプチドを選択的に生
産することができる。
ついて述べるが、一般的に醗酵生産物を生産する場合に
準じ、各種の栄養物質を含む培地でペニシリウム・フェ
ルタナムＳＣＲＣ−ｆ２５を好気的条件下で培養するこ
とができる。この培養においては、静置条件、すなわち
振盪培養による菌体の分散がおこらないよう留意するこ
とが必須であり、又空気との接触面積を大きくする積極
的な好気的培養を行う事により、後記式（ＩＩ）のNo.1
0位炭素原子に結合する水酸基が水素原子となった化合
物の生産を抑え、式（Ｉ）のトリペプチドを選択的に生
産することができる。
【００１３】培地は主として液体培地を用い、炭素源と
してはグルコース、廃糖蜜、スターチなどを単独または
混合して用いることができる。窒素源としてはペプト
ン、大豆粉、酵母エキスなどを単独か又は混合して用い
ることができる。その他、菌株の成育を助け、式（Ｉ）
のトリペプチドの生産を促進する有機物及び無機塩を必
要により添加することができる。
してはグルコース、廃糖蜜、スターチなどを単独または
混合して用いることができる。窒素源としてはペプト
ン、大豆粉、酵母エキスなどを単独か又は混合して用い
ることができる。その他、菌株の成育を助け、式（Ｉ）
のトリペプチドの生産を促進する有機物及び無機塩を必
要により添加することができる。
【００１４】培養は、静置培養により、２５℃で７〜１
４日間行う。
４日間行う。
【００１５】この培養液中に生産された式（Ｉ）のトリ
ペプチドを単離するには、醗酵生産物を採取する一般的
な方法に準じて行えば良い。すなわち培養終了後、遠心
分離又は濾過により分離した菌体を、低級アルコール、
クロロホルム、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、エーテル、
アセトン、好ましくはメタノールで抽出する。
ペプチドを単離するには、醗酵生産物を採取する一般的
な方法に準じて行えば良い。すなわち培養終了後、遠心
分離又は濾過により分離した菌体を、低級アルコール、
クロロホルム、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、エーテル、
アセトン、好ましくはメタノールで抽出する。
【００１６】これを再度濾過し、濃縮後、９０％メタノ
ール等に再溶解し、続いて、ｎ−ヘキサン抽出を行い、
ヘキサン層を除去する。メタノール層を減圧乾固し、水
に懸濁後、酢酸エチルエステル、クロロホルムなどの非
水溶媒に転溶し、濃縮する。これをセファデックスＬＨ
−２０（ファルマシア）を用いたゲル濾過、マイクロボ
ンダパックＣ−１８（Waters）を用いたカラムクロマト
グラフ、及び／又はＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−ＴＭ（東
ソー）を用いた高速液体クロマトグラフを繰り返すこと
により精製することができる。
ール等に再溶解し、続いて、ｎ−ヘキサン抽出を行い、
ヘキサン層を除去する。メタノール層を減圧乾固し、水
に懸濁後、酢酸エチルエステル、クロロホルムなどの非
水溶媒に転溶し、濃縮する。これをセファデックスＬＨ
−２０（ファルマシア）を用いたゲル濾過、マイクロボ
ンダパックＣ−１８（Waters）を用いたカラムクロマト
グラフ、及び／又はＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−ＴＭ（東
ソー）を用いた高速液体クロマトグラフを繰り返すこと
により精製することができる。
【００１７】この活性物質について各種のスペクトルを
測定し、式（Ｉ）の公知のトリペプチドであることを確
認した。
測定し、式（Ｉ）の公知のトリペプチドであることを確
認した。
【００１８】
【実施例】以下、実施例、試験例、参考例を挙げて本発
明を具体的に説明する。 実施例 ペプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、
人工海水５００ｍｌ及び水５００ｍｌよりなる無菌液体
培地（ｐＨ７．０）を細胞培養用フラスコ（容量８００
ｍｌ、培養面積１７５ｃｍ2、ＮＵＮＣＬＯＮ）に２０
０ｍｌづつ分注し、各々にポテトデキストロース寒天上
で生育したペニシリウム・フェルタナム（Penicillium
fellutanum）ＳＣＲＣ−ｆ２５を適量植菌した。２５℃
で１１日間静置培養した後、三重にしたガーゼで培養液
を濾過し、菌糸体と培養上清を分離した。菌糸体は鋏で
切断し小断片とし適当量のメタノール中で、室温で約３
時間振盪し、抽出した。これを濾過した後、溶媒を減圧
除去し、９０％メタノールに再溶解した。これを等量の
ｎ−ヘキサンで抽出し、ヘキサン層を除去した後９０％
メタノール層を減圧乾固した。これを水に懸濁し、さら
に等量の酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固
した。これをメタノールに溶解し、あらかじめメタノー
ルで平衡化しておいたセファデックスＬＨ−２０（ファ
ルマシア）を用いて、メタノール中でゲル濾過した。活
性画分を集め、次にマイクロボンダパックＣ１８（Wate
rs）を用い、７０％メタノール溶液中で逆相カラムクロ
マトグラフィーを行った。活性画分を集め、ＴＳＫ ｇ
ｅｌ ＯＤＳ−ＴＭ（東ソー）を用いて、０．１％トリ
フルオロ酢酸含有７０％メタノール液中で高速液体クロ
マトグラフィーを行い、活性成分が単一になるまで精製
した。
明を具体的に説明する。 実施例 ペプトン１０ｇ、酵母エキス５ｇ、グルコース２０ｇ、
人工海水５００ｍｌ及び水５００ｍｌよりなる無菌液体
培地（ｐＨ７．０）を細胞培養用フラスコ（容量８００
ｍｌ、培養面積１７５ｃｍ2、ＮＵＮＣＬＯＮ）に２０
０ｍｌづつ分注し、各々にポテトデキストロース寒天上
で生育したペニシリウム・フェルタナム（Penicillium
fellutanum）ＳＣＲＣ−ｆ２５を適量植菌した。２５℃
で１１日間静置培養した後、三重にしたガーゼで培養液
を濾過し、菌糸体と培養上清を分離した。菌糸体は鋏で
切断し小断片とし適当量のメタノール中で、室温で約３
時間振盪し、抽出した。これを濾過した後、溶媒を減圧
除去し、９０％メタノールに再溶解した。これを等量の
ｎ−ヘキサンで抽出し、ヘキサン層を除去した後９０％
メタノール層を減圧乾固した。これを水に懸濁し、さら
に等量の酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を濃縮乾固
した。これをメタノールに溶解し、あらかじめメタノー
ルで平衡化しておいたセファデックスＬＨ−２０（ファ
ルマシア）を用いて、メタノール中でゲル濾過した。活
性画分を集め、次にマイクロボンダパックＣ１８（Wate
rs）を用い、７０％メタノール溶液中で逆相カラムクロ
マトグラフィーを行った。活性画分を集め、ＴＳＫ ｇ
ｅｌ ＯＤＳ−ＴＭ（東ソー）を用いて、０．１％トリ
フルオロ酢酸含有７０％メタノール液中で高速液体クロ
マトグラフィーを行い、活性成分が単一になるまで精製
した。
【００１９】この活性成分は式（ＩＩ）で表わされる物
質であり
質であり
【化３】 そのＮＭＲスペクトルは表１の通りである。
【表１】 表１ 活性成分のＮＭＲスペクトル1 H-NMRδ(DMSO-d6); Leucinal 9.38(s, CHO), 8.15(d, J=7.1Hz, NH), 4.04(m, α),1.
49(t, J=7.3Hz, β), 1.65(m, γ), 0.86(CH3). β-Hydroxyglutamine 7.74(d, J=7.3Hz, NH), 4.24(m, α), 4.38(m, β),5.1
1(m, β-OH), 2.22(m, γ), 7.12(br s, CONH2), 6.79
(br s). Asparagine 8.15(d, J=7.7Hz, NH), 4.58(m, α), 2.58(m, β),7.4
4(br s, CONH2), 6.91(br s). 3-Hydroxydodecanoic acid 2.22(m, No.22), 3.79(m, No.23), 1.2〜1.4(m, No.24
〜No.31),0.86(No.32).13 C-NMR δ(DMSO-d6); Leucinal 201.8(d, CHO), 57.0(d, α), 36.4(t, β), 23.7(m,
γ),22.9(q, CH3), 21.3(q). β-Hydroxyglutamine 171.7(s, CO), 56.7(d, α), 67.5(d, β), 39.6(t,
γ),172.3(s, CONH2) Asparagine 171.0(s, NH), 49.8(d, α), 36.9(t, β), 171.8(s, C
ONH2) 3-Hydroxydodecanoic acid 171.2(s, CO), 43.3(t, No.22), 67.4(d, No.23), 36.8
(t, No.24),31.2(2C, t, No.25〜No.26), 29.0(2C, t,
No.27〜No.28),28.9(t, No.29), 28.6(t, No.30), 22.0
(t, No.31), 13.8(q, No.32).
49(t, J=7.3Hz, β), 1.65(m, γ), 0.86(CH3). β-Hydroxyglutamine 7.74(d, J=7.3Hz, NH), 4.24(m, α), 4.38(m, β),5.1
1(m, β-OH), 2.22(m, γ), 7.12(br s, CONH2), 6.79
(br s). Asparagine 8.15(d, J=7.7Hz, NH), 4.58(m, α), 2.58(m, β),7.4
4(br s, CONH2), 6.91(br s). 3-Hydroxydodecanoic acid 2.22(m, No.22), 3.79(m, No.23), 1.2〜1.4(m, No.24
〜No.31),0.86(No.32).13 C-NMR δ(DMSO-d6); Leucinal 201.8(d, CHO), 57.0(d, α), 36.4(t, β), 23.7(m,
γ),22.9(q, CH3), 21.3(q). β-Hydroxyglutamine 171.7(s, CO), 56.7(d, α), 67.5(d, β), 39.6(t,
γ),172.3(s, CONH2) Asparagine 171.0(s, NH), 49.8(d, α), 36.9(t, β), 171.8(s, C
ONH2) 3-Hydroxydodecanoic acid 171.2(s, CO), 43.3(t, No.22), 67.4(d, No.23), 36.8
(t, No.24),31.2(2C, t, No.25〜No.26), 29.0(2C, t,
No.27〜No.28),28.9(t, No.29), 28.6(t, No.30), 22.0
(t, No.31), 13.8(q, No.32).
【００２０】本発明の化合物（Ｉ）は経口的にも非経口
的にも投与することができ、また、適当な医薬担体と混
合して用いることもできる。医薬担体としては、経口的
には、乳糖、マンニットなどの糖類、デンプン類、結晶
セルロース、クエン酸カルシウム、第２リン酸カルシウ
ム、ゼラチン、デキストリン、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸及
びそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、タルクな
どが挙げられる。非経口的には、植物油、エタノール、
プロピレングリコール、ポリエチレングリコール類、カ
カオ脂、ラウリン酸、グリセリンなどが挙げられる。
的にも投与することができ、また、適当な医薬担体と混
合して用いることもできる。医薬担体としては、経口的
には、乳糖、マンニットなどの糖類、デンプン類、結晶
セルロース、クエン酸カルシウム、第２リン酸カルシウ
ム、ゼラチン、デキストリン、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸及
びそのマグネシウム塩もしくはカルシウム塩、タルクな
どが挙げられる。非経口的には、植物油、エタノール、
プロピレングリコール、ポリエチレングリコール類、カ
カオ脂、ラウリン酸、グリセリンなどが挙げられる。
【００２１】また、投与剤型としては、錠剤、散剤、カ
プセル剤の如き固形剤であっても良く、溶液、懸濁液の
如き液剤であっても良い。更に、非経口的に投与する場
合には、注射剤、点滴用液剤あるいは坐剤として用いる
ことができる。
プセル剤の如き固形剤であっても良く、溶液、懸濁液の
如き液剤であっても良い。更に、非経口的に投与する場
合には、注射剤、点滴用液剤あるいは坐剤として用いる
ことができる。
【００２２】本発明の投与量は、投与経路、病疾患の種
類、程度、患者の年齢、体重、症状などによっても変動
するが、通常１日当り経口投与の場合は、０．３〜３０
ｍｇ／ｋｇ、とりわけ１〜２０ｍｇ／ｋｇ、静脈投与の
場合は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇとりわけ０．５〜５ｍｇ
／ｋｇが好ましい。
類、程度、患者の年齢、体重、症状などによっても変動
するが、通常１日当り経口投与の場合は、０．３〜３０
ｍｇ／ｋｇ、とりわけ１〜２０ｍｇ／ｋｇ、静脈投与の
場合は０．１〜１０ｍｇ／ｋｇとりわけ０．５〜５ｍｇ
／ｋｇが好ましい。
【００２３】試験例１ ＬＭ細胞に対するＮＧＦ産生
促進活性 ２×１０4ｃｅｌｌ／ｍｌ（０．５％ペプトン含有１９
９培地）のＬＭ細胞を、９６ｗｅｌｌマルチプレートの
各ｗｅｌｌに０．２ｍｌずつ播種し、２〜３日培養した
後、トリペプチド（Ｉ）を各濃度含んだ培地（０．５％
ＢＳＡ含有１９９培地）に培地交換し、更に２４時間培
養した。培養終了後、培養上清に含まれるＮＧＦの定量
は、抗マウスＮＧＦポリクローナル抗体を用いる酵素免
疫測定法によって測定した。その結果、図１に示したよ
うに１０μｇ／ｍｌ以上で無添加の場合の３〜５倍のＮ
ＧＦ産生促進活性が見られた。
促進活性 ２×１０4ｃｅｌｌ／ｍｌ（０．５％ペプトン含有１９
９培地）のＬＭ細胞を、９６ｗｅｌｌマルチプレートの
各ｗｅｌｌに０．２ｍｌずつ播種し、２〜３日培養した
後、トリペプチド（Ｉ）を各濃度含んだ培地（０．５％
ＢＳＡ含有１９９培地）に培地交換し、更に２４時間培
養した。培養終了後、培養上清に含まれるＮＧＦの定量
は、抗マウスＮＧＦポリクローナル抗体を用いる酵素免
疫測定法によって測定した。その結果、図１に示したよ
うに１０μｇ／ｍｌ以上で無添加の場合の３〜５倍のＮ
ＧＦ産生促進活性が見られた。
【００２４】試験例２ 誘導されたＮＧＦの神経突起
伸長活性 ＬＭ細胞２×１０4ｃｅｌｌ／ｍｌを培養フラスコ（７
５ｃｍ2）に２０ｍｌ接種し、３〜５日培養した後、ト
リペプチド（Ｉ）を２５μｇ／ｍｌの濃度で含む培地に
培地交換し、更に２４時間培養した。培養終了後、培養
中に含まれるＮＧＦ量をＥＩＡにより測定した。この測
定値をもとにＮＧＦ濃度が１５ｎｇ／ｍｌとなるように
濃縮し、この濃縮液を１０μｌ、トロンビン（１００ｕ
ｎｉｔ／ｍｌ）１０μｌ及びニワトリ血漿１０μｌ含む
培養系で、７日齢ニワトリ胚脊髄後根神経節の培養を行
った。約２０時間培養した後に、顕微鏡観察により神経
節からの神経突起の伸長の有無を観察した。その結果、
神経突起の伸長が観察された。この神経突起伸長活性の
強さは、ＥＩＡによって求めたＮＧＦ濃度から推定され
る活性の強さに対し矛盾のないものであることを、コン
トロールＮＧＦ（マウス顎下腺より精製したＮＧＦ）を
用いた実験により同時に確認した。
伸長活性 ＬＭ細胞２×１０4ｃｅｌｌ／ｍｌを培養フラスコ（７
５ｃｍ2）に２０ｍｌ接種し、３〜５日培養した後、ト
リペプチド（Ｉ）を２５μｇ／ｍｌの濃度で含む培地に
培地交換し、更に２４時間培養した。培養終了後、培養
中に含まれるＮＧＦ量をＥＩＡにより測定した。この測
定値をもとにＮＧＦ濃度が１５ｎｇ／ｍｌとなるように
濃縮し、この濃縮液を１０μｌ、トロンビン（１００ｕ
ｎｉｔ／ｍｌ）１０μｌ及びニワトリ血漿１０μｌ含む
培養系で、７日齢ニワトリ胚脊髄後根神経節の培養を行
った。約２０時間培養した後に、顕微鏡観察により神経
節からの神経突起の伸長の有無を観察した。その結果、
神経突起の伸長が観察された。この神経突起伸長活性の
強さは、ＥＩＡによって求めたＮＧＦ濃度から推定され
る活性の強さに対し矛盾のないものであることを、コン
トロールＮＧＦ（マウス顎下腺より精製したＮＧＦ）を
用いた実験により同時に確認した。
【００２５】試験例３ 脳細胞に対するＮＧＦ産生促
進活性 １７日齢ラット胎児より分離した脳細胞（神経細胞、ア
ストログリア細胞、その他の混合系）８×１０5ｃｅｌ
ｌ／ｍｌ（１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ）を、培養フラス
コ（７５ｃｍ2）に２０ｍｌ接種し、４時間後、インシ
ュリン５μｇ／ｍｌ、トランスフェリン５μｇ／ｍｌ、
亜セレン酸ナトリウム３７ｎＭ、ピルビン酸ナトリウム
１ｍＭ及びプロゲステロン２０ｎＭを含むＤＭＥＭに培
地交換し、更に３日間培養した。これにトリペプチド
（Ｉ）を２５μｇ／ｍｌの濃度になるように添加し、さ
らに２４時間培養を継続した後、培地中に生産されたＮ
ＧＦの濃度を２０倍に濃縮して測定した。その結果を図
２に示した。トリペプチド（Ｉ）２５μｇ／ｍｌの添加
（図中２）により、無添加の場合（図中１）の４〜５倍
のＮＧＦ産生が見られた。
進活性 １７日齢ラット胎児より分離した脳細胞（神経細胞、ア
ストログリア細胞、その他の混合系）８×１０5ｃｅｌ
ｌ／ｍｌ（１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ）を、培養フラス
コ（７５ｃｍ2）に２０ｍｌ接種し、４時間後、インシ
ュリン５μｇ／ｍｌ、トランスフェリン５μｇ／ｍｌ、
亜セレン酸ナトリウム３７ｎＭ、ピルビン酸ナトリウム
１ｍＭ及びプロゲステロン２０ｎＭを含むＤＭＥＭに培
地交換し、更に３日間培養した。これにトリペプチド
（Ｉ）を２５μｇ／ｍｌの濃度になるように添加し、さ
らに２４時間培養を継続した後、培地中に生産されたＮ
ＧＦの濃度を２０倍に濃縮して測定した。その結果を図
２に示した。トリペプチド（Ｉ）２５μｇ／ｍｌの添加
（図中２）により、無添加の場合（図中１）の４〜５倍
のＮＧＦ産生が見られた。
【００２６】
【発明の効果】前記式（Ｉ）で示されるトリペプチド
は、ＬＭ細胞のＮＧＦ産生を促進し、また、本物質によ
って誘導産生されたＮＧＦは、神経細胞の突起を伸ばす
活性を有していることがニワトリ胚脊髄後根神経節を用
いて確認された。さらに本物質は、脳の神経細胞と神経
細胞を支えるアストログリア細胞の混合培養系において
もＮＧＦの分泌を誘導した。以上のことから、トリペプ
チド（Ｉ）は、脳内および末梢でＮＧＦの分泌を促進す
る活性を有し、痴呆症、末梢の各種神経障害等の予防治
療に有効である。
は、ＬＭ細胞のＮＧＦ産生を促進し、また、本物質によ
って誘導産生されたＮＧＦは、神経細胞の突起を伸ばす
活性を有していることがニワトリ胚脊髄後根神経節を用
いて確認された。さらに本物質は、脳の神経細胞と神経
細胞を支えるアストログリア細胞の混合培養系において
もＮＧＦの分泌を誘導した。以上のことから、トリペプ
チド（Ｉ）は、脳内および末梢でＮＧＦの分泌を促進す
る活性を有し、痴呆症、末梢の各種神経障害等の予防治
療に有効である。
【００２７】
【図１】ＬＭ細胞におけるＮＧＦ産生活性を表わす。
【図２】脳細胞におけるＮＧＦ産生活性を表わす。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:80）
Claims (2)
- 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 で示されるトリペプチドを有効成分とする神経成長因子
産生促進剤。 - 【請求項２】 ペニシリウム属に属する請求項１記載の
トリペプチド産生菌を静置条件で好気的に培養し、培養
物から前記トリペプチドを採取することを特徴とする前
記トリペプチドの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4119532A JPH05284992A (ja) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | 神経成長因子産生促進剤及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4119532A JPH05284992A (ja) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | 神経成長因子産生促進剤及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05284992A true JPH05284992A (ja) | 1993-11-02 |
Family
ID=14763620
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4119532A Pending JPH05284992A (ja) | 1992-04-14 | 1992-04-14 | 神経成長因子産生促進剤及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05284992A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2007125913A1 (ja) * | 2006-04-26 | 2009-09-10 | 富山化学工業株式会社 | アルキルエーテル誘導体またはその塩を含有する神経細胞新生誘導剤および精神障害治療剤 |
-
1992
- 1992-04-14 JP JP4119532A patent/JPH05284992A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2007125913A1 (ja) * | 2006-04-26 | 2009-09-10 | 富山化学工業株式会社 | アルキルエーテル誘導体またはその塩を含有する神経細胞新生誘導剤および精神障害治療剤 |
| JP5695293B2 (ja) * | 2006-04-26 | 2015-04-01 | 富山化学工業株式会社 | アルキルエーテル誘導体またはその塩を含有する神経細胞新生誘導剤および精神障害治療剤 |
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