JP3434860B2 - Ｆｏ−２５４６物質およびその製造法 - Google Patents
Ｆｏ−２５４６物質およびその製造法Info
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- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アシルコエンザイムＡ
コレステロールアシル転位酵素阻害活性を有する新規物
質ＦＯ−２５４６物質およびその製造法に関する。
コレステロールアシル転位酵素阻害活性を有する新規物
質ＦＯ−２５４６物質およびその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、いくつかの高脂血症治療のための
薬物が知られている。高脂血症の治療薬としては、
（１）コレステロールの生合成阻害、（２）コレステロ
ールの吸収阻害、（３）コレステロールの異化促進、
（４）リポ蛋白リパーゼの活性化（リポ蛋白の合成の抑
制）などの作用を有する薬物が知られている。
薬物が知られている。高脂血症の治療薬としては、
（１）コレステロールの生合成阻害、（２）コレステロ
ールの吸収阻害、（３）コレステロールの異化促進、
（４）リポ蛋白リパーゼの活性化（リポ蛋白の合成の抑
制）などの作用を有する薬物が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】近年、食生活の向上に
伴い成人の高脂血症や動脈硬化などコレステロール蓄積
に起因する症状が現代病として問題視されている。高脂
血症は、動脈硬化の進行を促進する因子のひとつとして
知られており、血中コレステロールを低下させることで
虚血性心疾患の減少をもたらすことができる。又、高脂
血症になると心筋硬塞の発症率も高くなるなど高脂血
症、特に高コレステロール血症のより有効で安全な治療
薬の出現が望まれている。
伴い成人の高脂血症や動脈硬化などコレステロール蓄積
に起因する症状が現代病として問題視されている。高脂
血症は、動脈硬化の進行を促進する因子のひとつとして
知られており、血中コレステロールを低下させることで
虚血性心疾患の減少をもたらすことができる。又、高脂
血症になると心筋硬塞の発症率も高くなるなど高脂血
症、特に高コレステロール血症のより有効で安全な治療
薬の出現が望まれている。
【０００４】コレステロールはアシルコエンザイムＡか
らアシル基転位によりコレステロールエステルとなり、
細胞内および血中リポ蛋白に蓄積される。このアシル基
転位反応を触媒する酵素がアシルコエンザイムＡコレス
テロールアシル転位酵素であり、コレステロールの腸管
からの吸収および冠動脈における泡沫細胞の形成に深く
係わっている。したがって、アシルコエンザイムＡコレ
ステロールアシル転位酵素を阻害する物質は、かかる疾
病に有効であることが推察される。
らアシル基転位によりコレステロールエステルとなり、
細胞内および血中リポ蛋白に蓄積される。このアシル基
転位反応を触媒する酵素がアシルコエンザイムＡコレス
テロールアシル転位酵素であり、コレステロールの腸管
からの吸収および冠動脈における泡沫細胞の形成に深く
係わっている。したがって、アシルコエンザイムＡコレ
ステロールアシル転位酵素を阻害する物質は、かかる疾
病に有効であることが推察される。
【０００５】かかる実情において、アシルコエンザイム
Ａコレステロールアシル転位酵素阻害活性を有する物質
を提供することは、高脂血症やそれに基づく動脈硬化な
どの成人病の治療上有用なことである。
Ａコレステロールアシル転位酵素阻害活性を有する物質
を提供することは、高脂血症やそれに基づく動脈硬化な
どの成人病の治療上有用なことである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、微生物の
生産する代謝産物について研究を続けた結果、土壌から
分離したＦＯ−２５４６菌株の培養物中にアシルコエン
ザイムＡコレステロールアシル転位酵素阻害活性を有す
る物質が産生されることを見出した。次いで、該培養物
からアシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵
素阻害活性物質を分離、精製した結果、後記の理化学的
性質を有する各物質を得た。これらの物質は従来全く知
られていないことから、これら各物質をＦＯ−２５４６
Ａ物質、ＦＯ−２５４６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｃ物
質、ＦＯ−２５４６Ｄ物質、ＦＯ−２５４６Ｉ物質、Ｆ
Ｏ−２５４６Ｊ物質、ＦＯ−２５４６Ｋ物質と称するこ
とにした。本発明においては、これら各物質をＦＯ−２
５４６物質と総称する。本発明は、かかる知見に基いて
完成されたものであって、一般式、
生産する代謝産物について研究を続けた結果、土壌から
分離したＦＯ−２５４６菌株の培養物中にアシルコエン
ザイムＡコレステロールアシル転位酵素阻害活性を有す
る物質が産生されることを見出した。次いで、該培養物
からアシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵
素阻害活性物質を分離、精製した結果、後記の理化学的
性質を有する各物質を得た。これらの物質は従来全く知
られていないことから、これら各物質をＦＯ−２５４６
Ａ物質、ＦＯ−２５４６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｃ物
質、ＦＯ−２５４６Ｄ物質、ＦＯ−２５４６Ｉ物質、Ｆ
Ｏ−２５４６Ｊ物質、ＦＯ−２５４６Ｋ物質と称するこ
とにした。本発明においては、これら各物質をＦＯ−２
５４６物質と総称する。本発明は、かかる知見に基いて
完成されたものであって、一般式、
【０００７】
【化６】
（式中、Ｒ1 は水素原子または水酸基を示し、Ｗは結合
手を有しないか、または酸素原子を示し、ＸはＹと共に
式
手を有しないか、または酸素原子を示し、ＸはＹと共に
式
【０００８】
【化７】
で表される基、式
【０００９】
【化８】
で表される基または式
【００１０】
【化９】
で表される基を形成し、Ｒ2 は式
【００１１】
【化１０】
で表される基を示し、Ｚは単結合または酸素原子を示
し、Ｒ3 は水素原子または水酸基を示す）で表されるＦ
Ｏ−２５４６物質を提供するものである。
し、Ｒ3 は水素原子または水酸基を示す）で表されるＦ
Ｏ−２５４６物質を提供するものである。
【００１２】また、本発明は分生子果不完全菌綱に属
し、ＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有する微生物
を培地に培養して培養液にＦＯ−２５４６物質を蓄積せ
しめ、該培養液からＦＯ−２５４６物質を採取すること
を特徴とするＦＯ−２５４６物質の製造法を提供するも
のである。
し、ＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有する微生物
を培地に培養して培養液にＦＯ−２５４６物質を蓄積せ
しめ、該培養液からＦＯ−２５４６物質を採取すること
を特徴とするＦＯ−２５４６物質の製造法を提供するも
のである。
【００１３】さらにまた、本発明は、分生子果不完全菌
綱に属し、ＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有する
微生物を提供するものである。ＦＯ−２５４６物質を生
産する能力を有する微生物（以下、ＦＯ−２５４６物質
生産菌と称する）は、分生子果不完全菌網に属するが、
例えば本発明者らが分離した分生子果不完全菌綱に属す
るＦＯ−２５４６菌株は、本発明の最も有効に使用され
る菌株の一例であって、本菌株の菌学的性状を示すと次
の通りである。
綱に属し、ＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有する
微生物を提供するものである。ＦＯ−２５４６物質を生
産する能力を有する微生物（以下、ＦＯ−２５４６物質
生産菌と称する）は、分生子果不完全菌網に属するが、
例えば本発明者らが分離した分生子果不完全菌綱に属す
るＦＯ−２５４６菌株は、本発明の最も有効に使用され
る菌株の一例であって、本菌株の菌学的性状を示すと次
の通りである。
【００１４】本発明のＦＯ−２５４６物質を生産するた
めに使用される菌株としては、例えば本発明者らによつ
て土壌から分離された分生子果不完全菌綱に属するＳｔ
ｒａｉｎ ＦＯ−２５４６株が挙げられる。
めに使用される菌株としては、例えば本発明者らによつ
て土壌から分離された分生子果不完全菌綱に属するＳｔ
ｒａｉｎ ＦＯ−２５４６株が挙げられる。
【００１５】１．培養上の諸性状
（１）表１に本菌株の培養所見を示す。本所見は各種培
地上で２５℃、１４日間培養した場合の肉眼的に観察し
た結果である。
地上で２５℃、１４日間培養した場合の肉眼的に観察し
た結果である。
【００１６】
【表１】
【００１７】２．生理学的性状
（１）生育温度範囲：８．５〜３３℃
（２）至適生育温度範囲：１８．５〜２８℃
（３）生育ｐＨ範囲：２〜１０
（４）至適生育ｐＨ範囲：３〜６
（５）好気性、嫌気性の区別：好気性
【００１８】上記ＦＯ−２５４６株の形態的特徴、培養
上の諸性状、生理学的性状に基づき、既知菌種との比較
を試みた結果、本菌株は分生子果不完全菌綱に属する一
菌株と考えられるが、菌学的性質を詳細に明らかにする
までに至っていない。従って、本菌株をＳｔｒａｉｎ
ＦＯ−２５４６と仮称した。尚、本菌株は、Ｓｔｒａｉ
ｎ ＦＯ−２５４６として通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されている（ＦＥＲＭ ＢＰ−
４４０６）。原寄託日は平成４年７月１７日である。
上の諸性状、生理学的性状に基づき、既知菌種との比較
を試みた結果、本菌株は分生子果不完全菌綱に属する一
菌株と考えられるが、菌学的性質を詳細に明らかにする
までに至っていない。従って、本菌株をＳｔｒａｉｎ
ＦＯ−２５４６と仮称した。尚、本菌株は、Ｓｔｒａｉ
ｎ ＦＯ−２５４６として通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されている（ＦＥＲＭ ＢＰ−
４４０６）。原寄託日は平成４年７月１７日である。
【００１９】以上、ＦＯ−２５４６生産菌について説明
したが、菌の一般的性状として菌学上の性状はきわめて
変異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは
通常行われる紫外線照射または変異誘導体、例えばＮ−
メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチル
メタンスルホネートなどを用いる人工的変異手段により
変異することは周知の事実であり、このような人工的変
異株は勿論、自然変異株も含め、分生子果不完全菌綱に
属し、ＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有する菌株
は、すべて本発明に使用することができる。また、細胞
融合、遺伝子操作などの細胞工学的に変異させた菌株も
物質ＦＯ−２５４６物質生産菌として包含される。
したが、菌の一般的性状として菌学上の性状はきわめて
変異し易く、一定したものではなく、自然的にあるいは
通常行われる紫外線照射または変異誘導体、例えばＮ−
メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、エチル
メタンスルホネートなどを用いる人工的変異手段により
変異することは周知の事実であり、このような人工的変
異株は勿論、自然変異株も含め、分生子果不完全菌綱に
属し、ＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有する菌株
は、すべて本発明に使用することができる。また、細胞
融合、遺伝子操作などの細胞工学的に変異させた菌株も
物質ＦＯ−２５４６物質生産菌として包含される。
【００２０】本発明においては、先ず分生子果不完全菌
綱に属するＦＯ−２５４６物質生産菌が培地に培養され
る。本菌の培養においては、通常真菌の培養に用いられ
る方法が一般に用いられる。培地としては微生物が同化
し得る炭素源、資化し得る窒素源、さらには必要に応じ
て無機酸塩などを含有させた栄養培地が使用される。同
化し得る炭素源としては、ブドウ糖、ショ糖、糖密、デ
キストリン、セルロースなどが単独または組み合わせて
用いられる。
綱に属するＦＯ−２５４６物質生産菌が培地に培養され
る。本菌の培養においては、通常真菌の培養に用いられ
る方法が一般に用いられる。培地としては微生物が同化
し得る炭素源、資化し得る窒素源、さらには必要に応じ
て無機酸塩などを含有させた栄養培地が使用される。同
化し得る炭素源としては、ブドウ糖、ショ糖、糖密、デ
キストリン、セルロースなどが単独または組み合わせて
用いられる。
【００２１】資化し得る窒素源としては、ペプトン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・ステ
イープ・リカー、綿実粕、カゼイン、大豆蛋白加水分解
物、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、アンモニウム塩
などの無機窒素化合物が単独または組み合わせて用いら
れる。その他、必要に応じてナトリウム塩、カリウム
塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの無
機塩、重金属塩類が添加される。さらに、培地には、必
要に応じて、本菌の生育やＦＯ−２５４６物質の生産を
促進する微量栄養素、発育促進物質、前駆物質などを適
当に添加してもよい。
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、大豆粉、コーン・ステ
イープ・リカー、綿実粕、カゼイン、大豆蛋白加水分解
物、アミノ酸、尿素などの有機窒素源、アンモニウム塩
などの無機窒素化合物が単独または組み合わせて用いら
れる。その他、必要に応じてナトリウム塩、カリウム
塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、リン酸塩などの無
機塩、重金属塩類が添加される。さらに、培地には、必
要に応じて、本菌の生育やＦＯ−２５４６物質の生産を
促進する微量栄養素、発育促進物質、前駆物質などを適
当に添加してもよい。
【００２２】培養は通常振とうまたは通気攪拌培養など
の好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪
拌培養が好ましい。培養のｐＨは中性付近で培養を行う
のが好ましい。培養温度は２０〜３７℃で行い得るが、
通常は２４〜３０℃に保つのがよい。培養時間は通常２
〜３日間培養を行うと、本ＦＯ−２５４６物質が蓄積さ
れるので、培養中の蓄積量が最大に達した時に、培養を
終了すればよい。
の好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪
拌培養が好ましい。培養のｐＨは中性付近で培養を行う
のが好ましい。培養温度は２０〜３７℃で行い得るが、
通常は２４〜３０℃に保つのがよい。培養時間は通常２
〜３日間培養を行うと、本ＦＯ−２５４６物質が蓄積さ
れるので、培養中の蓄積量が最大に達した時に、培養を
終了すればよい。
【００２３】これらの培地組成、培地の液性、培養温
度、培養時間、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもまない。
液体培養において、発泡があるときは、シリコン油、植
物油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用できる。この
ようにして得られた培養物に蓄積されるＦＯ−２５４６
物質は、菌体内および培養濾液中に含有されるので、培
養物を遠心分離して培養濾液と菌体とに分離し、各々か
ら本ＦＯ−２５４６物質を採取するのが有利である。
度、培養時間、通気量などの培養条件は使用する菌株の
種類や外部の条件などに応じて好ましい結果が得られる
ように適宜調節、選択されることはいうまでもまない。
液体培養において、発泡があるときは、シリコン油、植
物油、界面活性剤などの消泡剤を適宜使用できる。この
ようにして得られた培養物に蓄積されるＦＯ−２５４６
物質は、菌体内および培養濾液中に含有されるので、培
養物を遠心分離して培養濾液と菌体とに分離し、各々か
ら本ＦＯ−２５４６物質を採取するのが有利である。
【００２４】培養濾液からＦＯ−２５４６物質を採取す
るには、先ず培養濾液を酢酸エチル、酢酸ブチル、ベン
ゼンなどの非親水性有機溶媒で抽出し、抽出液を減圧濃
縮して粗製のＦＯ−２５４６物質が得られる。この粗製
物質はさらに脂溶性物質の精製に通常用いられる公知の
方法、例えばシリカゲル、アルミナなどの担体を用いる
カラムクロマトグラフイーにより各々ＦＯ−２５４６
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｉ、ＪおよびＫ物質をそれぞれ分離精
製することができる。
るには、先ず培養濾液を酢酸エチル、酢酸ブチル、ベン
ゼンなどの非親水性有機溶媒で抽出し、抽出液を減圧濃
縮して粗製のＦＯ−２５４６物質が得られる。この粗製
物質はさらに脂溶性物質の精製に通常用いられる公知の
方法、例えばシリカゲル、アルミナなどの担体を用いる
カラムクロマトグラフイーにより各々ＦＯ−２５４６
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｉ、ＪおよびＫ物質をそれぞれ分離精
製することができる。
【００２５】菌体からＦＯ−２５４６物質を採取するに
は、菌体を含水アセトン、含水メタノールなどの含水親
水性有機溶媒で抽出し、得られた抽出液を減圧濃縮し、
その濃縮物を酢酸エチル、酢酸ブチル、ベンゼンなどの
非親水性有機溶媒で抽出、得られた抽出液は前記の培養
液から得た抽出液と合わせて分離精製するか、あるいは
前記と同様の方法によりＦＯ−２５４６物質を分離精製
することができる。
は、菌体を含水アセトン、含水メタノールなどの含水親
水性有機溶媒で抽出し、得られた抽出液を減圧濃縮し、
その濃縮物を酢酸エチル、酢酸ブチル、ベンゼンなどの
非親水性有機溶媒で抽出、得られた抽出液は前記の培養
液から得た抽出液と合わせて分離精製するか、あるいは
前記と同様の方法によりＦＯ−２５４６物質を分離精製
することができる。
【００２６】次に、本発明のＦＯ−２５４６物質の理化
学的性状について述べる。ＦＯ−２５４６Ａ物質、ＦＯ
−２５４６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｃ物質、ＦＯ−２５
４６Ｄ物質、ＦＯ−２５４６Ｉ物質、ＦＯ−２５４６Ｊ
物質およびＦＯ−２５４６Ｋ物質の理化学的性状は表２
および表３に示す。
学的性状について述べる。ＦＯ−２５４６Ａ物質、ＦＯ
−２５４６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｃ物質、ＦＯ−２５
４６Ｄ物質、ＦＯ−２５４６Ｉ物質、ＦＯ−２５４６Ｊ
物質およびＦＯ−２５４６Ｋ物質の理化学的性状は表２
および表３に示す。
【００２７】尚、ＦＯ−２５４６Ａ物質、ＦＯ−２５４
６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｃ物質、ＦＯ−２５４６Ｄ物
質、ＦＯ−２５４６Ｉ物質、ＦＯ−２５４６Ｊ物質およ
びＦＯ−２５４６Ｋ物質の溶媒に対する溶解性、塩基
性、酸性、中性の区別および物質の色は次の通りであ
る。 溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、アセト
ニトリル、酢酸エチル、ベンゼンに可溶、水に不溶 塩基性、酸性、中性の区別：中性 物質の色、形状：黄色粉末
６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｃ物質、ＦＯ−２５４６Ｄ物
質、ＦＯ−２５４６Ｉ物質、ＦＯ−２５４６Ｊ物質およ
びＦＯ−２５４６Ｋ物質の溶媒に対する溶解性、塩基
性、酸性、中性の区別および物質の色は次の通りであ
る。 溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、アセト
ニトリル、酢酸エチル、ベンゼンに可溶、水に不溶 塩基性、酸性、中性の区別：中性 物質の色、形状：黄色粉末
【００２８】
【表２】
【００２９】
【表３】
【００３０】本発明におけるＦＯ−２５４６Ａ物質、Ｆ
Ｏ−２５４６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｄ物質、ＦＯ−２
５４６Ｉ物質、ＦＯ−２５４６Ｊ物質およびＦＯ−２５
４６Ｋ物質の化学構造式はそれぞれ以下に示す通りであ
る。 ＦＯ−２５４６Ａ物質
Ｏ−２５４６Ｂ物質、ＦＯ−２５４６Ｄ物質、ＦＯ−２
５４６Ｉ物質、ＦＯ−２５４６Ｊ物質およびＦＯ−２５
４６Ｋ物質の化学構造式はそれぞれ以下に示す通りであ
る。 ＦＯ−２５４６Ａ物質
【００３１】
【化１１】
ＦＯ−２５４６Ｂ物質
【００３２】
【化１２】
ＦＯ−２５４６Ｄ物質
【００３３】
【化１３】
ＦＯ−２５４６Ｉ物質
【００３４】
【化１４】
ＦＯ−２５４６Ｊ物質
【００３５】
【化１５】
ＦＯ−２５４６Ｋ物質
【００３６】
【化１６】
【００３７】
【発明の効果】次に、本発明のＦＯ−２５４６物質の生
物学的性状について述べる。 （１）ラツト由来アシルコエンザイムＡコレステロール
アシル転位酵素に対する阻害作用 アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素活
性に対する影響は、供田らの方法（ザ・ジャーナル・オ
ブ・アンチバイオティックス、４４巻、１３６頁、１９
９１年）に従い、ラツト肝ミクロソーム画分より調製し
た粗酵素を用い１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
中３００μＭ牛血清アルブミン、３０μＭ〔１−14Ｃ〕
オレオイルコエンザイムＡ（０．０２μＣｉ）、３０μ
Ｍコレステロール（３０分の１重量のトリトンＷＲ−１
３３９で溶解させたもの）を添加して全量２００μl と
し、３７℃で３０分間反応させ、総脂質をクロロホル
ム：メタノール（２：１）混合液で抽出後、ＴＬＣ（キ
ーゼルゲルＧＦ254 、展開溶媒として石油エーテル：ジ
エチルエーテル：酢酸＝９０：１０：１）で各脂質を分
離後、コレステロールエステル画分にとり込まれた放射
活性をＲＩスキャナー（アンビス社製）で分析し、アシ
ルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素活性を
測定した。本酵素活性を５０％阻害する濃度を算定した
結果は表４に示す。
物学的性状について述べる。 （１）ラツト由来アシルコエンザイムＡコレステロール
アシル転位酵素に対する阻害作用 アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素活
性に対する影響は、供田らの方法（ザ・ジャーナル・オ
ブ・アンチバイオティックス、４４巻、１３６頁、１９
９１年）に従い、ラツト肝ミクロソーム画分より調製し
た粗酵素を用い１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
中３００μＭ牛血清アルブミン、３０μＭ〔１−14Ｃ〕
オレオイルコエンザイムＡ（０．０２μＣｉ）、３０μ
Ｍコレステロール（３０分の１重量のトリトンＷＲ−１
３３９で溶解させたもの）を添加して全量２００μl と
し、３７℃で３０分間反応させ、総脂質をクロロホル
ム：メタノール（２：１）混合液で抽出後、ＴＬＣ（キ
ーゼルゲルＧＦ254 、展開溶媒として石油エーテル：ジ
エチルエーテル：酢酸＝９０：１０：１）で各脂質を分
離後、コレステロールエステル画分にとり込まれた放射
活性をＲＩスキャナー（アンビス社製）で分析し、アシ
ルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素活性を
測定した。本酵素活性を５０％阻害する濃度を算定した
結果は表４に示す。
【００３８】
【表４】
【００３９】以上のように、本発明のＦＯ−２５４６物
質は、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位
酵素に対して著しい阻害活性を示すことから、ヒトのコ
レステロール蓄積に起因する疾病の予防および治療に有
用である。
質は、アシルコエンザイムＡコレステロールアシル転位
酵素に対して著しい阻害活性を示すことから、ヒトのコ
レステロール蓄積に起因する疾病の予防および治療に有
用である。
【００４０】
【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
する。 実施例 １ ５００ｍｌ容三角フラスコにグルコース２％、酵母エキ
ス０．２％、硫酸マグネシウム（７水和物）０．０５
％、ポリペプトン０．５％、リン酸２水素カリウム０．
１％、寒天０．１％を含む培地（ｐＨ６．０に調整）１
００ｍｌを仕込み、綿栓後、蒸気滅菌し、寒天培地上に
生育させたＳｔｒａｉｎ ＦＯ−２５４６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−４４０６）を白金耳にて無菌的に接種し、２７℃
で４８時間振とう培養して種培養液を得た。
する。 実施例 １ ５００ｍｌ容三角フラスコにグルコース２％、酵母エキ
ス０．２％、硫酸マグネシウム（７水和物）０．０５
％、ポリペプトン０．５％、リン酸２水素カリウム０．
１％、寒天０．１％を含む培地（ｐＨ６．０に調整）１
００ｍｌを仕込み、綿栓後、蒸気滅菌し、寒天培地上に
生育させたＳｔｒａｉｎ ＦＯ−２５４６（ＦＥＲＭ
ＢＰ−４４０６）を白金耳にて無菌的に接種し、２７℃
で４８時間振とう培養して種培養液を得た。
【００４１】一方、３０Ｌジャーフアーメンター１基に
可溶性スターチ３．０％、グリセリン１．０％、きなこ
２．０％、乾燥酵母０．３％、塩化カリウム０．３％、
炭酸カルシウム０．２％、硫酸マグネシウム（７水和
物）０．０５％、リン酸２水素カリウム０．０５％（ｐ
Ｈ６．５に調整）に仕込み、蒸気滅菌冷却後、種培養し
た種培養液２００ｍｌを無菌的に移植し、攪拌速度２５
０ｒｐｍ、通気量１０Ｌ／分の培養条件下で２７℃で７
２時間、通気攪拌培養した。
可溶性スターチ３．０％、グリセリン１．０％、きなこ
２．０％、乾燥酵母０．３％、塩化カリウム０．３％、
炭酸カルシウム０．２％、硫酸マグネシウム（７水和
物）０．０５％、リン酸２水素カリウム０．０５％（ｐ
Ｈ６．５に調整）に仕込み、蒸気滅菌冷却後、種培養し
た種培養液２００ｍｌを無菌的に移植し、攪拌速度２５
０ｒｐｍ、通気量１０Ｌ／分の培養条件下で２７℃で７
２時間、通気攪拌培養した。
【００４２】培養後、菌体を含む全培養液２０Ｌを酢酸
エチル１８Ｌで抽出し、抽出液を減圧濃縮して粗製物１
９ｇを得た。この粗製物をシリカゲル（４００ｇ、メル
ク社製、ＡＲＴ．９３８５）のカラムにチャージし、ク
ロロホルム−メタノール（９９：１）で溶出するカラム
クロマトグラフイーを行った。各フラクションは１００
ｍｌづつ分画し、活性分を含むフラクションを集め、減
圧乾固して粗活性物質１．０ｇを得た。
エチル１８Ｌで抽出し、抽出液を減圧濃縮して粗製物１
９ｇを得た。この粗製物をシリカゲル（４００ｇ、メル
ク社製、ＡＲＴ．９３８５）のカラムにチャージし、ク
ロロホルム−メタノール（９９：１）で溶出するカラム
クロマトグラフイーを行った。各フラクションは１００
ｍｌづつ分画し、活性分を含むフラクションを集め、減
圧乾固して粗活性物質１．０ｇを得た。
【００４３】これを１０回に分けて高速液体クロマトグ
ラフイーにより分離精製した。装置はトリロータＶ（日
本分光社製）を用い、カラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ａ−
３４３（ＯＤＳ系樹脂、山村化学研究所製）を用い、溶
媒系は７５％から９０％のアセトニトリル水へ２０分か
けた直線グラジエントの条件で、検出はＵＶ２２５ｎ
ｍ、流速は８ｍｌ／分で行った。その結果、ＦＯ−２５
４６Ａ物質１３ｍｇ、ＦＯ−２５４６Ｂ物質４．６ｍ
ｇ、ＦＯ−２５４６Ｃ物質１３ｍｇ、ＦＯ−２５４６Ｄ
物質３３５ｍｇ、ＦＯ−２５４６Ｉ物質４１ｍｇ、ＦＯ
−２５４６Ｊ物質１３４ｍｇおよびＦＯ−２５４６Ｋ物
質１１ｍｇを単離した。
ラフイーにより分離精製した。装置はトリロータＶ（日
本分光社製）を用い、カラムはＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ａ−
３４３（ＯＤＳ系樹脂、山村化学研究所製）を用い、溶
媒系は７５％から９０％のアセトニトリル水へ２０分か
けた直線グラジエントの条件で、検出はＵＶ２２５ｎ
ｍ、流速は８ｍｌ／分で行った。その結果、ＦＯ−２５
４６Ａ物質１３ｍｇ、ＦＯ−２５４６Ｂ物質４．６ｍ
ｇ、ＦＯ−２５４６Ｃ物質１３ｍｇ、ＦＯ−２５４６Ｄ
物質３３５ｍｇ、ＦＯ−２５４６Ｉ物質４１ｍｇ、ＦＯ
−２５４６Ｊ物質１３４ｍｇおよびＦＯ−２５４６Ｋ物
質１１ｍｇを単離した。
【図１】ＦＯ−２５４６Ａ物質の紫外線吸収スペクトル
である。
である。
【図２】ＦＯ−２５４６Ａ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
である。
【図３】ＦＯ−２５４６Ａ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルである。
ルである。
【図４】ＦＯ−２５４６Ａ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクト
ルである。
ルである。
【図５】ＦＯ−２５４６Ｂ物質の紫外線吸収スペクトル
である。
である。
【図６】ＦＯ−２５４６Ｂ物質の赤外線吸収スペクトル
である。
である。
【図７】ＦＯ−２５４６Ｂ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルである。
ルである。
【図８】ＦＯ−２５４６Ｂ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクト
ルである。
ルである。
【図９】ＦＯ−２５４６Ｃ物質の紫外線吸収スペクトル
である。
である。
【図１０】ＦＯ−２５４６Ｃ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１１】ＦＯ−２５４６Ｃ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図１２】ＦＯ−２５４６Ｃ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図１３】ＦＯ−２５４６Ｄ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１４】ＦＯ−２５４６Ｄ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１５】ＦＯ−２５４６Ｄ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図１６】ＦＯ−２５４６Ｄ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図１７】ＦＯ−２５４６Ｉ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１８】ＦＯ−２５４６Ｉ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１９】ＦＯ−２５４６Ｉ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図２０】ＦＯ−２５４６Ｉ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図２１】ＦＯ−２５４６Ｊ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図２２】ＦＯ−２５４６Ｊ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図２３】ＦＯ−２５４６Ｊ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図２４】ＦＯ−２５４６Ｊ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図２５】ＦＯ−２５４６Ｋ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図２６】ＦＯ−２５４６Ｋ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図２７】ＦＯ−２５４６Ｋ物質の 1Ｈ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
【図２８】ＦＯ−２５４６Ｋ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペク
トルである。
トルである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
// Ａ６１Ｋ 31/40 Ａ６１Ｋ 31/40
Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/06
(Ｃ１２Ｎ 1/14 Ｃ１２Ｎ 1/14
Ｃ１２Ｒ 1:645） Ｃ１２Ｒ 1:645
(Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｐ 17/18
Ｃ１２Ｒ 1:645）
(56)参考文献 特開 平６−65246（ＪＰ，Ａ)
国際公開94／09004（ＷＯ，Ａ１)
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C12P 17/00 - 17/18
C07D 491/153
C07D 491/22
ＣＡ／ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】 下記一般式 【化１】 （式中、Ｒ1 は水素原子または水酸基を示し、Ｗは結合
手を有しないか、または酸素原子を示し、ＸはＹと共に
式 【化２】 で表される基、式 【化３】 で表される基または式 【化４】 で表される基を形成し、Ｒ2 は式 【化５】 で表される基を示し、Ｚは単結合または酸素原子を示
し、Ｒ3 は水素原子または水酸基を示す）で表されるＦ
Ｏ−２５４６物質。 - 【請求項２】 分生子果不完全菌綱に属し、請求項１に
記載のＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有するＳｔ
ｒａｉｎ ＦＯ−２５４６（ＦＥＲＭ ＢＰ−４４０
６）を培地に培養して培養物中にＦＯ−２５４６物質を
蓄積せしめ、該培養物からＦＯ−２５４６物質を採取す
ることを特徴とするＦＯ−２５４６物質の製造法。 - 【請求項３】 分生子果不完全菌綱に属し、請求項１に
記載のＦＯ−２５４６物質を生産する能力を有するＳｔ
ｒａｉｎ ＦＯ−２５４６（ＦＥＲＭ ＢＰ−４４０
６）である微生物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25872593A JP3434860B2 (ja) | 1992-10-22 | 1993-10-15 | Ｆｏ−２５４６物質およびその製造法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4-284760 | 1992-10-22 | ||
| JP28476092 | 1992-10-22 | ||
| JP25872593A JP3434860B2 (ja) | 1992-10-22 | 1993-10-15 | Ｆｏ−２５４６物質およびその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06192264A JPH06192264A (ja) | 1994-07-12 |
| JP3434860B2 true JP3434860B2 (ja) | 2003-08-11 |
Family
ID=26543806
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25872593A Expired - Fee Related JP3434860B2 (ja) | 1992-10-22 | 1993-10-15 | Ｆｏ−２５４６物質およびその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3434860B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7138941B2 (ja) * | 2018-12-10 | 2022-09-20 | 学校法人北里研究所 | ステロールｏ－アシルトランスフェラーゼ２（ｓｏａｔ２）阻害活性を有する新規化合物及びその製造方法 |
-
1993
- 1993-10-15 JP JP25872593A patent/JP3434860B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06192264A (ja) | 1994-07-12 |
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