JPH05281232A - ＨＢｓ抗体測定試薬 - Google Patents
ＨＢｓ抗体測定試薬Info
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- JPH05281232A JPH05281232A JP8387592A JP8387592A JPH05281232A JP H05281232 A JPH05281232 A JP H05281232A JP 8387592 A JP8387592 A JP 8387592A JP 8387592 A JP8387592 A JP 8387592A JP H05281232 A JPH05281232 A JP H05281232A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 簡単な操作で高感度、正確、安価かつ短時間
にＨＢｓ抗体を測定することができ、しかも該測定の自
動化が可能なＨＢｓ抗体測定試薬を供給しようとするも
のである。 【構成】 リン脂質または糖脂質を主要構成成分とする
リポソームの表面に架橋剤を介してＨＢｓ抗原を含むタ
ンパク質を結合させ、該リポソーム内に親水性標識物質
を封入することを特徴とするＨＢｓ抗体測定試薬および
これを用いるＨＢｓ抗体測定法である。
にＨＢｓ抗体を測定することができ、しかも該測定の自
動化が可能なＨＢｓ抗体測定試薬を供給しようとするも
のである。 【構成】 リン脂質または糖脂質を主要構成成分とする
リポソームの表面に架橋剤を介してＨＢｓ抗原を含むタ
ンパク質を結合させ、該リポソーム内に親水性標識物質
を封入することを特徴とするＨＢｓ抗体測定試薬および
これを用いるＨＢｓ抗体測定法である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＨＢｓ抗体（Ｂ型肝炎
表面抗体）の測定試薬、さらに詳細には、補体依存性リ
ポソーム膜損傷反応を利用した、簡単な自動的操作によ
ってＨＢｓ抗体を測定することのできるＨＢｓ抗体測定
試薬およびＨＢｓ抗体の測定法に関する。
表面抗体）の測定試薬、さらに詳細には、補体依存性リ
ポソーム膜損傷反応を利用した、簡単な自動的操作によ
ってＨＢｓ抗体を測定することのできるＨＢｓ抗体測定
試薬およびＨＢｓ抗体の測定法に関する。
【０００２】
【従来の技術】Ｂ型肝炎ウイルスは主にヒト血液を介し
て伝播するウイルスで、急性肝疾患を惹き起こすのみな
らず、慢性肝炎、肝硬変さらに原発性肝癌とも密接に関
連する重大な病原ウイルスである。このウイルスすなわ
ち抗原は直径42nm前後の大型粒子で内部に直径27nmのコ
ア（core）とそれをとりまく外層（surface ）より成り
立っており、両者の組成は免疫学的に抗原性を全く異に
しているため、コア組成の抗原性はＢ型肝炎核抗原（Ｈ
Ｂｃ抗原）、外層の組成の抗原性はＢ型肝炎表面抗原
（ＨＢｓ抗原）と名付けられている。さらに、ＨＢｃ抗
原に関連した第３の抗原であるｅ抗原（ＨＢｅ抗原）の
存在も明らかにされている。これらＨＢＶ関連抗原のう
ち感染予防抗原として有効なものがＨＢｓ抗原であるこ
とが1971年のクルグハムら（ジャーナル オブ ザ ア
メリカン メディカル アソシエーション(J.Am.Med.As
soc.) 217,41〜45(1971)参照）により報告されている。
したがってＨＢｓ抗体の検出は、Ｂ型肝炎の回復・治療
を知る、または、ワクチン接種後の免疫状態を知る指標
になる。
て伝播するウイルスで、急性肝疾患を惹き起こすのみな
らず、慢性肝炎、肝硬変さらに原発性肝癌とも密接に関
連する重大な病原ウイルスである。このウイルスすなわ
ち抗原は直径42nm前後の大型粒子で内部に直径27nmのコ
ア（core）とそれをとりまく外層（surface ）より成り
立っており、両者の組成は免疫学的に抗原性を全く異に
しているため、コア組成の抗原性はＢ型肝炎核抗原（Ｈ
Ｂｃ抗原）、外層の組成の抗原性はＢ型肝炎表面抗原
（ＨＢｓ抗原）と名付けられている。さらに、ＨＢｃ抗
原に関連した第３の抗原であるｅ抗原（ＨＢｅ抗原）の
存在も明らかにされている。これらＨＢＶ関連抗原のう
ち感染予防抗原として有効なものがＨＢｓ抗原であるこ
とが1971年のクルグハムら（ジャーナル オブ ザ ア
メリカン メディカル アソシエーション(J.Am.Med.As
soc.) 217,41〜45(1971)参照）により報告されている。
したがってＨＢｓ抗体の検出は、Ｂ型肝炎の回復・治療
を知る、または、ワクチン接種後の免疫状態を知る指標
になる。
【０００３】ＨＢｓ抗体の検査方法には、交差免疫電気
泳動法（ＣＩＥ）、二次元免疫拡散法（ＭＯ）、受身赤
血球凝集反応（ＰＨＡ）、免疫粘着赤血球凝集反応（Ｉ
ＡＨＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法
（ＲＩＡ）などが知られている。現在では、おもに酵素
免疫測定法（ＥＩＡ）が用いられている。
泳動法（ＣＩＥ）、二次元免疫拡散法（ＭＯ）、受身赤
血球凝集反応（ＰＨＡ）、免疫粘着赤血球凝集反応（Ｉ
ＡＨＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定法
（ＲＩＡ）などが知られている。現在では、おもに酵素
免疫測定法（ＥＩＡ）が用いられている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】このうち、ＣＩＥおよ
びＭＯは測定時間が長く、感度も低い。また、ＰＨＡお
よびＩＡＨＡは安定した抗原被膜赤血球を用意すること
が困難であり、試薬価格も高い。さらに、ＥＩＡおよび
ＲＩＡは感度の高い点ではＭＯの5,000 〜50,000倍にも
なるが、試薬価格が高く、測定に数日かかるという欠点
を有している。
びＭＯは測定時間が長く、感度も低い。また、ＰＨＡお
よびＩＡＨＡは安定した抗原被膜赤血球を用意すること
が困難であり、試薬価格も高い。さらに、ＥＩＡおよび
ＲＩＡは感度の高い点ではＭＯの5,000 〜50,000倍にも
なるが、試薬価格が高く、測定に数日かかるという欠点
を有している。
【０００５】また、前述のようなＨＢｓ抗体の臨床上の
重要性に鑑み、測定法の自動化が望まれている。
重要性に鑑み、測定法の自動化が望まれている。
【０００６】したがって、本発明は簡単な操作で、高感
度、正確、安価かつ短時間にＨＢｓ抗体を測定すること
ができ、しかも該測定の自動化が可能なＨＢｓ抗体測定
試薬を供給することを目的とする。
度、正確、安価かつ短時間にＨＢｓ抗体を測定すること
ができ、しかも該測定の自動化が可能なＨＢｓ抗体測定
試薬を供給することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、リン脂質また
は糖脂質を主要構成成分とするリポソームの表面に架橋
剤を介してＨＢｓ抗原を含むタンパク質を結合させ、該
リポソーム内に親水性標識物質を封入するＨＢｓ抗体測
定試薬に関する。また、本発明はリン脂質または糖脂質
を主要構成成分とするリポソームの表面に、抗原もしく
は抗原を含むタンパク質または抗体もしくは抗体を含む
タンパク質を結合または吸着させ、かつ該リポソーム内
に標識物質を封入した免疫測定試薬を用い、前記リポソ
ームの膜上で生じる抗原−抗体反応にともないリポソー
ム膜溶解が生じ、放出される標識物質を定量することに
より、試料中の抗原または抗体量を測定する免疫測定法
に関する。
は糖脂質を主要構成成分とするリポソームの表面に架橋
剤を介してＨＢｓ抗原を含むタンパク質を結合させ、該
リポソーム内に親水性標識物質を封入するＨＢｓ抗体測
定試薬に関する。また、本発明はリン脂質または糖脂質
を主要構成成分とするリポソームの表面に、抗原もしく
は抗原を含むタンパク質または抗体もしくは抗体を含む
タンパク質を結合または吸着させ、かつ該リポソーム内
に標識物質を封入した免疫測定試薬を用い、前記リポソ
ームの膜上で生じる抗原−抗体反応にともないリポソー
ム膜溶解が生じ、放出される標識物質を定量することに
より、試料中の抗原または抗体量を測定する免疫測定法
に関する。
【０００８】
【実施例】本発明のＨＢｓ抗体測定試薬について説明す
る。
る。
【０００９】本発明において、リポソームはリン脂質ま
たは糖脂質を主要構成成分とするものであれば、従来使
用されている何れのものでもよく、とくに限定されるこ
とはない。しかし、リン脂質または糖脂質がその炭化水
素鎖がグリセロール部にエーテル結合するものであれ
ば、安定なリポソームがえられやすく、より好ましい。
炭化水素鎖がグリセロール部にエステル結合するリン脂
質または糖脂質としては、動物や微生物などの細胞膜に
広く存在するリン脂質または糖脂質、たとえばホスファ
チジルエタノールアミン類、ホスファチジルコリン類、
ホスファチジルセリン類、スフィンゴミエリン類などの
各種リン脂質があげられる。もちろん、天然の卵黄、牛
脳や大豆などからえられるホスファチジルコリンも適用
できる。このようなリン脂質中の脂肪酸の種類には各種
の飽和または不飽和脂肪酸が含まれ、たとえばホスファ
チジルコリンについてあげれば、ジヘプタノイルホスフ
ァチジルコリン、ジカプロイルホスファチジルコリン、
ジデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホス
ファチジルコリン、ジヘプタデカノイルホスファチジル
コリン、ジベヘノイルホスファチジルコリン、ジミリス
トイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファ
チジルコリンなどの脂肪酸があげられ、前述のその他の
リン脂質も同様に各種飽和および不飽和脂肪酸が含まれ
る。炭化水素鎖がグリセロール部にエーテル結合するリ
ン脂質または糖脂質としては、海産生物に含まれる１-
アルキル- ２- アセチル- ｓｎ- グリセロール- ３- フ
ォスホリルコリンとして一般的に現わされるグリセリル
エーテルなどや、古細菌に属する好熱性菌脂質などがあ
げられ、天然の抽出物であってもそれをモデルとした人
工合成物でもよい。人工合成による脂質においては、炭
化水素鎖としてポリイソプレノイド鎖、アルキル鎖、ア
ルケン鎖などがあげられ、ポリイソプレノイド鎖におい
ては鎖の途中に五員環を形成してもよい。また、アルキ
ル鎖またはアルケン鎖は側鎖に別の炭化水素化合物を有
してもよい。また、グリセロール部にエーテル結合する
炭化水素の炭素数は、脂質がリポソーム膜を形成できる
ものであればとくに限定されないが、通常、12〜40が好
ましい。
たは糖脂質を主要構成成分とするものであれば、従来使
用されている何れのものでもよく、とくに限定されるこ
とはない。しかし、リン脂質または糖脂質がその炭化水
素鎖がグリセロール部にエーテル結合するものであれ
ば、安定なリポソームがえられやすく、より好ましい。
炭化水素鎖がグリセロール部にエステル結合するリン脂
質または糖脂質としては、動物や微生物などの細胞膜に
広く存在するリン脂質または糖脂質、たとえばホスファ
チジルエタノールアミン類、ホスファチジルコリン類、
ホスファチジルセリン類、スフィンゴミエリン類などの
各種リン脂質があげられる。もちろん、天然の卵黄、牛
脳や大豆などからえられるホスファチジルコリンも適用
できる。このようなリン脂質中の脂肪酸の種類には各種
の飽和または不飽和脂肪酸が含まれ、たとえばホスファ
チジルコリンについてあげれば、ジヘプタノイルホスフ
ァチジルコリン、ジカプロイルホスファチジルコリン、
ジデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホス
ファチジルコリン、ジヘプタデカノイルホスファチジル
コリン、ジベヘノイルホスファチジルコリン、ジミリス
トイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファ
チジルコリンなどの脂肪酸があげられ、前述のその他の
リン脂質も同様に各種飽和および不飽和脂肪酸が含まれ
る。炭化水素鎖がグリセロール部にエーテル結合するリ
ン脂質または糖脂質としては、海産生物に含まれる１-
アルキル- ２- アセチル- ｓｎ- グリセロール- ３- フ
ォスホリルコリンとして一般的に現わされるグリセリル
エーテルなどや、古細菌に属する好熱性菌脂質などがあ
げられ、天然の抽出物であってもそれをモデルとした人
工合成物でもよい。人工合成による脂質においては、炭
化水素鎖としてポリイソプレノイド鎖、アルキル鎖、ア
ルケン鎖などがあげられ、ポリイソプレノイド鎖におい
ては鎖の途中に五員環を形成してもよい。また、アルキ
ル鎖またはアルケン鎖は側鎖に別の炭化水素化合物を有
してもよい。また、グリセロール部にエーテル結合する
炭化水素の炭素数は、脂質がリポソーム膜を形成できる
ものであればとくに限定されないが、通常、12〜40が好
ましい。
【００１０】本発明に用いられるリポソームの形状は、
多重層リポソーム（multi lamellarvesicle、以下ＭＬ
Ｖと略す）、小さな一枚膜リポソーム（small unilamel
larvesicle 、以下ＳＵＶと略す）、大きな一枚膜リポ
ソーム（large unilamellarvesicle 、以下ＬＵＶと略
す）の何れであってもよい。
多重層リポソーム（multi lamellarvesicle、以下ＭＬ
Ｖと略す）、小さな一枚膜リポソーム（small unilamel
larvesicle 、以下ＳＵＶと略す）、大きな一枚膜リポ
ソーム（large unilamellarvesicle 、以下ＬＵＶと略
す）の何れであってもよい。
【００１１】リポソームに固定化するＨＢｓ抗原はヒト
血清より精製されたものでもよいしリコンビナント抗原
でもよい。またＨＢｓ抗原を含むタンパク質に含まれる
ＨＢｓ抗原以外のタンパク質としては、ＨＢｃ抗原、Ｈ
Ｂｅ抗原、ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）抗原、ＨＣＶ
（Ｃ型肝炎ウイルス）抗原、ＨＩＶ抗原、ヒューマン・
Ｔセル・ロイケミア・ウイルス−Ｉ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）
抗原、ヒューマン・Ｔセル・ロイケミア・ウイルス−II
I 型（ＨＴＬＶ−III ）抗原などのウイルス関連の抗原
があげられる。ＨＢｓ抗原を含むタンパク質に、ＨＢｓ
抗原、ＨＢｃ抗原、ＨＢｅ抗原の３種を採用すれば、同
時に抗ＨＢｓ抗体、抗ＨＢｃ抗体、抗ＨＢｅ抗体を測定
できる測定試薬を作製することができる。ＨＢｓ抗原を
含むタンパク質に、ＨＢｓ抗原、ＨＢＡ抗原、ＨＣＶ抗
原の３種を採用すれば、同時に抗ＨＢｓ抗体、抗ＨＢＡ
抗体、抗ＨＣＶ抗体を測定できる測定試薬を作製するこ
とができる。
血清より精製されたものでもよいしリコンビナント抗原
でもよい。またＨＢｓ抗原を含むタンパク質に含まれる
ＨＢｓ抗原以外のタンパク質としては、ＨＢｃ抗原、Ｈ
Ｂｅ抗原、ＨＡＶ（Ａ型肝炎ウイルス）抗原、ＨＣＶ
（Ｃ型肝炎ウイルス）抗原、ＨＩＶ抗原、ヒューマン・
Ｔセル・ロイケミア・ウイルス−Ｉ型（ＨＴＬＶ−Ｉ）
抗原、ヒューマン・Ｔセル・ロイケミア・ウイルス−II
I 型（ＨＴＬＶ−III ）抗原などのウイルス関連の抗原
があげられる。ＨＢｓ抗原を含むタンパク質に、ＨＢｓ
抗原、ＨＢｃ抗原、ＨＢｅ抗原の３種を採用すれば、同
時に抗ＨＢｓ抗体、抗ＨＢｃ抗体、抗ＨＢｅ抗体を測定
できる測定試薬を作製することができる。ＨＢｓ抗原を
含むタンパク質に、ＨＢｓ抗原、ＨＢＡ抗原、ＨＣＶ抗
原の３種を採用すれば、同時に抗ＨＢｓ抗体、抗ＨＢＡ
抗体、抗ＨＣＶ抗体を測定できる測定試薬を作製するこ
とができる。
【００１２】リポソーム内に封入される標識物質は、リ
ポソーム外に溶出された際に定量可能な物質でなければ
ならない。かかる物質としては、たとえば、ラジオイム
ノアッセイで用いられる 125Ｉや 131Ｉなどの放射性同
位元素；低濃度域（10-3Ｍ以下）でも非常に強い蛍光を
発するカルボキシフルオレセイン、フルオレセインイソ
チオシアネートのような蛍光性化合物；リポソーム外で
の酸化反応により発光するルミノールやルシフェリンの
ような発光性化合物；可視部あるいは紫外部に特異的な
吸収帯を有する吸光性化合物（水溶性色素など）；酸化
酵素の作用により分解され酸素消費あるいは過酸化水素
生成をもたらすグリコースまたはスクロースなどの糖
類；テトラペンチルアンモニウムのような比較的大きな
イオン性化合物；カルシウムイオンなどの金属；ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）のような補
酵素類；メチルピオロゲンを初めとするラジカル化合
物；酵素免疫測定法などで用いられるβ- ガラクトシダ
ーゼ、ペルオキシダーゼなどの酵素類などが好ましい。
標識物質としてカルシウムイオンを用いたばあいにはカ
ルシウム依存性酵素（カルバイン、プロテインキナーゼ
Ｃ、トランスグルタミラーゼなど）を、酵素を用いたば
あいには基質（前述の酵素に対する基質としては、それ
ぞれ、４- メチルウムベリフェリルβ- Ｄ- ガラクトシ
ド、ｐ- ヒドロキシフェニルプロピオン酸があげられ
る）を、リポソーム破壊によりこれらの物質が放出した
際に用いることにより、はじめて定量が可能となる。
ポソーム外に溶出された際に定量可能な物質でなければ
ならない。かかる物質としては、たとえば、ラジオイム
ノアッセイで用いられる 125Ｉや 131Ｉなどの放射性同
位元素；低濃度域（10-3Ｍ以下）でも非常に強い蛍光を
発するカルボキシフルオレセイン、フルオレセインイソ
チオシアネートのような蛍光性化合物；リポソーム外で
の酸化反応により発光するルミノールやルシフェリンの
ような発光性化合物；可視部あるいは紫外部に特異的な
吸収帯を有する吸光性化合物（水溶性色素など）；酸化
酵素の作用により分解され酸素消費あるいは過酸化水素
生成をもたらすグリコースまたはスクロースなどの糖
類；テトラペンチルアンモニウムのような比較的大きな
イオン性化合物；カルシウムイオンなどの金属；ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）のような補
酵素類；メチルピオロゲンを初めとするラジカル化合
物；酵素免疫測定法などで用いられるβ- ガラクトシダ
ーゼ、ペルオキシダーゼなどの酵素類などが好ましい。
標識物質としてカルシウムイオンを用いたばあいにはカ
ルシウム依存性酵素（カルバイン、プロテインキナーゼ
Ｃ、トランスグルタミラーゼなど）を、酵素を用いたば
あいには基質（前述の酵素に対する基質としては、それ
ぞれ、４- メチルウムベリフェリルβ- Ｄ- ガラクトシ
ド、ｐ- ヒドロキシフェニルプロピオン酸があげられ
る）を、リポソーム破壊によりこれらの物質が放出した
際に用いることにより、はじめて定量が可能となる。
【００１３】本発明のＨＢｓ抗体測定試薬は、たとえば
次の方法で製造される。
次の方法で製造される。
【００１４】まずリン脂質または糖脂質をフラスコに入
れ、溶媒を加えて反応させたのち、溶媒を留去し、吸引
乾燥する。しかる後に、壁面に薄膜が形成されたフラス
コ内に所定の標識物質の水溶液を加え、密栓をして振盪
し、標識物質封入リポソームをえる。
れ、溶媒を加えて反応させたのち、溶媒を留去し、吸引
乾燥する。しかる後に、壁面に薄膜が形成されたフラス
コ内に所定の標識物質の水溶液を加え、密栓をして振盪
し、標識物質封入リポソームをえる。
【００１５】一方、ＨＢｓ抗原と架橋剤とを緩衝液中で
反応させて架橋剤を導入し、しかるのち、必要であれ
ば、架橋基を還元する試薬（たとえばジチオスレイトー
ル：ＤＴＴ）と反応させて、修飾抗原をえる。
反応させて架橋剤を導入し、しかるのち、必要であれ
ば、架橋基を還元する試薬（たとえばジチオスレイトー
ル：ＤＴＴ）と反応させて、修飾抗原をえる。
【００１６】最後に、標識物質封入リポソームと修飾抗
原とを緩衝液中で反応せしめることにより、本発明のＨ
Ｂｓ抗体測定試薬であるＨＢｓ抗原結合リポソームがえ
られる。かかるＨＢｓ抗体測定試薬は、通常、標識物質
を内包し、表面に固定化された抗原を担持したマイクロ
カプセルとしてえられる。
原とを緩衝液中で反応せしめることにより、本発明のＨ
Ｂｓ抗体測定試薬であるＨＢｓ抗原結合リポソームがえ
られる。かかるＨＢｓ抗体測定試薬は、通常、標識物質
を内包し、表面に固定化された抗原を担持したマイクロ
カプセルとしてえられる。
【００１７】前記製造法における架橋剤としては、たと
えば、Ｎ- スクシンイミジル３- （２- ピリジルジチ
オ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ- スクシンイミジ
ル４-（ｐ- マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰ
Ｂ）、Ｎ- スクシンイミジル４- （ｐ- マレイミドフェ
ニル）アセテート（ＳＭＰＡ）、Ｎ- スクシンイミジル
４- （ｐ- マレイミドフェニル）プロピオネート（ＳＭ
ＰＰ）、Ｎ- （γ- マレイミドブチリルオキシ）スクシ
ンイミド（ＧＭＢＳ）、Ｎ- （ε- マレイミドカプロイ
ルオキシ）スクシンイミド（ＥＭＣＳ）、グルタルアル
デヒド、テレフタルアルデヒドなどのジアルデヒドなど
があげられる。
えば、Ｎ- スクシンイミジル３- （２- ピリジルジチ
オ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ- スクシンイミジ
ル４-（ｐ- マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰ
Ｂ）、Ｎ- スクシンイミジル４- （ｐ- マレイミドフェ
ニル）アセテート（ＳＭＰＡ）、Ｎ- スクシンイミジル
４- （ｐ- マレイミドフェニル）プロピオネート（ＳＭ
ＰＰ）、Ｎ- （γ- マレイミドブチリルオキシ）スクシ
ンイミド（ＧＭＢＳ）、Ｎ- （ε- マレイミドカプロイ
ルオキシ）スクシンイミド（ＥＭＣＳ）、グルタルアル
デヒド、テレフタルアルデヒドなどのジアルデヒドなど
があげられる。
【００１８】このようにして調製したＨＢｓ抗体測定試
薬を用いて、被検体中のＨＢｓ抗体を測定するには、被
検体中にその試薬および補体を加え、抗原- 抗体と補体
との結合反応を引き起こさせる。すると、かかる反応量
に比例して、リポソーム内から標識物質が放出されてく
る。ついで、この標識物質に応じた分析法（たとえば、
標識物質が蛍光物質であれば、蛍光分析法）により定量
を行ない、たとえば、あらかじめ作成した検量線によ
り、試料中の抗体の量を測定することができる。
薬を用いて、被検体中のＨＢｓ抗体を測定するには、被
検体中にその試薬および補体を加え、抗原- 抗体と補体
との結合反応を引き起こさせる。すると、かかる反応量
に比例して、リポソーム内から標識物質が放出されてく
る。ついで、この標識物質に応じた分析法（たとえば、
標識物質が蛍光物質であれば、蛍光分析法）により定量
を行ない、たとえば、あらかじめ作成した検量線によ
り、試料中の抗体の量を測定することができる。
【００１９】この測定操作において使用する補体は、と
くに限定されないが、通常、モルモット血清が用いられ
る。しかし、ウサギ、マウスまたはヒトなどの血清を使
用してもよい。
くに限定されないが、通常、モルモット血清が用いられ
る。しかし、ウサギ、マウスまたはヒトなどの血清を使
用してもよい。
【００２０】次に本発明を実施例をあげて説明するが、
本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００２１】実施例１ (1) リポソームの調製 Ｎ- スクシンイミジル４- （ｐ- マレイミドフェニル）
ブチレート（ＳＭＰＢ）28.1μmol とジパルミトルフォ
スファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）20μmol を
クロロホルム4.5ml と無水メタノール0.5ml との混液に
溶解した。これにトリエチルアミン20μmol を添加し、
窒素封入下室温で２時間撹拌し反応させた。反応終了
後、メタノール3.5ml 、蒸留水２mlを加え、よく振盪し
た。これを静置し、クロロホルム相をとり、溶媒を蒸発
させたのち、約５mlのクロロホルムを添加し溶解した。
この溶液を、150 ℃で12時間以上乾燥させクロロホルム
で平衡化した10ml容量のシリカゲル（Wakogel C-100 、
和光純薬工業（株）製）カラムに負荷し、クロロホルム
- メタノール（20：１、ｖ／ｖ）40〜50mlで洗浄した。
クロロホルム- メタノール（５：１、ｖ／ｖ）により溶
出する画分を集め、溶媒を蒸発させたのち、新たに５ml
のクロロホルムに溶解した。以上の操作により、Ｎ-
（４- （ｐ- マレイミドフェニル）ブチリル）ジパルミ
トイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＢ- ＤＰ
ＰＥ）を調製した。
ブチレート（ＳＭＰＢ）28.1μmol とジパルミトルフォ
スファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）20μmol を
クロロホルム4.5ml と無水メタノール0.5ml との混液に
溶解した。これにトリエチルアミン20μmol を添加し、
窒素封入下室温で２時間撹拌し反応させた。反応終了
後、メタノール3.5ml 、蒸留水２mlを加え、よく振盪し
た。これを静置し、クロロホルム相をとり、溶媒を蒸発
させたのち、約５mlのクロロホルムを添加し溶解した。
この溶液を、150 ℃で12時間以上乾燥させクロロホルム
で平衡化した10ml容量のシリカゲル（Wakogel C-100 、
和光純薬工業（株）製）カラムに負荷し、クロロホルム
- メタノール（20：１、ｖ／ｖ）40〜50mlで洗浄した。
クロロホルム- メタノール（５：１、ｖ／ｖ）により溶
出する画分を集め、溶媒を蒸発させたのち、新たに５ml
のクロロホルムに溶解した。以上の操作により、Ｎ-
（４- （ｐ- マレイミドフェニル）ブチリル）ジパルミ
トイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＢ- ＤＰ
ＰＥ）を調製した。
【００２２】100ml ナス型フラスコに、特願平3-262142
号明細書記載の方法で合成した１、２ジ- Ｏ- フタニル
グリセロ- ３- フォスホコリン（Ｐｈｙ- ＰＣ）150 μ
mol、リン酸ジセチル（ＤＣＰ）7.5 μmol 、ＭＰＢ-
ＤＰＰＥ7.5 μmol をとり、約10mlのクロロホルムに溶
解し、42℃以上の水溶液中にてロータリーエバポレータ
ーで溶媒を除去したのち、残った脂質薄膜に、標識物質
水溶液として自己消光性の蛍光物質である0.2 Ｍカルボ
キシフルオレセイン（ＣＦ）15mlを加えてボルテックス
（Vortex）ミキサーで10分間振盪撹拌しＭＬＶを調製し
た。これを15分間プローブ型超音波発振装置（US-300
（株）日本精機製作所製、）で超音波処理することによ
って均一化したＳＵＶにした。ついでリポソームに封入
されなかったＣＦを除去するためセファデックスG-25
（商品名、ファルマシア社製）カラムにてクロマト分離
し、反応性リポソームをえた。
号明細書記載の方法で合成した１、２ジ- Ｏ- フタニル
グリセロ- ３- フォスホコリン（Ｐｈｙ- ＰＣ）150 μ
mol、リン酸ジセチル（ＤＣＰ）7.5 μmol 、ＭＰＢ-
ＤＰＰＥ7.5 μmol をとり、約10mlのクロロホルムに溶
解し、42℃以上の水溶液中にてロータリーエバポレータ
ーで溶媒を除去したのち、残った脂質薄膜に、標識物質
水溶液として自己消光性の蛍光物質である0.2 Ｍカルボ
キシフルオレセイン（ＣＦ）15mlを加えてボルテックス
（Vortex）ミキサーで10分間振盪撹拌しＭＬＶを調製し
た。これを15分間プローブ型超音波発振装置（US-300
（株）日本精機製作所製、）で超音波処理することによ
って均一化したＳＵＶにした。ついでリポソームに封入
されなかったＣＦを除去するためセファデックスG-25
（商品名、ファルマシア社製）カラムにてクロマト分離
し、反応性リポソームをえた。
【００２３】(2) リポソームへのＨＢｓ抗原の結合 0.5 mg／mlのＨＢｓ抗原（サブタイプａｙ、ケミコンイ
ンターナショナル社製）のリン酸緩衝生理食塩水溶液1.
5ml に40mM Ｎ- スクシンイミジル- ３- （２- ピリジ
ルジチオ）プロピオネイト（ＳＰＤＰ）エタノール溶液
0.0323mlを加え、室温で10分間撹拌し反応させた。未反
応のＳＰＤＰを除くために、20mM ＭＥＳ緩衝液（0.15
M ＮａＣｌ含有、ｐＨ6.0 ）で平衡化したエコノパック
Ｐ６カートリッジ（商品名、バイオラッド社製）カラム
でクロマト分離した。最初のピーク部分を集め、これに
100mM になるようにジチオスライトール（ＤＴＴ）を固
体のまま加えて溶解し、窒素封入下室温で30分間放置し
た。反応終了後リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ
7.4 ）で平衡化したエコノパックＰ６カートリッジカ
ラムでクロマト分離し、最初のピーク部分を集めた。以
上の操作によりＳＰＤＰを通じてＨＢｓ抗原にＳＨ基を
導入し、ＳＨ基入りＨＢｓ抗原を調製した。
ンターナショナル社製）のリン酸緩衝生理食塩水溶液1.
5ml に40mM Ｎ- スクシンイミジル- ３- （２- ピリジ
ルジチオ）プロピオネイト（ＳＰＤＰ）エタノール溶液
0.0323mlを加え、室温で10分間撹拌し反応させた。未反
応のＳＰＤＰを除くために、20mM ＭＥＳ緩衝液（0.15
M ＮａＣｌ含有、ｐＨ6.0 ）で平衡化したエコノパック
Ｐ６カートリッジ（商品名、バイオラッド社製）カラム
でクロマト分離した。最初のピーク部分を集め、これに
100mM になるようにジチオスライトール（ＤＴＴ）を固
体のまま加えて溶解し、窒素封入下室温で30分間放置し
た。反応終了後リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ
7.4 ）で平衡化したエコノパックＰ６カートリッジカ
ラムでクロマト分離し、最初のピーク部分を集めた。以
上の操作によりＳＰＤＰを通じてＨＢｓ抗原にＳＨ基を
導入し、ＳＨ基入りＨＢｓ抗原を調製した。
【００２４】つぎに、(1) でえた反応性リポソームを２
倍に希釈したものと前記操作でえたＳＨ基導入ＨＢｓ抗
原溶液を１：１（ｖ／ｖ）の割合で混合し、窒素封入下
４℃で20時間放置し反応させたのち、リポソームに結合
しなかったＨＢｓ抗原を除くためセファデックスG-25カ
ラムでクロマト分離し、ＨＢｓ抗原結合リポソームをえ
た。
倍に希釈したものと前記操作でえたＳＨ基導入ＨＢｓ抗
原溶液を１：１（ｖ／ｖ）の割合で混合し、窒素封入下
４℃で20時間放置し反応させたのち、リポソームに結合
しなかったＨＢｓ抗原を除くためセファデックスG-25カ
ラムでクロマト分離し、ＨＢｓ抗原結合リポソームをえ
た。
【００２５】前記の抗原結合リポソームをその初期蛍光
強度が適当なものとなるように、0.5mM ＭｇＣｌ2 およ
び0.15mM ＣａＣｌ2 を含有したゼラチンベロナール緩
衝液（ＧＶＢ2+）で100 倍程度に希釈したもの25μｌ
に、ＨＢｓ抗体測定試薬（オーサブ・ＥＩＡ、商品名
（ダイナボット社製））により陽性と判断された非働化
した血清（ＨＢｓ抗体血清）を倍々希釈したものを25μ
ｌ加え37℃で60分間放置して反応させた。そののち、10
ＣＨ50／mlに希釈した。モルモット全補体（石津製薬
社製）50μｌを加え、37℃で60分間放置して反応させた
のち、各試料の蛍光強度をマイクロプレート用蛍光光度
計MTP-32（コロナ社）で測定した（励起波長490nm 、蛍
光波長520nm ）。なお、測定値は、測定終了後測定試料
に１- プロパノール（ｎ- プロピルアルコール）を100
μｌ加えリポソームを完全に破壊したのちの蛍光強度を
２倍したものと、ＨＢｓ抗体血清の代わりにＧＶＢ2+を
25μｌ添加したものの差を100 ％として、各被験試料の
蛍光強度を相対的に換算したものを標識物質遊離率
（％）とした。結果を、図１に示す。このように、希釈
倍数１から64の範囲でＨＢｓ抗体が定量可能であるこが
わかる。
強度が適当なものとなるように、0.5mM ＭｇＣｌ2 およ
び0.15mM ＣａＣｌ2 を含有したゼラチンベロナール緩
衝液（ＧＶＢ2+）で100 倍程度に希釈したもの25μｌ
に、ＨＢｓ抗体測定試薬（オーサブ・ＥＩＡ、商品名
（ダイナボット社製））により陽性と判断された非働化
した血清（ＨＢｓ抗体血清）を倍々希釈したものを25μ
ｌ加え37℃で60分間放置して反応させた。そののち、10
ＣＨ50／mlに希釈した。モルモット全補体（石津製薬
社製）50μｌを加え、37℃で60分間放置して反応させた
のち、各試料の蛍光強度をマイクロプレート用蛍光光度
計MTP-32（コロナ社）で測定した（励起波長490nm 、蛍
光波長520nm ）。なお、測定値は、測定終了後測定試料
に１- プロパノール（ｎ- プロピルアルコール）を100
μｌ加えリポソームを完全に破壊したのちの蛍光強度を
２倍したものと、ＨＢｓ抗体血清の代わりにＧＶＢ2+を
25μｌ添加したものの差を100 ％として、各被験試料の
蛍光強度を相対的に換算したものを標識物質遊離率
（％）とした。結果を、図１に示す。このように、希釈
倍数１から64の範囲でＨＢｓ抗体が定量可能であるこが
わかる。
【００２６】実施例２ (1) リポソームの調製 Ｎ- スクシンイミジル４- （ｐ- マレイミドフェニル）
ブチレート（ＳＭＰＢ）28.1μmol とジパルミトルフォ
スファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）20μmol を
クロロホルム4.5ml と無水メタノール0.5ml との混液に
溶解した。これにトリエチルアミン20μmol を添加し、
窒素封入下室温で２時間撹拌し反応させた。反応終了
後、メタノール3.5ml 、蒸留水２mlを加え、よく振盪し
た。これを静置し、クロロホルム相をとり、溶媒を蒸発
させたのち、約５mlのクロロホルムを添加し溶解した。
この溶液を、150 ℃で12時間以上乾燥させクロロホルム
で平衡化した10ml容量のシリカゲル（Wakogel C-100 、
和光純薬工業（株）製）カラムに負荷し、クロロホルム
- メタノール（20：１、ｖ／ｖ）40〜50mlで洗浄した。
クロロホルム- メタノール（５：１、ｖ／ｖ）により溶
出する画分を集め、溶媒を蒸発させたのち、新たに５ml
のクロロホルムに溶解した。以上の操作により、Ｎ-
（４- （ｐ- マレイミドフェニル）ブチリル）ジパルミ
トイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＢ- ＤＰ
ＰＥ）を調製した。
ブチレート（ＳＭＰＢ）28.1μmol とジパルミトルフォ
スファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）20μmol を
クロロホルム4.5ml と無水メタノール0.5ml との混液に
溶解した。これにトリエチルアミン20μmol を添加し、
窒素封入下室温で２時間撹拌し反応させた。反応終了
後、メタノール3.5ml 、蒸留水２mlを加え、よく振盪し
た。これを静置し、クロロホルム相をとり、溶媒を蒸発
させたのち、約５mlのクロロホルムを添加し溶解した。
この溶液を、150 ℃で12時間以上乾燥させクロロホルム
で平衡化した10ml容量のシリカゲル（Wakogel C-100 、
和光純薬工業（株）製）カラムに負荷し、クロロホルム
- メタノール（20：１、ｖ／ｖ）40〜50mlで洗浄した。
クロロホルム- メタノール（５：１、ｖ／ｖ）により溶
出する画分を集め、溶媒を蒸発させたのち、新たに５ml
のクロロホルムに溶解した。以上の操作により、Ｎ-
（４- （ｐ- マレイミドフェニル）ブチリル）ジパルミ
トイルホスファチジルエタノールアミン（ＭＰＢ- ＤＰ
ＰＥ）を調製した。
【００２７】100ml ナス型フラスコに、ジパルミトイル
ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）150 μmol 、リン酸
ジセチル（ＤＣＰ）7.5 μmol 、ＭＰＢ- ＤＰＰＥ7.5
μmol をとり、約10mlのクロロホルムに溶解し、42℃以
上の水溶液中にてロータリーエバポレーターで溶媒を除
去したのち、残った脂質薄膜に、標識物質水溶液として
自己消光性の蛍光物質である0.2 Ｍカルボキシフルオレ
セイン（ＣＦ）15mlを加えてボルテックス（Vortex）ミ
キサーで10分間振盪撹拌しＭＬＶを調製した。ついでリ
ポソームに封入されなかったＣＦを除去するためセファ
デックスG-25（商品名、ファルマシア社製）カラムにて
クロマト分離し、反応性リポソームをえた。
ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）150 μmol 、リン酸
ジセチル（ＤＣＰ）7.5 μmol 、ＭＰＢ- ＤＰＰＥ7.5
μmol をとり、約10mlのクロロホルムに溶解し、42℃以
上の水溶液中にてロータリーエバポレーターで溶媒を除
去したのち、残った脂質薄膜に、標識物質水溶液として
自己消光性の蛍光物質である0.2 Ｍカルボキシフルオレ
セイン（ＣＦ）15mlを加えてボルテックス（Vortex）ミ
キサーで10分間振盪撹拌しＭＬＶを調製した。ついでリ
ポソームに封入されなかったＣＦを除去するためセファ
デックスG-25（商品名、ファルマシア社製）カラムにて
クロマト分離し、反応性リポソームをえた。
【００２８】(2) リポソームへのＨＢｓ抗原の結合 0.5 mg／mlのＨＢｓ抗原（サブタイプａｙ、ケミコンイ
ンターナショナル社製）のリン酸緩衝生理食塩水溶液1.
5ml に40mM Ｎ- スクシンイミジル- ３- （２- ピリジ
ルジチオ）プロピオネイト（ＳＰＤＰ）エタノール溶液
0.0323mlを加え、室温で10分間撹拌し反応させた。未反
応のＳＰＤＰを除くために、20mM ＭＥＳ緩衝液（0.15
M ＮａＣｌ含有、ｐＨ6.0 ）で平衡化したエコノパック
Ｐ６カートリッジ（商品名、バイオラッド社製）カラム
でクロマト分離した。最初のピーク部分を集め、これに
100mM になるようにジチオスライトール（ＤＴＴ）を固
体のまま加えて溶解し、窒素封入下室温で30分間放置し
た。反応終了後リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ
7.4 ）で平衡化したエコノパックＰ６カートリッジカラ
ムでクロマト分離し、最初のピーク部分を集めた。以上
の操作によりＳＰＤＰを通じてＨＢｓ抗原にＳＨ基を導
入し、ＳＨ基入ＨＢｓ抗原を調製した。
ンターナショナル社製）のリン酸緩衝生理食塩水溶液1.
5ml に40mM Ｎ- スクシンイミジル- ３- （２- ピリジ
ルジチオ）プロピオネイト（ＳＰＤＰ）エタノール溶液
0.0323mlを加え、室温で10分間撹拌し反応させた。未反
応のＳＰＤＰを除くために、20mM ＭＥＳ緩衝液（0.15
M ＮａＣｌ含有、ｐＨ6.0 ）で平衡化したエコノパック
Ｐ６カートリッジ（商品名、バイオラッド社製）カラム
でクロマト分離した。最初のピーク部分を集め、これに
100mM になるようにジチオスライトール（ＤＴＴ）を固
体のまま加えて溶解し、窒素封入下室温で30分間放置し
た。反応終了後リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ
7.4 ）で平衡化したエコノパックＰ６カートリッジカラ
ムでクロマト分離し、最初のピーク部分を集めた。以上
の操作によりＳＰＤＰを通じてＨＢｓ抗原にＳＨ基を導
入し、ＳＨ基入ＨＢｓ抗原を調製した。
【００２９】つぎに、(1) でえた反応性リポソームを２
倍に希釈したものと前記操作でえたＳＨ基導入ＨＢｓ抗
原溶液を１：１（ｖ／ｖ）の割合で混合し、窒素封入下
４℃で12時間放置し反応させたのち、リポソームに結合
しなかったＨＢｓ抗原とリポソームと遊離したＣＦを除
くためセファデックスG-25カラムでクロマト分離し、Ｈ
Ｂｓ抗原結合リポソームをえた。
倍に希釈したものと前記操作でえたＳＨ基導入ＨＢｓ抗
原溶液を１：１（ｖ／ｖ）の割合で混合し、窒素封入下
４℃で12時間放置し反応させたのち、リポソームに結合
しなかったＨＢｓ抗原とリポソームと遊離したＣＦを除
くためセファデックスG-25カラムでクロマト分離し、Ｈ
Ｂｓ抗原結合リポソームをえた。
【００３０】すぐに、前記の抗原結合リポソームをその
初期蛍光強度が適当なものとなるように、0.5mM Ｍｇ
Ｃｌ2 および0.15mM ＣａＣｌ2 を含有したゼラチンベ
ロナール緩衝液（ＧＶＢ2+）で100 倍程度に希釈したも
の25μｌに、ＨＢｓ抗体測定試薬（オーサブ・ＥＩＡ、
商品名（ダイナボット社製））により陽性と判断された
非働化した血清（ＨＢｓ抗体血清）を倍々希釈したもの
を25μｌ加え30℃で10分間放置して反応させた。そのの
ち、10 ＣＨ50／mlに希釈したモルモット全補体（石津
製薬社製）50μｌを加え、30℃で60分間放置して反応さ
せたのち、各試料の蛍光強度をマイクロプレート用蛍光
光度計MTP-32（コロナ社）で測定した（励起波長490nm
、蛍光波長520nm ）。なお、測定値は、測定終了後測
定試料に１- プロパノール（ｎ- プロピルアルコール）
を100 μｌ加えリポソームを完全に破壊したのちの蛍光
強度を２倍したものと、ＨＢｓ抗体血清の代わりにＧＶ
Ｂ２＋を２５μｌ添加したものの差を100 ％として、各
被検試料の蛍光強度を相対的に換算したものを標識物質
遊離率（％）とした。結果を、図２に示す。このよう
に、希釈倍数１から64の範囲でＨＢｓ抗体が定量可能で
あるこがわかる。
初期蛍光強度が適当なものとなるように、0.5mM Ｍｇ
Ｃｌ2 および0.15mM ＣａＣｌ2 を含有したゼラチンベ
ロナール緩衝液（ＧＶＢ2+）で100 倍程度に希釈したも
の25μｌに、ＨＢｓ抗体測定試薬（オーサブ・ＥＩＡ、
商品名（ダイナボット社製））により陽性と判断された
非働化した血清（ＨＢｓ抗体血清）を倍々希釈したもの
を25μｌ加え30℃で10分間放置して反応させた。そのの
ち、10 ＣＨ50／mlに希釈したモルモット全補体（石津
製薬社製）50μｌを加え、30℃で60分間放置して反応さ
せたのち、各試料の蛍光強度をマイクロプレート用蛍光
光度計MTP-32（コロナ社）で測定した（励起波長490nm
、蛍光波長520nm ）。なお、測定値は、測定終了後測
定試料に１- プロパノール（ｎ- プロピルアルコール）
を100 μｌ加えリポソームを完全に破壊したのちの蛍光
強度を２倍したものと、ＨＢｓ抗体血清の代わりにＧＶ
Ｂ２＋を２５μｌ添加したものの差を100 ％として、各
被検試料の蛍光強度を相対的に換算したものを標識物質
遊離率（％）とした。結果を、図２に示す。このよう
に、希釈倍数１から64の範囲でＨＢｓ抗体が定量可能で
あるこがわかる。
【００３１】
【発明の効果】前述のように、本発明のＨＢｓ抗体測定
試薬を使用すれば、簡単の操作で、高感度、正確、安価
かつ短時間に被検体中のＨＢｓ抗体を測定することがで
き、しかもその自動化が可能である。さらに、リポソー
ム作成時にコレステロールを使用しないのでさらに安価
に抗体測定試薬を製造することができる。
試薬を使用すれば、簡単の操作で、高感度、正確、安価
かつ短時間に被検体中のＨＢｓ抗体を測定することがで
き、しかもその自動化が可能である。さらに、リポソー
ム作成時にコレステロールを使用しないのでさらに安価
に抗体測定試薬を製造することができる。
【図１】本発明の実施例１によるＨＢｓ抗体測定試薬を
用いて測定した、検体中のＨＢｓの抗体濃度と標識物質
遊離率との関係を示すグラフである。
用いて測定した、検体中のＨＢｓの抗体濃度と標識物質
遊離率との関係を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例２によるＨＢｓ抗体測定試薬を
用いて測定した、検体中のＨＢｓの抗体濃度と標識物質
遊離率との関係を示すグラフである。
用いて測定した、検体中のＨＢｓの抗体濃度と標識物質
遊離率との関係を示すグラフである。
Claims (3)
- 【請求項１】 リン脂質または糖脂質を主要構成成分と
するリポソームの表面に架橋剤を介してＨＢｓ抗原を含
むタンパク質を結合させ、該リポソーム内に親水性標識
物質を封入することを特徴とするＨＢｓ抗体測定試薬。 - 【請求項２】 リン脂質または糖脂質を主要構成成分と
するリポソームの表面に架橋剤を介してＨＢｓ抗原を含
むタンパク質を結合させ、該リポソーム内に親水性標識
物質を封入したＨＢｓ抗体測定試薬を用い、前記リポソ
ームの膜上で生じる抗原−抗体反応にともないリポソー
ム膜溶解が生じ、放出される標識物質を定量することに
より、試料中の抗原または抗体量を測定することを特徴
とするＨＢｓ抗体測定法。 - 【請求項３】 リポソームの膜上で生じる抗原- 抗体反
応にともなうリポソーム膜溶解が補体の活性化によるも
のである請求項２記載のＨＢｓ抗体測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8387592A JPH05281232A (ja) | 1992-04-06 | 1992-04-06 | ＨＢｓ抗体測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8387592A JPH05281232A (ja) | 1992-04-06 | 1992-04-06 | ＨＢｓ抗体測定試薬 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05281232A true JPH05281232A (ja) | 1993-10-29 |
Family
ID=13814836
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8387592A Pending JPH05281232A (ja) | 1992-04-06 | 1992-04-06 | ＨＢｓ抗体測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05281232A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009532167A (ja) * | 2006-04-03 | 2009-09-10 | ギブン イメージング リミテッド | 生体内分析のための装置、システムおよび方法 |
-
1992
- 1992-04-06 JP JP8387592A patent/JPH05281232A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009532167A (ja) * | 2006-04-03 | 2009-09-10 | ギブン イメージング リミテッド | 生体内分析のための装置、システムおよび方法 |
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