JPH05276951A - 新規植物プロモーター - Google Patents
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- JPH05276951A JPH05276951A JP5001771A JP177193A JPH05276951A JP H05276951 A JPH05276951 A JP H05276951A JP 5001771 A JP5001771 A JP 5001771A JP 177193 A JP177193 A JP 177193A JP H05276951 A JPH05276951 A JP H05276951A
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- promoter
- brassica
- hsp80
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12N15/8222—Developmentally regulated expression systems, tissue, organ specific, temporal or spatial regulation
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
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- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 異型遺伝子発現のための非病原性プロモータ
ーを提供すること。 【構成】 異型遺伝子に作動可能に連結された、ブラシ
カ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０ プロモーターまた
はその機能的均等物を含むＤＮＡ構築物。
ーを提供すること。 【構成】 異型遺伝子に作動可能に連結された、ブラシ
カ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０ プロモーターまた
はその機能的均等物を含むＤＮＡ構築物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、植物中で機能する新
規プロモーター、より具体的には、構成的方法で目的の
遺伝子の発現を制御するプロモーターに関する。この発
明は又、目的の活性をもつハイブリッドプロモーターを
構築するのに使用され得る上流配列をも含む。
規プロモーター、より具体的には、構成的方法で目的の
遺伝子の発現を制御するプロモーターに関する。この発
明は又、目的の活性をもつハイブリッドプロモーターを
構築するのに使用され得る上流配列をも含む。
【０００２】
【従来の技術】熱衝撃遺伝子（ｈｓｐ遺伝子）は、イー
スト、ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｐｈｉｌａ）、および他
の植物種を含む、様々な生物中で既知である。熱衝撃遺
伝子のある一群は、熱衝撃のみに反応してタンパク質を
発現する。別の種類の熱衝撃遺伝子は熱誘導で非常に上
昇する低水準の活性をもつ。
スト、ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｐｈｉｌａ）、および他
の植物種を含む、様々な生物中で既知である。熱衝撃遺
伝子のある一群は、熱衝撃のみに反応してタンパク質を
発現する。別の種類の熱衝撃遺伝子は熱誘導で非常に上
昇する低水準の活性をもつ。
【０００３】植物中に異型遺伝子を遺伝子操作すると
き、プロモーターの選択は重大な要因であることが多
い。ある特定の刺激に反応してのみある種の遺伝子を発
現するかまたは、ある種の組織中にその発現を局所化す
るのが望ましいこともあり得るが、他の遺伝子は構成的
に、即ち常に全植物および大半の組織で発現するのがよ
り望ましい。かつては、カリフラワーモザイクウイルス
（ＣａｕｌｉｆｌｏｗｅｒＭｏｓａｉｃ Ｖｉｒｕｓ）
（ＣａＭＶ）の３５Ｓプロモーターが異型遺伝子の構成
的発現に使用されてきた。調節および他の理由のため
に、病原性でないプロモーターにより異型遺伝子発現を
調節するのが望ましい。さらに、植物プロモーターの使
用は、特定の組織の活性の水準を変えることができ、ウ
イルスのプロモーターと比較して発現がなされる組織の
スペクトラムを変え得る。
き、プロモーターの選択は重大な要因であることが多
い。ある特定の刺激に反応してのみある種の遺伝子を発
現するかまたは、ある種の組織中にその発現を局所化す
るのが望ましいこともあり得るが、他の遺伝子は構成的
に、即ち常に全植物および大半の組織で発現するのがよ
り望ましい。かつては、カリフラワーモザイクウイルス
（ＣａｕｌｉｆｌｏｗｅｒＭｏｓａｉｃ Ｖｉｒｕｓ）
（ＣａＭＶ）の３５Ｓプロモーターが異型遺伝子の構成
的発現に使用されてきた。調節および他の理由のため
に、病原性でないプロモーターにより異型遺伝子発現を
調節するのが望ましい。さらに、植物プロモーターの使
用は、特定の組織の活性の水準を変えることができ、ウ
イルスのプロモーターと比較して発現がなされる組織の
スペクトラムを変え得る。
【０００４】
【発明の記載】この発明は、カリフラワー［ブラシカ・
オレラシア（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）カ
ルチバリエタス・デリラ（Ｄｅｌｉｒａ）］の構成プロ
モーター、即ち常に大半の組織および器官で遺伝子を発
現するプロモーターに関する。プロモーターは目的の遺
伝子に作動可能に連結され得、そうすることでその遺伝
子の発現を導く。このプロモーターは、それが高水準の
構成的発現性をもちおよび熱誘導でほとんど増大しない
発現性をもつという点で既報のｈｓｐ遺伝子のプロモー
ターと区別され得る。
オレラシア（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ）カ
ルチバリエタス・デリラ（Ｄｅｌｉｒａ）］の構成プロ
モーター、即ち常に大半の組織および器官で遺伝子を発
現するプロモーターに関する。プロモーターは目的の遺
伝子に作動可能に連結され得、そうすることでその遺伝
子の発現を導く。このプロモーターは、それが高水準の
構成的発現性をもちおよび熱誘導でほとんど増大しない
発現性をもつという点で既報のｈｓｐ遺伝子のプロモー
ターと区別され得る。
【０００５】このプロモーターは、それが熱衝撃共通要
素をもつ構成プロモーターであり、他の種の遺伝子のｈ
ｓｐ８０群とある程度の相同性をもつ遺伝子からとられ
るので、“ｈｓｐ８０プロモーター”と表わされるに至
った。ｈｓｐ８０プロモーターは、常温（２０−２５
℃）で高水準の熱衝撃タンパク質の生成を導き、熱スト
レスによりわずかに高い発現を示す。
素をもつ構成プロモーターであり、他の種の遺伝子のｈ
ｓｐ８０群とある程度の相同性をもつ遺伝子からとられ
るので、“ｈｓｐ８０プロモーター”と表わされるに至
った。ｈｓｐ８０プロモーターは、常温（２０−２５
℃）で高水準の熱衝撃タンパク質の生成を導き、熱スト
レスによりわずかに高い発現を示す。
【０００６】図１は、プラスミドｐＺ０２１７およびプ
ラスミドｐＺ０６０１およびｐＺ０６０１ＢＳの構築を
示す。図２はｐＺ０６０２を表わしている。完全なプロ
モーターの配列を化１に示す。（配列表１参照）。完全
な自然配列は１５６８塩基対をもつ。ヌクレオチド類は
負の順序で天然熱衝撃タンパク質の翻訳開始部位（ＡＴ
Ｇ）から数える。下記の区域はこの配列において同定し
た。 Ａ）“ＴＡＴＡ”ボックスは、−９７から−９０（両端
を含む）にある８塩基対配列“ＴＡＴＡＴＡＴＡ”であ
る。 Ｂ）−６１から−１にある６１ｂｐｍＲＮＡ先導配列が
ある。 Ｃ）キャップ部位は−６１と同定されている。 Ｄ）このプロモーターの上流活性化配列を含むと思われ
る−６０４から−４８８の部位がある。この区域はＵＡ
Ｓ１と示す。この区域はトランジェントアッセイで構成
活性を与えることが観られ、これまで“構成ボックス”
と表わされてきた。 Ｅ）別の上流活性化配列を含むと思われる−１０００か
ら−６０４の部位がある。この区域はＵＡＳ２と表わ
す。 Ｆ）別の上流活性配列を含むと思われる−４８８から−
１２０の部分がある。この部分はＵＡＳ３と表わす。 Ｇ）−７７９から−７４１の間および−７４０かあら−
７０２の間には２つの直列反復がある。また、直列反復
の一部分を含む配列が−７０１から−６７７にある。 Ｈ）１つの熱衝撃共通要素は−１３１から−１２０まで
に位置し、別の要素は−２４４から−２３７までに位置
する。
ラスミドｐＺ０６０１およびｐＺ０６０１ＢＳの構築を
示す。図２はｐＺ０６０２を表わしている。完全なプロ
モーターの配列を化１に示す。（配列表１参照）。完全
な自然配列は１５６８塩基対をもつ。ヌクレオチド類は
負の順序で天然熱衝撃タンパク質の翻訳開始部位（ＡＴ
Ｇ）から数える。下記の区域はこの配列において同定し
た。 Ａ）“ＴＡＴＡ”ボックスは、−９７から−９０（両端
を含む）にある８塩基対配列“ＴＡＴＡＴＡＴＡ”であ
る。 Ｂ）−６１から−１にある６１ｂｐｍＲＮＡ先導配列が
ある。 Ｃ）キャップ部位は−６１と同定されている。 Ｄ）このプロモーターの上流活性化配列を含むと思われ
る−６０４から−４８８の部位がある。この区域はＵＡ
Ｓ１と示す。この区域はトランジェントアッセイで構成
活性を与えることが観られ、これまで“構成ボックス”
と表わされてきた。 Ｅ）別の上流活性化配列を含むと思われる−１０００か
ら−６０４の部位がある。この区域はＵＡＳ２と表わ
す。 Ｆ）別の上流活性配列を含むと思われる−４８８から−
１２０の部分がある。この部分はＵＡＳ３と表わす。 Ｇ）−７７９から−７４１の間および−７４０かあら−
７０２の間には２つの直列反復がある。また、直列反復
の一部分を含む配列が−７０１から−６７７にある。 Ｈ）１つの熱衝撃共通要素は−１３１から−１２０まで
に位置し、別の要素は−２４４から−２３７までに位置
する。
【０００７】したがって、この発明の１つの態様は、異
型遺伝子に操作可能に連結されたブラシカ（Ｂｒａｓｓ
ｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターを含むＤＮＡ構築物を
提供する。実質的にプロモーターの活性に影響すること
なくこのＤＮＡ配列中で小さな変更がなされ得ることが
認められることから、この発明はまた、ブラシカ（Ｂｒ
ａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０の“機能的均等物”であるＤ
ＮＡ配列および異型遺伝子に操作可能に連結されたＤＮ
Ａ配列を含む構築物を含む。
型遺伝子に操作可能に連結されたブラシカ（Ｂｒａｓｓ
ｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターを含むＤＮＡ構築物を
提供する。実質的にプロモーターの活性に影響すること
なくこのＤＮＡ配列中で小さな変更がなされ得ることが
認められることから、この発明はまた、ブラシカ（Ｂｒ
ａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０の“機能的均等物”であるＤ
ＮＡ配列および異型遺伝子に操作可能に連結されたＤＮ
Ａ配列を含む構築物を含む。
【０００８】明細書および請求項を通しての使用に際し
て、下記の定義を適用する。“機能的均等物”は、スト
リンジェントハイブリダイゼーション条件下で、参照配
列とハイブリダイズし、ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）
ｈｓｐ８０プロモーターと同様のプロモーター活性をも
つＤＮＡ配列に相補的なＤＮＡ配列である。“ストリン
ジェントハイブリダイゼーション条件”とは、ハイブリ
ダイゼーションを２．５Ｘ生理食塩水クエン酸緩衝液
（ＳＳＣ緩衝液）中で６０℃で実施した後、生起するハ
イブリダイゼーションに影響しない低い緩衝液濃度で３
７℃で単にすすぐものである。“異型遺伝子”は、ブラ
シカ（Ｂｒｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０タンパク質以外のペ
プチドまたはタンパク質をコードするＤＮＡ配列であ
る。“欠失プロモーター”は、欠失をもち、なお活性を
保持する、ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プ
ロモーターである。“欠失プロモーターの機能的均等
物”は別の欠失をもっていたが、欠失プロモーターと比
べて少なくとも実質的に同等の活性をもつ欠失プロモー
ターである。“調節可能プロモーター”は、その活性
が、シスまたはトランス作用因子によって影響されるプ
ロモーターである。“構成的プロモーター”は、ほとん
どの場合大半の組織または器官で活性なプロモーターで
ある。
て、下記の定義を適用する。“機能的均等物”は、スト
リンジェントハイブリダイゼーション条件下で、参照配
列とハイブリダイズし、ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）
ｈｓｐ８０プロモーターと同様のプロモーター活性をも
つＤＮＡ配列に相補的なＤＮＡ配列である。“ストリン
ジェントハイブリダイゼーション条件”とは、ハイブリ
ダイゼーションを２．５Ｘ生理食塩水クエン酸緩衝液
（ＳＳＣ緩衝液）中で６０℃で実施した後、生起するハ
イブリダイゼーションに影響しない低い緩衝液濃度で３
７℃で単にすすぐものである。“異型遺伝子”は、ブラ
シカ（Ｂｒｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０タンパク質以外のペ
プチドまたはタンパク質をコードするＤＮＡ配列であ
る。“欠失プロモーター”は、欠失をもち、なお活性を
保持する、ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プ
ロモーターである。“欠失プロモーターの機能的均等
物”は別の欠失をもっていたが、欠失プロモーターと比
べて少なくとも実質的に同等の活性をもつ欠失プロモー
ターである。“調節可能プロモーター”は、その活性
が、シスまたはトランス作用因子によって影響されるプ
ロモーターである。“構成的プロモーター”は、ほとん
どの場合大半の組織または器官で活性なプロモーターで
ある。
【０００９】ｈｓｐ８０プロモーター（またはその機能
的均等物）は目的の異型遺伝子を構成的に発現するのに
使用され得る。適当な異型遺伝子の例は、殺虫性毒素
（バシルス・スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔ
ｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）のもののような）、除草耐
性遺伝子、抗菌遺伝子、抗カビ遺伝子、抗ウイルス遺伝
子、および摂食阻害遺伝子を含むが、これらに限定され
るものではない。ｈｓｐ８０−異型遺伝子構築物がベク
ターの中に挿入され、ベクターが真核生物の宿主を形質
転換するのに使用されることが好ましい。真核生物の宿
主は好ましくは植物細胞または植物原形質体である。好
ましいベクターは、もちろん選択された宿主により変化
する。双子葉植物に対して、ベクターは電気穿孔法によ
って原形質体に導入され得るかまたはベクターは細胞ま
たは原形質体に感染するアグロバクテリウム・ツメファ
キエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａ
ｃｉｅｎｓ（Ａ．ｔ．）Ｔｉ−プラスミド誘導体であり
得、いわゆる二重技法を含むＡ．ｔ．媒介形質転換中で
使用され得る（例えばガッサー（Ｇａｓｓｅｒ）ら、１
９８９年、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２４４巻、１
２９３−１２９９頁参照）。単子葉植物は好ましくはい
わゆる“弾道”技法（上記、ガッサー（Ｇａｓｓｅ
ｒ））を使って形質転換されるかまたは原形質体を使っ
て形質転換され得る。どちらの場合でも、適当な形質転
換ベクターおよび形質転換プロトコルは当技術で既知で
ある。形質転換された細胞または原形質体は適当な培養
培地中で培養され、形質転換された植物は再生される。
形質転換された植物は、異型遺伝子を構成的に発現す
る。
的均等物）は目的の異型遺伝子を構成的に発現するのに
使用され得る。適当な異型遺伝子の例は、殺虫性毒素
（バシルス・スリンギエンシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔ
ｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ）のもののような）、除草耐
性遺伝子、抗菌遺伝子、抗カビ遺伝子、抗ウイルス遺伝
子、および摂食阻害遺伝子を含むが、これらに限定され
るものではない。ｈｓｐ８０−異型遺伝子構築物がベク
ターの中に挿入され、ベクターが真核生物の宿主を形質
転換するのに使用されることが好ましい。真核生物の宿
主は好ましくは植物細胞または植物原形質体である。好
ましいベクターは、もちろん選択された宿主により変化
する。双子葉植物に対して、ベクターは電気穿孔法によ
って原形質体に導入され得るかまたはベクターは細胞ま
たは原形質体に感染するアグロバクテリウム・ツメファ
キエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａ
ｃｉｅｎｓ（Ａ．ｔ．）Ｔｉ−プラスミド誘導体であり
得、いわゆる二重技法を含むＡ．ｔ．媒介形質転換中で
使用され得る（例えばガッサー（Ｇａｓｓｅｒ）ら、１
９８９年、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２４４巻、１
２９３−１２９９頁参照）。単子葉植物は好ましくはい
わゆる“弾道”技法（上記、ガッサー（Ｇａｓｓｅ
ｒ））を使って形質転換されるかまたは原形質体を使っ
て形質転換され得る。どちらの場合でも、適当な形質転
換ベクターおよび形質転換プロトコルは当技術で既知で
ある。形質転換された細胞または原形質体は適当な培養
培地中で培養され、形質転換された植物は再生される。
形質転換された植物は、異型遺伝子を構成的に発現す
る。
【００１０】様々な欠失がこのプロモーター中で作ら
れ、その結果生じた欠失プロモーターが、ａ）増大した
活性、ｂ）自然プロモーターと実質的に同じ活性、また
はｃ）保持された活性のどれかをもつことが発見され
た。したがって、この発明の別の態様は、ブラシカ（Ｂ
ｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターの欠失プロモ
ーターを含むＤＮＡ配列である。この発明の別の態様は
異型遺伝子に作動可能に連結された欠失プロモーターを
含むＤＮＡ構築物である。また、欠失プロモーターの機
能的均等物および機能的に均等な欠失プロモーターおよ
び異型遺伝子を含む構築物もこの発明のこの態様中に含
まれる。種々の欠失およびハイブリッドプロモーターが
実施例中に詳述されているようにして作られた。欠失プ
ロモーターの一番目のセットは６０１ＢＳシリーズとし
て表わされている。これらのプロモーターは−１１８か
ら−２４６までの塩基対を含む欠失をもつことを特徴と
する。−４９３から−１１８の欠失を含む、このシリー
ズの１つのプロモーター、６０１ＢＳΔ２−３は、非損
傷プロモーターに比べて約５０％−７５％の活性を持つ
ことがわかった。
れ、その結果生じた欠失プロモーターが、ａ）増大した
活性、ｂ）自然プロモーターと実質的に同じ活性、また
はｃ）保持された活性のどれかをもつことが発見され
た。したがって、この発明の別の態様は、ブラシカ（Ｂ
ｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターの欠失プロモ
ーターを含むＤＮＡ配列である。この発明の別の態様は
異型遺伝子に作動可能に連結された欠失プロモーターを
含むＤＮＡ構築物である。また、欠失プロモーターの機
能的均等物および機能的に均等な欠失プロモーターおよ
び異型遺伝子を含む構築物もこの発明のこの態様中に含
まれる。種々の欠失およびハイブリッドプロモーターが
実施例中に詳述されているようにして作られた。欠失プ
ロモーターの一番目のセットは６０１ＢＳシリーズとし
て表わされている。これらのプロモーターは−１１８か
ら−２４６までの塩基対を含む欠失をもつことを特徴と
する。−４９３から−１１８の欠失を含む、このシリー
ズの１つのプロモーター、６０１ＢＳΔ２−３は、非損
傷プロモーターに比べて約５０％−７５％の活性を持つ
ことがわかった。
【００１１】欠失プロモーターの第二のセットは６０２
シリーズと示される。これらのプロモーターは全て、少
なくとも−４８８から−１３４の欠失をもち、実施例３
に要約されているように、種々の長さの５’末端欠失を
持ち得る。驚くべきことに、この欠失の中には活性を増
大するものがある。欠失プロモーター６０３は−１１２
５から−１３４の範囲の欠失をもつ。このプロモーター
は非損傷プロモーターの約１０％の活性しかもたなかっ
た。欠失プロモーター６０４は、−１５６８から−１１
２５および−４９６から−１３４の欠失をもち、約２５
％の活性をもつ。欠失プロモーター６０５は−４８８の
上流の全塩基対欠失をもち、対応する活性の減少は約６
−８％にまでなる。活性の特に重要な一部分は−１３４
から−１２０の間にある。欠失プロモーター６０１ＢＳ
（ＢＳｐｈ）だけが欠失したこの小部分をもつが、その
活性は非損傷プロモーターの約５０−７５％にまで低下
した。したがって、この発明の好ましいプロモーター
は、少なくともこの短い配列を含む。
シリーズと示される。これらのプロモーターは全て、少
なくとも−４８８から−１３４の欠失をもち、実施例３
に要約されているように、種々の長さの５’末端欠失を
持ち得る。驚くべきことに、この欠失の中には活性を増
大するものがある。欠失プロモーター６０３は−１１２
５から−１３４の範囲の欠失をもつ。このプロモーター
は非損傷プロモーターの約１０％の活性しかもたなかっ
た。欠失プロモーター６０４は、−１５６８から−１１
２５および−４９６から−１３４の欠失をもち、約２５
％の活性をもつ。欠失プロモーター６０５は−４８８の
上流の全塩基対欠失をもち、対応する活性の減少は約６
−８％にまでなる。活性の特に重要な一部分は−１３４
から−１２０の間にある。欠失プロモーター６０１ＢＳ
（ＢＳｐｈ）だけが欠失したこの小部分をもつが、その
活性は非損傷プロモーターの約５０−７５％にまで低下
した。したがって、この発明の好ましいプロモーター
は、少なくともこの短い配列を含む。
【００１２】上記されたように、−６０４から−４８８
（ＵＡＳ１）の範囲の１１６ｂｐ部位またはその一部
は、組織部の構成的活性を与える原因であるようにみえ
る。上記のようなＵＡＳ２およびＵＡＳ３は他の組織で
の活性を与えるようにみえる。したがって、この発明の
別の態様は、それのみである種のまたは大多数の器官／
組織およびその組合せにおける活性を生み出し、結合し
ていわゆる構成的活性をあたえる１つ以上の上流活性化
領域を、誘導可能または調節可能なプロモーターに操作
可能に連結するかまたは挿入するかすることによって、
構成的活性を他の非構成的プロモーター（正常では誘導
的であるかまたは他の調節的であるプロモーターのよう
な）に与えることである。この発明は、構造的遺伝子に
作動可能に連結した構成的活性を与えられたプロモータ
ーを含むＤＮＡ構築物、例えば、構築物を使った植物細
胞および原形質体の形質転換のための方法、および構築
物によって形質転換された植物細胞および原形質体を含
む。ＵＡＳ１、２および３部分よりも小さい部分が構成
的活性を与えるのに十分であることが可能であることが
認められる。これは、当技術で既知の方法を使ってこれ
らの部位における欠失を作ることによって試験され得
る。次いでＵＡＳ部分における欠失をもつプロモーター
を構成的活性の保持について検定することができる。こ
のような検定法はまた、通常の熟練者の技術の範囲内に
ある。ＵＡＳ１、２および３部位が１つだけまたは一緒
に、欠失および／または突然変異によって、不活性にさ
れたプロモーターに活性を回復するのに使用され得る。
これはまた、この発明の別の態様を形成する。この使用
の１例は、それが機能的でなくなるまで欠失されたＣａ
ＭＶ３５Ｓプロモーターに関するものである。組み合わ
せたまたは単独のＵＡＳ１、２および３要素の挿入は、
一部または全部の組織のプロモーター活性を回復する。
（ＵＡＳ１）の範囲の１１６ｂｐ部位またはその一部
は、組織部の構成的活性を与える原因であるようにみえ
る。上記のようなＵＡＳ２およびＵＡＳ３は他の組織で
の活性を与えるようにみえる。したがって、この発明の
別の態様は、それのみである種のまたは大多数の器官／
組織およびその組合せにおける活性を生み出し、結合し
ていわゆる構成的活性をあたえる１つ以上の上流活性化
領域を、誘導可能または調節可能なプロモーターに操作
可能に連結するかまたは挿入するかすることによって、
構成的活性を他の非構成的プロモーター（正常では誘導
的であるかまたは他の調節的であるプロモーターのよう
な）に与えることである。この発明は、構造的遺伝子に
作動可能に連結した構成的活性を与えられたプロモータ
ーを含むＤＮＡ構築物、例えば、構築物を使った植物細
胞および原形質体の形質転換のための方法、および構築
物によって形質転換された植物細胞および原形質体を含
む。ＵＡＳ１、２および３部分よりも小さい部分が構成
的活性を与えるのに十分であることが可能であることが
認められる。これは、当技術で既知の方法を使ってこれ
らの部位における欠失を作ることによって試験され得
る。次いでＵＡＳ部分における欠失をもつプロモーター
を構成的活性の保持について検定することができる。こ
のような検定法はまた、通常の熟練者の技術の範囲内に
ある。ＵＡＳ１、２および３部位が１つだけまたは一緒
に、欠失および／または突然変異によって、不活性にさ
れたプロモーターに活性を回復するのに使用され得る。
これはまた、この発明の別の態様を形成する。この使用
の１例は、それが機能的でなくなるまで欠失されたＣａ
ＭＶ３５Ｓプロモーターに関するものである。組み合わ
せたまたは単独のＵＡＳ１、２および３要素の挿入は、
一部または全部の組織のプロモーター活性を回復する。
【００１３】この発明をさらに、下記の実施例により詳
述するが、これらは限定を意図するものではない。 実施例１−ｈｓｐ８０プロモーターの単離 ブラシカ・オレラシア（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａ
ｃｅａ）カルチバリエタス・デリラ（Ｄｅｌｉｒａ）の
ゲノムのライブラリーは、この明細書に参考として挿入
されている、マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、１９
８２年、モルキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、コールド・スプリング・ハー
バー研究所、２８２−２８３頁、により記載されている
方法をおもに使ってシャロン３５ラムダファージおよび
Ｋ８０２細胞中に構築される。このライブラリーをドロ
ソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）遺伝子ＰｖｕＩ−Ｓ
ｔｕＩ断片で選抜する［ハケット（Ｈａｃｋｅｔｔ）、
Ｒ．Ｗ．ら、１９８３年、ヌクレイク・アシド・リサー
チ（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１巻（２０）、
７０１１−７０３０頁］。ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐ
ｈｉｌａ）遺伝子との見かけ上の相同性をもつ２０の組
換え体を採取し、サザン・ブロット分析を、プローブと
してドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）ｈｓｐ８３
遺伝子断片を使って行なう。５．８ｋｂ ＨｉｎｄＩＩ
Ｉ断片を、ｐＵＣ９ベクター中でのサブクローニングの
ために選択し、ｐＺ０２１７と呼ぶ。このプラスミドは
図１に示される。
述するが、これらは限定を意図するものではない。 実施例１−ｈｓｐ８０プロモーターの単離 ブラシカ・オレラシア（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａ
ｃｅａ）カルチバリエタス・デリラ（Ｄｅｌｉｒａ）の
ゲノムのライブラリーは、この明細書に参考として挿入
されている、マニアチス（Ｍａｎｉａｔｉｓ）ら、１９
８２年、モルキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、コールド・スプリング・ハー
バー研究所、２８２−２８３頁、により記載されている
方法をおもに使ってシャロン３５ラムダファージおよび
Ｋ８０２細胞中に構築される。このライブラリーをドロ
ソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）遺伝子ＰｖｕＩ−Ｓ
ｔｕＩ断片で選抜する［ハケット（Ｈａｃｋｅｔｔ）、
Ｒ．Ｗ．ら、１９８３年、ヌクレイク・アシド・リサー
チ（Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１巻（２０）、
７０１１−７０３０頁］。ドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐ
ｈｉｌａ）遺伝子との見かけ上の相同性をもつ２０の組
換え体を採取し、サザン・ブロット分析を、プローブと
してドロソフィラ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）ｈｓｐ８３
遺伝子断片を使って行なう。５．８ｋｂ ＨｉｎｄＩＩ
Ｉ断片を、ｐＵＣ９ベクター中でのサブクローニングの
ために選択し、ｐＺ０２１７と呼ぶ。このプラスミドは
図１に示される。
【００１４】次に、クロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子（ファルマシア（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ））を既知のベクターｐＵＣ１９のＰｓ
ｔＩ部位に挿入する。それからＮＯＳターミネーター
［ビヴァン（Ｂｅｖａｎ）、Ｍ．ら、１９８３年、”ス
トラクチャー・アンド・トランスクリプション・オブ・
ザ・ノパリン・シンターゼ・ジーン・リージョン・オブ
・Ｔ−ＤＮＡ（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｐａｌｉｎｅ
Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ
Ｔ−ＤＮＡ）”ヌクレイク・アシド・リサーチ（Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）１１（２）］をＰｓｔＩ−
ＨｉｎｄＩＩＩ部位に挿入する。この結果生じたプラス
ミドをｐＺ０３０と表わす。ｐＺ０２１７のＢｇｌＩＩ
断片を分離し、ｐＺ０３０のＢａｍＨＩ部位にサブクロ
ーンする。これはプロモーター−ＣＡＴ遺伝子−ＮＯＳ
ターミネーター構築物になり、ＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄＩ
ＩＩ断片として市販されているベクターｐＴＺ１８Ｒ
（ファルマシアから）に転移され、図１に表わされてい
る、ｐＺ０６０１を創る。
ンスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子（ファルマシア（Ｐｈ
ａｒｍａｃｉａ））を既知のベクターｐＵＣ１９のＰｓ
ｔＩ部位に挿入する。それからＮＯＳターミネーター
［ビヴァン（Ｂｅｖａｎ）、Ｍ．ら、１９８３年、”ス
トラクチャー・アンド・トランスクリプション・オブ・
ザ・ノパリン・シンターゼ・ジーン・リージョン・オブ
・Ｔ−ＤＮＡ（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｐａｌｉｎｅ
Ｓｙｎｔｈａｓｅ Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ
Ｔ−ＤＮＡ）”ヌクレイク・アシド・リサーチ（Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．）１１（２）］をＰｓｔＩ−
ＨｉｎｄＩＩＩ部位に挿入する。この結果生じたプラス
ミドをｐＺ０３０と表わす。ｐＺ０２１７のＢｇｌＩＩ
断片を分離し、ｐＺ０３０のＢａｍＨＩ部位にサブクロ
ーンする。これはプロモーター−ＣＡＴ遺伝子−ＮＯＳ
ターミネーター構築物になり、ＥｃｏＲＩ−ＨｉｎｄＩ
ＩＩ断片として市販されているベクターｐＴＺ１８Ｒ
（ファルマシアから）に転移され、図１に表わされてい
る、ｐＺ０６０１を創る。
【００１５】実施例２−プラスミド構築物 ｐＺ０６０１中のｈｓｐ８０プロモーターのインビトロ
突然変異導入を、アメルシャム社によるオリゴヌクレオ
チド指定インビトロ突然変異導入システムを使って行な
う。２つのオリゴヌクレオチドを、２つの非反復制限部
位をＴＡＴＡボックスのプロモーター上流、−１３４で
ＢａｍＨＩおよび−１２０でＳｐｈＩ内に生み出すため
に製造業者の指示に従って合成する。（全ヌクレオチド
位置を、翻訳開始部位に相関して定める。）この新規プ
ラスミドはｐＺ０６０１ＢＳと表わされ、図１に示され
ている。 プラスミドｐＺ０６０２およびｐＺ０６０３ 段階Ａ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＫｐｎＩ
で消化し、末端をＤＮＡポリメラーゼのクレナウ断片を
使って補充する。次にＤＮＡをＫｐｎＩで消化し、生成
するプロモーターなしの断片を低融解点寒天ゲル上で分
離する。 段階Ｂ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＫｐｎＩ
で消化し、ｈｓｐ８０プロモーターを低融解点寒天ゲル
上で分離する。この断片をＥＬＵＴＩＰ（シュライハー
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ）とシュネル（Ｓｃｈｎｅｌ
ｌ））を使って精製し、ＤｒａＩまたはＦｎｕＤＩＩで
消化する。 段階Ｃ）段階Ｂ）の−１５６８から−４８８ＤｒａＩ断
片を、段階Ａのプロモーターのない断片に結合する。そ
の結果生じたプラスミドをｐＺ０６０３と表わす。
突然変異導入を、アメルシャム社によるオリゴヌクレオ
チド指定インビトロ突然変異導入システムを使って行な
う。２つのオリゴヌクレオチドを、２つの非反復制限部
位をＴＡＴＡボックスのプロモーター上流、−１３４で
ＢａｍＨＩおよび−１２０でＳｐｈＩ内に生み出すため
に製造業者の指示に従って合成する。（全ヌクレオチド
位置を、翻訳開始部位に相関して定める。）この新規プ
ラスミドはｐＺ０６０１ＢＳと表わされ、図１に示され
ている。 プラスミドｐＺ０６０２およびｐＺ０６０３ 段階Ａ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＫｐｎＩ
で消化し、末端をＤＮＡポリメラーゼのクレナウ断片を
使って補充する。次にＤＮＡをＫｐｎＩで消化し、生成
するプロモーターなしの断片を低融解点寒天ゲル上で分
離する。 段階Ｂ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＫｐｎＩ
で消化し、ｈｓｐ８０プロモーターを低融解点寒天ゲル
上で分離する。この断片をＥＬＵＴＩＰ（シュライハー
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ）とシュネル（Ｓｃｈｎｅｌ
ｌ））を使って精製し、ＤｒａＩまたはＦｎｕＤＩＩで
消化する。 段階Ｃ）段階Ｂ）の−１５６８から−４８８ＤｒａＩ断
片を、段階Ａのプロモーターのない断片に結合する。そ
の結果生じたプラスミドをｐＺ０６０３と表わす。
【００１６】プラスミドｐＺ０６０４ 段階Ａ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＳｍａＩ
で消化し、ＢａｍＨＩ部位をＴ４ＤＮＡポリメラーゼお
よびデオキシヌクレオチドで補充する。生成したプロモ
ーターなしの断片を低解点寒天ゲル上で分離する。 段階Ｂ）ｐＺ０６０１ＢＳをＦｎｕＤＩＩで消化する。
−１１２５から−４９６のＦｎｕＤＩＩ断片を段階Ａの
プロモーターなしの断片中に結合し、ｐＺ０６０４にな
る。 プラスミド ｐＺ０６０５ 段階Ａ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＳｍａＩ
で消化し、その結果生じたプロモーターなしの断片を低
融解点寒天ゲル上で分離する。 段階Ｂ）ｐＺ０６０１ＢＳをＤｒａＩでダイジェストす
る。−４８８から−１３４のＤｒａＩ断片を段階Ａのプ
ロモーターなしの断片中に結合し、ｐＺ０６０５を構築
する。
で消化し、ＢａｍＨＩ部位をＴ４ＤＮＡポリメラーゼお
よびデオキシヌクレオチドで補充する。生成したプロモ
ーターなしの断片を低解点寒天ゲル上で分離する。 段階Ｂ）ｐＺ０６０１ＢＳをＦｎｕＤＩＩで消化する。
−１１２５から−４９６のＦｎｕＤＩＩ断片を段階Ａの
プロモーターなしの断片中に結合し、ｐＺ０６０４にな
る。 プラスミド ｐＺ０６０５ 段階Ａ）ｐＺ０６０１ＢＳをＢａｍＨＩおよびＳｍａＩ
で消化し、その結果生じたプロモーターなしの断片を低
融解点寒天ゲル上で分離する。 段階Ｂ）ｐＺ０６０１ＢＳをＤｒａＩでダイジェストす
る。−４８８から−１３４のＤｒａＩ断片を段階Ａのプ
ロモーターなしの断片中に結合し、ｐＺ０６０５を構築
する。
【００１７】欠失突然変異体 ｈｓｐ８０プロモーター中の一連の５’欠失をｐＺ０６
０２プラスミドから構築する。ｐＺ０６０２をＳａｃＩ
およびＳｍａＩで消化し、エキソヌクレアーゼＩＩＩ
（ストラータジーン）消化の基質を生み出す。種々の長
さの時間でのエキソヌクレアーゼＩＩＩによる処理のあ
と、生成したＤＮＡをマングビーンヌクレアーゼ（ベー
リンガー・マンハイム）で鈍端化する。ＤＮＡを低融解
点寒天ゲル電気泳動法を使って分離する。突出したバン
ドを切除し、希釈し、ライゲートする。形質転換の後、
欠質突然変異体を選択し、結合点を通って配列決定す
る。ｈｓｐ８０プロモーター中の一連の３’欠失を、Ｂ
ａｍＨＩおよびＳｐｈＩによって消化し、５’欠失を生
み出すのに記載されたのと同じ方法に従うことによって
ｐＺ０６０１ＢＳから構築する。
０２プラスミドから構築する。ｐＺ０６０２をＳａｃＩ
およびＳｍａＩで消化し、エキソヌクレアーゼＩＩＩ
（ストラータジーン）消化の基質を生み出す。種々の長
さの時間でのエキソヌクレアーゼＩＩＩによる処理のあ
と、生成したＤＮＡをマングビーンヌクレアーゼ（ベー
リンガー・マンハイム）で鈍端化する。ＤＮＡを低融解
点寒天ゲル電気泳動法を使って分離する。突出したバン
ドを切除し、希釈し、ライゲートする。形質転換の後、
欠質突然変異体を選択し、結合点を通って配列決定す
る。ｈｓｐ８０プロモーター中の一連の３’欠失を、Ｂ
ａｍＨＩおよびＳｐｈＩによって消化し、５’欠失を生
み出すのに記載されたのと同じ方法に従うことによって
ｐＺ０６０１ＢＳから構築する。
【００１８】実施例３−生物検定 キャロット・セルライン・メインテナンス レッドウッド・シティー・ワイルド・キャロット（ＲＣ
ＷＣ）懸濁培養（スタンフォード大学から得た）を後記
のキャロット懸濁培地中に置く。１ Ｘ ＭＳ塩、１ｍ
ｇ／ｌのニコチン酸、１ｍｇ／ｌのピリドキシンＨＣ
Ｌ、１ｍｇ／ｌのチアミン、１００ｍｇ／ｌのイノシト
ール、０．１ｍｇ／ｌの２，４−Ｄ、３０ｇ／ｌのショ
糖をＫＯＨで最終ｐＨ５．８に調整する。培養を７日毎
に新鮮培地に１：１０で希釈することによって維持す
る。 原形質体形成 ＲＣＷＣ懸濁培養を使用の４日前に１：１０に希釈す
る。５０ｍｌの培養（約５ｍｌに包装された細胞）を１
０分間５００ｇで遠心分離する。つぎに細胞を後記の濾
過されたキャロット酵素溶液に再懸濁する。１０ｇ／ｌ
セルライジン（カルバイオケム社）、５ｇ／ｌのローザ
イム（ジーンコール社）、０．４モルのマンニトール、
５０ミリモルのＣａＣｌ２、１０ミリモルのＮａＯＡ
ｃ、ｐＨ５．８。細胞を、消化のために２時間軽く振動
させる。原形質体を２回洗浄し、前記のキャロット懸濁
培地と同じものに０．４モルのマンニトールを追加した
キャロット培養培地（ＣＣＭ）中に再懸濁する。原形質
体を、濃度を測定するために１：１０で希釈してヘマサ
イトメーター上で測る。
ＷＣ）懸濁培養（スタンフォード大学から得た）を後記
のキャロット懸濁培地中に置く。１ Ｘ ＭＳ塩、１ｍ
ｇ／ｌのニコチン酸、１ｍｇ／ｌのピリドキシンＨＣ
Ｌ、１ｍｇ／ｌのチアミン、１００ｍｇ／ｌのイノシト
ール、０．１ｍｇ／ｌの２，４−Ｄ、３０ｇ／ｌのショ
糖をＫＯＨで最終ｐＨ５．８に調整する。培養を７日毎
に新鮮培地に１：１０で希釈することによって維持す
る。 原形質体形成 ＲＣＷＣ懸濁培養を使用の４日前に１：１０に希釈す
る。５０ｍｌの培養（約５ｍｌに包装された細胞）を１
０分間５００ｇで遠心分離する。つぎに細胞を後記の濾
過されたキャロット酵素溶液に再懸濁する。１０ｇ／ｌ
セルライジン（カルバイオケム社）、５ｇ／ｌのローザ
イム（ジーンコール社）、０．４モルのマンニトール、
５０ミリモルのＣａＣｌ２、１０ミリモルのＮａＯＡ
ｃ、ｐＨ５．８。細胞を、消化のために２時間軽く振動
させる。原形質体を２回洗浄し、前記のキャロット懸濁
培地と同じものに０．４モルのマンニトールを追加した
キャロット培養培地（ＣＣＭ）中に再懸濁する。原形質
体を、濃度を測定するために１：１０で希釈してヘマサ
イトメーター上で測る。
【００１９】電気穿孔 環状電気をもつＰＧ２００プロジェニターＩＩ（ホイフ
ァー）を全電気穿孔に使用する。検体を２４ウエルの無
菌微量滴定皿に２５ボルトで１００ミリ秒電気穿孔す
る。各ＣＡＴ（ファルマシア社）構築含有プラスミド
を、多重実験中の３または４複製中で試験する。３０か
ら５０ミクロングラムのプラスミドｐＺ０６０１ＢＳを
対照として各実験で使用する。全ての他のプラスミドを
ｐＺ０６０１ＢＳと比べて等量のモル量のＤＮＡを使っ
て試験する。約１０6の原形質体を１．５ｍｌの試験管
にアリコートし、２分間５００ｇで遠心分離し、上澄み
を除去する。各ＤＮＡを７５ミクロンリットルの２モル
のＫＣｌに添加する。容積をＣＣＭ（ｐＨが８．０に調
整された）を添加して１ミリリットルに調整し、この混
合物を電気穿孔させ、すぐにペトリ皿中の５ミリリット
ルのｐＨ５．８のＣＣＭに希釈する。希釈された検体
を、ＣＡＴアッセイ用に集める前に暗所の戸棚に１−２
日貯蔵する。
ァー）を全電気穿孔に使用する。検体を２４ウエルの無
菌微量滴定皿に２５ボルトで１００ミリ秒電気穿孔す
る。各ＣＡＴ（ファルマシア社）構築含有プラスミド
を、多重実験中の３または４複製中で試験する。３０か
ら５０ミクロングラムのプラスミドｐＺ０６０１ＢＳを
対照として各実験で使用する。全ての他のプラスミドを
ｐＺ０６０１ＢＳと比べて等量のモル量のＤＮＡを使っ
て試験する。約１０6の原形質体を１．５ｍｌの試験管
にアリコートし、２分間５００ｇで遠心分離し、上澄み
を除去する。各ＤＮＡを７５ミクロンリットルの２モル
のＫＣｌに添加する。容積をＣＣＭ（ｐＨが８．０に調
整された）を添加して１ミリリットルに調整し、この混
合物を電気穿孔させ、すぐにペトリ皿中の５ミリリット
ルのｐＨ５．８のＣＣＭに希釈する。希釈された検体
を、ＣＡＴアッセイ用に集める前に暗所の戸棚に１−２
日貯蔵する。
【００２０】
【表１】 プロモーター 欠失部分 相関活性 ６０１ＢＳ なし １００％ ６０２Δ３−２ −１５６８から−１０００および １２５−１７５％ −４８８から−１３４ ６０２Δ３−３ −１５６８から−９４８および ７５−１２５％ −４８８から−１３４ ６０２Δ４−９ −１５４８から−８３０および １００−１５０％ −４８８から−１３４ ６０２Δ４−６ −１５４８から−６２８および ７５−１００％ −４８８から−１３４ ６０１ＢＳΔ２−３ −４９３から−１１８ ５０−７５％ ６０３ −１１２５から−１３４ 約１０％ ６０４ −１５６８から−１１２５および 約２５％ −４９６から−１３４ ６０５ −１５６８から−４８８ ６−８％ ６０１ＢＳ(ＢＳph) −１３４から−１２０ ５０−７５％
【００２１】実施例４−完全植物における構成的発現 タバコを下記のプロトコールを使って形質転換する。 植物組織 タバコ葉移植片を無菌栽培タバコから得る。無菌タバコ
を既存のもののいちばん上の節を除去することによって
約１月間育てて伸長させ、ムラシゲ−スクージ塩、１ｍ
ｌ／ｌの１００ｍｇ／ｌミオ−イノシトール、５ｍｌ／
ｌのビタミックス（０．５ｍｇ／ｌのピリドキシンＨＣ
ｌ、０．５ｍｇ／ｌのニコチン酸、１．０ｍｇ／ｌのチ
アミンを提供する）および３％のショ糖を含む７５ｍｌ
の寒天凝固無ホルモンの培地（０／０培地）を入れたス
ポンジのビンの中で再培養する。タバコを、中位の強さ
の光に持続して当てる。ビンを緑の紙のテープで封印す
るかまたは気体交換をさせるために封入せずに置くこと
ができる。 アグロバクテリウム ベクター 二元ベクター系をアグロバクテリウム・ツメファキエン
ス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅ
ｎｓ）を形質転換するのに使用し、次に細菌をタバコ細
胞を形質転換するのに使用する。
を既存のもののいちばん上の節を除去することによって
約１月間育てて伸長させ、ムラシゲ−スクージ塩、１ｍ
ｌ／ｌの１００ｍｇ／ｌミオ−イノシトール、５ｍｌ／
ｌのビタミックス（０．５ｍｇ／ｌのピリドキシンＨＣ
ｌ、０．５ｍｇ／ｌのニコチン酸、１．０ｍｇ／ｌのチ
アミンを提供する）および３％のショ糖を含む７５ｍｌ
の寒天凝固無ホルモンの培地（０／０培地）を入れたス
ポンジのビンの中で再培養する。タバコを、中位の強さ
の光に持続して当てる。ビンを緑の紙のテープで封印す
るかまたは気体交換をさせるために封入せずに置くこと
ができる。 アグロバクテリウム ベクター 二元ベクター系をアグロバクテリウム・ツメファキエン
ス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅ
ｎｓ）を形質転換するのに使用し、次に細菌をタバコ細
胞を形質転換するのに使用する。
【００２２】一般的方法 アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ベ
クターを−７０℃で貯蔵する。形質転換の約１８時間
前、適当な抗生物質を含む２５ｍｌの無菌液体ＬＢ３培
地（下記）に１００−５００マイクロリットルのアグロ
バクテリウム培養を接種する。培養を２８℃の２５０ｒ
ｐｍの振とう器上で１晩にわたって育成する。 ＬＢ３ 培地（１リットルに対して） トリプトン １０ｇ イースト抽出物 ５ｇ ＮａＣｌ ４ｇ ＫＣｌ ｌｇ ＭｇＳＯ4７Ｈ2Ｏ ３ｇ １リットルに水を添加し、１フラスコに対し２５ｍｌづ
つわける。抗生物質は２５μｇ／ｍｌのストレプトマイ
シンおよび５０μｇ／ｍｌのカナマイシンである。形質
転換は一般に、細胞が対数相にあるときに行なわれる。
６００ｎｍでの光学密度は好ましくは０．５０−１．０
である。培養を、５０ｍｌ液体無ホルモン０／０培地中
に１０８細胞／ｍｌの濃度まで希釈する。
クターを−７０℃で貯蔵する。形質転換の約１８時間
前、適当な抗生物質を含む２５ｍｌの無菌液体ＬＢ３培
地（下記）に１００−５００マイクロリットルのアグロ
バクテリウム培養を接種する。培養を２８℃の２５０ｒ
ｐｍの振とう器上で１晩にわたって育成する。 ＬＢ３ 培地（１リットルに対して） トリプトン １０ｇ イースト抽出物 ５ｇ ＮａＣｌ ４ｇ ＫＣｌ ｌｇ ＭｇＳＯ4７Ｈ2Ｏ ３ｇ １リットルに水を添加し、１フラスコに対し２５ｍｌづ
つわける。抗生物質は２５μｇ／ｍｌのストレプトマイ
シンおよび５０μｇ／ｍｌのカナマイシンである。形質
転換は一般に、細胞が対数相にあるときに行なわれる。
６００ｎｍでの光学密度は好ましくは０．５０−１．０
である。培養を、５０ｍｌ液体無ホルモン０／０培地中
に１０８細胞／ｍｌの濃度まで希釈する。
【００２３】タバコ葉移植片を、前記のように用意され
た形質転換されたアグロバクテリウムの１０8細胞／ｍ
ｌ希釈液中に３分間浸す。移植片を除去し、無菌ワット
マン濾紙上で吸い取る。次にそれらを２日間、抗生物質
を入れない再生培地に置く。３日目に、処置した移植片
を適当な抗生物質を含む再生培地に移入する。移植片を
これらの皿上に３から４週間かまたは推定的に形質転換
された若芽が発根培地まで動くのに十分な位大きくなる
まで置く。発根培地は、構築物に応じて異なり、２５０
ｍｇ／ｌのカルベニシリンおよび１００ｍｇ／ｌのカナ
マイシンまたは５０ｍｇ／ｌのヒグロマイシンを含む中
強度の０／０培地である。約２週間後、若芽は根付き緑
になる。次にそれらをビンに移入し、各植物に身元証明
番号を与える。検定を、構成的プロモーター活性を証明
するために種々の組織上で行なう。
た形質転換されたアグロバクテリウムの１０8細胞／ｍ
ｌ希釈液中に３分間浸す。移植片を除去し、無菌ワット
マン濾紙上で吸い取る。次にそれらを２日間、抗生物質
を入れない再生培地に置く。３日目に、処置した移植片
を適当な抗生物質を含む再生培地に移入する。移植片を
これらの皿上に３から４週間かまたは推定的に形質転換
された若芽が発根培地まで動くのに十分な位大きくなる
まで置く。発根培地は、構築物に応じて異なり、２５０
ｍｇ／ｌのカルベニシリンおよび１００ｍｇ／ｌのカナ
マイシンまたは５０ｍｇ／ｌのヒグロマイシンを含む中
強度の０／０培地である。約２週間後、若芽は根付き緑
になる。次にそれらをビンに移入し、各植物に身元証明
番号を与える。検定を、構成的プロモーター活性を証明
するために種々の組織上で行なう。
【００２４】形質転換ベクター ｐＺ０６３９ プラスミドを、ｈｓｐ８０−ＣＡＴ遺伝子ＮＯＳターミ
ネーターを含む代わりにｈｓｐ８０−ＧＵＳ−ＮＯＳタ
ーミネーターカセットを含む以外ｐＺ０６０１と同様に
構築する。このプラスミドをｐＺ０６１２と表わす。プ
ラスミドｐＢｉｎ１９（クローンテック）をＥｃｏＲＩ
およびＨｉｎｄＩＩＩで切断する。プラスミドｐＺ０６
１２をＳｃａＩ、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで切
断する。いずれの消化物も低融解点寒天上で分離する。
１２ｋｂ−ｐＢｉｎ１９ベクター断片および〜３．６Ｋ
ｂ ｈｓｐ８０−ＧＵＳ−ＮＯＳ断片を分離し、つづい
て結合する。生じたプラスミドはｐＺ０６３９と表わさ
れるが、ＰｓｔＩ消化により同定され得る。 ｐＺ０６４０ 上記の方法にしたがって、ｐＺ０６４０を構築する。こ
れは切り取られたｈｓｐ８０断片をもつ点でｐＺ０６３
９と異なる。 ｐＺ０６４１ 上記の方法にしたがって、ｐＺ０６４１を構築する。ｐ
Ｚ０６４１は、全長プロモーターではなく０．２５２ｋ
ｂ ｈｓｐ８０プロモーターを含む。 ｐＺ０６４２ 上記の方法にしたがって、ｐＺ０６４２を構築する。ｈ
ｓｐ８０または誘導プロモーターではなく、ｐＺ０６４
２はＣａＭＶ３５Ｓ プロモーター−ＧＵＳ−ＮＯＳ
断片を含む。
ネーターを含む代わりにｈｓｐ８０−ＧＵＳ−ＮＯＳタ
ーミネーターカセットを含む以外ｐＺ０６０１と同様に
構築する。このプラスミドをｐＺ０６１２と表わす。プ
ラスミドｐＢｉｎ１９（クローンテック）をＥｃｏＲＩ
およびＨｉｎｄＩＩＩで切断する。プラスミドｐＺ０６
１２をＳｃａＩ、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで切
断する。いずれの消化物も低融解点寒天上で分離する。
１２ｋｂ−ｐＢｉｎ１９ベクター断片および〜３．６Ｋ
ｂ ｈｓｐ８０−ＧＵＳ−ＮＯＳ断片を分離し、つづい
て結合する。生じたプラスミドはｐＺ０６３９と表わさ
れるが、ＰｓｔＩ消化により同定され得る。 ｐＺ０６４０ 上記の方法にしたがって、ｐＺ０６４０を構築する。こ
れは切り取られたｈｓｐ８０断片をもつ点でｐＺ０６３
９と異なる。 ｐＺ０６４１ 上記の方法にしたがって、ｐＺ０６４１を構築する。ｐ
Ｚ０６４１は、全長プロモーターではなく０．２５２ｋ
ｂ ｈｓｐ８０プロモーターを含む。 ｐＺ０６４２ 上記の方法にしたがって、ｐＺ０６４２を構築する。ｈ
ｓｐ８０または誘導プロモーターではなく、ｐＺ０６４
２はＣａＭＶ３５Ｓ プロモーター−ＧＵＳ−ＮＯＳ
断片を含む。
【００２５】実施例５−プロモーター活性 実施例４の方法から得た植物を同型遺伝子、ＧＵＳの発
現について試験する。組織検体を採取してＧＵＳの存在
について検定する。ＧＵＳ活性を全組織検体中で検索す
る。対照組織（同一培養および再生方法に処された非形
質転換植物から得た）もまた、ＧＵＳ活性について検定
する。何も測定されていない。括弧内の数は検体を採取
された植物の総数である。結果は正の数で示される（青
色がみられる）。“ＮＴ”は試験されていない。“Ｎ
Ａ"は無効である。“Ｍ”は突然変異体である。
現について試験する。組織検体を採取してＧＵＳの存在
について検定する。ＧＵＳ活性を全組織検体中で検索す
る。対照組織（同一培養および再生方法に処された非形
質転換植物から得た）もまた、ＧＵＳ活性について検定
する。何も測定されていない。括弧内の数は検体を採取
された植物の総数である。結果は正の数で示される（青
色がみられる）。“ＮＴ”は試験されていない。“Ｎ
Ａ"は無効である。“Ｍ”は突然変異体である。
【００２６】
【表２】プラスミド 構築物（プラスＧＵＳ、ＮＯＳ
ターミネーター） ｐＺ０６３９ 全長ｈｓｐ８０ ｐＺ０６４０ ｈｓｐ８０の−１０００から−４８８＋
−１３４から−２３（ＵＡＳ１＋ＵＡＳ２＋ＴＡＴＡ領
域を含む） ｐＺ０６４１ ｈｓｐ８０の−６２８から−４８８＋−
１３４から−２３（ＵＡＳ１＋ＴＡＴＡ領域を含む） ｐＺ０６４２ ３５Ｓプロモーター 組織 pＺ0639 (7) pＺ0640 (6) pＺ0641 (5) pＺ0642 (7) (7) 葉肉 1／7 1／5、1NT 1／5 5／7 葉脈 5／7 1／6 2／5 3／7 葉の毛状体 4／7 1／6 2／5 1／7 側生分裂組織 2／7 0／5、1NT 1／5 4／7 側生毛状体 1／7 0／6 0／5 1／7 がく片脈 3／7 3／6 2／4、1NA 4／6、1NA がく片毛状体 4／7 1／6 0／4 0／6、1NA 心皮 2／7 4／6 0／4、1NA 4／6、1NA 花管／花弁静脈 1／7 1／6 1／4、1NA 3／6、１ＮＴ 花管／ 花弁毛状体 ４／7 2／6 0／4 3／6、1NT 未熟やく 4／7 5／6 2／3、1NA、1M 3／5、1NA、 1NT 花粉 5／5、2NA 5／6 3／3、1NA、1M 0／6、1NA 根 6／7、1NT 1／4、2NT 0／4、1NT 3／6、1NT 茎 2／2、6NT 0／2、4NT 0／1、4NT 1／1、6NT
ターミネーター） ｐＺ０６３９ 全長ｈｓｐ８０ ｐＺ０６４０ ｈｓｐ８０の−１０００から−４８８＋
−１３４から−２３（ＵＡＳ１＋ＵＡＳ２＋ＴＡＴＡ領
域を含む） ｐＺ０６４１ ｈｓｐ８０の−６２８から−４８８＋−
１３４から−２３（ＵＡＳ１＋ＴＡＴＡ領域を含む） ｐＺ０６４２ ３５Ｓプロモーター 組織 pＺ0639 (7) pＺ0640 (6) pＺ0641 (5) pＺ0642 (7) (7) 葉肉 1／7 1／5、1NT 1／5 5／7 葉脈 5／7 1／6 2／5 3／7 葉の毛状体 4／7 1／6 2／5 1／7 側生分裂組織 2／7 0／5、1NT 1／5 4／7 側生毛状体 1／7 0／6 0／5 1／7 がく片脈 3／7 3／6 2／4、1NA 4／6、1NA がく片毛状体 4／7 1／6 0／4 0／6、1NA 心皮 2／7 4／6 0／4、1NA 4／6、1NA 花管／花弁静脈 1／7 1／6 1／4、1NA 3／6、１ＮＴ 花管／ 花弁毛状体 ４／7 2／6 0／4 3／6、1NT 未熟やく 4／7 5／6 2／3、1NA、1M 3／5、1NA、 1NT 花粉 5／5、2NA 5／6 3／3、1NA、1M 0／6、1NA 根 6／7、1NT 1／4、2NT 0／4、1NT 3／6、1NT 茎 2／2、6NT 0／2、4NT 0／1、4NT 1／1、6NT
【００２７】このデータは、染色の強度は多くの場合で
３５Ｓプロモーターより弱いけれども、ｈｓｐプロモー
ターが試験された全ての組織である程度活性であること
を示している。一般に葉肉は真空浸透まで染色しない
が、多数の細胞は、みたところは代表的な葉肉細胞より
むしろ葉脈のものに似ているが、染色する。
３５Ｓプロモーターより弱いけれども、ｈｓｐプロモー
ターが試験された全ての組織である程度活性であること
を示している。一般に葉肉は真空浸透まで染色しない
が、多数の細胞は、みたところは代表的な葉肉細胞より
むしろ葉脈のものに似ているが、染色する。
【００２８】実施例６−バイブリッドプロモーター ｈｓｐ８０の種々の上流領域を、上流領域が活性を与え
るかどうかを決定するため非活性異型最小プロモーター
に結合する。下記に示された断片を、これ以後本明細書
で“−４６ ３５Ｓプロモーター”と呼ぶ、ＣａＭＶ転
写開始部位に対して−４６から＋１３１（ＴＡＴＡＡＡ
ボックスは−３１から−２５である）までの切り詰めら
れたＣａＭＶ３５Ｓプロモーターの上流でクローンす
る。［注、切り詰められたＣａＭＶ３５Ｓを同定するの
にこの明細書で使用される番号は、ＣａＭＶ３５Ｓそれ
自体をいうこのであってｈｓｐ８０およびその断片に対
して他で使用される番号と同じものではない。］プラス
ミドｐＺ０６２５は、トウモロコシＡＤＨ１Ｓ遺伝子の
イントロン６、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）コード
化部位、およびｐＴ７Ｔ３中のＮＯＳターミネーター
（ファルマシアから入手可能）から成る。下記のブラシ
カ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０断片を−４６３５Ｓ
プロモーター断片の上流に結合する。 断片（第１表にしたがって番号を付ける） プラスミド −６２８から−４８８プラス−１３４から−１２０ ｐＺ０６７０ −１０００から−４８８プラス−１３４から−１２０ ｐＺ０６８１ −１０００から−６０４ ｐＺ０６８２ −４８８から−１２０ ｐＺ０６８３ −１５４８から−４８８プラス−１３４から−１２０ ｐＺ０６８９ 上記プラスミド中に含まれるハイブリッドプロモーター
は、それぞれハイブリッドプロモーター６７０、６８
１、６８２、６８３および６８９と呼ばれる。
るかどうかを決定するため非活性異型最小プロモーター
に結合する。下記に示された断片を、これ以後本明細書
で“−４６ ３５Ｓプロモーター”と呼ぶ、ＣａＭＶ転
写開始部位に対して−４６から＋１３１（ＴＡＴＡＡＡ
ボックスは−３１から−２５である）までの切り詰めら
れたＣａＭＶ３５Ｓプロモーターの上流でクローンす
る。［注、切り詰められたＣａＭＶ３５Ｓを同定するの
にこの明細書で使用される番号は、ＣａＭＶ３５Ｓそれ
自体をいうこのであってｈｓｐ８０およびその断片に対
して他で使用される番号と同じものではない。］プラス
ミドｐＺ０６２５は、トウモロコシＡＤＨ１Ｓ遺伝子の
イントロン６、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）コード
化部位、およびｐＴ７Ｔ３中のＮＯＳターミネーター
（ファルマシアから入手可能）から成る。下記のブラシ
カ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０断片を−４６３５Ｓ
プロモーター断片の上流に結合する。 断片（第１表にしたがって番号を付ける） プラスミド −６２８から−４８８プラス−１３４から−１２０ ｐＺ０６７０ −１０００から−４８８プラス−１３４から−１２０ ｐＺ０６８１ −１０００から−６０４ ｐＺ０６８２ −４８８から−１２０ ｐＺ０６８３ −１５４８から−４８８プラス−１３４から−１２０ ｐＺ０６８９ 上記プラスミド中に含まれるハイブリッドプロモーター
は、それぞれハイブリッドプロモーター６７０、６８
１、６８２、６８３および６８９と呼ばれる。
【００２９】ｐＺ０６１２も試験される（ＣＡＴ遺伝子
をＧＵＳ遺伝子で置き換える以外はｐＺ０６０１と同じ
である）が、ｐＴＺ１８Ｒ中のＮＯＳターミネーター
（イントロンは無し）と共にＧＵＳを制御する全長ｈｓ
ｐ８０プロモーターから成る。原形質体を前記のような
ニンジン、ブラック・メキシカン・スイート（ＢＭ
Ｓ）、トウモロコシ、およびタバコから用意する。原形
質体を目的のプラスミドで電気穿孔し、１日回復させて
から抽出し、抽出物のＧＵＳ活性を検定する。ＧＵＳ活
性を分光測光法で測定する。結果は平均値で表わし、全
長３５Ｓプロモーター構築物、ｐＺ０６６３（−３６６
から＋１３１の３５Ｓ、イントロン６、ＧＵＳ、ＮＯＳ
ターミネーター）に標準化する。全長３５Ｓプロモータ
ーは、フランクら、セル（Ｃｅｌｌ）、２１巻、２８５
−２９４頁（１９８０年）中に記載されている。
をＧＵＳ遺伝子で置き換える以外はｐＺ０６０１と同じ
である）が、ｐＴＺ１８Ｒ中のＮＯＳターミネーター
（イントロンは無し）と共にＧＵＳを制御する全長ｈｓ
ｐ８０プロモーターから成る。原形質体を前記のような
ニンジン、ブラック・メキシカン・スイート（ＢＭ
Ｓ）、トウモロコシ、およびタバコから用意する。原形
質体を目的のプラスミドで電気穿孔し、１日回復させて
から抽出し、抽出物のＧＵＳ活性を検定する。ＧＵＳ活
性を分光測光法で測定する。結果は平均値で表わし、全
長３５Ｓプロモーター構築物、ｐＺ０６６３（−３６６
から＋１３１の３５Ｓ、イントロン６、ＧＵＳ、ＮＯＳ
ターミネーター）に標準化する。全長３５Ｓプロモータ
ーは、フランクら、セル（Ｃｅｌｌ）、２１巻、２８５
−２９４頁（１９８０年）中に記載されている。
【表３】 トランジェントＧＵＳ検定 プラスミド タバコ ニンジン ＢＭＳ ｐＺ０６６３ １．０ １．０ １．０ ｐＺ０６２５ ０．０３ ０．０１ ０．０３ ｐＺ０６７０ ０．１６ ０．２８ ０．０２ ｐＺ０６８１ ０．１３ ｐＺ０６８２ ０．２４ ０．２３ ０．０８ ｐＺ０６８３ ０．１７ ｐＺ０６８９ ０．１６ ０．３２ ０．０３ ｐＺ０６１２ ０．６５ トランジェントＣＡＴ検定 プラスミド ニンジン ｐＺ０６０２ Δ４−６ ０．７５−１．０ ｐＺ０６０２ Δ３−２ １．２５−１．７５ ｐＺ０６０５ ０．０６−０．０８ ｐＺ０６０１ ＢＳΔ２−３ ０．０５−０．７５ ｐＺ０６０１ ＢＳ １．０ 上記の表からわかるように、全上流部位は、３５Ｓ−４
６プロモーターと融合されたとき本質的に同じ活性を与
え、殆ど追加の効果はないようにみえる。
６プロモーターと融合されたとき本質的に同じ活性を与
え、殆ど追加の効果はないようにみえる。
【００３０】
【化１】
【化２】
【００３１】（ｉ） 配列特性 （Ａ） 長さ、２０４２塩基対 （Ｂ） 型、核酸 （Ｃ） 鎖、 ２本鎖 （Ｄ） トポロジー、線形 （ｉｉ） 分子型、ＤＮＡ（ゲノムの） （ｉｉｉ）仮説、なし （ｉｖ） アンチセンス、なし （ｘｉ） 配列表記、配列番号１
【化３】
【００３２】
配列番号：１ 配列の長さ：２０４２ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ 仮説：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 配列 ＡＴＣＧＡＴＡＡＣＣ ＡＣＧＡＣＣＡＣＧＡ ＣＣＡＡＡＡＣＣＡＣ ＧＡＴ
ＴＧＴＧＡＣＣ ＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡ ＣＣＡＣＧＣＣＣＡＣ ６０ ＧＡＴＡＧＧＡＡＴＡ ＡＴＴＴＣＣＴＴＴＴ ＴＣＣＧＧＡＴＴＴＴ ＴＴＡ
ＴＡＴＣＣＧＴ ＴＧＣＡＴＴＴＡＣＣ ＴＣＡＧＧＡＡＡＴＧ １２０ ＣＴＴＴＧＧＴＴＣＣ ＣＧＴＧＧＧＴＣＧＧ ＧＣＡＴＴＧＴＧＧＴ ＴＴＴ
ＴＡＡＴＧＡＧ ＧＡＧＴＴＣＡＴＴＡ ＴＴＴＣＴＣＴＣＣＧ １８０ ＣＴＡＴＴＡＴＡＡＧ ＣＧＣＣＡＣＡＧＣＧ ＡＧＴＴＣＡＧＡＧＡ ＡＣＣ
ＴＣＧＴＡＴＡ ＣＣＣＡＣＡＡＴＴＴ ＣＴＡＴＡＴＴＧＴＴ ２４０ ＣＴＴＧＴＡＧＡＡＣ ＡＴＡＡＴＧＡＴＴＴ ＴＴＧＴＧＧＡＡＣＧ ＴＴＴ
ＧＧＴＡＡＧＴ ＴＴＴＣＴＣＧＡＧＣ ＡＴＴＴＣＣＧＣＴＴ ３００ ＣＣＧＡＧＡＣＡＧＧ ＣＴＴＡＣＣＧＣＡＡ ＴＡＡＴＣＴＡＡＴＴ ＧＣＧ
ＣＣＧＣＴＡＴ ＴＣＴＣＡＡＴＡＴＡ ＧＣＧＧＡＡＴＴＧＴ ３６０ ＡＣＧＴＴＴＣＣＡＣ ＴＴＴＴＴＣＡＡＡＡ ＴＣＴＴＧＡＡＡＴＣ ＧＴＡ
ＧＡＴＴＴＴＴ ＣＣＡＣＴＣＡＴＣＧ ＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧ ４２０ ＧＧＡＧＡＧＴＡＡＴ ＴＴＴＣＴＴＴＴＧＧ ＴＴＡＴＣＡＡＡＣＣ ＴＣＴ
ＣＣＴＴＣＡＧ ＡＧＣＴＴＴＣＣＡＡ ＡＧＡＴＣＴＡＡＧＧ ４８０ ＧＡＴＣＴＴＴＧＧＴ ＴＣＴＣＧＣＡＴＡＡ ＴＣＡＴＧＣＧＴＡＡ ＧＡＴ
ＴＴＴＣＡＴＣ ＴＡＧＡＴＧＴＣＴＴ ＣＴＣＡＧＡＡＡＴＡ ５４０ ＴＣＡＣＧＧＣＣＴＴ ＡＧＣＣＴＴＴＴＣＡ ＴＧＡＧＡＧＧＴＴＧ ＡＴＡ
ＴＡＴＴＧＣＣ ＴＴＣＴＣＴＴＡＴＴ ＧＴＴＴＣＧＡＧＴＡ ６００ ＴＴＴＴＣＴＣＧＧＡ ＡＴＣＴＡＧＡＴＧＡ ＡＧＣＴＣＣＡＴＧＴ ＴＴＧ
ＴＡＡＣＣＣＡ ＴＧＣＣＧＴＧＴＡＧ ＴＴＴＧＴＣＣＣＡＧ ６６０ ＴＴＡＣＴＴＣＣＡＡ ＴＧＣＣＧＧＡＡＡＣ ＴＧＡＡＧＴＴＴＣＴ ＣＧＡ
ＴＴＴＴＴＧＣ ＣＡＴＴＴＧＴＡＴＴ ＴＣＴＡＡＡＧＡＡＣ ７２０ ＡＴＡＡＡＴＡＡＡＡ ＡＴＴＡＴＴＡＧＡＡ ＴＡＴＴＡＴＴＣＡＴ ＡＴＴ
ＡＡＡＡＧＡＡ ＡＣＣＧＴＴＴＡＣＡ ＴＴＧＡＴＣＡＴＧＣ ７８０ ＡＡＧＣＡＡＴＴＡＣ ＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣ ＧＡＴＧＴＡＡＡＧＡ ＡＡＡ
ＧＴＡＡＡＣＣ ＧＡＴＡＴＴＣＡＴＣ ＣＴＡＡＡＴＴＣＴＣ ８４０ ＴＴＧＧＡＧＴＡＡＡ ＴＴＣＴＣＣＡＡＣＧ ＧＡＴＡＡＡＣＣＡＴ ＡＡＡ
ＴＡＧＡＡＡＣ ＡＣＡＡＡＴＡＡＡＡ ＡＴＧＧＣＡＣＡＴＡ ９００ ＡＡＡＡＣＡＡＡＡＧ ＴＧＣＧＣＧＡＡＴＣ ＡＴＣＴＴＴＣＴＴＧ ＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡ ＴＣＧＧＡＡＧＡＧＡ ＧＣＧＡＴＴＴＧＡＡ ９６０ ＡＴＴＴＴＴＧＡＧＡ ＧＡＡＧＡＴＧＡＡＡ ＴＡＴＴＴＴＧＧＡＴ ＧＡＴ
ＧＡＡＡＴＧＧ ＡＧＴＧＡＡＡＡＴＧ ＡＧＴＴＧＴＡＴＴＴ １０２０ ＡＴＡＧＡＴＧＡＡＡ ＡＡＣＡＣＴＧＴＴＣ ＡＴＡＡＣＣＧＴＴＧ ＧＡＧ
ＡＡＡＧＧＧＧ ＡＡＡＴＴＴＴＧＡＡ ＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴ １０８０ ＴＧＴＧＡＣＣＧＴＴ ＧＧＧＧＴＴＡＡＡＴ ＣＧＡＧＴＧＣＡＣＴ ＡＡＡ
ＡＡＴＣＡＧＴ ＣＴＧＡＧＡＡＴＡＴ ＣＧＴＡＴＴＡＡＡＣ １１４０ ＡＧＴＣＡＡＴＣＡＡ ＡＴＣＴＡＴＡＡＡＡ ＴＴＴＣＡＴＡＡＡＡ ＧＴＡ
ＡＡＡＡＴＴＡ ＴＧＧＣＡＡＴＧＡＡ ＡＴＡＴＴＴＡＴＧＴ １２００ ＴＡＴＧＡＣＡＡＣＡ ＡＡＴＣＡＴＧＣＧＡ ＣＧＧＣＴＣＡＧＣＣ ＧＡＴ
ＣＡＡＴＧＣＡ ＧＡＧＴＡＡＴＡＡＡ ＴＡＡＡＴＴＡＴＡＣ １２６０ ＧＧＣＧＧＣＴＣＧＧ ＣＣＧＡＣＣＡＡＴＴ ＡＡＴＡＡＴＡＡＡＣ ＡＧＡ
ＡＴＡＴＡＡＧ ＧＣＧＧＣＴＣＧＧＣ ＣＧＡＣＣＡＡＴＡＡ １３２０ ＡＴＡＡＴＡＡＡＣＡ ＧＡＡＴＡＴＡＡＧＧ ＣＧＧＣＴＣＧＧＣＣ ＧＡＣ
ＣＡＴＴＡＡＴ ＡＡＡＴＴＡＡＡＴＴ ＡＴＴＡＧＴＡＡＡＴ １３８０ ＡＡＴＡＴＡＧＧＣＧ ＧＴＡＴＴＣＣＧＧＣ ＣＡＴＴＡＴＡＡＣＡ ＴＡＡ
ＴＡＴＡＡＡＴ ＡＡＴＡＧＴＡＧＡＧ ＧＣＧＧＴＡＴＡＣＣ １４４０ ＧＡＣＣＡＴＴＡＴＡ ＡＣＡＧＧＧＴＡＴＡ ＡＡＴＧＡＴＡＣＡＡ ＡＴＡ
ＡＡＴＴＴＴＡ ＣＣＧＡＡＴＣＧＣＡ ＧＡＧＴＧＡＴＣＧＴ １５００ ＧＣＴＧＡＴＡＡＣＧ ＴＧＴＴＡＴＧＡＡＡ ＡＴＡＡＣＴＧＡＡＡ ＴＴＴ
ＴＡＴＴＡＴＡ ＴＣＧＣＧＧＧＡＡＴ ＴＴＡＡＡＴＡＡＧＧ １５６０ ＧＣＡＡＡＡＴＴＴＴ ＡＴＡＣＣＣＧＴＡＡ ＡＡＡＴＴＡＴＡＡＣ ＡＣＴ
ＧＡＡＡＧＡＡ ＡＧＴＧＴＴＴＡＴＣ ＴＧＡＧＡＧＡＧＡＡ １６２０ ＧＧＧＡＡＧＡＧＴＧ ＡＡＧＴＧＴＧＴＴＣ ＴＴＧＡＡＡＣＧＡＴ ＣＧＡ
ＡＣＴＴＧＡＴ ＣＧＴＡＴＡＴＡＴＡ ＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴ １６８０ ＣＴＡＣＴＧＴＧＣＡ ＡＡＴＡＧＴＧＣＡＧ ＣＧＧＧＣＣＣＣＡＣ ＡＴＣ
ＡＴＴＴＡＴＡ ＡＴＴＴＣＡＡＣＴＴ ＡＴＧＣＧＧＣＧＣＴ １７４０ ＧＴＧＴＴＣＴＣＴＧ ＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡ ＣＡＡＡＡＴＴＡＴＧ ＴＴＡ
ＴＴＴＧＴＴＴ ＴＡＡＣＡＣＡＡＡＡ ＡＡＧＴＡＧＡＡＡＡ １８００ ＴＴＡＴＡＡＡＧＡＡ ＧＡＡＧＡＡＡＡＴＡ ＡＣＡＣＡＴＴＧＡＣ ＣＡＡ
ＡＡＡＧＡＡＧ ＴＡＡＡＴＴＡＧＴＴ ＡＣＡＣＣＣＣＡＡＧ １８６０ ＡＴＴＡＴＴＧＧＧＣ ＣＣＡＡＣＴＴＧＴＣ ＴＣＡＡＡＣＴＡＡＣ ＡＡＧ
ＴＴＡＡＧＣＡ ＴＡＡＴＧＧＡＴＣＴ ＣＡＧＡＡＧＧＡＴＣ １９２０ ＴＡＧＡＡＡＣＣＣＴ ＡＴＡＡＣＧＴＴＴＧ ＴＧＴＡＴＡＴＡＴＡ ＣＧＴ
ＡＡＣＴＴＧＴ ＣＴＣＴＴＣＡＣＴＡ ＣＣＴＣＧＣＡＴＣＴ １９８０ ＧＣＴＣＴＣＴＣＴＡ ＴＴＡＴＣＧＴＡＣＣ ＴＣＣＴＴＧＡＴＡＡ ＡＣＣ
ＣＴＡＧＡＴＣ ＴＣＣＣＣＧＡＴＴＣ ＴＣＡＧＣＡＡＣＧＡ ２０４０ ＴＧ
２０４２
ＴＧＴＧＡＣＣ ＡＣＧＧＣＣＡＣＧＡ ＣＣＡＣＧＣＣＣＡＣ ６０ ＧＡＴＡＧＧＡＡＴＡ ＡＴＴＴＣＣＴＴＴＴ ＴＣＣＧＧＡＴＴＴＴ ＴＴＡ
ＴＡＴＣＣＧＴ ＴＧＣＡＴＴＴＡＣＣ ＴＣＡＧＧＡＡＡＴＧ １２０ ＣＴＴＴＧＧＴＴＣＣ ＣＧＴＧＧＧＴＣＧＧ ＧＣＡＴＴＧＴＧＧＴ ＴＴＴ
ＴＡＡＴＧＡＧ ＧＡＧＴＴＣＡＴＴＡ ＴＴＴＣＴＣＴＣＣＧ １８０ ＣＴＡＴＴＡＴＡＡＧ ＣＧＣＣＡＣＡＧＣＧ ＡＧＴＴＣＡＧＡＧＡ ＡＣＣ
ＴＣＧＴＡＴＡ ＣＣＣＡＣＡＡＴＴＴ ＣＴＡＴＡＴＴＧＴＴ ２４０ ＣＴＴＧＴＡＧＡＡＣ ＡＴＡＡＴＧＡＴＴＴ ＴＴＧＴＧＧＡＡＣＧ ＴＴＴ
ＧＧＴＡＡＧＴ ＴＴＴＣＴＣＧＡＧＣ ＡＴＴＴＣＣＧＣＴＴ ３００ ＣＣＧＡＧＡＣＡＧＧ ＣＴＴＡＣＣＧＣＡＡ ＴＡＡＴＣＴＡＡＴＴ ＧＣＧ
ＣＣＧＣＴＡＴ ＴＣＴＣＡＡＴＡＴＡ ＧＣＧＧＡＡＴＴＧＴ ３６０ ＡＣＧＴＴＴＣＣＡＣ ＴＴＴＴＴＣＡＡＡＡ ＴＣＴＴＧＡＡＡＴＣ ＧＴＡ
ＧＡＴＴＴＴＴ ＣＣＡＣＴＣＡＴＣＧ ＡＧＴＧＣＡＴＧＧＧ ４２０ ＧＧＡＧＡＧＴＡＡＴ ＴＴＴＣＴＴＴＴＧＧ ＴＴＡＴＣＡＡＡＣＣ ＴＣＴ
ＣＣＴＴＣＡＧ ＡＧＣＴＴＴＣＣＡＡ ＡＧＡＴＣＴＡＡＧＧ ４８０ ＧＡＴＣＴＴＴＧＧＴ ＴＣＴＣＧＣＡＴＡＡ ＴＣＡＴＧＣＧＴＡＡ ＧＡＴ
ＴＴＴＣＡＴＣ ＴＡＧＡＴＧＴＣＴＴ ＣＴＣＡＧＡＡＡＴＡ ５４０ ＴＣＡＣＧＧＣＣＴＴ ＡＧＣＣＴＴＴＴＣＡ ＴＧＡＧＡＧＧＴＴＧ ＡＴＡ
ＴＡＴＴＧＣＣ ＴＴＣＴＣＴＴＡＴＴ ＧＴＴＴＣＧＡＧＴＡ ６００ ＴＴＴＴＣＴＣＧＧＡ ＡＴＣＴＡＧＡＴＧＡ ＡＧＣＴＣＣＡＴＧＴ ＴＴＧ
ＴＡＡＣＣＣＡ ＴＧＣＣＧＴＧＴＡＧ ＴＴＴＧＴＣＣＣＡＧ ６６０ ＴＴＡＣＴＴＣＣＡＡ ＴＧＣＣＧＧＡＡＡＣ ＴＧＡＡＧＴＴＴＣＴ ＣＧＡ
ＴＴＴＴＴＧＣ ＣＡＴＴＴＧＴＡＴＴ ＴＣＴＡＡＡＧＡＡＣ ７２０ ＡＴＡＡＡＴＡＡＡＡ ＡＴＴＡＴＴＡＧＡＡ ＴＡＴＴＡＴＴＣＡＴ ＡＴＴ
ＡＡＡＡＧＡＡ ＡＣＣＧＴＴＴＡＣＡ ＴＴＧＡＴＣＡＴＧＣ ７８０ ＡＡＧＣＡＡＴＴＡＣ ＡＡＧＧＡＧＡＡＧＣ ＧＡＴＧＴＡＡＡＧＡ ＡＡＡ
ＧＴＡＡＡＣＣ ＧＡＴＡＴＴＣＡＴＣ ＣＴＡＡＡＴＴＣＴＣ ８４０ ＴＴＧＧＡＧＴＡＡＡ ＴＴＣＴＣＣＡＡＣＧ ＧＡＴＡＡＡＣＣＡＴ ＡＡＡ
ＴＡＧＡＡＡＣ ＡＣＡＡＡＴＡＡＡＡ ＡＴＧＧＣＡＣＡＴＡ ９００ ＡＡＡＡＣＡＡＡＡＧ ＴＧＣＧＣＧＡＡＴＣ ＡＴＣＴＴＴＣＴＴＧ ＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＡ ＴＣＧＧＡＡＧＡＧＡ ＧＣＧＡＴＴＴＧＡＡ ９６０ ＡＴＴＴＴＴＧＡＧＡ ＧＡＡＧＡＴＧＡＡＡ ＴＡＴＴＴＴＧＧＡＴ ＧＡＴ
ＧＡＡＡＴＧＧ ＡＧＴＧＡＡＡＡＴＧ ＡＧＴＴＧＴＡＴＴＴ １０２０ ＡＴＡＧＡＴＧＡＡＡ ＡＡＣＡＣＴＧＴＴＣ ＡＴＡＡＣＣＧＴＴＧ ＧＡＧ
ＡＡＡＧＧＧＧ ＡＡＡＴＴＴＴＧＡＡ ＡＡＡＡＴＴＴＣＴＴ １０８０ ＴＧＴＧＡＣＣＧＴＴ ＧＧＧＧＴＴＡＡＡＴ ＣＧＡＧＴＧＣＡＣＴ ＡＡＡ
ＡＡＴＣＡＧＴ ＣＴＧＡＧＡＡＴＡＴ ＣＧＴＡＴＴＡＡＡＣ １１４０ ＡＧＴＣＡＡＴＣＡＡ ＡＴＣＴＡＴＡＡＡＡ ＴＴＴＣＡＴＡＡＡＡ ＧＴＡ
ＡＡＡＡＴＴＡ ＴＧＧＣＡＡＴＧＡＡ ＡＴＡＴＴＴＡＴＧＴ １２００ ＴＡＴＧＡＣＡＡＣＡ ＡＡＴＣＡＴＧＣＧＡ ＣＧＧＣＴＣＡＧＣＣ ＧＡＴ
ＣＡＡＴＧＣＡ ＧＡＧＴＡＡＴＡＡＡ ＴＡＡＡＴＴＡＴＡＣ １２６０ ＧＧＣＧＧＣＴＣＧＧ ＣＣＧＡＣＣＡＡＴＴ ＡＡＴＡＡＴＡＡＡＣ ＡＧＡ
ＡＴＡＴＡＡＧ ＧＣＧＧＣＴＣＧＧＣ ＣＧＡＣＣＡＡＴＡＡ １３２０ ＡＴＡＡＴＡＡＡＣＡ ＧＡＡＴＡＴＡＡＧＧ ＣＧＧＣＴＣＧＧＣＣ ＧＡＣ
ＣＡＴＴＡＡＴ ＡＡＡＴＴＡＡＡＴＴ ＡＴＴＡＧＴＡＡＡＴ １３８０ ＡＡＴＡＴＡＧＧＣＧ ＧＴＡＴＴＣＣＧＧＣ ＣＡＴＴＡＴＡＡＣＡ ＴＡＡ
ＴＡＴＡＡＡＴ ＡＡＴＡＧＴＡＧＡＧ ＧＣＧＧＴＡＴＡＣＣ １４４０ ＧＡＣＣＡＴＴＡＴＡ ＡＣＡＧＧＧＴＡＴＡ ＡＡＴＧＡＴＡＣＡＡ ＡＴＡ
ＡＡＴＴＴＴＡ ＣＣＧＡＡＴＣＧＣＡ ＧＡＧＴＧＡＴＣＧＴ １５００ ＧＣＴＧＡＴＡＡＣＧ ＴＧＴＴＡＴＧＡＡＡ ＡＴＡＡＣＴＧＡＡＡ ＴＴＴ
ＴＡＴＴＡＴＡ ＴＣＧＣＧＧＧＡＡＴ ＴＴＡＡＡＴＡＡＧＧ １５６０ ＧＣＡＡＡＡＴＴＴＴ ＡＴＡＣＣＣＧＴＡＡ ＡＡＡＴＴＡＴＡＡＣ ＡＣＴ
ＧＡＡＡＧＡＡ ＡＧＴＧＴＴＴＡＴＣ ＴＧＡＧＡＧＡＧＡＡ １６２０ ＧＧＧＡＡＧＡＧＴＧ ＡＡＧＴＧＴＧＴＴＣ ＴＴＧＡＡＡＣＧＡＴ ＣＧＡ
ＡＣＴＴＧＡＴ ＣＧＴＡＴＡＴＡＴＡ ＡＡＧＡＡＡＡＡＡＴ １６８０ ＣＴＡＣＴＧＴＧＣＡ ＡＡＴＡＧＴＧＣＡＧ ＣＧＧＧＣＣＣＣＡＣ ＡＴＣ
ＡＴＴＴＡＴＡ ＡＴＴＴＣＡＡＣＴＴ ＡＴＧＣＧＧＣＧＣＴ １７４０ ＧＴＧＴＴＣＴＣＴＧ ＡＣＴＴＴＣＡＴＡＡ ＣＡＡＡＡＴＴＡＴＧ ＴＴＡ
ＴＴＴＧＴＴＴ ＴＡＡＣＡＣＡＡＡＡ ＡＡＧＴＡＧＡＡＡＡ １８００ ＴＴＡＴＡＡＡＧＡＡ ＧＡＡＧＡＡＡＡＴＡ ＡＣＡＣＡＴＴＧＡＣ ＣＡＡ
ＡＡＡＧＡＡＧ ＴＡＡＡＴＴＡＧＴＴ ＡＣＡＣＣＣＣＡＡＧ １８６０ ＡＴＴＡＴＴＧＧＧＣ ＣＣＡＡＣＴＴＧＴＣ ＴＣＡＡＡＣＴＡＡＣ ＡＡＧ
ＴＴＡＡＧＣＡ ＴＡＡＴＧＧＡＴＣＴ ＣＡＧＡＡＧＧＡＴＣ １９２０ ＴＡＧＡＡＡＣＣＣＴ ＡＴＡＡＣＧＴＴＴＧ ＴＧＴＡＴＡＴＡＴＡ ＣＧＴ
ＡＡＣＴＴＧＴ ＣＴＣＴＴＣＡＣＴＡ ＣＣＴＣＧＣＡＴＣＴ １９８０ ＧＣＴＣＴＣＴＣＴＡ ＴＴＡＴＣＧＴＡＣＣ ＴＣＣＴＴＧＡＴＡＡ ＡＣＣ
ＣＴＡＧＡＴＣ ＴＣＣＣＣＧＡＴＴＣ ＴＣＡＧＣＡＡＣＧＡ ２０４０ ＴＧ
２０４２
【図１】 プラスミドｐＺ０２１７、ｐＺ０６０１およ
びｐＺ０６０１ＢＳの構築方法を示す図である。
びｐＺ０６０１ＢＳの構築方法を示す図である。
【図２】 ｐＺ０６０２の図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/82
Claims (23)
- 【請求項１】 異型遺伝子に作動可能に連結された、ブ
ラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０ プロモーター
またはその機能的均等物を含むＤＮＡ構築物。 - 【請求項２】 異型遺伝子に作動可能に連結された、ブ
ラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８０ プロモーター
の欠失またはハイブリッドプロモーター、またはその機
能的均等物を含むＤＮＡ構築物。 - 【請求項３】 欠失プロモーターが、６０２、６０２
Δ３−３、６０２、Δ４−９、６０２ Δ４−６で示さ
れる欠失プロモーターまたは前記欠失プロモーターの機
能的均等物を含む群から選択される、請求項２記載のＤ
ＮＡ構築物。 - 【請求項４】 ハイブリッドプロモーターが、６７０、
６８１、６８２、６８３、６８９で示されるハイブリッ
ドプロモーターおよび前記ハイブリッドプロモーターの
機能的均等物を含む群から選択される、請求項２記載の
ＤＮＡ構築物。 - 【請求項５】ａ）ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ
８０ プロモーターから１つ以上の上流活性化部位を分
離し、 ｂ）構成的活性を得るために前記１部位または複数の部
位を、誘導可能な、別の調節可能なまたは不活性なプロ
モーターへまたはその中へ操作可能に連結するかまたは
挿入する、ことを含む、構成的活性を、誘導可能な、別
の調節可能な、または不活性化プロモーターに与える方
法。 - 【請求項６】 上流活性化部位が、ブラシカ（Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターの−６０４から−４
８８領域またはその一部を含む、請求項５記載の方法。 - 【請求項７】 上流活性化配列が、ブラシカ（Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターの−１０００から−
６０４領域またはその一部を含む、請求項５記載の方
法。 - 【請求項８】 上流活性化配列が、ブラシカ（Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターの−４８８から−１
２０領域またはその一部を含む、請求項５記載の方法。 - 【請求項９】 ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ８
０プロモーター以外の誘導可能な、別の調節可能なまた
は不活性なプロモーターおよび誘導可能な、別の調整が
可能なまたは不活性なプロモーターに作動可能に連結さ
れるかまたは中に挿入されたブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃ
ａ）ｈｓｐ８０の１つ以上の上流活性化部位を含む構成
プロモーター。 - 【請求項１０】 上流活性化部位がブラシカ（Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ）ｈｓｐ８０の−６０４から−４８８の領域ま
たはその一部を含む、請求項９記載のプロモーター。 - 【請求項１１】 上流活性化部位がブラシカ（Ｂｒａｓ
ｓｉｃａ）ｈｓｐ８０の−１０００から−６０４までの
領域またはその一部を含む、請求項９記載のプロモータ
ー。 - 【請求項１２】 上流活性部位がブラシカ（Ｂｒａｓｓ
ｉｃａ）ｈｓｐ８０プロモーターの−４８８から−１２
０までの領域またはその一部を含む請求項９記載のプロ
モーター。 - 【請求項１３】 構造遺伝子に作動可能に連結された請
求項９記載のプロモーターを含むＤＮＡ構築物。 - 【請求項１４】 前記異型遺伝子が、殺虫遺伝子、除草
作用耐性遺伝子、抗微生物遺伝子、抗真菌遺伝子、抗ウ
イルス遺伝子、および摂食阻害遺伝子を含む群から選択
される請求項１、２または１３記載のＤＮＡ構築物。 - 【請求項１５】 請求項１、２、１３または１４のＤＮ
Ａ構築物で形質転換された植物細胞または原形質体。 - 【請求項１６】 双子葉植物である請求項１５記載の細
胞または原形質体。 - 【請求項１７】 単子葉植物である請求項１５記載の細
胞または原形質体。 - 【請求項１８】 ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ
８０ プロモーターの機能的均等物であるＤＮＡ配列。 - 【請求項１９】 化１に実質的に示されるＤＮＡ配列ま
たは化１に示される配列とストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズし、それと同様なプロモーター活性をも
つその機能的均等物、およびその機能的均等部分。 - 【請求項２０】 化１中に示されるＤＮＡ配列およびそ
れの機能的均等物。 - 【請求項２１】 ＵＡＳ１、ＵＡＳ２、ＵＡＳ３を含む
群から選択されるＤＮＡ配列およびその機能的均等部
分。 - 【請求項２２】 ブラシカ（Ｂｒａｓｓｉｃａ）ｈｓｐ
８０プロモーターの欠失またはハイブリッドプロモータ
ーであるＤＮＡ配列。 - 【請求項２３】 ゲノムが請求項１、２、１３または１
４記載のＤＮＡ構築物を含む植物。
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