CN1079779A - 新的植物启动子 - Google Patents

Abstract

分离到了一种芥属启动子(hsp 80)，它能使异源 基因在广范围的组织和器官中进行组成型表达。描 述了各种保留活性和/或显示有增强活性的缺失突 变体和杂交启动子。还描述了上游激活序列，它们能 单独或联合作用使基因进行组成型表达。这些序列 也能给异源，非组成型启动子提供组成型表达活性。

Description

本发明涉及能在植物中起作用的新的启动子，尤其是指以组成型方式控制所需基因表达的启动子。该启动子还包括能用于构建具有所需活性的杂合启动子的各种上游序列。

已经知道在各种生物体，包括酵母，果蝇属，和一些植物种类中存在热休克基因。一类热休克基因表达仅响应热应力的蛋白质，另一类热休克基因具有低基础水平的活性，其活性随着热诱导而极大地增加。

如果要从遗传上控制植物中的异源基因，则选择的启动子常是关键的因素。如果表达仅响应特定刺激的特定基因，或者使其表达定位于特定组织中是合乎需要的，则更需要其他基因进行组织型表达，即无论何时在整个植物中和在大多数组织中表达。过去，常将来自花椰菜花叶病毒（CaMV）的35S启动子用于进行异源基因的组成型表达。由于调控和其他的原因需要用不是致病源的启动子调节异源基因的表达。另外，与病毒启动子相比，利用植物启动子可以改变特定组织中活性水平，以及改变可在其中实现表达的组织范围。

本发明涉及来自花椰菜（Brassica    oleracea    cv.′Delira′）的组成型启动子，即一种可在任何时候和大多数组织和器官中表达基因的启动子。该启动子可有效地连接到任何所需基因上并且指导该基因的表达。该启动子可以与以前曾描述的hsp基因的启动子相区别，该启动子具有高基础水平的组成型表达，并且随热诱导几乎没有提高其表达。

由于该启动子是具有热休克同感因子性质的组成型启动子并且是从与来自其他品种的hsp    80族基因具有某些同源性的基因中得到的，因此将该启动子命名为“hsp    80启动子”。该hsp    80指导热休克蛋白质在正常温度下（20-25℃）以高基础水平产生并且其表达随热应力（35-40℃）仅有稍微提高。

图1表示质粒pZ0217以及pZ0601和pZ0601BS质粒的构建过程。

图2描述的是pZ0602。

表1显示整个启动子的序列（SEQ.ID.NO：1）。全部天然序列有1568个碱基对。从天然热休克蛋白质的转译起始位点（ATQ）开始以负次序对核苷酸进行编号。在该序列中已鉴定出了下列区域：

A）一个“TATA”盒是一个八个碱基对序列“TATATATA”，其定位于从-97至-90位，包含首尾两位。

B）有一个定位于-61至-1位的61bp    mRNA前导序列。

C）已鉴定出在-61位是一个“帽”位点。

D）有一个从-604至-488位的区域，该区域似乎含有该启动子的上游激活序列。该区域记作UAS1。在“瞬时”分析中已观察到该区域具有组成的活性，以前曾将它记作“基本盒”。

E）含有从-1000至-604位的区域，该区域似乎含有另一个上游激活区域。该区域记作UAS2。

F）含有一个从-488至-120位的区域，该区域似乎含有另一个上游激活序列。该区域记作UAS3。

G）在-779至-741之间和-740至-702之间存在二个指导重复区。并且有一个含有部分指导重复区域从-701延伸至-677。

H）一个热休克同感因子定位于-311至-120位并且另一个因子定位于-244至-237。

因此本发明的一个方面提供一个DNA构建体，它含有有效地连接到一个异源基因上的芥属hsp    80启动子。由于意识到在该DNA序列中进行最小改变基本上不会影响该启动子的活性，本发明也包括是芥属hsp    80启动子的“功能等同物”的DNA序列，以及含有有效地连接到异源基因上的这样的DNA序列的构建体。

如在整个说明书和权利要求书中使用的，应用下列定义：

“功能等同物”是指在严格杂交条件下与一个DNA序列互补的任何DNA序列，该DNA序列与该参照序列杂交并且有类似于芥属hsp    80启动子的启动子活性。

“严格杂交条件”是指在这些条件下在60℃和2.5x柠檬酸盐缓冲液（SSC缓冲液）中完成杂交，然后仅在37℃和还原缓冲液浓缩液中洗涤而不影响杂交的发生。

“异源基因”是一种编码除芥属hsp    80蛋白质外的任何肽或蛋白质的DNA序列。

“缺失启动子”是指任何有缺失而仍保留其活性的芥属hsp    80启动子。

“一种缺失启动子的功能等同物”是指与该缺失启动子相比，还有其他的缺失，但仍至少保留了基本等同的活性。

“可调控的启动子”是指任何其活性受正或反作用因子影响的启动子。

“组成型启动子”是指在大多数情况下能在大多数组织或器官中有活性的任何启动子。

可用hsp    80启动子（或其功能等同物）组成型地表达所需要的任何异源基因。合适的异源基因的例子包括，但不限于：杀虫毒素基因（如来自于苏云金芽孢杆菌的那些杀虫基因），除草剂抗性基因，抗微生物的基因，抗真菌基因，抗病毒基因，和抗食剂基因。

较优选的是将hsp    80一异源基因构建体插入到一种载体中，并用该载体转化一种真核宿主。优选的真核宿主是一种植物细胞或植物原生质体。优选的载体当然是依据选择的宿主而改变。对于双子叶植物，可以采用电击穿法将载体引入原生质体中或者载体是一种根癌农杆菌（A.t.）Ti质粒衍生物，该衍生物可以直接感染细胞或原生质体并且可用于A.t介导的转体方式包括所谓的“双载体”技术。（参见，如Gasser    C.S某人1989，Science    244：1293-1299）。单子叶植物的转化优选使用所谓的“弹道”技术（Gasser等人，如上文）或者也可以用原生质体方法转化。

在这两种情况下，合适的转化载体和转化原生质体都是本领域内熟知的。将已转化细胞或原生质体培养于一种合适培养基中，并再生出已转化植物。该已转化植物组成型地表达异源基因。

令人惊奇地发现可在该启动子中制造各种缺失并且发现得到的缺失启动子具有a）增加了活性;b）基本上与天然启动子具有相似活性;或者c）保留其活性。

因此本发明的另一方面是一种包括来自于芥属hsp    80启动子的缺失启动子的DNA序列。本发明的再一个方面是一种包括有效地连接到异源基因上的缺失启动子的DNA构建体。本发明的这一方面还包括缺失启动子的功能等同物和由缺失启动子的功能等同物以及异源基因组成的构建体。

各种缺失和杂交启动子可以按实施例详述方法制备。将第一组缺失启动子命名为601BS系列。这些启动子的特征是具有包括从-118至-246碱基对的缺失。已发现该系列中一个启动子601BS△2-3具有从-493至-118bp的缺失，与完整启动子相比大约保留了50%-75%活性。

第二组缺失启动子命名为602系列。这些启动子全部含有至少从-488至-134bp范围的缺失，并且可以包括在5′末端有不同长度的缺失，如在实施例3中描述。令人惊奇的是，某些缺失增强了活性。

缺失启动子603缺失了从-1125至-134的范围。该启动子仅保留了完整启动子的约10%活性。缺失启动子604的缺失范围从-1568至-1125bp和从-496至-134bp，仅保留了约25%活性。缺失启动子605缺失了-488上游的所有碱基对，并且相应的活性减少至仅保留约6-8%。

一个特别重要的活性区位于-134至-120bp之间。缺失启动子601BS（BSph）仅缺失了该小区域，而其活性降低至仅约为完整启动子的50-75%。因此本发明的优选启动子至少含有该短序列。

如上文中所提到的，位于-604至-488的116bp区域（UAS1）或其部分显示出具有提供给一系列组织组成型活性的作用。如上文中描述的UAS2和UAS3显示出给更多的组织提供活性。因此，本发明的另一方面是通过有效地连接或在诱导型或调节型启动子中插入一个或多个上游激活区域而给其他的非组成型启动子（如一种正常的诱导型或其他调节型）提供组成型活性，在某些情况下上游激活区域在大多数器官/组织中单独产生活性，而结合后得到所谓的组成型活性。本发明包括由已有效地连接一个结构基因的能够赋予组成型活性的启动子组成的DNA构建体，以及方法，例如用该构建体转化植物细胞和原生质体的方法，以及已用这些构建体转化的植物细胞和原生质体。

已认识到用比UAS1，2和3区域更小的区域也足以提供组成型活性。这点可以通过利用本领域内技术人员熟知的方法在这些区域中制造缺失而进行测试。然后测试在UAS区域中有缺失的启动子保留的组成型活性。这种分析也是普通技术人员熟知的。

通过缺失和/或突变，也可以单独用UAS1，2和3或结合使用使已表现出失活的启动子恢复活性。这也是本发明的另一个方面。这种用途的一个实例是已缺失而不再有作用的CaMV35S启动子。将UAS1，2和3因子一起或单独插入后将在某些或所有组织中恢复启动子活性。

在下面给出的非限制性实施例中对本发明作进一步的描述。

实施例1    hsp    80启动子的分离

基本上按照由Maniatis等人，1982    Molecular    Cloning，Cold    Spring    Harbor    Laboratory，P.282-283，（引入作为参考文献）描述的方法用Charon35入噬菌体和K8802细胞构建花椰菜（Delira变种）的基因组文库，由来自于果蝇hsp    83基因的PvuⅠ-StuⅠ片段筛选该文库[Hackett，R.W.等人。1983    Nud.Acids.Res.11（20）：7011-7030]。得到20个明显与果蝇基因同源的重组子，用果蝇hsp    83基因片段作为探针进行Southern印迹试验。选择5.8Kb    HindⅢ片段再克隆于pVC9载体上，将得的载体称为pZ0217。该质粒表示于图1中。

接着，将氯霉素酰基转移酶（CAT）基因（Pharmacia公司）插入到已知载体pVC19的PstⅠ位点。在PstⅠ-HindⅢ位点处插入NOS终止子[Bevan，M.eg    al.1983“Structure    and    Transcription    of    the    Nopaline    Synthase    Gene    Region    of    T-DNA”Nucl.Acids    Res.11（2）]。将得到的质粒记作为pZ030。从pZ0217中分离出BglⅡ片段以及再克隆于pZ030的BamHⅠ位点。由此得到一个启动子-CAT基因-NOS终止子的构建体。该构建体作为EcoRⅠ-HindⅢ片段转移至可以购买的pTZ18R载体中（从pharmacia公司购得），得到pZ0601载体，在图1中描述。

实施例2质粒的构建

利用由Amersham提供的寡核苷酸特异的体外诱导系统完成pZ0601中hsp    80启动子的体外诱变操作。按照制造商的说明合成二个寡聚核苷酸并在TATA盒的上游启动子内制备了二个独特的限制性位点即BamHⅠ在-134位，SphⅠ在-120位（所给定的所有核苷酸位置相对于转译起始位点而言）。该新质粒称为pZ0601BS，也显示于图1中。

pZ0602和pZ0603

步骤（A）用BamHⅠ消化pZ0601BS并用DNA聚合酶的Klenow片段填充其末端。然后用KpnⅠ消化该DNA并且在低熔点琼脂糖凝胶上分离得到的非启动子片段。

步骤（B）：用BamHⅠ和KpnⅠ消化pZ0601BS，在低熔点琼脂糖凝胶上分离hsp    80启动子。用ELUIP（Schleicher和Schnell）纯化该片段，并用DraⅠ或FnuDⅡ消化。

步骤（C）：将从步骤（B）中得到的-1568至-488bp的DraⅠ片段连接至步骤（A）的非启动子片段。将得到的质粒命名为pZ0602，并显示于图2中。

步骤（D）：将-1568至-1125    FnuDⅡ片段连接至步骤A的非启动子片段上。得到的质粒命名为pZ0603。

pZ0604质粒

步骤（A）：用BamHⅠ和SmaⅠ消化pZ0601BS，并用T4DNA聚合酶和脱氧核苷酸填平BamHⅠ位点。在低熔点琼脂糖凝胶上分离到的非启动子片段。

步骤（B）：用FnuDⅡ消化pZ0601BS。将该-1125至-496FnuDⅡ片段连接至步骤A的非启动子片段上得到pZ0604。

pZ0605质粒

步骤（A）：用BamHⅠ和SmaⅠ消化pZ0601BS，在低熔点琼脂糖凝胶上分离得到的非启动子片段。

步骤（B）DraⅠ消化pZ0601BS。将-488至-134DraⅠ片段连接至步骤（A）的非启动子自片段上构建pZ0605。

缺失突变体

从pZ0602质粒上构建一系列hsp80启动子的5′缺失突变体。用SacⅠ和SmaⅠ消化pZ0602，得到核酸外切酶Ⅲ（Stratagene）的消化底物。在用核酸外切酶Ⅲ处理不同的时间长度后，用绿豆核酸酶（Boehringer    Mannheim）使得到的DNA片段末端钝化。用低熔点琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段。切掉主要谱带，稀释并连接。在转化后，选择缺失突变体，并穿过整个接合点进行序列分析。

用BamHⅠ和SphⅠ消化并然后用相同在制备5′缺失时描述的同样方法从pZ0601BS中构建一系列hsp    80启动子的3′缺失体。

实施例3生物测定

胡萝卜细胞系的维持培养

将Redwood    City野生胡萝卜悬浮培养物（从Syanford大学获得）维持于下面的胡萝卜悬浮培养基：1x    MS盐，1mg/升烟酸，1mg/升盐酸吡哆醇B6，1mg/升维生素B1，100mg/升肌醇，0.1mg/升2.4-D，30克/升蔗糖，用KOH调最终PH为5.8。每隔7天将该培养物通过以1∶10稀释至新鲜培养基中而维持其存活。

原生质体的制备

在使用前4天以1∶10稀释RCWC悬浮培养物。以500g转速将50ml培养物（约含5ml已包裹细胞体积）离心10分钟。然后将得到的细胞悬浮于50ml下列经过过滤的胡萝卜酶溶液中：10克/升细胞溶素（Calbiochem），5克/升Rhozyme（Genecor），0.4M甘露醇，50mM CaCl₂，10mM NaOAc，pH5.8。缓慢转动细胞达2小时以便进行消化。用胡萝卜培养物培养基（CCM）洗涤原生质体两次并重新悬浮，该CCM与上述描述的胡萝卜悬浮培养基相同但加入0.4M甘露醇。以1∶10稀释度将原生质体在血球计数器上计数而决定其浓度。

电击穿

所有电击穿操作使用带有环状电极的PG200ProgenitorⅡ（Hoefer）进行。将样品在24-井眼无菌微滴平板盘中以250伏电击穿100毫秒。

将每一个含CAT（Pharmacia）构建体的质粒设置3或4个重复进行多次测试试验。每次试验用30至50μg的pZ0601BS质粒作为对照。用与pZ0601BS相等摩尔量的DNA测试所有其他质粒。

将约10⁶个原生质体等分至1.5ml试管中。以500g转速离心2分钟，除去大部分上清液。将每一种DNA加入75μⅠ2M KCL。通过加入CCM（PH调至8.0）将其体积调至1ml，将该混合物进行电击穿，立即稀释至培养皿中的5mlCCM（PH＝5.8）中。将经稀释的样品在黑暗柜子中贮存1-2天，然后集合后进行CAT分析。

缺失区

启动子    相对活性

601BS    无    100%

602    △3-2    -1568至-1000和-488至-134    125-175%

602    △3-3    -1568至-948和-488至-134    75-125%

602    △4-9    -1548至-830和-488至-134    100-150%

602    △4-6    -1548至-628和-488至-134    75-100%

601BS    △2-3    -493至-118    50-75%

603    -1125至-134    约    10%

604    -1568至-1125和-496至-134    约    25%

605    -1568至-488    6-8%

601BS(BSph)    -134至-120    50-75%

实施例4在整个植株中进行组成型表达

用下述方法转化烟草。

植物组织

从无菌生长的烟草植株上获得烟草叶分离块。通过除去生存植株的顶端节并且在有弹性土的坛子中再培养而以约一个月的间隔旺盛地繁殖无菌烟草植株，其中坛子中含有75毫升不含琼脂固化的激素的培养基（0/0培养基），包括Murashige-Skoog盐，1ml/l的浓度为100mg/l的肌醇，5ml/l混合维生素（vitamix）（能供给0.5mg/l盐酸吡哆醇B6，0.5mg/l烟酸1.0mg/l维生素B1）以及3%蔗糖。将烟草植株在保持于培养基中连续强光照射。用绿纸带密封坛子，也可以敞开不密封允许气体交换。

根癌农杆菌载体

利用双载体系统转化根癌农杆菌，然后用该细菌转化烟草细胞。

一般操作步骤

将农杆菌载体贮存于-70℃。在转化前约18小时，用100-500微升农杆菌培养体接种25毫升含有合适的抗菌素的无菌液体LB3培养基（见下文）。以250rpm转速在振荡器28℃让该培养体生长过夜。

LB3培养基（1升）

胰旦白胨    10克

酵母提取物    5克

氯化钠    4克

氯化钾    1克

MgSO₄.7H₂O 3克

加入水至1升，每个烧瓶分装25ml。

抗生素是25μg/ml链霉素和50μg/ml卡那霉素。当细胞处于对数生长期时一般可进行转化;在600nm处的O.D.值最好达到0.50-1.0。用50ml不含激素的O/O液体培养基将培养物稀释至浓度为108个细胞/毫升。

将烟草叶分离块在上述制备的10⁸个细胞的根癌农杆菌稀释液中浸泡。移出外植体，在无菌Whatman滤纸上印干。然后将其置于不含抗菌素的再生培养基中，放置2天。在第三天，将经处理的分离块转移至含有合适抗菌素的再生培养基中。将分离块在这些平板上保留3至4星期或直至假定的已转化的芽足够大，然后移至生根培养基上。生根培养基是一半浓度O/O培养基，并含有250mg/升羧苄青霉素和根据构建体的不同而含有100mg/升卡那霉素或50mg/升潮霉素。在约二星期后，嫩芽长出根并变绿。然后转移至坛子中，每个植株都给定其鉴别号码。然后在各种组织上进行分析，证明组成型启动子的表达。

转化用载体

pZ0639

构建一个相同于pZ0601的质粒，但用hsp80-CAT基因-NOS终止子代替，该质粒含有hsp80-GUS-NOS终止子盒。该质粒称为pZ0612。

用EcoRⅠ和HindⅢ切割pBin19质粒（Clonetech）。用ScaⅠ，EcoRⅠ和HindⅢ切割pZ0612质粒。在低熔点琼脂糖上分离消化片段。分离到一个12Kb-pBin19载体片段和一个3.6Kb    hsp80-GUS-NOS片段，然后连接在一起。得到的质粒命名为pZ0639，可用PstⅠ消化而鉴别该片段。

pZ0640

在完成上面描述的步骤后，构建pZ0640它具有一个截短的hsp80片段（0.624Kb，而启动子的全长为1.56）而不同于pZ0639。

pZ0641

在完成上面描述的步骤后，构建pZ0641。pZ0641含有一个0.252Kb    hsp80启动子而不是全长的启动子。

pZ0642

在完成上面描述的步骤后，构建pZ0642。pZ0642含有CaMV35S启动子-GUS-NOS片段而不是hsp80或其衍生的启动子。

实施例5    启动子活性

从实施例4步骤中获得的植株用于测试异源基因GUS的表达。获取组织样品并用于分析GUS的存在。在所有组织样品中检测GUS活性。对照组织（从经过相同培养和再生步骤的非转化植物上获得）也用于测试GUS活性;没有测到活性。圆括号内的数字是植物样品的总数目。结果给出的阳性数（观察到蓝颜色）。“NT”是未测试的;“NA”是无效的;“M”是突变体。

质粒    构建体(加GUS;NOS终止子)

pZ0639    全长hsp80

pZ0640    -1000至-488+-134至-23的hsp80(包括UAS1+UAS2

+TATA区域)

pZ0641    -628至-488+-134到-23的hsp80(包括UAS1+TATA

区域)

pZ0642    35S启动子

组织    pZ0639(7)    pZ0640(6)    pZ0641(5)    pZ0642(7)

叶肉    1/7    1/5;1NT    1/5    5/7

叶脉    5/7    1/6    2/5    3/7

叶毛    4/7    1/6    2/5    1/7

侧生分生组织    2/7    0/5;1NT    1/5    4/7

侧枝    1/7    0/6    0/5    1/7

萼片脉    3/7    3/6    2/4;1NA    4/6;1NA

萼片毛    4/7    1/6    0/4    0/6;1NA

心皮    2/7    4/6    0/4;1NA    4/6;1NA

花管/瓣脉    1/7    1/6    1/4;1NA    3/6,1NT

花管/瓣毛    4/7    2/6    0/4    3/6;1NT

未成熟花药    4/7    5/6    2/3;1NA;1M    3/5;1NA;

1NT

花粉    5/5;2NA    5/6    3/3;1NA;1M    0/6;1NA

根    6/7;1NT    1/4;2NT    0/4;1NT    3/6;1NT

茎    2/2;6NT    0/2;4NT    0/1;4NT    1/1;6NT

该资料表示在某种程度上hsp80启动子在所有测试组织中都有活性，尽管在大多数情况下染色强度低于35S启动子。一般来说，叶肉不染色，除非是真空浸入，但尽管它们的外形好象藻类，仍有大量细胞能染色。

实施例6    杂交启动子

将hsp80启动子的各种上游区域连接至非活性的异源最小启动子上以测定该上游区域是否损失活性。将下面列出的片段克隆至被截短的CaMV35S启动子的上游，该启动子从相当于CaMV转译起始位点的-46位延伸至+131位（TATAAA盒是从-31位至-25位），在本文中将该启动子称作为“-46    35S启动子”。[NB这里使用的用于鉴别被截短的CaMV35S的编号是指CaMV35S本身并且不同于别处用于hsp    80和其片段的编号]。pZ0625质粒由-46    35S启动子，来自于玉米ADHIS基因的内含子6，β-葡糖苷酸酶（GUS）编码区域，以及pT7T3    18U（购自于Pharmacia）中的NOS终止子组成。将下面的芥属hsp80片段连接至-46    35S的上游。

启动子片段：

片段（根据表1编号）    质粒

-628至-488加上-134至-120    pZ0670

-1000至-488加上-134至-120    pZ0681

-1000至-604    pZ0682

-488至-120    pZ0683

-1548至-488加上-134至-120    pZ0689

上述质粒中包含的杂交启动子是分别指杂交启动子670，681，682，683和689。

也对pZ0612进行测试（除用GUS基因代替CAT基因外pZ0612与pZ0601相同）并且该质粒是由全部长度的控制GUS的hsp80的启动子和PTZ18R中的NOS终止子（但无内含子）组成。

从前面描述的胡萝卜，黑墨西哥甜（BMS）玉米，和烟草中制备原生质体。用所需质粒电击穿原生质体，并使其恢复一天，然后浸提，将浸提液用于检测GUS活性。用分光光度计检测GUS活性。结果以平均值表示，使全部长度35S启动子构建体pZ0663[35S（从-366至+131），内含子6，GUS，NOS终止子]。全部长度的35S启动子描述于Franck等人，Cell.，Vol.21，285-294（1980）。

短暂的GUS分析

质粒    烟草    胡萝卜    BMS

pZ0663    1.0    1.0    1.0

pZ0625    0.03    0.01    0.03

pZ0670    0.16    0.28    0.02

pZ0681    0.13

pZ0682    0.24    0.23    0.08

pZ0683    0.17

pZ0689    0.16    0.32    0.03

pZ0612    0.65

短暂的GUS分析

质粒    胡萝卜

pZ0602    △4-6    0.75-1.0

pZ0602    △3-2    1.25-1.75

pZ0605    0.06-0.08

pZ0601    BS△2-3    0.05-0.75

pZ0601    BS    1.0

如在上述表中看到的，如将所有上游区域融合至35S-46启动子上则基本上得到相同活性，并且这些区域很少显示有加附作用。

序列表

(1)一般资料:

(I)申请人:Sandoz有限公司

(II)发明主题:新的植物启动子

(III)序列编号:1

(2)SEQ  ID  NO:1的资料:

(I)序列特征:

(A）长度：2042碱基对

（B）类型：核酸

（C）股数：双股

（D）解剖结构：线性

（II）分子类型：DNA（基因组）

（III）假设：无

（IV）反意义链：无

（V）序列的描述：SEQ  ID  NO:1

Claims (23)

1、一种DNA构建体，包括一个芥属hsP80启动子或其功能等同物，以及与之有效连接的一个异源基因。

2、一种DNA构建体，包括一个芥属hsp80启动子的缺失或杂交启动子，或其功能等同物，并且该启动子有效地连接到一个异源基因上。

3、根据权利要求2所述的DNA构建体，其中的缺失启动子选自于具有下列命名的一组缺失启动子：602，602△3-3，602△4-9，602△4-6或所说缺失启动子的功能等同物。

4、根据权利要求2所述的DNA构建体，其中的杂交启动子选自于具有下列命名一组杂交启动子：670，681，682，683，689以及所说杂交启动子的功能等同物。

5、赋予一种诱导型，其他调节型，或失活启动子具有组成型活性的方法，包括：

a）从芥属hsp  80启动子中分离一个或多个上游激活区域;和

b）将所说的一个或多个激活区域有效地连接或插入到该诱导型，其他调节型或失活的启动子中以获得组成型活性。

6、根据权利要求5所说的方法，其中的上游激活区域包括芥属hsp80启动子的-604至-488区域或其部分。

7、根据权利要求5的方法，其中的上游激活序列包括芥属hsp80启动子的-1000至-604区域或其部分。

8、根据权利要求5的方法，其中的上游激活序列包括芥属hsp80启动子的-488至-120区域或其部分。

9、一种组成型启动子，包括一种除芥属hsp80启动子外的诱导型，其他调节型或失活启动子以及有效地连接到或插入到该诱导型，其他调节型或失活启动子中的来自于芥属hsp80启动子的一个或多个上游激活区域。

10、根据权利要求9的启动子，其中的上游激活区域包括芥属hsp80启动子的-604至-488区域或其部分。

11、根据权利要求9所说的启动子，其中的上游激活区域包括芥属hsp80启动子的-1000至-604区域或其部分。

12、根据权利林求9的启动子，其中的上游激活区域包括芥属hsp80启动子的-488至-120区域或其部分。

13、一种DNA构建体，包括有效地连接到结构基因上的权利要求9所说的启动子。

14、根据权利要求1，2或13所说的DNA构建体，其中所说的异源基因选自于下列组成的基因组：杀虫剂基因，除草剂抗性基因，抗一微生物剂基因，抗真菌基因，抗病毒基因，抗食剂基因。

15、用权利要求1，2，13或14的DNA构建体转化的植物细胞或原生质体。

16、根据权利要求15所说的细胞或原生质体，它是一种双子叶植物。

17、根据权利要求15所说的细胞或原生质体，它是一种单子叶植物。

18、一种DNA序列，它是一种芥属hsp80启动子的功能等同物。

19、一种基本上如表1所示的DNA序列或在严格条件下能与表1所示序列进行杂交并与该序列具有相同启动子活性的功能等同物，和上述序列的功能等同物。

20、如表1所示的DNA和其功能等同物。

21、一种选自于由下列组成的UAS1，UAS2，UAS3及其功能等同片段的DNA序列。

22、一种DNA序列，它是芥属hsp80启动子的缺失或杂交启动子。

23、一种植物基因组，它含有权利要求1，2，13或14所述的DNA构建体。

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