JPH05213990A - トリペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】本発明化合物は、システインプロテアーゼの一
種であるカルシウム依存性中性プロテアーゼ（ＣＡＮ
Ｐ）を特異的に阻害し、難病である筋ジストロフィー症
や空胞型ジスタールミオパチーなどの筋崩壊疾患の治療
薬となり得るものを提供する。 【構成】 （式中、ｎは１１〜１５の整数を示す。）で表されるト
リペプチド誘導体。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、医薬として有用なトリ
ペプチド誘導体に関し、更に詳しくはシステインプロテ
アーゼ、中でもカルシウム依存性中性プロテアーゼ（Ｃ
ＡＮＰ）の活性を特異的に阻害するトリペプチド誘導体
に関する。

【０００２】

【従来の技術】システインプロテアーゼの一種であるカ
ルシウム依存性中性プロテアーゼ（ＣＡＮＰ）およびカ
テプシンＢ、Ｌなどは、難病である筋ジストロフィー症
や空胞型ジスタールミオパチーなどの筋崩壊疾患の発症
に深く係わる物質であると考えられており、従って、こ
れらのシステインプロテアーゼの活性を阻害する物質
は、上記疾患の治療薬となり得るものと期待されてい
る。システインプロテアーゼの活性を阻害する化合物と
しては、従来ロイペプチン〔ｓｈｉｍｉｚｕ．Ｂら、
Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５巻、５１５頁（１９
７２）．〕、Ｅ−６４ｃなどのトランスエポキシコハク
酸誘導体〔Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．ｃｈｅｍ．，４２
巻、５２３頁（１９７８）．〕やトリペプチド誘導体１
６５６Ｂ（特開平１−２７９８９９号公報）が知られて
いる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、医薬
として有用な優れたシステインプロテアーゼ阻害作用を
有する化合物を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
に鑑み、トリペプチド化合物について鋭意研究した結
果、システインプロテアーゼの活性を強力に阻害するト
リペプチド誘導体を見いだし本発明を完成した。以下、
本発明を説明する。すなわち、本発明は、式（Ｉ）

【０００５】

【化２】

【０００６】（式中、ｎは１１〜１５の整数を示す。）
で表されるトリペプチド誘導体である。式（Ｉ）で示さ
れる本発明化合物は、例えば次のような方法で製造する
ことができる。

【０００７】

【化３】

【０００８】（反応式中、ｎは前記と同意義であり、Ｙ
はペプチド合成化学の分野で通常用いられるアミノ酸の
保護基の構成成分であり、例えば、第三級ブトキシ基あ
るいはベンジルオキシ基等を示す。）

【０００９】〔製造例〕 工程 式（ＩＩ）で表される化合物と式（ＩＩＩ）で表される
化合物をクロロホルム、ジクロルメタン、酢酸エチル、
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、Ｎ，Ｎ’
−ジシクロヘキシルカルボジイミド法、混合酸無水物
法、活性エステル法などペプチド合成化学の分野で通常
用いられる方法および条件により縮合し式（ＩＶ）で表
される化合物を得ることができる。

【００１０】工程 式（ＩＶ）で表される化合物を例えばジメチルスルホキ
シド中、トリエチルアミンの存在下、三酸化硫黄ピリジ
ン錯体を用いる方法および条件で酸化して式（Ｖ）で表
される化合物を得ることができる。

【００１１】工程 式（Ｖ）で表される化合物と式（ＶＩ）で表される化合
物をベンゼン、ジクロルメタンおよびＮ，Ｎ−ジメチル
ホルムアミドなどの有機溶媒中、反応させることにより
式（ＶＩＩ）で表される化合物を得ることができる。

【００１２】工程 式（ＶＩＩ）で表される化合物をトリフルオロ酢酸、塩
酸−ジオキサン、塩酸−酢酸エチル、臭化水素酸−酢酸
などを用いた酸加水分解法あるいは、メタノール、エタ
ノール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒中、
パラジウム炭素、パラジウム黒などの触媒を用いる接触
還元法またはカタリティックトランスファーハイドロゲ
ネーション（ＣＴＨ）法などペプチド合成化学の分野で
通常用いられる方法および条件によりアミノ基の保護基
を除去し式（ＶＩＩＩ）で表される化合物およびそのト
リフルオロ酢酸、塩酸あるいは臭化水素酸塩を得ること
ができる。これら式（Ｖ）の化合物の塩はトリエチルア
ミンなどの三級アミンあるいは炭酸水素ナトリウムなど
で処理することにより遊離の式（ＶＩＩＩ）で表される
化合物へと導くことができる。

【００１３】工程 式（ＶＩＩＩ）で表される化合物と式（ＩＸ）で表され
る化合物を工程に記したと同様の方法および条件で縮
合させを式（Ｘ）で表される化合物を得ることができ
る。

【００１４】工程 式（Ｘ）で表される化合物を工程に記したと同様の方
法および条件でアミノ基の保護基を除去し、式（ＸＩ）
で表される化合物を得ることができる。

【００１５】工程 式（ＸＩ）で表される化合物と式（ＸＩＩ）で表される
化合物を工程に記したと同様の方法および条件で縮合
させ式（ＸＩＩＩ）で表される化合物を得ることができ
る。

【００１６】工程 式（ＸＩＩＩ）で表される化合物を好ましくは約−９０
〜２０℃において、クロロホルム、ジクロルメタン、メ
タノール、エタノールまたは、これらの混合溶媒中、オ
ゾンと反応させ、ついでジメチルスルフィドのような緩
和な還元剤を加え中間体生成物であるオゾニドを分解す
る事により式（Ｉ）で表される化合物を得ることができ
る。

【００１７】

【発明の効果】以上の様にして得られた本発明化合物
は、ＣＡＮＰ、カテプシンＢなどのシステインプロテア
ーゼ、中でもＣＡＮＰの活性を特異的に強力に阻害し
た。

【００１８】

【実施例】以下、実施例および試験例により本発明を具
体的に説明する。なお、使用する略号は次の意味を表
す。 Ｂｏｃ；第三級ブトキシカルボニル基、ｉｓｏ−Ｂｕ；
イソブチル基、Ｅｔ；エチル基、Ａｓｎ；アスパラギン
残基、Ｇｌｎ；グルタミン残基、Ｌｅｕ；ロイシン残
基、Ｎｐ；ｐ−ニトロフェニル基

【００１９】参考例１ Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ｅｕ−ｏｌの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−ＯＮｐ１９．４ｇ（５２．８ミリ
モル）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド５０ｍｌに溶か
し、氷冷攪拌下、Ｈ−Ｌ−Ｌｅｕ−ｏｌ ６．１９ｇ
（５２．８ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
５ｍｌ溶液を滴下した。氷冷下１時間、その後室温で一
夜撹拌した後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣に酢
酸エチルを加え室温で放置し析出した結晶を濾取し、酢
酸エチルで再結晶し無色針状晶の標題化合物を１４．９
ｇ得た。

【表１】

【００２０】参考例２ Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−ｏｌ １９．７ｇ
（５７．０ミリモル）およびトリエチルアミン４３．８
ｍｌ（３１４ミリモル）をジメチルスルホキシド６５ｍ
ｌに溶解し、氷冷攪拌下、三酸化硫黄ピリジン錯体５
０．０ｇ（３１４ミリモル）を加えた。氷冷下１０分
間、その後室温で１０分間激しく撹拌した後、反応液を
氷水５００ｍｌに注ぎ、酢酸エチルで５回抽出した。抽
出液を１０％クエン酸水溶液、水、飽和重曹水、水およ
び飽和食塩水の順でで 洗浄した。有機層を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧濃縮し得ら
れた結晶を酢酸エチル・ヘキサンより再結晶し無色針状
晶の標題化合物を１８．７ｇ得た。

【表２】

【００２１】参考例３ Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂｕ）Ｃ
Ｈ＝ＣＨＣＯ_２Ｅｔの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈ １７．７ｇ（５
１．５ミリモル）および（トリフェニルホスホラニリデ
ン）酢酸エチルエステル１９．７ｇ（５６．５ミリモ
ル）のジクロルメタン２００ｍｌ溶液を室温で一夜撹拌
した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（溶離液；ヘキサン：酢酸エチル＝１：４）に
付し、ついでメタノール・水より再結晶し、無色針状晶
の標題化合物を１２．５ｇ得た。

【表３】

【００２２】参考例４ Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓ
ｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ_２Ｅｔの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂｕ）Ｃ
Ｈ＝ＣＨＣＯ_２Ｅｔ１２．５ｇ（３０．２ミリモル）を
４規定塩酸−ジオキサン溶液５０ｍｌに溶解し室温で１
時間撹拌した後、溶媒を減圧留去した。得られた残渣を
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２５ｍｌに溶解し、氷冷
攪拌下、トリエチルアミン４．２３ｍｌ（３０．３ミリ
モル）および Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−ＯＮｐ １０．７
ｇ（３０．３ミリモル）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド１０ｍｌ溶液を加えた。氷冷下１時間、その後室温で
一夜撹拌した後、反応液を減圧濃縮し残渣をクロロホル
ムに溶かし１０％クエン酸水溶液、水、飽和重曹水、水
および飽和食塩水の順に洗浄した。有機層を無水硫酸マ
グネシウムで乾燥し、乾燥剤を濾別後、減圧濃縮し得ら
れた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離
液；クロロホルム：エタノール＝９：１）に付し、つい
でメタノール・水よリ再結晶し無色粉末の標題化合物を
１１．８ｇ得た。

【表４】

【００２３】実施例１ （±）−ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１１ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＣＯ
−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの製造 （１） （±）−ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１１ＣＨ（ＯＨ）Ｃ
Ｈ_２ＣＯ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉ
ｓｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＥｔの製造 Ｂｏｃ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓ
ｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＥｔ １．００ｇ（１．０
９ミリモル）を４規定の塩酸−ジオキサン溶液１０ｍｌ
に溶解し室温で１時間撹拌した後、溶媒を減圧留去し
た。得られた残渣をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２０
ｍｌに溶解し、氷冷撹拌下、トリエチルアミン０．２６
ｍｌ（１．９０ミリモル）および（±）−３−ヒドロキ
シペンタデカン酸 Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエス
テル６７５ｍｇ（１．９０ミリモル）を加えた。氷冷下
１時間、その後室温で一夜攪拌した後、反応液を減圧濃
縮し得られた粉末を酢酸エチル、１０％クエン酸水溶液
および水で洗浄後、減圧乾燥して無色粉末の標題化合物
を６４６ｍｇ得た。

【表５】

【００２４】（２） （±）−ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１１Ｃ
Ｈ（ＯＨ）ＣＨ_２ＣＯ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−
Ｌｅｕ−Ｈの製造 （±）−ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１１ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＣＯ
−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂ
ｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ_２Ｅｔ６０１ｍｇ（０．９００ミリ
モル）のクロロホルム：メタノール（１：１）８０ｍｌ
溶液を約−５０℃に冷却し、オゾンを２０分間導通した
後、同温度で酸素を１０分間導通し過剰のオゾンを除去
した。ついで同温度でジメチルスルフィド０．６６ｍｌ
（９．００ミリモル）を加えて２時間撹拌しながら室温
に昇温した後、溶媒減圧留去して得られた粉末酢酸エチ
ルで洗浄し減圧乾燥して、無色粉末の標題化合物を５３
８ｍｇ得た。

【表６】

【００２５】実施例２ （±）−ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１２ＣＨ（ＯＨ）_２ＣＨ Ｃ
Ｏ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｈの製造 実施例１と同様にして、（±）−ＣＨ_３（ＣＨ_２）_１２
ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２ＣＯ−Ｌ−Ａｓｎ−Ｌ−Ｇｌｎ−Ｌ
−ＮＨＣＨ（ｉｓｏ−Ｂｕ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ_２Ｅｔ６１
４ｍｇ（０．９００ミリモル） のクロロホルム：メタ
ノール（１：１）１００ｍｌ溶液、オゾン（２０分間）
およびジメチルスルフィド ０．６６ｍｌ（９．００ミ
リモル）より無色粉末の標題化合物を５１３ｍｇ得た。

【表７】

【００２６】試験例 下記の方法により、ＣＡＮＰ、パパインおよびカテプシ
ンＢに対する阻害活性を測定し、その結果を表１に示し
た。 〔ＣＡＮＰ阻害活性測定法〕２５ｍＭ ２−メルカプト
エタノール、５ｍＭ塩化カルシウム、０．１Ｍグリセロ
リン酸ナトリウム−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）、０．２
４％アルカリ変性カゼイン、１％ジメチルスルホキシド
および種々濃度の被験薬を含む反応液０．４５ｍｌを３
０℃で５分間プレインキュベートした後、５μｇのμＣ
ＡＮＰ（５０μｌ）（カルパインｌ、ナカライテスク
製）を加えて反応を開始し、正確に３０℃で２０分間イ
ンキュベートした後、１０％トリクロロ酢酸０．５ｍｌ
を加えて反応を停止させた。室温で６０分間放置した後
３０００×ｇで５分間遠心分離し、上清の２８０ｎｍに
おける吸光度を測定した。１０％トリクロロ酢酸を、μ
ＣＡＮＰを加える前に添加して同様に測定したブランク
値を差し引き、残存活性を求めた。被験薬を加えないで
同様に測定した値を用いて算出した阻害率より５０％阻
害に必要な被験薬の濃度を算出しＩＣ_５０値として計算
した。

【００２７】〔パパイン阻害活性測定法〕２．５ｍＭ２
−メルカプトエタノール、１ｍＭエチレンジアミン四酢
酸二ナトリウム、０．１Ｍリン酸ナトリウム−カリウム
緩衝液（ｐＨ６．８）、０．１％ブリッジ−３５（ナカ
ライテスク製）、１％ジメチルスルホキシドおよび種々
濃度の被験薬を含む反応液０．９５ｍｌに４００ｎＭの
パパイン溶液（シグマ社製）２５μｌを加え、４０℃で
３分間インキュベートした後、２００μＭベンジルオキ
シカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニン
４−メチルクマリール−７−アミド（ペプチド研究所
製）を２５μｌ加え反応を開始し、４０℃で１０分間イ
ンキュベートした後、１００ｍＭクロロ酢酸ナトリウム
を含む１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）
１ｍｌを加えて反応を停止させた。遊離した４−メチル
−７−アミノクマリンの蛍光を島津蛍光光度計 ＲＦ−
５０００を用いて励起波長３８０ｎｍ、蛍光波長４４０
ｎｍで測定した。被験薬を加えないで同様に測定した値
を用いて算出した阻害率より５０％阻害に必要な被験薬
の濃度を算出しｌＣ_５０値として示した。

【００２８】〔カテプシンＢ阻害活性測定法〕２．５ｍ
Ｍ２−メルカプトエタノール、１ｍＭエチレンジアミン
四酢酸二ナトリウム、０．１Ｍリン酸ナトリウム−カリ
ウム緩衝液（ｐＨ６．０）、０．１％ブリッジ−３５
（ナカライテスク製）、１％ジメチルスルホキシドおよ
び種々濃度の被験薬を含む反応液０．９５ｍｌに２００
ｎＭのカテプシンＢ溶液（シグマ社製）２５μｌを加
え、４０℃で３分間インキュベートした後、２００μＭ
ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ
−アルギニン ４−メチルクマリール−７−アミド（ペ
プチド研究所製）を２５μｌ加え反応を開始し、４０℃
で１０分間インキュベートした後、１００ｍＭクロロ酢
酸ナトリウムを含む１００ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ４．３）１ｍｌを加えて反応を停止させた。遊離
した４−メチル−７−アミノクマリンの蛍光を島津蛍光
光度計ＲＦ−５０００を用いて励起波長３８０ｎｍ、蛍
光波長４４０ｎｍで測定した。被験薬を加えないで同様
に測定した値を用いて算出した阻害率より５０％阻害に
必要な被験薬の濃度を算出しｌＣ_５０値として示した。

【００２９】

【表８】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 【化１】 （式中、ｎは１１〜１５の整数を示す。）で表されるト
   リペプチド誘導体。