JPH0521120B2 - - Google Patents
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- JPH0521120B2 JPH0521120B2 JP59504219A JP50421984A JPH0521120B2 JP H0521120 B2 JPH0521120 B2 JP H0521120B2 JP 59504219 A JP59504219 A JP 59504219A JP 50421984 A JP50421984 A JP 50421984A JP H0521120 B2 JPH0521120 B2 JP H0521120B2
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
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Description
発明の分野
本発明は生化学の分野に、さらに詳細にはヒト
白血球インターフエロンの精製方法に関する。
白血球インターフエロンの精製方法に関する。
従来の技術
チオシアン酸カリウムの溶液によるタンパク質
の沈澱、該タンパク質沈殿の分離、および酸性媒
体中エタノールを用いた多工程抽出による所望生
成物の回収を含むヒト白血球インターフエロンの
精製方法〔カンテル・ケー・（Cantell K.）、ヒル
ヴオネン・エス．（Hirvonen S.）、インターフエ
ロン・システム（Interferon System）、ア・カ
レント・レヴユー・トウ1978（Ａ Current
Review to 1978）、編集エス．バロン（S.
Baron）、エフ．デイアンザニ（F.Dianzani）、
1977年、No.35、p.138参照〕が当業者に知られて
いる。
の沈澱、該タンパク質沈殿の分離、および酸性媒
体中エタノールを用いた多工程抽出による所望生
成物の回収を含むヒト白血球インターフエロンの
精製方法〔カンテル・ケー・（Cantell K.）、ヒル
ヴオネン・エス．（Hirvonen S.）、インターフエ
ロン・システム（Interferon System）、ア・カ
レント・レヴユー・トウ1978（Ａ Current
Review to 1978）、編集エス．バロン（S.
Baron）、エフ．デイアンザニ（F.Dianzani）、
1977年、No.35、p.138参照〕が当業者に知られて
いる。
この方法は106IU／mgタンパク質までの比活性
を有する所望の生成物を得ることを可能としてい
る。
を有する所望の生成物を得ることを可能としてい
る。
しかしながら、上記比活性を有する所望生成物
は正確に0.01の媒体PHの場合にのみ得ることがで
きるので、この方法の商業的実施はむしろ疑わし
くなつている。
は正確に0.01の媒体PHの場合にのみ得ることがで
きるので、この方法の商業的実施はむしろ疑わし
くなつている。
さらに、この方法は、酸性媒体中エタノールを
用いた７段階の抽出を含んでいるので労働力を要
するものである。
用いた７段階の抽出を含んでいるので労働力を要
するものである。
硫酸アンモニウムを用いた生タンパク質の沈
澱、該タンパク質沈殿の分離、該分離した沈殿の
溶解および所望生成物のゲル濾過を含むヒト白血
球インターフエロンの精製方法〔アンフインセ
ン・シー．ジー．（Anfinsen G.G.）、プロク．ナ
ト．アカド．サイ．（Proc.Nat.Acad.Sci.）、
「ザ・プロセス・フオー・メイキング・インター
フエロン（The Process for Making
Interferon）」、1974年、71、3139参照〕も当業者
に知られている。
澱、該タンパク質沈殿の分離、該分離した沈殿の
溶解および所望生成物のゲル濾過を含むヒト白血
球インターフエロンの精製方法〔アンフインセ
ン・シー．ジー．（Anfinsen G.G.）、プロク．ナ
ト．アカド．サイ．（Proc.Nat.Acad.Sci.）、
「ザ・プロセス・フオー・メイキング・インター
フエロン（The Process for Making
Interferon）」、1974年、71、3139参照〕も当業者
に知られている。
しかしながら、この方法は、ゲル濾過の間のイ
ンターフエロンと重いタンパク質との凝集のため
に高収率および高純度等級で所望生成物を得るこ
とを可能とするものではない。
ンターフエロンと重いタンパク質との凝集のため
に高収率および高純度等級で所望生成物を得るこ
とを可能とするものではない。
発明の開示
本発明は、ヒト白血球インターフエロンの精製
方法において、より高い収率およびより高い純度
の所望生成物を保証するように適当に選ばれたゲ
ル濾過条件を提供しようとするものである。
方法において、より高い収率およびより高い純度
の所望生成物を保証するように適当に選ばれたゲ
ル濾過条件を提供しようとするものである。
この目的は、硫酸アンモニウムを用いた生タン
パク質の沈殿、該タンパク質沈殿の分離、該分離
された沈殿の溶解、および所望生成物のゲル濾過
を含むヒト白血球インターフエロンの精製方法に
おいて、本発明に従つて前記沈殿を2.5〜9.0の範
囲のPHを有し凝集分解剤（desaggregation
agent）を含有する緩衝液中に溶解すること、お
よびゲル濾過前に同一の緩衝液をカラム容積の３
〜５％の量でカラム内に導入することによつて達
成される。
パク質の沈殿、該タンパク質沈殿の分離、該分離
された沈殿の溶解、および所望生成物のゲル濾過
を含むヒト白血球インターフエロンの精製方法に
おいて、本発明に従つて前記沈殿を2.5〜9.0の範
囲のPHを有し凝集分解剤（desaggregation
agent）を含有する緩衝液中に溶解すること、お
よびゲル濾過前に同一の緩衝液をカラム容積の３
〜５％の量でカラム内に導入することによつて達
成される。
凝集分解剤の存在において沈殿の溶解段階を実
施することにより、タンパク質複合体を破壊する
ことが可能となり、この結果よりよい純度かつよ
り高収率の所望生成物が得られる。
施することにより、タンパク質複合体を破壊する
ことが可能となり、この結果よりよい純度かつよ
り高収率の所望生成物が得られる。
9.0より高いPHおよび2.5より低いPHの媒体中で
は、インターフエロンは不安定である。
は、インターフエロンは不安定である。
タンパク質の溶解に用いる緩衝液をカラムの３
容積％より少ない量でゲル濾過の前にカラムに導
入すると、ゲル濾過の間タンパク質複合体の部分
的破壊が起こり、この結果精製の度合が低下し所
望生成物の損失が生ずる。
容積％より少ない量でゲル濾過の前にカラムに導
入すると、ゲル濾過の間タンパク質複合体の部分
的破壊が起こり、この結果精製の度合が低下し所
望生成物の損失が生ずる。
カラムに導入される緩衝液の量がカラムの５容
量％より多い場合には、凝集分解剤が所望生成物
中に浸透する。
量％より多い場合には、凝集分解剤が所望生成物
中に浸透する。
凝集分解剤として緩衝液中2.0〜8.0Mの濃度の
尿素を用いることが勧められる。
尿素を用いることが勧められる。
2.0Mより低い緩衝液中尿素の含有量において
は、タンパク質複合体の完全な破壊が起こり、所
望生成物の精製の度合を低下させおよび該生成物
の収率を低減させる。
は、タンパク質複合体の完全な破壊が起こり、所
望生成物の精製の度合を低下させおよび該生成物
の収率を低減させる。
約8.0の緩衝液中尿素の含有量においては、尿
素の沈殿が形成される。
素の沈殿が形成される。
本発明の別の態様において、凝集分解剤として
緩衝液中1.0〜6.0Mの濃度の塩化グアニジンを用
いることができる。
緩衝液中1.0〜6.0Mの濃度の塩化グアニジンを用
いることができる。
1.0Mより少ない緩衝液中塩化グアニジンの減
少量においては、タンパク質複合体の完全な分解
が起こらず、所望生成物の精製度合および収率を
低下させる。
少量においては、タンパク質複合体の完全な分解
が起こらず、所望生成物の精製度合および収率を
低下させる。
約6.0Mの緩衝液中塩化グアニジンの増加量に
おいては、塩化グアニジンの沈殿が生ずる。
おいては、塩化グアニジンの沈殿が生ずる。
発明を実施するための最良の態様
本発明に係る方法は以下のように実施する。
生インターフエロンに飽和の70％以上の濃度ま
で硫酸アンモニウムを添加して白血球インターフ
エロンおよび他のタンパク質を沈殿させる。遠心
分離によつてこの沈殿を分離する。回収したタン
パク質残渣を、2.5〜9.0のPHを有し凝集分解剤を
含有する0.1M緩衝溶液中に溶解する。
で硫酸アンモニウムを添加して白血球インターフ
エロンおよび他のタンパク質を沈殿させる。遠心
分離によつてこの沈殿を分離する。回収したタン
パク質残渣を、2.5〜9.0のPHを有し凝集分解剤を
含有する0.1M緩衝溶液中に溶解する。
ゲル濾過を実施する前に、ゲルを有するカラム
に、凝集分解剤を含有する前記に同じ緩衝液をカ
ラムの３〜５容量％の量で導入する。
に、凝集分解剤を含有する前記に同じ緩衝液をカ
ラムの３〜５容量％の量で導入する。
ゲル濾過は分子量で５〜70kDのタンパク質分
解の範囲のゲルを用いて行なう。
解の範囲のゲルを用いて行なう。
ゲルとしてウルトラゲルまたは凝集分解剤の作
用に対して比較的安定な任意の他のゲルを用い
て、５〜70kDの分子量を有するタンパク質の有
効な分離を可能とする。
用に対して比較的安定な任意の他のゲルを用い
て、５〜70kDの分子量を有するタンパク質の有
効な分離を可能とする。
カラムからのインターフエロンの溶離は、2.5
〜9.0の範囲内のPH値の0.1〜0.2M緩衝溶液を用い
て行なう。
〜9.0の範囲内のPH値の0.1〜0.2M緩衝溶液を用い
て行なう。
緩衝溶液およびゲル充填カラム中の凝集分解剤
の含有量は、用いる最初の材料の特性に基づいて
選ばれる。
の含有量は、用いる最初の材料の特性に基づいて
選ばれる。
実施例 １
生インターフエロン（2000IU／ml、タンパク
質２mg／ml）8810mlに硫酸アンモニウム4405ｇを
添加する。形成されたタンパク質沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中8Mの濃度の尿素を含有するPH2.5の0.1M
イン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲルを充填
したK100／100カラムをPH2.5の0.1Mリン酸緩衝
液を用いて平衡化し、そこに同じ緩衝液中8M尿
素の溶液240ml（カラム容積の３％）を導入する。
その後直ちに、インターフエロンの溶液をこのカ
ラムに導入しそしてPH2.5の0.1Mリン酸緩衝液で
溶離する。集めた活性画分の容積は700mlである。
精製した調製物は、500000IU／mgタンパク質の
比活性、100000IU／mlの容積活性および７×
107IUの総活性を有している。
質２mg／ml）8810mlに硫酸アンモニウム4405ｇを
添加する。形成されたタンパク質沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中8Mの濃度の尿素を含有するPH2.5の0.1M
イン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲルを充填
したK100／100カラムをPH2.5の0.1Mリン酸緩衝
液を用いて平衡化し、そこに同じ緩衝液中8M尿
素の溶液240ml（カラム容積の３％）を導入する。
その後直ちに、インターフエロンの溶液をこのカ
ラムに導入しそしてPH2.5の0.1Mリン酸緩衝液で
溶離する。集めた活性画分の容積は700mlである。
精製した調製物は、500000IU／mgタンパク質の
比活性、100000IU／mlの容積活性および７×
107IUの総活性を有している。
実施例 ２
生インターフエロン（3000IU／ml、タンパク
質２mg／ml）8585mlに硫酸アンモニウム4292ｇを
添加する。形成されたタンパク質沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中6Mの濃度の尿素を含有するPH6.0の0.1M
イン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲルを充填
したK100／100カラムをPH6.0を有する0.1Mリン
酸緩衝液を用いて平衡化し、そしてそこに同じ緩
衝液中6M尿素の溶液400ml（カラムの５容積％）
を導入する。その後直ちに、インターフエロンの
溶液をこのカラムに導入しそしてPH6.0を有する
0.1Mリン酸緩衝液で溶離を行なう。集めた活性
画分の容積は1360mlである。精製した調製物は、
300000IU／mgタンパク質の比活性、75000IU／ml
の容積活性および9.7×107IUの総活性を有してい
る。
質２mg／ml）8585mlに硫酸アンモニウム4292ｇを
添加する。形成されたタンパク質沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中6Mの濃度の尿素を含有するPH6.0の0.1M
イン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲルを充填
したK100／100カラムをPH6.0を有する0.1Mリン
酸緩衝液を用いて平衡化し、そしてそこに同じ緩
衝液中6M尿素の溶液400ml（カラムの５容積％）
を導入する。その後直ちに、インターフエロンの
溶液をこのカラムに導入しそしてPH6.0を有する
0.1Mリン酸緩衝液で溶離を行なう。集めた活性
画分の容積は1360mlである。精製した調製物は、
300000IU／mgタンパク質の比活性、75000IU／ml
の容積活性および9.7×107IUの総活性を有してい
る。
実施例 ３
生インターフエロン（2480IU／ml、タンパク
質１mg／ml）8270mlに硫酸アンモニウム4135ｇを
添加する。形成されたタンパク質沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中4Mの濃度の尿素を含有するPH9.0の0.1M
イン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲルを充填
したK100／100カラムをPH9.0の0.1Mリン酸緩衝
液で平衡化し、そこに同じ緩衝液中4M尿素の溶
液320ml（カラムの４容積％）を導入する。その
後直ちに、インターフエロンの溶液をこのカラム
に導入しそしてPH9.0を有する0.1Mリン酸緩衝液
中を用いて溶離を行なう。集めた活性画分の容積
は900mlである。精製した調製物は、50000IU／
mgタンパク質の比活性、20000IU／mlの容積活性
および1.8×107IUの総活性を有している。
質１mg／ml）8270mlに硫酸アンモニウム4135ｇを
添加する。形成されたタンパク質沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中4Mの濃度の尿素を含有するPH9.0の0.1M
イン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲルを充填
したK100／100カラムをPH9.0の0.1Mリン酸緩衝
液で平衡化し、そこに同じ緩衝液中4M尿素の溶
液320ml（カラムの４容積％）を導入する。その
後直ちに、インターフエロンの溶液をこのカラム
に導入しそしてPH9.0を有する0.1Mリン酸緩衝液
中を用いて溶離を行なう。集めた活性画分の容積
は900mlである。精製した調製物は、50000IU／
mgタンパク質の比活性、20000IU／mlの容積活性
および1.8×107IUの総活性を有している。
実施例 ４
生インターフエロン（4960IU／ml、タンパク
質３mg／ml）8980mlに硫酸アンモニウム4490ｇを
添加する。得られるタンパク質沈殿を遠心分離に
よつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、溶
液中2.0Mの濃度の尿素を含有するPH7.0の0.1Mリ
ン酸緩衝液中に溶解する。ゲルを充填した
K100／100カラムをPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を
用いて平衡化し、そこに同じ緩衝液中2M尿素の
溶液300ml（カラムの3.75容積％）を導入する。
その後直ちに、インターフエロンの溶液をカラム
に導入しそしてPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を用い
て溶離する。集めた活性画分の容積は1280mlであ
る。精製した調製物は400000IU／mgタンパク質
の比活性、70000IU／mlの溶融活性および9.4×
107IUの総活性を有している。
質３mg／ml）8980mlに硫酸アンモニウム4490ｇを
添加する。得られるタンパク質沈殿を遠心分離に
よつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、溶
液中2.0Mの濃度の尿素を含有するPH7.0の0.1Mリ
ン酸緩衝液中に溶解する。ゲルを充填した
K100／100カラムをPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を
用いて平衡化し、そこに同じ緩衝液中2M尿素の
溶液300ml（カラムの3.75容積％）を導入する。
その後直ちに、インターフエロンの溶液をカラム
に導入しそしてPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を用い
て溶離する。集めた活性画分の容積は1280mlであ
る。精製した調製物は400000IU／mgタンパク質
の比活性、70000IU／mlの溶融活性および9.4×
107IUの総活性を有している。
実施例 ５
生インターフエロン（3500IU／ml、タンパク
質3.3mg／ml）750mlに硫酸アンモニウム308ｇを
添加する。得られるタンパク質６沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中1Mの濃度の塩化グアニジンを含有する
0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ゲルを充填し
たK50／100カラムをPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を
用いて平衡化し、それに同じ緩衝液中1M尿素の
溶液80ml（カラム容積の４％）を導入する。その
後直ちに、インターフエロンの溶液をカラムに導
入しそしてPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を用いて溶
離を行なう。収集した活性画分の容積は200mlで
ある。精製した調製物は、30000IU／mgタンパク
質の比活性、15000IU／mlの容積活性および６×
106IUの総活性を有している。
質3.3mg／ml）750mlに硫酸アンモニウム308ｇを
添加する。得られるタンパク質６沈殿を遠心分離
によつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、
溶液中1Mの濃度の塩化グアニジンを含有する
0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ゲルを充填し
たK50／100カラムをPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を
用いて平衡化し、それに同じ緩衝液中1M尿素の
溶液80ml（カラム容積の４％）を導入する。その
後直ちに、インターフエロンの溶液をカラムに導
入しそしてPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液を用いて溶
離を行なう。収集した活性画分の容積は200mlで
ある。精製した調製物は、30000IU／mgタンパク
質の比活性、15000IU／mlの容積活性および６×
106IUの総活性を有している。
実施例 ６
生インターフエロン（3500IU／ml、タンパク
質3.3mg／ml）760mlに硫酸アンモニウム310ｇを
添加する。形成されたタンパク質の沈殿を遠心分
離によつて分離する。回収したタンパク質の沈殿
を、溶液中6Mの濃度の塩化グアニジンを含有す
るPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ウル
トラゲルを充填したK50／100カラムをPH7.0の
0.1Mリン酸緩衝液を用いて平衡化し、そこに同
じ緩衝液中6M塩化グアニジンの溶液60ml（カラ
ムの３容積％）を導入する。その後直ちに、イン
ターフエロンの溶液をカラムに導入しそしてPH
7.0の0.1Mリン酸緩衝液を用いて溶離する。集め
た活性画分の容積は220mlである。精製した調製
物は、35000IU／mgタンパク質の比活性、
15000IU／mlの容積活性および6.2×106IUの総活
性を有している。
質3.3mg／ml）760mlに硫酸アンモニウム310ｇを
添加する。形成されたタンパク質の沈殿を遠心分
離によつて分離する。回収したタンパク質の沈殿
を、溶液中6Mの濃度の塩化グアニジンを含有す
るPH7.0の0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ウル
トラゲルを充填したK50／100カラムをPH7.0の
0.1Mリン酸緩衝液を用いて平衡化し、そこに同
じ緩衝液中6M塩化グアニジンの溶液60ml（カラ
ムの３容積％）を導入する。その後直ちに、イン
ターフエロンの溶液をカラムに導入しそしてPH
7.0の0.1Mリン酸緩衝液を用いて溶離する。集め
た活性画分の容積は220mlである。精製した調製
物は、35000IU／mgタンパク質の比活性、
15000IU／mlの容積活性および6.2×106IUの総活
性を有している。
実施例 ７
生インターフエロン（2000IU／ml、タンパク
質2.0mg／ml）935mlに硫酸アンモニウム466ｇを
添加する。得られるタンパク質沈殿を遠心分離に
よつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、溶
液中3Mの濃度の塩化グアニジンを含有するPH３
の0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲ
ルを充填したK50／100カラムをPH3.0の0.1Mリン
酸緩衝液を用いて平衡化し、それに同じ緩衝液中
3Mのグアニジンの溶液60ml（カラムの３容積％）
を導入する。その後直ちに、インターフエロンの
溶液をカラムに導入しそしてPH3.0を有する0.1M
リン酸緩衝液を用いて溶離を行なう。集めた活性
画分の容積は240mlである。精製した調製物は、
96000IU／mgタンパク質の比活性、32000IU／ml
の容積活性および7.7×106IUの総活性を有してい
る。
質2.0mg／ml）935mlに硫酸アンモニウム466ｇを
添加する。得られるタンパク質沈殿を遠心分離に
よつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、溶
液中3Mの濃度の塩化グアニジンを含有するPH３
の0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲ
ルを充填したK50／100カラムをPH3.0の0.1Mリン
酸緩衝液を用いて平衡化し、それに同じ緩衝液中
3Mのグアニジンの溶液60ml（カラムの３容積％）
を導入する。その後直ちに、インターフエロンの
溶液をカラムに導入しそしてPH3.0を有する0.1M
リン酸緩衝液を用いて溶離を行なう。集めた活性
画分の容積は240mlである。精製した調製物は、
96000IU／mgタンパク質の比活性、32000IU／ml
の容積活性および7.7×106IUの総活性を有してい
る。
実施例 ８
生インターフエロン（7000IU／ml、タンパク
質3.5mg／ml）1230mlに硫酸アンモニウム613ｇを
添加する。得られるタンパク質沈殿を遠心分離に
よつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、溶
液中4Mの濃度の塩化グアニジンを含有するPH8.0
の0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲ
ルを充填したK50／100カラムをPH8.0の0.1Mリン
酸緩衝液を用いて平衡化し、そこに同じ緩衝液中
4M塩化グアニジンの溶液60ml（カラム容積の３
％）を導入する。その直後に、インターフエロン
の溶液をカラムに導入してPH8.0を有する0.1Mリ
ン酸緩衝液を用いて溶離を行なう。集めた画分の
容積は250mlである。精製した調製物は、
20000IU／mgタンパク質の比活性、10000IU／ml
の容積活性および５×106IUの総活性を有してい
る。
質3.5mg／ml）1230mlに硫酸アンモニウム613ｇを
添加する。得られるタンパク質沈殿を遠心分離に
よつて分離する。回収したタンパク質沈殿を、溶
液中4Mの濃度の塩化グアニジンを含有するPH8.0
の0.1Mリン酸緩衝液中に溶解する。ウルトラゲ
ルを充填したK50／100カラムをPH8.0の0.1Mリン
酸緩衝液を用いて平衡化し、そこに同じ緩衝液中
4M塩化グアニジンの溶液60ml（カラム容積の３
％）を導入する。その直後に、インターフエロン
の溶液をカラムに導入してPH8.0を有する0.1Mリ
ン酸緩衝液を用いて溶離を行なう。集めた画分の
容積は250mlである。精製した調製物は、
20000IU／mgタンパク質の比活性、10000IU／ml
の容積活性および５×106IUの総活性を有してい
る。
産業上の利用可能性
本発明は、給血者および死体の双方の血液の白
血球から任意の方法によつて得られるヒト白血球
インターフエロンの精製の医薬工業において最も
首尾よく用いることができる。
血球から任意の方法によつて得られるヒト白血球
インターフエロンの精製の医薬工業において最も
首尾よく用いることができる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 硫酸アンモニウムを用いた生タンパク質の沈
殿、該タンパク質沈殿の分離、該分離した沈殿の
溶解、および所望生成物のゲル濾過を含むヒト白
血球インターフエロンの精製方法であつて、前記
沈殿を2.5〜9.0のPHを有し凝集分解剤を含有する
緩衝液中に溶解すること、およびゲル濾過前に同
一の緩衝液をカラム容積の３〜５％の量でカラム
内に導入することを特徴とする方法。 ２ 前記緩衝液中2.0〜8.0Mの濃度の尿素を凝集
分解剤として用いることを特徴とする請求の範囲
第１項記載の方法。 ３ 前記緩衝液中1.0〜6.0Mの濃度の塩化グアニ
ジンを凝集分解剤として用いることを特徴とする
請求の範囲第１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/SU1984/000052 WO1986001723A1 (en) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | Method of rectification of human leukocytic interferon |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62500237A JPS62500237A (ja) | 1987-01-29 |
| JPH0521120B2 true JPH0521120B2 (ja) | 1993-03-23 |
Family
ID=21616868
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59504219A Granted JPS62500237A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | ヒト白血球インタ−フェロンの精製方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0195084B1 (ja) |
| JP (1) | JPS62500237A (ja) |
| DE (1) | DE3482307D1 (ja) |
| FI (1) | FI80599C (ja) |
| HU (2) | HU193078B (ja) |
| WO (1) | WO1986001723A1 (ja) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL7404590A (nl) * | 1974-04-03 | 1975-10-07 | Stichting Rega V Z W | Werkwijze voor het reactiveren van interferon. |
| NL7404589A (nl) * | 1974-04-03 | 1975-10-07 | Stichting Rega V Z W | Werkwijze voor het stabiliseren van interferon. |
| FR2351665A1 (fr) * | 1976-05-21 | 1977-12-16 | Elf Aquitaine | Procede de purification de preparations possedant notamment une activite interferon, preparations purifiees ainsi obtenues et leur application en tant que medicament |
-
1984
- 1984-09-21 JP JP59504219A patent/JPS62500237A/ja active Granted
- 1984-09-21 HU HU85186D patent/HU193078B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-09-21 HU HU85185A patent/HU193472B/hu not_active IP Right Cessation
- 1984-09-21 EP EP84904229A patent/EP0195084B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-09-21 WO PCT/SU1984/000052 patent/WO1986001723A1/ru active IP Right Grant
- 1984-09-21 DE DE8484904229T patent/DE3482307D1/de not_active Expired - Fee Related
-
1986
- 1986-06-26 FI FI862737A patent/FI80599C/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0195084B1 (de) | 1990-05-23 |
| HUT40575A (en) | 1987-01-28 |
| DE3482307D1 (de) | 1990-06-28 |
| WO1986001723A1 (en) | 1986-03-27 |
| EP0195084A4 (de) | 1988-01-20 |
| JPS62500237A (ja) | 1987-01-29 |
| EP0195084A1 (de) | 1986-09-24 |
| HU193078B (en) | 1987-08-28 |
| FI80599C (fi) | 1990-07-10 |
| FI862737A (fi) | 1986-06-26 |
| FI862737A0 (fi) | 1986-06-26 |
| FI80599B (fi) | 1990-03-30 |
| HU193472B (en) | 1987-10-28 |
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