JPH05199891A

JPH05199891A - モノグルコシルルチンの分離方法

Info

Publication number: JPH05199891A
Application number: JP6335891A
Authority: JP
Inventors: Sumihisa Iida; 田純久飯; Takashi Yumoto; 本隆湯; Yukinobu Gunji; 司幸信郡; Ikuo Takaya; 屋幾夫高
Original assignee: Toyo Sugar Refining Co Ltd
Current assignee: Toyo Sugar Refining Co Ltd
Priority date: 1991-03-27
Filing date: 1991-03-27
Publication date: 1993-08-10
Anticipated expiration: 2013-10-27
Also published as: JP2816030B2

Abstract

(57)【要約】【構成】本発明に係るモノグルコシルルチンの分離方法
は、例えば、モノグルコシルルチンとルチンとの混合物
（Ｂ）にα-1,6-ラムノシダーゼを作用させて、得られ
た反応混合物（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分離す
ることを特徴とする。また、他の分離方法はα-グルコ
シル化ルチンとルチンとの混合物（Ａ）に、グルアミラ
ーゼとα-1,6-ラムノシダーゼを同時または別々に作用
させて得られた反応混合物（Ｃ）からモノグルコシルル
チンを分離することを特徴とする。【効果】本発明の分離方法によれば、α-グルコシル化
ルチンとルチンとの混合物あるいはモノグルコシルルチ
ンとルチンとの混合物から高純度のモノグルコシルルチ
ンを効率的に分離・収集することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の技術分野】本発明は、モノグルコシルルチンの
分離方法に関する。さらに詳しくは、α-グルコシル化
ルチンとルチンとの混合物あるいはモノグルコシルルチ
ンとルチンとの混合物からモノグルコシルルチンを効率
的に分離する方法に関する。

【０００２】

【発明の技術的背景ならびにその問題点】ルチンはえん
じゅのつぼみ、ソバ等に含まれ、ビタミンＣとともに脆
弱化した血管を正常に戻し、出血を防止する作用を有
し、また消炎・鎮痛作用を有するなどその用途は広い。
しかしながら、ルチンは水に難溶であるため、その用途
は限定されている。そこでルチンに糖を転移（付加）さ
せたα-グルコシル化ルチンが開発（特開平3-27293号公
報）され、商品名「α-Ｇルチン」として市販されてい
る。この「α-Ｇルチン」は転移（付加）したグルコー
ス単位数の異なるα-グルコシル化ルチンとルチンとの
混合物であり（「食品工業」１９９０年５月３０日
（刊）参照）、α-グルコシル化ルチン自体は、ルチン
と同様の薬理・生理作用を示し、しかもルチンに比べて
約５０００倍と著しく水溶性に優れている。さらに製品
中のα-グルコシル化ルチンの純度を著しく高めること
ができれば、例えば医薬品、化粧品など、「αＧルチ
ン」の用途は一段と拡大され得るものと期待される。

【０００３】「αＧルチン」などのような、α-グルコ
シル化ルチンとルチンとの含有物から、α-グルコシル
化ルチンの内の１種であるモノグルコシルルチンを分離
する方法としては、例えば、クロマトグラフィーを用い
る方法、吸着樹脂及び酵素反応を用いる方法等が知られ
ている。

【０００４】クロマトグラフィーによる分離方法（例；
１９８９年農芸化学会講演要旨集２８７ページ参照）に
てα-グルコシル化ルチンとルチンとの混合物からα-グ
ルコシル化ルチンを分離すると、非常に純度の高いα-
グルコシル化ルチン（モノグルコシルルチン）が得られ
る。しかしながら、α-グルコシル化ルチンの内の１種
であるモノグルコシルルチンとルチンとは非常に性質が
似ているため、この方法では、効率的にα-グルコシル
化ルチンとルチンとを分離できないという問題点があっ
た。

【０００５】また、吸着樹脂を用いる方法では、まずは
じめに「αＧルチン」溶液を吸着樹脂中に通して、「α
Ｇルチン」中の、より疎水性の低い、糖単位の沢山つい
たα-グルコシル化ルチンを吸着樹脂からリークさせ
る。次いでこの吸着樹脂からリークしたα-グルコシル
化ルチンをグルコアミラーゼで分解するとモノグルコシ
ルルチンが得られる。あるいはまたあらかじめ吸着樹脂
に「αＧルチン」を吸着させておき、樹脂への付着力の
弱い糖単位の沢山付いたα-グルコシル化ルチンを例え
ば濃度の低いアルコール等で脱着し、必要により脱アル
コールしてからグルコアミラーゼで分解してもモノグル
コシルルチンが得られる。しかしながらこれらの方法で
はルチンとα-グルコシル化ルチンの吸着樹脂への付着
力の差により効率が決ってくるが、現実にはルチンとα
-グルコシル化ルチンの吸着樹脂への付着力の差がそれ
程大きくないため、この方法では「αＧルチン」からル
チンの含まれないα-グルコシル化ルチンさらにはモノ
グルコシルルチンを製造することはきわめて効率が悪
い。

【０００６】

【発明の目的】本発明は、上記のような従来技術に伴う
問題点を解決しようとするものであって、α-グルコシ
ル化ルチンとルチンとの混合物あるいはモノグルコシル
ルチンとルチンとの混合物から高純度のモノグルコシル
ルチンを効率的に分離する方法を提供することを目的と
している。

【０００７】

【発明の概要】本発明に係るモノグルコシルルチンの第
１の分離方法は、原料として、モノグルコシルルチンと
ルチンとの混合物（Ｂ）を用い、この原料（Ｂ）にα-
1,6-ラムノシダーゼを作用させて、該混合物（Ｂ）中の
ルチンをイソクエルシトリンに変えたのち、得られたモ
ノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの混合物
（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分離することを特徴
としている。

【０００８】また、本発明に係る第２の分離方法は、原
料としてα-グルコシル化ルチンとルチンとの混合物
（Ａ）を用い、この原料（Ａ）に、グルコアミラーゼと
α-1,6-ラムノシダーゼを同時または別々に作用させ
て、該混合物（Ａ）中のα-グルコシル化ルチンをモノ
グルコシルルチンに変え、また、ルチンをイソクエルシ
トリンに変えた後、得られたモノグルコシルルチンとイ
ソクエルシトリンとの混合物（Ｃ）からモノグルコシル
ルチンを分離することを特徴としている。

【０００９】また、本発明に係る第３の分離方法は、ア
ルコール中で結晶化させることにより、上記第１または
第２の発明において得られる、モノグルコシルルチンと
イソクエルシトリンとの混合物（Ｃ）からモノグルコシ
ルルチンを分離することを特徴としている。

【００１０】本発明の分離方法によれば、α-グルコシ
ル化ルチンとルチンとの混合物あるいはモノグルコシル
ルチンとルチンとの混合物からモノグルコシルルチンを
効率的に分離することができる。

【００１１】

【発明の具体的説明】以下、本発明に係るモノグルコシ
ルルチンの分離方法について下記の表１を参照しつつ具
体的に説明する。なお、表中、Ｒはルチノースを、また
Ｇはグルコースをそれぞれ表わす。

【００１２】

【表１】

【００１３】本発明に係るモノグルコシルルチンの第２
の分離方法では、原料としてα-グルコシル化ルチンと
ルチンとの混合物（Ａ）が用いられ、この混合物（Ａ）
は、通常、「αＧルチン」（東洋精糖（株）製）の商品
名で市販されている。このα-グルコシル化ルチンは
下記式（ロ）で表わされ、

【００１４】

【化１】

【００１５】・・・・（ロ）（但し、式（ロ）中、Ｇはグルコース残基、Ｒはラムノ
ース残基、ｎは１〜数十の整数を表わす。）、α-位の
グルコース残基数（ｎ）が１〜数十の範囲、平均ではｎ
が４〜５程度のα-グルコシル化ルチンの混合物であ
る。このα-グルコシル化ルチンには、α-位のグルコー
ス残基数（ｎ）が１のモノグルコシルルチンなどが含ま
れる。

【００１６】このα-グルコシル化ルチンは水、アルコ
ール等に対する溶解度が高く、水１００ｇ当り５０ｇ以
上溶解し、また濃度５０％のアルコール１００ｇ当り４
０ｇ以上溶解する。

【００１７】α-グルコシル化ルチンは、例えば下記の
ようにして製造される。すなわち、下記式（イ）で

【００１８】

【化２】

【００１９】・・・・（イ）で表わされる、水に極めて難溶（溶解度：水１００ｇ当
り０．０１ｇ程度）なルチンに、糖供与体としての澱粉
あるいはその部分加水分解物（例：デキストリン、マル
トース）を加えてなる組成物に、アミラーゼ、グリコシ
ダーゼ、トランスグリコシダーゼなどのグルコース残基
転移酵素を作用させて澱粉あるいはその部分分解物から
ルチンに糖（グルコース）を転移（付加）させることに
より、α-グルコシル化ルチンは得られる。

【００２０】このようなα-グルコシル化ルチンの製造
方法としては、従来より公知の種々の方法を採用するこ
とができる。具体的には、例えば特公昭５４ー３２０７
３号公報あるいは特公昭５８ー５４７９９号公報記載の
方法を採用することができる。なお、このようにして得
られた反応物には、通常、α-グルコシル化ルチンと共
に、未反応のルチンあるいはルチンの分解物であるケル
セチン等が少量含まれている。なお、この明細書中にお
いては、その主旨に反しない限り、α-グルコシル化ル
チンというときは、モノグルコシルルチンを含む。

【００２１】本発明は、少なくともこのようなα-グル
コシル化ルチンとルチンとが含まれた混合物からモノグ
ルコシルルチンを効率的に分離する方法に関する。以
下、まずはじめに本発明の主な反応工程について詳細に
説明するが、第１工程と第２工程のように隣合う工程に
おいて、用いられる各酵素が共通の作用を有するもので
ある場合には、先の工程で用いられる酵素にて、それに
続く後の工程の反応をも、通常、進行させることができ
る。

【００２２】［第１工程］本発明では、α-グルコシル
化ルチンとルチンとの混合物（Ａ）に、グルコアミラー
ゼを作用させて、α-グルコシル化ルチンをモノグルコ
シルルチンに変える。こうした酵素としては長瀬産業
（株）のグルコチーム、天野製薬（株）のグルクザイム
NL、（株）ヤクルトのユニアーゼ30等のグルコアミラー
ゼの他、田辺製薬のナリンギナーゼ、天野製薬（株）の
セルラーゼA「アマノ」３などのような酵素、すなわち
α-1,4-グルコシル結合を、グルコース単位で切断する
グルコアミラーゼ活性を有する酵素であれば自由に用い
ることができる。さらにα-アミラーゼ、β-アミラーゼ
等のように、α-1,4-グルコシル結合をグルコース単位
以外でも切断する酵素を用いることもできる。しかしこ
れらの酵素のうちではα-グルコシル化ルチンをモノグ
ルコシルルチンに変える性質に優れたグルコアミラーゼ
が好ましく用いられる。

【００２３】例えば、グルコアミラーゼの一種であるグ
ルコチームは、α-グルコシル化ルチンとルチンとの混
合物（Ａ）１００ｇ当り、通常、０.０１〜１０ｇの量
で、好ましくは０.２〜１ｇの量で、換言すれば、混合
物（Ａ）中のα-グルコシル化ルチン含有量１００ｇ当
り、通常、０.０１〜１１ｇの量で、好ましくは０.２〜
１ｇの量で用いられる。このような量でグルコチームを
用いると、効率的（変換率９９％程度）にα-グルコシ
ル化ルチンをモノグルコシルルチンに変換することがで
きる。

【００２４】このようにα-グルコシル化ルチンとルチ
ンと混合物（Ａ）にグルコアミラーゼなどの酵素を作用
させる際には、用いられる酵素の種類、活性などの違い
により一概に決定されないが、例えば、グルコチームで
は、混合物（Ａ）含有溶液のｐＨを無機酸、有機酸等を
用いて３〜６程度に調節することが好ましい。また、こ
のモノグルコシル化反応の際には、３５〜６５℃程度の
温度で、１〜６０時間程度保持することが好ましい。

【００２５】このように、混合物（Ａ）中のα-グルコ
シル化ルチンに酵素を作用させて得られたモノグルコシ
ルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）に、第２工程では、
α-1,6-ラムノシダーゼを作用させて、混合物（Ｂ）中
のルチンをイソクエルシトリンに変える。

【００２６】［第２工程］本発明では、モノグルコシル
ルチンとルチンとの混合物（Ｂ）に、α-1,6-ラムノシ
ダーゼを作用させて、混合物（Ｂ）中のルチンからラム
ノース単位が取れたイソクエルシトリンに変える。この
混合物（Ｂ）は、上記第１工程で原料（Ａ）を用いて得
られるものに限らず、公知の方法で得られた原料（Ｂ）
を用いることもできる。

【００２７】第２工程で用いられる酵素は、α-1,6-ラ
ムノシダーゼ活性を有する酵素であれば、いずれもルチ
ンをイソクエルシトリンに変えることができる。このよ
うな酵素として田辺製薬（株）のヘスペリジナーゼ２
号、ナリンギナーゼ、天野製薬（株）のセルラーゼA
「アマノ」３などを挙げることができる。

【００２８】例えば、田辺製薬（株）のヘスペリジナー
ゼ２号は、モノグルコシルルチンとルチンとの混合物
（Ｂ）１００ｇ当り、通常、０.０１〜１０ｇの量で、
好ましくは０.３〜２ｇの量で、換言すれば、混合物
（Ｂ）中のルチン含有量１００ｇ当り、通常、０.０５
〜５０ｇの量で、好ましくは１.５〜１０ｇの量で用い
られる。このような量でヘスペリジナーゼを用いると、
効率的（変換効率９９％程度）にルチンをイソクエルシ
トリンに変換することができる。

【００２９】なお、後述するように、原料（Ａ）に、第
１工程と第２工程の酵素を加えこれらの反応を実質的に
同時に進行させる場合において、両工程に共通の酵素
（例：ナリンギナーゼあるいはセルラーゼＡ「アマ
ノ」）を用いる場合には、その量を適宜加減し設定する
ことができる。

【００３０】モノグルコシルルチンとルチンと混合物
（Ｂ）にα-1,6-ラムノシダーゼなどの酵素を作用させ
る際には、用いられる酵素の種類、活性などの違いによ
り一概に決定されないが、通常、例えば、ヘスペリジナ
ーゼでは、混合物（Ｂ）含有溶液のｐＨ、温度、反応時
間を第１工程のモノグルコシル化反応の場合と同様に保
持することが好ましい。

【００３１】［第３工程］本発明では、第２工程で得ら
れた、モノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの
混合物（Ｃ）からモノグルコシルルチンを、分取（分
離）する。

【００３２】このように、第２工程で得られた混合物
（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分取（分離）するに
は、例えば、下記［ｉ］〜［ｉｖ］の方法を挙げること
ができる。

【００３３】［ｉ］すなわち、まずはじめに、第２工程
で得られた、モノグルコシルルチンとイソクエルシトリ
ンとの混合物（Ｃ）に、βーグルコシダーゼを作用させ
て、混合物（Ｃ）中のイソクエルシトリンをケルセチン
に変える。

【００３４】次いで、このようにして得られたモノグル
コシルルチンとケルセチンとの混合物（Ｄ）あるいはこ
れらが含まれた水溶液（Ｄ）では、ケルセチンは沈澱す
るため、この液（Ｄ）を濾過することにより容易に両者
を固液分離して、液相としてモノグルコシルルチンを得
ることができる。

【００３５】これらの酵素としてはβ-グルコシダーゼ
活性を有する酵素であればもいずれも用いることができ
る。そうした酵素としては天野製薬（株）のセルラーゼ
A「アマノ」等を挙げることができる。

【００３６】例えば、セルラーゼA「アマノ」は、モノ
グルコシルルチンとイソクエルシトリンとの混合物
（Ｃ）１００ｇ当り、通常、０.０１〜２０ｇの量で、
好ましくは１〜１２ｇの量で、換言すれば、混合物
（Ｃ）中のイソクエルシトリン含有量１００ｇ当り、通
常、０.０５〜１２０ｇの量で、好ましくは３０〜７０
ｇの量で用いられる。このような量でβーグルコシダー
ゼを用いると、効率的（変換効率９０％程度）にイソク
エルシトリンをケルセチンに変換することができる。

【００３７】このようにモノグルコシルルチンとイソク
エルシトリンとの混合物（Ｃ）にβーグルコシダーゼを
作用させる際には、用いられる酵素の種類、活性などの
違いにより一概に決定されないが、通常、例えば、セル
ラーゼA「アマノ」３では、混合物（Ｃ）含有溶液のｐ
Ｈを、無機酸、有機酸等を用いて３〜６程度に調節する
ことが好ましい。また、この反応の際には、３５〜６５
℃程度の温度で、１〜６０時間程度保持することが好ま
しい。

【００３８】このようにして得られたモノグルコシルル
チンとケルセチンとの混合物（Ｄ）あるいはこれらが含
まれた水溶液（Ｄ）では、ケルセチンは沈澱するから、
濾過することにより容易にモノグルコシルルチンとケル
セチンとの両者を分離して、モノグルコシルルチンを得
ることができる。

【００３９】［ｉｉ］また、本発明では、第２工程で得
られた、モノグルコシルルチンとイソクエルシトリンと
の混合物（Ｃ）あるいはこれらが含まれた水溶液（Ｃ）
から、吸着樹脂を用いることにより、モノグルコシルル
チンを分取することもできる。

【００４０】吸着樹脂としては、例えば、中間極性樹脂
ＸＡＤ７、非極性樹脂ＨＰ−２０、ＨＰ−５０、ＸＡＤ
−２等が用いられる。［ｉｉｉ］また、本発明では、第２工程で得られた、モ
ノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの混合物
（Ｃ）を、一旦、アルコールに溶解させ、結晶化させた
後、濾過にて結晶を分取することによりモノグルコシル
ルチンを得ることもできる。アルコールとしては、メタ
ノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなど炭
素数が１〜４程度の低級アルコールが挙げられる。

【００４１】なお、上記アルコール中におけるモノグル
コシルルチンの結晶化に先立ち、混合物（Ｃ）あるいは
これらが含まれた水溶液（Ｃ）から、上記と同様の吸着
樹脂を用いることにより、混合物（Ｃ）に含まれた糖
類、タンパク質等を除去してもよい。

【００４２】［ｉｖ］また、本発明では、第２工程で得
られた、モノグルコシルルチンとイソクエルシトリンと
の混合物（Ｃ）あるいはこれらが含まれた水溶液（Ｃ）
から、クロマト分離を用いることにより、モノグルコシ
ルルチンを分取することもできる。

【００４３】本発明では、このような［ｉ］〜［ｉｖ］
の方法を適宜組み合わせてもよい。本発明では、このよ
うな［ｉ］〜［ｉｖ］の方法の内では、［iii］が好ま
しい。これはモノグルコシルルチンとイソクエルシトリ
ンとのアルコールに対する溶解度の違いを利用するもの
で、効率良く高純度のモノグルコシルチンが得られる。
本発明では、原料として、例えば、東洋精糖（株）より
市販されているような、α-グルコシル化ルチンとルチ
ンとの混合物（Ａ）：「αＧルチン」を用いる場合に
は、上記、第１工程の反応の次に、第２工程の反応を行
い、得られたモノグルコシルルチンとイソクエルシトリ
ンとの混合物（Ｃ）から、モノグルコシルルチンを分離
すればよい。

【００４４】混合物（Ｃ）から、モノグルコシルルチン
を分離するには、例えば、第３工程の［ｉ］〜［ｉｖ］
の１または２以上の分離方法を組み合わせて採用するこ
とにより、目的とする高純度のモノグルコシルルチンを
効率的に得ることができる。

【００４５】また、本発明においては、例えば、原料
（Ａ）に、上記したような第１工程で用いられるグルコ
アミラーゼ等の酵素と、第２工程で用いられるα-1,6-
ラムノシダーゼ等の酵素と、必要に応じて、第３工程の
［ｉ］で用いられるβーグルコシダーゼ等の酵素とを一
緒に加え、これらの反応を実質上同時に進行させてもよ
く、あるいは第１〜第３工程の順序で加えて、その順序
で反応を進行させてもよく、さらには、用いられる酵素
に応じて第２工程の反応の後に第１工程の反応を進行さ
せ、ついで必要に応じて、第３工程の操作、例えば、反
応［ｉ］を進行させることもできる。

【００４６】また、本発明では、原料として、モノグル
コシルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）を用いる場合に
は、上記、第２工程の反応を行い、次いで、得られたモ
ノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの混合物
（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分離すればよい。

【００４７】このように、原料として、モノグルコシル
ルチンとルチンとの混合物（Ｂ）を用いる場合には、上
記第２工程の反応の次に、さらに必要により第３工程の
［ｉ］〜［ｉｖ］のいずれか１つの方法を採用し、ある
いはこれらの方法を適宜組み合わせて採用することによ
り、目的とする高純度のモノグルコシルルチンを効率的
に得ることができる。

【００４８】また、第２工程で用いられるα-1,6-ラム
ノシダーゼと、第３工程の反応［ｉ］で用いられるβー
グルコシダーゼとを同時に作用させて、ルチンをケルセ
チンに変える反応を進行させることもできる。

【００４９】なお、上記反応は還元剤の存在下に行うこ
とが好ましい。ここで使用される還元剤としてはα-グ
ルコシル化ルチンあるいは反応生成物を過度に還元しな
いような還元力を有すると共に溶存酸素や空気による酸
化を有効に防止し得る程度の還元力を有するものが好ま
しく、さらにモノグルコシルルチンの用途を考慮すると
生体に対する影響力の少ないものが好ましい。このよう
な還元剤の例としてはアスコルビン酸及びアスコルビン
酸塩を挙げることができ、一般にはアスコルビン酸が使
用される。その使用量はα-グルコシル化ルチン１００
ｇに対して０.１〜５ｇ程度の量である。このような量
のアスコルビン酸は製造工程で容易に除去される。

【００５０】上記のような本発明に係る分離方法で得ら
れる、モノグルコシルルチンは純度が高い。必要により
さらに再結晶を繰り返し純度を高めることもできる。こ
のような高純度のモノグルコシルルチンは医薬品、化粧
品、食品添加物などの広範な用途に好ましく用いられ
る。

【００５１】また、モノグルコシルルチンは単位重量当
りのルチン単位量が大きいので、ルチンに代えてモノグ
ルコシルルチンを用いることにより、効率的にルチン自
体の有する各種特性、例えば、消炎・鎮痛作用、抗酸化
作用、紫外線吸収作用等を発揮させることができる。

【００５２】

【発明の効果】本発明の分離方法によれば、α-グルコ
シルルチンとルチンとの混合物あるいはモノグルコシル
ルチンとルチンとの混合物から高純度のモノグルコシル
ルチンを効率的に分離することができる。

【００５３】

【実施例】以下、本発明を実施例に基づきさらに具体的
に説明するが、本発明はかかる実施例に何等制限される
ものではない。

【００５４】

【実施例１】α-グルコシル化ルチンとルチンとの混合
物（Ａ）１００ｇに水１０００mlを加え溶解した後、ア
スコルビン酸１ｇ、グルコチーム（長瀬産業（株）製）
１ｇを加えｐＨ４.５に調整し５５℃、２４時間反応さ
せた。この反応液（イ）にヘスペリジナーゼ２号（田辺
製薬（株）製）１ｇを加えｐＨ４.０に調整し５５℃、
２４時間反応させ、反応液（ロ）を得た。反応液（ロ）
は酸素を加熱失活させ濾過した後、濾液を中間極性樹脂
ＸＡＤ−７、１０００mlに通液し、水洗後、６０％エタ
ノール２０００ml、水１０００mlで脱着、押し出しを行
なった。両液を合わせ脱アルコール、濃縮、乾燥させ固
形物４７ｇ（純度６５％）を得た。この固形分に９９％
メタノール８０mlを加え６０℃で加熱溶解後、室温放置
し結晶を析出させた。析出した結晶は少量の９９％メタ
ノールで洗浄し、乾燥させ固形物２５ｇ（純度９３％）
を得た。

【００５５】図１、２に反応液（イ）、（ロ）の薄層ク
ロマトグラムを示す。展開はキーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄ 薄
層板（メルク社製）にスポットし、n-ブタノール／水／
酢酸＝４／５／１で行なった。図１には対照として混合
物（Ａ）と標準モノグルコシルルチン（（株）林原生化
学研究所製）をスポットした。反応液（イ）はモノグル
コシルルチン以下にスポットが無いこと、またモノグル
コシルルチンのスポットの発色が強いことより、新たな
モノグルコシルルチン（Ｒｆ０.３６）の生成が認めら
れた（混合物（Ｂ））。図２では標準イソクエルシトリ
ン（フナコシ薬品（株）製）のスポットから反応液
（ロ）のイソクエルシトリン（Ｒｆ０.７４）が確認さ
れた（混合物（Ｃ））。

【００５６】

【実施例２】実施例１と同様の操作で得たモノグルコシ
ルルチンとルチンとの混合物（Ｂ）１００ｇ（純度６４
％）に９９％メタノール１５０mlを加え６０℃で加熱溶
解後、室温放置し結晶を析出させた。析出した結晶は少
量の９９％メタノールで洗浄し、乾燥させ固形分５７ｇ
（純度８４％）を得た。

【００５７】

【実施例３】α-グルコシル化ルチンとルチンとの混合
物（Ａ）１００ｇに水１０００mlを加え溶解した後、ア
スコルビン酸ナトリウム２.５ｇ、グルコチーム（長瀬
産業（株）製）１ｇ、ナリンギナーゼ（田辺製薬（株）
製）０.５ｇを加えｐＨ４.０に調整し５５℃で２４時間
反応させた。反応液は酸素を加熱失活させ濾過した後、
濾液を非極性樹脂ＨＰ−２０、１０００mlに通液し、水
洗後６０％エタノール２０００ml、水１０００mlで脱
着、押し出しを行なった。両液を合わせ脱アルコール、
濃縮、乾燥させ固形物４２ｇ（純度６７％）を得た。こ
の固形分に９９％メタノール８０mlを加え６０℃で加熱
溶解後、室温放置し結晶を析出させた。析出した結晶は
少量の９９％メタノールで洗浄し乾燥させ固形物２３ｇ
（純度９３％）を得た。

【００５８】

【実施例４】α-グルコシル化ルチンとルチンとの混合
物（Ａ）１００ｇに水１０００mlを加え溶解した後、ア
スコルビン酸１ｇ、グルコチーム（長瀬産業（株）製）
１ｇ、ヘスペリジナーゼ２号（田辺製薬（株）製）１
ｇ、セルラーゼA「アマノ」３（天野製薬（株）製）１
０ｇを加えｐＨ４.０に調整し５５℃で４８時間反応さ
せた。反応液は酸素を加熱失活させ濾過した後、濾液を
中間極性樹脂ＸＡＤ−７、１０００mlに通液し、水洗
後、６０％エタノール２０００ml、水１０００mlで脱
着、押し出しを行なった。両液を合わせ脱アルコール、
濃縮、乾燥させ固形物４０ｇ（純度８０％）を得た。こ
の固形分に９９％メタノール８０mlを加え６０℃で加熱
溶解後、室温放置し結晶を析出させた。析出した結晶は
少量の９９％メタノールで洗浄乾燥させ固形物２２ｇ
（純度９５％）を得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、反応液（イ）の薄層クロマトグラムを
示す。

【図２】図２は、反応液（ロ）の薄層クロマトグラムを
示す。

【符号の説明】

（１）・・・混合物（Ａ）（２）・・・標準モノグルコシルルチン（（株）林原生
化学研究所製）（３）・・・反応液（イ）（＝混合物（Ｂ））（４）・・・イソクエルシトリン（フナコシ薬品（株）
製）（５）・・・反応液（ロ）（＝混合物（Ｃ））

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者高屋幾夫千葉県市原市岩崎西１−６−41 東洋精糖株式会社千葉工場内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】モノグルコシルルチンとルチンとの混合物
（Ｂ）にα-1,6-ラムノシダーゼを作用させて、得られ
た反応混合物（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分離す
ることを特徴とするモノグルコシルルチンの分離方法。
【請求項２】α-グルコシル化ルチンとルチンとの混合
物（Ａ）に、グルコアミラーゼとα-1,6-ラムノシダー
ゼを同時または別々に作用させて得られた反応混合物
（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分離することを特徴
とするモノグルコシルルチンの分離方法。
【請求項３】アルコール中で結晶化させることにより、
モノグルコシルルチンとイソクエルシトリンとの混合物
（Ｃ）からモノグルコシルルチンを分離することを特徴
とする前記請求項１、２に記載のモノグルコシルルチン
の分離方法。