JPH05176786A - カテキン類配糖体の製造法 - Google Patents
カテキン類配糖体の製造法Info
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- JPH05176786A JPH05176786A JP3356836A JP35683691A JPH05176786A JP H05176786 A JPH05176786 A JP H05176786A JP 3356836 A JP3356836 A JP 3356836A JP 35683691 A JP35683691 A JP 35683691A JP H05176786 A JPH05176786 A JP H05176786A
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- catechins
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 カテキン類の有する優れた生理活性を殆ど損
うことなく、カテキン類に易溶解性と色沢安定性を付与
したカテキン類配糖体を、極めて簡単な操作で得る。 【構成】 カテキン類とグルコース−１−リン酸または
シュークロースとの混合溶液に、シュークロースホスホ
リラーゼを作用させ、（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシド等のカテキン類配糖体を得る。
うことなく、カテキン類に易溶解性と色沢安定性を付与
したカテキン類配糖体を、極めて簡単な操作で得る。 【構成】 カテキン類とグルコース−１−リン酸または
シュークロースとの混合溶液に、シュークロースホスホ
リラーゼを作用させ、（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α
−Ｄ−グルコピラノシド等のカテキン類配糖体を得る。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、カテキン類の有する優
れた生理活性を殆ど損うことなく、カテキン類に易溶解
性と色沢安定性を付与したカテキン類配糖体を、極めて
簡単な操作で得ることを目的とするもので、特にシュー
クロースホスホリラーゼを利用してグルコース−１−リ
ン酸又はシュークロースとカテキン類とからグルコース
とカテキン類とが結合した上記特徴を有するカテキン類
配糖体を得る方法に関する。
れた生理活性を殆ど損うことなく、カテキン類に易溶解
性と色沢安定性を付与したカテキン類配糖体を、極めて
簡単な操作で得ることを目的とするもので、特にシュー
クロースホスホリラーゼを利用してグルコース−１−リ
ン酸又はシュークロースとカテキン類とからグルコース
とカテキン類とが結合した上記特徴を有するカテキン類
配糖体を得る方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来カテキン類は、食用油脂類に対す
る抗酸化作用、食中毒菌等に対する抗菌作用、血中
コレステロール濃度上昇抑制作用、アンジオテンシン
変換酵素阻害作用及び血圧上昇抑制作用、α−アミラ
ーゼ阻害作用及び血糖上昇抑制作用、そして微生物に
於ける抗突然変異及びマウスあるいはラットに於ける抗
腫瘍作用などの優れた生理活性を有し、食品及び医薬産
業上重要な化学物質である。
る抗酸化作用、食中毒菌等に対する抗菌作用、血中
コレステロール濃度上昇抑制作用、アンジオテンシン
変換酵素阻害作用及び血圧上昇抑制作用、α−アミラ
ーゼ阻害作用及び血糖上昇抑制作用、そして微生物に
於ける抗突然変異及びマウスあるいはラットに於ける抗
腫瘍作用などの優れた生理活性を有し、食品及び医薬産
業上重要な化学物質である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、カテキン類は
水に対する溶解度が低く、また光酸化に対する色沢安定
性も非常に悪い欠点を有し、上記食品や医薬産業におい
て利用の範囲が制約を受ける問題点を有している。
水に対する溶解度が低く、また光酸化に対する色沢安定
性も非常に悪い欠点を有し、上記食品や医薬産業におい
て利用の範囲が制約を受ける問題点を有している。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで本発明者等はこの
ような問題点を解消するため、種々検討を重ねた結果、
カテキン類とグルコース−１−リン酸またはシュークロ
ースとの混合液にシュークロースホスホリラーゼを作用
させるときは、カテキン類の有する優れた生理活性を殆
ど損うことなく、水に対する溶解度が高く、また光酸化
に対する色沢安定性が非常に高いカテキン類配糖体が得
られることを知り、この知見に基いて本発明を完成し
た。
ような問題点を解消するため、種々検討を重ねた結果、
カテキン類とグルコース−１−リン酸またはシュークロ
ースとの混合液にシュークロースホスホリラーゼを作用
させるときは、カテキン類の有する優れた生理活性を殆
ど損うことなく、水に対する溶解度が高く、また光酸化
に対する色沢安定性が非常に高いカテキン類配糖体が得
られることを知り、この知見に基いて本発明を完成し
た。
【０００５】即ち本発明は、カテキン類とグルコース−
１−リン酸またはシュークロースとの混合液にシューク
ロースホスホリラーゼを作用させることを特徴とするカ
テキン類配糖体の製造法である。
１−リン酸またはシュークロースとの混合液にシューク
ロースホスホリラーゼを作用させることを特徴とするカ
テキン類配糖体の製造法である。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
用いられるカテキン類としては、（＋）−カテキン、
（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレー
ト、（−）−エピガロカテキン、及び（−）−エピガロ
カテキンガレート等が挙げられる。
用いられるカテキン類としては、（＋）−カテキン、
（−）−エピカテキン、（−）−エピカテキンガレー
ト、（−）−エピガロカテキン、及び（−）−エピガロ
カテキンガレート等が挙げられる。
【０００７】このカテキン類は、一般に水に対する溶解
度が、非常に低い（１〜２．５ｍｇ／ｍｌ）ので、予め
メタノール、エタノール等の極性溶媒に溶解（１００〜
４００ｍｇ／ｍｌ）してできるだけカテキン類の濃度を
高くして使用することが効率良くカテキン類配糖体を取
得する上で好ましい。
度が、非常に低い（１〜２．５ｍｇ／ｍｌ）ので、予め
メタノール、エタノール等の極性溶媒に溶解（１００〜
４００ｍｇ／ｍｌ）してできるだけカテキン類の濃度を
高くして使用することが効率良くカテキン類配糖体を取
得する上で好ましい。
【０００８】次に、本発明で用いられるシュクロースホ
スホリラーゼは、無機リン酸の存在下でシュークロース
に作用してグルコース−１−リン酸とフラクトースを生
成する、またはこの逆反応を触媒する酵素である。
スホリラーゼは、無機リン酸の存在下でシュークロース
に作用してグルコース−１−リン酸とフラクトースを生
成する、またはこの逆反応を触媒する酵素である。
【０００９】そして、その起源としては例えばロイコノ
ストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ
ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、シュードモナス・サ
ッカロフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａ
ｒｏｐｈｉｌａ）、シュードモナス・パトリファシエン
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）、クロストリジウム・パステイリアナム（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）、アセト
バクター・キシリナム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙ
ｌｉｎｕｍ）、プルラリア・プルランス（Ｐｕｌｌｕｌ
ａｒｉａ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）等のものが知られてい
る〔バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリ
ング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，）Ｖｏ
ｌ．２９，Ｐｐ８−１５，１９８７参照〕が、これらに
限定されるものではない。
ストック・メセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ
ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、シュードモナス・サ
ッカロフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａ
ｒｏｐｈｉｌａ）、シュードモナス・パトリファシエン
ス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎ
ｓ）、クロストリジウム・パステイリアナム（Ｃｌｏｓ
ｔｒｉｄｉｕｍ ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）、アセト
バクター・キシリナム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙ
ｌｉｎｕｍ）、プルラリア・プルランス（Ｐｕｌｌｕｌ
ａｒｉａ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）等のものが知られてい
る〔バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリ
ング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，）Ｖｏ
ｌ．２９，Ｐｐ８−１５，１９８７参照〕が、これらに
限定されるものではない。
【００１０】次に、本発明を実施するには、先ずグルコ
ース−１−リン酸又はシュークロースと、上記カテキン
類とを水に溶解して、混合液を調製する。水に対する上
記２つの成分の添加量は、全体として重量％濃度で５〜
１００％、さらに望ましくは２０〜６０％である。
ース−１−リン酸又はシュークロースと、上記カテキン
類とを水に溶解して、混合液を調製する。水に対する上
記２つの成分の添加量は、全体として重量％濃度で５〜
１００％、さらに望ましくは２０〜６０％である。
【００１１】また、上記混合液に対するシュークロース
ホスホリラーゼの添加量は、グルコース−１−リン酸又
はシュークロースとカテキン類との総重量１グラム当た
り１単位以上、望ましくは５０〜１００単位である。
ホスホリラーゼの添加量は、グルコース−１−リン酸又
はシュークロースとカテキン類との総重量１グラム当た
り１単位以上、望ましくは５０〜１００単位である。
【００１２】なお、１単位とは特開平３−４７８５「シ
ュークロースホスホリラーゼの製造法」に記載の方法に
従って求めたものである。
ュークロースホスホリラーゼの製造法」に記載の方法に
従って求めたものである。
【００１３】また、酵素反応のｐＨは５〜８．５、望ま
しくは７〜８であり、また温度は２０〜５０℃、望まし
くは３５〜４５℃であり、また時間は１〜２４時間、望
ましくは８〜１５時間である。
しくは７〜８であり、また温度は２０〜５０℃、望まし
くは３５〜４５℃であり、また時間は１〜２４時間、望
ましくは８〜１５時間である。
【００１４】このようにして得られた反応液から目的と
するカテキン類配糖体の分離は、通常のカテキン類化合
物の単離方法を採用すればよい。即ち、セファデックス
ＬＨ−２０等のデキストラン誘導体を担体とするクロマ
トグラフィー法［Ｒ．Ｓ．Ｔｏｍｐｓｏｎ 等著、Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ，Ｎｏ．１１，１
３８７（１９７２）］、ポリアミドを担体とするカラム
クロマトグラフィー法［Ｊ．Ｐ．Ｖａｎ Ｂｕｒｅｎ
等著．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．，ｖｏｌ．３１．９６４
（１９６６）］、シリカゲルを用いる液体クロマトグラ
フィー法［Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｇｌｅｎｎｉｅ 等
著、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．，ｖｏｌ．２
９．９６５〜９６８（１９８１）］、水と酢酸エチル間
の向流分配による方法［Ａｎｄｒｅｗ Ｇ．Ｈ．Ｌｅａ
著、Ｊ．Ｓｃｉ．ＦｄＡｇｒｉｃ．，ｖｏｌ．２９．
４７１〜４７７（１９７８）］、ポリスチレン系樹脂、
例えばダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１、ＳＰ２０６、
ＳＰ２０７、ＣＨＰ３Ｃ、ＣＨＰ５Ｃ、ＣＨＰ２０Ｐ
（以上何れも三菱化成工業社製）、アンバーライトＸＡ
Ｄ−１、ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（以上何れもオルガノ
社製）を用いたクロマトグラフィー法［特開昭６３−１
６２６８５］、あるいは限外濾過膜や逆浸透膜を用いて
分画する方法［特開昭６３−２６７７７４］が挙げられ
る。これらは単独、または組み合わせることにより目的
とするカテキン類配糖体を分離することができる。例え
ば、濾過樹脂（例えばファルマシア社製、セファデック
スＬＨ−２０）を充填したカラムに通液し、ついで水を
通液して未反応の糖、酵素（蛋白質）などを除去し、つ
いでメタノール溶液を通液し、未反応のカテキン類及び
カテキン類配糖体を溶出し、これをシリカゲルを用いる
液体クロマトグラフィ（例えば、ＴＯＳＯＨ社製、ＴＳ
Ｋ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ）にかけ、メタノールの
濃度勾配によって目的とするカテキン類配糖体画分を分
離する。
するカテキン類配糖体の分離は、通常のカテキン類化合
物の単離方法を採用すればよい。即ち、セファデックス
ＬＨ−２０等のデキストラン誘導体を担体とするクロマ
トグラフィー法［Ｒ．Ｓ．Ｔｏｍｐｓｏｎ 等著、Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｉ，Ｎｏ．１１，１
３８７（１９７２）］、ポリアミドを担体とするカラム
クロマトグラフィー法［Ｊ．Ｐ．Ｖａｎ Ｂｕｒｅｎ
等著．Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｓｃｉ．，ｖｏｌ．３１．９６４
（１９６６）］、シリカゲルを用いる液体クロマトグラ
フィー法［Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍ Ｇｌｅｎｎｉｅ 等
著、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．，ｖｏｌ．２
９．９６５〜９６８（１９８１）］、水と酢酸エチル間
の向流分配による方法［Ａｎｄｒｅｗ Ｇ．Ｈ．Ｌｅａ
著、Ｊ．Ｓｃｉ．ＦｄＡｇｒｉｃ．，ｖｏｌ．２９．
４７１〜４７７（１９７８）］、ポリスチレン系樹脂、
例えばダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１、ＳＰ２０６、
ＳＰ２０７、ＣＨＰ３Ｃ、ＣＨＰ５Ｃ、ＣＨＰ２０Ｐ
（以上何れも三菱化成工業社製）、アンバーライトＸＡ
Ｄ−１、ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（以上何れもオルガノ
社製）を用いたクロマトグラフィー法［特開昭６３−１
６２６８５］、あるいは限外濾過膜や逆浸透膜を用いて
分画する方法［特開昭６３−２６７７７４］が挙げられ
る。これらは単独、または組み合わせることにより目的
とするカテキン類配糖体を分離することができる。例え
ば、濾過樹脂（例えばファルマシア社製、セファデック
スＬＨ−２０）を充填したカラムに通液し、ついで水を
通液して未反応の糖、酵素（蛋白質）などを除去し、つ
いでメタノール溶液を通液し、未反応のカテキン類及び
カテキン類配糖体を溶出し、これをシリカゲルを用いる
液体クロマトグラフィ（例えば、ＴＯＳＯＨ社製、ＴＳ
Ｋ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ）にかけ、メタノールの
濃度勾配によって目的とするカテキン類配糖体画分を分
離する。
【００１５】
【本発明の効果】従来、カテキン類に澱粉を加えて、サ
イクロデキストリン合成酵素を反応させ、カテキン類グ
ルコシドを生成させることが知られている（日本農芸化
学会会誌、６５巻、３号、第５頁、２Ａｐ１４、平成３
年３月１５日発行、参照）が、この方法は、反応液中に
グルコース重合度の異なる複数のカテキン類グルコシド
が生成するためこの反応液から目的とするカテキン類モ
ノグルコシドを採取するには、更に上記反応液をグルコ
アミラーゼ処理をしなければならず、操作が繁雑である
問題点を有している。これに対して、本発明によれば上
記、グルコース−１−リン酸又はシュークロースとカテ
キン類とを含有する溶液に糖加リン酸分解酵素シューク
ロースホスホリラーゼを添加作用させるという極めて簡
単な操作によって、単一な、目的とするカテキン類配糖
体、例えば（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシドが収率良く得られる。即ち、反応液から目
的とするこれらのカテキン類配糖体化合物を単離精製す
る操作が非常に簡単である。
イクロデキストリン合成酵素を反応させ、カテキン類グ
ルコシドを生成させることが知られている（日本農芸化
学会会誌、６５巻、３号、第５頁、２Ａｐ１４、平成３
年３月１５日発行、参照）が、この方法は、反応液中に
グルコース重合度の異なる複数のカテキン類グルコシド
が生成するためこの反応液から目的とするカテキン類モ
ノグルコシドを採取するには、更に上記反応液をグルコ
アミラーゼ処理をしなければならず、操作が繁雑である
問題点を有している。これに対して、本発明によれば上
記、グルコース−１−リン酸又はシュークロースとカテ
キン類とを含有する溶液に糖加リン酸分解酵素シューク
ロースホスホリラーゼを添加作用させるという極めて簡
単な操作によって、単一な、目的とするカテキン類配糖
体、例えば（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシドが収率良く得られる。即ち、反応液から目
的とするこれらのカテキン類配糖体化合物を単離精製す
る操作が非常に簡単である。
【００１６】以下、実施例を示して本発明をより具体的
に説明する。
に説明する。
【実施例１】 （＋）−カテキン６００ｍｇを２ｍｌのメタノールに溶
解し、これを１００ｍＭＭＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に
４００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したシュークロース溶液
１００ｍｌに混合し、これにシュークロースホスホリラ
ーゼ（盛進製薬社製）４５００単位を添加し、４２℃１
５時間反応させ、糖化合物生成反応を行い、次いで、１
００℃、５分間加熱処理して酵素反応を停止し酵素反応
処理液を得た。次に、得られた反応液をセファデックス
ＬＨ−２０カラム（内径３センチ、長さ３０センチ）に
通液し、水を通液して未反応の糖及び蛋白質（酵素）を
洗い流した後、メタノール５０％溶液を通流させて、未
反応の（＋）−カテキンと目的とするカテキングルコシ
ドを含有する溶液を得た。
解し、これを１００ｍＭＭＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に
４００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したシュークロース溶液
１００ｍｌに混合し、これにシュークロースホスホリラ
ーゼ（盛進製薬社製）４５００単位を添加し、４２℃１
５時間反応させ、糖化合物生成反応を行い、次いで、１
００℃、５分間加熱処理して酵素反応を停止し酵素反応
処理液を得た。次に、得られた反応液をセファデックス
ＬＨ−２０カラム（内径３センチ、長さ３０センチ）に
通液し、水を通液して未反応の糖及び蛋白質（酵素）を
洗い流した後、メタノール５０％溶液を通流させて、未
反応の（＋）−カテキンと目的とするカテキングルコシ
ドを含有する溶液を得た。
【００１７】このようにして得られた未反応の（＋）−
カテキンと目的とするカテキングルコシドを含有する溶
液は、次いで逆相系の分配吸着クロマトグラムであるＴ
ＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭカラム（内径２セン
チ、長さ２５センチ）に供し、メタノ−ル１５％溶液を
通流させて、目的とするカテキングルコシドを含む溶液
を得、これをロータリーエバポレーターにより減圧濃縮
を行い、次いで凍結乾燥を行い、４１０ｍｇカテキング
ルコシドと思われる粉末を得た。
カテキンと目的とするカテキングルコシドを含有する溶
液は、次いで逆相系の分配吸着クロマトグラムであるＴ
ＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭカラム（内径２セン
チ、長さ２５センチ）に供し、メタノ−ル１５％溶液を
通流させて、目的とするカテキングルコシドを含む溶液
を得、これをロータリーエバポレーターにより減圧濃縮
を行い、次いで凍結乾燥を行い、４１０ｍｇカテキング
ルコシドと思われる粉末を得た。
【００１８】上記粉末を高速液体クロマトグラフィー
（ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ）による分析を行
いカテキングルコシドの純度を測定したところ９８％で
あった。
（ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ）による分析を行
いカテキングルコシドの純度を測定したところ９８％で
あった。
【００１９】また、その構造を以下の核磁気共鳴スペク
トル及びマススペクトルによる分析方法によって測定し
たところ、得られた化合物は（＋）−カテキン ３’−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドであることが確認され
た。即ち、上記粉末を常法に従って、重アセトンに溶解
し、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル及び13Ｃ−核磁気共鳴
スペクトルによる分析方法によって測定し、構造の解析
をしたところそれぞれ図１（1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍ
ＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6））及び図２（13Ｃ−ＮＭ
Ｒ（５０ＭＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6））が得られ、
これらの図より構成成分はグルコース１分子と（＋）−
カテキン１分子であり、グルコースの１位と（＋）−カ
テキン類の３′位がα結合していることが判明した。
トル及びマススペクトルによる分析方法によって測定し
たところ、得られた化合物は（＋）−カテキン ３’−
Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドであることが確認され
た。即ち、上記粉末を常法に従って、重アセトンに溶解
し、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル及び13Ｃ−核磁気共鳴
スペクトルによる分析方法によって測定し、構造の解析
をしたところそれぞれ図１（1Ｈ−ＮＭＲ（２００Ｍ
ＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6））及び図２（13Ｃ−ＮＭ
Ｒ（５０ＭＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6））が得られ、
これらの図より構成成分はグルコース１分子と（＋）−
カテキン１分子であり、グルコースの１位と（＋）−カ
テキン類の３′位がα結合していることが判明した。
【００２０】また、常法に従って、マススペクトルによ
り分析を行ったところ図３が得られ、この結果から上記
方法で得られた化合物の分子量は４５２であることを確
認した。
り分析を行ったところ図３が得られ、この結果から上記
方法で得られた化合物の分子量は４５２であることを確
認した。
【００２１】以上の結果から、得られた糖化合物は
（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ドであることが確認された。
（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ドであることが確認された。
【００２２】
【実施例２】 （＋）−カテキン６００ｍｇを２ｍｌのメタノールに溶
解し、これを１００ｍＭＭＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に
２００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したグルコース−１−リ
ン酸溶液１００ｍｌに混合し、これにシュークロースホ
スホリラーゼ（盛進製薬社製）４５００単位を添加し、
４２℃１５時間反応させ、糖化合物生成反応を行い、次
いで、１００℃、５分間加熱処理して酵素反応を停止し
酵素反応処理液を得た。以下上記実施例１と全く同様に
して、（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシドの粉末３７０ｍｇを得た。
解し、これを１００ｍＭＭＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に
２００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したグルコース−１−リ
ン酸溶液１００ｍｌに混合し、これにシュークロースホ
スホリラーゼ（盛進製薬社製）４５００単位を添加し、
４２℃１５時間反応させ、糖化合物生成反応を行い、次
いで、１００℃、５分間加熱処理して酵素反応を停止し
酵素反応処理液を得た。以下上記実施例１と全く同様に
して、（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシドの粉末３７０ｍｇを得た。
【００２３】
【応用例１】 「（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シドの抗光酸化性試験」純水にリボフラビン２０ｐｐｍ
となるように溶解し、これを１ｍｌづつ３区分用意し、
第１区分に（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシドを２５００ｐｐｍの濃度となるように溶解
し、第２区分には（＋）−カテキンを２５００ｐｐｍの
濃度となるように溶解し、第３区分に何も添加せずに、
それぞれ疑似太陽光照射装置（入江製作所社製、精密陽
光恒温槽）により可視光線１４６００ルクス、紫外線強
度（３１０〜４００ｎｍ）０．１２ｍＷ／ｃｍ2の条件
で照射し、経時的にサンプルの一部を採取しこれを高速
液体クロマトグラムにより非分解のリボフラビンを定量
した。
シドの抗光酸化性試験」純水にリボフラビン２０ｐｐｍ
となるように溶解し、これを１ｍｌづつ３区分用意し、
第１区分に（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシドを２５００ｐｐｍの濃度となるように溶解
し、第２区分には（＋）−カテキンを２５００ｐｐｍの
濃度となるように溶解し、第３区分に何も添加せずに、
それぞれ疑似太陽光照射装置（入江製作所社製、精密陽
光恒温槽）により可視光線１４６００ルクス、紫外線強
度（３１０〜４００ｎｍ）０．１２ｍＷ／ｃｍ2の条件
で照射し、経時的にサンプルの一部を採取しこれを高速
液体クロマトグラムにより非分解のリボフラビンを定量
した。
【００２４】高速液体クロマトグラムの条件 ＴＳＫ−ｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ（内径４．６ｍｍ、
長さ１５０ｍｍ） 流速；１ｍｌ／分 移動相；メタノール：１０ｍＭＮａＨ2ＰＯ4（ｐＨ５．
５）＝３５：６５ 検出；２６６ｎｍ 以上の結果を図４に示す。
長さ１５０ｍｍ） 流速；１ｍｌ／分 移動相；メタノール：１０ｍＭＮａＨ2ＰＯ4（ｐＨ５．
５）＝３５：６５ 検出；２６６ｎｍ 以上の結果を図４に示す。
【００２５】図４の結果から何も添加しない区分３で
は、リボフラビンが急激に分解消失するが、（＋）−カ
テキンを添加した区分２と共に（＋）−カテキン ３’
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドを添加した区分１は、
リボフラビンが殆ど分解されずに安定であることが判
る。即ち、（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシドは、（＋）−カテキンと比べ、抗光酸化性
において全く遜色が無いことが判る。
は、リボフラビンが急激に分解消失するが、（＋）−カ
テキンを添加した区分２と共に（＋）−カテキン ３’
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドを添加した区分１は、
リボフラビンが殆ど分解されずに安定であることが判
る。即ち、（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グル
コピラノシドは、（＋）−カテキンと比べ、抗光酸化性
において全く遜色が無いことが判る。
【００２６】
【応用例２】 「（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シドの色沢安定性試験」純水を３ｍｌづつ２区分用意
し、第１区分に（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシドを１０００ｐｐｍとなるように、また
第２区分に（＋）−カテキンを１０００ｐｐｍの濃度と
なるようにそれぞれ溶解し、それぞれ疑似太陽光照射装
置（入江製作所社製、精密陽光恒温槽）により可視光線
１４６００ルクス、紫外線強度（３１０〜４００ｎｍ）
０．１２ｍＷ／ｃｍ2の条件で照射し、経時的にサンプ
ルの一部を採取しこれを４６０ｎｍの吸光度の増加によ
り着色の程度を測定した。その結果を図５に示す。
シドの色沢安定性試験」純水を３ｍｌづつ２区分用意
し、第１区分に（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−
グルコピラノシドを１０００ｐｐｍとなるように、また
第２区分に（＋）−カテキンを１０００ｐｐｍの濃度と
なるようにそれぞれ溶解し、それぞれ疑似太陽光照射装
置（入江製作所社製、精密陽光恒温槽）により可視光線
１４６００ルクス、紫外線強度（３１０〜４００ｎｍ）
０．１２ｍＷ／ｃｍ2の条件で照射し、経時的にサンプ
ルの一部を採取しこれを４６０ｎｍの吸光度の増加によ
り着色の程度を測定した。その結果を図５に示す。
【００２７】図５の結果から、（＋）−カテキンを溶解
した区分２は時間の経過と共に茶褐色に着色し、（＋）
−カテキンは色の安定性が非常に悪いが、これに対し
（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ドを添加した区分１は、７時間経過後も殆ど無色透明
で、色沢の安定性が非常に良好であることが判る。
した区分２は時間の経過と共に茶褐色に着色し、（＋）
−カテキンは色の安定性が非常に悪いが、これに対し
（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシ
ドを添加した区分１は、７時間経過後も殆ど無色透明
で、色沢の安定性が非常に良好であることが判る。
【００２８】
【応用例３】 「（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シドの水溶解性試験」（＋）−カテキン、及び（＋）−
カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドをそれ
ぞれ表１の各濃度となるように純水に溶解し、これを１
５℃の恒温室にて１５時間放置して、沈殿の有無を調べ
た。その結果を表１に示す。
シドの水溶解性試験」（＋）−カテキン、及び（＋）−
カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドをそれ
ぞれ表１の各濃度となるように純水に溶解し、これを１
５℃の恒温室にて１５時間放置して、沈殿の有無を調べ
た。その結果を表１に示す。
【００２９】表１の結果から、（＋）−カテキン ３’
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドは、（＋）−カテキン
に比べて溶解度が１０倍以上に増大し、実用に際して著
しく便利となることが判る。
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドは、（＋）−カテキン
に比べて溶解度が１０倍以上に増大し、実用に際して著
しく便利となることが判る。
【００３０】 注１．表中記号−は、沈殿を形成しない、＋は沈殿を形
成する、＋＋は沈殿が著しく形成する。
成する、＋＋は沈殿が著しく形成する。
【図１】（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシドの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（２００Ｍ
ＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6）を示す。
ピラノシドの1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（２００Ｍ
ＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6）を示す。
【図２】（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシドの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（５０Ｍ
ＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6）を示す。
ピラノシドの13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（５０Ｍ
ＨZ）（Ａｃｅｔｏｎｅ−ｄ6）を示す。
【図３】（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシドのマススペクトルを示す。
ピラノシドのマススペクトルを示す。
【図４】（＋）−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシドの抗光酸化性試験の結果を示す。
ピラノシドの抗光酸化性試験の結果を示す。
【図５】（＋）−カテキンと、本発明で得られる（＋）
−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドとの
色沢安定性を比較したグラフを示す。
−カテキン ３’−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドとの
色沢安定性を比較したグラフを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 関根 廣 千葉県野田市野田339番地 キッコーマン 株式会社内
Claims (1)
- 【請求項１】カテキン類とグルコース−１−リン酸また
はシュークロースとの混合液にシュークロースホスホリ
ラーゼを作用させることを特徴とするカテキン類配糖体
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03356836A JP3024848B2 (ja) | 1991-12-26 | 1991-12-26 | カテキン類配糖体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03356836A JP3024848B2 (ja) | 1991-12-26 | 1991-12-26 | カテキン類配糖体の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05176786A true JPH05176786A (ja) | 1993-07-20 |
| JP3024848B2 JP3024848B2 (ja) | 2000-03-27 |
Family
ID=18451014
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03356836A Expired - Lifetime JP3024848B2 (ja) | 1991-12-26 | 1991-12-26 | カテキン類配糖体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3024848B2 (ja) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008088047A1 (ja) * | 2007-01-19 | 2008-07-24 | Suntory Holdings Limited | フラボノイド類の配糖化方法 |
| WO2008088046A1 (ja) | 2007-01-19 | 2008-07-24 | Suntory Holdings Limited | 新規配糖化酵素及びそれをコードするポリヌクレオチド |
| US20100260913A1 (en) * | 2007-12-13 | 2010-10-14 | Cognis Ip Management Gmbh | Oxidative Stabilizing of Sterols and Sterol Esters |
| US8003150B2 (en) | 2006-05-19 | 2011-08-23 | Kraft Foods R & D, Inc. | Flavonoid sugar addition products, method for manufacture and use thereof |
| KR101374748B1 (ko) * | 2011-07-21 | 2014-03-17 | 경희대학교 산학협력단 | 아밀로수크라제를 이용한 카테킨 유도체의 제조방법 및 그로부터 제조된 카테킨 유도체 |
-
1991
- 1991-12-26 JP JP03356836A patent/JP3024848B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8003150B2 (en) | 2006-05-19 | 2011-08-23 | Kraft Foods R & D, Inc. | Flavonoid sugar addition products, method for manufacture and use thereof |
| EP2128265A1 (en) * | 2007-01-19 | 2009-12-02 | Suntory Holdings Limited | Method for glycosylation of flavonoid |
| JP2008174507A (ja) * | 2007-01-19 | 2008-07-31 | Suntory Ltd | フラボノイド類の配糖化方法 |
| WO2008088047A1 (ja) * | 2007-01-19 | 2008-07-24 | Suntory Holdings Limited | フラボノイド類の配糖化方法 |
| CN101605905A (zh) * | 2007-01-19 | 2009-12-16 | 三得利控股株式会社 | 类黄酮类的糖苷化方法 |
| WO2008088046A1 (ja) | 2007-01-19 | 2008-07-24 | Suntory Holdings Limited | 新規配糖化酵素及びそれをコードするポリヌクレオチド |
| US8278088B2 (en) | 2007-01-19 | 2012-10-02 | Suntory Holdings Limited | Polynucleotide encoding a polypeptide having glycosylation activity on a flavonoid |
| US8383384B2 (en) | 2007-01-19 | 2013-02-26 | Suntory Holdings Limited | Polypeptide having glycosylation activity on a flavonoid |
| EP2128265A4 (en) * | 2007-01-19 | 2013-07-03 | Suntory Holdings Ltd | PROCESS FOR GLYCOSYLATION OF FLAVONOID |
| EP2728008A1 (en) | 2007-01-19 | 2014-05-07 | Suntory Holdings Limited | Method for glycosylation of flavonoid compounds |
| US9364492B2 (en) | 2007-01-19 | 2016-06-14 | Suntory Holdings Limited | Method for glycosylation of flavonoid compounds |
| US20100260913A1 (en) * | 2007-12-13 | 2010-10-14 | Cognis Ip Management Gmbh | Oxidative Stabilizing of Sterols and Sterol Esters |
| KR101374748B1 (ko) * | 2011-07-21 | 2014-03-17 | 경희대학교 산학협력단 | 아밀로수크라제를 이용한 카테킨 유도체의 제조방법 및 그로부터 제조된 카테킨 유도체 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3024848B2 (ja) | 2000-03-27 |
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