JPH05133947A - 液体クロマトグラフイー用担体およびそれを用いた液体クロマトグラフイー法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 有機溶媒を使用せずに溶質を溶出・分離する
ことが可能であり、かつ生体関連物質を変性させること
なく分離することができる簡便な液体クロマトグラフィ
ー法を提供すること。 【構成】 ＬＣＳＴを有する水不溶化温度感応性高分子
化合物を含有する液体クロマトグラフィー用担体および
それを利用した液体クロマトグラフィー法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ＬＣＳＴを有する水不
溶化温度感応性高分子化合物を含有する液体クロマトグ
ラフィー用担体に関する。さらに詳しくは、温度を変化
させることによって親水的性質、疎水的性質を変化させ
ることが可能な液体クロマトグラフィー用担体に関す
る。また、該液体クロマトグラフィー用担体を用いた液
体クロマトグラフィー法に関する。

【０００２】

【従来の技術】液体クロマトグラフィ−はカラム中に充
填された担体中を溶質の混合相が移動する際にそれぞれ
の溶質と担体との相互作用の差異によって溶質を分離し
て溶出する技術である。相の移動は圧力を印加すること
によって行われる。溶質と担体との相互作用は物理的相
互作用と化学的相互作用に分類される。物理的相互作用
とは担体の物理的形状が溶質の形や大きさを認識するこ
とを意味し、化学的相互作用は溶質と担体と移動相の三
つの成分の間に働く化学的親和力、即ち、静電力、水素
結合力、双極子間力、ファンデルワールス力、疎水結合
力などによって代表される。

【０００３】一方、液体クロマトグラフィーの分離機構
を現象面から分類すると分子ふるい、分配、吸着の三つ
に大別される。分子ふるいが上記の物理的相互作用に対
応し、分配と吸着が化学的相互作用に対応する。本発明
の液体クロマトグラフィー用担体は後者の分配と吸着と
いう化学的相互作用を利用したものである。液体クロマ
トグラフィーにおける溶質の保持は溶質と担体間および
溶質と移動相間の親和力の強さのバランスによってコン
トロールされる。一般的に移動相よりも担体の方が極性
の強い場合を順相クロマトグラフィーと呼び、担体より
も移動相の方が極性が強い場合を逆相クロマトグラフィ
ーと呼ぶ。

【０００４】原則として、溶質が移動相よりも担体に親
和力が強い系を選択することがよい分離を得るために重
要であり、極性の強い溶質の場合には順相クロマトグラ
フィーが、非極性の場合には逆相クロマトグラフィーに
よる分離がそれぞれ適している。即ち、従来の液体クロ
マトグラフィー法では移動相として極性の強い水と弱い
有機溶剤あるいはその混合物が、また担体としては極性
の強い親水性あるいは電荷を有するもの、極性の弱い疎
水性のものがそれぞれ適宜、選択して使用されていてそ
の組み合わせ方が分離効率を大きく左右することがわか
っている。従来、使用されている担体としてはシリカゲ
ル系充填剤とポリマーゲル系充填剤の２種類に大別され
る。シリカゲル系充填剤は主として水系の極性溶媒を用
いたタンパク質などの生体関連化合物の逆相クロマトグ
ラフィー用に用いられてきた。特にシリカゲル表面に直
鎖のアルキル基（Ｃ₁₈、Ｃ₈、Ｃ₁）、フェニル基、シア
ノ基などの疎水性基が導入されたものが今日、最も一般
的に逆相クロマトグラフィー用担体として使用されてい
る。一方、ポリマーゲル系充填剤としてはポリスチレン
系ゲル、ポリメタクリル酸系ゲル、ポリ酢酸ビニル系ゲ
ル、ポリビニルアルコール系ゲル、デンプン系ゲルなど
があり、上記の順序で疎水性が低下する。いずれのポリ
マーゲルにも架橋構造が導入されている。さらに強い極
性を付与した順相クロマトグラフィー用にはゲルの表面
にポリエチレングリコールが導入されたもの、水酸基が
導入されたものがそれぞれ開発されている。一方、逆相
クロマトグラフィー用としてゲル表面に疎水性の強い直
鎖アルキル基、フェニル基などが導入されたものが開発
されている。

【０００５】一方、移動相としてはｎ−ヘキサン、シク
ロヘキサン、ベンゼン、四塩化炭素などの非極性溶媒が
主として順相クロマトグラフィー用として、水、メタノ
ール、アセトニトリルなどの極性溶媒が主として逆相ク
ロマトグラフィー用としてそれぞれ使用されている。近
年では特に逆相クロマトグラフィーの場合に担体に疎水
的結合によって吸着し溶離の困難な系に溶離を促進する
ための移動相中の水に対する有機溶媒含有量を連続的に
増加させて溶離するというグラジェント溶出法が有効で
あることがわかり、汎く行われるようになってきた。特
にタンパク質のように生体関連物質には水溶液中で担体
と疎水結合を形成し溶離の困難なものが多く上述のグラ
ジェント溶出法は非常に有効であることがわかってき
た。しかしながらタンパク質のような高次構造を有しか
つその構造が活性と密接に関連している化合物の場合は
有機溶剤の添加は致命的な活性の失活を誘発するという
重大な問題点があることがわかってきた。特に今日、生
体関連化合物の分離において最も効果的な手段である逆
相クロマトグラフィーにおいてこの問題は致命的であ
り、従来、開発されてきた移動相あるいは充填剤などに
関する液体クロマトグラフィー用技術ではこの問題の解
決は困難であった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は上述し
たように従来の液体クロマトグラフィーにおける問題点
を解決することにある。即ち特に、逆相クロマトグラフ
ィーにおいて、溶質の担体からの溶離を促進するために
添加する有機溶媒がタンパク質などの生体関連化合物の
変性を誘発するという問題点を解決し、温度を変えて疎
水性度あるいは親水性度を変化させることで分離および
溶離を可能にする液体クロマトグラフィー用担体および
それを用いた液体クロマトグラフィー法を提供すること
にある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】上記の目的は新規な液体
クロマトグラフィー用担体およびそれを用いた新しい液
体クロマトグラフィー法を提供することによって達成さ
れた。

【０００８】本発明はＬＣＳＴを有する水不溶化温度感
応性高分子化合物を含有することを特徴とする液体クロ
マトグラフィー用担体およびそれを用いた液体クロマト
グラフィー法からなる。ここでＬＣＳＴ（Lower Critic
al Solution Temperature）とは温度感応性高分子化合
物の水和と脱水和の転移温度をいう。

【０００９】本発明の液体クロマトグラフィー用担体は
ＬＣＳＴを有する水不溶化温度感応性高分子化合物を含
有するものであり、液体クロマトグラフィーに有効に使
用しうるものであれば、その構造、形状は特に制限され
ない。

【００１０】ＬＣＳＴを有する温度感応性高分子化合物
は水の共存下でＬＣＳＴ以上の温度では疎水的性質を示
し、ＬＣＳＴ以下に温度を下げると親水的性質に変化す
る。その疎水性と親水性の間の変化は可逆的である。

【００１１】温度感応性高分子化合物の状態変化は、水
和と脱水和によるものとされている。これについては、
Haskins, M., et al., J. Macromol, Sci.-Chem.,A2
(8),1441, 1968 に、該高分子化合物のひとつであるポ
リ−Ｎ−イソプロピルアクリルアミド（以下"ＰＮＩＰ
ＡＡｍ"）を例に挙げて説明がなされている。ＰＮＩＰ
ＡＡｍは水に対する溶解度温度係数が負の高分子化合物
である。そして、低温においては、ＰＮＩＰＡＡｍ分子
と水分子との水素結合に依存する水和物（オキソニウム
ヒドロキシド）が生成している。しかし、これはＬＣＳ
Ｔ以上に温度を上げることによって分解し、脱水和する
ため、結果としてＰＮＩＰＡＡｍ分子同士が凝集して沈
殿するとされている。

【００１２】上記変化は該温度感応性高分子化合物に架
橋構造を導入したもの、また該温度感応性高分子化合物
をグラフト重合したものについても観察される。

【００１３】液体クロマトグラフィー用充填剤として該
温度感応性高分子化合物を含有する担体を用いると充填
剤の疎水的性質あるいは親水的性質、即ち極性を温度に
よって可逆的に変えて溶質の分離を実施することが可能
である。ＬＣＳＴ以下では該充填剤は極性を有しＬＣＳ
Ｔ以上に温度が上昇すると該充填剤の極性が低下し逆相
クロマトグラフィーに変化する。

【００１４】本発明の担体のこのような性質を利用する
ことによって、新しい液体クロマトグラフィー法が開発
されたということができる。

【００１５】本発明の液体クロマトグラフィー法は、Ｌ
ＣＳＴを有する水不溶化温度感応性高分子化合物を含有
する担体に試料をチャージした後、ＬＣＳＴの上下で経
時的に温度を変化させることを特徴とする。温度変化
は、ＬＣＳＴ以上の温度からＬＣＳＴ以下の温度への変
化であっても、ＬＣＳＴ以下の温度からＬＣＳＴ以上の
温度への変化であってもよい。また、いったんＬＣＳＴ
を経る温度変化をさせた後、再度ＬＣＳＴを経る温度変
化をさせてもよい。

【００１６】例えば、まずＬＣＳＴ以上の温度で逆相ク
ロマトグラフィーを行うことによって溶質を疎水的結合
によって担体上に保持し、次に温度をＬＣＳＴ以下に下
げることによってこの溶質を溶離することができる。本
発明の方法によれば、溶離に際し有機溶媒を印加する必
要がない。このため、従来から問題になっていた変性等
が生じないため、本発明の方法はタンパク質などの生体
関連化合物の分離にとくに有用である。また、充填剤の
温度をＬＣＳＴ以上の温度から経時的にＬＣＳＴ以下の
温度に低下させることによって、水と有機溶媒の混合組
成比を連続的に変えて溶出する従来のグラジェント溶出
法と同様の効果を発揮させることも可能である。この場
合、担体の疎水性を広い温度範囲にわたって連続的に変
化させることが好ましく、これはＬＣＳＴの異なる複数
の水不溶化高分子化合物を組み合わせて用いることによ
り達成される。

【００１７】本発明の方法は、カラムの温度を変化させ
るだけでよいため操作が簡便であり、有機溶媒を使用し
ないですむため生体関連物質の変性のおそれがなく、し
かも、展開液として用いる混合溶媒の混合比を連続的に
変化させるという従来法の煩わしい操作を必要としない
点で極めて有用である。

【００１８】また、本発明の別の実施態様として、該担
体を充填したカラムの試料入口端と試料出口端に温度勾
配を作り分離を実施することも可能である。即ち、入口
端をＬＣＳＴ以下の温度に、出口端をＬＣＳＴ以上の温
度に設定すると充填剤の性質は入口側では極性が強く、
出口側に行くにしたがって非極性になり、極性の勾配を
作ることが可能である。また、上記と全く逆の勾配を作
ることも可能である。上記したような極性に勾配を有し
たカラムを用いることによって従来、分離が困難であっ
た系でも分離が可能になると考えられる。このため、本
発明のクロマトグラフィー法の応用範囲は極めて広く、
本発明の実用性、有効性は極めて高いものである。

【００１９】本発明の担体として使用するに先立って水
不溶化される温度感応性高分子化合物としては、ポリＮ
置換アクリルアミド誘導体、ポリＮ置換メタアクリルア
ミド誘導体およびこれらの共重合体、ポリビニルメチル
エーテル、ポリエチレンオキサイド、エーテル化メチル
セルロース、ポリビニルアルコール部分酢化物などが挙
げられる。特に好ましいのは、ポリＮ置換アクリルアミ
ド誘導体またはポリＮ置換メタアクリルアミド誘導体ま
たはこれらの共重合体、ポリビニルメチルエーテル、ポ
リビニルアルコール部分酢化物である。

【００２０】好ましい高分子化合物を以下にＬＣＳＴが
低い順に列挙する。

【００２１】ポリーＮ−アクリロイルピペリジン；ポリ
ーＮ−ｎ−プロピルメタアクリルアミド；ポリーＮ−イ
ソプロピルアクリルアミド；ポリーＮ,Ｎ−ジエチルア
クリルアミド；ポリーＮ−イソプロピルメタアクリルア
ミド；ポリーＮ−シクロプロピルアクリルアミド；ポリ
ーＮ−アクリロイルピロリジン；ポリーＮ,Ｎ−エチル
メチルアクリルアミド；ポリーＮ−シクロプロピルメタ
アクリルアミド；ポリーＮ−エチルアクリルアミド；上
記の高分子は単独でも、他の単量体と共重合してもよ
い。共重合する単量体としては、親水性単量体、疎水性
単量体のいずれも用いることができる。一般的には親水
性単量体と共重合するとＬＣＳＴは上昇し、疎水性単量
体と共重合するとＬＣＳＴは下降する。従って、これら
を選択することによっても所望のＬＣＳＴを有する高分
子化合物を得ることができる。

【００２２】親水性単量体としては、Ｎ−ビニルピロリ
ドン、ビニルピリジン、アクリルアミド、メタアクリル
アミド、Ｎ−メチルアクリルアミド、ヒドロキシエチル
メタアクリレート、ヒドロキシエチルアクリレート、ヒ
ドロキシメチルメタアクリレート、ヒドロキシメチルア
クリレート、酸性基を有するアクリル酸、メタアクリル
酸およびそれらの塩、ビニルスルホン酸、スチルスルホ
ン酸など、並びに塩基性基を有するＮ,Ｎ−ジメチルア
ミノエチルメタクリレート、Ｎ,Ｎ−ジエチルアミノエ
チルメタクリレート、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノプロピル
アクリルアミドおよびそれらの塩などが挙げられるがこ
れらに限定されるものではない。

【００２３】一方、疎水性単量体としては、エチルアク
リレート、メチルメタクリレート、ｎ−ブチルアクリレ
ート、ｎ−ブチルメタクリレート、グリシジルメタクリ
レート等のアクリレートまたはメタクリレート誘導体、
Ｎ−ｎ−ブチルアクリルアミドまたはメタアクリルアミ
ドなどのＮ置換アルキルアクリルアミドまたはメタアク
リルアミド誘導体、塩化ビニル、アクリロニトリル、ス
チレン、酢酸ビニルなどが挙げられるが、これらに限定
されるものではない。

【００２４】上記温度感応性高分子化合物を水不溶化す
る方法の一つとして、該温度感応性高分子化合物に架橋
構造を導入する方法がある。

【００２５】例えば、上記温度感応性高分子化合物自身
から液体クロマトグラフィー用担体を作製する場合、好
ましい方法として懸濁重合法あるいは分散重合法を行
う。分散媒の種類、粘度、撹拌速度、分散安定剤の種
類、添加溶媒などによって担体の粒子径および細孔径な
どを調節することが可能である。粒子径としては１〜１
００μm、好ましくは２〜１０μm；細孔径としては５０
〜５０００Å、好ましくは１００〜５００Åである。

【００２６】得られた高分子化合物に光、電子線、γ線
照射を行うことにより分子間に架橋を形成することがで
きる。

【００２７】温度感応性高分子化合物を水不溶化する別
の方法として、該高分子化合物の形成に用いられる単量
体とこれと共重合しうる多官能性単量体、例えば、Ｎ,
Ｎ−メチレンビスアクリルアミド、ヒドロキシエチルジ
メタクリレート、ジビニルベンゼン等を常法により共重
合させ架橋構造を有する共重合体を作製することができ
る。

【００２８】温度感応性高分子化合物を水不溶化する更
に別の方法として、該高分子化合物の水溶液を支持体に
塗布し、次いで塗布膜に光、電子線、γ線照射を行うこ
とにより分子間に架橋を形成することができる。

【００２９】温度感応性高分子化合物を水不溶化する別
の方法として、前記温度感応性高分子化合物の形成に用
いられる少なくとも一種の単量体を支持体にグラフト重
合することができる。この場合、通常用いられる方法の
うち、支持体の材質、形状等を考慮した最適の方法が選
択される。例えば、低温プラズマ重合法は支持体の表面
のみにグラフト重合が可能であり、支持体のバルクの性
質を損なうことが少ない。また、オゾン酸化法、セリウ
ムイオン法等の通常のグラフト重合法も用いることがで
きる。

【００３０】温度感応性高分子化合物を水不溶化する他
の方法として、前記温度感応性高分子化合物を支持体に
グラフトすることもできる。

【００３１】本発明において使用できる支持体として
は、今日液体クロマトグラフィー用充填剤として使用さ
れているシリカゲル、ポリマーゲルおよびポリスチレ
ン、ポリメチルメタクリレート、ポリ酢酸ビニル、ポリ
ビニルアルコール等のポリマーを挙げることができる
が、これらに限定されるものではない。シリカゲル、ポ
リマーゲル等の多孔質支持体を使用する場合、あらかじ
め所望の孔径、粒径を有するものを用意することが好ま
しい。また、これらの多孔質支持体に温度感応性高分子
化合物をグラフトする場合、支持体の細孔をふさがない
よう該温度感応性高分子化合物の分子量は、数平均分子
量が５００以上５０００以下であることが好ましい。こ
のような分子量の制御された高分子化合物を支持体に導
入するには、連鎖移動反応によって高分子末端に反応活
性な官能基を導入した分子量の制御された高分子（オリ
ゴマー）を合成し、これとあらかじめ高分子末端の官能
基と反応しうる官能基を表面に導入した支持体とを反応
結合させればよい。

【００３２】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明をさらに具体的
に説明するが、本発明の範囲は特許請求の範囲の項の記
載により定まるものであり、以下の実施例により制限を
受けるものではない。

【００３３】実施例１ スチレンとジビニルベンゼンの共重合体であるポリスチ
レンゲル（PolymerLaboratories社製, "PLRP-S300", 平
均粒子径１０μm，平均細孔径３００Å）約１０ｇを内
部電極型のプラズマ照射装置（サムコインターナショナ
ル（株））のチェンバー内に挿入しチェンバー内を約
０.８Torrまで排気した後アルゴンガスを流量、約２０m
l／分で導入し出力５０Watt、周波数１３.５６MHzで５
０秒間、ゲルを撹拌下にプラズマ照射を行った後にＮ−
イソプロピルアクリルアミド（以下"ＮＩＰＡＡｍ"）モ
ノマーの１０Ｗ／Ｖ％水溶液をチェンバー内に導入し該
ゲルを該溶液中に浸漬し常温で１８時間グラフト重合を
行った。モノマー水溶液をチェンバー内に導入する前に
アルゴンによって充分バブリングすることによって水溶
液中に溶存している空気を完全に除去した。グラフト重
合を行ったゲルは蒸留水で充分洗浄し残存モノマーを完
全に除去した。

【００３４】該グラフト重合ゲルを内径４.６mm、長さ１
５cmのミニカラム中に充填し、試料としてオボアルブミ
ン５μgの水溶液を流速１ml／分で注入し３７℃で溶離
を行った。検出は２８０nmの吸光度測定によって行った
が上記の条件ではオボアルブミンの溶離は認められなか
った。

【００３５】一方、カラム温度を３７℃から常温にまで
約３０分間かかって連続的に低下させながら上記と同様
の条件で溶離を行ったところ、オボアルブミンの溶離が
吸光度測定により認められた。

【００３６】本実験事実は担体に強固に保持されたオボ
アルブミンがカラムの温度を低下させるだけで容易に溶
離することを示している。しかも、従来法と異なりオボ
アルブミンを何ら変性させることなく分離することがで
きることも示している。

【００３７】実施例２ １１.３ｇ（０.１モル）のＮＩＰＡＡｍ、３.０８ｇ
（０.０４モル）の２−メルカプトエチルアミン、０.８
１ｇ（０.００５モル）のアゾビスイソブチロニトリル
を４００mlのベンゼンに溶解し、窒素下 ６０℃で８時
間反応させた。反応液を濾過後、残渣をテトラヒドロフ
ランに再溶解し、エーテルに再沈殿させた。沈殿を分離
し冷水に溶解後食塩を加えて４０℃に加温して析出沈殿
を回収、乾燥した。乾燥沈殿をクロロホルムに溶解し濾
過後、溶媒を除去して一級アミノ基を末端に有するＮＩ
ＰＡＡｍのオリゴマ−を得た。一級アミノ基の定量から
数平均分子量は約２,０００であった。

【００３８】表面に一級アミノ基を有するシリカゲル
（富士デヴィソン化学（株）、"CHROMATOREXNH"、 平均
粒子径１０μm、平均細孔径３００Å）約１０ｇに蒸留
水５０mlと２５w/v％グルタルアルデヒド溶液２mlを加
え、室温で１時間撹拌した。ゲルを蒸留水で十分洗浄
し、過剰のグルタルアルデヒドを除去した後、上記ＮＩ
ＰＡＡｍのオリゴマー４.８ｇと蒸留水５０mlを加え、
室温で終夜撹拌した。さらにイソプロピルアミンを０.
５ml加えて、残存アルデヒド基を不活化した後、ゲルを
蒸留水で十分洗浄し、ＮＩＰＡＡｍのオリゴマーをグラ
フトしたシリカゲルを得た。

【００３９】該シリカゲルを実施例１で使用したものと
同一のカラムに充填し、実施例１と同様の実験を行い、
同様の結果を得た。

【００４０】実施例３ １０.７ｇ（０.０９５モル）のＮＩＰＡＡｍ、０.７１
ｇ（０.００５モル）のｎ−ブチルメタクリレート（以
下"ＢＭＡ"）、３.０８ｇ（０.０４モル）の２−メルカ
プトエチルアミン、０.８１ｇ（０.００５モル）のアゾ
ビスイソブチロニトリルを４００mlのベンゼンに溶解
し、窒素下６０℃で８時間反応させた。反応液を濾過
後、残渣をテトラヒドロフランに再溶解し、エーテルに
再沈殿させた。沈殿を分離し冷水に溶解後食塩を加えて
４０℃に加温して析出沈殿を回収、乾燥した。乾燥沈殿
をクロロホルムに溶解し濾過後、溶媒を除去して一級ア
ミノ基を末端に有するＮＩＰＡＡｍとＢＭＡとの共重合
体のオリゴマーを得た。一級アミノ基の定量から数平均
分子量は約３,０００であった。

【００４１】実施例２に使用したものと同一の表面に一
級アミノ基を有するシリカゲル約１０ｇに蒸留水５０ml
と２５w/v％グルタルアルデヒド溶液２mlを加え、室温
で１時間撹拌した。ゲルを蒸留水で十分洗浄し、過剰の
グルタルアルデヒドを除去した後、上記ＮＩＰＡＡｍと
ＢＭＡとの共重合体のオリゴマー３.６ｇ、実施例２で
得られたＮＩＰＡＡｍのオリゴマー２.４ｇおよび蒸留
水５０mlを加え、室温で終夜撹拌した。さらにイソプロ
ピルアミンを０.５ml加えて、残存アルデヒド基を不活
化した後、ゲルを蒸留水で十分洗浄し、ＬＣＳＴの異な
る温度感応性高分子、ＮＩＰＡＡｍのオリゴマー（ＬＣ
ＳＴ約３０℃）とＮＩＰＡＡｍとＢＭＡとの共重合体オ
リゴマー（ＬＣＳＴ約２５℃）とをグラフトしたシリカ
ゲルを得た。

【００４２】該シリカゲルを実施例１で使用したものと
同一のカラムに充填し、実施例１と同様にしてオボアル
ブミンとリゾチームの分離を行った。カラム温度を３７
℃から１５℃まで約３０分間かけて連続的に低下させ、
蛋白の溶離を行ったところ、３０℃以上ではいずれの蛋
白の溶離も認められなかったが、３０℃から２５℃の間
でオボアルブミン、２５℃から２０℃の間でリゾチーム
の溶離がそれぞれ認められた。

【００４３】

【発明の効果】従来の液体クロマトグラフィーにおける
担体に保持された溶質を担体から溶出、分離するために
使用される有機溶媒は、タンパク質などを中心とした生
体関連物質を変性させてしまうという問題をかかえてい
た。この事実は、特に生体関連物質の分離の有効な手段
である逆相クロマトグラフィーの重大な欠陥であった。
温度によって極性が変化する本発明の担体を用いた液体
クロマトグラフィーによれば、有機溶媒を使用すること
なく溶質を溶出、分離することが可能でありかつ生体関
連物質を変性させることなく分離することが可能であ
る。また、従来のグラジェント溶出法のように複雑な有
機溶媒混合システムなどを必要としない点にも優れた利
点がある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ブルース・ロリン・コールエル アメリカ合衆国メイン州03908，サウス・ バーウイツク，プレザント・ストリート 36

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ＬＣＳＴを有する水不溶化温度感応性高分
   子化合物を含有する液体クロマトグラフィー用担体。
2. 【請求項２】前記温度感応性高分子化合物が、架橋構造
   を有することを特徴とする請求項１の液体クロマトグラ
   フィー用担体。
3. 【請求項３】前記温度感応性高分子化合物が、ポリＮ置
   換アクリルアミド誘導体、ポリＮ置換メタアクリルアミ
   ド誘導体、これらの共重合体、ポリビニルメチルエーテ
   ルまたはポリビニルアルコール部分酢化物からなる群よ
   り選ばれることを特徴とする請求項２の液体クロマトグ
   ラフィー用担体。
4. 【請求項４】前記温度感応性高分子化合物が、支持体に
   担持されていることを特徴とする請求項１のクロマトグ
   ラフィー用担体。
5. 【請求項５】前記温度感応性高分子化合物が、支持体に
   グラフトされていることを特徴とする請求項４の液体ク
   ロマトグラフィー用担体。
6. 【請求項６】前記支持体が、シリカゲルおよびポリマー
   ゲルからなる群より選ばれることを特徴とする請求項４
   の液体クロマトグラフィー用担体。
7. 【請求項７】前記温度感応性高分子化合物の数平均分子
   量が５００乃至５０００であることを特徴とする請求項
   ６の液体クロマトグラフィー用担体。
8. 【請求項８】前記温度感応性高分子化合物が、互いに異
   なるＬＣＳＴを有する２種以上の水不溶化温度感応性高
   分子化合物の組み合わせよりなることを特徴とする請求
   項１の液体クロマトグラフィー用担体。
9. 【請求項９】請求項１の液体クロマトグラフィー用担体
   に試料をチャージした後、ＬＣＳＴの上下で経時的に温
   度を変化させることを特徴とする液体クロマトグラフィ
   ー法。
10. 【請求項１０】ＬＣＳＴ以下の温度からＬＣＳＴ以上の
    温度にわたる温度勾配をカラム入口端とカラム出口端間
    に有することを特徴とする請求項７の液体クロマトグラ
    フィー法。