JPH0510951A - 免疫学的測定装置 - Google Patents
免疫学的測定装置Info
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- JPH0510951A JPH0510951A JP16588591A JP16588591A JPH0510951A JP H0510951 A JPH0510951 A JP H0510951A JP 16588591 A JP16588591 A JP 16588591A JP 16588591 A JP16588591 A JP 16588591A JP H0510951 A JPH0510951 A JP H0510951A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 液体試料中の特定成分を、簡便な操作で、再
現性良く、正確に定量できる技術を提供することであ
る。 【構成】 抗体（又は抗原）が吸水性の素材に固定化さ
れた第１のテープ状体と、発色前駆体が介在させられた
吸水性の素材を用いて構成した第２のテープ状体と、前
記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定の位置
で分離する分離手段と、前記第１のテープ状体と第２の
テープ状体とを所定の位置で接触させる接触手段と、前
記第１のテープ状体及び第２のテープ状体を走行させる
走行手段とを具備する免疫学的測定装置。
現性良く、正確に定量できる技術を提供することであ
る。 【構成】 抗体（又は抗原）が吸水性の素材に固定化さ
れた第１のテープ状体と、発色前駆体が介在させられた
吸水性の素材を用いて構成した第２のテープ状体と、前
記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定の位置
で分離する分離手段と、前記第１のテープ状体と第２の
テープ状体とを所定の位置で接触させる接触手段と、前
記第１のテープ状体及び第２のテープ状体を走行させる
走行手段とを具備する免疫学的測定装置。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫学的測定装置に関
するものである。
するものである。
【０００２】
【発明の背景】生物学的流体試料中に極微量含有される
物質を検出する方法として、各種の分析法が開発されて
来ている。この分析法の一つとして、免疫反応をその原
理とするものがある。そして、この原理を用いた測定法
として種々のものが開発され、精度の高いものとして知
られている。すなわち、ＢｅｒｓｏｎとＹａｌｌｏｗが
放射性同位元素Ｉで標識したウシインシュリンと糖尿病
患者血清中の抗インシュリン抗体を用いて血清中のイン
シュリンを測定することに成功して以来、ラジオアイソ
トープを用いた免疫測定法が広く用いられて来た。そし
て、これ以後、標識物質として放射性同位元素以外のも
のも種々開発されて来た。例えば、酵素、酵素基質、補
酵素、酵素阻害物質、バクテリオファージ、循環反応
体、金属及び有機金属の錯体、有機補欠分子族、化学発
光性反応体及び螢光性分子等が挙げられる。
物質を検出する方法として、各種の分析法が開発されて
来ている。この分析法の一つとして、免疫反応をその原
理とするものがある。そして、この原理を用いた測定法
として種々のものが開発され、精度の高いものとして知
られている。すなわち、ＢｅｒｓｏｎとＹａｌｌｏｗが
放射性同位元素Ｉで標識したウシインシュリンと糖尿病
患者血清中の抗インシュリン抗体を用いて血清中のイン
シュリンを測定することに成功して以来、ラジオアイソ
トープを用いた免疫測定法が広く用いられて来た。そし
て、これ以後、標識物質として放射性同位元素以外のも
のも種々開発されて来た。例えば、酵素、酵素基質、補
酵素、酵素阻害物質、バクテリオファージ、循環反応
体、金属及び有機金属の錯体、有機補欠分子族、化学発
光性反応体及び螢光性分子等が挙げられる。
【０００３】このような免疫学的測定法は、均一免疫測
定法と非均一免疫測定法に大別される。すなわち、抗原
抗体反応生成物（Ｂｏｕｎｄ体）と非反応物（Ｆｒｅｅ
体）との分離（Ｂ／Ｆ分離）が必要な非均一免疫測定法
と、Ｂ／Ｆ分離の必要のない均一免疫測定法とに大別さ
れる。このうち、測定対象物質が高分子である場合に
は、Ｂ／Ｆ分離が必要な非均一免疫測定法が利用されて
いる。
定法と非均一免疫測定法に大別される。すなわち、抗原
抗体反応生成物（Ｂｏｕｎｄ体）と非反応物（Ｆｒｅｅ
体）との分離（Ｂ／Ｆ分離）が必要な非均一免疫測定法
と、Ｂ／Ｆ分離の必要のない均一免疫測定法とに大別さ
れる。このうち、測定対象物質が高分子である場合に
は、Ｂ／Ｆ分離が必要な非均一免疫測定法が利用されて
いる。
【０００４】ところで、この非均一免疫測定法は洗浄操
作、試薬の調整が必要であること、標識物質、基質、反
応停止液等の添加が必要であることから操作が煩雑であ
ること等の問題がある。これらの問題点に対して各種の
技術が提案されている。例えば、特開昭６４−６３８６
３号公報、特開昭６４−６３８６４号公報、特開平２−
８３４４号公報においては、乾式分析素子を用いること
により操作性はかなり簡便になっているものの、簡便性
に対する要求は高まる一方であり、改善が待たれてい
る。
作、試薬の調整が必要であること、標識物質、基質、反
応停止液等の添加が必要であることから操作が煩雑であ
ること等の問題がある。これらの問題点に対して各種の
技術が提案されている。例えば、特開昭６４−６３８６
３号公報、特開昭６４−６３８６４号公報、特開平２−
８３４４号公報においては、乾式分析素子を用いること
により操作性はかなり簡便になっているものの、簡便性
に対する要求は高まる一方であり、改善が待たれてい
る。
【０００５】
【発明の開示】本発明の目的は、液体試料中の特定成分
を、簡便な操作で、再現性良く、正確に定量できる技術
を提供することである。この本発明の目的は、抗体（又
は抗原）が吸水性の素材に固定化された第１のテープ状
体と、発色前駆体が介在させられた吸水性の素材を用い
て構成した第２のテープ状体と、前記第１のテープ状体
と第２のテープ状体とを所定の位置で分離する分離手段
と、前記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定
の位置で接触させる接触手段と、前記第１のテープ状体
及び第２のテープ状体を走行させる走行手段とを具備す
ることを特徴とする免疫学的測定装置によって達成され
る。
を、簡便な操作で、再現性良く、正確に定量できる技術
を提供することである。この本発明の目的は、抗体（又
は抗原）が吸水性の素材に固定化された第１のテープ状
体と、発色前駆体が介在させられた吸水性の素材を用い
て構成した第２のテープ状体と、前記第１のテープ状体
と第２のテープ状体とを所定の位置で分離する分離手段
と、前記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定
の位置で接触させる接触手段と、前記第１のテープ状体
及び第２のテープ状体を走行させる走行手段とを具備す
ることを特徴とする免疫学的測定装置によって達成され
る。
【０００６】又、抗体（又は抗原）が吸水性の素材に固
定化されると共に、標識抗体（又は抗原）が介在させら
れた第１のテープ状体と、発色前駆体が介在させられた
吸水性の素材を用いて構成した第２のテープ状体と、前
記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定の位置
で分離する分離手段と、前記第１のテープ状体と第２の
テープ状体とを所定の位置で接触させる接触手段と、前
記第１のテープ状体及び第２のテープ状体を走行させる
走行手段とを具備することを特徴とする免疫学的測定装
置によって達成される。
定化されると共に、標識抗体（又は抗原）が介在させら
れた第１のテープ状体と、発色前駆体が介在させられた
吸水性の素材を用いて構成した第２のテープ状体と、前
記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定の位置
で分離する分離手段と、前記第１のテープ状体と第２の
テープ状体とを所定の位置で接触させる接触手段と、前
記第１のテープ状体及び第２のテープ状体を走行させる
走行手段とを具備することを特徴とする免疫学的測定装
置によって達成される。
【０００７】本発明の免疫学的測定装置による測定試料
としてはあらゆる形態の溶液、コロイド溶液などが使用
しうるが、好ましくは生物由来の試料、例えば血液、血
漿、血清、脳脊髄液、唾液、羊水、乳、尿、汗、肉汁等
が挙げられる。本発明に用いられる抗体（又は抗原）の
標識物質として酵素、酵素基質、補酵素、酵素阻害物
質、バクテリオファージ、循環反応体、金属及び有機金
属の錯体、有機補欠分子族、化学発光性反応体及び螢光
性分子等が挙げられるが、例えばβ−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、グ
ルコースオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナー
ゼ、アミラーゼ等の酵素が好ましい。これらの酵素を標
識物質とする場合、酵素反応系、発色系は公知のものを
使用できる。具体的には、特開昭６１−２９２０６０号
公報、特開昭６２−９０５３９号公報、特開昭６３−１
３１０６２号公報、特開昭６３−４５５６２号公報、特
願昭６３−２１９８９３号明細書に記載の物質（物質
群）が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。そして、これら標識物質の抗体（抗原）への結合
は、当業者間で知られている公知の試薬と方法で行うこ
とができ、例えば石川 栄治、河合 忠、宮井 潔 編
「酵素免疫測定法（第２版）、医学書院、１９７８年」
や日本臨床病理学会編「臨床病理」臨時増刊特集第５３
号「臨床検査の為のイムノアッセイ−技術と応用−、臨
床病理刊行会、１９８３年」などに記載された方法を参
考にすることができる。
としてはあらゆる形態の溶液、コロイド溶液などが使用
しうるが、好ましくは生物由来の試料、例えば血液、血
漿、血清、脳脊髄液、唾液、羊水、乳、尿、汗、肉汁等
が挙げられる。本発明に用いられる抗体（又は抗原）の
標識物質として酵素、酵素基質、補酵素、酵素阻害物
質、バクテリオファージ、循環反応体、金属及び有機金
属の錯体、有機補欠分子族、化学発光性反応体及び螢光
性分子等が挙げられるが、例えばβ−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、グ
ルコースオキシダーゼ、グルタメートデヒドロゲナー
ゼ、アミラーゼ等の酵素が好ましい。これらの酵素を標
識物質とする場合、酵素反応系、発色系は公知のものを
使用できる。具体的には、特開昭６１−２９２０６０号
公報、特開昭６２−９０５３９号公報、特開昭６３−１
３１０６２号公報、特開昭６３−４５５６２号公報、特
願昭６３−２１９８９３号明細書に記載の物質（物質
群）が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。そして、これら標識物質の抗体（抗原）への結合
は、当業者間で知られている公知の試薬と方法で行うこ
とができ、例えば石川 栄治、河合 忠、宮井 潔 編
「酵素免疫測定法（第２版）、医学書院、１９７８年」
や日本臨床病理学会編「臨床病理」臨時増刊特集第５３
号「臨床検査の為のイムノアッセイ−技術と応用−、臨
床病理刊行会、１９８３年」などに記載された方法を参
考にすることができる。
【０００８】酵素標識抗体（又は抗原）は、免疫反応時
に第１のテープ状体に存在しておれば良く、この点から
液体試料の添加時に加えられても良いが、予め第１のテ
ープ状体に介在させられていることが、測定作業の簡便
性から好ましい。本発明で使用される抗体は、その由来
を特に限定されるものではなく、哺乳動物等に抗原を投
与、免疫して得られる抗血清、腹水液をそのままか、あ
るいは従来公知の方法である硫酸ナトリウム沈澱法、硫
酸アンモニウム沈澱法、セファデックスゲルによるゲル
濾過法、イオン交換セルロースクロマトグラフィ法、電
気泳動法等（右田俊介偏「免疫化学」中山書店ｐｐ７４
〜８８参照）で精製して用いることができる。あるい
は、抗原で感染した哺乳動物など（例えばマウス）の脾
臓細胞や骨髄腫細胞（ミエローマ）から雑種細胞（ハイ
ブリドーマ）を得てモノクローナル抗体を作成し、これ
を特定成分と特異的に結合しうる物質として使用すると
特異性が向上し、好ましい。又、これらの抗体はＩｇ
Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ各分画を用いるこ
とができ、或いはこれらの抗体を酵素処理してＦａｂ、
Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ’）2 といった活性抗体フラグメ
ントにして使用しても良い。さらに、これらの抗体は単
一で使用しても、複数の抗体を組み合わせて使用しても
良い。
に第１のテープ状体に存在しておれば良く、この点から
液体試料の添加時に加えられても良いが、予め第１のテ
ープ状体に介在させられていることが、測定作業の簡便
性から好ましい。本発明で使用される抗体は、その由来
を特に限定されるものではなく、哺乳動物等に抗原を投
与、免疫して得られる抗血清、腹水液をそのままか、あ
るいは従来公知の方法である硫酸ナトリウム沈澱法、硫
酸アンモニウム沈澱法、セファデックスゲルによるゲル
濾過法、イオン交換セルロースクロマトグラフィ法、電
気泳動法等（右田俊介偏「免疫化学」中山書店ｐｐ７４
〜８８参照）で精製して用いることができる。あるい
は、抗原で感染した哺乳動物など（例えばマウス）の脾
臓細胞や骨髄腫細胞（ミエローマ）から雑種細胞（ハイ
ブリドーマ）を得てモノクローナル抗体を作成し、これ
を特定成分と特異的に結合しうる物質として使用すると
特異性が向上し、好ましい。又、これらの抗体はＩｇ
Ｇ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ各分画を用いるこ
とができ、或いはこれらの抗体を酵素処理してＦａｂ、
Ｆａｂ’又はＦ（ａｂ’）2 といった活性抗体フラグメ
ントにして使用しても良い。さらに、これらの抗体は単
一で使用しても、複数の抗体を組み合わせて使用しても
良い。
【０００９】本発明の免疫学的測定装置による反応型式
としては、競合法、２抗体法、サンドイッチ法などが挙
げられるが、特に限定はされない。又、他の生物活性物
質（例えば、ビオチン、アビジン）を利用した免疫測定
方法も適用できる。本発明で使用する抗原は特異抗体と
反応するものであり、ハプテン及びその誘導体を含有す
る。
としては、競合法、２抗体法、サンドイッチ法などが挙
げられるが、特に限定はされない。又、他の生物活性物
質（例えば、ビオチン、アビジン）を利用した免疫測定
方法も適用できる。本発明で使用する抗原は特異抗体と
反応するものであり、ハプテン及びその誘導体を含有す
る。
【００１０】抗体（又は抗原）は第１のテープ状体に固
定化される。この第１のテープ状体は吸水性の材料が用
いられて構成されてなり、このような吸水性の材料とし
てはアガロース、セルロース、架橋デキストラン、ポリ
アクリルアミド、セルロース、微結晶セルロース、架橋
アガロース、架橋ポリアクリルアミド、シリカゲル、発
泡ポリスチレン等の発泡樹脂、濾紙、脱脂綿、パルプ、
羊毛、麻などの繊維などが挙げられる。抗体又は抗原
は、第１のテープ状体の吸水性の材料よりなる部分に、
当業者に公知の方法で化学的及び／又は物理的に直接、
あるいは間接的に結合させることができる。結合法につ
いては１９７６年、講談社発行、千畑一郎ほか２名編
「実験と応用 アフィニティクロマトグラフィー」（第
１刷）、１９７５年、講談社発行、山崎 誠ほか２名編
「アフィニティクロマトグラフィー」（第１版）を参考
にできる。結合反応後、標識抗体（又は抗原）の非特異
反応を排除する目的で、測定すべき特異的反応に関与し
ない蛋白質を担持させることができる。それらの代表的
な例としては、哺乳動物及び鳥類の正常血清蛋白質、ア
ルブミン、スキムミルク、乳酸醗酵物、コラーゲン及び
それらの分解物質等が挙げられる。尚、非特異吸着抑制
蛋白質は、第１のテープ状体に担持させるだけでなく、
免疫反応時に、その一定量を免疫反応溶液中に添加する
ことにより、一層非特異吸着の抑制効果が上がる。
定化される。この第１のテープ状体は吸水性の材料が用
いられて構成されてなり、このような吸水性の材料とし
てはアガロース、セルロース、架橋デキストラン、ポリ
アクリルアミド、セルロース、微結晶セルロース、架橋
アガロース、架橋ポリアクリルアミド、シリカゲル、発
泡ポリスチレン等の発泡樹脂、濾紙、脱脂綿、パルプ、
羊毛、麻などの繊維などが挙げられる。抗体又は抗原
は、第１のテープ状体の吸水性の材料よりなる部分に、
当業者に公知の方法で化学的及び／又は物理的に直接、
あるいは間接的に結合させることができる。結合法につ
いては１９７６年、講談社発行、千畑一郎ほか２名編
「実験と応用 アフィニティクロマトグラフィー」（第
１刷）、１９７５年、講談社発行、山崎 誠ほか２名編
「アフィニティクロマトグラフィー」（第１版）を参考
にできる。結合反応後、標識抗体（又は抗原）の非特異
反応を排除する目的で、測定すべき特異的反応に関与し
ない蛋白質を担持させることができる。それらの代表的
な例としては、哺乳動物及び鳥類の正常血清蛋白質、ア
ルブミン、スキムミルク、乳酸醗酵物、コラーゲン及び
それらの分解物質等が挙げられる。尚、非特異吸着抑制
蛋白質は、第１のテープ状体に担持させるだけでなく、
免疫反応時に、その一定量を免疫反応溶液中に添加する
ことにより、一層非特異吸着の抑制効果が上がる。
【００１１】上記第１のテープ状体に対向して第２のテ
ープ状体が配設される。この第２のテープ状体は分析素
子としての機能を発揮するものであり、例えば酵素基質
が内蔵され、そして遊離状態の酵素標識抗体（又は抗
原）を速やかに第２のテープ状体（分析素子）側に移行
させる為、表面層が吸水性の素材で構成される。このよ
うな吸水性の材料としてはアガロース、セルロース、架
橋デキストラン、ポリアクリルアミド、セルロース、微
結晶セルロース、架橋アガロース、架橋ポリアクリルア
ミド、シリカゲル、発泡ポリスチレン等の発泡樹脂、濾
紙、脱脂綿、パルプ、羊毛、麻などの繊維などが挙げら
れる。この第２のテープ状体には他の添加剤、例えば緩
衝剤、保恒剤、界面活性剤、媒染剤等を目的に応じて添
加することができる。緩衝剤は、特異的結合反応、酵素
反応、発色反応等に適したｐＨとする為に含有される。
用いることができる緩衝剤としては日本化学会編「化学
便覧基礎編」（東京、丸善株式会社 １９６６）ｐｐ１
３１２〜１３２０、Ｎ，Ｅ，Ｇｏｏｄ等; Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ ５、ｐ４６７（１９６６）、今
村、斎藤; 化学の領域、Ｖｏｌ３０（２）、ｐ７９（１
９７６）、Ｗ．Ｊ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ等 Ａｎａｌ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ１０４、ｐ３００（１９８０）等
の文献に記載されているものを挙げることができる。具
体的な例としては、ホウ酸塩、クエン酸塩、燐酸塩、炭
酸塩、トリスバルビツール、グリシン、グッド緩衝剤な
どが挙げられる。これらの緩衝剤は必要に応じて単独で
層を形成させてもよい。保恒剤は基質発色試薬の保存安
定化の為に含有され、酸化防止剤などがある。その物質
としては、日本生化学会編「生化学実験口座１、蛋白質
の化学１」（東京化学同人株式会社 １９７６) ｐｐ６
６，６７、実験と応用「アフィニティクロマトグラフ
ィ」ｐｐ１６〜１０４、特開昭６０−１４９９２７号公
報などに記載されているものが挙げられる。具体的例と
しては、ゼラチン、ゼラチン分解物、アルブミン、シク
ロデキストリン類、非還元糖類（シュクロース、トレハ
ロース）、ポリエチレングリコール、アミノ酸、各種イ
オン、アジ化ソーダ等が挙げられる。界面活性剤として
は、トライトンＸ−１００（ロームアンドハース社製、
オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）、サーフ
ァクタント１０Ｇ（オリーン社製、ノニルフェノキシポ
リグリシドール）等の非イオン性界面活性剤が挙げられ
る。その他に含有される試薬としては、溶解助剤、ブロ
ッカー試薬などがある。これらの添加剤は必要に応じて
適当量添加する。媒染剤は、酵素活性測定の為の検出物
質を測光部側に集中的に集めたり、検出物質が色素の場
合吸光度係数を高めたり、波長をシフトさせる物質であ
り、検出物質と強い相互作用を示す。カチオン性ポリマ
ー、アニオン性ポリマー及びこれらのポリマーのラテッ
クスが用いられる。
ープ状体が配設される。この第２のテープ状体は分析素
子としての機能を発揮するものであり、例えば酵素基質
が内蔵され、そして遊離状態の酵素標識抗体（又は抗
原）を速やかに第２のテープ状体（分析素子）側に移行
させる為、表面層が吸水性の素材で構成される。このよ
うな吸水性の材料としてはアガロース、セルロース、架
橋デキストラン、ポリアクリルアミド、セルロース、微
結晶セルロース、架橋アガロース、架橋ポリアクリルア
ミド、シリカゲル、発泡ポリスチレン等の発泡樹脂、濾
紙、脱脂綿、パルプ、羊毛、麻などの繊維などが挙げら
れる。この第２のテープ状体には他の添加剤、例えば緩
衝剤、保恒剤、界面活性剤、媒染剤等を目的に応じて添
加することができる。緩衝剤は、特異的結合反応、酵素
反応、発色反応等に適したｐＨとする為に含有される。
用いることができる緩衝剤としては日本化学会編「化学
便覧基礎編」（東京、丸善株式会社 １９６６）ｐｐ１
３１２〜１３２０、Ｎ，Ｅ，Ｇｏｏｄ等; Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ Ｖｏｌ ５、ｐ４６７（１９６６）、今
村、斎藤; 化学の領域、Ｖｏｌ３０（２）、ｐ７９（１
９７６）、Ｗ．Ｊ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ等 Ａｎａｌ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ１０４、ｐ３００（１９８０）等
の文献に記載されているものを挙げることができる。具
体的な例としては、ホウ酸塩、クエン酸塩、燐酸塩、炭
酸塩、トリスバルビツール、グリシン、グッド緩衝剤な
どが挙げられる。これらの緩衝剤は必要に応じて単独で
層を形成させてもよい。保恒剤は基質発色試薬の保存安
定化の為に含有され、酸化防止剤などがある。その物質
としては、日本生化学会編「生化学実験口座１、蛋白質
の化学１」（東京化学同人株式会社 １９７６) ｐｐ６
６，６７、実験と応用「アフィニティクロマトグラフ
ィ」ｐｐ１６〜１０４、特開昭６０−１４９９２７号公
報などに記載されているものが挙げられる。具体的例と
しては、ゼラチン、ゼラチン分解物、アルブミン、シク
ロデキストリン類、非還元糖類（シュクロース、トレハ
ロース）、ポリエチレングリコール、アミノ酸、各種イ
オン、アジ化ソーダ等が挙げられる。界面活性剤として
は、トライトンＸ−１００（ロームアンドハース社製、
オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）、サーフ
ァクタント１０Ｇ（オリーン社製、ノニルフェノキシポ
リグリシドール）等の非イオン性界面活性剤が挙げられ
る。その他に含有される試薬としては、溶解助剤、ブロ
ッカー試薬などがある。これらの添加剤は必要に応じて
適当量添加する。媒染剤は、酵素活性測定の為の検出物
質を測光部側に集中的に集めたり、検出物質が色素の場
合吸光度係数を高めたり、波長をシフトさせる物質であ
り、検出物質と強い相互作用を示す。カチオン性ポリマ
ー、アニオン性ポリマー及びこれらのポリマーのラテッ
クスが用いられる。
【００１２】ところで、図１に示す如く、上記第１のテ
ープ状体１と第２のテープ状体２とは対向して配設され
ている。そして、流体試料が滴下される部分や測定の為
に光を照射する部分では、第１のテープ状体１と第２の
テープ状体２とが離間しているよう両者の間にはスペー
サ３，４が配設されている。これらのスペーサ３，４間
の部分には押圧部材５が配置されており、押圧部材５の
作用により、図１に示す如く、第２のテープ状体２の吸
水性表面層に第１のテープ状体１の下面が接触するよう
に構成されている。
ープ状体１と第２のテープ状体２とは対向して配設され
ている。そして、流体試料が滴下される部分や測定の為
に光を照射する部分では、第１のテープ状体１と第２の
テープ状体２とが離間しているよう両者の間にはスペー
サ３，４が配設されている。これらのスペーサ３，４間
の部分には押圧部材５が配置されており、押圧部材５の
作用により、図１に示す如く、第２のテープ状体２の吸
水性表面層に第１のテープ状体１の下面が接触するよう
に構成されている。
【００１３】そして、図１に示す如く、試料が滴下さ
れ、固定化抗体（又は抗原）、標識抗体（又は抗原）と
試料中の抗原（又は抗体）との間で免疫反応が行われ
る。この時、第１のテープ状体１と第２のテープ状体２
とは所定の走行機構で走行（又は一時停止）しており、
試料滴下の所定の時間後には押圧部材５で第１のテープ
状体１は押され、第２のテープ状体２の吸水性表面層に
接触させられる。この接触により、第１のテープ状体１
に存在する免疫反応後の遊離標識酵素が第２のテープ状
体２側に移行する。そして、第２のテープ状体２は走行
し、図１に示す如く光が当てられ、遊離標識酵素と酵素
基質との反応によって生成した色素を検出することで、
試料中の抗原（又は抗体）が測定されることになる。
れ、固定化抗体（又は抗原）、標識抗体（又は抗原）と
試料中の抗原（又は抗体）との間で免疫反応が行われ
る。この時、第１のテープ状体１と第２のテープ状体２
とは所定の走行機構で走行（又は一時停止）しており、
試料滴下の所定の時間後には押圧部材５で第１のテープ
状体１は押され、第２のテープ状体２の吸水性表面層に
接触させられる。この接触により、第１のテープ状体１
に存在する免疫反応後の遊離標識酵素が第２のテープ状
体２側に移行する。そして、第２のテープ状体２は走行
し、図１に示す如く光が当てられ、遊離標識酵素と酵素
基質との反応によって生成した色素を検出することで、
試料中の抗原（又は抗体）が測定されることになる。
【００１４】標識酵素に起因した信号は、紫外線、可視
光、近赤外光などを利用した吸光度法（比色法) などで
検出することができ、測定法としては信号の経時的変化
を測定するレート測定法または一定時間後の信号を測定
するエンドポイント測定法で測定することができる。
光、近赤外光などを利用した吸光度法（比色法) などで
検出することができ、測定法としては信号の経時的変化
を測定するレート測定法または一定時間後の信号を測定
するエンドポイント測定法で測定することができる。
【００１５】
１−（１） β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗
体の作成 抗ＣＲＰ抗体（ウサギＩｇＧフラクション、タウンズ社
製）２０ｍｇを０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐ６．５）
２．０ｍｌに溶解し、これにＮ−（ε−マレイミドカプ
ロイルオキシ）スクシンイミド（同仁化学研究所製）が
２．５ｍｇ／ｍｌのジメチルホルムアミド溶液７７μｌ
を加えて、３０℃で２０分間反応後、５ｍＭのＥＤＴＡ
を含有する０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平
衡化したセファデックスＧ−２５カラムで精製し、マレ
イミド化した抗ＣＲＰ抗体を得た。
体の作成 抗ＣＲＰ抗体（ウサギＩｇＧフラクション、タウンズ社
製）２０ｍｇを０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐ６．５）
２．０ｍｌに溶解し、これにＮ−（ε−マレイミドカプ
ロイルオキシ）スクシンイミド（同仁化学研究所製）が
２．５ｍｇ／ｍｌのジメチルホルムアミド溶液７７μｌ
を加えて、３０℃で２０分間反応後、５ｍＭのＥＤＴＡ
を含有する０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０）で平
衡化したセファデックスＧ−２５カラムで精製し、マレ
イミド化した抗ＣＲＰ抗体を得た。
【００１６】次に、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（東洋紡
社製）が１０．５ｍｇ／ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液
１．８ｍｌに、前記マレイミド化した抗ＣＲＰ抗体を１
３．６ｍｇ含む溶液３．２ｍｌを加えて、４℃で４５時
間反応後、０．１Ｍの２−メルカプトエチルアミン１７
５μｌを加えて３０℃で２０分間反応させ、０．１５Ｍ
の塩化ナトリウムを含有する０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）で平衡化したスーパーローズ６プレップグレ
ード（ファルマシア社製）カラムで分離、精製し、β−
Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を得た。
社製）が１０．５ｍｇ／ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液
１．８ｍｌに、前記マレイミド化した抗ＣＲＰ抗体を１
３．６ｍｇ含む溶液３．２ｍｌを加えて、４℃で４５時
間反応後、０．１Ｍの２−メルカプトエチルアミン１７
５μｌを加えて３０℃で２０分間反応させ、０．１５Ｍ
の塩化ナトリウムを含有する０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７．４）で平衡化したスーパーローズ６プレップグレ
ード（ファルマシア社製）カラムで分離、精製し、β−
Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を得た。
【００１７】１−（２） 抗ＣＲＰ抗体が固定化され、
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を含浸した
第１のテープ状体１の作成 １ｃｍ×１ｃｍの大きさのトラベロンＮＰ３００（金井
重要工業社製）を０．１５Ｍの塩化ナトリウムを含有す
る０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）４０ｍｌ中に分
散し、これに抗ＣＲＰ抗体（ウサギＩｇＧフラクショ
ン、タウンズ社製）１２０ｍｇを入れ、４℃で２０時間
攪拌し、反応させる。反応後、濾取し、０．１Ｍ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．０）と０．１Ｍの炭酸緩衝液（ｐＨ８．
０）を交互に用い、充分洗浄した。次いで、水洗した
後、３％スキムミルク添加の０．１５Ｍ塩化ナトリウム
含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で４℃、２
０時間攪拌し、そして凍結乾燥した。
β−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を含浸した
第１のテープ状体１の作成 １ｃｍ×１ｃｍの大きさのトラベロンＮＰ３００（金井
重要工業社製）を０．１５Ｍの塩化ナトリウムを含有す
る０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８．０）４０ｍｌ中に分
散し、これに抗ＣＲＰ抗体（ウサギＩｇＧフラクショ
ン、タウンズ社製）１２０ｍｇを入れ、４℃で２０時間
攪拌し、反応させる。反応後、濾取し、０．１Ｍ酢酸緩
衝液（ｐＨ４．０）と０．１Ｍの炭酸緩衝液（ｐＨ８．
０）を交互に用い、充分洗浄した。次いで、水洗した
後、３％スキムミルク添加の０．１５Ｍ塩化ナトリウム
含有０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）中で４℃、２
０時間攪拌し、そして凍結乾燥した。
【００１８】この後、この凍結乾燥品を１−（１）で得
たβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体溶液（１
０μｇ／ｍｌ）５ｍｌ中に浸し、そして取り出した後凍
結乾燥し、抗ＣＲＰ抗体が固定化され、β−Ｄ−ガラク
トシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を含浸したトラベロンＮＰ
３００のチップを得た。そして、このトラベロンＮＰ３
００のチップを長尺状のテープの孔の部分に貼り付け、
孔の部分をトラベロンＮＰ３００のチップで塞ぎ、又、
トラベロンＮＰ３００が剥がれないように枠を取り付
け、抗ＣＲＰ抗体が固定化され、β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を含浸した第１のテープ状体１を
作成した。
たβ−Ｄ−ガラクトシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体溶液（１
０μｇ／ｍｌ）５ｍｌ中に浸し、そして取り出した後凍
結乾燥し、抗ＣＲＰ抗体が固定化され、β−Ｄ−ガラク
トシダーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を含浸したトラベロンＮＰ
３００のチップを得た。そして、このトラベロンＮＰ３
００のチップを長尺状のテープの孔の部分に貼り付け、
孔の部分をトラベロンＮＰ３００のチップで塞ぎ、又、
トラベロンＮＰ３００が剥がれないように枠を取り付
け、抗ＣＲＰ抗体が固定化され、β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼ標識抗ＣＲＰ抗体を含浸した第１のテープ状体１を
作成した。
【００１９】１−（３） 第２のテープ状体（分析素
子）２の作成 厚さ１８０μｍの透明な下引き済ポリエチレンテレフタ
レートフィルムの上に、下記の組成の塗布液（１）を塗
布し、乾燥させ、ゼラチン層を作成させた。 塗布液−（１） 脱イオン化ゼラチン ６．０ｇ トライトンＸ−１００ ０．１５ｇ １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン ０．０１ｇ 純水 ５４．０ｇ 次に、塗布液−（２）を前記ゼラチン層の上に塗布し、
乾燥した。
子）２の作成 厚さ１８０μｍの透明な下引き済ポリエチレンテレフタ
レートフィルムの上に、下記の組成の塗布液（１）を塗
布し、乾燥させ、ゼラチン層を作成させた。 塗布液−（１） 脱イオン化ゼラチン ６．０ｇ トライトンＸ−１００ ０．１５ｇ １，２−ビス（ビニルスルホニル）エタン ０．０１ｇ 純水 ５４．０ｇ 次に、塗布液−（２）を前記ゼラチン層の上に塗布し、
乾燥した。
【００２０】塗布液−（２）
粉末ろ紙Ｃ（東洋濾紙社製） ２１．６ｇ
ピロリドン−酢酸ビニル（２対８）共重合体 １１．０ｇ
クロロフェニルレッドβ−Ｄ−ガラクトピラノシド（ベーリンガー社製）
３６５ｍｇ
ｎ−ブタノール ４９．４ｇ
これを１．５ｃｍ幅のものに裁断し、第２のテープ状体
２を作成した。
２を作成した。
【００２１】１−（４） 免疫学的測定装置
図１に示す如く、第１のテープ状体１と第２のテープ状
体２との間にスペーサ３，４を配置する。又、スペーサ
３とスペーサ４との間に、滴下部分には接触がないよう
円筒状の押圧部材５を配置する。尚、図１中、６，７は
第１のテープ状体１や第２のテープ状体２に対するガイ
ド部材、８，９はガイドローラ、１０は駆動ローラ、１
１は圧着ローラであり、第１のテープ状体１及び第２の
テープ状体２は駆動ローラ１０と圧着ローラ１１との作
用により連続（又は間歇）走行できるように構成されて
いる。
体２との間にスペーサ３，４を配置する。又、スペーサ
３とスペーサ４との間に、滴下部分には接触がないよう
円筒状の押圧部材５を配置する。尚、図１中、６，７は
第１のテープ状体１や第２のテープ状体２に対するガイ
ド部材、８，９はガイドローラ、１０は駆動ローラ、１
１は圧着ローラであり、第１のテープ状体１及び第２の
テープ状体２は駆動ローラ１０と圧着ローラ１１との作
用により連続（又は間歇）走行できるように構成されて
いる。
【００２２】１−（５） ＣＲＰの測定
１ｍＭの塩化マグネシウム及び３重量％のウシ血清アル
ブミンを含有する０．３Ｍのビストリス緩衝液５０μｌ
並びにＣＲＰ溶液（０、１、３、１０、３０、１００μ
ｇ／ｍｌ）５μｌの混合液３０μｌを前記免疫学的測定
装置の第１のテープ状体１におけるトラベロンＮＰ３０
０のチップ上に、図１に示す如く、滴下し、１０分間免
疫反応させた。
ブミンを含有する０．３Ｍのビストリス緩衝液５０μｌ
並びにＣＲＰ溶液（０、１、３、１０、３０、１００μ
ｇ／ｍｌ）５μｌの混合液３０μｌを前記免疫学的測定
装置の第１のテープ状体１におけるトラベロンＮＰ３０
０のチップ上に、図１に示す如く、滴下し、１０分間免
疫反応させた。
【００２３】この後、第１のテープ状体１及び第２のテ
ープ状体２を走行させ、押圧部材５で第１のテープ状体
１におけるトラベロンＮＰ３００の周囲の部分を押し、
５秒間にわたって第２のテープ状体２と接合させる。そ
して、押圧部材５を第１のテープ状体１から離間し、第
１のテープ状体１及び第２のテープ状体２を走行させ、
スペーサ４により第１のテープ状体１から第２のテープ
状体２を剥がし、そして３７℃でインキュベートし、５
４６ｎｍの反射濃度を第２のテープ状体２の支持体側
（下側）から測定した。
ープ状体２を走行させ、押圧部材５で第１のテープ状体
１におけるトラベロンＮＰ３００の周囲の部分を押し、
５秒間にわたって第２のテープ状体２と接合させる。そ
して、押圧部材５を第１のテープ状体１から離間し、第
１のテープ状体１及び第２のテープ状体２を走行させ、
スペーサ４により第１のテープ状体１から第２のテープ
状体２を剥がし、そして３７℃でインキュベートし、５
４６ｎｍの反射濃度を第２のテープ状体２の支持体側
（下側）から測定した。
【００２４】３分３０秒及び７分の反射濃度差（ΔＤ
ｒ）を用いて検量線を作成したので、その結果を図２に
示す。尚、図２は、本発明装置により作成されたＣＲＰ
の検量線を示すものである。これによればＣＲＰが正確
に測定されることが判り、又、測定は極めて簡単で手軽
な作業で行える。すなわち、バックグラウンドノイズは
小さく、ＣＲＰが正確に測定できるものであり、かつ、
Ｂ／Ｆ分離の為の特別な操作や液の移し換えの操作をせ
ずとも測定が行える。
ｒ）を用いて検量線を作成したので、その結果を図２に
示す。尚、図２は、本発明装置により作成されたＣＲＰ
の検量線を示すものである。これによればＣＲＰが正確
に測定されることが判り、又、測定は極めて簡単で手軽
な作業で行える。すなわち、バックグラウンドノイズは
小さく、ＣＲＰが正確に測定できるものであり、かつ、
Ｂ／Ｆ分離の為の特別な操作や液の移し換えの操作をせ
ずとも測定が行える。
【００２５】
【効果】本発明によれば、簡単、かつ、手軽な操作で、
すなわちＢ／Ｆ分離の為の特別な操作や液の移し換えの
操作をせずとも簡単な操作で連続的に測定が行え、しか
もその測定結果はバックグラウンドノイズが小さく、正
確なといった特長を有する。
すなわちＢ／Ｆ分離の為の特別な操作や液の移し換えの
操作をせずとも簡単な操作で連続的に測定が行え、しか
もその測定結果はバックグラウンドノイズが小さく、正
確なといった特長を有する。
【図１】本発明の免疫学的測定装置の原理図である。
【図２】本発明により作成されたＣＲＰの検量線を示す
ものである。
ものである。
１ 第１のテープ状体
２ 第２のテープ状体
３，４ スペーサ
５ 押圧部材
６，７ ガイド部材
８，９ ガイドローラ
１０ 駆動ローラ
１１ 圧着ローラ
Claims (2)
- 【請求項１】 抗体（又は抗原）が吸水性の素材に固定
化された第１のテープ状体と、発色前駆体が介在させら
れた吸水性の素材を用いて構成した第２のテープ状体
と、前記第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定
の位置で分離する分離手段と、前記第１のテープ状体と
第２のテープ状体とを所定の位置で接触させる接触手段
と、前記第１のテープ状体及び第２のテープ状体を走行
させる走行手段とを具備することを特徴とする免疫学的
測定装置。 - 【請求項２】 抗体（又は抗原）が吸水性の素材に固定
化されると共に、標識抗体（又は抗原）が介在させられ
た第１のテープ状体と、発色前駆体が介在させられた吸
水性の素材を用いて構成した第２のテープ状体と、前記
第１のテープ状体と第２のテープ状体とを所定の位置で
分離する分離手段と、前記第１のテープ状体と第２のテ
ープ状体とを所定の位置で接触させる接触手段と、前記
第１のテープ状体及び第２のテープ状体を走行させる走
行手段とを具備することを特徴とする免疫学的測定装
置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16588591A JPH0510951A (ja) | 1991-07-05 | 1991-07-05 | 免疫学的測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16588591A JPH0510951A (ja) | 1991-07-05 | 1991-07-05 | 免疫学的測定装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0510951A true JPH0510951A (ja) | 1993-01-19 |
Family
ID=15820830
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16588591A Pending JPH0510951A (ja) | 1991-07-05 | 1991-07-05 | 免疫学的測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0510951A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001035098A1 (fr) * | 1999-11-05 | 2001-05-17 | Takara Shuzo Co., Ltd | Bases sur lesquelles sont immobilises des ligands |
| EP1359420A1 (en) * | 2001-02-09 | 2003-11-05 | Bio Strand, Inc. | Equipment and method for measuring storage reaction |
| JP2005321207A (ja) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Nikko Materials Co Ltd | 蛍光ｘ線分析用試料ホルダー及び同試料の作成方法 |
| US6988996B2 (en) * | 2001-06-08 | 2006-01-24 | Roche Diagnostics Operatons, Inc. | Test media cassette for bodily fluid testing device |
| US7481777B2 (en) | 2006-01-05 | 2009-01-27 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Lancet integrated test element tape dispenser |
| US7959581B2 (en) | 2004-04-30 | 2011-06-14 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Test magazine and method for processing the same |
-
1991
- 1991-07-05 JP JP16588591A patent/JPH0510951A/ja active Pending
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001035098A1 (fr) * | 1999-11-05 | 2001-05-17 | Takara Shuzo Co., Ltd | Bases sur lesquelles sont immobilises des ligands |
| EP1229329A1 (en) * | 1999-11-05 | 2002-08-07 | Takara Shuzo Co, Ltd. | Bases having ligands immobilized thereon |
| EP1229329A4 (en) * | 1999-11-05 | 2005-01-05 | Takara Bio Inc | BASES ON WHICH LIGANDS ARE IMMOBILIZED |
| EP1359420A1 (en) * | 2001-02-09 | 2003-11-05 | Bio Strand, Inc. | Equipment and method for measuring storage reaction |
| EP1359420A4 (en) * | 2001-02-09 | 2004-03-31 | Bio Strand Inc | DEVICES AND METHOD FOR MEASURING THE STORAGE REACTION |
| AU2002232159B2 (en) * | 2001-02-09 | 2007-08-16 | Bio Strand, Inc. | Device for containing, reacting and measuring, and method of containing, reacting and measuring |
| US6988996B2 (en) * | 2001-06-08 | 2006-01-24 | Roche Diagnostics Operatons, Inc. | Test media cassette for bodily fluid testing device |
| US7959581B2 (en) | 2004-04-30 | 2011-06-14 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Test magazine and method for processing the same |
| US9179872B2 (en) | 2004-04-30 | 2015-11-10 | Roche Diabetes Care, Inc. | Lancets for bodily fluid sampling supplied on a tape |
| JP2005321207A (ja) * | 2004-05-06 | 2005-11-17 | Nikko Materials Co Ltd | 蛍光ｘ線分析用試料ホルダー及び同試料の作成方法 |
| US7481777B2 (en) | 2006-01-05 | 2009-01-27 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Lancet integrated test element tape dispenser |
| US8083992B2 (en) | 2006-01-05 | 2011-12-27 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Lancet integrated test element tape dispenser |
| US8196374B2 (en) | 2006-01-05 | 2012-06-12 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Lancet integrated test element tape dispenser |
| US8621828B2 (en) | 2006-01-05 | 2014-01-07 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Lancet integrated test element tape dispenser |
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