JPH049509B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はカゼインをベースとした物質の処理分
野に関するものである。特に、本発明はリンカゼ
インの一価陽イオン塩またはその誘導体を処理し
て得た生成物、特に非リン酸化ペプチド含有量の
多い部分に関するものである。さらに、本発明は
このようにして得た生成物を、栄養剤組成物、特
に特定の栄養の必要条件を満たすのに適当な滋養
物ならびに治療用栄養剤として使用することに関
するものである。 酪農原料、特に乳のカゼインはホスホセリンを
含有し、ホスホセリンはその出発物質であるペプ
チドに有価な物理化学的、工学的および生理学的
性質を付与する。特に乳タンパクに関する情報は
「Milk proteins（ミルク・プロテインズ）」と題
するマツケンジー・エイチ・エー（Mc
KENZIE H.A.）の著者、第１巻および第２巻
（1971）（Academic Press、New York）に記載
されている。 装置と観察現象の理解との両者に関する最近の
進歩によつて、膜限外濾過は乳の処理を行う乳処
理工業において広く使用されている（例えば、
「LE LAIT」51、508、495〜533（1971）参照）。
乳を限外濾過膜に通す場合に、水、可溶性ミネラ
ル塩、乳糖、低分子量含窒素化合物（ペプチド、
遊離アミノ酸）および水溶性ビタミンは限外濾過
液または透過液として膜を通過するが、タンパク
質および結合成分（カルシウム、リン）、脂肪粒
および脂肪親和性元素は残留し、これらの濃度は
水相の除去が進行するにつれて増大する。これら
の物質は残留液またはタンパク濃縮液を構成す
る。高純度タンパク濃縮液を得るには限外濾過工
程およびダイアフイルトレーシヨン工程の両者を
必要とする。ダイアフイルトレーシヨン工程で
は、水または塩含有水溶液を限外濾過残留液に連
続的または断続的に添加する。同時にまたは引続
いて、同等量の透過液を除去する。このような操
作の結果、残留液中の濾過可能な元素量が減少す
る。膜限外濾過技術の利点は乳タンパクが自然の
形態に保持されていることにある。 本発明においては膜限外濾過を利用してカゼイ
ンをベースとした原料の諸成分の分離を行うが、
この際前記限外濾過工程と酵素加水分解工程とを
組合せて行う。 タンパク質、例えば乳タンパクの加水分解に関
していくつかの方法が知られている。実際に酸性
加水分解では遊離アミノ酸溶液が得られるが、若
干のアミノ酸は破壊される。アルカリ性加水分解
ではトリプトフアンは保持されるが、不溶化が起
り、これにより当初のタンパク濃縮液の栄養価が
著しく低下する。 酵素によるプロテオリシスはよく知られてお
り、分析または栄養を目的として長い間使用され
てきたが、その主目的はタンパク質を可溶性にす
ることである。動物、微生物または植物のプロテ
アーゼの作用による大豆タンパク（荒井、野口、
黒沢、加藤および藤巻：「Applying proteolytic
enzymes on soybean、６−deodorizatin effect
（大豆に対するタンパク分解酵素の応用、６−脱
臭効果）」（1970）参照）、魚タンパク（「ジヤーナ
ル・オブ・アグリカルチユラル・フード・ケミス
トリー（J.Agric.Food.Chem.）」第24巻、(2)、
383〜385（1976）参照）または菜種の加水分解物
の数多くの栄養上の用途について、多くの報文が
文献に発表されている。 しかし、これらの技術を商業的規模で乳タンパ
クに応用することはまだ全く限られている。 酵素によるプロテオリシスは化学プロセスの欠
点を持つていない。加水分解条件は温和であり、
従つて生成物の栄養価が保持される。 一般に、加水分解では強い苦味を持つペプチド
が生成する。この特徴はこの種の加水分解物を人
の食養（alimentation）に使用することを制限す
る作用をする。加水分解物の苦味の程度は主にタ
ンパク基質の性質と酵素特異性とによる。苦味を
除くため、エクソペプチターゼの作用を利用する
ことが提案されている。例えば、「Agric.Biol.
Chem.」34、729（1970）および「J.Food
Technol.」９、425〜431（1974）を参照された
い。またプラステイン反応前にグルタミン酸を添
加することによりペプチドを変性することも提案
されている。疏水性アミノ酸を除去することによ
つて行うことも可能である。 しかし、これらの既知技術はすべて、本発明の
必要条件を満たすには不十分かつ不適当である。
実際に、エクソペプチターゼの使用によつて生じ
る広範囲の可溶化によつて、遊離アミノ酸、特に
アルギニン、リジン、チロシン、バリン、フエニ
ルアラニン、メチオニンおよびロイシンの分量が
増加し、この結果腸壁における遊離アミノ酸移送
システムに負担がかかり、従つて加水分解物の栄
養効果が低下する。他方、アミノ酸平衡が変化す
るので加水分解物の固有の性質が変わり、この結
果遊離アミノ酸の追加が必要になる。 技術的立場から、酵素加水分解は不連続反応装
置系によつて行うのが最も普通である。酵素を被
処理タンパク溶液に添加する。ある程度長くした
滞留時間の後に、酵素活性および基質への作用を
促進する条件下に、PHを変え、酵素を温和な熱処
理で不活性化する。遠心分離を行つて未消化の不
溶性部分を除去することができる。しかし、この
不連続酵素加水分解反応の技術では、高い酵素対
基質の比を使用するのは困難である。「Internat.
J.Vit.Nutr.Res.」48、44〜52（1978）に記載され
ているように、酵素対基質の比はプロテオリシス
中に放出される遊離アミノ酸およびペプチドの性
質に決定的な影響を及ぼす。不連続プロセスにお
いて酵素を過剰に使用した場合には、上述の高い
比の場合にそうであるように、加水分解終了時に
酵素を破壊する必要がある。 また固定酵素を使用する反応装置が提案されて
いる。しかし、かかる反応装置は実用面で大きな
欠点を有する。実際問題として、酵素活性にとつ
ての最適条件、特にPH条件が変わると、反応器の
操作は常に満足できないものになる。しかも、細
菌学上の問題、固定床の閉塞、並びに基質におけ
るタンパクの吸着が起る。また、酵素反応は、酵
素−タンパクフラグメント複合体の生成により、
時間の経過と共に抑制される傾向がある。抑制は
基質の性質によつても生じることがある。さら
に、基質に関する酵素の競争現象のため、また酵
素の安定性が経時変化をするため、多酵素系を使
用することは極めて困難である。 本発明においてはある他の分野において既知で
ある手段を利用し、膜を設けた酵素反応装置を使
用する。例えば、「Ann.Technol.Agric.」21、
(3)、423〜433（1972）を参考にすることができ、
この文献には魚肉タンパク濃縮液のプロテオリシ
スに用いた膜式反応装置が記載されている。限外
濾過膜は溶液中の酵素ならびにタンパク基質を反
応装置内に保持する。加水分解生成物、すなわち
ペプチドのみを、その生成が進むにつれて、除去
する。しかし、実際には、この種の反応装置を使
用することは該文献に指摘されているように容易
ではない。基質を酵素で完全に可溶化可能にする
ことが必要であり、タンパク溶液が申し分のない
細菌学的性質を有していることが必要である。 この技術分野の現状を示す文献としてさらに次
の文献を引用することができる： 仏国特許第7724069号（公告第2399213号）に
は、限外濾過に次いで電気透析により加水分解物
を処理することについて記載されている。この文
献はタンパク加水分解物を限外濾過することが既
知であることを証明している。この特許に記載さ
れている方法によつて天然アミノ酸の純粋な溶液
を生成することが可能になる。 仏国特許第7439311号（公告第2292435号）は、
乳の限外濾過残留液からリンカゼインカルシウム
を得ることに関するものである。従つて、この特
許はリンカゼインカルシウムの製造を目的として
いる。この特許はリンカゼインの一価陽イオン塩
またはその誘導体に関するものではない。 ケミカル・アブストラクト、第87巻、第19号、
1977年11月７日第265頁アブストラクト148285P
に示されているコロンブス オハイオ
（COLUMBUS OHIO）（米国）および「ジエ
ー・デアリー・リサーサ（J.Dairy Research）」
第44巻、第２号（1977）、第373〜376頁には、カ
ゼイン塩からリンペプチドを製造することについ
て記載されている。この方法はトリプシンによる
酵素加水分解工程およびゲル濾過とクロマトグラ
フイーとによる分別工程を含むが、全く特殊な生
成物を生成するCNBrとの反応によつて開始して
いる。 ケミカル・アブストラクト第91巻、第21号、
1979年11月19日、第523頁、アブストラクト
173597gコロンブス オハイオ（米国）および
「エンザイム・ミクロビオロジカル・テクノロジ
ー（Enzyme Microb.Technol.）」第１巻、第２
号（1979）、第122〜124頁には、タンパク加水分
解物の味を改善する目的で酵素反応装置において
行つた加水分解について記載されている。従つて
この文献は酵素反応装置が既知装置であることを
証明するものである。 本発明においては、カルシウムおよび／または
マグネシウムのような二価イオンを含有していな
いタンパク溶液に、かかる処理方法を適用する。
実際問題として、リンカゼインの一価陽イオン塩
またはその誘導体を含有するカゼインをベースと
した物質を使用することが不可欠条件である。 本発明の非リン酸化ペプチドは、人体の生体内
で起るタンパク質の消化を再現することができる
少なくとも１種のタンパク分解酵素によつて上述
の原料を酵素加水分解し；このようにして得た加
水分解物を、このなかのすべてのペプチドを通し
て透過液中に存在させることのできる膜を使用し
て、少なくとも１個の限外濾過工程で処理し；こ
のようにして得た透過液に、前記ペプチドのリン
酸化部分と凝集体を形成することのできる少なく
とも１種の二価陽イオン塩を添加して、本質的に
リンペプチド凝集体と非リン酸化ペプチドとを含
有する溶液を生成させ；この溶液と前記リンペプ
チドを残させることのできる少なくとも１個の膜
とを接触させることにより少なくとも１個の限外
濾過工程で非リン酸化ペプチドと比較的大きい粒
度を有するリンペプチドとを分離することにより
得た生成物であつて、次のパラメータ：全芳香族
アミノ酸＞12％、セリン含有量＜４％、遊離アミ
ノ酸含有量＜10％を有することを特徴とする。 本発明の非リン酸化ペプチドを製造するための
上述の方法により処理されるカゼインをベースと
した原料はリンカゼインのナトリウム塩またはカ
リウム塩のようなリンカゼインの一価陽イオン塩
を含有する。また、上述の方法による処理は前記
リンカゼイン塩の誘導体、特にパラカゼインを含
有する原料に適用することができる。かかる化合
物は当該分野でよく知られている化合物で、工業
的手段により得ることができる。例えば、カゼイ
ンナトリウムのような一価カゼイン塩を製造する
には、先ず、例えば乳から出発して、等電点で沈
殿させることによりカゼインを生成する。生成し
たカゼインを水洗し、次いでこのカゼイン沈殿に
水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アン
モニウムまたは一価イオンを含有しカゼインを再
可溶化するのに適した他の塩基性化合物を添加す
る。最後に、前記カゼインの一価陽イオン塩、好
ましくはカゼインのナトリウム塩またはカリウム
塩を含有するタンパク溶液が生成する。かかる物
質は本発明において原料として直接使用すること
ができる。 他の例では、前記カゼイン塩の誘導体、特にパ
ラカゼインの形態の誘導体を使用することができ
る。このためには、リンカゼインの一価陽イオン
塩の溶液にレンネツトを添加して加水分解を行う
ことにより予備処理する。加水分解生成物はパラ
カゼイン塩およびカゼイノマクロペプチド
（CMP）を含有する。次いでこのパラカゼインを
既知方法により、好ましくは栄養または医薬とし
て許容し得る無機または有機の酸、例えば、塩
酸、リン酸、硫酸、酢酸、酪酸または他の類似の
酸によつてPH4.6まで酸性化することにより、沈
殿させる。実際には塩酸が好ましい。次いでカゼ
イノマクロペプチドを含有する上澄液を、沈殿し
たパラカゼインから分離する。次いでこのパラカ
ゼインを本発明において原料として使用する。か
かる他の例では、得られた溶液はカゼイノマクロ
ペプチドを含有し、カゼイノマクロペプチドは有
価生成物であることがある。この生成物を精製・
分離するために、前記溶液を水酸化ナトリウムの
ような塩基性化合物で中和することができる。こ
の溶液に塩化カルシウムを添加し次いで限外濾過
することによりCMPを濃縮形態で生成すること
ができる。 上述の他の例の好適形態では、３％カゼインナ
トリウム水溶液を20ml／100のレンネツトによ
り加水分解する。次いで塩酸でPH4.6まで酸性化
することにより沈殿させる。次いでこのカゼイノ
マクロペプチドを含有する上澄液を水酸化ナトリ
ウムでPH7.0まで中和し、0.5ｇのCaCl₂を添加し
た後に限外濾過により濃縮する。かかる他の例で
は、1000の３％カゼイン塩溶液から出発して約
30〜40の３％カゼイノマクロペプチド溶液を得
ることができる。 本発明において使用する原料とは無関係に、第
１工程では人体の生体内で起るタンパク消化を再
現することができる少なくとも１種のタンパク分
解酵素によつて酵素加水分解を行う。上述のよう
に、かかる加水分解は限外濾過装置と酵素反応装
置とを組合せた装置で行うのが有利で、この場合
には連続操作が可能になる。 かかる例では、カゼインをベースとした原料を
反応圏に供給してこの原料と酵素とを緊密に接触
させ、反応生成物を連続的に取出し、反応圏から
限外濾過圏に移送し、この圏から、ペプチド加水
分解物を形成する透過液を連続的に取出すことに
より、酵素加水分解工程を連続的に行う。 酵素加水分解中に、PHを７〜９の範囲に調整す
る必要がある。このため、連続的または断続的方
法で反応圏に塩基性化合物を供給する。塩基性化
合物としては水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウ
ム、水酸化カルシウム、炭酸カリウム、水酸化カ
ルシウム、水酸化アンモニウムまたはこれらの混
合物等を使用することができる。特定のアルカリ
性化合物の選択は最終生成物の意図する目的によ
る。 酵素としては、人体の生体内で起るタンパク質
の消化を再現することができる少なくとも１種の
タンパク分解酵素を使用するのが好ましい。従つ
て、パンクレアチンを使用するのが有利であり、
パンクレアチンはトリプシン、キモトリプシンお
よび他の二次タンパク分解酵素を含む複合混合物
である。実際には、商業的に容易に入手できる天
然のパンクレアチン抽出物を使用することができ
る。しかし、所要に応じて合成混合物、例えばア
ルフアキモトリプシンとトリプシンとの合成混合
物により形成される酵素を使用することもでき
る。使用する合成混合物はパンクレアチンの組成
に近く、従つて天然パンクレアチンの抽出物に含
まれる二次酵素を含有する組成を有するのが好ま
しい。本発明においては、PHが７〜９好ましくは
７〜8.5の範囲、例えば８の場合に、パンクレア
チンおよび本発明の必要条件に合致する他の同様
な酵素が最大の安定性を有することを見出した。 さらに酵素加水分解圏では可成り厳密な温度条
件を使用するのが当を得たことである。実際に、
酵素活性はPHよりも温度に大きく影響されること
を見出した。特に、本発明においては、トリプシ
ンを使用する場合には酵素加水分解中の最高温度
を54℃以上にしてはならず、またキモトリプシン
を使用する場合には前記温度を45℃以上にしては
ならないことを、試験により確かめた。実際に
は、パンクレアチンを使用する場合には、生体内
の腸におけるプロテオリシスに最適な条件（37℃
程度の温度）と、温度が高い程細菌（germ）の
成育に好ましくなくかつ限外濾過における生成量
（output）が多くなる事実との両者を考慮して妥
協する。一般に、選択される温度は37〜40℃程
度、最も好ましくは37℃に近い温度である。 明らかに反応パラメータ、すなわちPHと酵素加
水分解温度とは相互に関係がある。従つて、当業
者は各々の特定の場合における最適条件を選定す
ることになる。 最適な酵素加水分解を行うには、酵素反応装置
と組合せて使用する限外濾過膜を注意して選択す
るのが当を得たことである。使用する膜は有機質
または無機質のいずれでもよい。良好な結果を与
える膜構造体は中空繊維を用いたモジユールであ
る。例えば、商品名H10P5（カツトオフ限界（cut
−off threshold）5000）およびH10P10（カツト
オフ限界10000）で市販されているアミコン
（AMICON）社の膜ならびに商品名PM2（カツト
オフ限界2000）またはPM50（カツトオフ限界
50000）で市販されているロミコン
（ROMICON）社の膜を使用することができる。
満足できる唯一の必要条件は、操作中に膜が有効
に酵素を残留させ、かつ特にその寿命に関して満
足な性能を示すことである。 本発明の非リン酸化ペプチドの製造は２個の別
個の段階で行うことができる。第１段階は酵素加
水分解工程であり、第２段階は前記加水分解と組
合せた限外濾過工程である。これらの各工程を実
施する装置を別個または一体に設けることができ
る。しかし、他の例として、本発明の非リン酸化
ペプチドの製造を連続操作することもでき、この
際前記両段階を単一装置で行う。最初の操作期
間、例えば約１時間の間に、透過液（膜を通過す
る液体）を加水分解圏に再循環してカゼインをベ
ースとした物質を所望の程度に加水分解する。加
水分解後に、反応装置にカゼインをベースとした
被処理原料を透過液と同じ流量で供給する。 従つて、本発明の好適例では、酵素加水分解工
程と膜限外濾過工程とを組合せ、これらの工程を
連続的に行う。これにより加水分解中のすべての
ペプチドを加水分解物中に回収することができ
る。酵素加水分解工程と組合せて使用する限外濾
過膜は加水分解物中のすべてのペプチドが自由に
通過することのできるような特性を有しているこ
とが必要である。カツトオフ限界が50000以上で
ある膜が適当であることが分つた。 本発明の必須構成要件によれば、次いで透過液
にペプチドのリン酸化部分と凝集体を形成するこ
とができる少なくとも１種の二価陽イオン塩を添
加する。事実、二価イオンとの錯体形成
（complexing）によりリンペプチドの相互凝集は
容易に行われるので、リンペプチドを非リン酸化
ペプチドから分離することができる。リンペプチ
ドと酵素加水分解の際に得られた非リン酸化ペプ
チドとの分離はホスホセリンがアルカリ土類イオ
ン特にカルシウムイオンおよびマグネシウムイオ
ンと錯体を形成する能力に基く。本発明において
そうであるように、カルシウムおよび／またはマ
グネシウムを含有していないタンパク溶液につい
て加水分解を行う場合には、錯体形成作用を行う
所要の二価陽イオンを、加水分解で得られたペプ
チド溶液に添加するのが重要である。 実際に、錯体形成用二価陽イオンとしては、カ
ルシウム陽イオン、例えば、塩化カルシウムによ
つて導入されるカルシウム陽イオンを使用するの
が好ましい。本発明においてペプチド溶液に添加
する必要のある二価陽イオンベースのペプチド
（bivalent−based peptides）を錯体にする錯体
形成剤の分量は厳密なものではない。実際に、ペ
プチド溶液に対して0.5重量％程度の塩化カルシ
ウム量が適当である。使用する二価化合物および
その使用量は、リンペプチド凝集体と非リン酸化
ペプチドとを分離する次の段階の特性を考慮して
選定する。かかるリンペプチド凝集体と非リン酸
化ペプチドとの分離は、本発明においては、限外
濾過工程により行う。換言すれば、特に限外濾過
膜のカツトオフ限界に適切な注意を払つて、リン
ペプチド凝集体がこの膜を通らないようにするこ
とが必要である。 良好な結果を得た１例においては、錯体形成剤
を酸性リン酸ナトリウムPO₄HNa₂のような無機
リン酸塩と併用する。かかるリン酸塩化合物の存
在は錯体形成作用および大きなリンペプチド凝集
体の形成を促進することができる。しかし、ある
場合には、特に処理の終りに無機リン酸塩が過大
に濃縮されていないリンペプチド部分を得るのが
望ましい場合には、プロセスの最終段階におい
て、リンペプチドを残留させることができかつ好
ましくは2000〜50000特に好ましくは2000〜10000
の範囲のカツトオフ限界を示す膜を使用する場合
に、リン酸塩添加量を減少することができ、ある
いは完全に抑制することさえできる。 上述のように、上述の各限外濾過工程に次いで
ダイアフイルトレーシヨン工程を行い、この工程
の間に限外濾過生成物をさらに精製するために、
水または塩含有水溶液のような液体を連続的また
は断続的に添加する。本発明においては水がダイ
アフイルトレーシヨンに適当であることを確かめ
た。 酵素加水分解工程に次いで限外濾過工程および
ダイアフイルトレーシヨン工程を行う結果とし
て、一方では本発明においてさらに処理されるペ
プチド溶液が得られ、他方ではタンパク残留物お
よび残留酵素とからなる部分（残留物）が得られ
る。本発明における最終段階で行う限外濾過工程
およびダイアフイルトレーシヨン工程の結果とし
て、一方では非リン酸化ペプチドが透過液として
得られ、他方ではリンペプチドが残留液として得
られる。 本発明の好適例では、６％カゼインナトリウム
溶液から出発してペプチド部分を生成する。酵素
反応装置における加水分解は４ｇ／の分量のパ
ンクレアチンによつてPH８において37℃で行う。
次いで反応装置の内容物を水によつてダイアフイ
ルトレーシヨンする。次いで得られたペプチド溶
液をPH6.2まで酸性化し、CaCl₂（0.5％）および
PO₄HNa₂（0.2％）を添加することにより凝集さ
せる。次いでこのペプチド溶液を限外濾過および
ダイアフイルトレーシヨンする。1000の６％カ
ゼインナトリウムから出発して、900の非リン
酸化ペプチド溶液（45ｇ／）および100〜200
のリンペプチド溶液（80ｇ／）を得ることがで
きる。 このようにして本発明における最終段階で得ら
れたリンペプチドは最も興味ある有価生成物であ
る。実際に、得られたリンペプチドはホスホセリ
ン含有量が大きく、芳香族アミノ酸（フエニルア
ラニン、チロシン、トリプトフアン）の含有量が
小さい。 従つて、このようにして得られたリンペプチド
含有量の大きい部分は、特殊なアミノ酸組成と、
全窒素に比べて高いミネラル物質（灰分）との両
者を特徴とする。これはリンペプチド部分が添加
された塩を錯体にする作用をするからである。 下記の第１表に本発明における生成物の主要特
性を示す。第１欄には参考として一価カゼイン塩
の特性を示す。

【表】 本発明の非リン酸化ペプチドは食養分野で多く
の用途がある。 一般に母乳タンパクの主要な優れた性質は、特
に低い値の腎臓浸透圧負荷（osmotic load）お
よびH⁺イオン負荷と共に、著しい窒素同化作用
を保証する点にあることが認められている。 極めて高い窒素同化作用と低い腎臓浸透圧負荷
およびH⁺イオン負荷との組合せは、今日特に活
気付与（reanimation）および治療食の分野で求
められている。これらの分野では高い同化作用と
いう必要条件と機能上の腎不全とが共存すること
が多い。 本発明の非リン酸化ペプチドはこれらの必要条
件を満たすのに適している。ある用途では、本発
明の非リン酸化ペプチドは不十分な分量の若干の
必須アミノ酸（フエニルアラニン、チロシン、ト
リプトフアン、シスチン）を含有する。そこで本
発明の非リン酸化ペプチドを他のタンパク質また
はペプチド、あるいは必須アミノ酸のアルフアケ
ト酸またはアルフア（OH）酸のいずれかの同族
体と組合せて、最適な生物価（biological
value）に導く良好なアミノ酸平衡を回復させる
のが有利である。 本発明の非リン酸化ペプチドは、特に本発明の
非リン酸化ペプチドをペプチド、必須アミノ酸ま
たは必須アミノ酸同族体と組合せた場合に、機能
上または構造上の腎臓欠陥と関連しているかまた
は関連していないパンクレアチン欠乏、代謝疾
患、栄養不足または障害にかかつている患者の栄
養上の必要条件を満たす。 従つて本発明の非リン酸化ペプチドは人体で完
全に同化できるダイエツト用または治療食用栄養
物に直接使用することができる。 従つて、本発明は、栄養補給の観点から許容さ
れる担体と組合せた非リン酸化ペプチドを有効量
で含有する栄養剤組成物に関するものである。か
かる有効量は得ようとする効果によつて広い範囲
で変動することがある。全組成物に対して10重量
％の分量が普通の場合には適当である。 また本発明の非リン酸化ペプチドを人および動
物の医薬として使用することができる。 また本発明は本発明の非リン酸化ペプチドを通
常の賦形剤と混合した状態で含有する栄養剤組成
物に関するものである。新規な非リン酸化ペプチ
ドの物理的形態（水性媒体に可溶性の粉末）を考
慮すると、提供する形態によつて困難が生ずるこ
とはない。本発明の新規な非リン酸化ペプチドは
そのまま、特に腸管経由で、例えば通常の食物と
混合して、摂取または投与することができる。ま
た、本発明の非リン酸化ペプチドは、例えば経口
投与に適する通常の賦形剤との組成物の形態で提
供することができる。従つて本発明の適当な栄養
剤組成物は、既知の賦形剤、例えばタルク、ステ
アリン酸マグネシウム、微粉砕シリカおよび他の
同様な既知担体を加えた錠剤またはカプセル剤の
形態で提供することができる。 次に本発明の非リン酸化ペプチドの製造方法を
図面を参照して例につき説明する。 第１図に示すように、一価カゼイン塩（カゼイ
ンナトリウムまたはカゼインカリウム）をベース
とした原料Ａは、径路（符号１）により直接処理
するか、あるいは他方の径路（符号２）により予
備処理することができる。この他方の径路による
例では、原料をレンネツトにより加水分解して対
応するパラカゼイン塩（パラカゼインナトリウム
またはパラカゼインカリウム）およびカゼイノマ
クロペプチド（CMP）を含有する溶液を生成す
る。このパラカゼインを酸性化（HCl）により沈
殿させる。次いで、沈殿したパラカゼインとカゼ
イノマクロペプチド（CMP）とを分離する。カ
ゼイノマクロペプチド（CMP）は、副生物Ｇで、
これは例えば水酸化ナトリウムにより中和し、次
いで塩化カルシウムを添加した後に限外濾過によ
り濃縮することができるが、これらの工程は図示
しない。 従つてこの方法の原料はカゼイン塩Ａまたはそ
の誘導体、すなわちパラカゼインである。 この方法の最初の段階は酵素反応装置における
加水分解（符号３）である。第１図に示すように
PHを８に上昇するのに適当な塩基を添加すると、
加水分解はパンクレアチンのようなタンパク分解
酵素によつて満足に進行する。次いで加水分解生
成物を限外濾過４し、しかる後に水によつてダイ
アフイルトレーシヨン５する。ペプチド部分Ｅ
と、残留タンパク質および酵素を含有する残留部
分Ｆとが得られる。この方法でさらに処理を受け
るのはペプチド部分Ｅである。次の工程は錯体形
成工程（符号６）で、この間に部分Ｅに塩化カル
シウムおよび所要に応じてリン酸塩
（PO₄HNa₂）を添加する。ペプチドを錯体形成
または凝集させた後に、生成物を限外濾過７し、
次いで水によつてダイアフイルトレーシヨン８す
る。かくして最後に非リン酸化ペプチドの含有量
が多い部分Ｂ（透過液）と、リンペプチド含有量
の多い部分Ｃとが得られる。 第２図に本発明の非リン酸化ペプチドの製造に
使用できる膜式酵素反応装置を示す。 この反応装置は第一に符号１５で示す反応タン
クを具える。リンカゼイン塩を導管１６から連続
的に供給する。装置１７はPHを測定する役割と、
ペプチド結合が切断された際に放出されるH⁺イ
オンを中和することにより反応タンク内のPHを一
定に維持する役割との両者を行う。この装置はメ
トラーPH−スタツト（Mettler PH−stat）で、
電位増幅器と、等価点予備設定スイツチと、反応
剤供給用自動ビユーレツトとを具える。反応剤は
上述のような塩基性化合物である。過渡な電極汚
染は認められなかつた。導管１８を経て反応タン
クから取出した加水分解生成物を自動膜式ポンプ
１９により搬送する。実際の例では約1.76Kg／cm²
（25psi）において吐出量が720／ｈであるアミ
コン（AMICON）LP20Aモデルのポンプを使用
した。このポンプの出口において、生成物は導管
２０を通つて流れ、孔の大きさが150ミクロンの
プレフイルタ２１に供給される。符号２２は限外
濾過モジユールを示す。特定例では、使用した糸
は中空繊維タイプの限外濾過カートリツジを有す
るアミコンDC10Sであつた。透過液を導管２３
により回収する。これは所望のペプチド加水分解
物である。残留液を導管２４によりモジユール２
２から取出し、次いで交換器２５に供給し、しか
る後に導管２６により搬送して反応タンク１５に
再循環させる。 使用した膜は次の特性を有する中空繊維タイプ
のものであつた。

【表】 実施例 １ この例では原料としてカゼインナトリウムを使
用した。 第１図に示すプロセスにおいてカゼイノマクロ
ペプチド（CMP）部分およびペプチド部分を次
の２段階で製造した： (1) ３％カゼンノナトリウム水溶液を、タンク内
でレンネツト（20ml／100−ボル（BOLL）
レンネツト、1/10000）によりPH6.8、37℃にお
いて50分間加水分解した。次いで4N塩酸でPH
4.6まで酸性化することによりパラカゼインを
沈殿させた。乳液（lactoserum）100mlに対し
440mlの酸が必要であつた。 沈降後に、CMPを含有する上澄液をガーゼ
（gauze）で濾過し、次いで2N水酸化カリウム
によりPHを6.6に再調整した後に遠心分離（８
分間1000ｇ）した。次いでこの溶液に0.5ｇ／
のCaCl₂を添加した後、この溶液を膜で限外
濾過することにより濃縮した。使用した装置は
表面積1.4m²のホロー・フアイバ（Hollow
Fiber）タイプXM50のロミコン膜を装着した
タイプDC10のアミコン・モジユールであつた。
この製造実験で得た種々の生成物の化学分析結
果を第２表および第３表に示す。

【表】 た。

【表】 (2) 6.2％カゼインナトリウム水溶液を第２図に
示すと同一の膜式酵素反応装置内で加水分解し
た。使用した膜は表面積4.9m²のホロー・フア
イバタイプXM50の膜であつた。酵素（活性
4NFを有する牛のシグマ・パンクレアチン）
を４ｇ／の濃度で添加した。2N水酸化カリ
ウムを添加することにより反応装置のPHを８に
維持した。加水分解を37〜40℃で行つた。捕集
する前に透過液をタンク内で１時間再循環させ
た。このようにして得た透過液はリンペプチド
および非リン酸化ペプチドを含有していた。こ
の透過液をPH6.4まで酸性化し、次いで0.6％の
CaCl₂および0.1％のPO₄HNa₂を添加すること
によりリンペプチドを凝集させた。しかる後
に、限外濾過および水によるダイアフイルトレ
ーシヨンによりペプチドを２個の群に分別して
非リン酸化ペプチド部分をすべて除去した。濃
縮工程およびダイアフイルトレーシヨン工程は
XM50タイプの膜を使用してPH6.5、温度８℃
において行つた。ダイアフイルトレーシヨンし
て得た濃縮液はリンペプチド部分に相当してい
た。 種々の生成物の分析結果を第４表および第５
表に示す：

【表】 第５表 リンペプチド中のアミノ酸の組成 （試料100ｇ当りのアミノ酸のｇ数） Asp 5.6 Cys ε Thr 3.3 Met 0.45 Ser 18.5 Ile 9.5 Prc 4.7 Leu 2.9 Glu 36.8 Tyr ε Gly 1.7 Phe ε Ala 2.8 Lys 0.9 Val 8.7 His 0.5 Arg 0.3

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の非リン酸化ペプチドの製造工
程を示すフローシート、第２図は本発明の非リン
酸化ペプチドの製造に使用する反応装置の１例の
配置図である。 １……直接処理径路、２……予備処理径路、３
……加水分解、４……限外濾過、５……ダイアフ
イルトレーシヨン、６……錯体形成工程、７……
限外濾過、８……ダイアフイルトレーシヨン、１
５……反応タンク、１６，１８，２０，２３，２
４，２６……導管、１７……PH測定・維持装置、
１９……ポンプ、２１……プレフイルタ、２２…
…限外濾過モジユール、２５……交換器、Ａ……
原料カゼイン塩、Ｂ……透過液（非リン酸化ペプ
チドの含有量の多い部分）、Ｃ……リンペプチド
含有量の多い部分、Ｅ……ペプチド部分、Ｆ……
残留タンパク質および酵素を含有する残留部分、
Ｇ……副生物。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ リンカゼインの一価陽イオン塩またはその誘
   導体を含有するカゼインをベースとした物質を処
   理して得た非リン酸化ペプチドにおいて、 人体の生体内で起るタンパク質の消化を再現す
   ることができる少なくとも１種のタンパク分解酵
   素によつて前記原料を酵素加水分解し；このよう
   にして得た加水分解物を、このなかのすべてのペ
   プチドを通して透過液中に存在させることのでき
   る膜を使用して、少なくとも１個の限外濾過工程
   で処理し；このようにして得た透過液に、前記ペ
   プチドのリン酸化部分と凝集体を形成することの
   できる少なくとも１種の二価陽イオン塩を添加し
   て、本質的にリンペプチド凝集体と非リン酸化ペ
   プチドとを含有する溶液を生成させ；この溶液と
   前記リンペプチドを残留させることのできる少な
   くとも１個の膜とを接触させることにより少なく
   とも１個の限外濾過工程で非リン酸化ペプチドと
   比較的大きい粒度を有するリンペプチドとを分離
   することによつて得た生成物であつて、次のパラ
   メータ： 全芳香族アミノ酸＞12％ セリン含有量＜４％ 遊離アミノ酸含有量＜10％ を有することを特徴とする非リン酸化ペプチド。 ２ リンカゼインの一価陽イオン塩またはその誘
   導体を含有するカゼインをベースとした物質を処
   理して得た非リン酸化ペプチドを活性成分として
   含有する栄養剤組成物において、 前記非リン酸化ペプチドは、人体の生体内で起
   るタンパク質の消化を再現することができる少な
   くとも１種のタンパク分解酵素によつて前記原料
   を酵素加水分解し；このようにして得た加水分解
   物を、このなかのすべてのペプチドを通して透過
   液中に存在させることのできる膜を使用して、少
   なくとも１個の限外濾過工程で処理し；このよう
   にして得た透過液に、前記ペプチドのリン酸化部
   分と凝集体を形成することのできる少なくとも１
   種の二価陽イオン塩を添加して、本質的にリンペ
   プチド凝集体と非リン酸化ペプチドとを含有する
   溶液を生成させ；この溶液と前記リンペプチドを
   残留させることのできる少なくとも１個の膜とを
   接触させることにより少なくとも１個の限外濾過
   工程で非リン酸化ペプチドと比較的大きい粒度を
   有するリンペプチドとを分離することによつて得
   た生成物であつて、次のパラメータ： 全芳香族アミノ酸＞12％ ８％＜セリン含有量＜４％ 遊離アミノ酸含有量＜10％ を有することを特徴とする栄養剤組成物。 であることを特徴とする栄養剤組成物。 ３ 経口栄養または経腸栄養に適した中性担体と
   組合せられていることのあるダイエツト用または
   治療食用の栄養物である特許請求の範囲第２項記
   載の栄養剤組成物。 ４ さらに必須アミノ酸補給源を含有する特許請
   求の範囲第３項記載の栄養剤組成物。