JPH02268649A - ペプチド混合物、その製造方法およびそれを含有せしめた食品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、牛乳カゼインのペプシンによる加水分解物よ
り得られるペプチド混合物またはその塩、その製造方法
、およびそれを含有せしめた食品に関する。本発明のペ
プチド混合物またはその塩は、体調調節機能、具体的に
は、鎮静作用を有しており、該ペプチド混合物またはそ
の塩を含有せしめた食品は、例えば機能性食品あるいは
健康食品として有用である。

［従来の技術］ 食品には生命維持に必要な栄養源としての機能と、味覚
・嗅覚応答にかかわる感覚機能とがあるが、近年、食品
に第３の機能を見い出そうとする動きがある。ここに言
う第３の機能とは、高次の生命活動に対する食品の体調
調節機能のことであリ、例えば免疫賦活化機能、アレル
ギー低減化機能、神経系調節機能、高血圧防止機能、老
化抑制機能等が考えられている。そして食品の品質変換
操作により得られるものであって、上記の機能を有する
成分を含有せしめた食品は機能性食品と呼ばわる。

さて、カゼインは乳汁中に存在する分子量約７５０（１
０〜３７５０００の端上白質であるが、これから体調調
節機能を有する成分を見い出す試みは既になされている
。例えば、＾ｅｔａ　Ｍｅｄｉｃａ　Ｋｉｎｋｉｌｌｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ、第３＠、１１頁（１９７８年）には
、カゼインをペプシンで加水分解して得られるもの（以
下、カゼインのペプシン加水分解物と呼ぶ）を５ｅｐｈ
ａｄｅｘ　Ｇ−２５で分画し、各両分の血圧低下作用を
調べたと記載されている。しかし、この両分を特定する
具体的な物理化学的性質についてはこの記載からは不明
である。また、特開昭６０−１１４２５号には、カゼイ
ンのペプシン加水分解物から得られる分子ｉ　２００〜
１５００のペプチド混合物とその血中コレステロール低
下作用が開示されている。

しかしながら、上記各開示は、カゼインのペプシン加水
分解物の血圧低下作用あるいは血中コレステロール低下
作用に関するもので、いすねにおいても鎮静作用につい
ての記載はない。

［発明が解決しようとする課題］ 社会の複雑化に伴ない日常生活においても精神的ストレ
スが増加傾向にあり、心身を安静に保つ機能、すなわち
鎮静作用を有する食品が望まれる様になって来ている。

本発明者等はこの様な機能を付与した食品、例えば機能
性食品あるいは健康食品を提供すべく、カゼインのペプ
シン加水分解物から鎮静作用を有する両分を探索した。

本発明の目的は、鎮静作用を有するペプチド混合物また
はその塩、その製造方法およびそれを含有せしめた食品
を提供することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者等は、カゼインをペプシンで加水分解し、この
加水分解物を種々分画して鎮静作用を検討した結果、 （ａ）水に対する溶解度が１００　ｍｇ／ｍ１以上であ
り、 （ｂ）　ｐＨ９のアンモニア性８０￥；エタノールに対
する溶解度がｌＩ！１ｇ／１Ｉ１１以下であり、（ｃ）
分子量分布が８５０〜５６０００の範囲内にある、 ことを特徴とするペプチド混合物またはその塩が鎮静作
用を有することを見い出し、本発明を完成した。

以下、本発明ペプチド混合物の製造法について説明する
。

まず、カゼインと、ペプシンとを塩酸中に加え、カゼイ
ンを加水分解する。

カゼインには、牛乳あるいは脱脂牛乳等から常法によっ
て得られるカゼイン、あるいはこれを精製して得られる
αＳカゼイン等の牛乳由来のカゼイン（牛乳カゼイン）
を用いる。

塩酸には、通常０．０５〜１．５規定の塩酸、好ましく
は約０．１規定の塩酸を用い、その使用量は、通常カゼ
インに対して７〜２０倍（Ｖ／Ｗ）である。

カゼインに対するペプシンの使用量は、カゼイン１ｇに
対して通常１万〜ＩＩ）万ユニットであり、好ましくは
３万〜６万ユニツトである。

ペプシンには精製ペプシンばかりでなくペプシンを主成
分とする酵素製剤、例えば含糖ペプシン（第十−改正日
本薬局方解説書Ｄ−２１４、日本公定書協会監修、法用
書店発行　１９８６年参照）の原末も使用し得るが、こ
の場合も」二記ユニッ１〜量を使用する。

なお、ここで言うユニットとは、ヘモグロビンを基質と
して測定した値である（　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉ口Ｅｎｘ
ｙｍｏｌｏｇｙ、Ｇｅｒｔｒｕｄｅ　Ｅ、　Ｐｅｒｌｍ
ａｎｎおよびＬａ５ｚｌ。

Ｌｏｒａｎｄ　　ｔｔＪＡ集、１９巻、３１６〜３１９
　頁、１９７０年、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ　Ｉ
ｎｃ、　（Ｌｏｎｄｏｎ）　ＬＴＤ、発行　参照）。

加水分解反応は、通常３０〜５０℃で３０分〜２０時間
、好ましくは約３７℃で３〜７時間行なう。

次に、上記加水分解反応液にアルカリ、好ましくは、ア
ンモニア水を添加し反応液のｐＨを約９に調整し、次に
反応液玉に対して通常１〜２０倍容量、好ましく２〜１
０倍客五のエタノールを加えペプチド混合物を沈殿させ
る。

最後に、沈殿したペプチド混合物を濾過、遠心分離ある
いはデカンテーション等の通常の分離手段で取得して減
圧乾燥するか、沈殿したペプチド混合物を通常２〜１０
倍（ｗ／ｖ）の水に加え、要すれば濾過あるいは遠心分
離等により不溶物を除去後、水溶液を噴ｎ乾煙あるいは
凍結乾燥して粉末状の本発明ペプチド混合物を得る。な
お、本発明ペプチド混合物の実施形態によって、乾燥粉
末として取得する必要の無い場合は、上記水ｍ液を濃縮
し、本発明ペプチド混合物をこの濃厚溶液あるいはペー
ストとして得てもよい。

本発明ペプチド混合物は常法により、塩酸塩、酢酸塩、
クエン酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩、アンモニウム
等、食品として許容される塩に変換することが出来る。

本発明ペプチド混合物の分子量分布をゲルクロマトグラ
フィー法により測定すると、少なくとも５種のピークが
認められメインビークは分子量５６００〜１０３００に
相当するところに現われ、分子量分布は８５０〜５６０
００の範囲にある。

一方、本発明ペプチド混合物は、水に対して１００ｍｇ
／ｍ１以上の溶解度を示し、ｐ１１９のアンモニア性８
０％エタノールに対し１　ｍ３／ｍ１以下の溶解度を示
す。

本発明ペプチド混合物およびその塩は、心身の過度な緊
張を緩和し心身を安静に保つための食品、例えば機能性
食品あるいは健康食品の成分として使用される。

これら食品は、ブドウ糖、水飴、ガムベース、香料、ク
エン酸、水などの各種食品原料に本発明ペプチド混合物
またはその塩を通常０，０５〜５重量％添加し、常法に
より、例えば清涼飲料水、スポーツ飲料、ジュース等の
各種ソフトドリンク、チューインガム、およびキャンデ
イ等の形態に製造する事が出来る。なお、本発明ペプチ
ド混合物またはその塩の添加による風味低下はない。

［発明の効果］ 本発明のペプチド混合物およびその塩は、鎮静作用を有
する。この事は、本発明のペプチド混合物を、例えばマ
ウスに経口投与すると自発運動を抑制する（後記試験例
１参照）が、筋弛緩作用を示さない（後記試験例２参照
）ことから明らかである。

一方、本発明のペプチド混合物およびその塩は低毒性で
あり、例えばマウスに５ｇ／ｋｇ体重の割合で経口投与
しても毒性を発現しない。

従って本発明ペプチド混合物およびその塩は、心身の過
度な緊張を緩和し心身を安静に保つための食品、例えば
機能性食品あるいは健康食品の成分として有用である。

以下に試験例を挙げて本発明のペプチド混合物の有用性
を示す。

試験例１　（自発運動抑制作用） （ａ）検体 ・本発明ペプチド混合物Ａ・・・実施例１で得たペプチ
ド混合物 ・本発明ペプチド混合物Ｂ・・・実施例２で得たペプチ
ド混合物 ・本発明ペプチド混合物Ｃ・・・実施例３で得たペプチ
ド混合物 ・比較へブチド混合物Ｘ・・・実施例２の本発明ペプチ
ド混合物の製造過程で除去したペプチド混合物（実施例
２の本発明ペプチド混合物の製造に於いて、カゼイン加
水分解反応液をｐＨ９に調製しエタノールを添加しても
沈殿しなかったペプチド混合物。エタノール添加後の上
清液を濃縮・乾燥して得た。） ・牛乳カゼイン（牛乳から常法で調製した）（ｂ）試験
方法 検体をそれぞれ蒸留水に溶解または懸濁し、この液を０
．２ｍｌ／ｋｇ体重の割合でｄｄＹ系雄性マウス（５週
齢、１群１０〜２０匹）に経口投与した（検体の投与量
はそれぞれ３０００ｍｇ／ｋｇ体重）、対照群マウスに
は、生理食塩水のみを０．２＋ｎｌ／ｋｇ体重の割合で
経口投与した。

次に、実験動物運動量測定装置ＡＣＴＹ−３０３（バイ
オメゾイカ社製）でマウスの自発運動量を測定した。検
体投与後１５分間における各群の自発運動量の平均値を
算出すると共に、検体投与群の自発運動量と対照群の自
発運動量との間の有意差検定を行った。

（ｃ）試験結果 第１表に示す。

第１表 ）　　ｐ＜ｏ、ｏｓ、　”）　　ｐ＜ｏ、ｏｘ（ｔ−テ
スト）比較ペプチド混合物Ｘおよび牛乳カゼインは、自
発運動を抑制しなかったが、本発明ペプチド混合物はい
ずれも有意に自発運動を抑制した。

試験例２　（筋弛緩作用） （ａ）検体 ・本発明ペプチド混合物Ａ・・・実施例１で得たペプチ
ド混合物 ・本発明ペプチド混合物Ｂ・・・実施例２で得たペプチ
ド混合物 ・本発明ペプチド混合物Ｃ・・・実施例３で得たペプチ
ド混合物 （ｂ）試験方法 Ｒｏｔａｒｏｄ法により測定した。すなわち、まず水平
に支えられ毎分５回転する直径３ｃｍの木製の棒（ｒｏ
ｔａｒｏｄ　）上にｄｄＹ系マウスを、回転方向と逆方
向に向けて乗せ、１分間以上ｒｏｔａｒｏｄ上に留るこ
との出来るマウスを選び、これを１群８匹毎の群に分け
た。

次に、各検体を蒸留水に懸濁し、各群のマウスにこの懸
濁液を０．２＋Ｉｌｌ／Ｊ体重の割合で軽口投与した（
検体投与量は３ｇ／ｋｇ体重、または９ｇ／ｋｇ体重）
。なお、対照群マウスには蒸留水のみを経口投与した。

次に、検体投与してから１５分後に、上記と同様にして
マウスをｒｏｔａｒｏｄ上に乗せ、１分間に２回以上落
下したマウスの数を数え、フィッシャーテストにより検
体投与群と対照群との有、ｔ！差検定を行った。

（ｃ）試験結果 本発明ペプチド混合物投与群と対照群との間に有意差は
なく、本発明ペプチド混合物は筋弛緩作用を示さなかっ
た。結果を第２表に示す。

第２表 以上の試験例１〜２の結果の通り、本発明ペプチド混合
物は、自発運動を抑制するが筋弛緩作用を示さない。

［実施例コ 以下、実施例により本発明を説明する。

なお、実施例中、ペプチド混合物の分子量分布は、ゲル
クロマトグラフィー法（下記条件の高速液体クロマトグ
ラフィー）により測定した。

高速液体クロマトグラフ機種：ボンブ、マルチポンプＣ
ＣＰＭ、検出器、紫外線吸収測定器ＵＶ−ａＯＵ　（い
ずれも東洋曹達株式会社製）。

カラム：　Ａｓａｈｉｐａｋ　Ｇ５−３２０　、７．６
＋ｎｍ　ｘ　５００ｍｍ（旭化成工業株式会社製）。

溶出溶媒、４Ｍグアニジン−アセトニトリル（９５：５
）混合溶媒。

検出波長：　２３０ｎｍ　。

試料注入法：濃度４ｍｇ／ｍｌの試料溶液１０ｊＬ（ｌ
を注入。

標準物質：アルドラーゼ（ＭＷ　４２０００）　　　リ
ゾチーム（ＭＷ　１４３００）、インスリンＢ釦（ＭＷ
　３４％）、ブラジキニンボテンシェータ（ＭＷ　１０
５２）　　メチオニンエンケファリン（ＭＷ　５７４）
。

実施例１ ０．１規定塩酸ｔｅｏｏ＋＋＋１に牛乳カゼイン１ｏ。

ｇ（牛乳から常法で得た）および含糖ペプシン原末（天
野製薬製）１２　ｇ　（４５６，９万ユニツト）を３７
℃で加え、同温で６時間攪拌して加水分解反応を行なっ
た。反応液のｐＨをアンモニア水の添加によって９に調
整した後、エタノール２３３３ｍ１を加えて室温に静置
した。上溝液をデカンテーションにより除去し、沈澱物
を水１００１に加えた。不溶物を遠心分離により除去し
、得られた水溶液を凍結乾燥し、白色粉状物として本発
明のペプチド混合物１０．６ｇを得た。

分子量分布：８５０〜３４０００　（メインビーク１０
３００）溶解度（２０℃）二本に対して１００ｍｇ／ｍ
１以上、ｐＨ９のアンモニア性８０零エタノールに対し
て１　ｍｇ／＋ｍｌ以下。

実施例２ ０．１規定塩酸１０１００Ｏに、３７℃でカゼイン１０
０ｇ（牛乳から常法で得た）および含糖ペプシン原末（
天野製薬製）　１２　ｇ　（４５６，９万ユニツト）を
加え、同温で６時間攪拌して加水分解反応を行なった。

反応液のｐＨをアンモニア水の添加によって９に調整し
た後、エタノール４０００ｍ１を加えて室温に静置した
。上清液をデカンテーションにより除去し、沈澱物を水
６０ｍ１に加えた。不溶物を遠心分離により除去し、得
られた水溶液を凍結乾燥し、白色粉状物として本発明の
ペプチド混合物１８．６ｇを得た。

分子量分布二８５０〜５Ｆ＋０００（メインビーク１０
３００）溶解度（２０℃）：水に対してｌｏＯｍｇ／ｍ
１以上、ｐＨ９のアンモニア性９０零エタノールに対し
てｍｇ／ｍｌ以下。

酢酸塩の調製；上記本発明ペプチド混合物２０５．３ｍ
ｇを水５ｍｌに溶解し、酢酸を滴下して溶液のｐＨを約
４に調整した後、凍結乾燥して本発明ペプチド混合物の
酢酸塩２０７．３ｍｇを得た。

実施例３ ０．１規定塩酸１０１００Ｏに３７℃でカゼインｘｏｏ
ｇ（牛乳から常法で得た）および含糖ペプシン原末１２
　ｇ　（４５６，９万ユニツト）を加え、同温で６時間
攪拌し加水分解反応を行なった。反応液のｐＨをアンモ
ニア水の添加によって９に調整した後、エタノール９０
００ｍ１を加えて室温に静置した。上清液をデカンテー
ションにより除去し、沈澱物を水６Ｃ）＋１に加えた。

不溶物を遠心分離により除去し、得られた水溶液を凍結
乾燥し、白色粉状物として本発明のペプチド混合物３９
．０ｇを得た。

分子量分布：８５０〜４９０００　（メインビーク５８
００）溶解度（２０℃）：水に対して１００ｍｇ／ｍ１
以上、ｐＨ９のアンモニア性９０にエタノールに対して
１　ｍｇ／ｍ１以下。

！［例４　　（チューインガムの製造）配合組成　　　
　　　　　　　　　重量部チューインガムベース　　　
　　　２０．Ｏ粉　　　＄１　　　　　　　　　　　　
　　　　　　５０．　６ブドウ１！　　　　　　　　　
　　　　１０・　０水　　　飴　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１８．０ペパーミントオイル　　　　
　　　　０．８粉末へバーミント香料　　　　　　　０
．５本発明ペプチド混合物　　　　　　　０．１製　　
法 ６０℃に保温したチューインガムベース及び水飴をニー
ダ−に投入して、１０分間混練し、粉糖の１７３量及び
ブドウ糖を投入して５分間、次いで粉糖のｌ／３量を投
入して５分間混練した。次に、ペパーミントオイル、粉
末へバーミント香料および本発明ペプチド混合物（実施
例１と同様にして製造した）を残りの１／３量の粉糖に
混合してから投入し、５分間混練してガムミックスを得
た。このガムミックスを通常の方法で、押出、圧延、切
断、包装し、板ガムとして製品化した。

実施例５　（チューインガムの製造） 配合組成　　　　　　　　　　　　重量部バブルガムベ
ース　　　　　　　　２５．０無水結晶ブドウ糖　　　
　　　　　３３，５含氷結晶ブドウ糖　　　　　　　　
２０．０粉　　　９　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１０．０水　　　飴　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１０．０バナナフレーバー　　　　　
　　　　０６８クエン酸　　　　　　　　　　　　　　
０．　５ベニバナ色素　　　　　　　　　　　ｏ、　　
ｉ本発明ペプチド混合物　　　　　　　ｏ、　　ｉ製法 ５０℃に保温したバブルガムベース、クエン酸、ベニバ
ナ色素及び水飴をニーダ−に没入して１０分間混練し、
次いで無水結晶ブドウ糖の１／２ユ及びｌ糖を投入して
５分間、含水結晶ブドウ糖を投入してさらに５分間混練
した。次いでバナナフレーバー及び残りの１７２量の無
水結晶ブドウ糖に本発明ペプチド混合物（実施例３と同
様にして製造した）を混合してから投入し、５分間混練
してガムミックスを得た。このガムミックスを通常の方
法で、押出、サイジング、切断、包装しブロックガムと
して製品化した。

実７＋λ例６　（キャンデイの製造） 配合組成　　　　　　　　　　　　重量部グラニユー糖
　　　　　　　　　　　６５．０水飴（水分３０％）　
　　　　　　　　５０．０アツプルフレーバー　　　　
　　　　０．　２クエン酸　　　　　　　　　　　　　
　０．　３クチナシ色素　　　　　　　　　　　０．１
本発明ペプチド混合物　　　　　　　０．　１製法 予備溶解釜に、グラニユー糖、水飴及び少量の水を没入
し、−度沸騰させて、グラニユー糖を完全に溶解し、こ
の混合物を真空クツカーにポンプで送り込み、真空度４
６０　ｍｍＨｇ、温度１３０℃で煮詰めた後、取出釜に
取り、混合釜に移した。次いでアップルフレーバー、ク
エン酸及びクチナシ色素を投入して十分混合後、冷却盤
上に広げ、温度が１１０℃以下にな５た時点で本発明ペ
プチド混合物（実施例２と同様にして製造した）を混合
しキャンデイマスな得た。

このキャンデイマスを、通常の方法で、コーンローラー
に投入し、サイジング、型打後、包装して、粒状ハード
キャンデイとして製品化した。

衷ＪＬ幻ニー（スポーツ飲料） 配合組成　　　　　　　　　　　　重量部砂　　　糖　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　７．０クエン酸
　　　　　　　　　　　　　２．１クエン酸ナトリウム
　　　　　　　　０．　８塩化ナトリウム　　　　　　
　　　　０．４１乳酸カルシウム　　　　　　　　　　
０．５２塩化カリウム　　　　　　　　　　　０．２８
塩化マグネシウム　　　　　　　　０．１２フレーバ　
　　　　　　　　　　　０，１本発明ペプチド混合物　
　　　　　０．０５水　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　８８．７製法 全原料を水に溶解させ、フィルターを通過させ８５℃ま
で加温した後、充填巻き締めしクーラーにて４０℃まで
冷却して製品化した。

手続補正書 （自発） 事件の表示 平成１年特許願第８８ ８７号 ２゜ 発明の名称 ペプチド混合物、 その製造方法およびそれを 含有せしめた食品 ３、補正をする者 事件との関係 特 許 出 願 人 住所 東京都墨田区墨田五丁目 ７番４号 大阪市部島区友渕町 １丁目 ５番９０号 ５、補正により増加する発明の数　　なし６．補正の対
象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 （１）明細書第１Ｏ貰１３行目、同書第１Ｏ頁１７行目
および同書第１２頁１５行目のｒ　０．２ｍｌ／ｋｇＪ
をそれぞれｒ　２０ｍ１／ｋｇ　Ｊと訂正する。

以上 手糸売ネ甫正１） （自発） 平成１年６月２８日 事件の表示 平成１年特許願第８８ ６８７号 ２　。

発明の名称 ペプチド混合物、 その製造方法およびそれを 含有せしめた食品 ３、補正をする者 事件との関係 特 許 出 願 人 住所 東京都墨田区墨田五丁目 １７番４号 大阪市部島区友渕町 １丁目 ５番９０号 ５、補正により増加する発明の数　　なし補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄 ７、補正の内容 （１）明細書第１６頁９行目および同書第１７頁１０行
目の　ｒ９０Ｘ、をそれぞれｒ８０％ＨＪと訂正する。

（２）明細書第１Ｏ貰１０行目のｒ　ｍｇ／ｍｌ」をｒ
　１　ｍｇ／ｍｌ　Ｊと訂正する。

（３）明細書下１９頁１３行目の「サイジング」をｒサ
イジングＪと訂正する。

（４）明細書第１Ｏ貰１３の「フレーバ」を「フレーバ
ー」と訂正する。

（５）明細書第１Ｏ貰１３の「本発明ペプチド混合物」
をｒ本発明ペプチド混合物（実施例２に従い製造）Ｊと
訂正する。

以上

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）牛乳カゼインのペプシンによる加水分解物を分画
   して得られるペプチド混合物であって、（ａ）水に対す
   る溶解度が１００ｍｇ／ｍ１以上であり、 （ｂ）ｐＨ９のアンモニア性８０％エタノールに対する
   溶解度が１ｍｇ／ｍｌ以下であり、 （ｃ）分子量分布が８５０〜５６０００の範囲内にある
   、 ことを特徴とするペプチド混合物またはその塩。
2. （２）牛乳カゼインを塩酸中ペプシンで加水分解し、そ
   の反応液のｐＨを約９に調整し、次にエタノールを加え
   て沈殿するペプチド混合物を取得することを特徴とする
   特許請求の範囲第１項に記載のペプチド混合物またはそ
   の塩の製造方法。
3. （３）特許請求の範囲第１項に記載のペプチド混合物ま
   たはその塩を含有せしめた食品。