JPH0488984A

JPH0488984A - 組換え型ミンク成長ホルモン遺伝子、組換え型ミンクプレ成長ホルモン遺伝子、ミンク成長ホルモン又はミンクプレ成長ホルモン形質転換プラスミド、及び、ミンク成長ホルモン又はミンクプレ成長ホルモン形質転換大腸菌

Info

Publication number: JPH0488984A
Application number: JP20384690A
Authority: JP
Inventors: Kazuaki Shoji; 和明荘司; Eiji Ohara; 英治大原; Masanori Watabiki; 綿引　正則; Sukeyasu Yoneda; 祐康米田
Original assignee: NIPPON JIIN KK
Current assignee: NIPPON JIIN KK
Priority date: 1990-08-02
Filing date: 1990-08-02
Publication date: 1992-03-23
Anticipated expiration: 2013-08-20
Also published as: JP2787729B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、ミンク成長ホルモンに関するものであり、特
に、組換え型ミンク成長ホルモン、組換え型ミンク成長
ホルモン構造遺伝子、組換え型ミンクプレ成長ホルモン
、組換え型ミンクプレ成長ホルモン構造遺伝子、組換え
プラスミド、組換え型ミンク成長ホルモン及び組換え型
ミンクプレ成長ホルモンの製造法に関するものである。

［従来の技術］成長ホルモンは、脳下垂体好酸性細胞で産生されるペプ
チドホルモンである。

ホ乳類の成長ホルモンは脳下垂体前葉において生産され
るが、それらの活性ならびに構造は、例えば、ヒト、ウ
シ、ブタ、ヒツジ等で既に知られている。このホルモン
の生物学的活性には著明な種差があり、霊長類には霊長
類のもののみが有効であることがわかっている。また、
免疫学的にも種差があり、ヒトの成長ホルモンに対する
抗体はウシのものと交差反応を示さない。

成長ホルモンの主な生理作用はその名前のごとく、身体
の多くの生体組織・器官に作用して、成長を促進するこ
とである。また、成長促進の他、タンパク貿同化促進作
用、脂質代謝等の同化作用にも影響を与えることが知ら
れている。

成長ホルモンを動物に投与した場合、動物の成長速度、
体重増加及び肉生産を著しく増大させることがかつてか
ら知られていた。しかしながら、天然の成長ホルモンは
脳下垂体に掻く微量にしか含まれておらず、遺伝子組換
え技術の開発によってその構造決定及び微生物における
組換えホルモンの生産がヒト、ウシ等で早くから試みら
れていた。

［発明が解決しようとする課題］しかし、ミンク成長ホルモンについては、ホルモンタン
パク質が単離されたという報告はなく、ホルモンタンパ
ク質及び遺伝子の構造は全く解析されていない現状であ
った。成長ホルモンの生物学的活性には前述のように著
明な種差があることから、ミンクの養殖において、ミン
ク成長ホルモンの研究開発が望まれていた。

そこで上記の問題を鑑み、本発明者らは、遺伝子組換え
技術を利用したミンク成長ホルモンの構造解析を行い、
将来の大量供給を目的として本発明の完成に至った。

さらに付言すると、本発明によって、ミンク成長ホルモ
ン構造遺伝子をクローニングして、塩基配列を決定する
だけでなく、ミンク成長ホルモンのアミノ酸配列が解明
され、ミンク成長ホルモンの大腸菌等の微生物による生
産が可能になり、多様な生理作用を持つミンク成長ホル
モンのさらに詳しい生理作用の研究に役立つとともに、
その応用範囲の広がることも予想される。

部ち、ミンク成長ホルモン遺伝子に関して、本発明者ら
がミンクプレ成長ホルモン遺伝子をｊ＃離し構造を決定
し、ミンク成長ホルモンの構造についてもこれを解明し
たものである。

［課題を解決するための手段］本発明の第１の発明に係る組換え型ミンク成長ホルモン
又は組換え型ミンクプレ成長ホルモンは、ミンク脳下垂
体に存在するｍＲＮＡ由来のものである。

第２の発明に係る組換え型ミンク成長ホルモンは下記の
アミノ酸配列の全部又は一部を有するものである。

Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−ＡＩａ、−Ｍｅｔ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−
５ｅｒ−５ｅｒ”Ｌｅｕ−ＰｈｅＡｌａ−＾ｓｎ−Ａｌ
ａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−）１ｉ
ｓ−ＬｅｕＨ１ｓ−Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−＾１ａ−＾１ａ
−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−八５ｐ−Ｐｈｅ−
Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−４５５〇八へｇ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−１１ｅ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａ
ｌａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−＾１ａ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈ
ｅ−５ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ
−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−
＾１ａ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−５ｅｒ−７５８゜＾ｓｐ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−＾ｒｇ−Ｐ
ｈｅ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ−Ｇｌ
ｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ
−ＧｌｎＰｈｅ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｐ
ｈｅ−Ｔｈ１００Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｒ　　　
　　　　　　　　　　　　　１１０Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−Ｔｈｒ−５ｅｒ−Ａｓｐ−＾ｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙ
ｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｇｉｎ＾１ａ−Ｌ
ｅｕ−Ｍｅｔ−＾ｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−＾５
ｐ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ　１ａ−Ｇ　
１ｙ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｎ−Ｔ
ｈｒ−Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｔｈ
ｒ−＾５ｎ−Ｌｅｕ−八ｒｇ−５ｅｒへ５５　　　　　
　　　　　　　　　　　　１６０Ａｓｐ−八５ｐ−Ａｌ
ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−八５ｎ−Ｔｙｒ−Ｇ　１
ｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ
−Ｌｙｓ−八５ｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−
Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−＾ｒｇ−Ｖａｌ−Ｍ
ｅｔ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−＾ｒｇ−Ｐｈｅ−Ｖａ
１−Ｇｌｕ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
第３の発明に係る組換え型ミンク成長ホルモン構造遺伝
子は、第２の発明のアミノ酸配列をコードするものであ
る。

第４の発明に係る組換え型ミンクプレ成長ホルモンは、
下記のアミノ酸配列の全部又は一部を有するものである
。

Ｍｅｔ−＾１ａ−＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａ
ｓｎ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈ
ｅ−＾１ａ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ
−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−
八１ａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−＾１ａ−ＭｅｔＰｒｏ−Ｌｅ
ｕ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−＾１ａ−八５ｎ
−Ａｌａ−Ｖａ１Ｌｅｕ−＾ｒｇ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｈ
ｉｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ａｌａ＾１ａ
−＾５ｐ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−
Ｇｌｕ−八ｒｇ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−＾ｒｇ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−１１
ｅＧＩｎ−へｓｎ−＾１ａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−八１ａ−
Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−５ｅｒＧｌｕ−Ｔｈｒ−１１
ｅ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ
−ＡｓｐＧｌｕ−Ａｌａ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−へｒｇ−５
ｅｒ−八ｓｐ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−＾ｒｇ−＾ｒ
ｇ−Ｐｈｅ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−１１ｅ
−Ｇｌｎ−５ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
Ｖａｌ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｒｇ−Ｖ
ａｌ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ
ｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＴｈｒＳｅｒ−＾ｓｐ−Ａｒｇ−
Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａ
ｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−１１ｅ−Ｇｌ
ｎ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｙ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−＾ｒｇ−
＾１ａ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇ
ｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−＾ｓ　ｐ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｐ　
ｈ　ｅ　−１７５’　　　　　　　　　　　　　　　　
１８０Ａｓｐ−丁ｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−へｒｇ−５ｅ
ｒ−八ｓｐ−＾５ｐ−Ａｌａ−Ｌｅｕ＋８５　　　　　
　　　　　　　　　　　　１９０Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓ
ｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ｃｙｓ
−ＰｈｅＬｙｓ−Ｌｙｓ−へ５ｐ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌ
ｙｓ−八１ａ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−ＴｙｒＬｅｕ−＾ｒｇ
−Ｖａｔ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−八ｒｇ−Ａｒｇ−
Ｐｈｅ−Ｖａ１Ｇｌｕ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｌ
ａ−Ｐｈｅ第５の発明に係る組換え型ミンクプレ成長ホ
ルモン構造遺伝子は、第４の発明のアミノ酸配列をコー
ドするものである。

第６の発明に係る組換えプラスミドは、第２の発明のア
ミノ酸配列の全部又は一部をコードする組換え型ミンク
成長ホルモン構造遺伝子を含有するものである。

第７の発明に係る組換えプラスミドは、第４の発明のア
ミノ酸配列の全部又は一部をコードする組換え型ミンク
プレ成長ホルモン構造遺伝子を含有するものである。

第８の発明に係る微生物は第６又は第７の発明に記載の
組換えプラスミドを含むものである。

第９の発明に係る組換え型ミンク成長ホルモン及び組換
え型ミンクプレ成長ホルモンの製造法は、第１の発明に
記載の組換え型ミンク成長ホルモン又は組換え型ミンク
プレ成長ホルモンをコードする遺伝子を組み込んた組換
えプラスミドを含有する微生物を培養基中にて培養し、
該培養基中に蓄積された請求項１の組換え型ミンク成長
ホルモン又は組換え型ミンクプレ成長ホルモンを分離精
製するものである。

本発明をさらに詳しく説明すると、ミンクから摘出した
脳下垂体組織をグアニジウムチオシア床−ト溶液中で破
砕し、遠心分離によりＲＮＡ分画を集め、得られたＲＮ
Ａ分画をオリゴテックス・ｄＴ３０　（日本合成ゴム社
製）にてポリ（＾）末端を有するポリ（Ａ）″ＲＮＡ　
（ｍＲＮＡ）を濃縮した。このｍＲＮＡから、ｃＤＮＡ
合成キット（ファルマシア社製）を用いて、ｃＤＮＡを
得た。次に、得られたｃＤＮＡを脱リン酸化されたＥｃ
ｏＲＩ末端を持つプラスミドｐＵｃ１９に連結して、ミ
ンク成長ホルモン構造遺伝子（ｃＤＮＡ）を含むＤＮＡ
釦を完全な環状ＤＮＡ構造のプラスミドとして完成した
。

本発明者らは、得られたプラスミドｐＫＳ−ｍＧＨ５９
を大腸菌ＪＭ１０９株に導入して、３７℃で培養し、ア
ンピシリンを含む寒天培地上に育成したコロニーに対し
て、ブタ成長ホルモンのｃＤＮＡの制限酵素Ｒｓａ　Ｉ
及びＰｖｕｌ＋処理によって得られる　４３５塩基対の
ＤＮＡ断片をプローブとしてコロニーパイプリダイセイ
ションを行うことにより複数個の陽性コロニーを得た。

第１図に示されているのは本発明によって初めて明らか
にされたミンク成長ホルモン構造遺伝子の全塩基配列で
あり、請求項４で示したアミノ酸配列をコードする領域
を含んでいる。その構造から、Ｎ末端側にシグナルベブ
チト部分と思われるアミノ酸２６残基が存在し、本発明
において初めてミンク成長ホルモンの構造が解明された
。

なお、形質転換体として本プラスミドｐＫＳｍＧＨ５９
を導入した大腸菌（ＪＭ１０９株）は寄託番号　徴工研
菌寄第１１６４３号として、工業技術院微生物工業技術
研究所に寄託済みである。

さらに付言すると、本発明のミンク成長ホルモン構造遺
伝子及びミンクプレ成長ホルモン構造遺伝子は、これを
利用することにより、適当な宿主（例えば大腸菌、枯草
菌、酵母等）において、ミンク成長ホルモンあるいはミ
ンク成長ホルモン様ポリペプチドが生産可能であること
を意味するものである。すなわち、本発明で得られた遺
伝子を適当な宿主内で調節可能な遺伝子配列（例えばｔ
ａｃ　、　ｔｒｐ　、λＰＬと呼ばれるプロモーター）
を含んだ組換えプラスミドを導入し形質転換すれば、そ
のポリペプチドの生産はプロモーターの支配下におかれ
、人為的にその生産を調節することが可能となるという
ことである。

［作用］本発明における成長ホルモン及びその誘導体によって養
殖ミンクの成長を促進させることが可能となる。

［実施例］以下に本発明の具体的な実施例を示す。

実施例１　ミンク脳下垂体からの全ポリ（＾）・ＲＮＡ
の単離ミンク脳下垂体からポリ（八）＋ＲＮへのＩｌｍは、グ
アニジウム・チオシアネート法（モレキュラー・クロー
ニング（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ）、２ｎ
ｄ　ｅｄ。

１９８９）　　に従い下記のごとく調整した。

ミンクの凍結脳下垂体８７０ｍｇ　（約４０個体分）を
４　Ｍグアニジウム・チオシアネート（和光紬薬工業社
製（以下「和光」と略記）　）　、　Ｏ，１Ｍ　Ｔｒｉ
ｓＨＣＩ　（ｐＨ７，５）、１％β−メルカプトエタノ
ール熔液５Ｉｌｌｌ中で、ホモゲナイザーにて破砕、可
溶化した。このホモゲネートを１８Ｇ注射針に数回通し
、染色体由来のＤＮＡを分断した。この溶液を５７Ｍセ
シウムクロライド（和光）　、　０．ＯＩＭ　Ｅ　ＤＴ
Ａ（ｐＨ７，５）の溶液上に、この溶液の約２倍量とな
るように静かに重層し、日立王様社製ＲＰＳ２７−３０
−ターで２６．０００回転で１２時間遠心することによ
りＲＮＡの沈殿を得た。この沈殿を７０にエタノールで
注意深く洗浄し、１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　（ｐ
Ｈ８，０）。

ｍＭ　　ＥＤＴＡｉ液に懸濁した後、エタノール沈殿を
行った。得られた沈殿を蒸留水４０μｌに懸濁し、その
内の２０μｌを１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ、　　１
　ｍＭ　　ＥＤＴＡ、０．１！ｋｓＤｓ溶液１００μｌ
と混合した後、オリゴテックス・ｄＴ３０　（日本合成
ゴム社製）ゲル溶液１００μｌと混合した。

この溶液を６５℃、５分間加熱後、水中にて急冷し、５
ＭＮａＣ１を２２μｌ加えた。さらに、この溶液を３７
℃、１０分間保温した後、ポリ（Ａ）＋ＲＮＡか吸着し
たゲルを遠心にて沈殿させ、上清を取り除いた後、１０
＋ＩＩＭＴｒｉｓ−）ＩＣＩ　（ｐＨ７，５）　、　　
１　ｍＭ　　Ｅ　　Ｄ　　ＴＡ、０．１零　ＳＤＳ溶液
ｉｏｏμｌに再懸濁し６５℃、５分加熱後、遠心により
ｍＲＮＡを上清中に解離させた。得られたｍＲＮＡはエ
タノール沈殿後、２０μｌの蒸留水に溶解しｃ　ＤＮＡ
の合成に用いた。

実施例２．ｃＤＮＡ合成とベクタープラスミドへの組み
込み。

ｃＤＮＡの合成とへフタ−への組み込みは、ファルマシ
ア社製のｃＤＮＡ合成キットを用い下記のごとく行った
。

実施例１て調整したｍＲＮＡ　（２μｇ）溶液２０μｌ
を６５℃、１０分間加熱した後、水中にて急冷し、ファ
ーストストランド・リアクションミックス溶液にｌμＩ
のＤＤＴ　ｉ液とともに加え、３７℃、１時間反応させ
た。この溶液をセカンドストランド・リアクションミッ
クス溶液に加え１２℃で１時間、続いて２２℃で１時間
反応させた。次に、１μｌのフレノウ・フラグメントを
加え、３７℃で３０分間反応させた後、フェノール／ク
ロロフォルム処理を行い、その上層をスパンカラムにて
精製した。得られたｃＤＮＡ溶液にＥｃｏＲ［／　Ｎｏ
ｔ　Ｉアダプター溶液２μｌ、ＡＴＰ溶液１μｌ、Ｔ４
　　ＤＮＡリガーゼ溶液３μＩを加え１２℃にて一晩反
応させた後、フェノール／クロロホルム処理とスパンカ
ラムにて精製した。

上記のごとく調整したｃＤＮＡを０５μｇの脱リン酸化
されたＥｃｏＲＴ末端を持つプラスミドｐＵＣ１９に連
結し、ミンク成長ホルモン遺伝子を含むプラスミド・ラ
イブラリーを作製した。

実施例３　ミンク成長ホルモンｃＤＮＡ組換えプラスミ
ドの選択とｃ　ＤＮＡ部分の塩基配列上記のごとく得ら
れた組換えプラスミド・ライブラリーを大腸菌ＪＭ１０
９株に、ＰＥＧ法（Ｃｈｕｎｇら、プロシーディング・
オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐ
ｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　ＡｃａｄＳｃｉ、）、　ＵＳ八
、　８６．２１７２（１９８９）に従い形質転換し、ア
ンピシリン耐性を示す約１，２００個のコロニーをニト
ロセルロース・メンプラン（アマジャム社製）に固定し
た。そして、ブタ成長ホルモンｃＤＮＡを制限酵素Ｒｓ
ａｌ及びｐｖｕｌ＋処理によって得られる４３５塩基対
よりなるＤＮＡ断片をポースラディシュ・ペルオキシダ
ーゼ（アマジャム社製）で標識し、これをプローブとし
てコロニー・ハイブリダイセイションを行った所、４個
の陽性コロニーか得られた。

これらのコロニーより組換えプラスミドを抽出し制限酵
素による分析を行った所、その全てについて、同じよう
なりＮＡ断片の挿入が認められた。その結果を第２図に
示す。そして、はぼ完全長のｃＤＮＡ部分の長さと推定
されたクローンであったｐＫＳ−ｍＧＨ５９について、
ジブオキシン去（Ｓａｎｇｅｒら、プロシーディング・
オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンス（Ｐ
ｒｏｃＮａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、）、υＳ＾、
　７４．５４６３（１９７７））に従いミンク成長ホル
モンの塩基配列を決定した。第１図にｃＤＮＡ部分の塩
基配列とアミノ酸配列を示す。

［発明の効果コ本発明は以上説明したとおり、本発明によって初めて解
明されたミンク成長ホルモンのアミノ酸配列をもとにし
て、その全部または一部のアミノ酸配列をコードするデ
オキシリボヌクレオチド連鎖を含む種々の発現ベクター
を構築し、それぞれを適切な形質転換体として大腸菌、
枯草菌、光合成細菌、酵母または動物細胞等に導入して
のち培養することにより各種の形質転換体より組換え型
ミンク成長ホルモンを容易にしかも大量に得ることが出
来るという効果がある。

へ丁０ＯＣＴＯＣＴＣＯＴＣＣＴＬｌｅｔ　＾１ｍ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｐｒ。

【図面の簡単な説明】

＄１図はミンク成長ホルモンを含む相補ｉ１　Ｄ　ＮＡ
部分の全塩基配列とその配列から明らかとなったアミノ
酸配列図、第２図はミンク成長ホルモン相補ＭＤＮＡを
含む部分の制限酵素切断地図である。代理人　弁理士　佐　藤　正　年０ＣｃａＣＧＡＡＴＴｃ　　３’ 第１図手続補正書（自発）平成２年１０月１１日

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ミンク脳下垂体より分泌されるｍＲＮＡ由来の組
換え型ミンク成長ホルモン又は組換え型ミンクプレ成長
ホルモン。
（２）下記のアミノ酸配列の全部又は一部を有するポリ
ペプチドである組換え型ミンク成長ホルモン。【遺伝子配列があります。】
（３）請求項２のアミノ酸配列をコードする組換え型ミ
ンク成長ホルモン構造遺伝子。
（４）下記のアミノ酸配列の全部又は一部を有するポリ
ペプチドである組換え型ミンクプレ成長ホルモン。【遺伝子配列があります。】【遺伝子配列があります。】
（５）請求項４のアミノ酸配列をコードする組換え型ミ
ンクプレ成長ホルモン構造遺伝子。
（６）請求項２のアミノ酸配列の全部又は一部をコード
する組換え型ミンク成長ホルモン構造遺伝子を含有する
組換えプラスミド。
（７）請求項４のアミノ酸配列の全部又は一部をコード
する組換え型ミンクプレ成長ホルモン構造遺伝子を含有
する組換えプラスミド。
（８）請求項６又は７に記載の組換えプラスミドを含む
微生物。
（９）前記微生物が大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃ
ｏｌｉ）に属することを特徴とする請求項８に記載の組
換えプラスミドを含む微生物。
（１０）請求項１に記載の組換え型ミンク成長ホルモン
又は組換え型ミンクプレ成長ホルモンをコードする遺伝
子を組み込んだ組換えプラスミドを含有する微生物を培
養基中にて培養し、該培養基中に蓄積された請求項１の
組換え型ミンク成長ホルモン又は組換え型ミンクプレ成
長ホルモンを分離精製することを特徴とする組換え型ミ
ンク成長ホルモン及び組換え型ミンクプレ成長ホルモン
の製造法。