JPH0488954A - 稚魚用飼料としての生物の培養法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、エイコサペンタエン＃（以下ＥｐＡと称す）
及び／又はドコサヘキサエン酸（以下ＤＭＡと称す）を
エサとする、稚魚用飼料である生物の培養法に関する。

〔従来の技術〕

従来から稚魚の飼料としては、シオミズツボワムシ（以
下華にワムシという）が有用であることが知られている
。このワムシは、海産クロレラを培養し、これをエサと
して得られるものである（特開昭６１−７４５５０公報
）。

近年、このワムシ中に含まれるＥＰＡ　（エイコサペン
タエン酸）が稚魚の成長に必須の因子であることが明ら
かにされたが、ＥＰＡはワムシに本来台まれているもの
ではなく、海産クロレラに含まれるＥＰＡが食物連鎖に
より蓄積されたものである。

上記の理由からＥＰＡを含有するワムシを用いる稚魚用
飼料の製造方法は一層、有用なものとなっているが、こ
のような海産クロレラを用いる方法で稚魚の飼料を作る
ためにはいくつもの広大な培養池を準備する必要があり
、また増殖に極めて長時間を必要とし、手間のかがるも
のであった。

このように、広大な土地を必要とする海産クロレラの培
養はおのずと限界がある。そこでこれを解決するために
、最近ではパン酵母に魚油又は争油肝油（ＥＰＡ含量７
〜１５％）を混合したものをワムシのエサとして使用さ
れるようになったが、この方法では海産クロレラをエサ
としたワムシの場合に比べると稚魚の生育が劣るという
欠点がある。また、このような混合物は高度不飽和脂肪
酸を多く含むために、非常に酸化され易く、保存に当た
り凍結などの手間が必要である。さらに、パン酵母に付
着した魚油が培養池中で酸化して、水が劣化し異臭を放
つなどの重大な問題があった。

さらに近年、ＤＭＡ　（ドコサヘキサエン酸）も、稚魚
の成長に極めて重要な事も明らかにされつつあるが、今
だに満足の行く、ＤＭＡを含有する錐角用飼料としての
生物はない。

〔発明が解決しようとする課題〕 本発明の目的は、上述したような従来の稚魚用飼料の製
造法が有していた欠点を払拭し、ＥＰＡ及び／又はＤＨ
Ａを含む稚魚用飼料を季節によらず安定して供給でき、
さらにＥＰＡ及び／又はＤＨＡ高含有の稚魚用飼料とし
ての生物を効率よく製造できる方法を提供することにあ
る。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の目的を達成すべく種々の研究の結
果、本発明に係わるＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有細菌の
生菌又は死菌をワムシ、アルテミア、原虫動物等の生物
に高効率に取り込ませることにより、ＥＰＡ及び／又は
ＤＨＡ高含有稚魚用飼料としての生物を培養できること
を見出じだ。

即ち、ＥＰＡ産生細菌（特願平２−２２０８６号）のＥ
ＰＡ含量を高め、又ＤＨＡを含有させるために、ＥＰＡ
産生菌の培養に当り、培地中に魚油、イカ肝油等海産物
由来の油成分を添加したところ、ＥＰＡ産生菌菌体に、
ＥＰＡ及び／又はＤＨＡを含有することを見出した。こ
のような方法によりＥＰＡ及び／又はＤＨＡ高含有稚魚
用飼料としての生物をより効果的かつ安定に供給できる
ことを見出した。

本発明はかかる知見ムこ基づいて完成されたもので、Ｅ
ＰＡ及び／′又はＤＨＡ含有細菌を取り込ませた稚魚用
飼料としてのワムシ、アルテミア原虫動物等の生物を培
養する方法である。さらに、本発明は従来の海産クロレ
ラやパン酵母を用いる方法を併用することもてきる。

３具体的な説明］ ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有細菌とは、特に種属などを
限定するものではなく、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡを菌体
内もしくは菌体外に分泌する細菌であればいずれを使用
してもよく、通常シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｎａｓ
）属、アルテロモナス（Ａ　ｌ　ｔｅｒｏｍｏｎａｓ）
属又はシーワ７ラ　（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）属などに
分類される海洋微生物を用いる。

上記のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｎａｓ）属に属す
る微生物の例としてシュードモナス・ビュートリファシ
ェンス（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａｃｉ
ｅｎｓ）、５ＣＲＣ−２８７８（徽工研菌寄第ＦＥＲＭ
Ｐ−９１１４）を挙げることができる。アルテロモナス
（Ａ　Ｉ　Ｌｅｒｏａ＋ｏｎａｓ）属に属する微生物の
例として、アルテロモナス・ビュートリファシェンス（
Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　　ｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ
）Ｓ　　ＣＲＣ６３７０（微工研菌寄第ＦＥＲＭＰ−１
０６８４）及びアルテロモナス　ハ名グイ（Ａｌｔｅｒ
ｏｍｏｎａｓ　ｈａｎｅｄａｉ）ＪＡＭ−１２６４１を
挙げることかできる。シーワネラ　（Ｓｈｅｗａｎｅｌ
ｌａ）属に属する微生物の例として、シーワネラ・ピユ
ートリファシェンス（Ｓｈｅｈａｎｅｌｌａ　　ｕｔｒ
ｅｆａｃｉｅｎｓ）　　Ｓ　ＣＲＣ−２８７４（微工研
菌寄第ＦＥＲＭＰ−９１５９＞を挙げることができる。

以上、自然界から分離したこれら菌株について詳細に記
載したが、これら菌に変異を生じさせて一層ＥＰＡ及び
／又はＤＨＡ含有能の高い菌株を得ることも出来る。

この発明の菌株は、常法に従って保存することが出来、
例えば寒天スラント培地上で、又は凍結乾燥法により保
存することが出来る。寒天スラント培地としては、アル
テロモナス属細菌の保存に常用されている培地を使用す
ることができる。また、凍結乾燥保存も常法に従って行
うことができＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有細菌の製造方
法としては、前記の微生物を培養して本発明のＥＰＡ及
び／又はＤＨＡ含有細菌を製造しようとする場合、基礎
栄養培地として、この発明の微生物が増殖しうるちので
あり、かつ魚油、イカ肝油等海産物由来の油成分を含有
するものであればいずれを使用してもよい。

この培地は、魚油、イカ肝油等海産物由来の油成分を含
有するほか、窒素源として例えば酵母エキス、ペプトン
、肉エキス、等の１種類又は複数種類を含有する。又は
この培地には必要に応じて炭素源として各種の糖及び乳
化剤を加えることができる。

培養は固体培地又は液体培地のいずれを用いても良いが
、目的とするＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有細菌を多量に
得る為には、液体培地を用い、静置もしくは振過培養、
通気・攪拌培養等により好気条件下で培養を行うのが好
ましい。培養温度は菌が生育する温度範囲であればいず
れの温度でも良く、好ましくは５〜３０℃であり、より
好ましくは１５〜２５℃である。ｐ）（は６〜９、好ま
しくは７〜８の範囲である。培養時間は採取し得る量の
ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有細菌が生産される時間を選
べば良く、好ましくは８〜４８時間である。

このようにして得られたＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含有細
菌は、生きたまま湿菌体として、また凍結乾燥菌体とし
て使用可能であり、さらに死菌体としても使用可能であ
る。そしてこれらの菌体を例えば稚魚用飼料としての生
物の培養槽に添加し、又これらの生物を稚魚の生育槽に
加えることにより、稚魚の生長に利用することができる
。稚魚用飼料としての生物はＥＰＡ及び／又はＤＨＡ含
有細菌をエサとすることができ、又稚魚の食餠となるこ
とができるものならばいずれでもよいが、例えばシオミ
ズツボワムシ、アルテミア、原虫動物、ミジンコ、オキ
アミ、チグリオパス、コペポーダなどを挙げることがで
きる。

実施例１ （１１アルテロモナス・ピュートリファンエンス（Ａｌ
ｔｅｒｏｍｏｎａｓ　　ｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）　Ｓ
　ＣＲＣ−６３７０（微工研菌寄第ＦＥＲＭＰ−１０６
８４）をペプ１−ン１％、酵母エキス０．５％、魚油０
．１％、乳化剤（いりこ自慢・日清製油）０．００３％
を含有した海水培地（ｐＨ７，０）１１で、２４時間好
気的に゛培養して得られた菌体を集菌した。

このようにして得られた湿菌体を塩酸メタノールで脂質
をメチルエステル化して抽出した。魚油を添加しない培
地で培養した菌体（コントロール）についても同様に抽
出した。各々の脂質中のＥＰＡ及びＤＭＡ含量をガスク
ロマトグラフで調べたところ、コントロールに比べＥＰ
Ａ及びＤＭＡが著しく菌体に含有されていることがわか
った（表１）。

表Ｉ　　　　　ＥＰＡ及びＤＨＡの含量（２＋　　（１
）の方法で得られた湿菌体１ｇ及び魚油無添加培地で培
養したコントロール菌体１ｇをそれぞれワムシ培養液１
／（ワムシ５００個体／）に添加し、１６時間後に両群
のワムシを培養液から取り上げ、塩酸メタノールで脂質
をメチルエステルにして抽出した。各々の群の脂質中の
ＥＰＡ及びＤＨＡ量をガスクロマトグラフで調べ、ワム
シ１個体当たりのＥＰＡ及びＤＨＡ蓄積量について表２
の結果を得た。

表２　ワムシ１個体当たりのＥＰＡ及びＤＨＡクロレラ
）を０．１ｇ添加し、やはり１７時間実施蓄積量（ｎｇ
／個体） した。得られたワムシの脂肪酸組成を分析した結果は、
次の通りである。

２次培養したマ２ムン中のＥＰＡ及びＤＨＡ含量実施例
２ 次に、本発明により得られるＥＰＡ及びＤＭＡ含有細菌
を摂取させたワムシを用いて、ヒラメの種苗生産実験を
行った。対照区としては、いわゆる海産クロレラの濃縮
液で２次培養したワムシを使用した。海産クロレラ濃縮
液（約１５０億ｃｅｌｌｓ／　　）は、ワムシ密度が５
０ＯＮ／　　の濃縮液１１に対して０．２３　ｇの割合
で添加し、１７時間後に投餌に供した。ＥＰＡ及びＤＭ
Ａ含有細菌による２次培養は、ワムシ密度が５０ＯＮ／
　　のン農縮液１βに対して同菌体（湿体）を１ｇと、
市販の淡水クロレラ濃縮液（ＰＣＶ＝６００　：日本ヒ
ラメは、ふ化後２日目から、前記で得られたワムシを投
餌し、全実験期間（２０日間）にわたって投与を継続し
た。飼育実験は、ふ化後２日目に、Ｌｏｏ７！パンライ
ト水槽に海水を満たし、ここに１０００個体のヒラメ幼
生を収容した。　（なお、実験はすべて２連（Ａ及びＢ
槽）で行った。）水温は全期間１８〜２０℃に保持した
。ワムシ投与量に関しては、２日目〜５日目までは５Ｎ
／を維持するようにし、５日目以降は１ＯＮ／　を維持
できるように１日２回投詞した。

ふ化後２０日目に実験を中止し、生残率と体長を測定し
たところ、次の結果となった。

このように本発明の方法は、現状で最も良い飼料と言わ
れる海産クロレラと同等以上の効果を示した。

〔発明の効果〕

本発明により、ワムシを用いる従来の稚魚用飼料の製造
法に見られた欠点が解決され、ＥＰＡ及び／又はＤＨＡ
を含む稚魚用飼料等の生物をＥＰＡ及び／又はＤＭＡ含
有細菌の生菌又は死菌添加培地により培養して得ること
が可能である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）稚魚用飼料としての生物を培養するに当たりその
   生物のエサとしてエイコサペンタエン酸及び／又はドコ
   サヘキサエン酸含有細菌の生菌又は死菌を与えることを
   特徴とする当該生物の培養法。
2. （２）エイコサペンタエン酸及び／又はドコサヘキサエ
   ン酸含有細菌がシュードモナス￥（Ｐｓｅｕｄｏｎａｓ
   ）￥属、アルテロモナス￥（Ａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）
   ￥属、又はシーワネラ￥（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）￥属
   に属する細菌である請求項（１）記載の培養法。
3. （３）生物がシオミズツボワムシ、アルテミア又は原虫
   動物である請求項（１）記載の培養法。