RU2115732C1 - Штамм mucor circinelloides var. lusitanicus - продуцент витамина f и способ получения витамина f - Google Patents
Штамм mucor circinelloides var. lusitanicus - продуцент витамина f и способ получения витамина f Download PDFInfo
- Publication number
- RU2115732C1 RU2115732C1 RU97102081A RU97102081A RU2115732C1 RU 2115732 C1 RU2115732 C1 RU 2115732C1 RU 97102081 A RU97102081 A RU 97102081A RU 97102081 A RU97102081 A RU 97102081A RU 2115732 C1 RU2115732 C1 RU 2115732C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vitamin
- lusitanicus
- producer
- producing
- extract
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Штамм Mucor circinelloides var. lusitanicus ВКПМ F723 выращивают в питательной среде, содержащей источник углерода, азота, минеральные соли и добавку-экстракт солянки холмовой в качестве стимулятора роста и биосинтеза. За 48 ч получают 29 г витамина F на 100 г биомассы. Технический результат - усовершенствование существующих микробиологических способов получения витамина F путем использования штамма Mucor circinelloides var. lusitanicus ВКПМ F723 и экстракта солянки холмовой. 2 с. и 2 з.п. ф-лы, 3 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству физиологически активных веществ микроорганизмами, и может быть использовано в медицине, косметологии, диетпитании.
Витамин F - это эссенциальные полиненасыщенные жирные кислоты: линолевая, линоленовая, арахидоновая, которые являются предшественниками в синтезе простагландинов. Витамин F необходим для нормального роста и развития организма. Он способствует нормализации липидного обмена в организме, предупреждает развитие атеросклероза, обладает гепатопротекторным, ранозаживляющим, противоожоговым, противоаллергическим действием [1 - 3].
Источником витамина F являются растительные масла, содержащие линолевую и альфа-линоленовую кислоты, такие как кукурузное, подсолнечное, соевое, облепиховое, хлопковое [4].
Однако эти масла малоэффективны по сравнению с маслами, содержащими гамма-изомер линоленовой кислоты, являющейся непосредственным предшественником в синтезе арахидоновой кислоты в организме людей и животных [5 и 6].
Известен штамм гриба Mucor lusitanicus как продуцент липидов, содержащих гамма-линоленовую кислоту, путем выращивания его в течение 72 ч при 28oC, pH 4,5 - 6,5, при аэрации 1,8 O2 /л/ч на среде следующего состава, г/л: глюкоза 30; мочевина 1; K2HPO4 1; NaCl 0,5; MgSO4 7H2O 0,5; FeSO4 7H2O 0,01; ZnSO4 7H2O 0,001; CaCl2 0,02; дрожжевой экстракт 0,5; витамин B6 0,002; биотин 0,02 мг. Получают 26 г липидов на 100 г сухой биомассы, содержащих 29% гамма-линоленовой кислоты в сумме жирных кислот [7].
Однако известный штамм требует длительного ферментационного процесса и не обеспечивает достаточно высокого выхода целевого продукта.
Известен способ получения липидов, содержащих гамма-линоленовую кислоту с использованием гриба Mucor circinelloides [8]. Культуру гриба выращивают в течение 96 ч на среде, содержащей, г/л: глюкоза 250; сульфат аммония 19,8; K2HPO4 9,0; MgSO4 7H2O 1,0; дрожжевой экстракт 0,6; FeSO4 7H2O 40 мг/л; CaCl2 2H2O 4,8 мг/л; CuSO4 5H2O 0,8 мг/л; ZnSO4 7H2O 4,0 мг/л; MnCl 4H2O 4,0 мг/л. На 100 г биомассы получают 25 г липидов, содержащих 34% гамма-линоленовой кислоты сумме жирных кислот.
Однако известный способ предусматривает использование многокомпонентной питательной среды и длительный процесс ферментации.
Цель изобретения - усовершенствование существующих микробиологических способов получения витамина F путем использования штамма M. circinelloides var. lusitanicus F-723 и экстракта солянки холмовой.
Технический результат, получаемый от использования нового штамма и предлагаемого способа, выражается в ускорении биосинтеза и повышении производительности процесса получения витамина F.
Используемый в изобретении штамм получен из штамма Mucor circinelloides var. lusitanicus 1233 путем его облучения УФ с последующим отбором вариантов по способности к росту при пониженной температуре, депонирован в ВКПМ под номером Mucor circinelloides var. lusitanicus F-723 и характеризуется следующими признаками, типичными для грибов семейства Mucoraceae.
Культурально-морфологические признаки.
На сусло-агаре образует колонии белого цвета с хорошо развитым мицелием, гифы без поперечных перегородок. Спорообразование хорошее.
На среде Чапека колонии белого цвета, мицелий развит слабее, чем на сусло-агаре. Спорообразование хорошее.
На мясопептонном агаре колонии мелкие, белого цвета. Мицелий развит слабо.
На картофельном агаре рост мицелия слабее, чем на сусло-агаре.
В погруженной культуре рост дисперсный или нитчатый.
Физиолого-биохимические признаки.
В качестве источника углерода использует глюкозу, ксилозу, рибозу, мальтозу, сахарозу. Плохо растет на лактозе, не растет на этаноле.
В качестве источника азота использует соли аммония, мочевину, органические источники азота.
Строгий аэроб. Маркерным признаком является рост при 5 - 30oC, оптимальный диапазон 18 - 26oC. Область pH роста 4 - 8; оптимальный диапазон 5,5 - 6,8.
Культура продуцирует витамин F, содержащий гамма-линоленовую кислоту 32 - 35% от суммы жирных кислот.
Штамм хранят при 5 - 10oC на сусло-агаре. Для сохранения культуры в активном состоянии ее пересевают через 25 - 30 дней.
Предлагаемый способ получения витамина F заключается в том, что гриб Mucor circinelloides var. lusitanicus F-723 выращивают на среде следующего состава, г/л: глюкоза 50 - 100; мочевина 1,5 - 3; (NH4)2SO4 1,0 ± 0,1; K2HPO4 0,5 - 1,0; NaCl 0,5 - 1,0; MgSO4 7H2O 0,5 - 1,0; дрожжевой автолизат 2 - 3; экстракт солянки холмовой 1,0 ± 0,1; при 20 - 28oC, интенсивности аэрации 1,6 - 1,8 O2 /л/ч. Экстракт солянки холмовой (Solsola collina) добавляют дробно: при посеве 50%, через 24 ч - остальные 50%. Выращивание проводят в течение 48 - 60 ч. Мицелий отделяют от культуральной жидкости фильтрованием, лиофилизируют. Липиды экстрагируют из лиофилизированной биомассы смесью метанол : хлороформ (2 : 1). Жирнокислотный состав липидов определяют методом газо-жидкостной хроматографии метиловых эфиров жирных кислот, которые получают кислотным метанолизом [9]. В результате получают липиды, содержащие 30 - 35% гамма-линоленовой кислоты в сумме жирных кислот.
Пример 1. В качестве инокулята используют суспензию спор штамма с титром 10. Культуру выращивают в течение 60 ч в колбах объемом 2 л с содержанием среды 300 мл, при 26oC на качалке (200 об./мин). Состав среды, г/л воды:
Глюкоза - 70
Мочевина - 2,0
K2HPO4 - 1
NaCl - 0,5
MgSO4 7H2O - 0,5
FeSO4 7H2O - 0,01
CaCl2 - 0,02
ZnSO4 7H2O - 0,001
Дрожжевой автолизат - 2
Витамин B6, мг - 2
Биотин, мг - 0,2
Мицелий отделяют от культуральной жидкости фильтрованием, лиофилизируют. Липиды экстрагируют из лиофилизированной биомассы смесью метанол : хлороформ (2 : 1). Жирнокислотный состав липидов определяют методом газо-жидкостной хроматографии метиловых эфиров жирных кислот, которые получают кислотным метанолизом. Выход витамина F на 100 г биомассы 27,0 г, при этом содержание гамма-линоленовой кислоты 30% в сумме жирных кислот, линолевой 17%.
Глюкоза - 70
Мочевина - 2,0
K2HPO4 - 1
NaCl - 0,5
MgSO4 7H2O - 0,5
FeSO4 7H2O - 0,01
CaCl2 - 0,02
ZnSO4 7H2O - 0,001
Дрожжевой автолизат - 2
Витамин B6, мг - 2
Биотин, мг - 0,2
Мицелий отделяют от культуральной жидкости фильтрованием, лиофилизируют. Липиды экстрагируют из лиофилизированной биомассы смесью метанол : хлороформ (2 : 1). Жирнокислотный состав липидов определяют методом газо-жидкостной хроматографии метиловых эфиров жирных кислот, которые получают кислотным метанолизом. Выход витамина F на 100 г биомассы 27,0 г, при этом содержание гамма-линоленовой кислоты 30% в сумме жирных кислот, линолевой 17%.
Пример 2. В качестве инокулята используют 10% односуточного мицелия. Культуру выращивают в 10-литровом ферментере при 26oC, аэрации 1,8 O2 /л/ч, pH среды 6,8 на среде оптимального состава, г/л воды:
Глюкоза - 100
Мочевина - 2
(NH4)2SO4 - 1
K2HPO4 - 1
NaCl - 1
MgSO4 7H2O - 1
Дрожжевой автолизат - 3
Экстракт солянки холмовой - 1
Выращивание проводили 48 ч. Обработку биомассы и выделение витамина F проводили как в примере 1. Выход витамина F на 100 г биомассы составил 27,5 г, при этом содержание гамма-линоленовой кислоты в сумме жирных кислот составляет 32%, линолевой 17,5%.
Глюкоза - 100
Мочевина - 2
(NH4)2SO4 - 1
K2HPO4 - 1
NaCl - 1
MgSO4 7H2O - 1
Дрожжевой автолизат - 3
Экстракт солянки холмовой - 1
Выращивание проводили 48 ч. Обработку биомассы и выделение витамина F проводили как в примере 1. Выход витамина F на 100 г биомассы составил 27,5 г, при этом содержание гамма-линоленовой кислоты в сумме жирных кислот составляет 32%, линолевой 17,5%.
Пример 3. В качестве инокулята используют 10% односуточного мицелия. Культуру выращивают 48 ч в 10-литровом ферментере при 26oC, аэрации 1,8 O2 /л/ч, pH среды 6,8 на среде оптимального состава, г/л воды:
Глюкоза - 100
Мочевина - 2
(NH4)2SO4 - 1
K2HPO4 - 1
NaCl - 1
MgSO4 7H2O - 1
Дрожжевой автолизат - 3
Экстракт солянки холмовой - 1
Экстракт солянки холмовой добавляют дробно: при посеве 50%, через 24 ч - оставшиеся 50%. Обработку биомассы и выделение витамина F проводили, как в примере 1. Выход витамина F на 100 г биомассы составил 29 г, при этом содержание гамма-линоленовой кислоты в сумме жирных кислот составляет 35%, линолевой 18%.
Глюкоза - 100
Мочевина - 2
(NH4)2SO4 - 1
K2HPO4 - 1
NaCl - 1
MgSO4 7H2O - 1
Дрожжевой автолизат - 3
Экстракт солянки холмовой - 1
Экстракт солянки холмовой добавляют дробно: при посеве 50%, через 24 ч - оставшиеся 50%. Обработку биомассы и выделение витамина F проводили, как в примере 1. Выход витамина F на 100 г биомассы составил 29 г, при этом содержание гамма-линоленовой кислоты в сумме жирных кислот составляет 35%, линолевой 18%.
При проведении исследований полученного витамина F показана его высокая ранозаживляющая и антиаллергическая активность. Результаты исследований представлены в табл. 1, 2 и 3.
В табл. 1 показано, что витамин F более эффективен для заживления ожогов и ран, чем облепиховое масло или мазь метилурациловая 10%, 0,5 г.
Как видно из результатов, представленных в табл. 2 и 3, полученный витамин F высокоэффективен при лечении экспериментально полученного дерматоза морских свинок, а также при лечении атопического дерматита у детей.
Литература
1. Колотилова А.И., Глушанков Е.П. Витамины - химия, биохимия и физиологическая роль. - Л.: ЛГУ 1976.
1. Колотилова А.И., Глушанков Е.П. Витамины - химия, биохимия и физиологическая роль. - Л.: ЛГУ 1976.
2. Левачев М.М. Роль липидов в обеспечении процессов жизнедеятельности организма. - Вопросы питания, М., 1980, N 2.
3. Патент Японии JP 60-273100, кл. C 12 P 7/64.
4. Бремнер С.М. Витамины. - М.: Медицина, 1984.
5. Ratledge C. Lipid Biothechnology: A Wonderland for the Microbial Physiologist. 1987, J. Amer. Oil. Chem. Soc., v. 64, 2, 1647 - 1656.
6. Алимова Е.К., Аствацатурьян А.Т., Жаров Л.В. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний. - М.: Медицина, 1975.
7. Патент Российской Федерации N 1585331, кл. C 12 P 7/64, 1993.
8. Патент Японии JP 63-283589, кл. C 12 P 7/64, 1989.
9. Кейтс М. Техника липидологии. - М.: Мир, 1975.
Claims (3)
1. Штамм Mucor circinelloides var. lusitanicus ВКПМ F-723 - продуцент витамина F.
2. Способ получения витамина F, включающий выращивание штамма - продуцента Mucor circinelloides var. lusitanicus ВКПМ F-723 в погруженной культуре, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли, стимулятор роста и биосинтеза, в условиях аэрации и перемешивания с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцента используют штамм по п.1, а в качестве стимулятора роста и биосинтеза используют водный или спиртовый экстракт солянки холмовой 0,5 - 3 г/л.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что выращивание осуществляют на питательной среде, содержащей, г/л воды:
Глюкоза - 50 - 100
Мочевина - 1,5 - 3,0
(NaH4)2SO4 - 1 ± 0,1
K2HPO4 - 0,5 - 1,0
NaCl - 0,5 - 1,0
MgSO47H2O - 0,5 - 1,0
Дрожжевой автолизат - 2 - 3
Экстракт солянки холмовой - 1 ± 0,1
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что экстракт солянки холмовой добавляют дробно при посеве 50%, через 24 ч - остальные 50%.
Глюкоза - 50 - 100
Мочевина - 1,5 - 3,0
(NaH4)2SO4 - 1 ± 0,1
K2HPO4 - 0,5 - 1,0
NaCl - 0,5 - 1,0
MgSO47H2O - 0,5 - 1,0
Дрожжевой автолизат - 2 - 3
Экстракт солянки холмовой - 1 ± 0,1
4. Способ по п.2, отличающийся тем, что экстракт солянки холмовой добавляют дробно при посеве 50%, через 24 ч - остальные 50%.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97102081A RU2115732C1 (ru) | 1997-02-18 | 1997-02-18 | Штамм mucor circinelloides var. lusitanicus - продуцент витамина f и способ получения витамина f |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU97102081A RU2115732C1 (ru) | 1997-02-18 | 1997-02-18 | Штамм mucor circinelloides var. lusitanicus - продуцент витамина f и способ получения витамина f |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2115732C1 true RU2115732C1 (ru) | 1998-07-20 |
| RU97102081A RU97102081A (ru) | 1999-02-27 |
Family
ID=20189833
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU97102081A RU2115732C1 (ru) | 1997-02-18 | 1997-02-18 | Штамм mucor circinelloides var. lusitanicus - продуцент витамина f и способ получения витамина f |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2115732C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA007389B1 (ru) * | 2005-01-31 | 2006-10-27 | Инна Николаевна Федорова | Способ лечения эрозивно-язвенных заболеваний слизистой оболочки полости рта |
| CN114933973A (zh) * | 2022-02-17 | 2022-08-23 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | 拉斯坦毛霉hz-6-27及其在黄精多糖提取中的应用 |
-
1997
- 1997-02-18 RU RU97102081A patent/RU2115732C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Бремнер С.М. Витамины. - М.: Медицина, 1984. Алимова Е.К., Аствацатурьян А.Т., Жаров Л.В. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний. - М.: Медицина, 1975. * |
| Кейтс М. Техника липидологии. - М.: Мир, 1975. * |
| Колотилова А.И., Глушанков Е.П. Витамины - химия, биохимия, и физиологическая роль. - Л.: ЛГУ, 1976. Левачев М.М. Роль липидов в обеспечении процессов жизнедеятельности организма. - Вопросы питания, 1980, N 2. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA007389B1 (ru) * | 2005-01-31 | 2006-10-27 | Инна Николаевна Федорова | Способ лечения эрозивно-язвенных заболеваний слизистой оболочки полости рта |
| CN114933973A (zh) * | 2022-02-17 | 2022-08-23 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | 拉斯坦毛霉hz-6-27及其在黄精多糖提取中的应用 |
| CN114933973B (zh) * | 2022-02-17 | 2023-09-01 | 浙江树人学院（浙江树人大学） | 拉斯坦毛霉hz-6-27及其在黄精多糖提取中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH08214893A (ja) | アラキドン酸の生成方法 | |
| WO1989000606A1 (en) | Microorganism production of omega-3 (n-3) lipids | |
| RU2346033C2 (ru) | Способ непрерывного культивирования водорослей | |
| JP3354582B2 (ja) | オメガ９系高度不飽和脂肪酸およびこれを含有する脂質の製造方法 | |
| CN1986822A (zh) | 用寇氏隐甲藻发酵生产二十二碳六烯酸油脂的方法 | |
| AU2008338017A1 (en) | Method for the cultivation of microorganisms of the order thraustochytriales | |
| Emelyanova | Lipid and γ-linolenic acid production by Mucor inaquisporus | |
| JPH0734752B2 (ja) | アラキドン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 | |
| CA2308065C (en) | Process for producing arachidonic acid-containing lipids and dihomo-.gamma.-linolenic acid-containing lipids | |
| KR100366258B1 (ko) | 신규 kf-1040 물질 및 그 제조법 | |
| AU2003226626B2 (en) | A method for enhancing levels of Polyunsaturated fatty acids in thraustochytrid protists | |
| US20020110873A1 (en) | Process for the production of lipstatin and tetrahydrolipstatin | |
| RU2115732C1 (ru) | Штамм mucor circinelloides var. lusitanicus - продуцент витамина f и способ получения витамина f | |
| US8652814B2 (en) | Method for production of DHA-containing phospholipid through microbial fermentation | |
| CN105189769A (zh) | 从腐霉属物种生产ω-3脂肪酸 | |
| JPH0712315B2 (ja) | エイコサペンタエン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 | |
| RU2140980C1 (ru) | Штамм гриба mortierella alpina peyronel бс-2 для производства полиненасыщенных высших жирных кислот и их производных | |
| JPS6314696A (ja) | ビスホモ―γ―リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 | |
| JPH11243942A (ja) | エタノールを用いた高機能性ユーグレナの製造法 | |
| GB2091285A (en) | Multistage process for the preparation of fats and oils | |
| JPH0216989A (ja) | ω６系不飽和脂胞酸含有リン脂質の製造法 | |
| JPH0712314B2 (ja) | γ―リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法 | |
| Botha et al. | The production of eicosanoid precursors by mucoralean fungi | |
| SU553283A1 (ru) | Способ получени алкогольдегидрогеназы | |
| CN117467716A (zh) | 一种提高洛伐他汀发酵单位的发酵培养基及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20080219 |
|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20090920 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160219 |