JPH0477438A - 標識化抗体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、マウス胎児由来ＧＰ６８シアロ糖タンパク質
に対する抗体（抗ＧＰ６８抗体）が反応し得る抗原が産
生される各種疾患、特に癌等の診断および治療に有用な
標識化抗ＧＰ６８抗体およびその用途に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする課題］ 癌やその他の疾患の体内診断、イメージングによる画像
診断が、放射性同位元素、蛍光色素、増感剤、核磁気共
鳴イメージング（ＭＨＩ）用磁性体等を用いて行われて
いる。

なかでも、癌の体内診断においては、”Ｇ　ａが多く使
用されているか、これは癌部位のみならす、肝臓、腎臓
などに非特異的に集積し、必すしも癌部位に特異的とは
いえず診断鯖度において充分なものとはいえない。

また、”Ｇ　ａの癌組織細胞への浸透性、到達度は低く
、微小な癌原発部位や癌転移部位を検田、イメージング
することは困難であり、”Ｇ　ａを用いた癌の体内診断
には限界がある。

更に、”Ｇ　ａ　１１独投与では、顕著な癌の治療効果
は認められていない（特開平１−１０４０１６号公報参
照）。

近年、種々の癌抗原に対する抗体が調製され、それらを
用いた癌治療が試みられている。

更に、ピトＣＥＡ　（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉ
ｃ　ａｎｔｉｇｅｎ）、ヒトメラノーマに対するマウス
モノクローナル抗体に６７Ｇａあるいは＋１１１ｎを結
合した標識化抗体を用いた癌の画像診断の試みがなされ
ているが、有用性において６７０　ａを単独で用いた画
像診断と大差なく、また臨床に適応されるまでには至っ
ていない。

癌の診断、治療に有用な標識化合物には、例えば以下の
ような特性が要求される。

ａ）癌局所への到達性に優れ、かつ癌組織細胞との結合
、親和性に優れる。

ｂ）癌部位に特異的か、または非癌部位に比べて癌部位
への到達、分布率が有意差をもって充分に高い。

Ｃ）画像分析等における検出感度が高い。

しかしながら、これらの特性を充分に満足でき、実用に
耐え得る癌の診断や治療に有用な標識化合物は未だ提供
されてないのが現状である。

本発明は、このような癌の診断、治療に有用な標識化合
物における問題に鑑みなされたものてあり、上記各種特
性を満足する標識化抗体を提供することをその目的とす
る。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、マウス胎児由来ＧＰ６８シアロ糖タンパク質
（以下ＧＰ６８タンパク質という）に対する抗体（抗Ｇ
Ｐ６８抗体）に、各種の標識化合物を結合して得られる
標識化抗ＧＰ６８抗体を用いることて、癌の診断、治療
に極めて良好な結果が得られるという新たな知見に基つ
いて為されたものである。

本発明の標識化抗体は、抗ＧＰ６８抗体と、該抗体に結
合した標識化合物とを有することを特徴とする。

本発明に用いる抗ＧＰ６８抗体は、ＧＰ６８で免疫した
動物の抗血清、抗ＧＰ６８モノクローナル抗体産生ハイ
ブリトーマ培養上清、あるいは該ハイブリドーマを移植
した動物の腹腔液（腹水）などから常法により調製でき
る。

抗ＧＰ８Ｂ抗体調製用の抗原としてのＧＰ６８タンパク
質は、例えば、マウス組織・細胞から抽出、精製するこ
とによって得ることができ、例えば、特開昭６０−１０
０５９７号公報および特願昭６３−２０５６９０号に記
載の方法などに従って得ることができる。

このマウス組織・細胞としては、受精から生後１週間ま
での、例えば、受Ｍ後１１口紅胚〜ｊ９日月胚の胎児や
、生後１週間のマウスの脳、神経組織、胃腸管、平滑筋
組織、肝臓、心臓、腎臓、肺、牌臓等の各臓器などを挙
げることができるが、高濃度での抽出分離を行いたい場
合には胎児脳あるいは生後１週間位までのマウス脳を用
いるのが便利である。

例えば、２％トリトン（Ｔｒｉｔｏｎ）Ｘ　−１００（
ローム　アンド　ハース　社製）　、０．００５’４フ
エニルメチルスルフオニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、
０．１５Ｍ食塩を含む１０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐ
Ｈ７。

５）中にマウス組織・細胞をホモジナイズして所定時間
の抽出操作を行ない、得られた粗抽出液がら遠心分離（
例えば、４０，０００ｒｐｍ）で得られる上滑液を分取
し、これをレクチンを担持（固定化）した担体に接触さ
せて該担体にＧＰ６８タンパク質を吸着させ、更に該担
体からＧＰ６８タンパク質を選択的に単離することによ
り、ＧＰ６８タンパク質を得ることができる。このＧＰ
６８タンパク質には、更に必要に応じて例えばゲルロ通
法など各種精製処理を行フても良い。

この工程に用いることのできる担体としては、例えばア
ガロース、アクリルアミドケル、各種トヨパール（東洋
曹達工業社製）、セルロースなどを挙げることができる
。

また、担体に固定化させるレクチンとしては、とマ凝集
素（Ｒｉｃｉｎｕｓ　Ｃｏｍｍｕｎｉｓ　Ａｇｇｌｕｔ
ｉｎｉｎ　、以下ＲＣＡと略記する）、小麦胚アグルチ
ニン（Ｗｈｅａｔ　Ｇｅｒｍ　Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　
、　Ｗ　Ｇ　Ａ　）　、　ニア　ンカナバリンＡなどを
用いることかできるか、これらの中では、ＲＣＡが特に
好適である。

レクチンを担体に担持（固定化）させる方法としては、
用いる担体およびレクチンの種類に応じて常法に従って
行なえば良い。

これらを用いてのアフィニティークロマトグラフィーは
、レクチンを担持した担体を適当な大きさ及び形状のカ
ラムに通して利用するカラム法や、レクチンを担持した
担体と処理すべき溶液あるいは溶出用溶液とを一度に混
合して処理するハツチ方式を用いた方法など所望に応じ
て適宜選択した方法によって実施すれば良い。

レクチンを担持する担体に吸着させたＧＰ６８タンパク
質の溶出用の溶液は、レクチンおよび担体の種類などに
応じて適宜選択すれば良いが、例えば、０．０１Ｍ〜０
．２Ｍのラクトース溶液、Ｎ−アセチルゲルコサ、ミン
溶液、α−メチルマンノシド溶液、シアル酸溶液などを
利用することがてきる。

溶出画分中でのＧＰ６８タンパク質の確認は、その分子
量および等電点の測定などによって行なうことができる
。

本発明のＧＰ６８タンパク質は、後述の参考例１に記載
の２次元電気泳動での測定で約６８，０００（６８，０
００±２，０００　）の分子量を有し、その等電点が５
．４〜５．６である。

このようにして得られた純度の高いＧＰＢ８タンパク貿
は、後述の参考例１に示されるアミノ酸組成及び糖組成
を有し、そのアミノ末端部分のオリゴペプチドのアミノ
酸配列は、マウスのα−フェトプロティンのアミノ末端
のアミノ酸配列［Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｂ、　Ｇｏｒｉｎ　
ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　ＣｈｅＩｌｌ、、
　２５６．１９５４（１９８１）］　とほぼ同一であっ
た。また、糖の含有率は１２．７重量％である。

次に、上記ＧＰ６８タンパク質を用いて動物を免疫し、
該ＧＰ６８タンパク質に対する抗体を調製することがで
きる。

すなわち、ＧＰ６８タンパク質を例えばラット、ハムス
ター、モルモット、ウサギ、ヤキ、ヒツジ、ウマ、ウシ
なとの動物に免疫し、得られた抗血清中にＧＰ６８タン
パク質に対するポリクローナル抗体を得ることができる
。

この免疫処理には、通常の方法が利用でき、例えば各種
動物の背中、足置、腹腔内、血管内などに適当なアジュ
バントとともにＧＰ６８タンパク質を接種する。免疫後
、７〜２００日経過した動物から抗血清を採取して目的
とするポリクローナル抗体を得ることができる。

なお、初回免疫後、適当な間隔をおいて追加免疫して抗
体価を高めることがてきる。

方、上記のようにして免疫した動物や、Ｂａ１ｂ／Ｃな
どのようなマウスの牌細胞と骨髄腫細胞（ミエローマ細
胞）株との融合によフて、ＧＰ６８タンパク質に対する
モノクローナル抗体生産能を有するハイブリトーマを作
製することができる。

この融合に用いるミエローマ細胞株としては、マ’７ス
Ｎ５−１株、Ｘ　６３−Ａｇ８株、　ＭＰ（ニー１１株
、５Ｐ−２１０株などのマウス系のミエローマ細胞株や
ラット２１０、ＲＣＹ、Ａｇ１．２．３などを挙げるこ
とができる。

また、ＧＰ６８タンパク質で免疫した動物としては、初
回免疫後１０〜８０日経過したものが好適である。

更に、融合は公知の方法で行なえば良く、得られたバイ
プリドーマは、例えば５〜２０％の牛胎児血清とＨＡＴ
を含むＲＰＭＩ培養液（日永製薬社製、Ｃｏｄｅ　０５
９１１）　、続いてＨＴを含むＲＰＭＩ培養液、最終的
にＲＰＭＩ培養液なとの細胞培養用培地で培養して、培
地中に所望とするＧＰ６８タンパク質に対するモノクロ
ーナル抗体を分泌、備蓄させて該モノクローナル抗体を
生産することができる。

あるいは、該ハイブリトーマをメートラット、または免
疫抑制されたラットのａＪＷ内に移植してその腹水癌化
を銹発し、該腹水中に該モノクローナル抗体を生産、備
蓄させる方法によって該モノクローナル抗体を生産する
ことができる。

なお、こうして得た抗体を用いて作製したアフィニティ
ークロマト担体を用いたアフィニティークロマトグラフ
ィーを行なうことにより、ＧＰ６８タンパク質の分離精
製を行なうことがてきる。

その隔月いる担体としては、アガロース、セファデック
ス類、ＢｒＣＮ活性化セファロース４Ｂのようなセファ
ロース類、Ａｆｉｇｅｌ　１０（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）
、各種トヨパールなどを利用することができ、担体への
結合方法は、適当な緩衝液などに抗体を溶解し、４℃で
数時間から一昼夜担体とまぜあわせて行なえば良い。

このＧＰ６８タンパク質に対する抗体を用いたアフィニ
ティークロマトグラフィーを行なう場合、吸着したＧＰ
６８タンパク質を溶出させる溶液としては、酸性緩衝液
、アルカリ性緩衝液あるいは高濃度の塩を含む中性緩衝
液などが利用できる。

本発明で用いる抗ＧＰ６８抗体としては、いがなるクラ
ス、サブクラスのものでも良く、例えばＩｇＧについて
は、Ｉ　ｇＧｌ、Ｉ　ｇＧ２ａ。

Ｉ　ｇ　Ｇｚｂ、　　Ｉ　ｇ　Ｇ３などのサブクラスの
ものが挙げられ、ＩｇＭについては、ｌ　ｇＭｌ　、　
　Ｉ　ｇＭ２などのサブクラスのものが挙げられる。

また、抗体は通常分子全体を用いるが、抗原と結合する
部位を含む部分断片を用いても良い。この部分断片とし
ては、ＩｇＭ抗体の単量体のＩｇＭｓや抗体分子をペプ
シンて分解することによって得られる２僅のフラグメン
トＦ（ａｂ’）２．パパインで分解することによって得
られる１価のフラグメントＦａｂ、ジチオスレイトール
のような還元剤で処理することによって得られる１僅の
フラグメントＦａｂ’などを挙げることができる。

抗ＧＰ６８１　ｇＧは、例えば、家兎抗ＧＰ６８血清１
ｍｌに、硫酸ナトリウム（キシダ化学社製）１８０ｍｇ
を攪拌しなから加えて溶かし、室温で一間接放置後、１
１０００ｒｐ、１０分間遠心分離した後、沈殿を０．０
１７５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６，３）の１ｍＫに溶かし
、ヒスキンクチュウーブ（三光純薬社製、サイズ８７３
２）に移し、同緩衝液にて一夜透析し、ついて、遠心分
ｌｌｌ（３０００ｒｐｍ、１０分間）して沈殿を除き、
ＤＥ５２カラム（２ｍＩｔ、ワットマン社製）に流し、
敢初に溶出する分画を集め、家兎抗ＧＰ６Ｂ　１　ｇＧ
画分２．４ｍＡを得ることがてきる。

また旧記のようにして、Ｆ（ａｂ’）ｚ画分、Ｆａｂ画
分及びＦａｂ”画分等を調製することかできる。

抗ＧＰ６８抗体（上述の部分断片を含む）に標識化合物
を結合させることによって癌の診断、治療に有用な本発
明の標識化抗体を得ることかできる。

抗ＧＰ６Ｂ抗体に結合させる標識化合物としては、放射
性同位元素、蛍光色素、増感剤、磁性体などを用いるこ
とがてきる。

放射性核種としては、例えば、６４（、ｕ、６７Ｃ，ｕ
、６７Ｇａ、　５９ｐｅ、　５７にｏ、　　１８Ｆ　　
、　７５５ｅ、　）６Ｂｒ、　８１１（ｉ、、８１ａに
、　、　９０Ｙ　、　ａｎｙ　、　９７Ｒｕ、９９１Ｉ
ＩＴｃ、１０５Ｒｈ、＋０ｓＲｄ　、　　＋０９ｐｄ　
、　　１ｌｌｌｎ、　　＋２３１、１２５■、■ＯＬＩ
ＩＡｇ、１目Ａｇ、＋３１Ｊ、　　１３３ｘｅ、　　＋
４０Ｌａ、　　１６８Ｙｂ、　　＋９８Ａｕ１１１１６
１ｅ、１１１８Ｒｅ、　　＋９８Ａｕ、　　１９９Ａｇ
、　　２０１Ｔｌ　　、　　２０３ｐｂ、２１２ｐｌ、
、”’Ａｔ　、　　”２Ｂｊ　　、　　１０５Ｒｕ　　
、　　Ｈｇ、　　Ｓｂ、、Ｐｔ、Ｗ、Ｎｉ、Ｏ５などか
ら選択した１種以上を用いることかてきる。

蛍光色素としては、例えば、フルオロエラセンインチオ
シアナ−）（ＦＩＴＣ）などを用いることができる。

また、増感剤としては、例えば、各種ポリフィリン化合
物を用いることができる。

磁性体としては、例えば、常磁性金属のＭｎ、Ｆｅ、Ｃ
ｕ％　Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｒ、Ｖ、Ｇｄ。

Ｅｕ、Ｌａ、Ｙｂ、Ｐａなどを用いることができる。

標識化合物と抗ＧＰ６８抗体の結合は、例えば、直接結
合や、キレート化合物、架橋剤、錯体形成化合物を介し
た結合などによって行うことができる。

キレート化合物、架橋剤および錯体形成化合物としては
、例えば、二官能性キレータ−としてのデフェロキサミ
ンメシレート（ｄｅｆｅｒｏｘａｍｉｎｅｍｅｓｙｌａ
ｔｅ　、以下ＤＦＯと略称する、日本チハガイギー社製
）、２−　（３’　−ヒドロキシピリド−２゛−イル）
−３−メチル−３−チアゾリン−４カルボン酸（デスフ
ェリチオシン）、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ｄ
ｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅ
ｔｊｃ　ａｃｉｄ、以下ＤＴＰＡと略記する、同仁化学
社製、Ｋｈａｗ、Ｂ、Ａ、　ｅｔ　ａｌ；　５ｃｉｅｎ
ｃｅ、　２０９．２９５〜２９７．１９８０参照）、ト
ランスフェリン、Ｄ−ペニシラミン、エチレンジアミン
テトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、エチレンジアミン、１−（Ｐ
−ベンゼンジアゾニウム）　−ＥＤＴＡ、１〜ｐ−アミ
ノフェニル−ＥＤＴＡなどのジアミン類、ポリアミン類
、アミンオキシムリガンド類、ジカンルボン酸類、ポリ
カルボン酸類、酸無水物、３−カルボキシ−２−オキソ
プロピオンアルデヒドビス（Ｎ−メチルチオセミカルバ
ゾン）（ＯＰＢＭＴ）、４−アシドフェニルグリオキサ
ル（ＡＰＧ）などのアリルアジドカルボニル基を有する
化合物、ゲトオキサル、ジスルフィドヘンシルオキシカ
ルボニル基を有する化合物、３−（２−ピリジルチオ）
プロパノヒドラジド、ジアミノ・ジメルカプト隣接基を
有するキレート化合物などの含イオウ原子キレート化合
物類、あるいは１．２−ビス（ジメチルホスフィノ）エ
タンなどの含リン原子キレート化合物類、メタルチオネ
インなどを挙げることができる。

抗ＧＰ６８抗体への標識化合物の結合反応は、０〜４０
℃の範囲内で行うことができる。抗ＧＰ６８抗体とキレ
ータ−とのコンジュゲートを製造する際には、０〜４℃
の範囲が好ましく、また、抗ＧＰ６８抗体と標識化合物
、あるいは抗ＧＰ６８抗体−キレーター−コンジュゲー
トと標識化合物の反応は、約１８〜２５℃の室温で実施
することが望ましい。

結合反応は、例えば、ｐＨ６，５〜９．５の水性緩衝液
中で行うことができる。

本発明の標識化抗ＧＰ抗体を用いて、実験癌、ヒト腫瘍
を移植したマウス、ヌードマウス、ラットの癌移植部位
のイメージングの効果、癌治療の効果を検討したところ
、本発明の標識化抗ＧＰ６８抗体は、多くの癌において
、対照の６７ＧａＣ１３、標識化抗ＣＥＡ抗体、および
標識化抗α−フェトプロティン（ＡＦＰ）抗体に比べて
、移植癌部位への集積性が高く、抗体投与後短間接軽過
後から、より鮮明に、癌部位を、より特異的、選択的に
イメージングすることが明らかにされ、核医学的体内診
断薬としての有用性か示唆された。また、癌移植部位は
イメージングの連日の追跡過程で、明瞭な縮小が見られ
、本発明の標識化抗ＧＰ６８抗体は、癌のターゲツティ
ングによる抗腫瘍効果も有することが確認された。

［実施例］ 以下、実施例により、本発明の標識化抗ＧＰ抗体の製造
法、その生物学的活性、効果を詳細に説明するが、本発
明はこれらに限定されない。

参考例１ １００個のＩＣＲマウス胎児脳（受精後１３日胚脳）を
、１００ＩＩＩＩｌの２％　トリトン　Ｘ　−１００、
０，００５＊ＰＭＳＦ、　０．１５　Ｍ食塩を含む１０
１１１Ｍトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ７，６）中でホモジ
ェナイズして、４℃、３０分の抽出を行ない、得られた
粗抽出液を１２０，０００　ｘｇ、１時間の条件の高速
遠心にかけた後、更に得られた上滑液を以下のようにし
て調製したＲＣＡアガロース　アフィニティークロマト
グラフィーカラム（４ＩＩＩＩｔ）に通した後、上記緩
衝液４０　ｍｌでこのカラムを洗浄した。

カラムへの充填； ＲＣＡアガロース（ＥＹ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社
製）の４ｍｌを円筒状カラムに充填し、これを１％トリ
トンＸ−１００、０，００５亀ＰＭＳＦを含むｌＯｆｌ
１Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，５）で処理し平衡化
した。

次に該カラムに１％トリトンＸ　−１００、０，００５
９６ＰＭＳＦを含む１０ｍＭトリス・塩酸緩衝液（ｐＨ
７，５）に更に０．１　Ｍラクトースを加えた２０　ｍ
ｌの溶液を通し、溶出液を得た。

この溶出液の一部を充分透析して精製タンパク質溶液を
得た後、これを凍結乾燥してタンパク質標品を得た。

なお、タンパク質標品の収量は、１００個のマウス胚の
脳あたり２．０ｍｇタンパク質てあった。

また、タンパク質量は、ローリ−（Ｌｏｗｒｙ　）法に
より、牛血清アルブミン（シグマ社製）を標準として求
めた。なお、以下の各種操作でのタンパク質量の測定も
同様の方法により行なった。

一方、これとは別に、先の溶出液の残りにエタノールを
最終濃度が８０〜９０％となるように加えてエタノール
沈殿タンパク質を得て、これをタンパク質標品とした。

得られたタンパク質標品の一部を以下の条件の二次元電
気泳動にかけて、その分子量および等電点を測定したと
ころ、この標品から分子量的６８．０００、等電点５，
４〜５．６のタンパク質のみが検出された。

なお、分子量測定での対照のタンパク質としては、いず
れもシグマ社製のチログロブリン（分子量３３０，００
０）、ラクトフェリン（分子量８８，０００）、ウシ血
清アルブミン（分子Ｍ６７．０００）　、卵白アルブミ
ン（分子量４３．０００）　、アルドラーゼ（分子量３
４．０（１０）を使用した。

一次元電気泳動の条件： ａ）一次元目 泳動用媒体として、尿素２．７６ｇ　、　３０％アクリ
ルアミド０．６７　ｍＩＬ、　　ｉｏ％ｉ　ＮＰ−４０
の１　　ｍＪＺ、アンホライン（ｐＨ３，５−ｔｏ　）
の０．２５　ｔｎｊ２．１０９６過硫酸アンモニア１０
μｍ、５９ｇテトラメチルエチレンジアミン［ｔｅｔｒ
ａｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅ　（Ｔ
ＥＭＥＤ　）　、牛丼化学社製］　０．１４　ｍｌ！、
水０．９１　ｔｒｒｌの組成のものを使用し、サンプル
をこの一次元ゲルにかけ、陽極液として１０ｍＭ　８３
ＰＯ４、陰極液として２０ｍＭ　　ＮａＯＨをそれぞれ
用い、４００Ｖで１３時間、次で８００ｖで１時間電気
泳動を行なった。

ｂ）二次死目 一次元泳動後、ゲルをソジウムドデシルサルフェート（
ＳＤＳ）試料緩衝液［１０＊グリセリン、５％　β−メ
ルカプトエタノール、２３ｔＳＤＳ　、　６２．５ｍＭ
トリス・塩酸緩衝液（ｐＨ６，８）コと平衡化し、７．
５９６のアクリルアミドスラブゲル（２５ｍＭトリス、
１９２ＩＩＩＭグリシン、０．１亀５ＯＳ）にかけ、１
２０ｖて４時間の二次死目の泳動を行なった。

体動後、０．０鴎クマシブルー、１０ｔメチルアルコー
ル、ＩＯｔ酢酸で１時間ゲルを染色した後、更に１０９
６メチルアルコール、ＩＯｔ酢酸で処理し、得られた各
スポットを測定した。

次に、先に得たＧＰ６８タンパク質の凍結乾燥標品（１
ａａｇタンパクｉ！ｔ）における糖含有率を、バアティ
ら（Ｂｔ＋ａｔｔｉ　ｅｔ　ａｌ）の方法に従って、メ
タツリシス反応を行なフた後にガス液体クロマトクラフ
ィーにより求めた。

一方、該凍結乾燥標品中のシアル酸の含有率を、０．０
５１　Ｈ２ＳＯ４を用いた８０℃、３０分の加水分解反
応を行なった後に、Ｎ−ａｃｅｔｙｌｎｅｕｒａｍｉｎ
ｉｃ　ａｃｉｄを標準として用いたＴｈ１ｏｂａｒｂｉ
ｔｕｒｉｃ　ａｃｉｄ反応により求めた。

更に、該ＧＰ６８タンパク質の凍結乾燥標品（タンパク
質量としてそれぞれ１ｍｇあるいは９８μｇ）を４Ｍ　
　Ｈ（：ｆｉでの１００℃、４時間の処理あるいは６Ｍ
ＨＣｆｌでの１０５℃、２４時間の処理によって加水分
解し、得られた加水分解物中のヘキソサアミンあるいは
アミノ酸を、日立アミノ酸分析器８３５型により分析し
た。

以上の分析操作の結果を以下に示す。

糖組成（モル比）； ガラクトース　　　　　　　　１ マンノース　　　　　　　　　１．４２フルクトース　
　　　　　　　０．３２グルコース　　　　　　　　　
０．０７グルコサミン　　　　　　　１．０６ ガラクトサミン　　　　　　０．１０ シアル酸　　　　　　　　　０．１８ システイン　　　　　　　　　６．９ バリン　　　　　　　　　２３，３ メチオニン　　　　　　　　　５２ イソロイシン　　　　　　　　９．５ ０イシン　　　　　　　　　４８．４ チロシン　　　　　　　　　　８・６ フエニルアラニン　　　　　１７．４ リジン　　　　　　　　　　　２６．３アンモニア　　
　　　　　　９０．１ ヒスチジン　　　　　　　　１０．６ アルギニン　　　　　　　　１８．２ プロリン　　　　　　　　　　２６．５アミノ酸組成（
モル比）； アスパラギン酸 スレオニン セリン グルタミン酸 グリシン アラニン ４３．２ ２６．１ ３５．８ ５８．４ ３０．２ ３０．６ 更に、上記ＧＰ６８タンパク質の凍結乾燥標品（１０５
μｇ）を２５μｍの水に溶解させ、その１７μ２（７１
，４μｇ）をベブチトシークエンサ−（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｓｃｉｅｎｃｅ社Ｍｏｄｅ＋　４７７Ａ　）に適用して
、そのアミノ末端のアミノ酸配列を分析したところ、以
下の結果が得られた。

ＧＰ６８タンパク質のアミノ末端のアミノ酸配列：Ｌｅ
ｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ
−Ｔ　１ｅ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ
−５ｅｒ−Ｘ　−Ｇｉｎ−Ｙ　−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌ
ｕ−Ｌｙｓ（ｘ、Ｙは未確定） なお、参考のためにマウスα−フェトプロティンのアミ
ノ末端のアミノ酸配列［Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｂ。

Ｇｏｒｉｎ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ
ｍ、、　２５６．１９５４〜（１９８１）］は以下のと
おりである。

マウスα−フェトプロティンのアミノ末端のアミノ酸配
列： Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇ
ｌｙ−１１ｅ−Ａｌａ−５ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−＾５
ｐ−５ｅｒ−５ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ
−Ｇｌｕ−しｙｓ− 更に、ＧＰ６８タンパク質（上記凍結乾燥標品）に対す
る抗マウスＱｐ６８タンパク質ポリクローナルウサギ抗
血清（参考例２で調製）及び抗マウスα−フェトプロテ
ィンポリクローナルウサギ抗血清（ヘキスト社製）のオ
クタルロニ（Ｏｕｃｈｔｅｒｌｏｎｙ）法によるゲル内
沈降反応を行なったところ、両抗血清はＧＰ６８タンノ
ペタ質に対して同様の沈降反応を示した。

参考例２ 参考例１で得たＧＰ６８タンパク質の凍結乾燥標品とエ
タノール沈殿標品の１：１の混合物１００μｇを、２週
問おきにフロイントの完全アジュバント（牛丼化学社製
）とともに計４回ウサギにュージーラントホワイト種）
の足置に接種してこれを免疫した。

最終免疫後ｌＯ０日目全採血し、血清を調製した。得ら
れた血清は、ＢＳＡを結合したＡｆｉｇｅｌ　１０（Ｂ
ｉｏ　Ｒａｄ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）カラム
に通し、流出液を更に、１ｍｇ／　ｍｘ濃度のＧＰ６８
タンパク質を含む重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐｌ（８，
Ｑ）と接触させたＡｆｉｇｅｌ　１０を充填したカラム
に通し、抗体を吸着させた。次に、　３Ｍのチオシアン
酸カリウム溶液で吸着抗体を溶出させ、流出液を集めた
。この操作を必要な回数縁り返し抗体溶液を備蓄した。

この抗体を含む流出液を充分透析し、２０μｇ／ｍｌの
タンパク濃度とし、イムノブロッティング法により分析
したところ、ＧＰ６８タンパク質に対するポリクローナ
ル抗体が含まれていることが確認された。

参考例３ 参考例１で得たＧＰ６８タンパク質の凍結乾燥標品とエ
タノール沈殿標品の１：１の混合物５００μｇを、２週
問おきにフロイントの完全アジュバントとともに計４回
ヤギの各所皮内、皮下に投与して、これを免疫し、経時
的に採血した。

十分抗体価が上った５箇月後に全採血した。得られた血
清を参考例２と同様にカラム処理して、ＧＰ６８タンパ
ク質に対するポリクローナル抗体を集積し、その一部を
分析したところ、ＧＰ６８タンパク質に対する特異的抗
体であることが確認された。

参考例４ 免疫する動物としてウマを用いる以外は実施例３と同様
にしてポリクローナル抗体を集積した。

参考例５ 免疫する動物としてウシを用いる以外は実施例３と同様
にしてポリクローナル抗体を集積した。

参考例６ 参考例１で得たＧＰ６８タンパク質の凍結乾燥標品とエ
タノール沈殿標品の１：１の混合物を以下に示す量で、
２週間間隔でウィスターラット（５〜６週令）に投与し
、これを免疫した。

１回目（皮下）５０μｇ ２回目（皮下）５０μｇ ３回目（腹腔内）１００μｇ ４回目（腹腔内）１００μｇ 最終免疫から３日目の牌細胞のｌＸ１０３個と、ミエロ
ーマ細胞としてのマウスＮ５−１細胞株の２×１０’個
とをポリエチレングリコール４００の存在下でＫｏｅｈ
ｌｅｒらの方法に従って融合させた。

ポリエチレングリコールを除き、得られたハイブリドー
マを２００ＩＩＩｔのＨＡＴ培地（ＨＡＴ及びＩＨｆｅ
ｔａｌ　ｃａｌｆ　５ｅｒｕｏ＋（Ｆｅ２）を含むＲＰ
ＭＩ　１６４０　ｍｅｄｉｕｍ）に浮遊させ、これを９
６ウエルプレート（Ｆａｌｃｏｎ社製）に各ウェル当り
の細胞数が１×１０５個となるように移した。

次に３７℃で１週間〜１０日培養を続けた。

培養ｌＯ日目上り３日ごとに各ウェル培養上清の半分を
用いて（その分断しい培養液を加えて培養を続ける）、
ベクタスティンＡＢＣ法（ＶｅｃｔａｓｔａｉｎＡＢＣ
ｍｅｔｈｏｄ、アビジンーピオチン化ワサビペルオキシ
ダーゼコンプレックス法、フナコシ社販売）によるＥＬ
ＩＳＡ　（ｅｎｚｙｍｅ　１ｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏ
　５ｏｒｂｅｎｊ　ａｓｓａｙ）を行ない、陽性クロー
ンを含むウェルを検索し、更に陽性のものを含むウェル
から限界希釈法によるクローニングを行なって所望とす
るクローンを得た。

なお、ＥＬＩＳＡ法に用いたアッセイプレート２０９５
　（Ｆａｌｃｏｎ社製）には、常法に従い参考例１で得
たエタノール沈殿ＧＰ６８タンパク質を溶解したリン酸
緩衝生理食塩水（以下ＰＢＳ）を１〜数時間接触させる
ことによフて、各ウェルにＧＰ６８タンパク質を１１０
０ｎ吸着させて使用した。

以上の操作で、計８個の陽性クローンが得られた。

これらのクローンのうちの２種（ＥＢＲ３、ＥＢＲ７）
をそれぞれ個々に用いて以下のようにしてＥＲＲ３−１
モノクロ一ナル抗体、ＥＢＲ７−］モノクローナル抗体
を得た。

なお、これらクローンＥ８Ｒ３及びＥＢＲ７は、昭和６
３年（１９８８年）８月１８日付けで、通商産業省Ｔ業
技術院微生物工業技術研究所（日本国茨城県つくば市東
１丁目１番３号、郵便番号３０５）にブタベスト条約に
基いて寄託された。

これらクローンの原寄託日は、昭和６３年（１９８８年
）８月１８日であり、クローンＥＢＲ３の受託番号はＦ
ＥＲＭ　　ＢＰ−２００２、クローンＥＲＲ７の受託番
号はＦＥＲＭ　　ＢＰ−２００３である。

参考例７ 参考例６で得たハイブリドーマ（クローンＥＢＲ３、Ｅ
ＢＲ７）を用いたＧＰ６８タンパク質に対するモノクロ
ーナル抗体の生産を実施した。

まず、クローンＥＲＲ３、ＥＢＲ７を別々にＲＰＭＩ１
６４０培地で、１０ｃｍシャーレ中で培養した。

得られだ２ＭＩの培養上清から５０を硫安で沈殿した沈
殿物を１〜２　ｍＩＬのＰＢＳに溶解し、３日間ＰＢＳ
で透析した。次いで、透析処理後の溶液をセファデック
スＧ　−２５０カラムに通し、精製ＥＢＲ３１モノクロ
一ナル抗体および精製ＥＢＲ７−１モノクロ一ナル抗体
を得た。

更に、ブリスタン処理［２，６、１０，１４−テトラメ
チルペンタデカン０．５ｍｍ　７匹を腹腔内に投与し、
１〜２週飼育するコした８退会ヌードラットに参考例６
で得られたクローンＥＲＲ３、ＥＢＲ７を個々にＩ　Ｘ
　ｔｏ’　７匹となるように腹腔内に投与した。ｌＯ〜
２１日目に腹口紅たまったラットから腹水（５０ｔｒｉ
ｌｌ／匹）を採取し、これから遠心分離により固形分を
除去した。

得られた上滑を５０％硫安塩析、４０９６硫安塩析し、
更にＰＢＳ　　（ｐＨ７，２）で３日間透析したう得ら
れた粗精製モノクローナル抗体は、セファデックスＧ　
−２００カラムにかけて、ＰＢＳで溶出させ、精製モノ
クローナル抗体（ＥＲＲ３−２モノクロ一ナル抗体およ
びＥＢＲ７−２モノクロ一ナル抗体）をそれぞれ個々に
含む２種の溶液を回収した。

参考例８ バイブリドーマの形成に、ウィスターラットの代りにＢ
ａ１ｂ／ｃマウスを用いる以外は、参考例６及び参考例
７と同様の操作を縁り返して、精製モノクローナル抗体
（ＥＢＲ３−３モノクロ一ナル抗体およびＥＢＲ７−３
モノクロ一ナル抗体）を得ることができた。

実施例１（＋２５１−抗ＧＰ６８抗体の製造）リン酸緩
衝生理食塩水（ＰＢＳ）に溶解した１、３ｍｇ／ｍｕ抗
ＧＰ抗体溶液１００μｌｌと、”Ｊ−ＮａＩ（７４ＭＢ
ｑ／ｍｊＺ）１０μｌｌを混ぜ、更にＰＢＳ　１００μ
ｋ及びクロラミン−Ｔ（２ｍｇ　／　ｍ　Ｉｔ　）溶液
の１０μｍを加え、室温で３０分間静置した。

次に、１０ｍｇ／ｍＩＬのメタビサルフエートナトリウ
ム２０μｍを加え反応を止めた。

得られた反応溶液をセファデックスＧ−５０カラムで、
ＰＢＳを溶出液として用い、ゲル濾過を行い、１２５Ｉ
−抗ＧＰ６８抗体分画を得た。

実施例ｚ（１３１Ｊ−抗ＧＰ６Ｂ抗体の製造）実施例１
の”５Ｉ−ＮａＩの代わりに、”’ｌ−Ｎａ１を用いる
以外は、実施例１と同様の条件で反応及び後処理を行い
、′３１■−抗ＧＰ６８抗体分画を得た。

実施例３　（６７Ｇａ　−ＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体の製
造）（Ａ）ＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体−コンジュゲートの
製造 ＰＢＳに２Ｘ１０−５Ｍの濃度でＤＦＯを溶解した溶液
の１．０ｍｊ２に、１０％グルタルアルデヒド溶液１０
μＩを加え、室温で５分間攪拌し、この反応混合液に、
１．３ｍｇ／ｍｌ！の濃度でＰＢＳに溶解した抗ＧＰ６
８抗体の溶液２ｍＩＬを加え、０〜４℃で４５分間攪拌
した。

次に、ナトリウムボロハイドライト（ＮａＢＨ４）０．
３ｍｇを加え、さらに０〜４℃で２時間、泡が消えるま
で攪拌した。次いで、この反応溶液をセファデックスＧ
−５０カラムで、ＰＢＳを溶出液として用い、ゲル濾過
を行い、試験管１本当たり、１．ＯｍＩＬずつ溶出液を
分取した。

分取した溶出液の２８０ｎｍでの吸光度を測定し、タン
パク質分画の溶出されている試験管３本の溶液を集め、
ＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体−コンジュゲートを得た。

（Ｂ　）　　（６７Ｇａによる標識） 上記（Ａン項で得たＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体−コンジュ
ゲート溶液（抗体として１．３ｍｇ／ｍ１）ｓｏμｘに
、”ＧａＣ１３（４００μｃ　ｉ　／ｍｊ２）溶液１０
μｍを混ぜ、更に、ＰＢＳ２００μｍを加え、室温で３
０分間放置した。

得られた反応溶液をセファデックスＧ−５０カラムで、
ＰＢＳを溶出液として用い、ゲル濾過を行い、試験管１
本当り１．０ｍｌ！ずつ溶出液を３０本分取した。

各試験管の放射能を測定し、放射能の高い試験管２本の
溶液を集め、６７Ｇａ−ＤＦＯ−抗ＧＰ６Ｂ抗体を得た
。

実施例４　（”’Ｉｎ　−ＤＴ　ＰＡ−抗ＧＰ６８抗体
の製造） （Ａ）（ＤＰＴＡ−抗ＧＰ６８抗体−コンジュゲートの
製造） ０．１Ｍの炭酸水素ナトリウム０．１ｍｆｔに、１．３
ｍｇ／ｍｌの濃度でＰＢＳに溶解した抗ＧＰ６Ｂ抗体の
溶液０．９ｍｆｔを加え、さらに抗ＧＰ６８抗体の２５
０倍モルのＤＴＰＡを加え、室温で１時間放置した。

次いで、この反応液をセファデックスＧ−５０で、０．
０１Ｍ酢酸ＵＳ液（ｐＨ，６，０）を用い、ゲル濾過を
行ない、試験管１本当たり２．ＯｍＬずつ溶出液を２０
本分取した。

各試験管内の溶液の吸光度（２８０ｎｍ）を測定し、吸
光度の高いタンパク質分画を含むｖｏｉｄ分画を集め、
ＤＴＰＡ−抗ＧＰ６８抗体−コンジュゲートを得た。

（Ｂ）（”’Ｉｎによる標識） 上記（Ａ）項で得たＤＴＰＡ−抗ＧＰ６８抗体−コンジ
ュゲートの０．２５ｍＩＬに、”　’　Ｉｎ−Ｃ：１３
（２５０μＣｉ／ｍｌり溶液０．０２ｍＩＬを混ぜ、さ
らに、０．０１Ｍの酢酸緩衝液（ｐＨ１６，０）０．２
３ｍ１Ｌを加え、室温で３０分間静置した。

得られた反応液を、セファデックスＧ−５０で、ＰＢＳ
を溶出液として用い、ゲル濾過を行ない、試験管１本当
たり１．Ｏｍｆずつ溶出液を３０本分取した。

各試験管内の溶液の放射能を測定し、放射能の高い２本
の試験管内の溶液を集め、１ｌｌｉｎ−ＤＴＰＡ−抗Ｇ
Ｐ６８抗体を得た。

実施例４　（９９ＩＩＩＴｃ　−ＤＴＰＡ−抗ＧＰ６Ｂ
抗体の製造） 実施例３で製造したＤＴＰＡ−抗ＧＰ６８抗体コンジュ
ゲート０．２５ｍｊ２に、１　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌの濃
度の塩化スズ無水物生理食塩水溶液の０．１ｍ１．１　
ｍ　ｇ　／　ｍ　ｆＬの濃度のアスコルビン酸溶液の０
．１ｍＪｌ及び９９鵬ＴＣＯ４（２０ｍ　Ｃｉ　／　ｍ
　Ｉｔ生理食塩水）０．１ｍｌを加え、室温で３０分間
放置した。

得られた反応液をセファデックスＧ−５０カラムで、Ｐ
ＢＳを溶出液として用い、ゲル濾過を行ない、分画し、
放射能の高い画分な合せて、′ｌＩ９”Ｔｃ　−ＤＴＰ
Ａ−抗ＧＰ６Ｂ抗体を得た。

実施例５　（”Ｇａ　−Ｄ　Ｆ　Ｏ−抗ＧＰ６８抗体Ｆ
（ａｂ’）、の製造） （Ａ）　　（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの製造）抗Ｇ
Ｐ６８１　ｇＧ抗体４ｍｇ（２５ナノモル）を０．１Ｍ
の濃度で食塩を含む０．１Ｍ酢酸緩衝液（ｐ）Ｉ、４．
５）１ｍｆに溶かし、これに２．５％ペプシン（シグマ
社製）を添加して、３７℃、２０時間静置した。得られ
た反応液を、セファデックスＧ−５０カラムて、ＰＨ７
，０のＰＢＳを溶出液として用い、ゲル濾過を行ない、
溶出されたタンパク質画分を凍結乾燥して、Ｆ（ａｂ’
）２フラクメント１．６ｍｇを得た。

（Ｂ）（ＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体Ｆ（ａｂ’）２７ラグ
メントーコンジユケートの製造） 実施例３の（Ａ）項と同様にして、ＤＦＯ−抗ＧＰ６８
抗体Ｆ（ａｂ’）、フラグメント−コンジュゲートを製
造した。

（Ｃ）　　（”Ｇａによる標識） 実施例３の（Ｂ）項と同様にして、８７　Ｇａ−ＤＦＯ
−抗ＧＰ６８抗体Ｆ（ａｂ’）ｚフラグメント−コンジ
ュゲートを製造した。

実験例１　（Ｍ細胞への１２５１−抗ＧＰ６Ｂ抗体の結
合） エーリッヒ癌細胞及びザルコーマ１８０　（Ｓ−１８０
）癌細胞は、雄性ｄｄＹマウスに移植後、７日目に腹水
より採取し、これに水冷生理食塩水を加え、３回、遠心
（５℃、２０ＱＯｒｐｍ、５分間）により洗浄した。

アデノカルシノーマ（ＡＤＣ）フ５５細胞及びルイス３
ＬＬＷ＃癌細胞は、雄性Ｃ５７ＢＩｌ／６マウスに皮下
に継代移植して維持した。移植後！２２日目癌腫留を破
砕し、ステンレススチールメツシュを通して癌細胞浮遊
液を調製し、水冷生理食塩水で３回上記と同様の条件で
の遠心により洗浄した。なお、赤血球は溶血して取り除
いた。

ｌＸｌ０’〜２ｘｌＯ’個のそれぞれの癌細胞を、１０
０μｍのＰＢＳに浮遊させ、そこに、凰２１ｉ１−抗Ｇ
Ｐ６Ｂ抗体の１１００ｎを加え、４℃、２時間保温した
後、癌細胞を４℃で水冷ＰＢＳで３回上記と同様の条件
での遠心により洗浄した。

次に、癌細胞ベレットに結合した放射能をウェルタイプ
のシンチレーションカウンター（ＡｌｏｋａＡＲＣ３０
０）で測定した。癌細胞に特異的に結合した放射能の割
合（％）を、非特異結合放射能を減することにより算出
した。

その結果を第１図に示すが、１２Ｊ−抗ＧＰ６８抗体の
アデノカルシノーマ７５５細胞及びルイス３ＬＬ肺癌細
胞への結合は高く、他方エールリッヒ癌細胞及びＳ−１
８０癌細胞との結合は極めて小さかった。

実験例２（担癌マウスでの＋２５）−抗ＧＰ６８抗体の
生物学的分布） 約ｔｘｔｏ５個のエールリッヒ腹水癌細胞及びＳ−１８
０癌細胞をそれぞれ体重的３０ｇの雄ｄｄＹマウスの左
足後ろ側に皮下移植した。

ルイス３ＬＬ肺癌細胞及びアデノカルシノーマ７５５細
胞は、体重的２５ｇのＣ５７Ｂｆ／６マウス背部に皮下
移植した。

また、Ｃｏ　ｌ　ｏｎ３８細胞、ＭＭＴＯ６０５６２細
胞及びＢ−１６細胞も同様にＣ５７Ｂ　ＩＬ／６マウス
背部に皮下移植した。

癌が直径１ｃｍ程度、０．５〜１ｇの重さになる癌移植
後１〜３週間目に分布の試験を行った。

それぞれの担癌マウスに、！２５Ｉ−抗ＧＰ６８抗体（
約３７にＢｑ、５μｇ／マウス）を尾静脈より静注した
。

注射後３日目に層殺し、腹腔大動脈から血液を採取し、
また臓器及び癌を摘出し、秤量の後、シンチレーション
カウンターでそれぞれの放射能を測定した。その結果か
ら、各組織の湿重量のｇあたりの注射した＋２ｓＪ−抗
ＧＰ６８抗体の分布％（％ＩＤ）を算出した。

その結果を表１に示す。なお、表１の結果は、４〜５匹
のマウスを１群とした平均値（％）±ＳＥ（％）で示し
た。

ＭＭＴ０６０５６２、Ｂ−１６及びアデノカルシノーマ
７５５癌細胞への集積は、試験した各種癌の中ですぐれ
た部類に入っていた。

１２Ｊ−抗ＧＰ６８抗体の分布における癌／血液（Ｔ／
Ｂ）、癌／肝臓（Ｔ／Ｌ）及び癌／筋肉（Ｔ／Ｍ）の比
を、それぞれの癌について算出したところ、アデノカル
シノーマ７５５及びＭＭＴ０６０５６２がそれらの中で
卓越していた。これらの結果は、実験例１の結果と対応
するものである。

実験例３（標識化抗体による癌イメージング）アデノカ
ルシノーマ７５５移植マウスの尾静脈から６７Ｇａ−Ｄ
ＦＯ−抗ＧＰ６８抗体、６７Ｇａ−ＤＦＯ−抗ＡＦＰ抗
体及び６７ＧａＣ１３をそれぞれ個々に尾静脈から静注
し、注射後１日から６日まで連続してシンチグラムを取
った。

マウスはベントパルビタールナトリウムで麻酔し、高エ
ネルギー　パラレルホール　コリメーター（ｐａｒａｌ
ｌｅｌ−ｈｏｌｅ　ｃｏｌｌｉｍａｔｅｒ、０ｈｉｏ　
ＮｕｃｌｅａｒΣ５ｅｒｉｅｓ）を装着したガンマカメ
ラで像映、スキャンした。１イメージ当り１５，０００
カウントを集積した。

その結果、”Ｇａ−ＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体のアデノカ
ルシノーマ７５５癌移植部位への集積が所期より際立っ
ていることが示された。

注射３日後の各標識体の生物学的分布の量を表２に示す
。表２の結果もまた、４〜５匹のマウスを１群とした平
均値±ＳＥで示した。

”Ｇａ−ＤＦＯ−抗ＡＦＰ抗体の肝臓、腎臓への集積は
癌へのそれよりもかなり高く、また、６７Ｇａ（：１３
の場合、癌への集積よりも、肝臓、腎臓、牌臓などの多
くの臓器への集積の方が高く、強く描写され、癌特異的
、選択的イメージングを行うことは難しく、それに比較
して、６７ＧａＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体の癌局所への集
積性は極めて高く、”Ｇａ−ＤＦＯ−抗ＧＰ６８抗体の
臨床的な有用性が示唆された。

同様に、”’Ｉｎ　−ＤＴＰＡ−抗ＧＰ６Ｂ抗体の癌イ
メージングにおいても同様の結果が得られた。

実験例４　（ＭＭＴＯ６０５６２マウス乳癌移植マウス
での癌治療） ＭＭＴＯ６０５６２ｖウス乳癌細胞Ｉ　Ｘ　１０５〜２
Ｘ　１０’個を移植したＣ５７Ｂｊ！／６マウスに、１
週間後に６７Ｇ　ａ　−Ｄ　Ｆ　Ｏ−抗ＧＰ６８抗体を
尾静脈より静注し、注射後癌の大きさを測定したところ
、６日目には腫瘍の大きさは半分以下となった。

実験例５（ヒト癌移植ヌードマウスでの１２５Ｉ−抗Ｇ
Ｐ６８抗体の生物学的分布） ヒト直腸腺癌（Ｃｏ１ｏｎ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏ
ｍａ）　Ｌ　５１７４Ｔ細胞をヌードマウス（日本タレ
ア製）の背部皮下に移植し、１０日後に分布の試験を行
なった。結果を表３に、４〜５匹のマウスを１群とした
平均値±ＳＥで示す。

”Ｇａ−ＤＦＯ− 抗ＧＰ６８抗体 ”Ｇａ−ＤＦＯ− 励ＦＰ抗体 ”ＧａＣ１：＋ 血液 肝臓 腎臓 膵臓 范億 肺 膵臓 筋肉 癌 脳 胃 小腸 ７．５１±０．２３ １０、８２±０．６３ １０、６２±０．８６ １８．２２±２，２６ ２．８４±０．２６ ５．４０±０．３７ １．７９±０．０３ ０．６５±０．０２ １１．２９±０．３７ ０．３０±０．０１ ２．７７±０．２３ ２．６７±０．２８ ２．４７±０．２２ ７．３１±０．８２ １４．５９±１，０６ ４．５７±０．５７ １、８１±０．２３ １．９６±０．２８ １．３７±０．１５ ０．６５±０．１４ ３．７５±０．５６ ０．０７±０．０１ ０．９１±０．１９ １．４９±０．２２ ０．４６　±０．０７ ６．４０±０．５４ ６．５５±０，５９ ５．６９　±０，５３ １．２８±０．１３ １．９８±０．１４ ２ｏ４９±０．０８ ０．３４±０．０２ ２．５８±０．２２ ０．２２±０．０３ ４．７８±０．３８ １．６３±０．３６ ［発明の効果］ 本発明により、癌の診断、治療に有用な標識化抗体が提
供された。本発明の標識化抗体は、癌部位への特異的集
積性が高く、抗体投与後足時間で、癌部位のより特異的
、選択的イメージングが可能であり、また癌のターゲツ
ティングによる抗腫瘍効果も得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実験例１における癌細胞に特異的な放射能の結
合割合（％）を示すグラフであり、Ｏはルイス３ＬＬ肺
癌細胞での結果を、・はアデノカルシノーマ７５５癌細
胞での結果を、口はザルコーマ−１８０癌細胞での結果
を、■はエーリッヒ癌細胞での結果をそれぞれ示す。 特許出願人　　三井東圧化学株式会社

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １）マウス胎児由来ＧＰ６８シアロ糖タンパク質に対す
   る抗体と、該抗体に結合した標識化合物とを有すること
   を特徴とする標識化抗体。