JPH0472566A - 検出試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、検体中の被検出物質に対して免疫的に活性な
物質を固定した固体微粒子を含み、免疫学的な各種の検
出や測定に用い得る検出試薬に関する。

［従来の技術］ 抗体等の免疫的に活性な物質を担持したポリスチレンな
どの固体微粒子を水等の液媒体中に分散させた分散液（
ラテックス試薬）に、抗原等の前記免疫的に活性な物質
に対して特異的に反応する物質を作用させることにより
起る凝集を観察することで、抗原等の存在を測定するラ
テックス凝集イムノアッセイ法（ＬＡＩＡ）がジエー・
エム・シンガーら［Ｊ、　Ｍ、　Ｓｉｎｇｅｒ　ｅｔ　
ａｌ、Ａｍ、　Ｊ、　Ｍｅｄ、。

２１、８８８　（１９５６）］により見出され、その後
、種々の検討がなされている。

凝集の程度を視覚で判断するＬＡＩＡを利用した測定法
は、定量的な測定は困難なものの、筒便でかつ結果が短
時間で得られるという利点があり、実用化されており、
各種の検出に広く普及している。

更に、近年、光学機器を利用した光学的手法によって、
反応に応じた凝集の度合を光学的な変化でとらえること
で、ＬＡＩＡによる定量的な測定も可能となり、広く行
われるようになってきた。

ＬＡＩＡに用いるラテックス試薬は、上述のように液媒
体中に抗体等を固定した固体微粒子を分散したものであ
る。

しかしながら、固体微粒子の分散液は、本質的に不安定
な系であるために、例えば長時間の貯蔵を行うと、固体
微粒子の凝集を起こし易く、凝集が生じた場合には測定
感度の低下等の問題が生じる。また、凍結保存した後に
解凍した場合、固体微粒子の良好な分散状態が再現され
ず、試薬として利用できなくなる場合が多い。

従って、ラテックス試薬は、その保存に格別の配慮が必
要であった。

こうした保存安定性における問題を改善する方法として
、分散液としてのラテックス試薬を乾燥して、乾燥品と
して保存安定性を高める方法が検討されている。

例えば、特開昭５８−７３８６６号公報には、ラテック
ス試薬等の凝集性免疫試薬を毛細管に注入して、凍結乾
燥させて保存する方法が開示されている。

［発明が解決しようとする課題］ ところが、乾燥状態としたラテックス試薬は、定性的な
測定には十分適用可能であるが、光学的手法を用いた定
量的な測定に適用するには不十分なものであった。

すなわち、蒸発、スプレートライ、凍結乾燥、真空乾燥
などの方法によってラテックス試薬を乾燥させた場合、
固体微粒子間の固着・凝集が生じ、再懸濁に際して固体
微粒子の均一な分散状態が得られなくなり、再現性良い
定量分析が行えなくなる。

乾燥ラテックス試薬の再分散性を向上させる方法として
は、例えば、特開昭５２−１１７４２０号公報に、ラテ
ックス試薬に乳糖などの水溶性糖類を添加した状態で凍
結乾燥させて、乾燥品とする方法が開示されている。

この方法によれば、水溶性糖類の添加によって乾燥ラテ
ックス試薬の再分散性はかなり向上されるものの、光学
的手法を用いる定量分析において要求される十分な再分
散性が得られないという問題がなお残されている。

そこで、糖類のような再分散性を高めるための添加剤の
添加量を増やす方法があるが、多量の添加剤の使用は免
疫学的反応に対して感度低下などの悪影響を及ぼすため
、添加量の増加には限界がある。

更に、長時間の攪拌や、高い攪拌強度での攪拌を行うこ
とで、より均一な再分散状態を得る方法もあるが、強い
条件での攪拌処理によって免疫的に活性な物質と固体微
粒子との結合状態が破壊されたり、また免疫的に活性な
物質自体が破壊されたりする場合があり、免疫的に活性
な物質と固体微粒子との結合形態や、免疫的に活性な物
質の種類によっては、これらの方法は適用できない。

本発明の目的は、光学的手法を用いた定量分析にも好適
に適用できるＬＡＩＡ用の検出試薬を提供することにあ
る。

本発明の他の目的は、乾燥状態で安定保存可能なＬＡＩ
Ａ用の検出試薬を提供することにある。

本発明の他の目的は、乾燥状態からの液媒体への再分散
性に優れ、得られた再分散液は光学的手法を用いた定量
分析にも好適に適用できるＬＡＩＡ用の検出試薬を提供
することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明の検出試薬は、検体中の被検出物質に対して免疫
的に活性な物質を固定した固体微粒子を含む検出試薬に
おいて、前記固体微粒子がアミノ基とカルボキシル基を
有する変性ポリスチレンであることを特徴とする。

本発明における担体として機能する変性ポリスチレン微
粒子は、少なくともアミノ基とカルボキシル基を有し、
水性液媒体（水を主体とする液媒体）への分散性に優れ
、本発明の試薬を水性液媒体に分散させてＬＡＩＡ用の
検出試薬として用いることで、定性分析のみならず、光
学的手法を用いた定量分析を行うことができる。

また、本発明の試薬は、乾燥品とした際の保存安定性に
優れ、乾燥品の再分散においても良好な分散性が維持で
きる。

従って、乾燥品の再分散液をＬＡＩＡ用の検出試薬とし
て用いることで、定性分析及び光学的手法を用いた定量
分析を行うことができる。

また、本発明の検出試薬は水性液媒体への分散性に優れ
ているので、その分散液の調製に当たっては、分散性を
高めるための糖類などの添加剤が不要、あるいはその使
用量を更に減少させることができ、また、特別に強度な
攪拌条件による攪拌を行う必要もなく、これらを採用す
ることによる弊害を回避できる。

なお、本発明の試薬の分散液に調製に用いる水性液媒体
としては、水又は水およびアルコール類、ケトン類など
の水と相溶性のある有機溶媒との混合溶媒が使用される
。また分散媒には適宜ｐＨ緩衝剤、蛋白質、界面活性剤
、水溶性高分子化合物などが添加される。

ｐＨ緩衝剤は、抗原−抗体反応は一般に溶媒のｐＨの影
響を受けやすいため、最適の１）Ｈに調節するために添
加され、例えば、リン酸塩やＴｒ　ｉ　５Ｈｃｔ緩衝剤
などが使用される。蛋白質は、非特異反応を防止する目
的で添加され、例えば、牛血清アルブミン、ゼラチンな
どが使用される。また、検出感度の調整が目的で界面活
性剤やポリエチレングリコールなどの水溶性高分子化合
物が添加される。

本発明の検出試薬における変性ポリスチレンからなる固
体微粒子は、アミノ基及び／又はカルボキシル基を有す
る部位とスチレンを有する部位からなる共重合体、又は
、アミノ基及び／又はカルボキシル基で置換したスチレ
ンを有する部位の重合体、又は、アミノ基及び／又はカ
ルボキシル基で置換したスチレンを有する部位とアミノ
基及び／又はカルボキシル基を有する部位からなる共重
合体をいう。該固体微粒子は、種々の公知の方法により
製造することができ、例えば、以下のような方法を利用
することができる。

ａ）カルボキシル基を有するモノマーと、アミノ基を有
するモノマーと、スチレン及びスチレン誘導体から選択
した一種以上とを３元共重合させて微粒子状の変性ポリ
スチレンな得る方法。

ｂ）カルボキシル基を有するモノマーと、スチレン及び
スチレン誘導体から選択した一種以上とを２元共重合さ
せ、得られた共重合体微粒子の表面のカルボキシル基の
一部をエチレンジアミノなどの二官能性アミノによりア
ミノ基に変換する方法。

Ｃ）スチレン及びスチレン誘導体から選択した一種以上
からなる成分Ａと、アミド基を有するモノマーからなる
成分Ｂとを共重合させ、得られた共重合体微粒子の表面
をホフマン反応で改質して、アミノ基およびカルボキシ
ル基を導入する方法。

これらの方法の中では、均一粒径のより安定な微粒子が
得られるという点からＣ）の方法がより好適である。こ
のＣ）の方法では、ホフマン反応によってアミド基がア
ミノ基に変換されるとともに、副反応として、アミド基
の加水分解によってカルボキシル基も生成され、その条
件を適宜設定することで、アミノ基とカルボキシル基の
比率を変化させることができるという利点もある。

固体微粒子を構成する変性ポリスチレンにおけるアミノ
基とカルボキシル基の比率は、アミノ基１に対し、カル
ボキシル基は、○　０１〜１０Ｑの範囲、より好適には
０．５〜２０である。

以下、Ｃ）の方法による場合について説明する。

成分Ａに用いるスチレン誘導体としては、例えば、α−
メチルスチレン、２，４−ジメチルスチレン、ａ−エチ
ルスチレン、ｐ−ビニルスチレン、ｐ−イソプロピルス
チレン、ｍ−フェニルスチレン、α−クロルスチレン、
ｐ−クロルスチレン、ｐ−メトキシスチレン、ｍ−アミ
ノスチレン、ｐ−シアンスチレンなどを挙げることがで
きる。

成分Ｂしては、例えば、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−
メチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−フェニル（メタ）
アクリルアミド、Ｎ−（ジエチルアミノエチル）（メタ
）アクリルアミド、Ｎ。

Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミドなどの（メタ）ア
クリルアミド誘導体、メチレンビス（メタ）アクリルア
ミドなどを、単独で、またはこれらの二種以上を組合せ
て用いることができる。

成分Ａと成分Ｂとの共重合には、種々の公知の方法が利
用できる。

例えば、アニオン性界面活性剤、非イオン系界面活性剤
などの存在下に水性液媒体中で水溶性ラジカル開始剤を
用いた乳化重合；界面活性剤を使用せずに、水性液媒体
中で水溶性ラジカル開始剤を用いたソープフリー乳化重
合：部分鹸化ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリ
ドンなどの保護コロイドの存在下での懸濁重合：ビニル
系モノマーは溶解するが重合体は溶解しない液媒体中で
重合させる沈殿重合等の各種の重合法が利用できる。

共重合体中での成分Ａと成分Ｂのモル比は、例えば、１
：０．５〜１：Ｏ，ＯＯｌの範囲とすることができる。

重合における反応条件は、得られる共重合体固体微粒子
の粒径などに応じて適宜設定すれば良い。

固体微粒子の粒径は、特に限定されないが、検出試薬の
液媒体中での分散性、特に乾燥試薬の再分散性等を考慮
すれば、例えば、０．０５μｍ〜５μｍの範囲内である
ことが好ましく、０．１μｍ〜２μｍの範囲内であるこ
とが特に好ましい。すなわち、０．０５μｍ未満の粒径
の場合は、乾燥試薬の再分散が困難になり、また、５μ
ｍを越えると分散液中での固体微粒子の沈殿等が生じ易
くなり、分散液としての試薬の安定性が得られなくなる
。

得られた固体微粒子は、次にホフマン反応によって処理
され、その表面にアミノ基及びカルボキシル基が誘導さ
れる。ホフマン反応は次式に示すように第一級カルボン
酸アミドにアルカリ水溶液中、臭素（または塩素）を作
用させた炭素数が１他生ない第一級アミノを得る方法で
、一部側反応でカルボキシル基が生成する。

固体微粒子の表面に固定させる免疫的に活性な物質とし
ては、被検出物質の免疫測定に必要な各種物質が用いら
れる。

例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥなどの免疫グロブリン
：補体、ＣＲＰ、フェリチン、０１マイクログロブリン
、β、マイクログロブリンなどの血漿タンパク質や、こ
れらに対する抗体；α−フェトプロティン、癌胎児性抗
原（ＣＥＡ）、前立腺性酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ
）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５などの腫瘍マーカー及
びこれらに対する抗体；黄体化ホルモン（ＬＨ）、卵細
胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、ヒト繊毛性ゴナドトロピン
（ｈＣＧ）、エストロゲン、インスリンなどのホルモン
類及びこれらに対する抗体：ＨＢＶ関連抗原（ＨＢｓ、
ＨＢｅ、ＨＢｃ）、ＨＩＶ、ＡＬＴなどのウィルス感染
関連物質およびこれらに対する抗体ニジフチリア菌、ボ
ツリヌス菌、マイコプラズマ、梅毒トレボネーマなどの
バクテリア類及びこれらに対する抗体、トキソプラズマ
、トリコモナス、リーシュマニア、トリパノゾーマ、マ
ラリア原虫などの原虫類及びこれらに対する抗体：フェ
ニトイン、フォスファターゼなどの抗てんかん薬、キニ
ジン、ジゴキシニンなどの心血膏薬、テオフィリンなど
の抗喘息薬、クロラムフェニコール、ゲンタマイシンな
どの抗生物質等の薬物類及びこれらに対する抗体：酵素
、菌体外毒素（ストレリジン０なと）及びこれらに対す
る抗体などが用いられる。

免疫的に活性な物質の固体微粒子への固定方法としては
、例えば、固定化酵素（講談社、１９７５、千畑一部編
）などに開示されている酵素等の固定化に用いられてい
る各種の化学的及び／または物理的結合方法が利用でき
る。

例えば、固体微粒子にグルタルアルデヒドなどのポリア
ルデヒドを用いて共有結合によって免疫的に活性な物質
を結合させる方法、特公昭５３−１２９６６号公報、特
開昭５３−５２６２０号公報に開示されている縮合剤と
してカルボジイミドやウッドワード試薬になどを使用し
て免疫的に活性な物質を固体微粒子に結合させる方法な
どを利用することができる６ なお、固体微粒子や免疫的に活性な物質に、免疫測定時
における凝集の検出をより容易とするための着色染料や
、蛍光色素などの標識剤を結合させてもよい。

免疫的に活性な物質の固体微粒子への固定は、水性液媒
体中で行うのが好ましい。この水性液媒体としては、水
、水と有機溶媒との混合物等が利用できる。なお、有機
溶媒としては水と相溶性のあるアルコール類やケトン類
が利用できる。

固定化反応は、反応系中に固体微粒子の安定化、非特異
凝集の生起を防止するなどの目的で、リン酸緩衝生理食
塩水（ＰＢＳ）、トリス−塩酸緩衝液などの緩衝液中で
、必要に応じて牛血清アルブミンなどの不活性タンパク
質、界面活性剤等の存在下に行っても良い。

固定化反応における反応液のｐＨは、通常、６〜１０、
好ましくは７〜９とすることができる。

また、反応液中での固体微粒子の濃度は通常００１〜５
．０重量％とすることができる。

免疫的に活性な物質が固定化された固体微粒子は、免疫
測定用の液媒体に分散させて、分散液としての測定用試
薬を得ることができる。

この分散液試薬を調製するための液媒体としては、リン
酸緩衝生理食塩水やトリス−塩酸緩衝液などの緩衝液に
、必要に応じて牛血清アルブミンなどの不活性タンパク
質、界面活性剤等を添加したものが利用できる。

更に、免疫的に活性な物質が固定化された固体微粒子の
適当な分散液を調製し、該分散液から液媒体を除去して
、乾燥させることによって乾燥試薬を得ることができる
。

乾燥方法としては、蒸発、スプレードライ、凍結乾燥、
真空乾燥などの方法が利用できるが、６０’Ｃ以下、好
ましくは３０℃以下の温度で行うのが望ましい。これら
の方法の中では、試薬の感度を定常的に維持できるとい
う点から凍結乾燥が好ましい。

乾燥試薬は、免疫測定用の液媒体に再分散させて、分散
液試薬として測定に用いることができる。

［実施例］ 以下、実施例により本発明を更に詳細に説明する。

実施例１ １−１　固体微粒子の合成 還流冷却器、攪拌機及び温度計を備える３００ｍ１２容
量の重合容器中に、水１６０ｍβ、四ホウ酸ナトリウム
（Ｎ８２Ｂ４０．１０８２０）　０　、５０　ｇ、アク
リルアミド２．０ｇを加え７０℃に加温し、溶解させた
。

重合容器内に３０分間Ｎ２ガスを導入して、容器内の空
気をＮ２に置換した後、重合開始剤として過硫酸カリウ
ム１．７ｇを添加し、攪拌機で３００ｒｐｍで攪拌しな
がら７０℃で一時間重合反応を行った。

次に、スチレン４０ｇを重合容器内に加えて４時間開条
件で攪拌し、更に、アクリルアミド２ｇを加えて５時間
開条件で攪拌を続け、スチレン／アクリルアミド共重合
体微粒子の分散液が得られた。

分散液を室温にもどし、その一部を取り出して合成され
たスチレン／アクリルアミド共重合体微粒子を回収、乾
燥させて、透過型電子顕微鏡で観察したところ粒径０．
７６μｍの均一な大きさの球形粒子であることがし察で
きた。

スチレン／アクリルアミド共重合体微粒子を上記の分散
液から遠心分離により、回収し、さらに蒸留水で三回洗
浄した後、蒸留水中に固形分２０重量％で共重合体微粒
子が含まれる分散液を得た。

この分散液の５ｍ℃に、５ｍＩ２の１０％次亜塩素酸ナ
トリウム水溶液及び１０ｍ℃の１０％水酸化ナトリウム
溶液を加え４℃で六時間反応させて、固体微粒子表面の
ホフマン反応による処理を行い、変性ポリスチレン微粒
子を得た。

反応後、反応液を塩酸で中和し、遠心分離による変性ポ
リスチレンからなる固体微粒子の洗浄を蒸留水で四回行
った後、蒸留水を用いて固形分１０重量％の固体微粒子
の分散液を得た。

この変性ポリスチレン微粒子の分散液の電導度滴定を行
い、得られた電導度滴定曲線より、変性ポリスチレン微
粒子のアミノ基とカルボキシル基の表面密度を求めた。

その結果、アミノ基の表面密度は、２．０　ｕｎｉｔ／
ｎｍ”、カルボキシル基の表面密度は、０．９　ｕｎｉ
ｔ／ｎｍ”であった。

１−２．抗体の固定化 上記の１−１項の操作で得た変性ポリスチレンからなる
固体微粒子の分散液の０．５ｍｇにＮ／１５リン酸塩緩
衝液（ｐＨ８，０）の５ｍｇ、１−エチル−３−（３−
ジメチルアミノプロピル）−力ルポジイミド　ハイドロ
クロライド（ＷＳＣ）の０．１２ｇを加え、室温で三時
間振盪した。

次に、Ｎ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８，０）で遠心分
離により固体微粒子の洗浄を三回行い、固体粒子を回収
した。

回収された固体微粒子に、ＣＲＰ抗体溶液（Ｃｏｏｐｅ
ｒ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ　　Ｉｎｃ、社製の抗ヒトＣ
ＲＰヒツジ血清ＩｇＧ画分をＩｇＧが１ｍｇ／ｍ［どな
るようにＰＢＳで希釈して調製）の５ｍｆｉを加え、室
温で三時間振盪し、抗体感作固体微粒子を得た。

反応液から得られた抗体感作固体微粒子を、遠心分離に
より回収し、Ｎ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８，０）で
洗浄し、１％濃度で牛血清アルブミンを含むＰＢＳ　（
ｐＨ７，２）に分散させて抗体感作固体微粒子の分散液
を得た。

１−３．乾燥試薬の調製 上述の１−２項の操作で得た抗体感作固体微粒子の分散
液を液体窒素中で凍結減圧乾燥して、乾燥試薬を得た。

１−４．再分散性の評価 上述の１−３項の操作で得た乾燥試薬の２，０ｍｇをガ
ラスセル内に入れ、これにＰＢＳを１ｍＩ２加え、出力
２５Ｗ（２０ｋＨｚ）で３０秒間超音波攪拌を行い、Ｐ
ＢＳ中に抗体感作固体微粒子を再分散させて、分散液と
しての測定用試薬を調製した。

得られた測定用試薬中の抗体感作固体微粒子の再分散性
をフローサイトメーターで測定し、単分散度（Ｍ％）を
算出した。

なお、単分散度（Ｍ％）は次式より算出した。

その結果を表１に示す。

１−５　抗原の定量 標準ＣＲＰ血清（医学生物学研究所）の所定の濃度シリ
ーズを調製し、各濃度サンプル（０，５ｍ℃）と、上述
の操作で乾燥試薬を再分散させて得た測定用試薬（０，
５ｍｇ）とを個々に３７℃で反応させ、抗原−抗体反応
による凝集状態を６３３ｎｍの光の照射における吸光度
として測定した。その結果、６μｇ　／　ｍ　２以上の
ＣＲＰ濃度において、ＣＲＰの定量を行なった。

実施例２ 実施例１の１−１項で得たスチレン／アクリルアミド共
重合体微粒子の分散液（固形分２０重■％）の５ｍｆｆ
に、１０％次亜塩素酸ナトリウム水溶液（５ｍｆｆ）及
び１０％水酸化ナトリウム溶液（１０ｍｆｆ）を加え１
０℃で６時間反応させて、固体微粒子表面のホフマン反
応による処理を行い、変性ポリスチレン微粒子を得た。

反応後、反応液を塩酸で中和し、蒸留水で４回遠心分離
による洗浄を行い、固形分１０重量％の変性ポリスチレ
ン微粒子の分散液を得た。得られた分散液中に含まれる
変性ポリスチレン微粒子のアミノ基及びカルボキシル基
の表面密度を実施例１の１−１項と同様にして測定した
結果、アミノ基の表面密度は３．２ｕｎｉｔ／　ｎｍ２
、カルボキシル基の表面密度は０．２ｕｎｉｔ／　ｎｍ
２であった。

この変性ポリスチレン微粒子の分散液を用い、実施例１
の１−２〜１−５項と同様にして、抗体（ＣＲＰ）の固
定化、乾燥試薬の調製、ＰＢＳへの再分散及びＣＲＰの
定量を行った。

再分散の際に実施例１の１−４項と同様にして算出した
単分散度（Ｍ％）の結果を表１に示す。

なお、本実施例の測定用試薬（分散液）では、６μｇ／
ｍ℃以上の濃度においてＣＲＰの定量を行なった。

実施例３ 実施例２で得た変性ポリスチレン微粒子分散液の０．５
ｍｎにＮ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８０）の５ｍｊ２
、ＣＲＰ抗体溶液（１０ｍｇ／ｍ℃）の０．５ｍ℃を加
え、室温で３時間振盪し、抗体感作固体微粒子を得た。

得られた抗体感作固体微粒子を遠心分離で回収し、更に
Ｎ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄後、ＰＢ
Ｓ　（ｐＨ７，２）に分散させて抗体感作固体微粒子の
分散液を得た。

この分散液を用い実施例１の１−３〜１−５項と同様に
して、乾燥試薬の調製、ＰＢＳへの再分散及びＣＲＰの
定量を行った。

再分散の際に実施例１の１−４項と同様にして算出した
単分散度（Ｍ％）の結果を表１に示す。

なお、本実施例の測定用試薬（分散液）液では、６μｇ
／ｍβ以上の濃度においてＣＲＰの定量を行なった。

実施例４ 抗ヒトミーフェトプロティン（ウマ）　　（ＡＦＰ）血
清（ミトリ＋字製）からプロティンＡを固定したセファ
ロース（ファルマシア製）を用いたカラムクロマトグラ
フィーによりＩｇＧ画分を分画し、これを○　１Ｍリン
酸塩緩衝液（ｐＨ７，２）で１０ｍｇ／ｍｊ２の濃度に
希釈し、ＩｇＧ画分抗体溶液を調製した。

実施例１の１−１項で得た変性ポリスチレン微粒子の分
散液（固形分１０重量％）の０．５ｍ℃に、１０％のグ
ルタルアルデヒドを含む０．０５Ｍホウ酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ８，０）を５ｍ℃を加え０℃で１０分間振盪
した。

振盪終了後、Ｎ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８０）で遠
心による洗浄を３回行い、固体粒子を回収した。回収し
た固体粒子に先に調製した抗体溶液の１ｍｎ及びＮ／＋
５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８，０）の４ｒ＋１２を加え、
室温で３時間振盪し、抗体感作固体微粒子を得た。

得られた抗体感作固体微粒子を遠心分離で回収し、Ｎ／
１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８０）で洗浄した後、ＰＢＳ
に分散させて分散液を得た。

この分散液を用い、実施例１の１−３〜１−４項と同様
にして、乾燥試薬の調製、ＰＢＳへの再分散を行った。

再分散の際に実施例１の１−４項と同様にして算出した
単分散度（Ｍ％）の結果を表１に示す。

更に、標準ＣＲＰ血清の代わりに、標準ＡＦＰ血清（協
和油化化学製）を用いて、実施例１の１５項と同様にし
て、ＡＦＰの定量を行った。

なお、本実施例の測定用試薬（分散液）液では、２μｇ
　／　ｍ　ｆ２以上の濃度においてＡＦＰの定量を行な
った。

比較例 粒径０７２１μｍのポリスチレンラテックス（日本合成
ゴム製）の蒸留水分散液（固形分１０％）の０５ｍＩ２
に、Ｎ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８０）の５ｍＡ及び
ＣＲＰ抗体溶液（１０ｍｇ／ｍ℃）を加え、室温で３時
間振盪し、抗体感作固体微粒子を得た。

得られた抗体感作固体微粒子を遠心分離で回収し、更に
Ｎ／１５リン酸塩緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄後、１％
濃度で牛血清アルブミンを含むＰＢＳ　（ｐＨ７，２）
に分散させて抗体感作固体微粒子の分散液を得た。

この分散液を用い実施例１の１−３〜１−５項と同様に
して、乾燥試薬の調製、ＰＢＳへの再分散及びＣＲＰの
定量を行った。

再分散の際に実施例１の１−４項と同様にして算出した
単分散度（Ｍ％）の結果を表１に示す。

なお、本比較例の測定用試薬（分散液）液では、１５μ
ｇ／ｍでの濃度においてＣＲＰの定量を行なった。

［発明の効果コ 本発明の検出試薬に用いた担体としてのアミノ基とカル
ボキシル基を有する変性ポリスチレン微粒子は、水を主
体とする液媒体への分散性に優れ、分散液としＬＡＩＡ
用の検出試薬として用いることで、定性分析のみならず
、光学的手法を用いた定量分析を行うことができる。

また、本発明の検出試薬は、乾燥品としての保存安定性
に優れるばかりでなく、再分散性においても優れており
、再分散して調製した分散液は、ＬＡＩＡ用の検出試薬
として、定性分析及び光学的手法を用いた定量分析に再
現性良い結果を与久るものとして好適に用いることがで
きる。

また、乾燥品の再分散による分散液の調製に当たっては
、特別に強度な攪拌条件による攪拌を行う必要がなく、
検出感度の低下を招くことなく短時間で測定用試薬（分
散液）の調製が行え、測定時間の短縮化が計れる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）検体中の被検出物質に対して免疫的に活性な物質を
   固定した固体微粒子を含む検出試薬において、前記固体
   微粒子がアミノ基とカルボキシル基を有する変性ポリス
   チレンであることを特徴とする検出試薬。 ２）変性ポリスチレンが、スチレンからなる成分Ａと、
   アミド基を有するモノマーからなる成分Ｂとの共重合体
   の表面に、ホフマン反応によりアミノ基及びカルボキシ
   ル基を生成させて得たものである請求項１に記載の検出
   試薬。 ３）共重合体中での成分Ａと成分Ｂのモル比が、１：０
   ．５〜１：０．００１の範囲にある請求項２に記載の検
   出試薬。 ４）成分Ｂがアクリルアミドである請求項２または３に
   記載の検出試薬。 ５）乾燥状態にある請求項１〜４のいずれかに記載の検
   出試薬。