JPH0471482A - 液体培地入りカルチヤーバツグの製造方法 - Google Patents
液体培地入りカルチヤーバツグの製造方法Info
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- JPH0471482A JPH0471482A JP18507990A JP18507990A JPH0471482A JP H0471482 A JPH0471482 A JP H0471482A JP 18507990 A JP18507990 A JP 18507990A JP 18507990 A JP18507990 A JP 18507990A JP H0471482 A JPH0471482 A JP H0471482A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
本発明は、細胞を生体外で長期間培養することができる
。液体培地入りカルチャーバッグの製造方法に関するも
のである。
。液体培地入りカルチャーバッグの製造方法に関するも
のである。
細胞を生体外で長期間培養するためにカルチャーバッグ
が用いられる。その際、液体培地をカルチャーバッグに
入れ、培養されるべき細胞をこのバッグに添加する方法
が一般に行われている。
が用いられる。その際、液体培地をカルチャーバッグに
入れ、培養されるべき細胞をこのバッグに添加する方法
が一般に行われている。
【発明が解決しようとする課１！ｊ！］カルチャーバッ
グを用いる細胞培養も盛んに行われるにつれて、最近は
液体培地の標準化が進んできた。そのため培養試験の都
度、カルチャーバッグに液体培地を封入する作業が面倒
になってきた。 本発明者は新規に液体培地入りカルチャーバッグなるも
のを提供し１本発明はその製造方法を示すものである。 【課題を解決するための手段】 本発明は、ガス透過率の大なるフィルムからなり、γ線
で滅菌したカルチャーバッグに、濾過滅菌を施した液体
培地を無菌的に充填し、その充填口を無菌的にシールし
た後、ガス透過率が小さくγ線で滅菌した２次包材で無
菌的に包装することを特徴とする液体培地入りカルチャ
ーバッグの製造方法であり、また、該製造方法であって
、γ線で滅菌した脱酸素剤とともに、２次包材で包装す
ることを要旨とする。 本発明において、カルチャーバッグの材質としては、γ
線の滅菌に耐えるもので現在一般に使用されている軟質
プラスチックを指し、ポリエチレン・ポリ塩化ビニル・
エチレンビニルアセテートコポリマー（ＥＶＡ） ・
エチレンエチルアクリレートコポリマー（ＩｉＥＡ）
・エチレンメチルメタアクリレートコポリマー（Ｅ！
ＨＭＡ）・スチレン−エチレン−ブチレン−スチレン（
ＳＥＢＳ）とポリプロピレン又はポリエチレンとのポリ
マーブレンド等を素材としたフィルムから造られたもの
である。培養にあたり。 ガス透過率の大なること、中でも酸素がカルチャーバッ
グのフィルムをできるだけ透過することが必要であるが
、この点で上記具体例は好ましいとされる。 本発明において液体培地は以下に述べるように公知の方
法により調製する。市販培地の代表例としては、１９９
培地、 ＭＥＭ、αＭＥＭ、ダルベツコＭＥＭ、浮遊培
養用ＭＥＭ、ＲＰＭ１１６４０培地、 Ｌ−１５培地、
ハム培地（Ｆ−１２）、 ウェイマウス培地ＭＢ７５
２／１等がある。培地溶解には、スターラー付きのビー
カー又はテフロン・コーティング容器、 ５ＵＳ３１６
ステンレス容器を用いることが好ましく、規定量の８０
〜９０％の蒸留水に粉末培地及び抗生物質を攪拌しなが
ら、完全に溶解させることが必要である。Ｎａ）ＩＣＯ
３の熔解後はｐＨがアルカリ性に傾くのでできるだけす
みやかに希塩酸で最終ｐＨを調製し１次いで蒸留水を加
えて規定の容量にした後濾過滅菌を行う。 本発明において２次包材としてはγ線の滅菌に耐えるも
ので、ポリプロピレン・ポリエチレンの他、ナイロン・
ポリエステル・ポリ塩化ビニリデン（ＰνＤＣ）・ポリ
塩化ビニリデンコートナイロン・ポリ塩化ビニリデンコ
ートポリエステル・ポリ塩化ヒニリデンコートポリプロ
ピレン・ポリビニルアルコール（ＰＶＡＬ）・エチレン
−ビニルアルコールコポリマー（ＥＶＡＬ）・ビニロン
・アルミ蒸着ポリエステル・シリカ（Ｓｉｎｇ）コート
ポリエステル等を素材とした合成樹脂のフィルムである
。 ２次包材はガス透過率の小さいものが良いが。 それは封入された液体培地の変質を防ぐためである。本
発明のうち、ｒｍで滅菌した脱酸素剤とともに、２次包
材で包装する場合は、上述の素材のうち比較的透過率が
大なるフィルムを２次包材に用いることができる。 本発明において、脱酸素剤としては鉄又は鉄系化合物の
粉体とハロゲン化金属とからなるものを用いることが好
ましい。鉄系化合物の例としては炭化鉄・鉄カルボニル
・酸化第１鉄・水酸化第１鉄・珪素鉄等がある。 本発明において、脱酸素剤は上記のものであるが、これ
を実際に用いるにはこの脱酸素剤を不織布・紙・布帛等
のシート状のものに洩れないように詰めて用いる。 本発明において、γ線の滅菌条件としては１通常の条件
を指し、室温において２．５Ｍｒａｄ程度の線量でよい
。
グを用いる細胞培養も盛んに行われるにつれて、最近は
液体培地の標準化が進んできた。そのため培養試験の都
度、カルチャーバッグに液体培地を封入する作業が面倒
になってきた。 本発明者は新規に液体培地入りカルチャーバッグなるも
のを提供し１本発明はその製造方法を示すものである。 【課題を解決するための手段】 本発明は、ガス透過率の大なるフィルムからなり、γ線
で滅菌したカルチャーバッグに、濾過滅菌を施した液体
培地を無菌的に充填し、その充填口を無菌的にシールし
た後、ガス透過率が小さくγ線で滅菌した２次包材で無
菌的に包装することを特徴とする液体培地入りカルチャ
ーバッグの製造方法であり、また、該製造方法であって
、γ線で滅菌した脱酸素剤とともに、２次包材で包装す
ることを要旨とする。 本発明において、カルチャーバッグの材質としては、γ
線の滅菌に耐えるもので現在一般に使用されている軟質
プラスチックを指し、ポリエチレン・ポリ塩化ビニル・
エチレンビニルアセテートコポリマー（ＥＶＡ） ・
エチレンエチルアクリレートコポリマー（ＩｉＥＡ）
・エチレンメチルメタアクリレートコポリマー（Ｅ！
ＨＭＡ）・スチレン−エチレン−ブチレン−スチレン（
ＳＥＢＳ）とポリプロピレン又はポリエチレンとのポリ
マーブレンド等を素材としたフィルムから造られたもの
である。培養にあたり。 ガス透過率の大なること、中でも酸素がカルチャーバッ
グのフィルムをできるだけ透過することが必要であるが
、この点で上記具体例は好ましいとされる。 本発明において液体培地は以下に述べるように公知の方
法により調製する。市販培地の代表例としては、１９９
培地、 ＭＥＭ、αＭＥＭ、ダルベツコＭＥＭ、浮遊培
養用ＭＥＭ、ＲＰＭ１１６４０培地、 Ｌ−１５培地、
ハム培地（Ｆ−１２）、 ウェイマウス培地ＭＢ７５
２／１等がある。培地溶解には、スターラー付きのビー
カー又はテフロン・コーティング容器、 ５ＵＳ３１６
ステンレス容器を用いることが好ましく、規定量の８０
〜９０％の蒸留水に粉末培地及び抗生物質を攪拌しなが
ら、完全に溶解させることが必要である。Ｎａ）ＩＣＯ
３の熔解後はｐＨがアルカリ性に傾くのでできるだけす
みやかに希塩酸で最終ｐＨを調製し１次いで蒸留水を加
えて規定の容量にした後濾過滅菌を行う。 本発明において２次包材としてはγ線の滅菌に耐えるも
ので、ポリプロピレン・ポリエチレンの他、ナイロン・
ポリエステル・ポリ塩化ビニリデン（ＰνＤＣ）・ポリ
塩化ビニリデンコートナイロン・ポリ塩化ビニリデンコ
ートポリエステル・ポリ塩化ヒニリデンコートポリプロ
ピレン・ポリビニルアルコール（ＰＶＡＬ）・エチレン
−ビニルアルコールコポリマー（ＥＶＡＬ）・ビニロン
・アルミ蒸着ポリエステル・シリカ（Ｓｉｎｇ）コート
ポリエステル等を素材とした合成樹脂のフィルムである
。 ２次包材はガス透過率の小さいものが良いが。 それは封入された液体培地の変質を防ぐためである。本
発明のうち、ｒｍで滅菌した脱酸素剤とともに、２次包
材で包装する場合は、上述の素材のうち比較的透過率が
大なるフィルムを２次包材に用いることができる。 本発明において、脱酸素剤としては鉄又は鉄系化合物の
粉体とハロゲン化金属とからなるものを用いることが好
ましい。鉄系化合物の例としては炭化鉄・鉄カルボニル
・酸化第１鉄・水酸化第１鉄・珪素鉄等がある。 本発明において、脱酸素剤は上記のものであるが、これ
を実際に用いるにはこの脱酸素剤を不織布・紙・布帛等
のシート状のものに洩れないように詰めて用いる。 本発明において、γ線の滅菌条件としては１通常の条件
を指し、室温において２．５Ｍｒａｄ程度の線量でよい
。
本発明は、液体培地入りカルチャーバッグを製造し、滅
菌するにあたり、該カルチャーバッグを一体にしてγ線
で滅菌するのではなく、カルチャーバッグ・液体培地・
２次包材・脱酸素剤の各々を別々に滅菌し、それらを無
菌の状態で［液体培地入りカルチャーバッグ」の製品に
仕上げるものである。従って、滅菌の難しい液体培地も
放射線の照射を受けないですむのである。 また、γ線で滅菌した脱酸素剤とともに、２次包材で包
装することにより、比較的透過率が大なるフィルムを２
次包材に用いることができる。
菌するにあたり、該カルチャーバッグを一体にしてγ線
で滅菌するのではなく、カルチャーバッグ・液体培地・
２次包材・脱酸素剤の各々を別々に滅菌し、それらを無
菌の状態で［液体培地入りカルチャーバッグ」の製品に
仕上げるものである。従って、滅菌の難しい液体培地も
放射線の照射を受けないですむのである。 また、γ線で滅菌した脱酸素剤とともに、２次包材で包
装することにより、比較的透過率が大なるフィルムを２
次包材に用いることができる。
【実施例］
以下、実施例により具体的に説明する。
カルチャーバッグに、線状低密度ポリエチレンを用い、
インフレーション法により厚さ０．１ｍｍ。 巾２３０−のチューブ状フィルムを得た。 このフィルムのガス透過率はＡＳＴＭ Ｄ−３９８５に
準じた測定で、 ５，２８０ｃｃ／ｍ２・ａｔｍ ・
２４時間のものであった。 このチューブ状フィルムを長さ３５０ｍｍに切断し充填
口・混注口・排出口を付は熱溶着によりカルチャーバッ
グを作成した。 これに液体培地のハムＦ−１２培地にツスイ）を使用し
た。この使用にあたっては、この１０．６ｇを蒸留水に
溶解し、全量を１ 、０００＋ｎ ＋とし、炭酸水素ナ
トリウムを１．２〜２．０ｇ加え、５％炭酸ガス下、３
７゛ＣでｐＨを７．２に調製した。 ２次包材として、厚さ７０μで、ポリエチレンが表面に
あり、エチレン−ビニルアルコールコポリマー（ＥＶＡ
Ｌ）を内層とする３層構造のフィルムを使用した。 その２次包材のガス透過率はＡＳＴＭ Ｄ−３９８５に
準じた測定で、 １．９ｃｃ／ｍ”・ａｔｍ ・２４
時間のものであった。 上記カルチャーバッグに培地を充填し、２次包装後４〜
６°Ｃで３力月にわたり保存した。そのときのｐＨは７
．４であり、かつ、無菌テストは陰性であった。 【発明の効果】 本発明はＴ線による滅菌が主体であるので、オートクレ
ーブ滅菌法の場合における熱履歴の心配が不要で、耐熱
性の乏しいポリエチレン等の材料が使用でき、また、ガ
ス滅菌法における酸化エチレンやホルムアルデヒドの残
留による毒性の心配がない。 特許出願人 株式会社ニッショー
インフレーション法により厚さ０．１ｍｍ。 巾２３０−のチューブ状フィルムを得た。 このフィルムのガス透過率はＡＳＴＭ Ｄ−３９８５に
準じた測定で、 ５，２８０ｃｃ／ｍ２・ａｔｍ ・
２４時間のものであった。 このチューブ状フィルムを長さ３５０ｍｍに切断し充填
口・混注口・排出口を付は熱溶着によりカルチャーバッ
グを作成した。 これに液体培地のハムＦ−１２培地にツスイ）を使用し
た。この使用にあたっては、この１０．６ｇを蒸留水に
溶解し、全量を１ 、０００＋ｎ ＋とし、炭酸水素ナ
トリウムを１．２〜２．０ｇ加え、５％炭酸ガス下、３
７゛ＣでｐＨを７．２に調製した。 ２次包材として、厚さ７０μで、ポリエチレンが表面に
あり、エチレン−ビニルアルコールコポリマー（ＥＶＡ
Ｌ）を内層とする３層構造のフィルムを使用した。 その２次包材のガス透過率はＡＳＴＭ Ｄ−３９８５に
準じた測定で、 １．９ｃｃ／ｍ”・ａｔｍ ・２４
時間のものであった。 上記カルチャーバッグに培地を充填し、２次包装後４〜
６°Ｃで３力月にわたり保存した。そのときのｐＨは７
．４であり、かつ、無菌テストは陰性であった。 【発明の効果】 本発明はＴ線による滅菌が主体であるので、オートクレ
ーブ滅菌法の場合における熱履歴の心配が不要で、耐熱
性の乏しいポリエチレン等の材料が使用でき、また、ガ
ス滅菌法における酸化エチレンやホルムアルデヒドの残
留による毒性の心配がない。 特許出願人 株式会社ニッショー
Claims (2)
- （１）ガス透過率の大なるフィルムからなり、γ線で滅
菌したカルチャーバッグに、濾過滅菌を施した液体培地
を無菌的に充填し、その充填口を無菌的にシールした後
、ガス透過率が小さくγ線で滅菌した２次包材で無菌的
に包装することを特徴とする液体培地入りカルチャーバ
ッグの製造方法。 - （２）ガス透過率の大なるフィルムからなり、γ線で滅
菌したカルチャーバッグに、濾過滅菌を施した液体培地
を無菌的に充填し、その充填口を無菌的にシールした後
、γ線で滅菌した脱酸素剤とともに、ガス透過率が小さ
くγ線で滅菌した２次包材で包装することを特徴とする
液体培地入りカルチャーバッグの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18507990A JP2854394B2 (ja) | 1990-07-12 | 1990-07-12 | 液体培地入りカルチヤーバツグの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18507990A JP2854394B2 (ja) | 1990-07-12 | 1990-07-12 | 液体培地入りカルチヤーバツグの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0471482A true JPH0471482A (ja) | 1992-03-06 |
| JP2854394B2 JP2854394B2 (ja) | 1999-02-03 |
Family
ID=16164454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18507990A Expired - Lifetime JP2854394B2 (ja) | 1990-07-12 | 1990-07-12 | 液体培地入りカルチヤーバツグの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2854394B2 (ja) |
Cited By (3)
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