JPH04507090A - 虚血性組織のリポゾームターゲッティング - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 虚血性組織のりポゾームターゲッティング本発明は、生化学及び医学の分野に関 し、特に、虚血性組織の診断及び処置におけるリボゾームの使用に関する。 虚血は、組織における血液の欠乏であり、重要な医学上の問題である。例えば、 心疾患は、罹病率及び死亡率の第一の原因であり、２つの関係する重要な関心事 である条件は、心筋虚血（血管収縮のような血液供給の障害の結果として心筋に おける組織貧血）及び心筋梗塞（心筋の局所的化をもたらす虚血条件及び動脈流 の障害によりもたらされた虚血条件）である。虚血組織の処置において進歩かな される一方、多くの改良の余地か存在している。 有力な抗虚血剤のひとつの問題点は、虚血組織以外に及ぼすこれらの薬剤の作用 である。例えば、多くの有力な冠血管拡張剤は、心筋虚血の間効果が無い。とい うのは、それは非虚血冠血管だけでなく、虚血冠血管も拡張するためであり、虚 血域から血流を流出させるからである。又、多くの抗虚血化合物（例えば、カル シウム流入阻害剤）は、虚血域に直接ターゲットされればより効果かあるであろ う。 従って、心筋ベッドに化合物を選択的に供給する薬剤供給システム、即ち、非虚 血組織よりもむしろ梗塞心組縁に活性薬剤を好ましく供給する薬剤供給システム か切に望まれていた。この側面において、用語、「虚血性」又は「虚血」は、外 傷性（ｔｒａｕｍａｔｉｃ）組織貧血の状態の組織で、梗塞化組織を含むものを 言う。 リン脂質ベシクル（ｖｅｓｉｃｌｅ）　（リボゾーム）は、選択された組織に集 中し、この組織特異性由来の活性薬剤の供給における更なる強化を持たらすであ ろうという希望から追跡されてきた。よって、研究者は、リボゾームを活性薬剤 の心筋組織への供給に使用しようと企てた。例えば、キャリド及びザレット（Ｃ ａｒｉｄｅ　ａｎｄ　Ｚａｒｅｔ）による刊行物、サイエンス１９８，７３５− ７３８　（１９７７）において、直径約１，０００ｎｍの純陽性、陰性か又は中 性電荷のいずれかを存する多層（ｍｕｌｔｉａｍｅｌｌａｒ）リボゾームを、塞 栓性閉脚内壁心筋梗塞（ｅｍｂｏｌｉｃ　ｃｌｏｓｅｄ−ｃｈｅｓｔ　１ｎｔｅ ｒｉｏｒ　ｗａｌｌ　ｍｙｏｃａｒｄｉｌ　１ｎｆａｒｃｔｉｏｎ）を誘導した 後のホ乳動物へ投与している。リボゾームは、１１＋″Ｔｃ−ＤＴＰＡ（ジエチ レントリアミンペンタ酢酸）でラベルされていた。この刊行物は、梗塞心筋組織 における陽及び中性ＭＬＶの集積を報告すると同時に、””Ｔｃ−ＤＴＰＡか、 虚血心筋中に集積（１時間の循環時間後の通常の心筋の１０倍）するのが示され 、更に、この文献で観察された梗塞化心筋での−”Ｔｃ−ＤＴＰＡの集積か、循 環中のベシクル成分（ｃｏｎｔｅｎｔｓ）の放出：その後の損傷を受けた心筋中 のフリーな３９”Ｔｃ−ＤＴＰＡの集積にまことよるものであることかデータで 示されている。 ミュラー（Ｍｕｅｌｌｅｒ）等の刊行物、サーキュレーションリサーチ（Ｃｉｒ ｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｒｅ５ｅａｒｅｈ）　４９　、　４０３−４１５（１９８１ ）は、４００から７００ナノメーターの大きさて、単層（ｕｎｉｌａｍｅｌｌａ ｒ）リボゾームに保持された蛋白マーカー（”’Ｉ−アルブミン）の使用を報告 している。その結果、正常の心筋と比較して虚血心筋での陽リボゾームの僅かな 集積（虚血／正常＝１．３８：１）が見られ、中性リボゾームについては、虚血 心筋でのネットの集積は見られなかった（比率０．８１：１）。 カルジオパスキュラーリサーチ（ＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＲｅｓｅａｒｃ ｈ）　１６．　５１６−５２３　（１９８２）コール（Ｃａｆｅ）等は、心筋梗 塞の初期において心筋リボゾームの取り込みを開示しており、７５から１２５ｎ ｍリボゾームか虚血性心筋による選択的取り込みの証拠を示さなかったと結論づ けている。この著者は、リボゾームは、心筋梗塞での薬剤供給の手段としては限 定した能力を有していることを示唆している。抗体を又、このようなベシクルを 組織に優先的に供給しようとして、リボゾームに共有結合させたが、結果は、多 くの例で成功からははととおいものであった。 発明の要点 本発明によれば、患者の血流中に２００ｎｍ未膚の大きさの（好ましくは、単一 層ベシクル）リボゾームを導入することを特徴とし、好ましくは化学的に純粋な 合成ホスホリビッドを含むことにより特徴つけられ、最も好ましくは、少くとも １６炭素長の脂肪族側鎖を存し、且つ治療、診断薬の量をリボゾームに結合した 抗体の実質的不存在下において虚血組織に選択的に供給（即ち、ターゲット）す るのに十分な量の治療、診断薬を含む、患者の虚血組織をターゲットする方法を 提供する。表現、［化学的に純粋なホスホリビッド」とは、存寄なデタージエン ト部（ｄｅｌｅｔｅｒｉｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ　ｍｏｉｅｔｉｅｓ）及び そこから形成される小車一層ベシクル（ＳＵＶ）の擬集をもたらす不純物を実質 的に含まないホスホリピットを意味し、９７％以上純粋のものを言う。 好ましくは、ＳＵＶは、主として、直径５０から１１００ｎを有し、電荷は実質 的に中性であり、側鎖長１６から１８炭素原子を有するホスホリビッドを含んて いる。更に好ましくは、このリボゾームはジステアロイルホスファチジルコリン から製造され、ベシクル安定剤としてコレステロール（最も好ましくは、全すピ ッドの１０から５０％の量）を含む。 ターゲットされた虚血組織は、好ましくは、可逆的な梗塞化心筋組織のような虚 血性心筋組織であり、この方法か、活性薬剤をそこにターゲットするのに有効で あることを示した。 急性心筋虚血組織へのりボゾームのターゲットに関するいかなる理論にも拘束さ れるわけてはないか、リボゾームは、増加する透過性（増加する孔の大きさ）を 有するキャピラリーを通過し、選択的に非虚血域に比較して、虚血心筋のような 虚血組織に浸透することかできるように思われる。 種々の診断薬をこのリボゾーム中にカプセル化することかでき、本発明の方法に 使用しうる。以下の実施例において、インジウム（”’Ｉｎ）の放射活性アイソ トープをリボゾーム中に負荷し、急性心筋虚血のガンアイメージング（ｇａｍｍ ａ　ｉｍａｇｉｎｇ）をさせる。更に、適当なりボゾーマルＮＭＲコントラスト 剤：例えば、米国特許第４．７２８，５７５に記述されている、を磁気共鳴法に より心筋虚血をイメージするのに投与できる。 治療剤に関して、スーパーオキシド又は酸素ラジカルスベーシ−（例えば、スー パーオキシドジスミューターゼ）の分割を触媒する酵素を適当なベシクル中に含 めることかでき、カタラーゼ又はグルコースオキシダーゼ、又はニカルジピンの ようなジヒドロ−ピリジン化合物のような治療剤を含めることかできる。 本発明に使用できる特別の診断、治療剤は、本発明の開示をフォローすれば当業 者に明白であり、本発明の部分を構成するものではない。 説明的な実施例において、虚血組織を抽写（ｄｅｌｉｎｅａｔｅ）するのに放射 線ラベル化リボゾームを使用し、本発明方法か治療又は診断薬を傷害を受けた虚 血組織に選択的に供給することができることを説明する。本開示によって、心筋 虚血の処置に関する別の診断又は治療薬の使用は当業者に明白であろう。 図面の簡単な説明 図１は、　Ｉｌｌ　ｉ　ｎ−ラベル化リボゾームのイヌでの血液クリアランスデ ータを時間とともに示す。データは、ラジオアクティビティ−（ＣＰＭ）／ｇ血 液として表わす。各点で、Ｎ＝４゜値は、平均±Ｓ、Ｄとして表わす。 本発明で使用するりボゾームは、２００１ｍ未満の大きさの小さな単一層リボゾ ームであり、好ましくは、直径５０からｌｏｏｎｍを有する。上記したように、 ベシクルは、好ましくは、飽和側鎖を有する化学的に純粋なホスホリピットを特 徴とし、最も好ましくは、ジステアロイルホスファチジルコリンのようなホスホ リピ・ソドから製造する。コレステロールを、有利には本開示に使用されるベシ クルの安定性を増すためにリボゾーム中に含める。 多種の治療又は診断薬を当業者に明らかな方法によりリボゾームの内部水性空間 又はリピツド複層中に含める。 下記の実施例において、ベシクル中にラジオラベルする外部カチオンを負荷する のにキレート化合物及びイオノホール（１ｏｎｏｐｈｏｒｅ）を用いる。好まし いイオノホールはＡ２３１８７であるか、他の好ましいイオノホールは、ラサロ シドＡ　（Ｘ−５３７Ａ）及びラサロシドの５−ブロモ誘導体のようなポリエー テル、ペアウヘルシンのような環状デブシペプチド、及びハルツミリンのような 環状ペプチドである。キレート剤は、好ましは、ニトリロ酢酸（ＮＴＡ）である か、他のキレート剤も又使用しうる。 リボゾームは、ホスホリビッド及びコレステロールをクロロホルムのような適当 な存機溶媒中に溶解し、溶媒を蒸発してリビッドフィルムを形成することによっ て製造する。下記の実施例のように、もしイオノホールを診断又は治療薬剤をリ ボゾーム中に負荷するのに使用するならば、この化合物を蒸発前にリピッド溶液 中に添加することができる。 乾燥したリビッドフィルムをその後適当な水性相中で再加水する。例えば、ホス フェートバッファー化食塩水又は他の物理的に適当な溶液である。水可溶薬剤又 は治療剤をハイドレーション溶液中に含めることができ、も負荷をリモートする 必要があるなら、上記したキレート剤のような負荷剤をハイドレーション溶液に 添加して、リボゾームの内部水性空間中にカプセル化することかできる。 ハイドレーション溶液の添加の際、種々の大きさのりボゾームか瞬時に形成し、 水性相の一部をカプセル化する。したかって、リボゾーム及び懸濁水性溶液をソ ニケーションのようなせん断力にさらし、又は米国特許４．７５３，７８８号に 述へられた方法に従ってホモジエナイサーにより操作して、特定した大きさ内の ベシクルを作る。リボゾームをその後プロセスして懸濁液から、キレート剤又は 未カプセル化薬剤のような望ましくない化合物を、ゲルクロマトグラフィー又は ウルトラフィルトレージョンのような方法により除去する。必要ならば、生成物 をその後濃縮して過剰のバッファー溶液を除去する。リボゾームは０．２ミクロ ンより大きさか小さいので、これらをその後殺菌した０、　２２　ミクロンフィ ルターを通過させて、他の懸濁液中に存在する微生物を除去する。 その後、リボゾームを殺菌したガラス容器中に充填し、殺菌エラストマー栓で栓 をする。 実施例１ ジステアロイルホスファチジルコリン及びコレステロール２：１モル比の有機溶 液を作り、溶液を蒸発させて、リビッドフィルを形成し、リビッドを更に真空上 乾燥させてＳＵＶを調製した。　１ｌｌｉｎをベシクル中へ負荷させるために２ 価のイオノホール（Ａ２３１８７）を、蒸発前にリピッド溶液に添加した。典型 的な調製においては、２０μモルジステアロイルホスファチジルコリン；１０μ モルコレステロール及び０，０４μモルＡ　２３１８７をクロロホルム中に溶解 し、乾燥して薄層としく６０℃、窒素流下）、その後真空下−晩乾燥した。 乾燥リビッドフィルムをその後、適当な水性相、例えば、ホスフェート−バッフ ァー化食塩水（０，９％ＮａＣｌ及び５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７，４）で 、Ｉｌｌ　■ｎ２＋を負荷するキレート剤を含むもので再加水し、せん断力を与 えてＳＵＶを形成した。典型的な調製においては、乾燥リビットを、キレート剤 として１ｍＭ二ｌ・り口ｌ・り酢酸（ＮＴＡ）を含むホスフェート−バッファー 化食塩水で再加水し、混合物を約６５°Ｃでサスペンションか透明になる迄（約 ５分）ソニケートし、その後４００ｇで遠心分離した。未カプセル化ＮＴＡをセ ファデックスＧ−５０カラムを通して混合物を濾過してベシクルから除去した。 リボゾームをＮｉｃｏｍｐモデル２７０サブミクロン粒子サイズ分析計により測 定し、平均直径１１００ｎ未満と決定した。 実施例２ ジステアロイルホスファチジルコリンとコレステロール２：１モル比況合物をク ロロホルム中に、イオノホールＡ２３１８７と共に溶解した。これらの化合物を 完全に溶解するまで十分に混合した。溶液をその後ロータリーエバポレーター中 に置いて、クロロホルムを除去し、エバポレーターフラスコの表面上にリビッド フィルムをデポジットした。別法として、他の公知の乾燥方法を使用して、リピ ッドフィルム又はパウダーを形成することができるであろう。 キレート物質（ＮＴＡ）をその後ホスフェートバッファー化食塩水中で混合し、 得られた溶液をリピッドフィルムに添加した。かくして形成されたりポゾームを 米国特許第４．７５３．７８８号教示の方法に従かいホモジエナイザーにより処 理して平均直径１００ナノメーターを越えないベシクルを製造した。リボゾーム をその後ゲルクロマトグラフィーカラムを通過させて、リボゾームの外側の懸濁 液中に残っているキレート剤を除去した。生成物をその後、中空ファイバーコン セントレータ−を通して濃縮して過剰のバッファーを除去し、リボゾームサスペ ンションを濃縮した。 その後、リボゾームを０．２２ミクロン殺菌フィルターを通して濾過し、クラス １００フードの殺菌ガラス容器に移し、殺菌エラストマー栓で栓をした。このプ ロセスを通じて、適当なＱＡ１０方法を殺菌操作条件を確保するために用いた。 ベシクル負荷 上記したように、ベシクルをリビッドフィルム形成の間、アンフィフィリック剤 で、加水の闇水性−可溶剤又は、他の公知の負荷手段によって、負荷することか できる。リボゾームの心筋組織へのターゲットは、ラジオアクティブな薬剤の供 給によって最も良く説明されるので、ガンマイメージング剤、　１１１インジウ ム３＋を使用の直前リボゾーム中に負荷した。 実施例３ 必要な活性に応じて、１０４ｍＭクエン酸ナトリウム（ｐＨ７，４）中の５００ μｌのベシクル、３５μＩの３．４μＭの［ｎＣＩｘ及びｌ−５０μｌの目１） 、％＋から成るインキュベーションミクスチャーを用いて、負荷を実行した。　 １１１インジウム１添加の２倍に等しいＰＢＳの容量をインキュベーションミク スチャー中に含めた。インキュベーション時間及び温度は、モーフ（Ｍａｕｋ） 等、アナリチ力ルバイオケミストリ−９４，３０２−３０７（１，９７９）のよ うな刊行された手法に従って選択することができる。一般的には、６０から８０ ’Ｃ，１５から６０分間のインキュベーションにより負荷は、達成される。イン キュベーションは、サンプルを冷却し、その後１０ｍＭ　ＥＤＴＡ　（ＰＢＳ中 ）を添加して停止する。添加した１目インジウムの９０％まで、事前に形成され たりボゾーム中に、本方法により含めることがで、このリボゾームは、３００μ Ｃｉ／ｍｇリビッドまでの特異的活性実施例２の方法で製造したバイアルは、そ れぞれ４７１ＩＩＩのりボゾームサスペンジョン（２５ｍｇリボゾーム／ｍｌ） 及び主として５０から１１００ｎの直径を有する小さな単一層リボゾームを含ん でいた。これらのバイアル中のりボゾームを下記のプロセスに従って負荷した。 ０．２ｍｌの０．１Ｍクエン酸ナトリウム注入用を各バイアルに添加し、充十に 混合した。ラジオファーマシュティカル投与を計算する標準ラジオファーマシュ ーティカル手法に従って、注入時処方した投与量の１１１１ｎ３＋を得るのに十 分の１１１インジウムクロリド溶液の量をそれから添加した。この混合物をその 後８０°Ｃで３０分間インキュベートし、ひき続き室温まで冷却した。 ０、１　ｍｌの０．１　Ｍナトリウムニブテート注入用をその後添加してリボゾ ームか過剰のｌ１ｌｉｎをキレートにより負荷するのを止めた。このプロセスの 間、ラジオアクティブ負荷効率をリボゾーム負荷法を停止するのに先立ち、０、 ５　ｍｌのりボゾーム溶液を引き抜き、この溶液を０．５　ｇＣｈｅｌｅｘｌ　 ００を含む１．５　ｍｌ遠沈バイアルに移した。遠沈バイアルの内容物を室温で ５分間、時々攪拌してインキュベートし、遠沈バイアルの全ラジオアクティビテ ィをドーズキャリブレータ−を用いて決定した。０．５　ｍｌの０．１ｍ注入用 クエン酸ナトリウムを遠沈バイアルに添加し、攪拌した。バイアルをＣｈｅｌ、 ｅｘ　ｌ　００をコンパクトするおだやかな速度て５分間遠心分離した。０．５ 　ｍｌの上澄液を適当なシリンジにより除去し、上澄液のラジオアクティビティ −を決定した。負荷効率を上澄液のラジオアクティビティ−を全ラジオアクティ ビティ−で２回除して計算し、１００倍してパーセント負荷効率を得た。全ての 場合に、負荷効率は９０％よりも大きかった。 本発明の小車一層リボゾームの抗体ターゲツティング組織の不存在下における虚 血心筋への選択的供給の例を実施例２及び４の方法に従って製造したラベル化リ ボゾームの使用により説明する。リボゾームか動物に投与され該組織にターゲッ トするのが分かった。 使用した全ての動物は、容性の雑種犬（＋６−２０ｋｇ。 Ｎ＝４）であった。手術前に３０　ｍｇ／　ｋｇナトリウムベンドパルビタール を用いて性腺注射により麻酔した。ポリエチレンカテーテルを血圧測定及び心拍 数、血液サンプリング及びリボゾーム注入用に大腿動脈及び静脈に挿入した。気 管にカニユーレを挿入し、動物を室内空気を用いるハーバ−ドレスビレ−ターに より人工呼吸した。 ニーカブニア（ｅｕ　ｃａｐｎｉａ）を維持し、ゴダートースタタムカブノグラ フによりモニターした。左の開胸術を第５肋間で施こし、部分ペリカルディオド ミーにより心臓を現わにし、ベリカルディアルクラドルを形成した。左前部下行 冠状動脈（ＬＡＤ）の約１ｃｍを単離してその第１大分技の末端とし、シルク結 紮糸を血管周囲にゆるく置いた。 大動脈圧及び心拍数をステータム（Ｓｔａｔｈａｍ）　Ｐ　２３ＡＡトランスデ ユーサ−を用いて測定し、ベックマンＲ−４１ルコーダー上に記録した。大腿動 脈カテーテルから得た血液サンプルで、血液ガス及びｐＨを電気計測的に分析し た（ラジオメーターＢＭＳ　３血液ガスアナライザー）。この時、実施例２及び ３に従って製造した６ｍｇ／ｋｇのＩＩＩ　ｌ　ｎラベル化リボゾームをｉ、■ 注射した。 動物へのりボゾームの注射後、動脈血を１．　２．　３．　４゜５．１０分及び １．２，３，４，５．６時間注射後サンプルした。そして血液ラジオアクティビ ティ−を後で決定した。リボゾーム注射の１０分後、ＬＡＤをサージ力ルシルク スネア（ｓｕｒ　ｇｉｃａｌ　５ｉｌｋ　５ｎａｒｅ）により閉塞し、この閉塞 を２時間継続した。この時、閉塞を解き、再潅流を４時間継続せしめた。 実験の終りに、血液ガス及び血液動態的変数を再び決定し、その後心臓を除去し た。大動脈を食塩水で１００ｍｍ　Ｈｇの圧力で潅流して、冠血管をクリアにし た。 左ベントキュラーフリーウオール（ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｆｒｅｅｗａｌｌ 　）をその後虚血域から６つの小片に、そして非虚血域から６つの小片に切断し た。これらの小片をその後サブオブロ力ルディアル部分とサブエンドカルディア ル部に分けた。肝臓及び大腿薄部を採取した。ラジオアクティビティ−をその後 血液及び組織の両方でヒユーレットパラカードガンマカウンターを用いて決定し た。 全てのデータをペアドＴ−テストを閉いて分析した。 組織及び血液のクリアランスデータは、組織又は血液のダラム当りカウント７分 （ＣＰＭ）ラジオアクティビティ−として表わされる。全てのデータは、平均± Ｓ、　Ｄとして表わす。 血液動態データを表１に示す。全ての値はイヌの正常範囲であった。実験中これ らの変数に対する相違は無かった。実験中に、血液ガスにおける変化は見られな かった。 リボゾームに対する血液クリアランスデータを図１に示す。迅速な初期クリアラ ンス、引き続きゆっくりした相か観察される。データはＣＰＭラジオアクティヒ ティ（ＣＰＭ）／ｇ血液として表わされる。リボゾームの半分以上か、実験の最 後には血液からクリアしたことか明白である。 心筋組織のりホゾ−ムクリアランスのデータを表２に示す。データは、ＣＰＭ／ ｇ組織として表わす。全ての動物の虚血域はその対となった非虚血域と比較して よりラジオアクティビティ−を含んでいた。その違いは、５−１０倍であった。 虚血域内で、サブエンドカルシウムはサブエビカルシウムに含まれたラジオアク ティビティーの２倍を含んでおり、この相違は大きかった。肝臓は、リボゾーム を積極的にクリアし、ＣＰＭ／ｇが１２．３４×１０４±５．４９　Ｘ　１０’ 　ＰＭ／ｇでクリアした。骨格筋は、心臓の非虚血域と類似の量、０．１ｌＸ１ ０’±０．０１ＸＩ　Ｏ’　ＣＰＭ／ｇをクリアした。 動物：１６−２０ｋｇイヌ−４研究 平均全リピッド投与量：　６　ｍｇ／ｋｇｘ　ｌ　８　ｋｇ＝　１０８　ｍｇリ ビッド 平均全ラジオアクティビティ−（注射時の平均血液レベルから計算）　＋　１３ ００　ｘ　ｌ　Ｏ’　ｃｐｍ平均生体分布６時間：ｃｐｍ　／ｇｍ（Ｘ　Ｉ　Ｏ ’　）虚血サブエンドカルシウム　２，２±１．１虚血サブエビカルシウム　１ ．６±０．９非虚血サブエンドカルシウム　０．２６±０．１０非虚血サブエビ カルシウム　ｏ、２７±０．１４血液　２．０±０．５ 骨格筋　０ｏ１１±０，０１ 肝臓　１２．３±５．５ 心筋虚血及び梗塞は、とりわけキャピラリー透過性の増加により特徴づけられる 。この増加した透過性により、供給ビヒクルとして適当な大きさのりボゾームを 用いて、虚血域に薬剤を供給することかできる。本研究において、虚血域のラジ オアクティビイティーの局所化（そして恐らくリボゾームの）は、非虚血心筋と 比較して５−１０倍大きかった。特別の理論に拘束されるつもりはないが、リボ ゾームは増加したキャピラリー透過性により虚血域に局所化されたものと思われ る。興味深いことに、虚血サブエンドカルシウムは、虚血サブエビカルシウムと 比較して、よりリボゾームを局所化する傾向かあった。これは、サブエンドカル シウムか通常、虚血中、より危険であるという事実を反映しているかもしれない 。非虚血のサブエビ力ルジアルーサブエンド力ルジアルのりボゾーム局所化にお ける相違は、大きな相違ではなかった。 リボゾームの高い肝臓クリアランスは、この臓器か血液生成粒子除去の重要部位 であることから、驚（に値しない。これは又Ｉｌｌ　ｌ　ｎがリボゾームに結合 していたことを示す。というのは、フリーである　Ｉｌｌ　ｌ　ｎは、恐らく肝 臓によりクリアされなかったであろうからである。推定のラベル効率は７０−８ ０％てあった。非虚血心筋及び骨格筋は、比較的低いリボゾーム局所化であった 。 上記記述から、約２００ナノメーター、好ましくは６０から）００ｎｍの大きさ のりボゾームか、診断又は治療剤のような活性薬剤を虚血心筋域に、選択的にタ ーゲットし、特に、通常リスクのより大きい虚血サブエンドカルシウムにリボゾ ームを選択的に局所化させ、最も虚血の厳しい域に薬剤を供給することを助ける ことか明らＬＡＤ結紮及び再潅流の前後リボゾーム処置動物の血液動態データ 閉塞前　閉塞及び再潅流の後 全値とも平均±Ｓ、Ｄ　（Ｎ＝４） 表　２ 虚血及びＪ胤罎餅１：、、動中の”’Ｉｎラベル化リボゾームの局所化（ＣＰＭ ／ｇ　）　士　士　士　士 ０．９２　１．１４　０．１４　０．１０全値は、平均±Ｓ、Ｄ、（Ｎ＝４） °　その各サブエピカルカルシウム域の値に有意差（Ｐｏ、０５） ３８　その各虚血域の値に有意差（Ｐｏ、０５）（ＣＰＭ／ｌ血液）ｘ１０５ 虚血性組織のりボゾームターゲッティングベスター、　インコーポレイテッド ４−代理人 ６−補正により増加する請求項の数 ７、補正の対象 明細書及び請求の範囲翻訳文 ８−補正の内容　別紙のとおり 明細書及び請求の範囲翻訳文の浄書（内容に変更なし）手続補正書（方式） １、事件の表示　団 ２、発明の名称 虚血性組織のりボゾームターゲッティング氏名（名称） ベスター、　インコーポレイテッド ４−代理人 ６−ネ甫正乙こより増力口する宮野求項の数７、補正の対象 図面の翻訳文 図面の翻訳文の浄書（内容に変更なし）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．２００ナノメーター未満の大きさの単一層リポゾームの量を導入することを 含み、 供給を有効とするためリポゾームに結合した抗体の実質的な不存在下、治療又は 診断薬の虚血組織に選択的に供給するのに十分な量を含むことを特徴とする、患 者の可逆的虚血組織をターゲットする方法。 ２，虚血組織が、心筋組織であり、薬剤が、非虚血心筋よりもむしろ虚血組織に 選択的に供給される請求項１の方法。 ３．リポゾームが、約５０から約１００ナノメーターの大きさである請求項１の 方法。 ４．リポゾームが、約５０から約１００ナノメーターの大きさである請求項２の 方法。 ５．リポゾームが、化学的に純粋な合成ホスホリピッドからなることを特徴とす る請求項１の方法。 ６．リポゾームが、化学的に純粋な合成ホスホリピッドから成ることを特徴とす る請求項２の方法。 ７．リポゾームが、化学的に純粋な合成ホスホリピッドから成ることを特徴とす る請求項３の方法。 ８．リポゾームが、化学的に純粋な合成ホスホリピッドから成ることを特徴とす る請求項４の方法。 ９．化学的に純粋な合成ホスホリピッドが、少くとも１６炭素長の脂肪族側鎖を 有する請求項５の方法。 １０．化学的に純粋な合成ホスホリピッドが、少くとも１６炭素長の脂肪族側鎖 を有する請求項６の方法。 １１．化学的に純粋な合成ホスホリピッドが、少くとも１６炭素長の脂肪族側鎖 を有する請求項７の方法。 １２．化学的に純粋な合成ホスホリピッドが、少くとも１６炭素長の脂肪族側鎖 を有する請求項８の方法。 １３．患者の可逆的虚血組織に治療又は診断薬剤をターゲットする組成物を製造 するに際し、該薬剤を含み、リポゾームに結合した抗体の実質的不存在である、 ２００ナメーター未満の大きさの単一層リポゾームの使用。 １４．リポゾームが、患者の血流中に導入された時、虚血組織に該薬剤の量を選 択的に供給するのに十分な量である請求項１３の使用。 １５．虚血組織が、心筋組織であり、薬剤が、非虚血心筋よりもむしろ虚血組織 に選択的に供給される請求項１３又は１４の使用。 １６．リポゾームが、約５０から１００ナノメーターの大きさである請求項１３ ないし１５のいずれか１項記載の使用。 １７．リポゾームが、化学的に純粋な合成ホスホリピッドから成ることを特徴と する請求項１３ないし１６のいずれか１項記載の使用。 １８．化学的に純粋な合成ホスホリピッドが、少くとも１６炭素長の脂肪族側鎖 を有する請求項１７の使用。 １９．患者の可逆的虚血組織にターゲットする治療又は診断薬剤を含む、 該リポゾームに結合した抗体は実質的に存在せず、２００ナノメーター未満の大 きさの単一層リポゾームの使用。 ２０．リポゾームが、患者の血流中に導入された時、非虚血心筋よりもむしろ虚 血心筋組織に薬剤の量を選択的に供給するのに十分な量使用される請求項１９の 使用。