JPH04504729A

JPH04504729A - 医薬

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Publication number: JPH04504729A
Application number: JP3502111A
Authority: JP
Inventors: ツバロー、エツィオ; カバロ、ジョバンニ
Original assignee: ザ・ウエルカム・ファウンデーション・リミテッド
Priority date: 1989-12-28
Filing date: 1990-12-27
Publication date: 1992-08-20
Anticipated expiration: 2017-11-18
Also published as: EP0438921A1; IT1238356B; JP3345415B2; WO1991009603A1; IT8948702A1; US5281702A; US5330977A; EP0559055A1; IT8948702A0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】医　薬本発明は、ガングリオシド誘導体、治療剤としてのその使用、該誘導体の製造法、及びそれを含む薬学的コンパウンドに関する。特に、本発明は、フォスフォリバーゼＡ２の抑制剤及びスーパーオキシド生産の抑制剤として、抗増殖性及び免疫抑制剤として及び自己免疫疾患の処置に有用な、モノシアローガングリオシドのＮ−デアシル化誘導体に関する。

ガングリオシドは、１以上のシアル酸基が付いていることもあるオリゴサツカリド部分、及びスフィンゴシン（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）又はスフインガニン（ｓｐｈｌｎｇａｎｌｎｅ）鎖及び脂肪酸から誘導されたアシル基を含むセラミド（ｃｅｒａａ＋ｆｄｅ）部分を包含する天然に存在するグリコスフィンゴリピドの−のクラスである。ガングリオシドは、哺乳類の脳、ヒ臓、肝臓、腎臓及び血液、更に鶏卵にも見出だされる。

［Ｌｅｄｅｅｎ、　Ｊ、５ｕｐｒａａ＋ｏｌｅｃｕｌａｒ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅ、　８：１−１７（１１−１７（１９７５ｕｒｆａｃｅ　Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ４３７−４５３　ｆ’ｏｒ　ａ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓａ参照］スベンネルホルム［Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ；　Ｊ、ＮｅｕｒｏｃｈｅＩＢ、、１０，８１３゜１９８３］の提案した命名法によると、各種のガングリオシドは、ガングリオシドがモノ−、ジー、トリー又はテトラーシアロガングリオシドであるかどうかによってＭ、Ｄ、Ｔ又はＱの４文字の１を伴う文字Ｇで指定される。従って、例えばＧＭｌは次の構造を有するモノシアローングリオシドである。

式中、Ｒは−ＣＨ又は−Ｃ３Ｈ７である。天然源から単離されるＧＭｌは、一般に１８〜２０Ｃ−原子の炭素鎖を有し、Ｒが−ＣＨである分子及びＲが−Ｃ３Ｈ７である分子の混合物である。該分子はスフィンゴシン鎖の二重結合に関してエリスロ又はスレオ配位であり得ることが理解できるが、天然に生じる形態はエリスロ配位である。天然に生じるＧＭｌは、スフィンゴシン部分の代りに完全飽和スフィンガニン鎖を有する分子の小部分をも含む。更に、脂肪アシル鎖の長さに若干の変型があり１．主成分としてステアリン酸（Ｃ１８）から誘導されたものを有し、他の脂肪アシル成分にはミリスチン酸（Ｃ１４）アラキシン酸（Ｃ２ｏ）リグノセリン酸（Ｃ２４）から誘導されるものがある。［５ｏｎｎｉｎｏ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ　２Ｂ、１９８５　ｐ２４８；　ａｎｄＧａｚｚｏｔｔｉ　ｅｔ　ａｌ、、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｓｅｌｅｎｃｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１２：１７９−１９２．１９８４］　。

０Ｍ２は、類似の構造を有するが、上記構造のガラクトース部分（ＩＶ）が欠如し、６Ｍ３はガラクトース部分及びＮ−アセチル−ガラクトサミン（ＩＩ＋）部分の両者が欠如している。

ヘキソピラノシド部分（１）から（１■）の番号付は及びシアル酸基（Ａ）の指定は、文献［５ｉｌｌｅｒｕｄ　ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｅｈｅｍｉｓｔｒｙ１９８２、２１．１２６０−１２７１及びＫｏｅｒｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、ＢｉｏｃｈｅＩＩＩｉｓｔｒｙ１９ｇ３．２２．２８７６−２６８７］　で提案された命名で、以後も同様である。

スフィンゴリピドに密接に関連したクラスは、リソスフィンゴリピドで、リソガングリオシドともいわれ、対応ガングリオシドの脂肪アシル部分が欠如している。リソガングリオシドはプロティンキナーゼＣ活性及びホルボールジエステル結合の有力な抑制剤であり、神経学的障害に役割を有することを示唆すると報告されている［Ｈａｎｎｕｎ　ａｎｄ　Ｂｅ１ｌ。

５ｃｉｅｎｃｅ　Ｖｏ１２３５　ｐ６７０−６７４コ。文献［Ｎｅｕｅｎｈｏｆｅｒ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｂｉｏｃｈｅｉｉｓｔｒｙ、（１９８５）　２４　ｐ５２５−５３２１には、ガングリオシドＧＭ２、ＧＭｌ及びＧ　Ｄ　ｌａを脱アシル化して脂肪アシル部分及びシアル酸残基に存在するアセチル基の両者を除いた後、シアル酸の再アシル化による各種のリソガングリオシドの合成が記載されている。この文献は、完全に脱アシル化されたＧＭ　及びＧＤｌａの痕跡がＦＡＢマス分析で示されたことも指摘している。生物学的活性はこれらの化合物に帰せられていない。

シン二ノ等［５ｉｎｎｉｎｏ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＬｉｐｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ、　Ｖｏｌ　２８．１９８５　ｐ２４８］は、天然に生じる脂肪アシル部分を各種の脂肪アシル部分で置換するＧＭｌの各種誘導体の製造を記載している。これらの化合物の合成は、シアル酸部分が脱アセチル化されたＧＭｌのリソガングリオシド誘導体を介しても進行する。生物学的活性はこれらの化合物に帰せられていない。

この明細書では、シアル酸残基のみが脱アセチル化されたリソガングリオシド誘導体を、モノ−Ｎ−デアセチル−リソガングリオシド、例えばモノ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭ１と呼び、シアル酸残基及びＮ−ガラクトサミン残基の両者が脱アセチル化されたリソガングリオシドを、ジ−Ｎ−デアセチル−リソガングリオシドと呼ぶ。この明細書で用いる「Ｎ−デアセチル　リソガングリオシド」の表現は、モノ−又はジ−Ｎ−デアセチル−リソガングリオシド及びその混合物を意味する。以上の用語はこれらの化合物の製造の特定ルートを意味することを意図するものではなく、対応するリソガングリオシドＧＭ１の直接脱アセチル化で製造されたかどうかに拘らず該化合物自体が包含されることを理解すべきである。

一定のＮ−デアセチル−リソガングリオシドが各種のテストシステムで治療に有用な生物学的活性を示すことが見出された。これについては以下で詳細に説明する。

従って、本発明の第１の面は、医薬として使用するための、即ち治療用途のＮ− デアセチル−リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩を提供することである。該Ｎ−デアセチル−リソガングリオシドは、ガングリオシドＧＭ　Ｓ０Ｍ２、ＧＭ　又はＧ　Ｄ　Ｌａに対応するのが好ましい。

本発明により用いるための好ましい誘導体は、次の式（Ｉ）の化合物及びその生理学的受容性塩である。

式中、Ｒは−ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ）　ＣＨ又は−ＣＨ２ｎ　３ＣＨ（ＣＨ２）ｎＣＨ３を示し、ｎは１２又は１４であり、Ｒ１は又は水素を示し、かつ、Ｒ２は水素又はアセチルを示す。

本発明により用いるための好ましい化合物には、モノ−Ｎであり、Ｒ２がそれぞれアセチル又は水素原子である式（Ｉ）の化合物である。

Ｒ２は水素原子が好ましい。

更に好ましい化合物は、ｎが１４である式（Ｉ）の化合物、即ちＣ２ｏスフインゴシン又はスフィンガニン鎖を有するものである。特に好ましい本発明の化合物は、Ｒが−ＣＨ−ＣＨで示される残基であり、かつＲ２が水素原子である式（Ｉ）の化合物である。この化合物は以後ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇　Ｍ　Ｉ　Ｃ２０と呼ぶ。

Ｒが−ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ２）　ｎＣＨ３であることが好ましい。

ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ２ｏは新規化合物であると信じられ、それ自体が本発明の別の面を構成する。

本発明による別の新規化合物は、ｎが１２の対応する化合物である。対応するモノデアセチル　リソガングリオシドをここではそれぞれ、ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１−Ｃ１８、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ　−Ｃ及び１２０ゝモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１−０１８と呼ぶ。

Ｎ−デアセチル−リソガングリオシドの塩には、酸とで形成される塩及び塩基とで形成される塩があり、生理学的に受容性であることが好ましい。適当な酸付加塩には、塩酸、臭化水素酸、硝酸、過塩素酸、硫酸、クエン酸、酒石酸、燐酸、乳酸、安息香酸、グルタミン酸、シュウ酸、アスパラギン酸、ピルビン酸、酢酸、コハク酸、フマール酸、マレイン酸、オキサロ酢酸、イセチオン酸、ステアリン酸、フタル酸、メタンスルフォン酸、ｐ−トルエンスルフォン酸、ベンゼンスルフォン酸、ラクトビオニック酸、及びグルクロン酸から形成されるものがある。適当な塩基塩には、アルカリ金属（例えばナトリウム及びカリウム）塩及びアルカリ土類金属（例えばカルシウム）塩のような無機塩基塩、フェニルエチルベンジルアミン、ジベンジルエチレンジアミン、エタノールアミン及びジェタノールアミン塩等の有機塩基塩、及びリシン及びアルギニン塩等のアミノ酸塩がある。

本発明に用いるＮ−デアセチル−リソガングリオシドは、生体内及び生体外の両者でフォスフォリバーゼＡ２（ＰＬＡ２）、酵素を抑制することが見出された。

ＰＬＡ２は、細胞膜からアラキドン酸の解放を触媒する。次いでこの酸は体内でプロスタグラシン、ロイコトリエン及びトロンボキサンに変換される。ＰＬＡ２は、アルキルアセチル　フォスファチジルコリンから血小板活性化因子の発生をも含む。

従って、ＰＬＡ２は感染、トロンポスチック障害及びアレルギー性障害を含む多くの条件での役割を果たす。Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドも生体外でヒト末梢血液好中球からスーパーオキシドの生産を抑制する。スーパーオキシドの生産は、心臓梗塞及び腎臓２血に起こるような感染過程及び再潅流損傷に関係すると信じられている。

Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドは、生体外での白血病Ｌ１２１０細胞及びダウジ（Ｄａｕｄｉ）細胞の増殖を抑制すること、及び実験的肉腫１８０腫瘍を移植したマウスの死亡率を減少させることも見出された。更に、生体外でＮ−デアセチル　リソガングリオシドで予備処理した腫瘍細胞によってチャレンジされたマウスが、未処理腫瘍細胞によってチャレンジされたマウスに比べて、増大した生存時間を有し、Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドが腫瘍細胞の催腫瘍性を減少させることを示すことが見出された。モノ−Ｎ−デアセチル−リソ　ＧＭｌは、照射マウスの実験的骨髄移植に免疫抑制作用を有することが示された。処置なしで、同種異系骨髄移植（即ち、遺伝的に同一ではない骨髄）を受けたマウスは、同系移植（遺伝的に同一の骨髄）を受けたマウスより低い生存時間（骨髄の拒絶を示す）を有する。他方、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ　ＧＭｌの処置は同種異系骨髄移植を受けたマウスの生存時間を増大し、−例では同系移植の生存時間と等しくなることが見出された。更に、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ　ＧＭｌはギニアビッグに保護作用を示し、多発性硬化症のような自己免疫条件の標準動物試験モデルである実験的アレルギー性脳を髄炎試験の死亡率を減少させる。

［Ｂｏｒｅｌ　Ｊ、Ｆ、　ａｎｄ　Ｇｕｎｎ　Ｈ，Ｃ，Ａｎｎａｌｓ　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ　１９８Ｂ、４７５．３０７−３１９］本発明の他の面は、フォスフォリバーゼＡ２の抑制又はスーパーオキシド生産の抑制、増殖的又は自己免疫疾患の処置、又は免疫系の抑制を必要とする条件の処置のための医薬の製造におけるＮ−デアセチル　リソガングリオシドの使用を提供することである。

フォスフォリバーゼＡ２の抑制を必要とする条件には、炎症例えば関節炎のような、慢性炎症疾患、炎症腸疾患、喘息、及び例えば冠疾患の予防又は次の発作を予防するための最初の心臓発作後の処置のための血栓障害が含まれる。

スーパーオキシド生産の抑制を必要とする条件には、例えば心臓梗塞及び腎臓２血における再潅流損傷が含まれる。

増殖的疾患には、白血病、リンパ腫、肉腫及び固体腫瘍を含む各種の癌、基底細胞癌及び偏平上皮癌、及び乾癖が含まれる。

免疫系の抑制を必要とする条件には、例えば、心臓、肝臓、腎臓、骨髄及び内分泌腺を含む移植器官の拒絶反応の防止が含まれる。変更免疫学的反応性及び自己免疫性の表現によって特徴付けられる自己免疫性疾患には、全身性紅斑性狼癒（ＳＬＥ）、壊死性脈管炎、硬皮症、多発筋炎、リューマチ様関節炎のようなコラーゲン脈管性障害；限局性腸炎；潰瘍性大腸炎；慢性活性肝炎；糸球体腎炎；グツドパスチャー症候群；自己免疫溶血性貧血症；特発性血小板性紫斑病；尋常天庖癒；類天庖癒；ブライマリミセデマ（ｐｒｉｍａｒｙｍｙｘｏｅｄｅｍａ）　；橋本甲状腺炎、甲状腺中毒；悪性貧血症；自己免疫萎縮性胃炎；アジソン病；若年性糖尿病；重症筋無力症；交感性眼炎；ファコゲニツク（ｐｈａｃｏｇｅｎｉｃ）ブドウ膜炎；多発性硬化症；特発性白血球減少症；原発性胆汁性肝硬変：シェーグレン症候群；皮膚筋炎及び円板状ＬＥが含まれる。

医薬として有効であることが必要なＮ−デアセチル　リソガングリオシドの量は、変わることは当然であり、究極的には医者又は獣医の裁量である。考慮すべき因子には、処置する条件、投与経路、及び処方の性質、哺乳類の体重、年齢及び一般条件、及び投与する特定化合物が含まれる。適当な治療投与量は約０．０００５〜約１０　ｍｇ／　ｋｇ体重、例えば０．０１〜約５ｍｇ／ｋｇ体重であり、好ましくは０．１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。１日の全投与量は、単一投与でも、例えば１日に２〜６回の多数投与でも、又は選定した期間の静脈注入によっても与えることができる。例えば、７５ｋｇの哺乳類に対して、投与範囲は１日当り約０．５〜５００　ｍｇ。

例えば１日当り約１０〜２５０ｍｇであり、典型的投与量は１日当り約１００ｍｇであることができる。不連続多数投与が指示されたときには処置は典型的には１日当り４回までで式（Ｉ）の化合物の２５ｍｇが与えられる。抗腫瘍処置の適当な有効投与量は約０．１〜約１０　ｍｇ／　ｋｇ体重、例えば１〜５ｆｌ１ｇ／ｋｇ体重の範囲である。抗腫瘍処置のための７５ｋｇ唾乳類哺乳類る適当な投与範囲は、１日当り１０〜７５０Ｂ、１日当り例えば５０〜５００ｍｇである。

本発明のＮ−デアセチル　リソガングリオシドを単独で投与することは可能であるが、薬学的処方で該化合物を提供するのが好ましい。医薬用途の本発明処方は、Ｎ−デアセチルリソガングリオシド又はその生理学的受容性塩と共に１以上の薬学的受容性担体及び場合により他の治療成分を包含する。担体は、該処方の他の成分と共存でき（ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ）、受領者に害を与えないという意味で薬学的に受容性でなければならない。

本発明は、従って、Ｎ−デアセチル　リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩をその薬学的受容性担体と共に包含する薬学的処方をも提供する。

更に、Ｎ−デアセチル　リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩をその薬学的受容性担体と一緒にすることを包含する薬学的処方の製造方法をも提供する。

本発明の処方は、経口的、局所、直腸、又は非経口的（皮下、筋肉内及び静脈内）投与に適したものを含む。好ましい処方は経口的又は非経口的投与である。固体腫瘍の処置にはＮ−デアセチル　リソガングリオシドは腫瘍の周辺の経皮的投与用にも処方できる。

該処方は、単位投与量形態で提供するのが便利であり得るし、薬学技術において既知の任意の方法で調製できる。全ての方法は、Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドを１以上の付随的成分を構成する担体と一緒にする工程を包含する。一般に、処方は該化合物を液体担体又は微細に分割された固体担体又は両者と均質かつ緊密に一緒にした後、必要な場合には所望の処方に製品を成形して調製する。

経口的投与に適した本発明の処方は、それぞれ所定量のＮ−デアセチル　リソガングリオシドを含むカプセル、カシェ剤、錠剤、ロゼンジのような個別単位として、粉末又は顆粒として、シロップ、エリキシール、エマルジョン、又はドラフトのような水性又は非水性液体として提供できる。

錠剤は、場合によって１以上の付随的成分と共に圧縮又は成形によって製造できる。圧縮錠剤は、適当な機械内で粉末又は顆粒のような自由流動性形態のＮ−デアセチル　リソガングリオシドを場合によって結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、表面活性又は分散剤と混合して圧縮することによって製造できる。成形錠剤は、適当な機械内で粉末化合物と適当な担体との混合物を成形することによって製造できる。

シロップは、Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドを、付随的成分が添加されていることもあるショ糖のような糖の濃縮水溶液に加えることで調製できる。この付随的成分には、付番剤、糖の結晶化遅延剤又はグリセロール又はソルビトール等の多価アルコールのような他の成分の溶解性増大剤がある。

直腸投与の処方は、ココアバターのような通常の担体との座薬として提供できる。

非経口的投与に適した処方は、受容体の血液と好ましくは等浸透圧のＮ−デアセチル　リソガングリオシドの殺菌水性調剤を包含することが便宜である。

有用な処方は、適当な溶剤で希釈すると上記の非経口的投与用の溶液となるＮ− デアセチル　リソガングリオシドを含む濃縮溶液又は固体をも包含する。

上記の成分に加えて、本発明の処方は、更に希釈剤、緩衝剤、付番剤、結合剤、表面活性剤、濃縮剤、潤滑剤、保存剤（酸化防止剤を含む）等から選ばれた１以上の付随的成分を含むことができる。

本発明に用いるＮ−デアセチル　リソガングリオシドは、他の治療剤と組合せて、例えば組合せ薬学的処方で、又は同一処置養生の一部として他の剤と同時に投与できる。このような他の治療剤には、例えばシクロフォスフアミドのような他の免疫抑制剤、抗腫瘍剤、コルチコステロイド、シトカイン、非ステロイド抗炎症剤、抗ヒスタミン剤、抗セロトニン剤、及び抗血小板剤が含まれる。

本発明に用いるＮ−デアセチル　リソガングリオシドは、シアロガングリオシドから、該シアロガングリオシドを上昇温度、便宜には１００〜１３０℃において、例えばＣ１−４アルカノール等のアルコールのような適当な溶剤中でアルカリ加水分解に付すことによって、又は酵素加水分解を用いて調製できる。アルカリ加水分解は当該技術で既知の方法で行うことができ、メタノール又はｎ−ブタノールのようなＣ１−４アルカノールと混合した水性水酸化ナトリウム又はカリウム又はテトラメチルアンモニウムハイドロキサイドを用いて行うのが便宜である。加水分解は還流温度で行うのが便宜である。

加水分解の時間は、使用する他の条件にもよるが、一般には少なくとも３時間で、３０時間まで続くことができる。当業者には容易に分かるように、達成する脱アセチル化の程度は、使用する反応条件の正確な組合せによるが、完全な脱アセチル化がめられ、ジ−Ｎ−デアセチル−リソガングリオシドを得る場合には、原料物質の部分的脱アセチル化を行う場合に用いる条件より厳密な条件を選ばなければならない。反応は反応混合物の薄層クロマトグラフ又は分光分析でモニターできるので、終了点が定められることを認識すべきである。

次いで、当該技術に既知の方法で、例えば有機溶剤を除去し、便宜には２４〜７２時間、好ましくは４８時間、水に対し透析して反応混合物からＮ−デアセチル　リソガングリオシドを得ることができる。この工程で蒸留水又は天然水を用いることができる。生成溶液は、凍結乾燥、又は更にカラムクロマトグラフのような精製に付すことができる。生成物がモノ−及びジ−Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドの混合物を含む場合には、これらはカラムクロマトグラフで分離できる。

上記方法で出発物質として用いられるシアロガングリオシドは好ましくはモノシアロガングリオシドで、ＧＭｌ　、ＧＭ　Ｓ０Ｍ３、及びＧＤｌａを含む。この出発物質の脂肪アシル部分の性質は、この部分は最終物質に存在しないために、重要ではないことを認識すべきである。ガングリオシド出発物質は天然に存在するエリスト形態であることが好ましい。

上記方法で得ることができるＮ−デアセチル　リソガングリオシドは、通常５０％未満、好ましくは３０％未満、特に好ましくは１０％未満の不純物、例えばガングリオシド出発物質及び他のガングリオシド誘導体を含んでいる。当初得られたＮ−デアセチル　リソガングリオシドの精製は、カラムクロマトグラフのような当該技術で既知の方法で行うことができる。

本発明の他の面は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、例えば少なくとも９０％純粋であることを特徴とするモノ−又はジ−Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドＧＭ１を提供することである。

出発物質が、それぞれがｎが１２である化合物及びｎが１４である化合物の混合物として存在するＧＭｌ又はＧＤｌａのような同族体化合物の混合物を包含する場合に、対応するＮ−デアセチル　リソガングリオシドも同族体の混合物であることを認識すべきである。最終化合物の純度は該混合物との関係で計算され、１の同族体に対するものではない。Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドの調製で得られる同族体の割合は広範囲に変化する。実際には、１：１混合物に近いことが見出だされた。同様に、出発ガングリオシドの割合がスフィンガニン形態である場合には、最終化合物もスフィンガニン部分の割合を含む。

Ｃ１８及びＣ１６成分の両者を含むＮ−デアセチル　リソガングリオシド（即ち、ｎが１２及び１４の化合物の混合物）はクロマトグラフ法で分離して個別のＣ１８及びＣ１６成分とすることができる。或いは、ＧＭｌのようなガングリオシド出発物質は例えばクロマトグラフ法によって先ずＣ１８及びＣ１６成分に分離され、次いで上記の一般的方法に従って対応する０１８及びＣ２０Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドを調製するために用いることができる。出発ガングリオシドのＣ１８成分は水性有機溶剤で溶出するのが好ましく、Ｃ１６成分は非水性有機溶剤で溶出するのが好ましい。

上記方法で得ることができるＣ１８及びＣ２ｏＮ−デアセチルリソガングリオシド誘導体は、通常５０％未満、好ましくは３０％未満、特に好ましくは１０％未満の不純物、例えばガングリオシド出発物質及び他のガングリオシド誘導体を含んでいる。本発明の他の面は、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、例えば少なくとも９０％の実質的純粋形態であることを特徴とするＣ　又はＣ２ｏモノ−又はジーＮ−デアセチル　リソガングリオシドを提供することである。

このＣ１８又はＣ２ｏモノ−又はジ−Ｎ−デアセチル　リソガングリオシドは、実質的に純粋な形態のモノ−Ｎ−デアセチル−リソＧ　Ｍ　Ｉ　Ｃ２０モノ−Ｎ−デアセチル−リソ０Ｍ１−０１８ジーＮ−デアセチル−リソＧＭ１−Ｃ２゜ジ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭ１−Ｃ１８から選ぶのが好ましい。

本発明を次の例で説明するが、これは本発明を制限するものではない。

例１モノ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭ１及びジ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭ１の製造１５０ｍｇのＧＭｌ（Ｏｐｏｃｒｉｎ　、純度９８％、ＨＰＬＣ及びｔ、１．ｅ、による）を、ＩＯＭＫＯＨ及びブタン−１−オル（１／９ｖ／ｖ）の混合物の１０１で３，５時間、１１５−１１７℃で還流して加水分解した。室温に一夜冷却後、１０ｍ１の水を加水分解溶液に添加し注意深く混合した溶液を分離漏斗に一夜おいた。リソガングリオシドを含む低水層を単離し、減圧下で濃縮してブタノールの痕跡を除いた後、ＭＣＩ　（１２Ｎ）でｐＨを９に調節し１５分間遠心分離（３０００ｒｐｍ）で透明化した。透明な上澄みを２日間に亘ってＩＯＬの蒸留水（日に３回変える）に対してビスキング管内で透析した後、凍結乾燥して加水分解生成物を得た。これをシリカゲルＳｉ６０（Ｍｅｒｋ　ａｒｔ、９３８５）上で次の移動相スキームを用いたカラムクロマトグラフで精製した。

溶出液Ａニブタンー１−オル／メタノール／水（２：２：０．７５　ｖ／ｖ／ｖ）１２００ｍｌ溶出液Ｂニブタンー１−オル／メタノール／水（２：２：１　ｖ／ｖ／ｖ）００ｍ１加水分解生成物の１ｇを溶出液Ａの６０ｍ１に溶解し、４５℃で６０分間音波処理した後、ガラスウールを通して濾過し残留不溶解物を除いた。次いで、この溶液を２０＋Ｉ／分の流速で４５℃において（ウォータージャケット）クロマトグラフし、各溶出液の５０１１分を回収し４０℃減圧下で濃縮した。

溶出液Ａからの留分は白いふわふわした粉末としてモノ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭ１を得た。溶出液Ｂからの留分は白いふわふわした粉末としてジ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭ１を得た。

物理特性モノ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭＩＲｆ−０，１３（プレート：ケイソウ±６０　ＴＬＣＦ２５４（Ｍｅｒｋ　ａｒｔ、５７１５）　２０Ｘ２０ｃｍ−０，２５１０１！１．使用直前に１００℃で３０分間加熱して活性化し室温に冷却。１時間飽和後、プレートを溶出液としてクロロフォルム：メタノール　１：２．５Ｍ　アンモニア（５０：４０：１０）で展開。検出＝１）レゾルシノール、２）オルシノール）。

オルシノールスプレィの調製：溶出液Ａ：１ｇの塩化鉄を１００１の１０％硫酸に溶解。

溶出液Ｂ：６％エタノール性オルジオルシノール溶液使用に１０ｍ１のＡと１１１のＢとを混合。噴霧後、プレートを１００℃で２０〜２５分間加熱。

ローディング：２０１１ラン長さ：１２．５ｃｍレゾルシノールスプレィの調製：２ｇのレゾルシノールを１００１の蒸留水に溶解した。

１０ｍ１のこの溶液を０．２５ｒｒ１１の０．１Ｍ硫酸銅を含む８０ｍ１の濃塩酸に加えた。試薬の容量を蒸留水の１００１にした。試薬は使用の少なくとも４時間前に調製した。

生成物について得られた’Ｈｎｍｒスペクトルは第１図に示すものと実質的に同一であった。

ジ−Ｎ−デアセチル−リソＧＭＩＲｆ−０，０５（プレート及び検出は上記の通り）。得られた　Ｈｎ１ｏｒ及び ””ｃ　ｎｍｒスペクトルは第２（ａ）図及び第２（ｂ）図に示すものと実質的に同一であった。

例２ガングリオシドＧＭ　−Ｃ及びＧＭ、−Ｃ２ｏの調製溶出液溶出液Ａ：水：テトラヒド口フラン：メタノール：１Ｂ＋１：８３ｖ／ｖ／ｖ溶出液Ｂ：水：テトラヒド口フラン：メタノール；８　：　８　：　８４ｖ／ｖ／ｖ溶出液Ｃ：テトラヒド口フラン：メタノール；　ｌＯ：９０ｖ／ｖ２．５ｇのＧＭｌ　（オポクリン）を２００ｍ１の溶出液Ａに溶解した。溶液をガラスフィルターを通して濾過し、不溶解物を除き、シリカ（２００ｇ；　ＲＰ１８２５−４０１ｍ、　ａｒｔ　９３０３　Ｍｅｒｋ）を詰めたカラム（Ｊｏｂｉｎ　Ｙｏｎ、直径４ｃｍ、高さ５０ｃａ＋）に入れた。

カラムを溶出液Ａ　（３０００＋ａｌ）　、溶出液Ｂ　（８００ｍｌ）及び溶出液Ｃ（８００ｍｌ）で室温において２５２５−３Ｏ／分の流速で順次溶出した。

各溶出液の２００１留分を回収し、４０℃減圧下で濃縮した。各留分の純度はＨＰＬＣでチェックした。留分２−５は粉末としてガングリオシドＧＭ１−０１８を与えた（５０−１２０ｍｇ／留分）。留分６−１０は粉末としてＧＭ　−Ｃ及びＧＭｌ−Ｃ２ｏの混合物を与えた（５０−１２０℃ｍｇ／留分）。留分１１− １８はＧＭ　−０２゜を与えた。ＧＭ　−Ｃについて得られたＩＨｎａ＋ｒスペクトあった。ＧＭｌ−Ｃ１８について得られた１３Ｃｎｍｒスペクトルは第４図に示すものと実質的に同一であった。

例３ａ）ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ、−Ｃ２ｏの調製３ｇのＧ　Ｍ　１Ｃ２０を、ＩＯＭ　ＫＯＨ及びブタン−１−オルの混合物［１／９　ｖ／ｖ］　Ｉ　Ｌと共に１２時間還流沸騰（温度１１８−１２１℃）で加水分解した。室温に冷却後、反応混合物を、白色沈殿が形成されるまで数ｍｌのＨＣ１３７％で徐々に中和し、約１時間放置して沈殿させた。上層を除いた後、沈殿を３００ｍ１の蒸留水中に懸濁させ、再中和した。有機溶媒の痕跡を減圧下で除き、濁った懸濁液を蒸留水１２Ｌ（日に２回代えて２日間）に対してビスキング管中で透析し、凍結乾燥した。凍結乾燥粉末を２５０ｍ１の蒸留水で懸濁し、濾紙で濾過し、１００ｍ１のＨ２Ｏで２回洗浄して水不溶物を除いた。

濾液と洗浄液を一緒にし、０．２１膜フイルターで濾過し、凍結乾燥して標記の化合物を得た。

クトルは第５図に示す。

ｂ）モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１−Ｃ２ｏの調製ＧＭ１−Ｃ２ｏを例３ａ）の方法に従って加水分解したが、反応は３，５０時間後に停止した。この段階で生成物がモノ−及びジ−Ｎ−デアセチル−リソ　ＧＭｌ−Ｃ２ｏの混合物を含むことが見出だされた。主成分はモノデアセチル化合物である。混合物をカラムクロマトグラフで分離して標記の化合物を得た。

ＩＨｎ１ｌｌｒスペクトルは第６図に示す。

表　１例２の生成物　例３ａの生成物Ｒ４５，３４ｄｄ、Ｊ４．５−１５．１　５．４３ｄｄ：Ｊ４，５−１５．ＩＪ３，４−６．８　Ｊ３．４−６．８Ｒ５５，５３ｄｔ；Ｊ５．８−７．１　５．５９ｄｔ；Ｊ５，８−６．９Ｉ　Ｉ　Ｉ　−１４，８２ｄ、Ｊｌ、２−８．５　４．８７ｄ：Ｊｌ、２−８．４Ｉ　Ｉ　−１４，２８ｄ、Ｊｌ、２−７．７　４．３８ｄ、Ｊｌ、２−７．７Ｉ　Ｖ　−１４，２３ｄ、封、２−７．０　４．２９ｄ；Ｊｌ、２−７．３Ｉ−１４，１５ｄ：Ｊｌ、２−７．８　４．１８ｄ、Ｊｌ、２−７．８Ａ　６　３．１１ｄ；Ｊ−９，８３，１２ｄ：Ｊ−１０，３Ａ　３　ａ　１．８３ｔ；Ｊ３ｅ、３ａ −１，２，４１，５４ｔ；Ｊ−１２，１Ｒ６１，９３ｂｓ　１．９８ｑ；Ｊ−６，９Ｒ８２，０２ｔ；Ｊ−７，３− Ｒ１０１，２３ｂｓ　１．２３ｂｓＲ１４０，８５；Ｊ−６，９０，８５ｔ：Ｊ−６，９表１の番号は、文献（Ｓｉｌｌｅｒｕｄ　ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９８２．２１．１２６０−１２７１及びＫｏｅｒｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、Ｂｉｏｃｈｅａ＋１ｓｔｒｙ１９８３．２２．２６７６−２６８７　）で提案されたものに従った。

例４ａ）ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−０１８の調製標記化合物を例３ａ）と同様の方法で調製した。

ｂ）モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ１８の調製標記化合物を例３ｂ）と同様の方法で調製した。生成物の’Ｈｎｍｒスペクトルは第７図に示す。

生物学的試験結果例５生体外のＬ１２１０及びダウディ（Ｄａｕｄｉ）細胞の増殖に対するモノ−Ｎ− デアセチル−リソ−〇Ｍ１の影響方法増殖試験：細胞系を抗生物質及び１０％ウシ胎児血清不活性化ＧＩＢＣＯ０１３ −０６２９０Ｈで補足した２　５　ｍＭ　ＨＥＰＥＳ緩衝液及び１０％Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣｏ　０４Ｏ４１−０２４Ｏ０のＲＰＭＩ　１８４０媒体に維持した。腫瘍細胞を洗浄し、適当な希釈で完全媒体によって希釈し、ＦＡＬＣＯＮ　３０４７プレートのウェルに加えた（　２　ｍｌ）。

完全媒体に希釈した各種濃度の全ての医薬を０．　２ｍｌの容量でトリプリケートウェルに添加した。細胞を３７℃、７２時間培養した。培養後、細胞を細胞カウンター（ＣＯＵＬＴＥＲＣＯＵＮＴＥＲＺＭ）を用いてカウントした。

試験化合物インターフェロンガンマ　１０００Ｕ／ｍｌベータ　１０００Ｕ／ｍｌフルフｙ　１０００ＬＩ／ｍｌモノーＮ−デアセチル−リソＧ　Ｍ　１１００　ｍｃｇ／ｍ　１結果結果は、第８図及び第９図にグラフで示し、表２に数値で示した。この結果は、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１が、未処理対照及び各種のインターフェロンのいずれに比較しても生体外でのＬ１２１０及びダウディ細胞の増殖を極めて減少させることを示している。

表　２Ｌ１２１０　（ｘｌＯ”）　４８時間　７２時間平均　％　平均　％（Ｓ、Ｅ）　（Ｓ、Ｅ）対照　３４６　１７０２　− （３７）　（４１，７６）ガンマインターフェロン　３３６　−２．８９　１１０２　−３５１０００ＬＩ／ｍｌ　（６１，６）　（３２，４）ベータインターフェロン　３１０　−１０．４　１０５９　〜３８１０００Ｕ／［１１１（１２，２）　（２４）アルファインターフェロン２９４　−１５．０２　１１１４　−３４１００ＯＬＩ１０＋１　（７，８６）　（３８）モノ−Ｎ−デアセチル−１７７−４８，８４５２７ −７１，５リソ−〇Ｍ１（４）　７１．５表　２　（続き）ダウディ（ＸＩＯ）　４８時間　７２時間平均　％　平均　％（Ｓ、Ｅ）　（Ｓ、Ｅ）対照　１２５０　−　１９８４　− （３９，５）　（７８，９）ガンマインターフェロン　１２１２　−３．０４　２２０９　１１．３１０００Ｕ／ｍｌ　（６９，２）　（４４，７）ベータインターフェロン　１１５１　− ７．９２　２１７９　９．８１０００Ｕ／ｍｌ　（４２，２）　（３４，８）アルファインターフェロン　１１２１　−１０．３　２１５７　８．７１０００Ｕ／ｍｌ　（３０，９）　（１４７）モノ−Ｎ−デアセチル−６８２−４７９１８ −５３例６生体内での肉腫１８０に対するモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１の影響方法１０匹のマウス（雄、ＣＤＩ　、Ｃａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ）の群に、ＰＢＳＤｕ　ｌ　ｂｅｃｃｏ°５（ＧＩＢＣｏ　０４１−０４１９０Ｈ）に懸濁した肉腫１８０　（ＮＣＩＧＯ１１４３）　、１．　６　Ｘ　１０５細胞／マウスを０日に右脇腹に皮下移植した。医薬は、０．２．４．７．９及び１１日にベリレジョナルインジエクション（ｐｅｒｉｌｅｓｉｏｎａｌ　１ｎｊｅｃｔｉｏｎ）で投与した。マウスの２群はモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１を１００及び１０ｍｇ／マウスで受け、２群は１００及び１０ｏ＋ｃｇ／マウスでＦＢＳに溶解したグルカン（Ｓｉｇｍａ　Ｇ−５０１１）を受けた。

結果表３に示した結果は、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ、で処置されたマウスは、腫瘍細胞の移植後３０日までは死亡が発生しない事実から示されるように、極めて保護されることを示している。

表　３群　マウス　１５日ロア　３０日目先亡率％　死亡率％対照　１０　３０　６０モノ−Ｎ−デアセチル− リソ−ＧＭ１１００利ｃｇ／マウス　１０　０　０モノ−Ｎ−デアセチル− リソ−ＧＭ１１０利ｃｇ／マウス　１０　０　０グルカン１００利ｃｇ／マウス　１０　１０　３０グルカン１０利ｃｇ／マウス　１０　１０　１０例７ａ）モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１にょるルイス肺癌腫細胞の予備培養（ｐｒｅ−ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ）ノ影響方法ルイス肺癌腫細胞（１×１０６細胞／１）を３７℃及び５％ＣＯ２で２時間、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１で２００１０００ｇ／ｍｌ、１００利ｃｇ／ｌｌ１ｌ及び５０　ｍｃｇ／ｍｌの濃度で培養した。マウス（Ｃ５７ＢＬ６　、雄、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ）の群を処理細胞（０，１ｍｌ／ｍｏｕｓｅ　ｉ、ｍ、）でチャレンジした。対照群は未処理細胞のチャレンジを受けた。マウスを観察し、死亡時間（ｔｉｍｅ　ｔ。

ｄｅａｔｈ）を記録した。

結果死亡時間は細胞を予備処理するのに用いたモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１の量に伴って増大し、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１が直接に該細胞の催腫瘍性を減少することを示した。この結果は第１０図にグラフで示す。

ｂ）モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１によるリンパ腫Ｌ５１７８Ｙ細胞の予備培養の影響方法リンパ腫Ｌ５１７８Ｙ細胞（６Ｘ１０”細胞／１）を３７℃及び５％Ｃｏ２で９０分間、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１で１００　ｍｃＫ／ｉｔ及び５０　ｍｃｇ／ｍｌの濃度で培養した。マウス（ＣＤＦＩ　、雄、Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ）の群を処理細胞（０，１ａ＋ｌ／ｍｏｕｓｅ　ｉ、ｐ、）でチャレンジした。対照群は未処理細胞のチャレンジを受けた。死亡時間を記録した。

結果死亡時間は細胞を予備処理するのに用いたモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１の量に伴って増大し、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１が直接これらの細胞の催腫瘍性を減少することを示した。この結果は第１１図にグラフで示す。

例８照射マウスの骨髄移植片拒絶に対するモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１の影響マウス（０５）ＢＬノ８、雄、１８１８−２Ｏの３群に、日−１に１０Ｇｙのガンマ照射を与えた。１の群には日−〇に非照射Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ＩＸＩＯ６、ｉ、ν、）からの同系（ｓｙｌｇＢｎｅｉｃ）骨髄移植をした。２の群にはＣ３Ｈ雄マウス（１ｘ　１０６、ｉ、ｖ、）からの同種異系（ａｌ　ｌｏｇｅｎｅｉｃ）骨髄移植をした。これらの同種異系群の１を、移植後の日−０，１，２，３及び４にモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１１ｍｇ／ｋｇ　ｉ、ｅ、で処理した。対照群は照射したが、骨髄移植片は与えなかった。マウスは移植後３５日目土で観察し、平均生存時間（ＭＳＴ）を計算した。

結果２つの実験の結果は、表４及び５に示し、第１２図及び第１３図にグラフで示す。これは、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１が同種異系骨髄移植で与えられるマウスの生存時間を増大させることを示し、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１が骨髄移植片の拒絶を防ぐことを示している。

表　４群　ＭＳＴ　死亡率（％）同種異系　２３．　０　５７．　１同種異系＋モノーＮ−デアセチル−リソ−ＧＭ。

動物数二群当り１４表　５群　動物数　ＭＳＴ同種間　１４　５．０同種間十モノーＮ−デアセチルーリソ−０Ｍ１１５　１３．４例９実験的アレルギー性脳を髄炎におけるモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１の影響方法抗原溶液は次のようにして調製した。

ウシ脳Ｍ　１８９１　ＳＩＧＭＡ　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、　ＵＳＡからのミニリン塩基性蛋白質を５Ｂ／ｍｌの濃度で塩類溶液（ｓａｌｉｎｅ）に溶解し、１：１でフロイント完全アジュバント（ＦＣＡ　−Ｄｉｆｃｏ　ｃｏｄ０８３８−６０ −７．　Ｄｅｔｒｏｉｔ、　ＵＳＡ）　、及びＭ結核（Ｈ３７Ｒａ　−Ｄｉｆｃ。

ｃｏｄ　３１１４−３３−８．　Ｄｅｔｒｏｉｔ、　ＬＩＳＡ）　８ｍｇ／ｍｌを混合した。

雌の非近交ハートレイギニアビッグ（ｏｕｔｂｒｅｄ　Ｈａｒｔｌｅｙｇｕｉｎｅａ　ｐｉｇ）の各群８の２群に０．　１ｍｌの抗原溶液を各後足蹟（ｈｉｎｄ　ｆｏｏｔｐａｄ）に日−〇に注射して実験的アレルギー性脳を髄炎（ＥＡＥ）を誘発した。これらの群の１に毎日チャレンジ前５日間及び後３日間モノ−Ｎ− デアセチル−リソ−〇Ｍ１を５ｍｇ／ｋｇ／Ｂ、　ｉ、ｐ、テ処理した。対照群はＦｃＡのみを受けた。

ＥＡＥの臨床評価：動物を最初の注射から毎日秤量し、観察した。ＥＡＥの発病度を文献（Ｋｅｉｔｈ　＆　Ｍｅ　ＤｅｒＩＩｌｏｔｔ、　Ｊ。

Ｊｅｕｒｏｌ　Ｓｃｉ　１９８０．４６：３５３−３６４）記載の基準に従って等級をつけた。

臨床等級及び再発基準− 〇−臨床徴候なし；１−重量損失＝２−マイルドなバレーシス；３−中程度のバレーシス；４−厳しいバレーシス及びフェーカルインバクション；５−死亡生存動物はガスで安楽死した。脳を組繊学的スコアのために４％バラフォルムアルデヒドで固定した。ヒ臓を秤量し、対照と比較した。

結果表６及び７並びに第１４図及び第１５図に示された結果は、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１がＥＡＥの臨床徴候を減少し、死亡率を増加することを示す。

表　６群　日　１０　１１　１２　１３　１４　１５　１６　１７　１８対照　０／８　０／８　１／８　４／８　４／８　４／８　４／８　４／８　４／８モノ−Ｎ −デアセチル−リソ−ＧＭ１表　７ＥＡＥの臨床評価に対するモノ−Ｎ−デアセチル−リソーＧＭ１処置の影響の結果日　０　７　１４　２１　２８対照　０　３　２１　２９　３５モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１例１０生体外フォスフォリバーゼＡ２（ＰＬＡ２）に対するジ−Ｎ−デアセチル−リソ −ＧＭ１−Ｃ２ｏの影響ｅｔ　ａｔ、　Ｂｉｏｅｈｅｉｉｓｔｒｙ、１６．３９３２．１９７７）の方法で試験し、リポソームについてブタすい臓ＰＬＡ２に対する抑制作用を示すことを見出だした。結果は第１６図に示す。

例１１生体内ラビット血小板懸濁に対するジ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇　Ｍ　１Ｃ２０の影響方法血小板懸濁液（血小板に富むプラズマ）の調製血液試料を絶食ニューシーラントラビットがら抗凝固物質クエン酸ナトリウムを含む（最終濃度ｏ、３８％）プラスチックチューブに心臓穿刺によって収集した。血小板に富むプラズマ（ＰＲＰ）を室温で２Ｃ分間１５０ｇの遠心分離によって調製した後、室温で貯蔵した。

血小板の濃度を２．５〜３　Ｘ　１０”　／ｍｌに調節した。

血小板凝集計的検討血小板凝集を３７℃の一定温度でボーン（Ｂｏｒｎ、　Ｎａｔｕｒｅ１９４：９２７．１９８２）の濁度計（ｔｕｒｂｊｄｊｍｅｔｒｉｃ）方法で検討した。

血小板懸濁液試料（１ｍｌ）をボーン血小板凝集計中で撹拌し、連続記録（Ｓｅｒｖｏｇｏｒ　２ｓ、Ｇｏｅｒｓ）で光透過率（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）をモニターした。用いた凝集剤はアラキドン酸ナトリウム（Ｆｌｕｋａ）で、最終濃度は２０〜３０ｍＭであった。結果第１７図にグラフで示した結果は、投与量０．　２及び０、　１３ｍｇ／ｋｇ　ｐ、０−でアラキドン酸をアゴニストとして用いて、該化合物がラビットの血小板凝集を抑制することを示している。

例１２マウスの出血時間に対するジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ２ｏの影響方法ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ２ｏを、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量で体重２２〜２４ｇの雄ＣＤ１７ウス（Ｃ，Ｒｉｖｅｒ。

Ｃ０ＱＩＯ，Ｉｔａｌｙ）に、試験前９６．７２．４８及び２４時間に経口投与した。マウスを麻酔にかけ、数個の開口を持つプラスチックマウス拘束器に入れ、その開口の１から動物の尾を出した。使い捨て外科用刃（Ｎｏ１８−Ｍａｒｔｉｎ）を用いて先端から５〜６ｍｍ５尾の離断によって出血を生じさせた。尾を垂直に保ち、切断後直ちに等張液（塩類）に３７℃でおいた。尾の切断時から出血が完全に停止する（少なくとも３０秒間再出血しない）まで時間を秒で測定した。統計的分析のためにスチューデントｔ−テストを用いた。

参考文献（Ｇ、Ｂ、Ｇｅｒｖａｓｉ、Ｃ，Ｂａｒｔｏｌｉ、Ｇ、Ｃａｒｐｉｔａ　ａｎｄＭ、Ｂａ１ｄａｃｅｉ　Ａｒｚｎｅｉｍ　Ｆｏｒｓｃｈ、／Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓ、（１９８８）　３８（ＩＩ）　Ｎｏ９゜動物　平均（秒）　％Ｓ、Ｅ、％Ｉｎｅｒ、ｐ＜対照　１９　７７．１８　１５．３　−　−ジ−Ｎ−デアセチル− リソ−ＧＭ１−Ｃ２ｏ１９　１８０．５　４２　１３４　０．０２９例１３マウスのトロンビン誘発トロンボエンボリズムに対するジ−Ｎ−デアセチル−リソ−Ｇ　Ｍ　ｔ　Ｃ２０の影響方法ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−Ｇ　Ｍ　ｔ　Ｃ２０をゴミ（Ｇｏｍｉ　ｅｔａｌ、、Ｂｌｏｏｄ　Ｖｏｌ、７５　Ｎｏ、７１９９０　ｐｐ１３９Ｂ−１３９９）の方法に従って試験した。

結果は、第１８図に示した。これは、試験化合物がマウスの死亡率を極めて減少させることを示す。

例１４次に、本発明に従って調製できる処方の例を示す。

八　錠剤式（Ｉ）の化合物　１００．０ｍｇプレゼラチン化コーンスターチ　６０．０ｍｇナトリウム澱粉グリコレート　２０．０ｍｇステアリン酸マグネシウム　４．　０ｍｇ式（Ｉ）の化合物を微細に粉砕し、粉末賦形剤、プレゼラチン化コーンスターチ及びナトリウム澱粉グリコレートと緊密に混合する。粉末を精製水で湿らせて顆粒とする。顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウムと混合する。次いでこの処方を、それぞれ約１８４ｍｇの錠剤に圧縮する。

Ｂ　錠剤式（Ｉ）の化合物　１００．Ｏｎ＋ｇナトリウム澱粉グリコレート　２０．Ｏｍｇラクトーズ　８３．８Ｂステアリン酸マグネシウム　４．　２ｍｇポリビニルピロリドン　１４．０ｍｇ式（Ｉ）の化合物を微細に粉砕し、粉末賦形剤、ナトリウム澱粉グリコレート及びラクトーズと緊密に混合する。粉末を精製水及び変性アルコールに溶解したポリビニルピロリドンで湿らせて顆粒とする。顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウムと混合する。次いでこの処方を、それぞれ約２２２１１１ｇの錠剤に圧縮する。

Ｃカプセル式ＣＩ）の化合物　１００．０ｍｇコーンスターチ　５０．０ｍｇステアリン酸マグネシウム　３．　０ｍｇ微細に粉砕した式（Ｉ）の化合物を粉末コーンスターチと混合する。乾燥粉末をステアリン酸マグネシウムと混合し、硬いシェルのゼラチンカプセルに詰める。

Ｄ　懸濁液式（Ｉ）の化合物　１００．０ｍｇ分散性セルロース　１００．０ｍｇグリセリン　５００．０ｍｇシュクロース　３．　５００．　０ｍｇｍ香付　ｑ、ｓ・着色剤　ｑ、ｓ。

保存剤　０．１％精製水　ｑ、ｓ、から５．　Ｏｍ１式ＣＩ）の化合物をグリセリン及び精製水の一部に懸濁する。シュクローズと保存剤を熱精製水の別の一部に溶解した後、着色剤を添加し、その後、分散性セルローズで溶解する。

２つの調剤を混合し、付番剤を添加する前に冷却する。精製水を最終容量まで加える。生成懸濁液を完全に混合する。

Ｅ　ＩＶ注射式（１）の化合物　５．　０ｍｇ塩酸　ｐＨ調節に必要量注射用水　ｑ、ｓ、から１０ｍ１式（Ｉ）の化合物を注射用水の一部に添加する。ｐＨを塩酸で調節して該化合物を溶解する。注射用水を最終容量まで添加し、完全混合して溶液を完全にする。

溶液を０．２２マイクロメータ膜フイルタによる濾過で殺菌し、殺菌１０１アンプル又はバイアルに無菌的に詰める。

リン−ＧＭ１　（ＧＭｌＬ）及びインターフェロンの影響Ｌ１２１０　８１１！、＋１０３１ダウディＲＥｐＩＪ、増殖に対するモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１　（ＧＭｌＬ）及びインターフェロンの影響ダウディ細胞　Ｘｔ１０３１死亡日生体内リンパ腫Ｌ５１７８Ｙに対するモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ、（ＧＭｌＬ）の影響一−−−’ＧＭｉＬ　１００ｍｃｇ／ｍｌ−−ＧＭＩＬ　５０ｍｃｇ／ｍｌ０Ｍ１ＬＭ１ＬギニアビッグのウシミニリンのＥＡＥ銹発による死亡率に対するモノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ　（ＧＭｌＬ）処置の効果チャレンジ後の日チャレンジ後の日邑生体内ラビット血小板懸濁に対するジ−Ｎ−デアセチル−０、２１ｎＱ／ｋＱ　Ｏ，０，におけるジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−ｃ２゜Ａ、Ａ、＝アラキドン酸生体内ラビット血小板懸濁に対するジ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇Ｍ１−Ｃ２ｏの影響０　、　１３１ｎ（１／ｋｏ　ｐ、ｏ、におけるジ−Ｎ−デアセチル−リソ−〇　Ｍ　１−　Ｃ２０Ａ、Ａ、＝アラキドン酸マウスのトロンビン誘発トロンボエンボリズムに対するジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭＩ　Ｃ２０の影響リソ−ＧＭｌ−Ｃ２゜要約本発明は、Ｎ−デアセチル−リソガングリオシド及び生理学的受容性塩、特に治療用の次の式（１）の化合物に関する。

式中、Ｒは−ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ２）ｎＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）ｎＣＨ３を示し、ｎは１２又は１４であり、Ｒ１は又は水素を示し、Ｒ２は水素又はアセチルを示す。

この化合物は、フォスフォリバーゼＡ２及びスーパーオキシド生産の抑制剤として、抗増殖性及び免疫抑制剤として、及び自己免疫疾患処置に有用である。本発明は、上記条件の処置用の医薬の製造へのＮ−デアセチル−リソガングリオシドの使用にも関する。

国際調査報告国際調査報告ＳＡ　４３２５８

Claims

【特許請求の範囲】１　Ｎ−デアセチル−リソガングリオシド又はその治療用の生理学的受容性塩。２　該Ｎ−デアセチル−リソガングリオシドが次の式（Ｉ）を有する請求項１に記載の用途のためのＮ−デアセチル−リソガングリオシド又は生理学的受容性塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）式中、Ｒは−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｎＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）ｎＣＨ３を示し、ｎは１２又は１４であり、Ｒ１は ▲数式、化学式、表等があります▼ ▲数式、化学式、表等があります▼ 又は水素を示し、Ｒ２は水素又はアセチルを示す。３　Ｒ１が ▲数式、化学式、表等があります▼ であり、Ｒ２がそれぞれアセチル又は水素原子である請求項２に記載のＮ−デアセチル−リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩。４　Ｒ２が水素原子である請求項２又は請求項３に記載のＮ−デアセチル−リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩。５　Ｒが−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｎＣＨ３又は−ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨ２）ｎＣＨ３を示し、ｎが１４である請求項２乃至請求項４のいずれかに記載のＮ−デアセチル−リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩。６　Ｒが−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）１４ＣＨ３である請求項１乃至請求項５のいずれかに記載のＮ−デアセチル−リソガングリオシド又はその生理学的受容性塩。７　実質的に純粋な形態のモノ−又はジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１又はその生理学的受容性塩。８　ジ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ２０、ジ−Ｎ−デアセチル−リソ− ＧＭ１−Ｃ１８、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ２０、モノ−Ｎ−デアセチル−リソ−ＧＭ１−Ｃ１８、又はその生理学的受容性塩。９　請求項１乃至請求項８のいずれかに記載の化合物又はその生理学的受容性塩とその薬学的受容性担体とを包含する薬学的組成物。１０　別の治療剤を含む請求項９に記載の薬学的組成物。１１　フォスフォリパーゼＡ２の抑制を求める条件の処置用の医薬の製造への請求項１乃至請求項８のいずれかに記載の化合物又はその生理学的受容性塩の使用。１２　スーパーオキシド生産の抑制を求める条件の処置用の医薬の製造への請求項１乃至請求項８のいずれかに記載の化合物又はその生理学的受容性塩の使用。１３　増殖的疾患の処置用の医薬の製造への請求項１乃至請求項８のいずれかに記載の化合物又はその生理学的受容性塩の使用。１４　自己免疫疾患処置用の医薬の製造への請求項１乃至請求項８のいずれかに記載の化合物又はその生理学的受容性塩の使用。１５　免疫系抑制用の医薬の製造への請求項１乃至請求項８のいずれかに記載の化合物又はその生理学的受容性塩の使用。