JPH04503508A

JPH04503508A - 薬物送達組成物

Info

Publication number: JPH04503508A
Application number: JP2-503637A
Authority: JP
Inventors: イラム，リスベス
Original assignee: ウェスト　ファーマシューティカル　サーヴィシズ　ドラッグ　デリバリー　アンド　クリニカル　リサーチ　センター　リミテッド
Priority date: 1989-02-25
Filing date: 1990-02-23
Publication date: 1992-06-25
Anticipated expiration: 2017-07-24

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】薬物送達組成物本発明は、薬物送達組成物（ｄｒｕｇ　ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）に関し、より詳細には、たとえば腟、結腸、または鼻腔などの粘膜表面から、活性物質を吸収させるための組成物に関する。

薬物送達における主なる問題点は、生物学的膜から、たとえば、プロティンおよびペプチドなどの高分子量物質を、如何に効果的に吸収するかということである。通常、このような分子は、胃腸器官、口腔粘膜、直腸粘膜、膣粘膜、または鼻腔粘膜に投与されると、体内には吸収されない。したがって、近年のインシュリンに関する研究においては、このような化合物が、いわゆる吸収促進剤とともに投与されると、その吸収量が増加することが論証されている。これらの吸収促進物質は、種々の胆汁酸塩誘導体と同様、非イオンタイプの界面活性剤を含有する。これらのタイプの界面活性物質が存在すると、膜の浸透性が増加するものであり、胃腸病学の分野の文献には、このような吸収促進剤が、種々発表されている。（デービスら（Ｄａｖｉｓ）による、ペプチドドラッグの送達システム（Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　ｆｏｒ　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｄｒｕｇｓ）、プレナム出版（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ）　、ニューヨーク、１９８７年）。

しかしながら、このような物質は、膜に対する刺激効果を有するため、薬物を慢性的に投与する場合には使用できない。これは、非イオンタイプの界面活性剤ばかりでなく、胆汁酸塩およびその誘導体（たとえば、フシジン酸）に対してもいえることである。

欧州特許第０２３．３５９号（ＥＰ−Ａ−０２３，３５９）および欧州特許第１２２．０２３号（ＥＰ−Ａ−１２２，０２３）には、鼻の粘膜に投与する粉状薬物矧成物、およびその投与方法が記載されている。この薬物組成物は、ポリペプチドおよびその誘導体を、鼻の粘膜から効果的に吸収させることを可能とする。

同様に、米国特許第４，２２６．８４８号（ＵＳ−Ａ−４，２２６，８４８）には、粉状薬物を、組成物が粘膜接着特性を有するような鼻の粘膜に、投与する方法が開示されている。

欧州特許第２３０，２６４号（ＥＰ−Ａ−２３０，２６４）には、高分子量薬物、ゲル化剤（たとえば、ヒドロキシエチルセルロース）、および必要に応じて、他の付加物（たとえば、界面活性剤、グリセロール、またはポリエチレングリコール）を含有する、ワクチン用水溶性鼻薬送達システムが開示されているが、前記組成物は、粉末として投与されるものである。

ミクロ球体含有製剤が、国際特許第８８１０９１６３号（ＷＯ８８１０９１６３）に記載されており、この製剤には、薬物が粘膜から効果的に浸透する目的で、ある促進剤が含有されている。また、国際特許出願第８９１０３２０７号（Ｗｏ　８９１０３２０７）には、促進剤を必要としない製剤が記載されおり、この製剤は、薬物を含有する、ＤＥＡＥ−デキストランにより被覆されたマイクロカプセルからなるものである。

ＤＥＡＥ−デキストランの、経口薬物送達製剤への使用が提案されている。

これは、胃粘素ムチンと相互作用するとされており　（アンダーソン、Ｍ、Ｔ、ら（Ａｎ　ｄ　ｅ　ｒ　ｓ　ｏ　ｎ、　Ｍ、Ｔ、）　、実験生物協会会議（ｔｂｅ　５ｏｃｉｅｔｙｆｏｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、１９８８年７月２４−２９日、マンチェスタ、英国、参照）、また、異なったサイズのペプチド吸収を研究する目的で、モデル化合物として、ラビットの鼻腔に投与されている（マイタニら（Ｍａｉｔａｎｉ、Ｙ、）　、Ｉ　ｎ　ｔ、　Ｊ、　ｐｈ、　ａ　ｒｍ、、１９８９．４９．２３−２７、参照）。

イガワら（Ｉｇａｗａ）（ケミカルファーマシュウテイカルプリテン（Ｃｂｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、）３６（８）　３０５５−３０５９．１９８８、参照）は、ヒトインターフェロン−βを、ＤＥＡＥ−デキストランぶ形削を用いて、ラビットに、鼻腔的に投与したところ、このデキストラン部は、９０００の平均分子量を有しており、薬物の吸収は促進されなかった。したがってここでは、低分子量ぶ形削は、高分子量成分よりも好ましいと結論づけられている。

これに対して我々は、キト−サンのような他のポリカチオン物質、または、比較的高分子量のＤＥＡＥ−デキストランの分散または溶液が、たとえ他の促進剤により組成物の効用がさらに改善されるとしても、それらの促進剤を必要としない、改善された製剤の基礎を形成することを見いだした。

独国特許第２．０９２．００２号（ＧＢ−Ａ−２，０９２，００２）には、消化器官から薬物を吸収することを促進する、マグネシウム−キレート化合物およびカルシウム−キレート化合物が開示されている。このような化合物は、ポリアミノ酸を含有する。サワナギら（Ｓａｗａｎａｇｉ）は、ケミカルファーマシュウティ力ルブリテン（Ｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、）、３０　（１１）、４２１６−４２１８，１９８２において、口内で保持する錠剤の成分を結合させるための、キト−サンの使用方法を開示している。ここには、非経口の粘膜表面への送達は、開示されていない。

本発明は、薬理学的に活性な化合物と、複数のカチオン基を有する高分子物質（以後、”ポリカチオン物質“と称す）とからなる、粘膜に投与される組成物において、（１）前記高分子物質は、マグネシウムイオンまたはカルシウムイオンとキレートするポリアミノ酸ではなく、（２）前記組成物が、ＤＥＡＥ−デキストランにより被覆されたマイクロカプセルからなるものではなく、（３）消化器官に投与される場合、前記組成物は、ＤＥＡＥ−デキストランの溶液および前記活性化合物からなるものではなく、しかも（４）口内で保持する錠剤形状の場合、前記組成物がキト−サンからなるものではないことを特徴とする、粘膜に投与される組成物を提供する。

前記ポリカチオン物質は、水性媒体における溶液として、水性システムにおける分散として、粉状として、またはミクロ球体として、存在してもよい。好ましくは、このようなミクロ球体は、たとえば（ヒト）血清アルブミンおよびその誘導体およびその類似化合物などの、他の適当なミクロ球体形状物質とともに、または、他の適当なミクロ球体形状物質なしで、（通常は、薬理学的に活性な物質とともに）ポリカチオン物質自体から、形成される。

好ましくは、このような溶液におけるポリカチオン物質の濃度は、０．Ｏ１％ｗ／ｖから５０％ｗ／ｖ、より好ましくは、０．１％ｗ／ｖから５０％ｗ／ｖ。

さらに好ましくは、０．２％ｗ／ｖから３０％ｗ／ｖ、および、最も好ましくは、０．５％ｗ／ｖから１５％ｗ／ｖである。

ジエチルアミノエチル−デキストラン（ＤＥＡＥ−デキストラン）は、エーテル結合により、グルコース残基と連結したジエチルアミノエチル基を含有するデキストランのポリカチオン誘導体である。デキストランは、約５．０００から４０．０００．０００の平均分子量を有することが可能であるが、典型的には、約５００．０００の平均分子量を有するものである。本発明においては、デキストランは、分子量１０．０００以上のものに限定する。窒素含有量は、通常、３つのグルコース単位に対して１つのチャージされた基に対応して、約３．２％である。副反応の結果として得られた”タンデム”基は、概ね等しい比率の、３つの異なった塩基性基の存在下において、生じるものである。

キト−サンは、脱アセチル化されたキチン、またはポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンである。これは、プロタンラボラトリーズインコーポレーション（Ｐｒｏｔａｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ）、レツドモンド（Ｒｅｄｍｏｎｄ）、ワシントン　９８０５２、米国から入手可能であり、グレードに応じて、ｐＨ６，０にまで、水で溶解することが可能である。非水溶性キト−サン（Ｓｅａ　Ｃｕｒｅ）の１％溶液は、水でスラリー（たとえば、２ｇ／１００ｍ１）とし、同量の有機酸くたとえば、２％酢酸１００ｍ１）を添加して、１時間激しく攪拌することにより、得られる。水溶性キト−サン（Ｓｅａ　Ｃｕｒｅ＋）は、有機酸または無機酸がなくても、溶解する可能性がある。

キト−サンは、以前は、外科的縫合および免疫刺激剤として、タンパク質の物質を沈殿させるために使用されていた。また、キト−サンは、はぼ不溶な薬物の溶解性を改善するため、経口薬物製剤に使用され（サワヤナギら（Ｓａｗａｙａｎａｇｉ）、ケミカルファーマシュウテイ力ルプリテン（Ｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌ　１．）　、３１．２０６２−２０６８．１９８３）、または、薬物をゆっくり遊離させる（ナガイら（Ｎａｇａ　ｉ）％　Ｐｒｏｃ、Ｊ　ｔ、ｔｙｓ− Ｊｐｎ、Ｓｅｍ１ｎ、Ａｄｖ、ｃｈｉｔｉｎ、ＣｈｉｔｏｓａｎｌＲｅｌａｔ、Ｅｎｚｙｍｅｓ１２１−３９、Ｚｉｋａｋｉｓ　Ｊ、Ｐ、（ｅｄ）、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、０ｒｌａｎｄｏ　（１９８４））ために使用されてきた。

ＤＥＡＥ−デキストランおよびキト−サンが好ましいが、さらに、本発明の組成物に使用されることの可能なポリカチオン物質は、キト−サンの無機塩または有機塩およびキト−サンの変性形（特に、より正にチャージされたもの）、ポリリジンなどのポリアミノ酸、ポリクオータナリー化合物、プロタミン、ポリイミン、ＤＥＡＥ−イミン、ポリビニルピリジン、ポリチオジエチルアミノメチルエチレン（Ｐ　（ＴＤＡＥ））　、ポリヒスチジン、ＤＥＡＥ−メタクリレート、ＤＥＡＥ−アクリルアミド、ポリ−ｐ−アミノスチレン、ポリオキシエタン（ｐ。

１ｙｏｘｅｔｈａｎｅ）　、ポリメタクリレート共重合体（たとえば、Ｎ−（２ −ヒドロキシプロピル）−メタクリルアミド、ＨＰＭＡの共重合体）　、ＧＡＦＱＵＡＴ（米国特許第３．９１０．８６２号）、および、ポリアミドアミンなどに限定されないような、他のポリカチオンカーボハイドレートを含有する。

本発明で使用されるポリカチオン物質は、１Ｏ１０００以上の分子量を有し、好ましくは、少なくとも１００．０００または２００．０００の分子量を有し、最も好ましくは、約５００．０００の分子量を有する。キト−サン（またはその塩）は、好ましくは、少なくとも４００ｍ１／ｇの固有粘度、より好ましくは、少なくとも５００ｍ１／ｇ、７５０ｍ１／ｇ、または１０１００Ｏ／Ｈの固有粘度を有する。

所望の場合には、他の促進剤が、本発明の組成物に含有されてもよく、たとえば、リゾホスファチジルコリン、および、一般的には国際特許第８８１０９．１６３号（Ｗｏ　８ｇ１０９１６３）に記載されているものを含有することが可能である。粘膜において製剤を持続させるために、ゲル化剤または粘度増加物質を、添加することも可能である。キト−サンは、特に、アルブミンとともに、またはアルブミンなしで、ミクロ球体として、製剤することができる。

前記組成物は、たとえば標準リン酸エステル緩衝液を用いて、中性のｐＨで、すなわち、ｐＨ６，５−７，５、好ましくはｐＨ約７．３に、調整されるか、または、塩酸を添加するまたは他の緩衝液システムを用いることにより、低ｐＨで、たとえばｐＨ４に、調整されることが可能である。しかしながら、少なくともある薬物とＤＥＡＥ−デキストランまたはキト−サンとを混合した場合には、コンプレックスを形成する。より低いまたはより高いｐＨを有するもの、すなわち、薬物およびポリカチオンの等電点から離れているものにおいては、このコンプレックスは、分散にかわって、溶液として存在可能である。これは、非常に低いｐＨのものは、粘膜を刺激しやすく、また傷つけやすいが、有益である。このようにして、当業者は、ｐＨを、１．０および１１．０の間、好ましくは４．０および７．５の間、たとえば、４．０から６．０、または９．０から１１．０に特定することが可能である。

前記コンプレックスは、単離することが可能であり、このコンプレックスおよびその治療用途は、本発明の範囲内である。

本発明で使用する”薬理学的活性化合物”は、薬物、ワクチン、およびその成分くたとえば単離された抗原またはその部分）、およびモノクロナル抗体を含有する。

前記組成物は、たとえば、インシュリン、カルシトニン（たとえば、ブタ、ヒト、サケ、ニワトリまたはウナギ）およびこれらの合成変性物、エンカファリン、ＬＨＲＨおよびその類似物（ナファゾリン（Ｎａｆａｒｅｌｉｎ）、プセレリン（Ｂｕｓｅｒｅｌｉｎ）、ゾリデツクス（Ｚｏ　Ｉ　ｉ　ｄｅｘ））　、ＧＨＲＨ（成長ホルモン遊離ホルモン）、ニフェジピン、ＴＨＦ（胸腺体液性ファクタ）、ＣＧＲＰ　（カルシトニン　ゲン　リレイテツド　ペプチド）、心房性のナトリウム排泄増加ペプチド、抗生物質、メトクロプラミド、エルゴタミン、ビゾチジン（Ｐｉｚｏｔｉｚｉｎ）、鼻ワクチン（特にＡＩＤＳワクチン、麻疹、ライノウィルスタイプ１３、および、ＲＳウィルス）、ペンタミジン、および、ＣＣＫ（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｙｋｉｎｉｎ）から選択された薬物とともに使用可能である。

さらに、薬物は、テトラサイクリン塩酸塩、ロイコマイシン、ペニシリン、ペニシリン誘導体、エリスロマイシン、サウファチアゾール、および、ニトロメタシンなどの、抗生物質および抗菌剤；ベンゾサインなどの局所麻酔剤；フェニルエフリン塩酸塩、テトラヒドラゾリン塩酸塩、ナファゾリン硝酸塩、オキシメタゾリン塩酸塩、およびドラマゾリン塩酸塩などの血管収縮薬；ジギタリス、およびジゴキシンなどの強心剤；ニトロ−グリセリン、およびパパベリン塩酸塩などの血管拡張薬；クロルヘキシジン塩酸塩、ヘキシルレゾルシノール、デクアリニウムクロライド、およびエタクリジンなどの防腐剤；リゾジウムクロライド、デキストラナーゼなどの工ンザイム；ビタミンＤ１および活性ビタミンＤ３などの骨代謝制御剤；性ホルモン；血圧降下剤；鎮静剤；抗腫瘍剤；ヒドロ−コーチシン、プレドニソン、フルチカゾン、プレドニソロン、トリアミジノロン、トリアミジノロン　アセトナイド、デキサメタシン、ベータメタシン、ベクロメタゾン、およびベクロメタゾン　ジブロピオネイトなどのステロイド系抗炎症剤；アセタミノフエン、アスピリン、アミノビリン、フェニルブタシン、メツアナミック酸、イブプロフェン、ジクロフェナックナトリウム、インドメタシン、コルチゾン、およびプロペノシドなどの非ステロイド系抗炎症剤；チモトリプシン、およびプロメレインセラチオベプチダーゼなどのエンザイム系抗炎症剤；ジフェンヒドラミン塩酸塩、クロロフエニラミン　マリアート、およびフレマスチンなどの抗ヒスタミン剤；および、ナトリウムクロモグリケート、コディンホスフェイト、およびイソプロテレノール塩酸塩などの抗せき去えん抗喘息剤および抗アレルギー剤を、含有する。

前記組成物は、鼻孔スプレー、圧縮エアゾールキャニスタ、または点滴手段を用いて、鼻孔から投与することが可能である。前記組成物は、粘膜に対して、少なくともある部分でゲル化することが可能であり、これにより、組成物が粘膜において持続されやすくなる。

腸に対して送達可能な製剤は、薬理製剤分野の当業者に公知な技術カテゴリの多くに、細分化して利用されることが可能である。これらは、たとえば、錠剤、ペレット、小錠剤、硬ゼラチンカプセルなどの、被覆固体投与製剤、または、柔軟ゼラチンカプセルなどの被覆半固体投与製剤として、使用可能である。たとえば、ユードラギットＬ　（Ｅｕｄｒａｇｉ　ｔ　Ｌ）　（ポリ　（メタクリル酸、メチルメタクリレート））などのようなメタクリレート共重合体をベースとした、腸用被覆システムは、ｐＨ６以上でのみ可溶であり、したがって、前記ポリマーのみが小腸の入口において解は始める。製剤が分解する位置は、存在するポリマーの量および腸の通過速度に依存する。すなわち、比較的厚みのあるポリマー被覆においては、腸の近傍まで製剤が運搬されることが、報告されている（）蔦 −ディら（Ｈａ　ｒｄｙ）　、Ａｌ　ｉｍｅｎ　ｔ、Ｐｈａ　ｒｍａｃｏ　１．Ｔｈｅ　ｒａｐ、、１．　２７３−２８０．（１９８７））。位置選択的に腸まで運搬可能なポリマーを使用することができ、これらのポリマーは、典型的には、大腸の細菌性フローラに依存し、ポリマー被覆が酵素的に分解されて薬物を遊離する。多数の候補物質が有望であり、たとえば、アゾポリマー類（サフランら（Ｓａｆｆｒａｎ）、米国特許第４．６６３．３０８号）、グリコサイド類（フレンドら（Ｆｒｉｅｎｄ）、ジャーナルオブメディカルケミストリ　（Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、）、２７，２６１−２６６、（１９８４））、および種々の天然から入手可能な変性ポリサッカライド類（アーチャアンドリング（Ａｒｃｈｅｒ　ａｎｄ　Ｒｉｎｇ）　、国際特許出願ＧＢ８９１００５８１）が有望である。

新規な急激遊離技術（ｐｕｌｓｅｄ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（Ｙグループら（Ｍａｇｒｕｄｅｒ）、米国特許第４，７７７．０４９号）など、あらかじめ定められた時間で薬物を運搬することが可能な技術が、現在、有用である。このようなシステムは、薬物とポリカチオン物質との双方を、他の付加物とともに送達させるために使用することができる。なお、この付加物は、薬物を、安定にしかも直接的に腸に運搬することを促進するため、微小環境を変えることが可能であり、また、水があるだけでインビボ（ｉｎ　ｖｉｖｏ）で遊離されるため、外部環境には依存しないものである。

本発明の目的はさらに、上記の組成物を、ヒトまたはその他の哺乳類の粘膜表面、たとえば腟、目、腸、または鼻孔に投与することにより、ヒトまたはその他の哺乳類を治療する方法を提供することである。

以下、本発明による実施態様を、実施例を挙げて説明する。

１：インシュリン＋ＤＥＡＥ−デキストランヒライら（Ｈｉｒａｉ）の文献（１９８１、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｈａｒｍ、、７３１７−３２５）、および、フィッシャーらの文献（Ｆｉｓｈｅｒ）　（１９８７、Ｊ、Ｐａｒｍ、Ｐａｒｍａｃｏｌ、、３９　３５７−３６２）に記載されたラットの変形である、インビボ（ｉ　ｎ　ｖ　ｉ　ｖ　ｏ）実験用モデルラットが、インシュリン水溶液の鼻孔吸収研究に使用された。−昼夜、約２０時間絶食した、約２００ｇ−２５０ｇの重量を有するオスウイスタ（Ｗｉ　ｓ　ｔ　ａ　ｒ）ラット（）（ンテインおよびキングマン（Ｂａｎｔ　ｉｎ　ａｎｄ　Ｋｉｎｇｍａｎ））が、８０ｍｇ／ｋｇ　ペントバービトンナトリウム（６０ｍｇ／ｍｌ　Ｓａｇａｔａｌ　（ｒｅｇｄ、Ｔ、Ｍ、）Ｍａｙ　ａｎｄ　Ｂａｋｅｒ）の腹腔内注射により麻酔され、さらに、麻酔を適当な程度に保持するため、必要に応じて、０．０５ｍ１の腹腔内注射が施される。このラットは、気管切開され、食道が封じられ、頚動脈および頚静脈にカニユーレが挿入される。

インシュリン（半合成ヒトナトリウムインシュリン）溶液が、ｐＨ７，３の１７７５Ｍリン酸緩衝液において調整されたところ、１６７　ＩＵ／ｍｌの濃度が得られた。さらに、ＤＥＡＥ−デキストランが添加されて、１０％ｗ／ｖ、５％Ｗ／Ｖ、または１％Ｗ／Ｖの濃度のものが得られた。これらの実験に使用されたＤＥＡＥ−デキストランは、ｓｏｏ、ｏｏｏの分子量を有する。

リン酸緩衝液における、３３４　ＩＵ／ｍｌのインシュリン溶液を作成し、同量の、２０％、１０％、または２％強度のリン酸緩衝液におけるＤＥＡＥ−デキストランを添加することも可能である。これにより、先と同様の溶液が調整される。前記インシュリン溶液を前記ＤＥＡＥ−デキストラン溶液と混合すると、その溶液には、インシュリンとＤＥＡＥ−デキストランとの間で相互作用がおきたことを示す、混濁が見られる。

ローレス−９促進剤システム　（Ｌａｕｒｅｔｈ−９ｅｎｈａｎｃｅｒ　ｓｙｓｔｅｍ）を含有するインシュリン溶液が、同様の方法で調整された。

前記インシュリン溶液単独、または、ローレス−９（Ｌａｕ　ｒｅｔｈ−９）または種々の濃度のＤＥＡＥ−デキストランを含有する前記インシュリン溶液が、ハミルトン（Ｈａｍｉ　Ｉ　ｔｏｎ）？イクロシリンジを用いて、１６．７　１Ｕ／ｋｇ体重で、ラット（ｎ＝４）の鼻孔に投与された。その投与量は、２０，１であった。

０．２ｍｌの血液サンプルが、インシュリン投与の１０分前および５分前と、投与後、５分、１５分、３０分、４５分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、２４０分、および３００分後において、頚動脈からフルオライドオキサレートチューブ（Ｆｌｕｏｒｉｄｅ　ｏｘａｌａｔｅ　ｔｕｂｅｓ）に収集された。これらのサンプルは、グルコースオキシダーゼ法により、イエロースプリング（Ｙｅｌｌｏｗ　Ｓｐｒｉｎｇｓ）２３ＡＭグルコースアナライザで分析されるまで、短時間、氷で冷却されて保持された。

表１は、リン酸緩衝液中のインシュリン溶液投与、および、１％、５％、または１０％のＤＥＡＥ−デキストラン溶液含有のリン酸ｌ１ｉｌ衝液（ｐＨ７，３）投与後、１２０分経過した、ラットの概算グルコースレベル（ｍｍｏｌ／Ｉ）を示す。投与時のレベルは、約３．５ｍｍｏ　ｌ／Ｉ−４，０ｍｍｏ　Ｉ／ｌであった。こリンは、血中グルコースレベルをさげないが、ＤＥＡＥ−デキストランを添加すると、血中グルコースレベルが早急にさがることがわかる。この効果は、ＤＥＡＥ−デキストランの濃度が上がると、上がるものである。１０％の濃度のＤＥＡＥ−デキストラン溶液を投与されたラットは、低血糖症で死亡した。リン酸緩衝液のみを投与した場合にも、インシュリン溶液のみを投与した場合と同様の傾向、すなわち、約３．５ｍｍｏ　ｌ／Ｉ−４，０ｍｍｏ　ｌ／ｌから、約５ｍｍｏｌ／Ｉへと、プラズマグルコースが増加する傾向を示す。

表１血中グルコースレベル（ｍｍｏｌ／１）ＤＥＡＥ−デキストラン　１％　１．６ＤＥＡＥ−デキストラン　５％　１．２インシユリンのみ　５．１比較として、インシュリンのリン酸緩衝液が投与されたラットのグルコースレベルと、０．５％ローレス−９（Ｌａｕｒｅｔｈ−９＞を含有した、インシュリンのリン酸緩衝液が投与されたラットのグルコースレベルとから、こｆ）公知ノ効果的促進剤システムが、１％ＤＥＡＥ−デキストラン（１２０分、約１．９ｍｍｏｌ／ｌ）と同様、血中グルコース濃度の減少を示すことがわかる。

２：インシュリン　ＤＥＡＥ−デキストラン゛　の　ＨＤＥＡＥ−デキストラン　１％Ｗ／Ｖを含有する溶液、および、ナトリウムインシュリン　１６７　ＩＵ／ｍｌを含有する溶液が、各々調整され、リン酸緩衝液（ｐＨ７，３）において混合されて、ガレンカンプｐＨスティック　（Ｇａｌｌｅｎｋａｍｐ　ｐＨＳｔ　１ｃｋ）を用いて、それらのｐＨが測定された。１Ｍ水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）溶液、または、０．１Ｍ塩酸（ＨＣＩ）溶液の添加効果が確かめられた。

前記２つの溶液は、各々透明（ＤＥＡＥ−Ｄ：　ｐＨ６゜５８、インシュリン：　ｐＨ７，３８”）であったが、その混合物（ｐＨ：６．６５）は、混濁した。

ＤＥＡＥ−デキストラン単独の０．１Ｍ塩酸溶液を添加しても、透明である溶液の外見には、何ら効果をあたえなかった。しかしながら、そのｐＨが６．６５に達すると、ナトリウムインシュリン溶液は混濁したが、さらに酸を添加してｐＨ４，１４まで下げたところ、ナトリウムインシュリン溶液は透明となった。ナトリウムインシュリン溶液が混合されたＤＥＡＥ−デキストラン溶液は、酸が添加されるとほとんど混濁しなくなり、ｐＨ４，１４においては、透明になった。

前記ＤＥＡＥ−デキストラン単独の溶液およびナトリウムインシュリン単独の溶液に、１．０Ｍ水酸化ナトリウム溶液を添加しても、その溶液の外見に変化はなく、相変らず透明であった。前記ＤＥＡＥ−デキストランの溶液およびナトリウムインシュリンの溶液を混合すると、しかしながら、ｐＨが増加するにしたがって、はとんど混濁しなくなり、そのｐＨが９．３２に達すると、透明な溶液となった。ｐＨが約４．０においては、前記ＤＥＡＥ−デキストランの溶液およびナトリウムインシュリンの溶液は、上記ラットモデルにおいては、少なくとも、そのｐＨが約６．６のものと同様に効果的であることが判明した。

３：　による　のＤＥＡＥ−デキストラン５％Ｗ　■が゛、　されたインシュリン１００　ＩＵＺユ上ラットの鼻孔粘膜におけるＤＥＡＥ−デキストラン製剤の効果（接種６０分後）は、従来技術による界面活性促進剤のそれよりも、劇的ではなかった。中隔および鼻甲介から失われたいくつかの細胞は、見ることが可能で島り、投与された側に粘液が排出されたので、その結果、上皮の高さが幾分低くなった。この透明な細胞構造は、明確ではなく、細胞質空間が減少したようであった。基部膜上の核配列が変化したが、前記上皮はｌ細胞の厚さよりも大きい（すなわち概要された）ように見え、連続層が形成された。線毛は、必ずしも排出された粘液において明確ではなかった。

一般には、投与されていない側には、ゴブレット細胞（ｇｏｂｌｅｔ　ｃｅＩＩｓ）はないが、かなりの量のＡＢ染色粘液が、投与された側の細胞に観察された。いくらかの粘液が、投薬されていない鼻孔において観察された。

この製剤の効果は、一般的には、鼻孔の腹側半分（前方）にのみ限定されるものであり、側鼻甲介、すなわち鼻孔の背側半分（後方）には、なんら影響を与えなかった。

ＤＥＡＥ−デキストラン５％Ｗ／Ｖと比較するために、５ＴＤＨＦ　（ナトリウムトウロジヒドロキシフサイデート（ｓｏｄｉｕｍｔａｕｒｏｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｕｓｉｄａｔｅ））を、ラットに対して同様の方法で投与し、６０分間培養したところ、明らかに、鼻の上皮が破壊されたことが観察された。多量の粘液が、細胞の損失、上皮の再構成、および、投与されていない側の約半分の高さに上皮が減少することとともに現われた。一般には、投与された隔壁および鼻甲介の全長が影響されるものである。ＡＢ染色によれば、いくらかの粘液が多くの上皮細胞に残っていたが、それ以外の細胞は、全粘液を放出しており、特に上皮が、鼻道にあるような薄い１層にまで減少してしまった部分においては、全粘液が放出されたものである。

いくらかの粘液は、投与されていない隔壁にも見られ、または、前側の管へと流れ込んでいたが、細胞損失はなかった。投与されていない鼻甲介には、何ら影響はみられなかった。投与された側の上皮の高さは、投与されていない゛比較９側のそれよりも、明らかに低かった。

５：インシュ１ンとキト−サンのラットへのこの実験例では、ラット（ｎ＝４）に対するインシュリンの鼻孔内吸収において、異なった濃度、および、ＤＨ４及びｐＨ７，３−７，４のｐＨ値での、低程度または中程度の粘度を有する水に可溶な製剤（Ｓｅａ　ｃｕｒｅ＋）、キト−サンの効果を評価した。

半合成されたナトリウムインシュリンおよびキト−サン（Ｓｅａ　ｃｕｒｅ＋）（水に可溶な粒状物）で、プロタンラボラトリーズインコーポレーション（Ｐｒｏｔａｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ、）から入手可能な、低程度の粘度（１、ｖ、）および中程度の粘度（ｍ、　ｖ、）を有するものが用いられた。

すべてのインシュリン溶液は、まず、１．９０４ｇ／Ｉのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４２Ｈ２０）および０．６１６ｇ／ｌの亜リン酸ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４２Ｈ２０）と倍の蒸留水から調整された１４．６５ｍＭリン酸緩衝液を用いて製造された。必要に応じて、溶液１ｍｌあたり０．１Ｍ塩酸を１５０μｍ添加することにより、ｐＨ値を４に調整した。インシュリン各１ｍｇは、２８ＩＵに相当すると考えられた。以下の、倍の強度のインシュリン株溶液が、新鮮に調整された。すなわち、ｐＨ７，３−７，４における投与用の１５９．９　ＩＵ／ｍｌ　（６，７４ｍｇ／ｍｌ）、および、ｐＨ４における投与用の１８３．８　ＩＵ／ｍｌ　（７，７５ｍｇ／ｍｌ）が、０゜１Ｍ塩酸による希釈を考慮して、調整された。

倍の強度のキト−サン溶液が、以下のように調整された。すなわち、ｐＨ７゜３ −７．４用として０．２％ｗ／ｖ（＋、ｖ、ン（２ｍｇ／ｍｌ）；　ｐＨ７，３７，４用として１．０％ｗ／ｖ　（１，ｖ、）（１０ｍｇ／ｍｌ）：ｐＨ４用として０．２％ｗ／ｖ　（１，ｖ、）（２，３ｍｇ／ｍｌ）；　ｐＨ４用として１．０％ｗ／ｖ　（１，ｖ、）（１１，５ｍｇ／ｍｌ）：およびＤＨＪ用として０．２％ｗ／ｖ　（ｍ、ｖ、）　（２，３ｍｇ／ｍｌ）が、調整された。

インシュリン／キト−サン製剤は、前記適当な株インシュリンおよびキト−サン溶液の等量を混合し、必要に応じて０．１Ｍ塩酸を１５０μｌ／ｍ１添加することにより、調整された。溶液は、ラットの鼻孔に、０．１または０．５ｍｇ／ｋｇ　（１，ｖ、）キト−サンまたは０．１ｍｇ／ｋｇ　（ｍ、ｖ、）キト−サンとともに、８　ＩＵ／ｋｇのインシュリン投与に応じて、１００μｌ／ｋｇ投与された。インシュリン（１６７ＩＵ／ｍ１）１００μｌ／ｋｇの投与は、マイクロシリンジ（ハミルトン（Ｈａｍｉ　ｌ　ｔｏｎ））および０．６１ｍｍ　（ｏ、ｄ、）ポリプロピレンチューブ（ポルテックス（Ｐｏｒｔｅｘ））を経由して、鼻の穴に、滴下することにより行なわれる。

１５０μＩ　（８−１２滴）の血のサンプルが、インシュリン投与の１０分、６分および２分前と、投与後、５分、１０分、１５分、２０分、４０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、および２４０分後において、頚動脈からフルオライドオキサレートチューブに収集された。流体置換は、頚静脈を経由して０．９％食塩水の形態で行なわれる。前記サンプルのグルコースレベルは、グルコースオキシダーゼ法により、イエロースプリング（Ｙｅｌｌｏｗ　Ｓｐｒｉｎｇｓ）２３ＡＭグルコースアナライザで、２時間以内で分析された。

前記ｐＨ４の溶液は、緩衝システムではなく、所望ならば、適当な緩衝システムが、工夫されても良い。

すべての製剤は、即座に血中グルコースレベルとなり、前記０．５％（１，ｖ、）ｐＨ４，０溶液においては、６０分後に、グルコースレベルが１００％から約１６％に低下した。一般的には、０．５％のものが、０．１％のものよりもより効果的であり、ｐＨ４，０が、ｐＨ７，３−７，４よりも良好であった。

ノルディスク（Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ゲントフト（Ｇｅｎｔｏｆｔｅ）から得られた半合成ヒトナトリウムインシュリンが使用され、このサンプルの水分含有量は、分光測光法により測定したところ、約１５％であった。水に可溶である、キト −サン（ＳＥＡ　ＣＵＲＥ＋）の、低い粘度（固有粘度：３８８ｍ１／ｇ）のものと、中程度の粘度（固有粘度：　１０１０ｍ１／ｇ）のものが、プロタンラボラトリインコーポレーション（Ｐｒｏｔａｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　Ｉｎｃ）から入手された。これらは、各々、’Ｃ５Ｎ　ＬＶ”およびＣ３Ｎ　ＭＶ” と称される。あらかじめ体重の測定された１６の雑種羊が、使用され、これらの羊は、インシュリンを投与する以前に、絶食しなかった。実験第１８目に、万能セカロン（ｓｅｃａｌｏｎ）フロースイッチ付きの、１．２ｍｍ１．ｄ、のビゴセカロン（Ｖｉｇｇｏ　５ｅｃａｌｏｎ）カニユーレが、約１５ｃｍ、各羊の頚静脈の１つに設置され、必要に応じて、ヘバリナイズドノーマルサライン（ｈｅｐａｒｉｎｉｓｅｄｎｏｒｍａｌ　５ａｌｉｎｅ）（２５ＩＵ／ｍｌ）を用いて、開いておかれた。

１９．３２ｍｇ／ｍ＋　（４６０ＩＵ／ｍｌ）のインシュリン溶液が、ｐＨ７，３−７，４の１４．６５ｍＭリン酸緩衝液（２５０ｍｌ水中、０．４７６ｇのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４２Ｈ２０）および０．１５４ｇのリン酸ナトリウム（Ｎａ２ＰＯ４２Ｈ２０））において調整され、０．２ｐｍ膜フィルター（コーニング（Ｃｏ　ｒ　ｎ　ｉｎｇ）２１０５２−２５）により、濾過された。

キト−サン溶液は、以下のように、１４．６５ｍＭリン酸緩衝液において、調整された。すなわち、２．３ｍｇ／ｍｌ　Ｃ３ＮＬＶ、１１．５ｍｇ／ｍｌ　Ｃ５Ｎ　ＬＶ、２．３ｍｇ／ｍｌ　Ｃ５Ｎ　ＭＶ、もしくは、１１５ｍｇ／ｍｌ　Ｃ５Ｎ　ＭＶが、調整された。インシュリン／キト−サン製剤は、等量のインシュリン株溶液と適当なキト−サン溶液を混合し、次いで、前記混合物、各１．０ｍｌに対して、０．１６６Ｍ塩酸をＱ、１５ｍ１添加することにより、調整された。この塩酸添加は、前記溶液中にキト−サンが残存していることを確認するのに、必要である。

このようにして調整された最終製剤は、以下の組成からなるものであった。

製剤１：２００　１Ｕ／ｍｌインシュリン　＋　０．１％Ｃ５Ｎ　ＬＶ、ｐＨ３，６製剤２：２００　ＩＵ／ｍｌインシュリン　＋　０．５％Ｃ５Ｎ　Ｌ、ＶＳｐＨ４，４製剤３：２００　ＩＵ／ｍ＋インシュリン　＋　０．１％Ｃ５Ｎ　ＭＶ、ｐＨ３，６製剤４：２００　１Ｕ／ｍｌインシュリン　＋　０．５％Ｃ５Ｎ　ＭＶ、ｐＨ４，４前記羊は、各３頭ずつ、４つのグループに分けられ、２．ＯＩＵ／ｋｇインシュリンが、製剤１．２．３、および４の水溶液の形状にて、対応するグループ１から４の羊の鼻孔に投与された。

鼻孔に投与する実験のため、前記羊は、２．２５ｍｇ／ｋｇのケタミン塩酸を静脈に投与することにより、鎮静された。これは、投与中に前記羊がくしゃみをすることに対する、対策である。前記麻酔は、約３分間持続した。６ｍｌの血のサンプルは、インシュリン投与の１５分および５分前と、投与後、種々の時間にわたり、羊の頚静脈から粉砕された氷に収集された。これらの各車のサンプルは、２つに分けられた。インシュリン分析するために、前記収集された血（４，０ｍ１）は、５ｍｌヘバリナイズドチューブ（Ｌｉ　Ｈｅｐａｒｉｎ）に混合された。また、グルコース分析するために、前記収集された血（２，０ｍ１）は、５ｍｌフルオライドオキサレートチューブに混合された。前記プラスマは、４℃、３、ｏｏｏｒｐｍにおいて、遠心分離により、分離され、その後、−２０℃で保存されてインシュリンおよびグルコース分析にふされな。

以下に示す結果が得られた。

表２平均血中グルコースレベル（ｍｍｏｌ／ｌ）投与５分後　投与７５分後グループ４　３．８　１．８国際調査報告 −１−一ム−ｍ１ｍ、ＰＣＴ／ＧＢ　９０１００２９１国際調査報告ＧＢ　９０００２９１Ｓ＾　３４６９８

Claims

【特許請求の範囲】１、薬理学的に活性な化合物と、複数のカチオン基を有する高分子物質（以後、これを“ポリカチオン物質”と称す）とからなる、粘膜に投与される組成物において、（１）前記ポリカチオン物質は、マグネシウムイオンまたはカルシウムイオンとキレートするポリアミノ酸ではなく、（２）前記組成物が、ＤＥＡＥ−デキストランにより被覆されたマイクロカプセルからなるものではなく、（３）消化器官に投与される場合、前記組成物は、ＤＥＡＥ−デキストランの溶液および前記活性化合物からなるものではなく、しかも（４）口内で保持する錠剤形状の場合、前記組成物がキトーサンからなるものではないことを特徴とする、粘膜に投与される組成物。２、前記組成物が、ポリカチオン物質のミクロ球体からなることを特徴とする、特許請求の範囲第１項に記載の組成物。３、前記組成物が、ポリカチオン物質の分散または溶液からなるこよを特徴とする、特許請求の範囲第１項に記載の組成物。４、前記ポリカチオン物質の濃度が、０．５％ｗ／ｖから１５％ｗ／ｖであることを特徴とする、特許請求の範囲第３項に記載の組成物。５、前記薬理学的に活性な化合物が、インシュリンであることを特徴とする、特許請求の範囲第１項ないし４項のいずれか１つに記載の組成物。６、前記ポリカチオン物質が、ジエチルアミノエチル−デキストラン（ＤＥＡＥ −デキストラン）またはキトーサンまたはその塩または誘導体であることを特徴とする、特許請求の範囲第１項ないし５項のいずれか１つに記載の組成物。７、特許請求の範囲第１項ないし６項のいずれか１つに記載の組成物を、ヒトまたは他の哺乳類の粘膜に投与することからなる、薬理学的に活性な化合物をヒトまたは他の哺乳類に送達する方法。８、薬理学的に活性な化合物、および、複数のカチオン基を有する高分子物質の複合体。９、治療用として使用される、特許請求の範囲第８項に記載の複合体。１０、粘膜表面に送達するための薬物の製造における、特許請求の範囲第８項に記載の複合体の用途。