JPH04500456A - 炭水化物および炭水化物誘導体を用いるウイルス―宿主細胞相互作用のモジュレート法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

炭水化物および炭水化物誘導体を用いるウィルス−宿主細胞相互作用のモジュレ ート法 １、発明の分野 本発明はウィルス感染治療分野に関する。さらに詳細には、本発明は宿主細胞上 またはウィルス上またはその両方のレセプター部位に結合することにより、ウィ ルス−宿主細胞相互作用を妨害または阻止する生物学的に活性な薬剤の分野に関 する。 ２、発明の背景 ２’、１．ＨＩＶ 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は今日、世界でもつとも恐れられている疾患 のひとつである。ＡＩＤＳの原因であると考えられているヒト免疫不全ウィルス （ＨＩＶ−１）の感染は多くの場合致命的である。この疾患の症状は発病に数年 かかり、そのことがこのウィルスを知らぬまに内包している人々によるこの致命 的疾患のまん延を助長している。ＡＩＤＳの治療には限界があり、この疾患の制 御は成功していない。 ＨＩＶ−１のエンベロープ糖タンパク質がウィルスによるヒト組繊細胞の感染過 程において決定的な役割を果たしていることが一般に認識されている。エンベロ ープ糖タンパク質は２個の主要な糖タンパク質部分、ｇｐ１２０およびｇｐ４１ から成っている。ｇｐ１２０はこれら２個の糖タンパク質から成る複合体の最外 部であると考えられている。細胞のウィルス感染における決定的な出来事である ＨＩＶ−１粒子のヒト細胞への結合は、ｇｐ１２０とある種のヒト細胞上のＣＤ ４として知られているレセプタータンパク質複合体との間の結合を必要とする。 ヒト細胞上のＣＤ４発現は、ＨＩＶ−１の結合、侵入、および感染の受けやすさ を増大させることが示されている。５５．０００ダルトンの細胞表面積タンパク 質ＣＤ４はＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質（ｇｐ１２０）が結合する細胞 表面レセプターであると考えられている。この相互作用が同様に原形質膜とのウ ィルスの融合およびそれに続く細胞への侵入に必要な出来事を促進している。 ｇｐ１２Ｑ分子上には少なくとも３種の別々の結合部位が存在しておりこれらが 一緒になってＣＤ４レセプターとの高アフィニティ結合部位を形成すると考えら れている。ＣＤ４レセプターへのこの親和性は極度に強く、この結合アフィニテ ィは標準的な免疫学的防御において宿主により産生された抗体の結合と置き換る かまたはそれを阻止しつる。例えば、多くのＡＩＤＳ患者および多くのＡＲＣ（ ＡＩＤＳ関連症候群）患者はｇｐ１２０に対する高レベルの抗体を有するが、ｇ ｐ１２０−ＣＤ４相互作用は結合した抗体に取って代わることができ従ってｇｐ １２０に対するワクチンは効果がないと予想される。なぜならそれらが宿主から 惹起する抗体は比較的効果がないであろうからである。抗感染剤として有用であ るひとつの商業的に入手可能な化合物はＣＤ４の形態をしている。 この化合物はそれが天然のＣＤ４と同じくらい緊密にｇｐ１２０と結合するので 作用を有すると考えられる。この方法で、遊離の（投与された）ＣＤ４はもし充 分に高い濃度で与えられると全てのウィルスｇｆ１１２０に結合し、そして宿主 細胞上のＣＤ４にそれが結合するのを阻止するであろう。 則■利ウィルスはＣＤ４表面糖タンパク質を発現する細胞に優先的に感染するこ とが示されている。この向性はウィルスエンベロープｇｐ１２０とウィルス吸収 を可能にするＣＤＪ高アフィニティ結合部位糖タンパク質との間の相互作用から 生じると考えられる。細胞表面ＣＤ４分子へのウィルスの最初の結合に続いて、 ウィルスエンベロープの他の領域がウィルスと細胞膜との間の融合を開始するの に重要であると考えられている。この相互作用はウィルス侵入、脱外被および複 製に先だっと考えられている。 前記の提案された一連の事象を支持する多くの証拠があるにもかかわらず、いく つかの研究ではＣＤ４がＨＩＶ−１の細胞への侵入を媒介するのに必要ではある が充分ではないことが示されている。これらの実験はＣＤ４を発現する第１次細 胞およびＣＤ４でトランスフェクトされたヒト細胞系を用いている。これらの細 胞は則■−１ウィルスに結合し、内在化する。さらに、ＨＩＶ−１により感染さ れた単球およびある種のまれなり細胞系はＣＤ４タンパク質をコードする可能性 のあるｍＲＮＡを発現する。最後に、ＣＤ４エピトープに特異的な抗体はウィル ス結合およびシンシチウム形成ならびにウィルス感染を阻止する。 ヒトＣＤ４糖タンパク質を発現する大部分のマウス細胞はＨＩＶ−１に結合する がシンシチウムを容易に形成せず、容易に感染されない。さらに、ウィルス−Ｃ Ｄ４相互作用を崩壊させる抗体はある種のヒトニューロン細胞系のウィルス感染 を阻止しないことが報告されている。これらの後者の観察はＣＤ４の他にヒト細 胞上に存在する他の因子およびまたは他の分子がＨＩＶ−１の侵入に作用してい ることを示唆している。 細胞表面レセプターは多くの種類の細胞上に存在することが知られている。これ らのレセプターは、細胞−細胞認識過程、成長調節、代謝およびホルモン調節お よび細胞構造的集合のような広く種々の細胞機能に重要であると考えられている 。ＣＤ４レセプターのようなこれらの細胞表面レセプターのいくつかは糖タンパ ク質であると考えられている。糖タンパク質はポリサッカライド部分と結合した タンパク質部分を含んでなる分子である。タンパク質部分がその分子の大きな部 分を構成する。レセプターＣＤ４に結合するＨＩＶ−１のエンベロープ糖タンパ ク質であるｇｐ１２０のような、いくつかのレセプターのリガンドもまた糖タン パク質である。糖タンパク質分子のポリサッカライド部分がレセプターとそのリ ガンドとの間の相互作用において役割を果しており、そして少なくともいくつか の場合においてレセプター−リガンド結合に特異性を付与するのに重要であると 考えられている。 ２．２．治療剤としてのポリサッカライドポリサッカライドは単一の糖分子の結 合により形成されている生物学的に重要なポリマーである。これらの物質は生物 に遍在する。澱粉は多くの天然に存在する組成物である普通に知られたポリサッ カライドである。ポリサッカライド鎖の小セグメントは、多くのタンパク質の物 理的および化学的性質、特に真核生物において重要であることが知られている。 種々のポリサッカライドおよびその誘導体は生物系における表面現象に重要であ ることが知られている。例えばヘパリンは約５　、０００−４０．０００の範囲 の分子量を有するポリ硫酸化ポリサッカライドの混合物である。このものは肺組 織のような生物学的物質から商業的に調製される。ヘパリンに含有される物質は 重要な生物学的界面活性剤でありそしてまた血液中の凝血塊形成を阻止する。ヘ パリンおよびヘパリン様物質もまた細菌の感染の可能性のある膀胱、尿道および 尿管の表面への付着を阻止することが知られている。 ヘパリンは血液凝血塊の治療に医薬において長く用いられてきたが、ヘパリンは 最近他の用途に研究者の注目をあびている。５ｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｃｕｓ、　Ｎ ｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　２（３）：　１． １９８８、は、ヘパリンはＡＩＤＳの原因となるウィルス物質であるＨＩＶを選 択された細胞において、ウィルスの再生産サイクルの１段階で阻止しうると報告 している。しかしながら、ヘパリンはよく知られた強い抗凝固剤であり、そして 哺乳類にそれを継続的に使用することは出血性障害を生じうる。さらに、商業上 のヘパリンは天然起源由来の物質の異種混合物である。 Ｍｉｔｓｕｙａら、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２４０：　６４６−６４９．　（１９ ８８）、は高分子量（約８．０００Ｍ、　Ｗ、　）のポリ硫酸化線状ポリデキス トランの使用によりある種のヒト白血球の旧Ｖ−１感染を阻止できることを示し ている。Ｂａｂａら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。 Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　８５．６１３２−６１３６　、はデキス トラン硫酸（５０００ｍ、　ｗ、　）およびヘパリンがある種の白血球の旧Ｖ− １感染を阻止できることを示している。米国特許第４　、７８３．４４６号、１ ９８８年、はＡＩＤＳおよび他のレトロウィルス感染を治療するのにカラゲーニ ンまたはカラゲーニン混合物の使用を開示している。カラゲーニンは分子量５． ０００−５００．０００　テあり、１００．０００−５００．０００の範囲が最 も多い。しかしながら、この現象がこの化金物の特異的作用であるかまたは非特 異的作用であるかは明らかではない。なぜならこの種のかがる大きな分子量を有 する物質は細胞表面およびウィルスエンベロープ表面の脂質の性質に非特異的な 模作用を及ぼしうる可能性がある。さらに、ヘパリンと同様に高分子量化合物は 強い抗凝固剤である。 ＨＩＶ利に感染した個体の治療は、哺乳動物細胞へのウィルスの結合能力および そのウィルスによる感染の毒性が極度に高いゆえに複雑化している。ワクチンと してのほんの部分的に不活性化された、全期Ｖ−１またはウィルスの構成部分は 健康な個体を不適切にも感染させてしまう可能性がある。薬剤によりウィルスを 制御する努力は今日に至るまで成功していない。旧Ｖ−１に感染した個体を治療 する別の手段ならびに細胞のＨＩＶ−１感染を予防または阻止する別の手段（こ れらはＨＩＶ−１感染個体に毒性がなくそしてウィルスに感染していない個体に 安全である）が必要とされる。 ３、発明の要約 本発明は阻止剤として炭水化物を用いて細胞のウィルス感染を阻止するための新 規の方法を提供する。本発明はまた阻止剤として炭水化物を用いるウィルスの細 胞−細胞伝達を阻止する方法にも関する。炭水化物阻止剤は宿主細胞と相互作用 できそして細胞にウィルスが結合するのを妨害する。好ましくは、炭水化物阻止 剤は約１２個までの糖モノマーを有する環状オリゴサツカライドの非常に水溶性 の高い誘導体である。この環状オリゴサツカライド誘導体はイオン性および／ま たは非イ′オン性の置換基を含有しうる。本出願で用いられている［非常に水溶 性」なる用語は、０°Ｃで測定して蒸留水中に少なくとも約１．５ｇｍ／１００ ｍ１、好ましくは少なくとも約２０ｇｍ／１００ｍ１、さらに好ましくは３０ｇ ｍ／１００ｍ１以上の溶解度を包含することを意図する。好ましくは環状オリゴ サツカライドは約６−８個の糖モノマーを有する。 本発明はまた細胞またはウィルスと相互作用しうる炭水化物阻止剤を提供するこ とを含んでなる細胞間のシンシチウム形成を阻止する方法をも提供する。該炭水 化物阻止剤は約１２個までの糖を有しかつ少なくとも２０ｇｍ／１００ｍ１の溶 解度を有することを特徴とする環状、オリゴサツカライド誘導体を含有する。こ の阻止剤は環状オリゴサツカライド誘導体と該細胞とを相互作用させそれによっ てシンシチウム形成を阻止するために選択された条件下で該細胞に投与される。 別の実施態様においては、本発明の環状オリゴサツカライド誘導体は、ウィルス が細胞への結合を阻止される条件下で炭水化物阻止剤を投与することによりシン シチウム形成を阻止しうる。 本発明はさらに（１）蒸留水中に０°Ｃで少くとも２０ｇｍ／１００ｍ１の溶解 度を有することを特徴とする環状オリゴサツカライドの非常に水溶性の高い誘導 体を（２）少くとも１種の抗ウィルス剤と組み合せて含有する、ヒトを含めた哺 乳動物におけるウィルス感染を阻止するための組成物をも提供する。この組成物 はまたウィルスの細胞−細胞伝達を阻止するのにも使用できる。他の実施態様に おける組成物は、感染細胞のシンシチウム形成を阻止するのに使用できる。 本発明はさらに、（１）環状オリゴサツカライドの非常に水溶性の高い誘導体を （２）細胞増殖をモジュレートする少なくとも１種のステロイドまたは非ステロ イド有機化合物と組み合せて含有する、ヒトを含めた哺乳動物におけるレトロウ ィルス感染を阻止するための組成物をも提供する。ここにおいて前記ステロイド 化合物はグルココルチコイド活性がないものとしそして該誘導体は、蒸留水中に ０°Ｃで少なくとも２０　ｇ　／１００ｍ１の溶解度を有することを特徴とする 。一実施態様においては、この組成物は、ＡＩＤＳ患者にしばしば現われるカボ ジ肉腫の治療に使用できる。この組成物はまたウィルスの細胞−細胞伝達を阻止 するのにも使用できる。 さらに、（１）環状オリゴサツカライドの非常に水溶性の高い誘導体を（２）少 なくとも１種の抗ウィルス剤および（３）少なくとも１種の増殖モジュレート性 ステロイドまたは非ステロイド有機化合物と組合せて含有する、ヒトを含む哺乳 動物におけるレトロウィルス感染を阻止するための組成物も提供される。ここで 前記ステロイド化合物はグルココルチコイド活性を有さずまた該誘導体は蒸留水 中にＯ″Ｃで少なくとも２０ｇ／１００ｍ１の溶解度を有することを特徴とする ものとする。一実施態様においては、これらの組成物はＡＩＤＳ患者にしばしば 現われるカボジ肉腫の治療に使用できる。 ４、

【図面の簡単な説明】

第１図は３２０μＭβ−シクロデキストリンスルフェートの存在下（Ａ）または 非存在下（Ｂ）におけるシンシチウム形成を示す。 第２図は逆転写酵素活性により測定した旧■感染力におよほすシクロデキストリ ンおよびシクロデキストリン誘導体の作用を示す。アッセイされた試料（Ａ）未 処理対照細胞、（Ｂ）β−シクロデキストリン未置換環、（Ｃ）部分的硫酸化β −シクロデキストリン環、（Ｄ）プロピル化β−シクロデキストリン環、（Ｅ） 硫酸化β−シクロデキストリン環、および（Ｆ）メチル化β−シクロデキストリ ン環である。数字は試験化合物の％希釈を示し、１＝２．５ｍＭ濃度を表わす。 第３図は、ＨＩＶ　ＲＮＡ産生におよほすβ−シクロデキストリンテトラデカス ルフェート（β−ＣＤ−１４３またはβ−ＣＤ−ＴＤＳ）の作用を示す。ウィル ス粒子をＩＭのβ−ＣＤ−１４３の存在下または非存在下で標的細胞とインキュ ベートした。感染後７２時間目、細胞を洗浄し、ドツトプロット　アッセイを行 ってウィルスＲＮＡ産生の存在または非存在を判定した。（Ａ）では標的細胞を 硫酸化β−シクロデキストリンの存在下（レーンＡ）、シクロデキストリンの非 存在下（レーンＢ）、または未置換β−シクロデキストリンの存在下（レーンＣ ）で感染させた。細胞の４希釈は左から右であり、１０１細胞／使用ウエルで開 始した。（Ｂ）ではウィルス感染細胞（＋）または非感染細胞（−）のウィルス ＲＮＡ産生能をドツトプロット分析によりアッセイした。ＣＤは１ｍＭβ−ＣＤ −１４３とインキュベートした感染細胞である。細胞の各希釈は上から下であり 、そして１０＠細胞／ウエルで開始した。 第４図は１ｍＭβ−ＣＤ−１４３の存在下に感染Ｈ９細胞により生成された旧ソ −１粒子の電子顕微鏡写真を示す。生成されたウィルス粒子の成熟形態（左上） ならびに出芽中のウィルスに注目。 第５図は１μＭのβ−ＣＤ−１，４３の存在下におけるモノクローナル抗体結合 を示す。ヒトＴ細胞系ＣＥＭをＩＭのβ−ＣＤ−１４３とブレインキュベートし 、続いて下記６゜１、項に注記される種々のモノクローナル抗体とインキュベー トした。蛍光ヒストグラムは列挙した各モノクローナル抗体の相対的蛍光強度（ 横軸）対相対的細胞数（縦軸）を示す。第１次抗体結合をβ−ＣＤ−１４３の存 扛下（右）または非存在下（左）で評価した。 第６図は旧■感染力におよぼすデキストランポリスルフェートおよび置換β−シ クロデキストランの作用を比較する。（Ａ）ではシンシチウム阻止の度合いを添 加各化合物に関して縦軸に示す。５ＵＬ＝６００μＭβ−ＣＤ−１４３、ＡＩ、 ＝６００ｕＭ未置換β−ＣＤ、　Ｐｒｏ＝６００　μＭプロポキシル化β−ＣＤ 、　２ＭＥＴ＝３００μＭメトキシル化β−ＣＤ、　ＤＳ５・６００μＭデキス トラン硫酸５，０００．　ＤＳ５００・６００μＭデキストラン硫酸５００．０ ００各３時点の結果を示す。（Ｂ）では逆転写酵素アッセイを使用した同様の結 果を示す。 感染性ウィルス粒子を硫酸化β−シクロデキストリン（レーン１）、デキストラ ン硫酸５．０００（レーン２）または培地（レーン３）の存在下で６日間インキ ュベートし、そこで細胞を新鮮な培地に再懸濁し、そしてさらに１００日間イン キュベート収穫した。逆転写酵素活性は下記６３１０項記載のようにしてアッセ イした。添加化合物の各希釈を下（２，５ｍＭの最高濃度）から上（最低濃度） に示す。 ５、発明の詳細な記載 本発明は細胞と相互作用できてウィルスが細胞に結合するのを妨害しつる炭水化 物阻止剤を使用する、ウィルスによる細胞の感染を阻止する方法を提供する。 本発明はまたウィルスの細胞−細胞伝達を阻止するためのかかる炭水化物阻止剤 の使用法にも関する。本発明はさらにシンシチウム形成を阻止するためのかかる 炭水化物阻止剤の使用法をも提供する。本発明はさらに少なくとも１種の抗ウィ ルス剤と組み合せた炭水化物阻止剤を含んでなる組成物にも関する。また少なく とも１種のステロイドまたは非ステロイド有機化合物（ここでステロイドはグル ココルチコイド活性を含有しない）と組み合せた炭水化物阻止剤を含んでなる組 成物も提供される。 ５．１．炭水化物阻止剤二オリゴサツカライド本発明の方法に従い使用するのに 好適な炭水化物阻止剤は１２個までの糖モノマーを育する環状オリゴサツカライ ドの非常に水溶性の高い１種またはそれ以上の誘導体を含んでなる。オリゴサツ カライドは共に結合した２個から約１０個までの単糖を含有する炭水化物として 一般に定義される。ポリサッカライドは１０個をこえる単糖が共に結合している 。しかしながら、ここにおける目的のためには、オリゴサツカライドなる用語は 共に結合した２から約１２の単糖を含有する炭水化物を意味するのに用いられる 。約１２未満の糖モノマーを有するオリゴサツカライドが用いられるのか好まし い。 さらに好ましい環状オリゴサツカライドはα−１β−９またはγ−シクロデキス トリンのような６−８糖モノマーを存する環状分子からなる。シクロデキストリ ン（ＣＤ）は、少なくとも６個のグルコビラノース単位を有する環状、非線状オ リゴサツカライドである。１２個までのかかる単位を有するシクロデキストリン が知られているが、最初の３種の同族体のみが充分に研究されている。低分子量 シクロデキストリンの一般名称は、それぞれ６．７および８グルコビラノ一ス単 位に相当するα−９β−９およびγ−シクロデキストリンである。シクロデキス トリンはまた時としてシクロアミロースとしても知られている。数多くのシクロ デキストリン誘導体が知られている。一般に、これらの化学的に修飾されたシク ロデキストリンはアルファ（１−４）へミアセタール結合を妨げることなく、炭 素２，３゜または６に結合した第１または第２ヒドロキシル基の反応により形成 される。グルコース以外の糖例えばアラビノース、ガラクトース、および他の５ −および６−炭素種、および「糖」として当業者に知られている他の多くの他の 形態も使用できる。 非イオン性および／またはイオン性置換基を担持する非常に水溶性の高い環状オ リゴサツカライドが本発明に従って使用できる。好適な高水溶性環状オリゴサツ カライド誘導体はメチル、エチル、その他のようなアルキル置換基を包含するが それらに限定されない非イオン性置換基を有するα−２β−１およびγＣＤ誘導 体、ならびに多数のヒドロキシル基がＣＤの親水活性を増大させるために他の基 により置換されているものが包含される。かかる基には、エステル、エーテル（ 例えばアルコキシ）、チオエステル、チオエーテル、カルボン酸、炭水化物、ま たは極性性または水素結合性成分により親水活性をもたらす他の基が包含される 。 置換はヒドロキシル基のいくつかまたは全てで起りつる。好ましい実施態様にお いては、環状オリゴサツカライドは約１〇−約１６個の基を含有する。 本発明に有用な環状オリゴサツカライドは高度に親水性であり従って非常に水溶 性が高い。高度に親水性である特性は恐らく細胞表面と相互作用できるのに重要 である。親水活性は水への溶解度により測定される、水への親和性により適度に 大ざっばに示される。溶解度は０℃で測定することが重要である。なぜならそれ より高い温度では最も好適な誘導体は溶解度が高すぎて意味のある測定が困難だ からである。 イオン性および／または非イオン性置換基を担持する非常に水溶性の高い環状オ リゴサツカライド誘導体がいくつかの場合には有利な性質を有しうろこと、およ びそれらが本発明の範囲内であることか意図される。 水溶性の高い誘導体が一般に有用であると考えられているが、塩誘導体が好まし い。ここで用いられる「溶解度が高い」なる用語はＯ″Ｃで測定して少なくとも ２０ｇｍ／１００ｍ１好ましくは３０ｇｍ／１００ｍ１以上の溶解度を指す。 ここで用いられる「塩誘導体」なる語は好適な反応剤との反応により環状オリゴ サツカライドから誘導されるイオン性化合物を意味する。好ましい塩誘導体は、 無毒性の生理学的に受容できるカチオンと一緒のスルフェート、ホスフェート、 カルボキシレートおよびそれらの混合物からなる群から選択される置換基を有す る環状オリゴサツカライドにより提供される。該好ましい誘導体の多くが既知化 合物である（Ｃｒｏｆ　ｔおよびＢａｒｔｅｃｈ、　１９８３．　Ｔｅｔｒａｈ ｅｄｒｏｎ　３９：１４１７−１４７４）。しかし多くの有用でありうる形態は 、既知化合物の構造的または化学的変形物であることができる。誘導体の好まし い塩形態のいくつかはナトリウムおよびカリウム形態である。なぜならこれらは 有機アニオンに水溶性増大を付与する傾向があるからである。ここで有用な塩誘 導体は水溶液中にある場合電解質および高分子電解質に特徴的な電解質導電性お よび浸透圧性質を示す。 特に好ましい塩誘導体は約１２−１６個のスルフェート基を含有するβ−シクロ デキストリン誘導体であろう。 グルコース２単位当り平均１スルフエート基またはグルコース１単位当り平均２ スルフェート基のような、グルコース単位当り種々の硫酸化度が用いられうる。 グルコース単位当り約２スルフエート基を有するシクロデキストリンが好ましい 。 前記は本発明の実施に有用でありうるオリゴサツカライドの一般的理解を提供す るために示したものである。しかしながら、かかるオリゴサツカライドはそれら がなんであるかというよりむしろそれらがなにをするかにより最善に記載される ことが理解されるべきである。ここで有用であるオリゴサツカライドは、ウィル スの宿主細胞への結合を妨害する様式で宿主細胞となりうるものと相互作用でき るものである。当業者は、ウィルスの宿主細胞への結合を妨害する様式は関連す る特定のウィルス−宿主細胞結合に従い変化しようことを認識するであろう。オ リゴサツカライドの異なる部分は特定のウィルス−宿主細胞相互作用の特異的な 要求に従い、宿主細胞となりつるものへの結合に関与することが予想される。 ５．２．抗ウィルス剤 本発明の一実施態様によれば、少なくとも１種の抗ウィルス剤と組合せた非常に 水溶性の高い環状オリゴサツカライド誘導体が細胞とのウィルスの相互作用を妨 害するのに使用される。抗ウィルス剤は、ウィルスの細胞への結合、ウィルスの 細胞への侵入、ウィルスの脱汁液、ウィルス核酸複製の阻害、ウィルスタンパク 質合成の阻害、およびウィルス粒子の成熟を包含するがそれらに限定されないウ ィルス複製サイクルの任意の段階を阻害する任意の有機または無機化合物である 。 抗ウィルス剤の例はヌクレオシド誘導体である。ヌクレオシド誘導体は、ＲＮＡ およびＤＮＡの構成単位であるプリン（アデノシンおよびグアノシン）およびピ リミジン（チミジン、ウリジン、およびシチジン）ヌクレオシドの修飾形態であ る。現在特許請求する発明において利用できるヌクレオシド誘導体は、ＡＺＴ（ ３°−アジド−２’、３’−ジデオキシチミジン、アジドチミジン、シトプシン （ｚｉｄｏｖｕｄｉｎｅ）　）　；２“、３゛ジデオキシアデノシン、２゛、３ °ジデオキシグアノシン、２°、３゛ジデオキシシチジン、２゛、３°ジデオキ シチミジン、および２゛、３“ジデオキシイノシンを含む２°、３゛ジデオキシ ヌクレオシド；３゛−デオキシチミジン−アレン（ａｌｅｎｅ）（３°−デオキ シ−２°、３゛−ジデヒドロチミジン）：およびＤ４Ｔ（２°、３゛−ジブ１ニ ドロー２′、３“−ジデオキシチミジン） を包含するがそれらに限定されない。ヌクレオシド誘導体の他の例には、ＣＤ４ ペプチドまたはその類似体およびピペリジン（ｂｙｐｅｒｉｅｉｎ）が包含され るがそれらに限定されない。 ５．３．ステロイドおよび非ステロイド有機化合物本発明は環状オリゴサツカラ イド誘導体を単独でまたは細胞増殖モジュレータ−すなわち、促進および阻害を 包含する増殖挙動を改変または変化させつる化合物である、ステロイドまたは非 ステロイド有機化合物と組合せて含有する任意の組成物を提供する。 ステロイド増殖モジュレート性化合物のうちで最も好ましいものは、グルココル チコイド活性およびミネラロコルチコイド活性を欠く潜在性の増殖阻害性ステロ イドである。なぜならかかる活性は望ましからぬ副作用であり、そして本発明の 目的にとってステロイドの用量の大きさまたは使用度合いを限定するからである 。かかる最も好ましいステロイドには、１１α、１７゜２１−トリヒドロキシプ レグホー４−エン−３，２０−ジオン（１１−デスオキシコルチゾールまたはコ ルチキソロン）、１７α、２】−ジヒドロキシプレグナ−４、９（１１）−ジエ ン−３，２０−ジオンおよびテトラヒドラコルチゾールがある。 非ステロイド有機化合物には、本質的にはペプチド、炭水化物または脂質であり うる化合物が包含されるがそれらに限定されない。かかる化合物の例には、イン ターロイキン−１，インターロイキン−２およびインターフェロンα、β、およ びγが包含されるがそれらに限定されない。 ５．４．適用および使用方法 本発明は細胞のウィルス感染を阻止する新規な方法を提供する。宿主細胞と相互 作用しうる炭水化物阻止剤が細胞にウィルスが結合するのを妨害するために提供 される。この炭水化物阻止剤は約１２個までの糖モノマーを有する１種またはそ れ以上のオリゴサツカライドを含んでなる。宿主細胞は炭水化物阻止剤が細胞と 相互作用できてその結果ウィルスが細胞に結合するのを妨害できるように選択さ れた量、時間および条件下で炭水化物阻止剤と接触される。 炭水化物阻止剤はウィルスが細胞に結合するのを妨害するのに有効な濃度で細胞 に投与される。細胞に投与される任意の特定のオリゴサツカライドの濃度は、細 胞を取り囲む媒体中へのその溶解度、ウィルスの宿主細胞となりえるものへの結 合を妨害するその能力および細胞の他の生物学的系統におよぼすその作用のよう なパラメーターの如何による。約０．１５−２ミリモルの範囲の濃度でウィルス の細胞への結合が妨害されることが予想される。炭水化物阻止剤はウィルスの細 胞への結合を妨害できかつそれを維持するに充分な時間細胞に投与される。当業 者は特定の炭水化物阻止剤か投与される時間の長さは、投与される炭水化物阻止 剤の濃度、ウィルス−宿主細胞相互作用の種類および炭水化物阻止剤がウィルス の細胞への結合を妨害する能力のような因子の如何による。 特定の炭水化物阻止剤がウィルスのありうる宿主細胞への結合を妨害する条件は 下記６．１１項に記載されるシンシチウム阻止アッセイのような好適なアッセイ で測定できる。かかるアッセイは細胞のウィルス感染を阻止するのに最も有効な 炭水化物阻止剤の濃度を判定する助けとなろう。 当業者は、これら濃度の炭水化物阻止剤は細胞表面で身体の細胞外媒体中に少な くとも前記濃度を付与する用量を用いていくつかの投与経路の任意のものにより 、ヒトを含めた哺乳動物体内の細胞に提供されうろことを認識するであろう。か かる投与経路には、とりわけ経口、静脈内および経皮経路が包含される。 本発明の方法はウィルス感染の治療に用いるのに好適である。それらは、ヒト免 疫不全ウィルス−１（ＨＩＶ−１）、ヒト免疫不全ウィルス−２（旧Ｖ−２）、 ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルス−１（ＨＴＬＶ−１）、ヒトＴ細胞リンパ向性ウ ィルス（ＨＴＬＶ−ＩＩ　）、トリ白血病ウィルス、ラウス肉腫ウィルス、トリ 赤芽球症ウィルス、ニワトリ骨髄芽球症ウィルス、ネコ白血病ウィルスおよびウ シ白血病ウィルスを包含するがそれらに限定されないレトロウィルスに使用でき る。これらはまたバラミクソウィルス（例えば、はしかウィルスおよびレスビラ トリイシンシチウムウイルス）およびヘルペスウィルス（例えばエプスタインパ ールウィルス）にも用いられうる。かかる化合物は、ウィルスの細胞への結合を 妨害する作用ができる。かかる細胞にはリンパ芽球細胞（Ｔ細胞およびＢ細胞） および単球が包含されるがそれらに限定されない。 ウィルスが宿主細胞となりうるものに結合するのを阻止することは細胞のウィル スによる感染を予防するのに重要であると考えられている。ＨＩＶ−１または旧 Ｖ−２のようなレトロウィルスの場合、宿主細胞への結合および侵入はウィルス のライフサイクルの重要な部分である。もしレトロウィルスの細胞への侵入が阻 止されれば細胞がウィルスに感染することはなかろう。レトロウィルスそしてよ り詳しくは旧Ｖ−１のようなウィルスによる感染の結果のひとつは、細胞が共に 融合し始めてシンシチウムを形成することである。シンシチウムの形成は冒され た細胞には致命的である。 さらに、いくつかの細胞表面レセプターはまた短いポリサッカライド残基を有す るある種の細胞外物質を認識する酵素でもあると考えられている。これらの細胞 表面レセプターのいくつかは、糖タンパク質および他の生物学的分子に存在する 短いポリサッカライド残基を認識するグリコジルトランスフェラーゼであると考 えられている。ウィルス表面上に見られ、それによってウィルスが特定の細胞型 または種特異的向性を示すものである糖タンパク質も細胞の感染に先だち宿主細 胞に結合するのにかかる細胞表面レセプター／酵素を用いると考えられている。 ウィルスとありうる宿主細胞との間の相互作用の阻止は、シンシチウム形成が疾 患の経過におけるウィルスまたはウィルス物質の作用の重要な部分である疾患の 病態生理学を最小限に抑制するのに重要である。 本発明はまたウィルスの細胞から細胞への伝達を阻止する方法をも提供する。宿 主細胞と相互作用しつる炭水化物阻止剤が一細胞から他の細胞へのウィルスの伝 達を妨害するために提供される。かかる細胞の例には、Ｔ細胞、Ｂ細胞、および 単球が包含されるがそれらに限定されない。宿主細胞は、炭水化物阻止剤が細胞 と相互作用して細胞から細胞へのウィルスの伝達を妨害しつるために選択された 量、時間および条件下に炭水化物阻止剤と接触される。炭水化物阻止剤は非常に 水溶性の高い環状オリゴサツカライド誘導体である。 これらの方法は、ヒト免疫不全ウィルス１　（ＨＩＶ−１）、ヒト免疫不全ウィ ルス２　（ＨＩＶ−２）、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＩ　（ＨＴＬＶ−１） 　、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＩＩ　（ＨＴＬＶ−ＩＩ　）、トリ白血病ウ ィルス、ラウス肉腫ウィルス、トリ骨髄芽球症ウィルス、ネコ白血病ウィルス、 およびウシ白血病ウィルスを包含するがそれらに限定されないレトロウィルスで の使用に好適である。これらの方法はまたバラミクソウィルス（例えば、はしか ウィルスおよびレスビラトリイシンシチウムウイルス）およびヘルペスウィルス （例えばエプスタインパールウィルス）でも使用できる。 本発明はまた細胞間のシンシチウム形成を阻止する方法をも提供する。ウィルス と細胞との相互作用を阻止する炭水化物阻止剤が提供される。かかる細胞の例に はＴ細胞、Ｂ細胞および単球が包含されるがそれらに限定されない。炭水化物阻 止剤は作用剤が細胞と相互作用できるために選択された条件下で細胞に投与され 、かくしてシンシチウム形成が阻止される。本発明の炭水化物阻止剤は非常に水 溶性の高い環状オリゴサツカライド誘導体である。これらの方法は、ヒト免疫不 全ウィルスｌ　（ＨＩＶ−１’）　、ヒト免疫不全ウィルス２（旧■−２）、ヒ トＴ細胞リンパ向性ウィルスｉ　（ＨＴＬＶ−１、）、ｔニドＴ細胞すンパ向性 つイ／ｌ、　スＩＩ　（ＨＴＬＶ−Ｉ［”）、トリ白血病ウィルス、ラウス肉腫 ウィルス、ニワトリ骨髄芽球症ウィルス、ネコ白血病ウィルス、およびウシ白血 病ウィルスを包含するがそれらに限定されないレトロウィルスでの使用に好適で ある。これらの方法はまたバラミクソウィルス（例えば、はしかウィルスおよび レスビラトリイシンシチウムウイルス）およびペルペスウイルス（例えばエプス タインパールウィルス）でも使用できる。 ウィルス感染、ウィルスの細胞−細胞伝達およびシンシチウム形成におよぼす炭 水化物阻止剤の有効性は当業上知られた操作を用いてアッセイできる。かかる操 作の記載は下記６．１項に示される。 本発明はさらに上記５．２項記載の抗ウィルス剤と組み合せた、上記５．１項記 載の非常に水溶性の高い環状オリゴサツカライド誘導体の組成物を提供する。か かる組成物はウィルスの細胞への結合を阻止するのに使用できる。もう一つの実 施態様においては、この組成物はウィルスの細胞−細胞伝達を阻止するのに使用 できる。さらに他の実施態様においては、かかる組成物はシンシチウム形成を阻 止するのに使用できる。これらの組成物は、ヒト免疫不全ウィルス１、ヒト免疫 不全ウィルス２、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＴ　（ＨＴＬｖ−１）、ヒトＴ 細胞リンパ向性ウィルスＩＩ　（ｌ（ＴＬＶ−ＩＩ　）、トリ白血病ウィルス、 ラウス肉腫ウィルス、トリ骨髄芽球症ウィルス、ネコ白血病ウィルス、およびウ シ白血病ウィルスのようなレトロウィルスで使用できる。 さらに、これらの組成物はパラミクソウィルス（例えば、はしかウィルスまたは レスビラトリイシンシチウムウイルス）またはヘルペスウィルス（例えばエプス タインパールウィルス）にも使用できる。ウィルス感染またはシンシチウム形成 におよぼす本発明組成物の有効性は、当業上知られた操作を用いてアッセイでき る。かかる操作についての記載は下記６．１項に示される。 本発明はさらに、上記５．１項記載の非常に水溶性の高い環状オリゴサツカライ ド誘導体の組成物を提供する。かかる組成物は上記５．３項記載の増殖モジュレ ート活性を含有するステロイドまたは非ステロイド有機化合物と組合せて細胞へ のウィルス結合を阻止するのに使用できる。これらの組成物は、ヒト免疫不全ウ ィルス１１ヒト免疫不全ウイルス２、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＩ　（ＨＴ ＬＶ−１’）　、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＩＩ　（ＨＴＬＶ−ｎ　）、ト リ白血病ウィルス、ラウス肉腫ウィルス、トリ骨髄芽球症ウィルス、ネコ白血病 ウィルス、およびウシ白血病ウィルスのようなレトロウィルスで使用できる。さ らに、これらの組成物はＡＩＤＳ患者にしばしば現われるカボジ肉腫の治療にも 使用できる。ウィルス感染またはシンシチウム形成に及ぼす本発明組成物の有効 性は当業上知られた操作を用いてアッセイできる。かかる操作に関する記載は下 記６．１項に示される。 本発明はさらに上記５．１項記載の非常に水溶性の高い環状オリゴサツカライド 誘導体の組成物を提供する。 かかる組成物は５．３項記載の細胞増殖モジュレート活性および上記５．２項記 載の抗ウィルス剤を含有するステロイドまたは非ステロイド有機化合物と組合せ て細胞へのウィルス結合を阻止するのに使用できる。これらの組成物は、ヒト免 疫不全ウィルスｌ、ヒト免疫不全ウィルス２、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＩ 　（ＨＴＬＶ−１）、ヒトＴ細胞リンパ向性ウィルスＩＩ　（）ＩＴＬＶ−ＩＩ 　）、トリ白血病ウィルス、ラウス肉腫ウィルス、トリ骨髄芽球症ウィルス、ネ コ白血病ウィルス、およびウシ白血病ウィルスのようなレトロウィルスで使用で きる。 さらに、これらの組成物はＡＩＤＳ患者にしばしば現われるカボジ肉腫の治療に も使用できる。ウィルス感染またはシンシチウム形成に及ぼす本発明組成物の有 効性は当業上知られた操作を用いてアッセイできる。かかる操作に関する記載は 下記６．１項に示される。 ６、実施例：合成シクロデスキトリンはインビトロでＨＩＶ感染を阻止する 下記実施例は説明のために提供されるのであって本発明を制限するものではない 。本発明はいくつかの好ましい実施態様および実施例に関してここに記載されて いる。しかしながら、明らかな変形は当業者には明らかであろう。本発明は詳細 な例示された実施態様に限定されるものと考えるべきでない。 ６３１、材料および方法 融合阻止（シンシチウム）アッセイは刊行された方法（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈら、 　Ｎａｔｕｒｅ　３１２：　７６３．　（１９８４）および５ｏｄｒｏｓｋｉら 、　Ｎａｔｕｒｅ　３２２：　４７０．　（１９８６））に従い行った。 ５ｕｐ−ＴＩ細胞はＨＩＶ−１産生細胞系と共に培養した場合、それらの細胞融 合の度合いが速いので好ましい標的細胞である。細胞培養はＤａｌｇｌｅｉｓｈ ら、　（Ｎａｔｕｒｅ　３１２ニア６３゜（１９８４））の方法に従い行われる 。５ｕｐ−ＴＩ細胞を９６ウエルプレート（ＲＰＭｒ　１６４０＋１０％ＦＣ３ 中１０＋１飽に入れ、３７°Ｃでβ−シクロデキストリンテトラデカスルフェー ト（β−ＣＤ−ＴＤＳまたはβ−ＣＤ−１４３）の希釈物の存在下または非存在 下にインキュベートした。次にＨＴＬＶ−ＩＩＩ　Ｂ　（ＨＩＢ−１）またはＷ ＭＪ感染Ｈ９細胞を５ＸＩＯ’／ウエルで加え、１８時間抜１６×視野当りの多 核巨細胞の数をＺｅｉｓｓ逆視野位相差顕微鏡で計数した。シンシチウムは容易 に同定されβ−ＣＤ−ＴＤＳの種々の希釈物によるシンシチウムの阻止をβ−Ｃ Ｄ−ＴＤＳを含まない調製物と比較できる。当業者には、旧Ｖ−１により感染さ れやすい細胞とＨＩＶ−１エンベロープ糖タンパク質を発現する細胞との間のシ ンシチウム形成は）ＩＮ’−１感染に伴う同じ分子的現象であるが、ずっと危険 が少なくウィルスそのものにさらされる恐れを伴うことなく、感染メカニズムお よびＨＩＢ−１細胞内感染メカニズムに及ぼすモジュレート因子の作用を研究す るのに使用できる。 種々の希釈物をスクリーニングするために、β−ＣＤ−ＴＤＳの１５０μＭ溶液 の１０倍希釈物を調製しそして前記のようにしてシンシチウムアッセイに直接加 えた。 ６　、　Ｉ、　１．　シンシチウムアッセイＨＩＶ利融合のアッセイには、５ｕ ｐｔ　Ｔｌ細胞を標的細胞として用いた。それらは、ＨＩＶ−１（Ｈ９／ｌ１ｌ ｂ）産生細胞系と培養した場合、速やかに融合する。旧Ｖ−２媒介細胞融合をア ッセイするには、Ｈ９細胞を標的細胞として用いた。それラバ、ＨＩＶ−２（Ｃ ＥＭＲＯＤ　２）産生細胞系と培養した場合に速やかに融合する。ＨＩＶ感染細 胞を９６ウエルプレート（ＲＰＭＩ　１６４０＋１０％ＦＣ３中１０＋１巾は非 存在下にインキュベートした。次に標的細胞を５Ｘ　１０’／ウエルで加え、そ してシンシチウムの数を本文中に記載されているインキュベート期間後に定性的 に測定する。 ６　、　１．　２．逆転写酵素アッセイウィルス感染細胞を遠心によりペレット となしそして培養上清５０μｌを各ウェルから収集してアッセイした。培養上清 （２５μＩ）を９６ウエル丸底プレートに入れ、転写酵素カクテル５０μｌを各 ウェルに加えた。カクテルは５０ｍＭ　）リス−〇ＣＩ，　ｐＨ８．０．　２０ ｍＭ　ＤＴＴ．　０．６ｍＭＭｎＣ１ｔ．　６０ｍＭ　ＮａＣ１．　０．０５％ ＮＰ−４０．　５　μｇ／ｍｌ　ｄｔ（オリゴデオキシチミジル酸）、１０μｇ ／ｍ　ｌポリＡ（ポリリポアデニル酸）　、１０，ｃＪ　ｄＴＴＰ．　Ｉ　Ｃｉ ／ｍｍ　”Ｐ　ｄＴＴＰである。 次にプレートを３７°Ｃで６０分間インキュベートした。インキュベート後、試 料をＷｈａｔｍａｎ　ＤＥＡＥ−８１紙にスポットし、洗浄し、計数または直接 オートラジオグラフィーにより分析した。 ６　、　１．　３．ウィルスＲＮＡ分析ウィルス処理した細胞を組織培養で増殖 させ、感染７２時間目にアッセイのために収穫した。次に細胞濃度をリン酸緩衝 食塩水でｌＸｌ０’細胞／ｍｌに調整し、ドツトプロット装置を使用して、あら かじめ湿したシーンスクリーンに直接スポットした。次にフィルターを１％グル タルアルデヒドを含有する３％ＮａＣ１．　１０ｍＭＮａＨ２ＰＯ４，　（１） ８７．２）中４°Ｃで１時間固定した。固定したプロットを次にタンパク分解緩 衝液（５０ｍＭ　ＥＤＴＡ．　０．　１Ｍトリス−ＨＣｌ　（ｐＨ８．０）、　 ２０μｇ／ｍｌプロティナーゼＫ）を用いて３７°Ｃで３０分間ずつ３回すすい だ。フィルターを風乾後にプローブした。ｐＨ１ｅｎｖｌプラスミド（Ｄｒ。 Ｊ．　５ｏｃｌｒｏｆｓｋｙの寛大な贈り物）に由来しそして）ＩＸＢ２。 ＨＩＶ−　１ウイルスのエンベロープ領域をコードする５ａｉｌ−Ｘｈｏｌプロ ーブを標準法を用いるランダムプライマー法により標識しそして先に記載される ようにして（Ｗｅｉｎｅｒら，　１９８６．　Ｃｅ１ｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　１ ００：１９７）フィルターにハイブリダイズさせた。 ６　、　１．　４．構造的研究 ウィルス感染細胞を洗浄しそして試験化合物の存在下または非存在下で新たな培 地中に再懸濁した。４８時間培養後、培養物をペレットにし、１％グルタルアル デヒド、０．ＩＭカコジルレートＨＣ１．　ｐＨ７．３　、続いて０８０４中で 固定し、そして電子顛微鏡によりこれらの切片を検査するために５ｐｕｒ　ｒｅ ｓｉｎ中に封埋した。 ６　、　１．　５．サイトフルオリメトリーヒトＴ細胞系を遠心しモしてＦＡＣ ３緩衝液（０．１％ＮａＮ３を含有するリン酸緩衝食塩水中１％ウシ血清アルブ ミン）で２回洗浄した。細胞を１０７／ｍｌで再懸濁し、そして指示されている ようにしてβ−ＣＤ−ＴＤＳの存在下または非存在下でブレインキュベートした 。続いて第１次抗体を加えさらに３０分間おき、試料を先に記載されている　（ Ｗｉ　ｌｌｉａｍｓら．　１９８８，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　 Ｓｃｉ。 Ｕ．Ｓ．Ａ．　８５：６４８８）ようにして調製した。 ６、２．結果 ６、２．１．置換β−シクロデキストリンによる旧■感染力の阻害 ヒトレンチウィルスの顧著な特色はそれらの標的細胞との融合能力である。イン ビトロでヒト標的細胞系で分析した場合、ＨＩＶに媒介された感染により多核巨 細胞またはシンシチウムの形成を生じる。かかるシンシチウムはＡＩＤＳ患者で 観察される感染に特徴的である免疫細胞減少の病理の一因をなすことが観察され ている。この融合過程は、融合がエンドサイト−シス小胞の酸性ｐＨを必要とし ないという点で、多くの他のレトロウィルスの細胞侵入メカニズムとは異なる。 インビトロでのＨＩＶ媒介細胞融合はインビボでのウィルス侵入と類似の方法で おこると考えられる。 一連の予備実験において、５ｕｐ−７１細胞の）ｆｌＶ利の融合により誘導され たシンシチウムアッセイは上記６、１。 １項記載のようにして行った。結果を第１表に示す。 第１表に示されるように、１、５μＭー１，５００μＭの濃度のβ−ＣＤ−ＴＤ Ｓで、シンシチウムの阻止が観察された。 これと対照的に、０．１５μＭの濃度ではシンシチウム形成の阻止は全く観察さ れなかった。 第　１　表 シンシチウム阻止活性： ＨＴＬＶＩＩｉＢ　０　２Ｍ　４Ｌ　４Ｌ　４Ｌ（旧Ｖ−Ｉ　ＩＩＩＢ） ＨＴＬＶＩＩＩＷＭＪ　ＯＯＩｓ　３Ｍ　４Ｌａシンシチウム形成の度合 形成されたシンシチウムの大きさ 一連の付加的実験において、旧■−１誘導シンシチウムの分析は標的として未感 染５ｕｐｔ−１（ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞系）細胞とｌ１ｌｂ単離物で感染したＨ９ 細胞とを一緒に培養することにより行った。ＨＩＶ−２をアッセイするためには ＲＯＤ−２単離物で感染したＨ［ＪＴ　７８細胞をＨ９（ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞系 ）標的細胞と共に培養した。置換基なしくβ−ＣＤ）、４スルフエート基（β− ＣＤ−４３）　、および４プロポキシ基（β−ＣＤ−４Ｐ「）を有するβ−シク ロデキストリンは旧Ｖ−１のシンシチウム形成阻止に培地単独と同じように効果 がなかった。対照的に、１分子当り１４個のスルフェート基を担持するβ−シク ロデキストリン（β−ＣＤ−ＴＤＳ）は第２表および第１図に示されるように極 度に高い抗シシチウム活性を媒介した。 （本頁以下余白） 第２表 ＨｌＶ−１侵入を阻止するシクロデキストリンの能力１溶解度　０℃　β−シク ロデキストリンの濃度（咄）化合物ｂｇｉｎ／１００ｍ１　Ｈ２Ｏ２，５１，３ ，６３，３２，１６，０８，０４，０２，０１対照　４Ｌ　４Ｌ　４Ｌ孔４Ｌ　 ４Ｌ孔４Ｌ孔β−ＣＤ　Ｏ，７孔孔孔４Ｌ　４Ｌ孔４Ｌ　４Ｌ孔β−ＣＤ−Ｐｒ 　２０　１ｍ　４Ｌ　４Ｌ孔４Ｌ　４Ｌ　４Ｌ孔孔β−ＣＤ−４−７Ｓ　１３　 ３ｍ　４Ｌ　４Ｌ孔４Ｌ　４Ｌ　４Ｌ孔４Ｌβ−ＣＤ−１４Ｓ　４２　０　０　 ０　０　Ｉｓ　２ｍ　３Ｌ　４Ｌ　４Ｌβ−ＣＤ−Ｍ　３２　０　０００００３ ｍ孔４Ｌａ結果は形成されたシンシチウムの数として表わす：シンシチウムは０ −４の数字で採点し、４は広範囲に分布した多数のシンシチウム、モして０はシ ンシチウムが全く観察されなかったことを示す。 シンシチウムの大きさはＳ＝小、ｍ＝中、し＝大シンシチウムとして記録する ｂβ−ＣＤは未置換基シクロデキストリン環、β−ＣＤ−Ｐｒはプロポキシ基で 置換された基本的環構造、β−ＣＤ−１４３はスルフェートで完全に置換された 基本的環構造、β−ＣＤ−Ｍはメトキシ基で完全に置換された基本的環構造を示 す。 （本頁以下余白） １４メトキシ基を有するβ−シクロデキストリン（β−ＣＤ−１４Ｍｅ）はＢ− ＣＤ−ＴＤＳで観察されたよりも大きい度合いのシンシチウム阻止を示した。こ のシンシチウム形成の阻止は８０μＭ以下の用量で観察された。 ＨｒＶ−２のＲＯＤ−２単離物により媒介されたシンシチウム誘導に関する同様 の結果が第３表に示されているように得られた。 （本頁以下余白） 第３表 対照　孔　孔４Ｌ孔４Ｌ　４Ｌ　４Ｌ　４Ｌ　４Ｌβ−ＣＤ　Ｏ，７４１，４Ｌ 　４Ｌ　４１．４Ｌ孔４Ｌ　４Ｌ孔β−ＣＤ−１４Ｓ　４２　０　００　Ｉｓ　 ２ｍ　３Ｌ　４Ｌ　４Ｌ　４Ｌβ−ＣＤ−Ｍ　３２　０　０００００３ｍ４Ｌ４ Ｌａ結果は形成されたシンシチウムの数として表わす：シンシチウムは０−４の 数字で採点し、４は広範囲に分布した多数のシンシチウム、そしてＯはシンシチ ウムが全く観察されなかったことを示す。 シンシチウムの大きさはＳ＝小、ｍ＝中、し＝大シンシチウムとして記録する ｂβ−ＣＤは未置換基シクロデキストリン環であり、β−ＣＤ−１４３はスルフ ェートで完全に置換された基本的環構造であり、β−ＣＤ−Ｍはメトキシ基で完 全に置換された基本的環構造である。 （本頁以下余白） ポリ硫酸化β−ＣＤおよびポリメトキシル化β−シクロデキストリンの両方がＲ ＯＤ−２により媒介されたシンシチウム形成を阻止した。しかしながら、阻止の 度合いはβ−ＣＤ−１４Ｍｅが実質的に大きかった。 シクロデキストリンが旧■感染を阻止する能力を上記６．１．２項記載の逆転写 酵素アッセイを利用してインビトロで評価した。ＨＴＬＶ−ＩＩＩ　ｂ細胞を含 まないウィルス保存株を合成化合物の存在下または非存在下で標的細胞に接種し た。１０日のインキュベーション期間の後ウェルを収穫し、逆転写酵素活性につ いて採点した（第１図）。β−シクロデキストリン自体（レーンＢ）゛は逆転写 酵素活性が陽性感染対照（レーンＡ）と同様であることが明らかになったので、 ウィルス感染の阻止を全く示さなかった。部分的に硫酸化（レーンＣ）およびプ ロポキシル化β−シクロデキストリン（レーンＤ）は最小限の逆転写酵素活性阻 止しか示さず、実質的に効果がなかった。対照的に、高度に硫酸化されたβ−Ｃ Ｄ−１４３はインビトロでの感染阻止に極度に有効であった（レーンＥ）。ある 活性は３２０μＭ（希釈度４）の高さの濃度で明らかであったが、逆転写酵素活 性は、８０μＭ（希釈度６）の低濃度で劇的に阻止された。β−ＣＤ−１４Ｍｅ （レーンＦ）は、少くとも有効であり、８０μＭ−４０μＭ（希釈度７）の低い 用量の存在下でウィルスと接触している細胞からの培養物中にウィルス逆転写酵 素活性が全く示されなかった。これらの結果はシンシチウムアッセイからの結果 と同様であるが、それらは、いくつかの置換されたシクロデキストリンの少量の 存在下におけるウィルス感染力は、シンシチウム形成を完全には阻止しない濃度 でさえも著しく減少することを示している。 ６．２．２．　シクロデキストリンの作用部位シクロデキストリン化合物により 中途妨害されるウィルス病因の特定の部位を判定するために、我々は旧Ｖ−１で すでに感染した細胞の逆転写酵素に及ぼすシクロデキストリン治療の能力をアッ セイした。ウィルスを未感染細胞に加えた場合に観察された結果とは対照的に（ 上記６．２．１．項参照）、逆転写酵素の有意な阻害は全（観察されなかった。 これはシクロデキストリンがウィルスのライフサイクルの比較的初期にその作用 を及ぼすに違いないことを示唆している。 シクロデキストリンがウィルス複製に関連した段階を妨害するかどうか判定する ために、これらの化合物がウィルス核酸合成を阻害する能力を測定した。ウィル ス粒子を１ｍＭβ−ＣＤ−１４３の存在下または非存在下で標的細胞とインキュ ベートした。感染７２時間目に、細胞を洗浄しそしてドツトプロットアッセイを 行ってウィルスＲＮＡ産生の存在または非存在を判定した。硫酸化β−シクロデ キストリン（第３Ａ図、レーンＡ）の存在下で感染した標的細胞からは、はとん どまたは全く旧Ｖ−１特異的ＲＮＡが検出されなかった。未置換環および陽性対 照レーンの両方では、実質的なウィルスＲＮＡがこの同じ時点で検出された。し かしながら、ウィルス核酸複製阻害はウィルスの複製機構におよほす直接作用で はなかった。硫酸化β−シクロデキストリンとインキュベートした感染細胞はウ ィルスＲＮＡ産生能力を阻害されなかった（第３Ｂ図）。これらの結果はシンシ チウムおよび逆転写酵素アッセイを補うものであり、このことはこれらの化合物 により媒介された抗ウィルス作用が細胞へのウィルス攻撃の初期に働くことを示 唆している。 置換β−シクロデキストリンは感染細胞のウィルスＲＮＡすなわち逆転写酵素活 性を阻害しないが、これら化合物がウィルスの成熟を妨げることは可能である。 この点をさらに調べるために、我々は電子顕微鏡検査により、特別に置換された シクロデキストリンの存在下でのウィルス粒子産生を分析した。ウィルス感染細 胞を洗浄しそして試験化合物の存在または非存在下で新しい培地に再懸濁した。 ４８時間の培養期の後、培養物をペレットとなしそして１％グルタルアルデヒド 、０、ＩＭカコジレー１−　ＨＣｌ、　ｐＨ７，３、続いて０３０４中で固定し そしてうすい切片を検査のために５ｐｕｒ　ｒｅｓｉｎ中に封埋した。 ３００ｇＭ硫酸化シクロデキストリンの存在下に処理されたウィルス調製物はウ ィルス出芽および飛び出しに相当する膜が濃い領域を示した。この飛び出たウィ ルスに観察されたＨＩＶ形態はレンチウィルスファミリーに典型的である（第４ 図）。置換シクロデキストリンの存在下に産生されたウィルス粒子の詳細な形態 学的検査では正常な成熟器Ｖ表現型が示された。さらに、我々はシクロデキスト リン処理後に存在する成熟ウィルスの比率においてもまたは、これら化合物の存 在下に産生されたウィルス粒子の総数においても有意な偏差を全く観察しなかっ た。これらの結果が一緒になって、β−シクロデキストリンは旧■ウィルス産生 または成熟化に何ら直接的作用を及ぼさないことを示唆している。これらは明ら かに細胞への最初の攻撃期間中に細胞膜でその作用を及ぼす。 ６．２．３．　ＣＤ４との相互作用に及ぼすシクロデキストリンの影響 ＨＩＶ−１感染細胞およびＨＩＶ−２感染細胞の両方がＣＤ４ヒトＴ細胞表面抗 原を発現する。観察される厳密な向性は、ＣＤ４担持細胞への結合を媒介するレ トロウィルスエンベロープ糖タンパク上に提示される高アフィニティ結合部位の 現われである。いくつかの完全に置換されたシクロデキストリン分子がシンシチ ウム形成、逆転写酵素活性、および感染性ウィルスＲＮＡの移動を特異的に妨害 する能力は、ＣＤ４分子に対する抗体の作用と同様である。抗ＣＤ４抗体のサブ セットはウィルスエンベロープがこの特異的レセプターと相互作用する能力を破 壊させる。これら化合物のありうる作用方式はＣＤＪ上のこれら特異的部位との 相互作用である。それゆえ我々はＩｍＭの置換β−シクロデキストリンがＣＤ４ 糖タンパク質の異なるエピトープに対するモノクローナル抗体の結合を妨害する 能力を測定した。フローサイトメトリーをこの調査に利用した。 Ｌｅυ３ａモノクローナル抗体はＣＤ４糖タンパク質の第１のシスティン結合領 域に結合しそしてＨ（Ｖ−１、旧Ｖ−２ならびにＳＩＶ結合を直接妨害すること が示されている。ＭＴｌ１５１モノクローナル抗体はＣＤ４の第２のシスティン 結合領域に位置されそしてｇｐ１２０−　ＣＤ　４相互作用に必要な第２次構造 の制約に関係している。ＯＫｔ　４モノクローナル抗体はこれらのはじめの２個 のモノクローナル抗体から遠位の領域に結合しそしてＨＩＶウィルスとＣＤ４陽 性細胞との間の結合反応に必要でない領域に位置する。 処理細胞および対照細胞に関するこれらの抗体の反応性パターンを比較すると、 この分析の限界内において、これらのモノクローナル抗体により認識されるエピ トープはどれもＣＤ４と相互作用する能力が減少しなかったことが示される（第 ５図）。これらの結果は、ＣＤ４への結合に重要なタンパク質相互作用は、ウィ ルス結合と類似の様式で、シクロデキストリン処理に変化しないことを示唆して いる。さらに、これらの結果はまたこれらの化合物が標的細胞上のＣＤ４発現を 妨害しないことをも示唆している。これらの結果はｇｐ１２０−　ＣＤ　４相互 作用に及ぼす作用を排除しないが、これらはシクロデキストリンがＣＤ４部位で の特異的なタンパク質−タンパク質相互作用に何ら直接作用を有しないことを示 している。 ６　、２．４．デキストランポリスルフェートと置換シクロデキストリンとの比 較 最近の研究ではポリアニオンデキストラン硫酸がインビトロでＨＩＶ−１感染を 阻止する能力が示された（Ｍｉｔｓｕｙａら、１９８８．　５ｃｉｅｎｃｅ　２ ４０：６４６−６４９　ａｎｄ　Ｂａｂａら。 １９８８、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　 ８５：６１３２−６１３ｇ）置換β−シクロデキストリンで観察されたウィルス 活性の阻害はデキストラン硫酸について報告されたそれと同様であることが明ら かになった。我々はＨ■■誘導のシンシチウム形成に及ぼすこれら化合物および 置換β−シクロデキストリンの作用を評価および比較している（第６Ａ図）。 ２４時間抜に、完全に硫酸化し、たβ−シクロデキストリンおよび完全にメチル 化したβ−シクロデキストリンはデキストラン硫酸ｓ　、　ｏｏｏと同じＨＩＶ 利感染阻止能力を示した。これらの化合物は全て、シンシチウム形成を阻止する 点で比較的大きなデキストラン硫酸５００、０００よりもより効果的であった。 しかしながら、２種類の複合糖により示された抗ウィルス作用の長さには劇的な 相異があった（第６ＡおよびＢ図）。４８時間までに、デキストラン硫酸５　、 ０００の活性はほぼ９０％減少した。メチル化または硫酸化シクロデキストリン で処理した培養物においては、抗シンシチウム活性は培養期間中変化しなかった 。この結果は培養１４４時間までにさらに著しくなりその時点でデキストラン硫 酸５．０００の抗ウィルス作用は数百μＭの範囲で存在する場合でさえも非常に 少ないかまたは全（ない。対照的に、置換β−シクロデキストリンは連続培養６ 日後でその効力のわずか５０％しか失わなかった。 これらの結果は、ウィルス侵入および感染力の特異的なインジケーターとして逆 転写酵素アッセイを利用して確認されている（第６Ｂ図）。感染性ウィルス粒子 を硫酸化β−シクロデキストリン（レーン１）、デキストラン硫酸（レーン２） または培地（レーン３）の存在下６日間インキュベー・・トし、その時点で細胞 を新鮮な培地に再懸濁し、さらに１０日インキュベートし、収穫しそして逆転写 酵素活性をアッセイした。硫酸化β−シクロデキストリンは長期間の組織培養後 でさえも存意な抗ウィルス活性を媒介した。この結果は組織培養中における酵素 分解に対するデキストラン硫酸と合成β−シクロデキストリンとの間の影響の受 けやすさの差に関連しているのであろう。 ６．３．考察 我々は炭水化物ウィルス阻止剤、特に完全に置換された硫酸化またはメチル化β −シクロデキストリンの劇的な抗ウィルス作用を示してきた。これらの抗ウィル ス作用はシクロデキストリン環により提示される側鎖と密接に関連しており、環 それ自体の機能ではない。 さらに、我々はいくつかの種々に置換された分子の作用を検査しそして側鎖の特 定のサブグループだけが有意な抗）１１Ｖ作用を媒介できると結論している。こ れらの化合物は旧■病因と関連した初期の事象を妨害することが明らかになった 。これらの結論に関していくつかの証拠がある。完全に硫酸化されたβ−シクロ デキストリンはすでにＨＩＶ−１に感染した細胞には何ら検出可能な作用を及ぼ さない。我々はシンシチウムアッセイにおいて保護性であることが示された濃度 のシクロデキストリンとインキュベートした感染細胞系からの逆転写酵素活性、 ウィルス粒子産生またはウィルス粒子形態には何ら作用がないことを観察してい る。すなわちウィルス感染に先立っている。対照的に同濃度のシクロデキストリ ンは、シンシチウム形成に加え、逆転写酵素アッセイおよびウィルスＲＮＡの存 在により示されるように未感染細胞の旧■感染を阻止する。これらを合わせると 、これらのデータはウィルスと細胞間の出会いの初期にウィルス機能を妨害する 様式を裏書きする。 我々はこれら化合物が、１（ＩＶに対する既知のレセプターに結合するモノクロ ーナル抗体を特異的に阻害する能力を検査した。その結果は、ウィルス機能に必 要なＣＤ４の領域に特異的に結合する抗体に対する何ら存意な阻害は存在しない ことを示している。この所見は、これらの化合物でのヒト細胞の処理がこの免疫 学的に重要なレセプターの機能に作用していそうにないという事実を強調してい るので重要である。 いくつかの研究では、種々の状況において、シクロデキストリンポリスルフェー トを包含する高度に親水性のグリコサミノグリカンおよび硫酸化糖類（Ｆｏｌｋ ｍａｎら、１９８９．　５ｃｉｅｎｃｅ　２４３：１４９０−１４９３　ａｎｄ 　Ｆｏｌｋｍａｎ　ａｎｄＷｅｉｓｚ、　１９８９．　Ａ＋＋＋ｅｒ、　Ｃｈｅ ｍ、　Ｓｏｃ、　Ｓｙｍｐ、　Ｓｅｒ、　３９２：１９−３２）による、細胞表 面への吸収（付着）に対する一般的親和性か示されている（Ｆｏｌｋｍａｎら、 　１９８９．５ｃｉｅｎｃｅ２４３：１４９０−１４９３；　Ｆｏｌｋｍａｎお よびＷｅｉｓｚ、　１９８９．　Ａｍｅｒ。 Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、Ｓｙｍｐ、Ｓｅｒ、３９２：１９−３２；　Ｍｉｔｓｕｙａ ら、１９８８゜５ｃｉｅｎｃｅ　２４０：６４６−６４９；　Ｉｔｏら、１９８ ７．　Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ｒｅｓ。 ７：３６１−３６７；　ＤｅＣｌｅｒｑ、　１９８６．　Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈ ｅｍ、　２９＋１５６１−１５６９ＨＣｏ１ｅら、１９８６．　Ｎａｔｕｒｅ　 ３２３ニア２３；　Ｈｏｏｋら、１９８４゜一−Ｏ°・−・・・・Ｆ −４＆　嗜 ＦＩＧ、３８ ＦＩＧ、５ ロ （り 補正書の翻訳文提比書 平成　３年　１月　７日

Claims (173)

【特許請求の範囲】
1. １．約１２個までの糖モノマーを有する環状オリゴサッカライド誘導体を含有し 、細胞またはウイルスと相互作用してウイルスと細胞との結合を妨害しうる炭水 化物防止剤を用意する、ここで該誘導体は蒸留水中における０℃での溶解度少な くとも約２０ｇｍ／１００ｍｌを有することを特徴とし；そして この炭水化物阻止剤を細胞と相互作用させるために選択された量、時間および条 件下に該細胞を炭水化物阻止剤と接触させてウイルスが細胞に結合するのを妨害 する、 ことを含んでなる、細胞のウイルス感染防止法。
2. ２．前記炭水化物阻止剤が約０．１５マイクロモルから１．５ミリモルの範囲の 濃度で細胞に投与される請求の範囲１記載の方法。
3. ３．前記炭水化物阻止剤が約０．１５から１５０ミリモルの範囲の濃度で細胞に 投与される請求の範囲１記載の方法。
4. ４．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有する 請求の範囲１記載の方法。
5. ５．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有する請 求の範囲４記載の方法。
6. ６．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルファー、ベーターまたはガンマー シクロデキストリンである請求の範囲５記載の方法。
7. ７．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオンと 一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレートおよびそれらの混合物 からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドのアニオン塩誘 導体である請求の範囲１記載の方法。
8. ８．前記環状オリゴサッカライド誘導体が環状オリゴサッカライドスルフェート である請求の範囲１記載の方法。
9. ９．前記環状オリゴサッカライドスルフェートが約１０−１６個のスルフェート 基を含有する請求の範囲８記載の方法。
10. １０．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリン 　テトラデカスルフェートである請求の範囲８記載の方法。
11. １１．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル、 チオエステル、チオエーテル、カルボン酸および炭水化物部分からなる群から選 択される置換基を有する該オリゴサッカライドの非イオン性誘導体である請求の 範囲１記載の方法。
12. １２．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカラ イドである請求の範囲１記載の方法。
13. １３．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキシ 基を含有する請求の範囲１２記載の方法。
14. １４．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシ　ベー ターシクロデキストリンである請求の範囲１２記載の方法。
15. １５．前記アルコキシ置換オリゴサッカライドが約１０−１６個のプロボキシ基 を含有する請求の範囲１２記載の方法。
16. １６．前記アルコキシ置換オリゴサッカライドがテトラデカプロボキシ　ベータ ーシクロデキストリンである請求の範囲１２記載の方法。
17. １７．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基を 含有する請求の範囲１記載の方法。
18. １８．前記ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲１記載の方法。
19. １９．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲１８記 載の方法。
20. ２０．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲１８記 載の方法。
21. ２１．前記ウイルスがパラミクソウイルスである請求の範囲１記載の方法。
22. ２２．前記ウイルスがヘルペスウイルスである請求の範囲１記載の方法。
23. ２３．約１２個までの糖モノマーを有する環状オリゴサッカライド誘導体を含有 し、細胞またはウイルスと相互作用してウイルスと細胞との結合を妨害しうる炭 水化物阻止剤を用意する、ここで該誘導体は蒸留水中における０°Ｃでの溶解度 少なくとも約２０ｇｍ／１００ｍｌを有することを特徴とし；そして この炭水化物阻止剤を細胞と相互作用させるために選択された量、時間および条 件下に該細胞を炭水化物阻止剤と接触させて細胞から細胞へのウイルス伝達を妨 害する、 ことを含んでなる、細胞間ウイルス伝達阻止法。
24. ２４．前記炭水化物阻止剤が約０．１５マイクロモルから１．５ミリモルの範囲 の濃度で細胞に投与される請求の範囲２３記載の方法。
25. ２５．前記炭水化物阻止剤が約０．１５から１５０ミリモルの範囲の濃度で細胞 に投与される請求の範囲２３記載の方法。
26. ２６．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有す る請求の範囲２３記載の方法。
27. ２７．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有する 請求の範囲２６記載の方法。
28. ２８．前記環状オリゴサッカライドがアルファー、ベーターまたはガンマーシク ロデキストリンである請求の範囲２７記載の方法。
29. ２９．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオン と一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレートおよびそれらの混合 物からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドのアニオン塩 誘導体である請求の範囲２３記載の方法。
30. ３０．前記環状オリゴサッカライド誘導体が環状オリゴサッカライドスルフェー トである請求の範囲２３記載の方法。
31. ３１．前記環状オリゴサッカライドスルフェートが約１０−１６個のスルフェー ト基を含有する請求の範囲３０記載の方法。
32. ３２．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリン 　テトラデカスルフェートである請求の範囲３０記載の方法。
33. ３３．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル、 チオエステル、チオエーテル、カルボン酸および炭水化物部分からなる群から選 択される置換基を有する該オリゴサッカライドの非イオン性誘導体である請求の 範囲２３記載の方法。
34. ３４．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカラ イドである請求の範囲２３記載の方法。
35. ３５．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキシ 基を含有する請求の範囲３４記載の方法。
36. ３６．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシベータ ーシクロデキストリンである請求の範囲３４記載の方法。
37. ３７．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のプロボキ シ基を含有する請求の範囲３４記載の方法。
38. ３８．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカプロボキシ　ベ ーターシクロデキストリンである請求の範囲３４記載の方法。
39. ３９．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基を 含有する請求の範囲２３記載の方法。
40. ４０．前記ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲２３記載の方法。
41. ４１．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲４０記 載の方法。
42. ４２．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲４０記 載の方法。
43. ４３．前記ウイルスがパラミクソウイルスである請求の範囲２３記載の方法。
44. ４４．前記ウイルスがヘルペスウイルスである請求の範囲２３記載の方法。
45. ４５．約１２個までの糖モノマーを有する環状オリゴサッカライド誘導体を含有 し、細胞またはウイルスと相互作用しうる炭水化物阻止剤を用意する、ここで該 誘導体は蒸留水中における０℃での溶解度少なくとも約２０ｇｍ／１０ｍｌを有 することを特徴とし；そしてこの環状オリゴサッカライド誘導体を細胞と相互作 用させるために選択された条件下に前記炭水化物阻止剤を細胞に投与してそれに よりシンシチウムの形成を阻止する、 ことを包含する、ウイルス感染細胞間のシンシチウム形成阻止法。
46. ４６．前記炭水化物阻止剤が約０．１５マイクロモルから１．５ミリモルの範囲 の濃度で細胞に投与される請求の範囲４５記載の方法。
47. ４７．前記炭水化物阻止剤が約０．１５から１５０ミリモルの範囲の濃度で細胞 に投与される請求の範囲４５記載の方法。
48. ４８．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有す る請求の範囲４５記載の方法。
49. ４９．前記環状オリゴサッカライド誘導体が６−８個の糖モノマーを有する環状 分子である請求の範囲４８記載の方法。
50. ５０．前記環状オリゴサッカライドがアルファー、ベーターまたはガンマーシク ロデキストリンである請求の範囲４９記載の方法。
51. ５１．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオン と一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレートおよびそれらの混合 物からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドのアニオン塩 誘導体である請求の範囲４５記載の方法。
52. ５２．前記環状オリゴサッカライド誘導体が環状オリゴサッカライドスルフェー トである請求の範囲４５記載の方法。
53. ５３．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約１０−１６個のスルフェート基を 含有する請求の範囲５５記載の方法。
54. ５４．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリン 　テトラデカスルフェートである請求の範囲５２記載の方法。
55. ５５．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル、 チオエステル、チオエーテル、カルボン酸および炭水化物部分からなる群から選 択される置換基を有する該オリゴサッカライドの非イオン性誘導体である請求の 範囲５２記載の方法。
56. ５６．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカラ イドである請求の範囲５５記載の方法。
57. ５７．記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキシ基 を含有する請求の範囲５６記載の方法。
58. ５８．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシ　ベー ターシクロデキストリンである請求の範囲５６記載の方法。
59. ５９．前記アルコキシ置換オリゴサッカライドが約１０−１６個のプロボキシ基 を含有する請求の範囲５６記載の方法。
60. ６０．前記アルコキシ置換オリゴサッカライドがテトラデカプロボキシ　ベータ ーシクロデキストリンである請求の範囲５６記載の方法。
61. ６１．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基を 含有する請求の範囲４５記載の方法。
62. ６２．前記ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲４５記載の方法。
63. ６３．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲６２記 載の方法。
64. ６４．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲６２記 載の方法。
65. ６５．前記ウイルスがパラミクソウイルスである請求の範囲４５記載の方法。
66. ６６．前記ウイルスがヘルペスウイルスである請求の範囲４５記載の方法。
67. ６７．（１）蒸留水中における０℃での溶解度少なくとも約２０ｇｍ／１００ｍ ｌを有することを特徴とする環状オリゴサッカライド誘導体を、（２）抗ウイル ス剤と組み合わせて含有する、ヒトを含めた哺乳動物における細胞の望ましから ぬウイルス感染を阻止するための組成物。
68. ６８．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有す る請求の範囲６７記載の方法。
69. ６９．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有する 請求の範囲６８記載の方法。
70. ７０．前記環状オリゴサッカライドがアルファー、ベーターまたはガンマーシク ロデキストリンである請求の範囲６９記載の組成物。
71. ７１．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオン と一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレート、ナイトレートおよ びそれらの混合物からなる群から選択される置換基を有する該シクロデキストリ ンのアニオン塩誘導体である請求の範囲６７記載の組成物。
72. ７２．前記環状オリゴサッカライド誘導体がシクロデキストリンスルフェートで ある請求の範囲６７記載の組成物。
73. ７３．前記環状オリゴサッカライドスルフェートが約１０−１６個のスルフェー ト基を含有する請求の範囲７２記載の組成物。
74. ７４．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリン 　テトラデカスルフェートである請求の範囲７１記載の組成物。
75. ７５．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル、 チオエステル、チオエーテル、カルボン酸および炭水化物部分からなる群から選 択される置換基を有する該オリゴサッカライドの非イオン性誘導体である請求の 範囲６７記載の組成物。
76. ７６．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカラ イドである請求の範囲６７記載の組成物。
77. ７７．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキシ 基を含有する請求の範囲７６記載の方法。
78. ７８．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシ　ベー ターシクロデキストリンである請求の範囲７６記載の組成物。
79. ７９．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基を 含有する請求の範囲６７記載の組成物。
80. ８０．前記抗ウイルス剤がヌクレオシド誘導体である請求の範囲６７記載の組成 物。
81. ８１．前記抗ウイルス剤がＣＤ４ペプチドまたはその類似体である請求の範囲６ ７記載の組成物。
82. ８２．前記抗ウイルス剤がヒペリシンである請求の範囲６７記載の組成物。
83. ８３．前記ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲６７記載の組成物。
84. ８４．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲６７記 載の組成物。
85. ８５．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲８４記 載の組成物。
86. ８６．前記ウイルスがパラミクソウイルスである請求の範囲６７記載の組成物。
87. ８７．前記ウイルスがヘルペスウイルスである請求の範囲６７記載の組成物。
88. ８８．（１）蒸留水中における０℃での溶解度少なくとも約２０ｇｍ／１００ｍ ｌを有することを特徴とする環状オリゴサッカライド誘導体を、（２）抗ウイル ス剤と組み合わせて含有する、ヒトを含めた哺乳動物における細胞間のウイルス 伝達を阻止するための組成物。
89. ８９．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有す る請求の範囲８８記載の組成物。
90. ９０．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有する 請求の範囲８８記載の組成物。
91. ９１．前記環状オリゴサッカライドがアルファー、ベーターまたはガンマーシク ロデキストリンである請求の範囲８８記載の組成物。
92. ９２．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオン と一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレートおよびそれらの混合 物からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドのアニオン塩 誘導体である請求の範囲８８記載の組成物。
93. ９３．前記環状オリゴサッカライド誘導体が環状オリゴサッカライドスルフェー トである請求の範囲８８記載の組成物。
94. ９４．前記環状オリゴサッカライドスルフェートが約１０−１６個のスルフェー ト基を含有する請求の範囲９３記載の組成物。
95. ９５．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリン 　テトラデカスルフェートである請求の範囲９３記載の組成物。
96. ９６．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル、 チオエステル、チオエーテル、カルボン酸、炭水化物、ハライドおよびアルキル ハライド部分からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドの 非イオン性誘導体である請求の範囲８８記載の組成物。
97. ９７．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカラ イドである請求の範囲８８記載の組成物。
98. ９８．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキシ 基を含有する請求の範囲９７記載の組成物。
99. ９９．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシ　ベー ターシクロデキストリンである請求の範囲９７３記載の組成物。
100. １００．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のプロボ キシ基を含有する請求の範囲９８記載の組成物。
101. １０１．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカプロボキシベ ータシクロデキストリンである請求の範囲９８記載の組成物。
102. １０２．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基 を含有する請求の範囲８８記載の組成物。
103. １０３．前記ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲８８記載の組成物。
104. １０４．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲１０ ３記載の組成物。
105. １０５．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲１０ ３記載の組成物。
106. １０６．前記ウイルスがパラミクソウイルスである請求の範囲８８記載の組成物 。
107. １０７．前記ウイルスがヘルペスウイルスである請求の範囲８８記載の組成物。
108. １０８．前記抗ウイルス剤がヌクレオシド誘導体である請求の範囲１０５載の組 成物。
109. １０９．前記抗ウイルス剤がＣＤ４ペプチドまたはその類似体である請求の範囲 １０５記載の組成物。
110. １１０．前記抗ウイルス剤がヒペリシンである請求の範囲１０５記載の組成物。
111. １１１．（１）蒸留水中における０。Ｃでの溶解度少なくとも約２０ｇｍ／１０ ０ｍｌを有することを特徴とする環状オリゴサッカライドシクロデキストリン誘 導体を、（２）抗ウイルス剤と組み合わせて含有する、ヒトを含めた哺乳動物に おけるウイルス感染細胞間のシンシチウム形成を阻止するための組成物。
112. １１２．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有 する請求の範囲１１１記載の組成物。
113. １１３．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有す る請求の範囲１１２記載の組成物。
114. １１４．前記アルファー、ベーターまたはガンマーシクロデキストリン誘導体が シクロデキストリンスルフェートである請求の範囲１１３記載の組成物。
115. １１５．前記オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオンと 一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレート、ナイトレートおよび それらの混合物からなる群から選択される置換基を有する該シクロデキストリン のアニオン塩誘導体である請求の範囲１１１記載の組成物。
116. １１６．前記シクロデキストリンスルフェートが約１０−１６個のスルフェート 基を含有する請求の範囲１１５記載の組成物。
117. １１７．前記シクロデキストリンスルフェートがベーターシクロデキストリン　 テトラデカスルフェートである請求の範囲１１５記載の組成物。
118. １１８．前記アルファー、ベーターまたはガンマーシクロデキストリン誘導体が アルコキシシクロデキストリンである請求の範囲１１１記載の組成物。
119. １１９．前記アルコキシシクロデキストリンが約１０−１６個のメトキシ基を含 有する請求の範囲１１８記載の組成物。
120. １２０．前記アルコキシシクロデキストリンがテトラデカメトキシ　ベーターシ クロデキストリンである請求の範囲１１８記載の組成物。
121. １２１．前記アルコキシシクロデキストリンが約１０−１６個のプロボキシ基を 含有する請求の範囲１１８記載の組成物。
122. １２２．前記アルコキシシクロデキストリンがテトラデカプロボキシ　ベーター シクロデキストリンである請求の範囲１１８記載の組成物。
123. １２３．前記抗ウイルス剤がヌクレオシド誘導体である請求の範囲１１１載の組 成物。
124. １２４．前記抗ウイルス剤がＣＤ４ペプチドまたはその類似体である請求の範囲 １１１記載の組成物。
125. １２５．前記抗ウイルス剤がヒペリシンである請求の範囲１１１記載の組成物。
126. １２６．前記ウイルスがレトロウイルスである請求の範囲１１１記載の組成物。
127. １２７．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲１２ ６記載の組成物。
128. １２８．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲１２ ６記載の組成物。
129. １２９．前記ウイルスがパラミクソウイルスである請求の範囲１１１記載の組成 物。
130. １３０．前記ウイルスがヘルペスウイルスである請求の範囲１１１記載の組成物 。
131. １３１．（１）蒸留水中における０。Ｃでの溶解度少なくとも約２０ｇｍ／１０ ０ｍｌを有することを特徴とする環状オリゴサッカライド誘導体を、（２）潜在 細胞増殖モジコレート性ステロイドまたは非ステロイド有機化合物（ここで該ス テロイドはグルココルチコイド活性を有しない）と組み合わせて含有する、ヒト を含めた哺乳動物における細胞の望ましからぬレトロウイルス感染を阻止するた めの組成物。
132. １３２．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有 する請求の範囲１３１記載の組成物。
133. １３３．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有す る請求の範囲１３１記載の組成物。
134. １３４．前記環状オリゴサッカライドがアルファー、ベーターまたはガンマーシ クロデキストリンである請求の範囲１３１記載の組成物。
135. １３５．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオ ンと一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレートおよびそれらの混 合物からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドのアニオン 塩誘導体である請求の範囲１３１記載の組成物。
136. １３６．前記環状オリゴサッカライド誘導体が環状オリゴサッカライドスルフェ ートである請求の範囲１３１記載の組成物。
137. １３７．前記環状オリゴサッカライドスルフェートが約１０−１６個のスルフェ ート基を含有する請求の範囲１３６記載の組成物。
138. １３８．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリ ン　テトラデカスルフェートである請求の範囲１３６記載の組成物。
139. １３９．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル 、チオエステル、チオエーテル、カルボン酸および炭水化物部分からなる群から 選択される置換基を有する該オリゴサッカライドの非イオン性誘導体である請求 の範囲１３１記載の組成物。
140. １４０．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカ ライドである請求の範囲１３１記載の組成物。
141. １４１．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキ シ基を含有する請求の範囲１４０記載の組成物。
142. １４２．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシ　ベ ーターシクロデキストリンである請求の範囲１４０記載の組成物。
143. １４３．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のプロボ キシ基を含有する請求の範囲１４０記載の組成物。
144. １４４．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカプロボキシ　 ベーターシクロデキストリンである請求の範囲１４０記載の組成物。
145. １４５．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基 を含有する請求の範囲１４０記載の組成物。
146. １４６．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲１３ １記載の組成物。
147. １４７．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲１３ １記載の組成物。
148. １４８．前記ステロイドがコルチゾン、ヒドロコルチゾン、コルテキソロンまた はテトラヒドロコルチゾールである請求の範囲１３１記載の組成物。
149. １４９．非ステロイド化合物がインターフェロン−アルファ、インターフェロン −ベータまたはインターフェロン−インターフェロンである請求の範囲１３１記 載の組成物。
150. １５０．非ステロイド化合物がインターロイキン−１またはインターロイキン− ２である請求の範囲１３１記載の組成物。
151. １５１．（１）蒸留水中における０℃での溶解度少なくとも約２０ｇｍ／１００ ｍｌを有することを特徴とする環状オリゴサッカライド誘導体を、（２）潜在細 胞増殖モジコレート性ステロイドまたは非ステロイド有機化合物（ここでは該ス テロイドはグルココルチコイド活性を有しない）および（３）抗ウイルス剤と組 み合わせて含有する、ヒトを含めた哺乳動物における細胞の望ましからぬレトロ ウイルス感染を阻止するための組成物。
152. １５２．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−１２個の糖モノマーを含有 する請求の範囲１５１記載の組成物。
153. １５３．前記環状オリゴサッカライド誘導体が約６−８個の糖モノマーを含有す る請求の範囲１５１記載の組成物。
154. １５４．前記環状オリゴサッカライドがアルファー、ベーターまたはガンマーシ クロデキストリンである請求の範囲１５１記載の組成物。
155. １５５．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、生理学的に受容されうるカチオ ンと一緒の、スルフェート、ホスフェート、カルボキシレートおよびそれらの混 合物からなる群から選択される置換基を有する該オリゴサッカライドのアニオン 塩誘導体である請求の範囲１５１記載の組成物。
156. １５６．前記環状オリゴサッカライド誘導体が環状オリゴサッカライドスルフェ ートである請求の範囲１５１記載の組成物。
157. １５７．前記環状オリゴサッカライドスルフェートが約１０−１６個のスルフェ ート基を含有する請求の範囲１５６記載の組成物。
158. １５８．前記環状オリゴサッカライドスルフェートがベーターシクロデキストリ ン　テトラデカスルフェートである請求の範囲１５６記載の組成物。
159. １５９．前記環状オリゴサッカライド誘導体が、アルキル、エステル、エーテル 、チオエステル、チオエーテル、カルボン酸および炭水化物部分からなる群から 選択される置換基を有する該オリゴサッカライドの非イオン性誘導体である請求 の範囲１５１記載の組成物。
160. １６０．前記環状オリゴサッカライド誘導体がアルコキシ置換環状オリゴサッカ ライドである請求の範囲１５１記載の組成物。
161. １６１．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のメトキ シ基を含有する請求の範囲１６０記載の組成物。
162. １６２．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカメトキシ　ベ ーターシクロデキストリンである請求の範囲１６０記載の組成物。
163. １６３．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドが約１０−１６個のプロボ キシ基を含有する請求の範囲１６０記載の組成物。
164. １６４．前記アルコキシ置換環状オリゴサッカライドがテトラデカプロボキシ　 ベーターシクロデキストリンである請求の範囲１６０記載の組成物。
165. １６５．前記環状オリゴサッカライド誘導体がイオン性および非イオン性置換基 を含有する請求の範囲１６０記載の組成物。
166. １６６．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−１である請求の範囲１５ １記載の組成物。
167. １６７．前記レトロウイルスがヒト免疫不全ウイルス−２である請求の範囲１５ １記載の組成物。
168. １６８．前記ステロイドがコルチゾン、ヒドロコルチゾン、コルテキソロンまた はテトラヒドロコルチゾールである請求の範囲１５１記載の組成物。
169. １６９．前記非ステロイド化合物がインターフェロン−アルファ、インターフェ ロン−ベータまたはインターフェロン−インターフェロンである請求の範囲１５ １記載の組成物。
170. １７０．前記非ステロイド化合物がインターロイキン−１またはインターロイキ ン−２である請求の範囲１５１記載の組成物。
171. １７１．前記抗ウイルス剤がヌクレオシド誘導体である請求の範囲１５１記載の 組成物。
172. １７２．前記抗ウイルス剤がＣＤ４ペプチドまたはその類似体である請求の範囲 １５１記載の組成物。
173. １７３．前記抗ウイルス剤がヒペリシンである請求の範囲１５１記載の組成物。