JPH0445797A - L―α―アラニンの製造法 - Google Patents
L―α―アラニンの製造法Info
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はL−α−アラニンの製造法に関する。
L−α−アラニンは、医薬品、食品添加物および各種工
業薬品の合成中間体として重要な化合物である。
業薬品の合成中間体として重要な化合物である。
従来の技術
L−α−アミノ酸は、−111i)に直接発酵法または
有機化学合成法により製造されたDL−α−アミノ酸を
光学分割を行うことにより得られている。
有機化学合成法により製造されたDL−α−アミノ酸を
光学分割を行うことにより得られている。
DL−α−アミノ酸の光学分割を行う方法としては、例
えばDL−α−アミノ酸のN−アシル誘導体に微生物の
生産するアシラーゼを作用させる方法(特公昭41−2
2380号公報)およびDL−αアミノ酸のヒダントイ
ン誘導体に微生物の生産するヒダントイナーゼを作用さ
せる方法(特公昭542274号公報)などが知られて
いる。
えばDL−α−アミノ酸のN−アシル誘導体に微生物の
生産するアシラーゼを作用させる方法(特公昭41−2
2380号公報)およびDL−αアミノ酸のヒダントイ
ン誘導体に微生物の生産するヒダントイナーゼを作用さ
せる方法(特公昭542274号公報)などが知られて
いる。
また、DL−アミノ酸アミドに、微生物が生産するし一
アミダーゼを作用させ、対応するL−アミノ酸を得る方
法として、バチルス属、バタテリジウム属、ミクロコツ
カス属およびブレビバクテリウム属に属する微生物が生
産するし一アミダーゼを用いる方法(公表時56−50
0319号公報)、種々の酵母、細菌類が生産するし一
アミダーゼを用いる方法(特開昭57−13000号公
報、特開昭59−159789号公報、特開昭60−3
6446号公報)、エンテロバクタ−・クロアッセイ
1l−7901またはシュードモナスsp、 N−71
31またはll−2211の微生物が生産するし一アミ
ダーゼを用いる方法(特開昭62−55097号公報)
、ミコプラナ属またはプロタミノバクタ−属に属する細
菌が生産するし一アミダーゼを用いる方法(特開平1−
277499号公報)などが知られている。
アミダーゼを作用させ、対応するL−アミノ酸を得る方
法として、バチルス属、バタテリジウム属、ミクロコツ
カス属およびブレビバクテリウム属に属する微生物が生
産するし一アミダーゼを用いる方法(公表時56−50
0319号公報)、種々の酵母、細菌類が生産するし一
アミダーゼを用いる方法(特開昭57−13000号公
報、特開昭59−159789号公報、特開昭60−3
6446号公報)、エンテロバクタ−・クロアッセイ
1l−7901またはシュードモナスsp、 N−71
31またはll−2211の微生物が生産するし一アミ
ダーゼを用いる方法(特開昭62−55097号公報)
、ミコプラナ属またはプロタミノバクタ−属に属する細
菌が生産するし一アミダーゼを用いる方法(特開平1−
277499号公報)などが知られている。
ラフネラ属に属する微生物が有する、L−α−アラニン
アミドを不斉加水分解する能力を利用してL−α−アラ
ニンアミドからL−α−アラニンを製造する方法は知ら
れていない。
アミドを不斉加水分解する能力を利用してL−α−アラ
ニンアミドからL−α−アラニンを製造する方法は知ら
れていない。
発明が解決しようとする課題
本発明は、微生物が生産するし一α−アラニンアミドを
不斉加水分解する作用を利用することにより、L−α−
アラニンアミドから光学純度の高いL−α−アラニンを
工業的により効率よく安価に製造する方法を提供するこ
とを目的としている。
不斉加水分解する作用を利用することにより、L−α−
アラニンアミドから光学純度の高いL−α−アラニンを
工業的により効率よく安価に製造する方法を提供するこ
とを目的としている。
RHを解決するための手段
本発明はラフネラ属に属し、L−α−アラニンアミドを
不斉加水分解する能力を有する微生物の培養物、菌体ま
たはそれらの処理物の存在下、DL−α−アラニンアミ
ドまたはL−α−アラニンアミドを含有する水性媒体中
で光学選択的に加水分解を行わせ水性媒体中にL−α−
アラニンを生成させ、該水性媒体よりL−α−アラニン
を採取することを特徴とするL−α−アラニンの製造法
を提供する。
不斉加水分解する能力を有する微生物の培養物、菌体ま
たはそれらの処理物の存在下、DL−α−アラニンアミ
ドまたはL−α−アラニンアミドを含有する水性媒体中
で光学選択的に加水分解を行わせ水性媒体中にL−α−
アラニンを生成させ、該水性媒体よりL−α−アラニン
を採取することを特徴とするL−α−アラニンの製造法
を提供する。
本発明で用いる微生物としては、ラフネラ属に属L、D
L−α−アラニンアミドまたはL−α−アラニンアミド
を不斉加水分解してL−α−アラニンを生成する能力を
有する微生物であればいずれでもよいが、例えばラフネ
ラ・エスピー(Rahnellasp、) H−724
6があげられる。
L−α−アラニンアミドまたはL−α−アラニンアミド
を不斉加水分解してL−α−アラニンを生成する能力を
有する微生物であればいずれでもよいが、例えばラフネ
ラ・エスピー(Rahnellasp、) H−724
6があげられる。
上記微生物の菌学的性質を以下に述べる。
(a)形態
■ 細胞の形および大きさ、桿状、直径0.7−1.0
μm1長さ 2.0−4.0μm ■ 細胞の多形性:な し ■ 運動性;25℃では側鞭毛で運動性があるが、36
℃では運動性がない。
μm1長さ 2.0−4.0μm ■ 細胞の多形性:な し ■ 運動性;25℃では側鞭毛で運動性があるが、36
℃では運動性がない。
■ 胞 子;形成しない。
0 ダラム染色性;陰 性
■ 抗酸性;はとんど認められない。
(b) 各培地における生育状態
■ 肉汁寒天平板培養;アイポリ−色のなめらかな集落
を形成する。拡散性色素は生成しない。
を形成する。拡散性色素は生成しない。
■ 肉汁寒天斜面培養;十分に生育し、アイポリ−色の
滑らかな集落を形成する。
滑らかな集落を形成する。
■ 肉汁液体培養;混濁状に生育し、表面には生育しな
い。
い。
■ 肉汁ゼラチン穿刺培養;液化しない。
■ リドマス・ミルク;弱酸性。1日目で凝固はみられ
ない。
ない。
(C) 生理学的性質
■ 硝酸塩の還元;陽 性
■ 脱窒反応;ガスは生成せず、生育する。
MRテスト;陰 性
VPテスト;陽 性
インドールの生成;陽 性
硫化水素の生成;陰 性
デンプンの加水分解;陰 性
クエン酸の利用(シモンズの培地)、陽性無機窒素源の
利用;硝酸塩<1a性) アンモニウム塩(陽性) 色素の生成;水溶性色素を生成しない ウレアーゼ;陰 性 オキシダーゼ;陰 性 カタラーゼ;陽 性 生育の範囲 (1)pH;ρ114.0−9.0 <最適ρlIニ
ア、[1)(2)温度; 15−42℃ (最適温度:
30℃)酸素に対する態度、好気性ないし通性嫌気性0
−Fテスト、発 酵 糖類から酸、ガスの生成 L−アラビノース D−キシロース D−グルコース D−マンノース D−フラクトース D−ガラクトース 麦芽糖 シ B @ 乳 糖 トレハロース D−ソルビット D−マンニット イノシット グリセリン デンプン 0 塩化ナトリウム耐性;要求性はない。
利用;硝酸塩<1a性) アンモニウム塩(陽性) 色素の生成;水溶性色素を生成しない ウレアーゼ;陰 性 オキシダーゼ;陰 性 カタラーゼ;陽 性 生育の範囲 (1)pH;ρ114.0−9.0 <最適ρlIニ
ア、[1)(2)温度; 15−42℃ (最適温度:
30℃)酸素に対する態度、好気性ないし通性嫌気性0
−Fテスト、発 酵 糖類から酸、ガスの生成 L−アラビノース D−キシロース D−グルコース D−マンノース D−フラクトース D−ガラクトース 麦芽糖 シ B @ 乳 糖 トレハロース D−ソルビット D−マンニット イノシット グリセリン デンプン 0 塩化ナトリウム耐性;要求性はない。
1600+nklで生育阻害を受ける。
1!ill DNA(D分Mr1m 性■ アルギ
ニンの分解;陰 性 ■ リジンの脱炭酸反応;陰 性 ■ オルニチンの脱炭酸反応;陰 性 ■ イエローピグメント;陰 性 (6)化学的組成 ■ mo1%G 十C(HPLC) ; 53.0以上
の菌学的性質ををする菌について、パージエイズ・マニ
ユアル・才ブ・システマチック・バタテリオロジー(日
ergey’s Manual of Systema
ticbacteriology) vol、 1 (
1986年〉の記載と照合すると、本菌株はダラム陰性
桿菌で、運動性があり、好気性ないし通性嫌気性であり
、グルコースから著しく酸およびガスを生成し、オキシ
ダーゼに陰性で、鞭毛の着性は側鞭毛であり、ナ) I
Jウムイオンの要求性がないことから、本菌株はEnt
ero−bacter 1aceae科に属する細菌に
分類される。さらにVP反応に1性を示し、クエン酸を
利用し、硫化水素の生成、ウレアーゼ、DNAの分解、
アルギニンの分解、リジンの脱炭酸反応およびオルニチ
ンの脱炭酸反応に陰性で、DNAのmo1%G+Cが5
3.0であることに基づいて検索した結果、本菌株をラ
フネラ(Rahnella)属に属する細菌と同定し、
ラフネラ・エスピー(Rahnella sp、) H
−7246と命名した。
ニンの分解;陰 性 ■ リジンの脱炭酸反応;陰 性 ■ オルニチンの脱炭酸反応;陰 性 ■ イエローピグメント;陰 性 (6)化学的組成 ■ mo1%G 十C(HPLC) ; 53.0以上
の菌学的性質ををする菌について、パージエイズ・マニ
ユアル・才ブ・システマチック・バタテリオロジー(日
ergey’s Manual of Systema
ticbacteriology) vol、 1 (
1986年〉の記載と照合すると、本菌株はダラム陰性
桿菌で、運動性があり、好気性ないし通性嫌気性であり
、グルコースから著しく酸およびガスを生成し、オキシ
ダーゼに陰性で、鞭毛の着性は側鞭毛であり、ナ) I
Jウムイオンの要求性がないことから、本菌株はEnt
ero−bacter 1aceae科に属する細菌に
分類される。さらにVP反応に1性を示し、クエン酸を
利用し、硫化水素の生成、ウレアーゼ、DNAの分解、
アルギニンの分解、リジンの脱炭酸反応およびオルニチ
ンの脱炭酸反応に陰性で、DNAのmo1%G+Cが5
3.0であることに基づいて検索した結果、本菌株をラ
フネラ(Rahnella)属に属する細菌と同定し、
ラフネラ・エスピー(Rahnella sp、) H
−7246と命名した。
本菌株は平成2年4月16日付で工業技術院微生物工業
技術研究所にFBRM BP−2871として寄託され
ている。
技術研究所にFBRM BP−2871として寄託され
ている。
本発明の微生物を培養する培地は、用いる微生物が資化
し得る炭素源、窒素源、無機塩類などを含有シ、DL−
α−アラニンアミドまたはL−α−アラニンアミドから
L−α−アラニンを生成する能力を有する微生物の培養
を効率的に行なえる培地であれば、天然培地、合成培地
のいずれでも良い。
し得る炭素源、窒素源、無機塩類などを含有シ、DL−
α−アラニンアミドまたはL−α−アラニンアミドから
L−α−アラニンを生成する能力を有する微生物の培養
を効率的に行なえる培地であれば、天然培地、合成培地
のいずれでも良い。
炭酸源としては、グルコース、フラクトース、シニーク
ロース、糖蜜、廃糖蜜、デンプン加水分解物などの炭水
化物、酢酸、プロピオン酸などの有機酸、およびエタノ
ール、プロパツールなどのアルコール類が用いられる。
ロース、糖蜜、廃糖蜜、デンプン加水分解物などの炭水
化物、酢酸、プロピオン酸などの有機酸、およびエタノ
ール、プロパツールなどのアルコール類が用いられる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、ff
1i!アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモ
ニウムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類、各
種硝酸塩ならびにペプトン、肉エキス、酵母エキス、コ
ーン・スチープ・リカーカゼイン加水分解物、大豆粕加
水分解物、各種発酵菌体およびその消化物プニどの窒素
含有有機物など種々のものが用いられる。
1i!アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモ
ニウムなどの各種無機および有機アンモニウム塩類、各
種硝酸塩ならびにペプトン、肉エキス、酵母エキス、コ
ーン・スチープ・リカーカゼイン加水分解物、大豆粕加
水分解物、各種発酵菌体およびその消化物プニどの窒素
含有有機物など種々のものが用いられる。
無機物としては、リン酸−水素カリウム、リン酸二水素
カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩
化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅およ
び炭酸カルシウムナよどが用いられる。
カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩
化ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅およ
び炭酸カルシウムナよどが用いられる。
培養は、振盪培養または深部通気攪拌培養ブよどの好気
的条件下で行う。培養温度は15〜45℃、培養時間は
通常12〜72時間である。培養中pl(は5.0〜9
.0に保持する。pllの調整は塩酸、硫酸などの無機
あるいは酢酸などの有機の酸、炭酸カルシウムなどの塩
、アンモニアなどのアルカリ溶液を用いて行う。
的条件下で行う。培養温度は15〜45℃、培養時間は
通常12〜72時間である。培養中pl(は5.0〜9
.0に保持する。pllの調整は塩酸、硫酸などの無機
あるいは酢酸などの有機の酸、炭酸カルシウムなどの塩
、アンモニアなどのアルカリ溶液を用いて行う。
培養の際、高い酵素活性を誘導させるために、L−α−
アラニンアミド、D−α−アラニンアミドあるいはDL
−α−アラニンアミドを培地に添加することは効果的で
あり、その添加量は培地に対して0,01〜2.0%程
度が好ましい。
アラニンアミド、D−α−アラニンアミドあるいはDL
−α−アラニンアミドを培地に添加することは効果的で
あり、その添加量は培地に対して0,01〜2.0%程
度が好ましい。
このようにして培養した培養物、菌体またはそれらの処
理物が本発明のDL−α−アラニンアミドの不斉加水分
解反応に用いられる。
理物が本発明のDL−α−アラニンアミドの不斉加水分
解反応に用いられる。
培養物、菌体の処理物としては、乾燥物、界面活性剤処
理物、酵素処理物、超音波処理物、溶媒処理物、固定化
物などがあげられる。
理物、酵素処理物、超音波処理物、溶媒処理物、固定化
物などがあげられる。
水性媒体としては、水、リン酸塩、炭酸塩、酢酸塩、ホ
ウ酸塩、クエン酸塩およびトリス塩酸などの緩衝液、メ
タノール、エタノールおよびプロパツールなどのアルコ
ール類などがあげられる。
ウ酸塩、クエン酸塩およびトリス塩酸などの緩衝液、メ
タノール、エタノールおよびプロパツールなどのアルコ
ール類などがあげられる。
反応は通常10〜70℃で9N5. G〜11.0で1
〜72時間行う。反応液中の培養物、菌体またはそれら
の処理物の濃度は、用いるDL−α−アラニンアミドの
量および反応時間により適宜決定すれば良いが、通常乾
燥菌体として反応液当たり0.01〜10%(重量)で
ある。反応に用いるDL−α−アラニンアミドおよびL
−α−アラニンアミドは、遊離型、塩酸塩、硫酸塩のい
ずれでも良く、濃度は、DL−α−アラニンアミドおよ
びL−α−アラニンアミドの飽和濃度以下であれば一般
に制限はないが、好ましくは反応液当たり0.1〜40
%(重量)である。なお、DL−α−アラニンアミドお
よびL−α−アラニンアミドは市販(バッケム社)され
ていて、容易に入手することができる。
〜72時間行う。反応液中の培養物、菌体またはそれら
の処理物の濃度は、用いるDL−α−アラニンアミドの
量および反応時間により適宜決定すれば良いが、通常乾
燥菌体として反応液当たり0.01〜10%(重量)で
ある。反応に用いるDL−α−アラニンアミドおよびL
−α−アラニンアミドは、遊離型、塩酸塩、硫酸塩のい
ずれでも良く、濃度は、DL−α−アラニンアミドおよ
びL−α−アラニンアミドの飽和濃度以下であれば一般
に制限はないが、好ましくは反応液当たり0.1〜40
%(重量)である。なお、DL−α−アラニンアミドお
よびL−α−アラニンアミドは市販(バッケム社)され
ていて、容易に入手することができる。
反応において、D−α−アラニンの生成を極力おさえる
ために、光学活性なアラニンのラセミ化を触媒する酵素
であるアラニンラセマーゼ活性を抑制する公知の方法を
用いることができる。例えば、通常の変異処理によりア
ラニンラセマーゼ活性がないかあるいは活性が低下した
変異株を取得し反応に用いる〔モレキユラー・アンド・
ジェネラル・ジエネテイツクス(Mo1.Gen、Ge
nat、) 198 。
ために、光学活性なアラニンのラセミ化を触媒する酵素
であるアラニンラセマーゼ活性を抑制する公知の方法を
用いることができる。例えば、通常の変異処理によりア
ラニンラセマーゼ活性がないかあるいは活性が低下した
変異株を取得し反応に用いる〔モレキユラー・アンド・
ジェネラル・ジエネテイツクス(Mo1.Gen、Ge
nat、) 198 。
315−322(1985) 〕、熱処理などによりア
ラニンラセマーゼ活性を失活させる〔日本化学会誌9゜
1369 (1983) 〕あるいはアラニンラセマー
ゼ阻害剤を反応時添加する〔化学と生物20.770−
772(1986);生化学実験講座11 、275
−296コなどの方法を適宜用いることにより、光学純
度の高いL−cr−アラニンを得ることができる。
ラニンラセマーゼ活性を失活させる〔日本化学会誌9゜
1369 (1983) 〕あるいはアラニンラセマー
ゼ阻害剤を反応時添加する〔化学と生物20.770−
772(1986);生化学実験講座11 、275
−296コなどの方法を適宜用いることにより、光学純
度の高いL−cr−アラニンを得ることができる。
反応が終了した時点で、反応生成液を加熱あるいはpH
を低下させるなどの常法により速やかに反応を停止させ
た後、反応生成液から目的物質であるL−α−アラニン
と未反応のD−α−アラニンアミドとをそれぞれ分離、
回収する。分離方法としては、イオン交換樹脂などを用
いるカラムクロマトグラフィーあるいは晶出法など通常
の分離方法が用いられる。
を低下させるなどの常法により速やかに反応を停止させ
た後、反応生成液から目的物質であるL−α−アラニン
と未反応のD−α−アラニンアミドとをそれぞれ分離、
回収する。分離方法としては、イオン交換樹脂などを用
いるカラムクロマトグラフィーあるいは晶出法など通常
の分離方法が用いられる。
未反応のD−α−アラニンアミドは、公知の方法、例え
ば、酸またはアルカリで加水分解することによりD−α
−アラニンに変換することができる。また、D−α−ア
ラニンアミドをラセミ化した後、反応系へ循環させるこ
止もできる。
ば、酸またはアルカリで加水分解することによりD−α
−アラニンに変換することができる。また、D−α−ア
ラニンアミドをラセミ化した後、反応系へ循環させるこ
止もできる。
以下、実施例により本発明を説明する。
実施例1
ペプトン10g/f、イーストエキス5g/fおよび塩
化す) +Jウム5g/Ilを含む培地(p)17.2
)40−を250m1容三角フラスコに分注し、120
℃、20分間オートクレーブにかけて滅菌し種培養j@
地とした。この培地にラフネラ・エスピーH−7246
を一白金耳植菌し、30℃で24時間振盪培養し、種培
養液として用いた。
化す) +Jウム5g/Ilを含む培地(p)17.2
)40−を250m1容三角フラスコに分注し、120
℃、20分間オートクレーブにかけて滅菌し種培養j@
地とした。この培地にラフネラ・エスピーH−7246
を一白金耳植菌し、30℃で24時間振盪培養し、種培
養液として用いた。
グルコース10g/β、ペプトン10g/L肉エキス5
g/l、 リン酸三水素カリウム2g/l、硫酸マグネ
シウム0.5g/l、硫酸第一鉄1■/β、硫酸マンガ
ン1mg/fおよびDL−α−アラニンアミド5g/f
を含む培地(pH7,0)11を21容量のミニジャー
ファーメンタ−に分注し、120℃、30分間オートク
レーブにかけて滅菌し主培養培地とした。この培地に種
培養液1mlを無菌的に接種し、30℃で48時間通気
攪拌培養(通気量1. OVVM)した。なお、培養中
、4規定アンモニア水により培地のpIlを7,0±0
.1に調整した。この主培養液500−を遠心分離(1
0,00Orpm、 10分間)し、生菌体を得た。
g/l、 リン酸三水素カリウム2g/l、硫酸マグネ
シウム0.5g/l、硫酸第一鉄1■/β、硫酸マンガ
ン1mg/fおよびDL−α−アラニンアミド5g/f
を含む培地(pH7,0)11を21容量のミニジャー
ファーメンタ−に分注し、120℃、30分間オートク
レーブにかけて滅菌し主培養培地とした。この培地に種
培養液1mlを無菌的に接種し、30℃で48時間通気
攪拌培養(通気量1. OVVM)した。なお、培養中
、4規定アンモニア水により培地のpIlを7,0±0
.1に調整した。この主培養液500−を遠心分離(1
0,00Orpm、 10分間)し、生菌体を得た。
DL−α−アラニンアミド(バッケム社製)50gを含
む50mMリン酸緩衝液(pH7,0) 11に、生
菌体5g (乾燥菌体重量換算)を加え、40℃で1
時間振盪し、反応を行った。反応終了後、反応液を遠心
分離(10,000rp111.10分間)して得られ
た上澄液をイオン交換樹脂ダイヤイオン5K−IB(H
型)(三菱化成社製)11に通塔し、L−α−アラニン
を吸着させた。該樹脂を水洗後、2規定アンモニア水で
L−α−アラニンを溶出した。溶出液を減圧濃縮し、結
晶を析出させ、ろ取し、乾燥した結果、L−α−アラニ
ン17g (光学純度99.8ee%以上)を得た。
む50mMリン酸緩衝液(pH7,0) 11に、生
菌体5g (乾燥菌体重量換算)を加え、40℃で1
時間振盪し、反応を行った。反応終了後、反応液を遠心
分離(10,000rp111.10分間)して得られ
た上澄液をイオン交換樹脂ダイヤイオン5K−IB(H
型)(三菱化成社製)11に通塔し、L−α−アラニン
を吸着させた。該樹脂を水洗後、2規定アンモニア水で
L−α−アラニンを溶出した。溶出液を減圧濃縮し、結
晶を析出させ、ろ取し、乾燥した結果、L−α−アラニ
ン17g (光学純度99.8ee%以上)を得た。
旋光度〔α:]2o=+14.5°(c=lo、 6規
定塩酸)実施例2 粉末ブイヨン20g/f、イーストエキス5g/lおよ
び塩化す)IJウム2.5g/βを含む培地(pH7,
2) 40mを250m1用三角フラスコに分注し、1
20℃、20分間オートクレーブにかけて滅菌して種培
養培地とした。この培地にラフネラ・エスピーH−72
46を一白金耳植菌し、30℃で24時間振動培養し、
種培養液として用いた。
定塩酸)実施例2 粉末ブイヨン20g/f、イーストエキス5g/lおよ
び塩化す)IJウム2.5g/βを含む培地(pH7,
2) 40mを250m1用三角フラスコに分注し、1
20℃、20分間オートクレーブにかけて滅菌して種培
養培地とした。この培地にラフネラ・エスピーH−72
46を一白金耳植菌し、30℃で24時間振動培養し、
種培養液として用いた。
シュークロースLog/i、ペプトン5g/l。
イーストエキス5g/It、 硫酸アンモニウム5g#
!。
!。
リン酸二水素カリウム2g/l、硫酸マグネシウム0.
5g/l、硫酸第一鉄1■/i、硫酸マンガン1■/1
およびDL−α−アラニンアミド(バッケム社製)5g
/lを含む培地(p)17.0) 11を21容量の
ミニジャーファーメンタ−に分注し、120℃、30分
間オートクレーブにかけて滅菌して主培養培地とした。
5g/l、硫酸第一鉄1■/i、硫酸マンガン1■/1
およびDL−α−アラニンアミド(バッケム社製)5g
/lを含む培地(p)17.0) 11を21容量の
ミニジャーファーメンタ−に分注し、120℃、30分
間オートクレーブにかけて滅菌して主培養培地とした。
この培地に、種培養液1−を無菌的に接種し、30℃で
48時間通気攪拌培養(通気量1.OVVM) した。
48時間通気攪拌培養(通気量1.OVVM) した。
なお、培養中、4規定アンモニア水により培地のphを
7.0±0.1に調整した。
7.0±0.1に調整した。
この主培養液500m1を遠心分離(10,00Orp
m、 10分間)し、得られた湿菌体9gを生理食塩水
で洗浄し、遠心分IF! (10,00(lrpm、
10分間)した後、ITnM2−メルカプトエタノール
を含む50mMリン酸緩衝液(pH7,0)に懸濁し、
超音波処理(5℃、20分間)により菌体破砕を行った
。菌体破砕液を遠心分離(15,OOOrpm、 30
分間)して得られた上清をL−a−アミダーゼ粗酵素液
として45−得た。
m、 10分間)し、得られた湿菌体9gを生理食塩水
で洗浄し、遠心分IF! (10,00(lrpm、
10分間)した後、ITnM2−メルカプトエタノール
を含む50mMリン酸緩衝液(pH7,0)に懸濁し、
超音波処理(5℃、20分間)により菌体破砕を行った
。菌体破砕液を遠心分離(15,OOOrpm、 30
分間)して得られた上清をL−a−アミダーゼ粗酵素液
として45−得た。
DL−α−アラニンアミド25gを含む50mMリン酸
緩衝液(ρ)17.0) 500−に、L−α−アミダ
ーゼ粗酵素液25−を加え、30℃で2時間振盪し、−
反応を行った。以下実施例1と同様に行った結果、L−
α−アラニン9−g (光学純度99.8ee%以上
)を得た。
緩衝液(ρ)17.0) 500−に、L−α−アミダ
ーゼ粗酵素液25−を加え、30℃で2時間振盪し、−
反応を行った。以下実施例1と同様に行った結果、L−
α−アラニン9−g (光学純度99.8ee%以上
)を得た。
旋光度〔α〕2o=+14.6°(c=IO,6規定塩
引実施例3 L−α−アラニンアミド(バッケム社製)50gを含む
50ffl&lリン酸緩衝液(pH7,0) 11に、
実施例1と同様に行って得たラフネラ・エスピーH−7
246の生菌体5g (乾燥菌体重量換算)を加え、4
0℃で4時間振盪し、反応を行った。反応終了後、反応
液を遠心分1(10,OOOrpm、 1[1分間)し
て得られた上澄液をイオン交換樹脂ダイヤイオンSに一
1日(H型) (三菱化成社製)11に通塔し、L−α
−アラニンを吸着させた。該樹脂を水洗後、2規定アン
モニア水でL−α−アラニンを溶出した。溶出液を減圧
濃縮し、結晶を析8させ、ろ取し、乾燥した結果、L−
α−アラニン32g(光学純度99.8ee%以上)を
得た。
引実施例3 L−α−アラニンアミド(バッケム社製)50gを含む
50ffl&lリン酸緩衝液(pH7,0) 11に、
実施例1と同様に行って得たラフネラ・エスピーH−7
246の生菌体5g (乾燥菌体重量換算)を加え、4
0℃で4時間振盪し、反応を行った。反応終了後、反応
液を遠心分1(10,OOOrpm、 1[1分間)し
て得られた上澄液をイオン交換樹脂ダイヤイオンSに一
1日(H型) (三菱化成社製)11に通塔し、L−α
−アラニンを吸着させた。該樹脂を水洗後、2規定アン
モニア水でL−α−アラニンを溶出した。溶出液を減圧
濃縮し、結晶を析8させ、ろ取し、乾燥した結果、L−
α−アラニン32g(光学純度99.8ee%以上)を
得た。
旋光度〔α)2o=+14.5°(c=10.6規定塩
酸)発明の効果 本発明により、医薬品、食品添加物および各種工業薬品
の合成中間体として重要なアミノ酸であるL−α−アラ
ニンを安価にかつ効率よく製造することができる。
酸)発明の効果 本発明により、医薬品、食品添加物および各種工業薬品
の合成中間体として重要なアミノ酸であるL−α−アラ
ニンを安価にかつ効率よく製造することができる。
Claims (2)
- (1)ラフネラ属に属し、L−α−アラニンアミドを不
斉加水分解する能力を有する微生物の培養物、菌体また
はそれらの処理物の存在下、DL−α−アラニンアミド
またはL−α−アラニンアミドを含有する水性媒体中で
光学選択的に加水分解を行わせ水性媒体中にL−α−ア
ラニンを生成させ、該水性媒体よりL−α−アラニンを
採取することを特徴とするL−α−アラニンの製造法。 - (2)微生物がラフネラ・エスピー(Rahnella
sp.)H−7246(FERMBP−2871)で
ある請求項1記載の製造法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15423190A JP2899071B2 (ja) | 1990-06-13 | 1990-06-13 | L―α―アラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP15423190A JP2899071B2 (ja) | 1990-06-13 | 1990-06-13 | L―α―アラニンの製造法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0445797A true JPH0445797A (ja) | 1992-02-14 |
JP2899071B2 JP2899071B2 (ja) | 1999-06-02 |
Family
ID=15579716
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP15423190A Expired - Lifetime JP2899071B2 (ja) | 1990-06-13 | 1990-06-13 | L―α―アラニンの製造法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2899071B2 (ja) |
-
1990
- 1990-06-13 JP JP15423190A patent/JP2899071B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2899071B2 (ja) | 1999-06-02 |
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