JPH0439461B2

JPH0439461B2 -

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Publication number: JPH0439461B2
Application number: JP14047084A
Authority: JP
Priority date: 1984-07-09
Filing date: 1984-07-09
Publication date: 1992-06-29
Also published as: JPS6122070A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は構造式で表される化合物（Ｔ−23−）または構造式で表わされる化合物（Ｔ−23−）およびそれら
の製造方法に関する。そして前記Ｔ−23−また
はＴ−23−は新規な化合物であつて抗腫瘍性を
有するので医薬として期待されるものである。本発明者等はストレプトマイセス・リシリエン
シスに属する新菌株たるストレプトマイセス・リ
シリエンシスＴ−23株（微工研寄託番号第6141
号）の醗酵生産物中に抗腫瘍活性を有するアンサ
マイシン骨格を有するＴ−23−及びＴ−23−
が存在することを知り、先にＴ−23−及びＴ−
23−の製造法を特願昭56−189237号、同第
189238号（特開昭58−94393号、同92662号）とし
て提案した。それによれば、前記Ｔ−23株を通常
の放線菌培養法で培養した後に、その培養物を菌
体と上清液とに分け、その菌体からアセトン−水
で活性区分を抽出し、液を非イオン性交換樹脂
に通して活性区分を吸着させ次いでアセトン、低
級アルコール等の溶媒で抽出する。一方上清液か
らは直接有機溶媒により活性区分を抽出する。両
者を合体し、ついで有機溶媒を除いた水性相から
クロロホルム、酢酸エチル等の水非混和性溶媒で
抽出し濃縮後、脂肪族炭化水素溶媒を加えて活性
区分を沈殿させ、それを例えばシリカゲル、非イ
オン性交換樹脂、セフアデツクスLH−20等を充
填したカラムに吸着させ、ベンゼンで洗浄後、ベ
ンゼン−アセトン（４：１）で溶出するとＴ−23
−含有溶液がさらにそのカラムからベンゼン−
アセトン（７：１）で溶出するとＴ−23−含有
溶液が得られる。その後本発明者等は、前記シリカゲルカラムか
らベンゼン−アセトン（４：１）でＴ−23−含
有溶液を溶出させた後さらに同溶媒で溶出を続け
ると微量の他の活性物質が溶出されて来る事、お
よび前記シリカゲルカラムをさらに、ベンゼン−
アセトン（７：３）で溶出し、Ｔ−23−含有溶
液を溶出させた後、同溶媒で溶出を続けるとさら
に異なつた微量活性物質が溶出されて来る事を知
つた。本発明者らは、これら微量物質を単離し、
それらの物性を確認することによつて本発明を完
成するに至つた。すなわち、前記シリカゲルカラムをベンゼン−
アセトン（４：１）で溶出し、その溶出液を一定
量ずつの区分に分取し、各区分を、シリカゲル薄
層クロマトグラフイーに付し、酢酸エチル／ベン
ゼン（１：１）溶媒で２回展開すると、Ｔ−23−
を含む区分が溶出された後の区分にＴ−23−
（R_f＝0.58）とは異なる微量物質（R_f＝0.56）が
存在したのでこの物質をＴ−23−と名付けた。また、前記シリカゲルカラムをさらにベンゼン
−アセトン（７：１）で溶出した場場合にも、同
様に一定量ずつの区分に分取し、その各区分をシ
リカゲル薄層クロマトグラフイーに付しベンゼ
ン／クロロホルム／メタノール（３：７：３）の
溶媒系で展開すると、Ｔ−23−を含む区分が溶
出された後の区分にＴ−23−（R_f＝0.56）とは
異なる微量物質（R_f＝0.55）が存在したのでこの
物質ををＴ−23−と名付けた。このＴ−23−とＴ−23−は、Ｔ−23−と
Ｔ−23−と同様に、酸化型と還元型の関係にあ
る。すなわち、Ｔ−23−をメタノールに溶解
し、少量のハイドロサルフアイトを添加して撹拌
すると容易に還元されＴ−23−に変換される。
また、Ｔ−23−をメタノールに溶解し、少量の
塩化第二鉄を添加して撹拌すると容易に酸化され
Ｔ−23−に変換される。次にＴ−23−及びＴ−23−の物理化学的性
質を示す。Ｔ−23− 物理化学的性質１結晶形態黄色不定形結晶２分子量 M⁺624 ３分子式 C₃₅H₄₈N₂O₈ ４元素分析値理論値実測値Ｃ：67.31％ 66.82％Ｈ：7.69％ 8.07％Ｎ：4.49 4.51 Ｏ：20.51 20.60 ５〔α〕²⁵ _D＝＋69.4゜（ｃ＝0.144、MeOH）６融点 109℃ ７紫外部吸収スペクトル（メタノール中） λ_nax 262nm（ε26700） 271nm（ε38600） 281nm（ε28000） 381nm（ε2200）８赤外部吸収スペクトル（KBr錠中）

【表】９溶解性可溶メタノール、エタノール、ア
セトン、酢酸エチル、クロロ
ホルム、ピリジン不溶ｎ−ヘキサン、石油エーテ
ル、水 10 ¹³C−NMRスペクトル化学シフト（重メタ
ノール中）

【表】 11 ¹H−NMRスペクトル（重クロロホルム中）
第２図Ｔ−23−物理化学的性質１結晶形態無色不定形結晶２分子量 M⁺626 ３分子式 C₃₅H₅₀N₂O₈ ４元素分析値理論値実測値Ｃ：67.09％ 67.48％Ｈ：7.99 8.11 Ｎ：4.47 4.29 Ｏ：20.45 20.12 ５〔α〕²⁵ _D＝＋211゜（ｃ＝0.1、MeOH）６融点 139℃ ７紫外部吸収スペクトル（メタノール中） λ_nax 261nm（ε30400） 271nm（ε39000） 281nm（ε31100） 305nm（ε4400）８赤外部吸収スペクトル（クロロホルム中）第
３図

【表】９溶解性可溶メタノール、エタノール、ア
セトン、酢酸エチル、クロロ
ホルム、ピリジン不溶ｎ−ヘキサン、石油エーテ
ル、水本発明によるＴ−23−物質およびＴ−23−
物質は次に示すような生物活性を示し、抗腫瘍剤
としての用途が期待される。Ｔ−23−物質およびＴ−23−物質のＬ−
5178Y腫瘍細胞に対する生育阻害作用（in vitro）

【表】前記のとおり、Ｔ−23−はＴ−23−に、ま
たＴ−23−はＴ−23−に随伴して溶出される
のでそれぞれ別々に精製することも可能である
が、Ｔ−23−およびＴ−23−は、Ｔ−23−
およびＴ−23−にくらべてシリカゲルカラムか
ら容易に溶出されるので、次のとおりの方法で精
製することが便利である。すなわち、前記のとおり、Ｔ−23−は酸化型
であり、Ｔ−23−は還元型であつて酸化還元反
応より可逆的に相互変換が可能であるので、得ら
れた粗混合物を塩化第二鉄（FeCl₃）を含むメタ
ノールに溶解した後、室温にて撹拌して含まれる
Ｔ−23−とＴ−23−をＴ−23−とＴ−23−
に酸化する。次いで過剰の酢酸エチルを添加し
た後、水洗をくり返えし、塩化第二鉄を除去して
から減圧濃縮しＴ−23−とＴ−23−を含む油
状物を得る。得られた油状物は、更に精製するた
めシリカゲルクロマトグラフイーを行なう。溶出
溶媒としては、クロロホルム／メタノール
（100：１）を用い、溶出液を一定量ずつ分画する
と、Ｔ−23−を含む区分が溶出された後に、Ｔ
−23−とＴ−23−を含む区分が溶出されて来
る。この区分を集めて減圧濃縮すると、Ｔ−23−
とＴ−23−を含む黄色粉末が得られる。得ら
れた黄色粉末はシリカゲルを用いる調製用薄層ク
ロマトグラフイーにおいてベンゼン／酢酸エチル
（１：１）の混合溶媒系で展開後乾燥して溶媒を
除去してから再び同一溶媒で展開すると、Ｔ−23
−がR_f0.58附近に現われ、Ｔ−23−がR_f0.56
附近に現われる。このＴ−23−に相当する区分
をかき取りそしてクロロホルム／メタノール
（10：１）の混合溶媒で溶出する。溶出液を減圧
下に濃縮するとＴ−23−物質が黄色不定形粉末
として得られる。このようにして得られたＴ−23
−物質は前記したような物理化学的性状を有す
る。Ｔ−23−物質は、Ｔ−23−物質をナトリウ
ムハイドロサルフアイト（Na₂S₂O₃）の様な還元
剤で還元する事によつて得られる。Ｔ−23−物
質を酢酸エチルに溶解し１％ナトリウムハイドロ
サルフアイト水溶液とともに撹拌した後、酢酸エ
チル層をくりかえし水洗してから減圧濃縮すると
Ｔ−23−物質を含む油状物が得られる。この油
状物は調製薄層クロマトグラフイーにおいてベン
ゼン／クロロホルム／メタノール（３：７：３）
の混合溶媒系で展開後R_f＝0.55附近のＴ−23−
物質に相当する区分をかき取りそしてクロロホル
ム／メタノール（７：１）の混合溶媒系で溶出す
る。溶出液を減圧下に濃縮するとＴ−23−XIが白
色粉末として得られる。このようにして得られた
Ｔ−23−物質は前記したような物理化学的性質
を有する。次に実施例を更に詳細に理解せしめるために実
施例を掲げる。実施例１可溶性殿粉1.0％、酵母エキス0.2％および寒天
1.5％の組成よりなる試験管斜面培地に継代保存
してあるストレプトミセスＴ−23株より１白金耳
をとり、これを可溶性殿粉1.0、廃糖蜜1.0、肉エ
キス1.0％およびポリペプトン1.0％（PH7.0）の粗
成よりなる種培地100mlを含有する坂口フラスコ
に接種する。30℃で48時間振盪培養を行ない、得
られた培養物を種菌として同じ培地を100ml含ん
だ坂口フラスコに0.5mlずつ接種した。30℃で24
時間振盪培養を行ないジヤー式醗酵槽による本培
養の種菌とした。本培養はグルコース1.0％、可溶性殿粉1.5％、
大豆粉1.5％、乾燥酵母0.2％、硫安0.2％、
NaCl0.5、沈降性炭酸カルシウム0.4％および消泡
剤（東芝シリコンYMA6509）0.33％よりなる培
地（PH7.0）を15.0含む30容のステンレス製
ジヤー式醗酵槽６基を用いて実施した。すなわち
上記した種菌を4.0％の割合で接種しそして30℃
で24時間通気撹拌培養（通気量15.0／分、撹拌
回転数200rpm）を行なつた。培養終了後直ちに大型連続遠心分離器により菌
体を別後、60％アセトン水溶液20により菌体
を浸漬ししばらく撹拌操作を行つた後、３時間放
置した。次いで菌体を過して上清液を得た。同
じ処理を２回繰返し得られた抽出液を合わせて40
の抽出液を得た。次いで抽出液よりアセトンを
減圧留去して水溶液18.0を得た。得られた水溶
液18.0に並塩6.5Kgを加えて溶解させ、酢酸エ
チル9.0で２回抽出を行つた。得られた酢酸エ
チル溶液に芒硝1.0Kgを加え、しばらく放置して
脱水後減圧下に濃縮し、得られた濃縮液にヘキサ
ンを加えてＴ−23−、、およびＴ−23−
物質を含む画分を沈殿させた。ヘキサンで洗浄
後、乾燥させてＴ−23−、Ｔ−23−、Ｔ−23
−およびＴ−23−を含む粗混合物を得た。得
られた粗混合物は、１のメタノールに溶解した
後、塩化第二鉄を20ｇ添加し、室温にて３時間撹
拌した。次いで減圧濃縮して溶媒を留去するとＴ
−23−およびＴ−23−を含む油状物が得られ
た。得られた油状物は酢酸エチル2.5に溶解し
た後、飽和食塩水で５回洗浄し、酢酸エチル層を
減圧下に濃縮して、油状物を得た。得られた油状物は、ククロロホルム150mlに溶
解してシリカゲルカラム（８cm×40cm）に吸着さ
せ、クロロホルム／メタノール（100／１）で溶
出を行なつた。最初の溶出液2.5は活性物質を
含まないので除去し、その後は15mlずつの分取を
行なつた。各フラクシヨンはKieselgel60F₂₅₄
（Art.5715）のシリカゲル板を用いる薄層クロマ
トグラフイー（展開溶媒：酢酸エチル／ベンゼン
＝１／１、２回展開）に付し254nmのUV灯下で
Ｔ−23物質の確認を行なつたところ、第16番目か
ら第50番目のフラクシヨンに純粋なＴ−23−が
含まれ、第51番目から第65番号のフラクシヨンに
Ｔ−23−とＴ−23−を含む区分が溶出され
た。Ｔ−23−を含む区分は減圧下に濃縮して溶媒
を留去しＴ−23−の黄色粉末12.5ｇを得た。ま
た、Ｔ−23−とＴ−23−を含む区分は減圧下
に濃縮してＴ−23−およびＴ−23−を含む黄
色粉末0.6ｇを得た。得られた粉末はアセトンに
溶解してシリカゲル（西独メタル社Kieselgel）
60F₂₅₄Art.5744）の薄層クロマトグラフイーに付
し、ベンゼン／酢酸エチル（１：１）の混合溶媒
系で展開した後乾燥してから再び同一溶媒系で展
開し、254nmの紫外線灯下で確認するとR_f＝0.58
附近にＴ−23−区分が現われ、R_f＝0.56附近に
Ｔ−23−区分が現われる。このＴ−23−区分
はかき取り、得られたシリカゲルはカラムにつ
め、クロロホルム／メタノール（10／１）の混合
溶媒を流してＴ−23−物質を溶出し、溶出液を
減圧下に濃縮するとＴ−23−物質の黄色紛末が
0.5ｇ得られた。また、Ｔ−23−区分をかき取
り、同様に溶出した後、溶出液を減圧下に濃縮す
るとＴ−23−物質の黄色粉末が50mg得られた。実施例２実施例１で得られたＴ−23−物質50mgを50ml
の酢酸エチルに溶解した後、0.5％ナトリウムハ
イドロサルフアイト水溶液40mlと分液ロート中
で、酢酸エチル層の黄色が消えるまで激しく撹拌
した。静置後水層を除去し酢酸エチル層は飽和食
塩水で５回洗浄した後、減圧下に濃縮して油状物
50mgを得た。得られた油状物は少量のアセトンに
溶解した後、シリカゲル（西独メルク社
Kieselgel60F₂₅₄、Art5744）の薄層クロマトグラ
フイーに付しベンゼン／クロロホルム／メタノー
ル（３：７：３）の混合溶媒系で展開後、R_f＝
0.55附近のＴ−23−物質に相当する区分を
254nmの紫外線灯下に確認してかき取つた。得ら
れたシリカゲルはカラムにつめクロロホルム／メ
タノール（７：１）の混合溶媒を流しＴ−23−
物質を溶出した。得られた溶出液は減圧下に濃縮
してＴ−23−物質の白色粉末35mgが得られた。

【図面の簡単な説明】

添付の第１図は本発明のＴ−23−の赤外吸収
スペクトル図、第２図はＴ−23−のNMRスペ
クトル図および第３図はＴ−23−の赤外吸収ス
ペクトル図である。

Claims

【特許請求の範囲】１構造式で表わされる化合物または構造式で表わされる化合物。