JPS58121290A - 抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規の抗生物質に関し、更に詳しくはストレプ
トミセス属に属するＴＭ−５５１株を好気的条件下で培
養することにより得られる抗生物質に関する。

本発明者らは前記ＴＭ−５３１株の好気培養物中に主と
してダラム陽性菌に対して強い増殖抑制ｆ１用を示す抗
生物質が生産、蓄積されることを見出し、培養物中より
活性物質を抽出、精製して新規の抗生物質を得、本発明
を完成した、本発明の目的物は、 （式中　Ｒ１とＲ２は異なり、それぞれ水素原子かメチ
ル基を示す。）で表わされる化合物およびその塩である
。

前記の式において　Ｒ１がメチル基を示し　Ｒ２が水素
原子を示す化合物を抗生物質ＴＭ−５３１Ｄと称し、ま
たＲ１が水素原子を示し、Ｒ２がメチル基を示す化合物
を抗生物質ＴＭ−５３１Ｅと称する６、本発明において
、抗生物質ＴＭ−５３１Ｄおよび同Ｅの生産菌としてス
トレプトミセス属に槙するストレプトミセス・ノへイグ
ロスコピカスＴ　Ｍ　−５３１を用いた。この菌株は埼
玉県大宮市の土壌から新たに分離したものであり、微生
物の名称［放線菌ＴＭ−５３１Ｊ　、微生物寄託番号「
微工研菌寄第４７３７号」として工業技術院微生物工業
技術研究所に寄託されている。そ・の菌学的性状および
在来の類似様の異同については特開昭５５−９２３８７
号明細書に詳しく記述されている。

本発明におけるＴＭ−５３１Ｄおよび同Ｅの生産菌を好
気的条件下で培養することにより行う。

培地は液体培地が好ましく、主として炭素源。

窒素源、無機塩よりなり、その他必要に応じて消泡剤、
ビタミン類、前駆物質を加えることができ、ｐｉ−（は
７前後に調整する。

炭素源としては、例えば、グルコース・マルトース、澱
粉、デキストリン、グリセリン、落花生油などを単独か
または混合して用いる。窒素源としては、例えば、ペプ
トン、肉エキス。

大豆粉、オートミール、コーン・ステイープ・リカー、
尿素、アンモニウム塩などを単独か捷たは混合して用い
る。無機塩としては、例えば、炭酸カルシウム、塩化す
ｌ−、ｌ）ラム、硫酸第一、鉄。

塩化マンガンなどを単独かまだは混合して用いる。

消泡剤としてはシリコーン化合物などを用いることがで
きる。

培養方法としては振盪培養２通気床部培養などの好気的
培養が適しており、ｐＨ７前後で２５〜４０℃、望まし
くは２８〜３０℃で培養する。

培養により生成した抗生物質ＴＭ−５３１Ｄおよ同 ｉ６Ｆは、例えば次の方法により単離することができる
。

すなわち、培養終了後の培養物を遠・し分離して上澄液
と菌体に分離する。

上澄液中の活性物質は酢酸エチル、ベンセン。

クロロホルムなどの非水溶性有機溶媒で抽出すじて、濃
縮後、適当な有機溶媒で更に抽出することもできる。

菌体中の活性物質は、アルコール、アセトンなどの有機
溶媒で抽出し、これを濃縮後、上澄液の抽出溶媒と同じ
溶媒に転溶する。

上澄抽出液と菌体抽出液を合せ、減圧濃縮する。この濃
縮物をベンゼンに溶解し、シリカゲルカラムに活性物質
を吸着させ、ベンゼン、酢酸酸エチルなどの有機溶媒で
活性物質中のＴＭ−５３１およびデアネマイシンを溶出
、除去する。

残りの活性物質をアセトンなどの有機溶媒で溶出し、溶
媒溜去後、ｎ−ヘキサン−アセトン（４：１）混合溶媒
に再溶解し、７リカゲル・カラムに吸着させる。

とのカラムをｎ−ヘキサン−アセトン（４：１）混合溶
媒で、活性物質を溶出し、カラム容積の１〜１．５べ、
ト量の区分を集める。

この区分を減圧濃縮し、ベンゼンに再溶解し、／リカゲ
ルカラムに吸着させた。このカラムをベンゼン−アセト
ン（４：１）混合溶媒で活性物質を溶出し、カラム容積
の１〜１５ベツト量の区分Ａ（薄層クロマトグラフィー
により確認）と同１．５〜２ベツト量の区分Ｂ（薄層ク
ロマトグラフィーによめ確認）とを集める。

区分Ａを常法によシ精製することにより、抗生物質ＴＭ
−５３１Ｄの結晶を得ることができる。

精製上または使用上、必要があればナトリウム塩、カリ
ウム塩、アンモニウム塩などに変換することもできる。

また区分Ｂを常法により精製することにより、抗生物質
ＴＭ−５５１にの結晶を得ることができる。

精製上まだは使用上、必要があればす）　ＩＪウム塩、
カリウム塩、アン汚ニウム塩などに変換することもでき
る。

本発明の目的物質である抗生物質ＴＭ−５３１Ｄおよび
同Ｅはその元素分析値１分子量、紫外線吸収スペ、クト
ル、赤外線吸収スペクトル、甘−ＮＭＲスペクトル、１
３０−ＩＪＭＲスペクトルの解析によりその構造式が次
の如く決定された。また、その理化学的性質および抗菌
作用は次の通りである。

（Ａ）抗生物質ＴＭ−５’３１Ｄ ｃＨ３ＯＮ（３ （Ｉｔ）　　理化学的性質（ナトリウム塩として測定） ■　元素分析値　Ｃ４６Ｈπ０１４Ｎａとして理論値（
％）：　Ｃ６５，１６Ｈａ５８　Ｎａ２．６３実測値（
％）：　Ｃ６２，９９Ｈ＆６２　Ｎａ２．５１■　分子
量＝８７４ ■　融　点：１６４．５〜１６１５℃ ■　比旋光度：〔α坩＋４４．８°（Ｃ！＝０．５．メ
タノール） ■　紫外線吸収スペクトル（メタノール）Ｅ１％（２５
２ｎｍ）＝１７１．４ ｍ ■　赤外線吸収スペクトルＫＢｒ錠で測定した結果を第
１図に示す。

■　溶媒に対する溶解性：水に不溶、メタノール、エタ
ノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼ
ンＫＥＴ溶。

■　呈色反応：ヨード反応、過マンガン酸カリウムおよ
びバニリン−硫酸反応陽性。

■　物質の色：無色 ■　’Ｈ−ＮＭＲスペクトル二重クロロホルり東４００
　ＭＨ２で測定した結果を第２図に示す。

＠　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル二重クロロホルム中、５
０ＭＨｚで測定した結果を第３図に示す。

■　塩基性、酸性、中性の区別：酸性。

（ｎ［）　　抗菌作用 抗生物質ＴＭ−５３１Ｄはグラム陽性菌に対してすぐれ
た増殖抑制作用を有す るが、ダラム陰性菌、酵母に対しては 増殖抑制作用を有しない。また抗生物 質ＴＭ−５３１ＤｌｄＴＭ−５３１と同様に原虫増殖抑
制作用を有する。

ＣＢ）抗生物質ＴＭ−５３１Ｅ （ＩＩ）　　理化学的性質（ナトリウム塩として測定） ■　元素分析値　Ｃ４６珊５０１４Ｎａとして理論値（
％）　：　Ｃ６３，１６Ｈａ５８　Ｎａ２．６３実測値
（％）：　Ｃ６２，９９Ｈａ６２　Ｎａ２．５６■　分
子量　二８７４ （３，ｌ融点：２０５．０〜２０Ｚ５℃■　比旋光度：
　〔αχ６＋４４．ＦＰ（ｃ＝ａ、５．メタノール）■
　紫外線吸収スペクトル（メタノール９Ｂ５！（２２６
ｎｍ）＝１８３．９ （（〕　　赤外線吸収スペクトルＫＢｒ錠で測定した結
果を第４図に示す。

■　溶媒に対する溶解性、水に不溶、メタノール、エタ
ノール、アセトン、酢酸エチル、クロロホルム、ベンゼ
ンに可溶。

■　呈色反応：ヨード反応、過マンガン酸カリウムおよ
びバニリン−硫酸反応陽性。

■　物質の色：無色。

■　ＪＨ−ＮＭＲスベ〉トル二重クロロホルム中、４０
０ＭＨｚで測定した結果を第５図に示す。

（７１）　１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム
中、５０ＭＨ２で測定した結果を第６図に示す。

■　塩基性、酸性、中性の区別、酸性。

（ＩＩＩ）抗菌作用 抗生物質ＴＭ−５３１Ｅはグラム陽性菌に対してすぐれ
た増殖抑制作用を有するが、ダラム陰性菌、酵母に対し
ては増殖抑制作用を有しない。また抗生物質ＴＭ−５３
１Ｅは、ＴＭ−５３１と同様に原虫増殖抑制作用を有す
る。

以上のように、抗生物質ＴＭ−５３１Ｄおよび同Ｅは新
規の抗生物質であって、医薬、動物薬。

消毒殺菌剤として有用である。

同 次に抗生物質ＴＭ−５３１Ｄおよ０−、Ｅの抗菌作用を
明らかにする試験例とその製造例を示す実施例を挙げて
本発明を具体的に説明する。

試験例 培地としてハートインフュージョン・アガー抗生物質Ｔ
Ｍ−５３４の各種細菌に対するＭＩＯ（最小発育阻止濃
度）を測定し、その抗菌作用を調べた。

その結果を次表に示す。

実施例 （１）　　グルコース２％、グリセリン２％、オートミ
ール２％、落花生油０．５％、肉エキス０．３　Ｘ　ｒ
炭酸カルシウム０．５％２食塩０．３Ｘ、硫酸第二鉄０
０４％、′塩化マンガン０．０４％からなる無菌液体培
地（ｐ　Ｈ７，０）にストレプトミセス・バイグロスコ
ピカスＴＭ−５３１を接種し、６０℃で７２時間振盪培
養したつこの培養液３ｔを種菌として、２５０を容発酵
槽内の前記と同一組成培地２００ｔに植菌し、３０℃で
１２０時間通気攪拌培養した。この際、状態に応じて必
要があれば消泡剤としてＫＳ−６６（信越化学制。

シリコーン系消泡剤）などを添加した。

こうして得た培養液２００ｔを遠心分離し、醒体と上澄
液に分離した。

菌体をアセトン２０１で２回抽出し、上澄液はアンバー
ライトＸＡＤ−８（商品名　ローム・アンド・・・ス社
製）に吸着させ、洗浄後アセトンで溶出した、 このアセトン抽出液とアセトン溶出液を合せ、減圧濃縮
した。侍られた残渣を酢酸エチル２ｔで２回抽出し、こ
の抽出液を合せ、ｋ酸ナトリワムで脱水後、減圧溜去し
、油状物質約１２３７を得た。

質 この油状＼をベンゼン０．５１に溶解し、ベンゼンで調
整したシリカケルカラム〔ワコーゲルｃ−２ｏｏ（商品
名　和光紬薬製）；　２１〕に吸着させた。ベンゼン５
ｔで洗浄し　酢酸エテル５ｔで溶出された区分を除き、
アセトン５ｔで溶出した。

このアセトン区分を集め、溶媒を除去し、得られた残渣
をｎ−ヘキサン−アセトン（４：１）混合溶媒０．１ｔ
に溶解し、これと同じ溶媒で調整したシリカケルカラム
（ワコーゲルＣ−２００二ｏ、　ｓ　ｔ　）に吸着させ
た。０．５ｔから０．７５　ｔの間の溶出区分を集め、
濃縮乾個して白色粉末を得た。

この粉末を１０艷のベンゼンに溶解し、ベンゼンテ調整
したシリカゲルカラム（ワコークル０−２００　：　１
　ｏｏ−）に吸着させた、このカラムをベンゼン２０　
ｏｍｚ、　爽にベンゼン−アセト／（９二１）混合、溶
媒２００−で洗浄した。続いてベンセン−アセトン（４
：１）混合溶媒３００ｒｎｔで溶出し、１００−から１
５０−の間の溶出区分Ａ〔薄層クロマトグラフィー（ア
セトン−ｎ−ヘキサン＝１：１）により確認〕と、１５
０−から２００−の間の溶出区分ＢＣ薄層クロマトグラ
フィー（アセトン−ｎ−へキサン＝に１）によシ確認〕
を集め、それぞれを濃縮乾個して白色粉末ＡおよびＢを
得た。

（２）得られた粉末Ａを少量のアセトンに溶解し、セフ
ァデックスＬＨ−２０カラム（商品名　ファルマシア社
製）を用い、アセトンでゲルｆ過を行なった。

得られた活性区分を集め、濃縮乾個して白色粉末を得、
これをアセトニトリルから結晶化し、無色プリズム状結
晶としてＴＭ−５３１Ｄナトリウム塩１１０〜を得た。

融点　　１６４．５〜１６７．５℃ （３）倚られた粉末Ｂを前項（２）に準じて処理し、無
色プリズム状結晶としてＴＭ−５３１Ｅナトリウム塩９
０■を得たつ 融点　　２０５．０〜２０Ｚ５℃

【図面の簡単な説明】

第１図はＴＭ−５３１Ｄナトリウム塩のＫＢｒ錠による
赤外線吸収スペクトルを示し、第２図はＴＭ−５３１Ｄ
ナトリウム塩の重クロロホルム溶液による’Ｈ−Ｎ　Ｍ
　Ｒスペクトルを示し、第３図は同１３Ｃ−Ｎ　Ｍ　Ｒ
スペクトルを示す。また第４図はＴＭ−，５３１Ｅナト
リウム塩のＫＢｒ錠による赤外線吸収スペクトルを示し
、第５図はＴＭ−５３１Ｅナトリウム塩の重クロロホル
ム溶液によるＩＨ−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトルを示し、第６
図は同１３ｃ　−Ｎ　Ｍ　Ｒスペクトルを示す。 特許出願人　大正製薬株式会社 代理人　弁理士　　北　川　富　造 第１頁の続き ０発　明　者　用嶋朗 東京都豊島区高田３丁目２４番１ 号大正製薬株式会社内 ０発　明　者　大村貞文 東京都豊島区高田３丁目２４番１ 号大正製薬株式会社内 ０発　明　者　大岳望 横浜市保土ケ谷区狩場町４６４−１ ０発　明　者　瀬戸治男 八王子市上野町３−１００

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 チル基を示す。） で表わされる化合物およびその塩。