JPH04304890A - ガノデリン酸類の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は，各種ガノデリン酸を含
有するマンネンタケ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌｕｃｉｄ
ｕｍ）菌糸体培養物からのガノデリン酸類の製造方法，
および該菌糸体培養物に関する

【０００２】。

【従来の技術】マンネンタケ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌ
ｕｃｉｄｕｍ）はセダナシタケ目サルノコシカケ科に属
する担子菌である。マンネンタケは，古来中国では霊芝
または芝草，日本ではレイシまたはサイワイタケと呼ば
れており，抗腫瘍作用，免疫増強作用，抗高血圧作用，
抗高脂血症作用などの優れた薬理作用を有する有効成分
を含有する生薬として珍重されている。

【０００３】このマンネンタケの有効成分を医薬品とし
て利用したり，マンネンタケそのものを健康食品として
用いるなどの試みがなされている。しかし，マンネンタ
ケは天然には稀にしか収穫されないため，安定して供給
することは困難であった。そこで近年では，マンネンタ
ケの子実体または菌糸体を人工的に栽培または培養する
試みがなされている。例えば，マンネンタケの人工栽培
法（特開昭４８−８５３３７号公報），マンネンタケ菌
糸体培養法（特開昭６０−４３３１８号公報）などの報
告があり，これらの方法により，安定してマンネンタケ
が供給されるとともに，その有効成分の科学的解明に関
する種々の研究が近年盛んに行われている。

【０００４】ガノデリン酸類はこのようなマンネンタケ
有効成分のひとつであり，抗腫瘍作用，免疫増強作用，
抗炎症作用，血圧降下作用などの種々の薬理作用を有す
ることが明らかにされている。ガノデリン酸類としては
ガノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ
，Ｈ，Ｉ，Ｋ，Ｍａ〜Ｍｋ，Ｏ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，
Ｕ，Ｖ，Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺが知られており，そのうち
ガノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ
，Ｈ，ＩおよびＫは子実体にのみ見い出され，ガノデリ
ン酸Ｍａ〜Ｍｋ，Ｏ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｕ，Ｖ，Ｗ
，Ｘ，ＹおよびＺは菌糸体にのみ見い出されている。こ
のようなガノデリン酸類のうち，例えば，血圧降下作用
を持つとされるガノデリン酸類はガノデリン酸Ｂ，Ｄ，
Ｆ，Ｈ，Ｋ，ＳおよびＹであり，これらのほとんどは子
実体に含まれ，菌糸体に主として存在する種（ガノデリ
ン酸ＳおよびＹ）は数少ない。これとは逆に，抗腫瘍作
用を持つとされるガノデリン酸類はガノデリン酸Ｕ，Ｖ
，Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺであり，これらは菌糸体にのみに
含有され，子実体には存在しない。このように，子実体
または菌糸体のどちらか一方から，血圧効果作用を有す
るガノデリン酸類と抗腫瘍作用を有するガノデリン酸類
とを，同時に得ることはできない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は，上記従来の
課題を解決するものであり，その目的とするところは，
マンネンタケ子実体に特有のガノデリン酸類と，マンネ
ンタケ菌糸体に特有のガノデリン酸類とを，同時に得る
ことの可能な，ガノデリン酸類の製造方法を提供するこ
とにある。本発明の他の目的は、上記マンネンタケ子実
体に特有のガノデリン酸類とマンネンタケ菌糸体に特有
のガノデリン酸類との両方を含有するマンネンタケ菌糸
体培養物を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明のガノデリン酸類
の製造方法は，（ａ）マンネンタケ（Ｇａｎｏｄｅｒｍ
ａ　ｌｕｃｉｄｕｍ）の種菌糸を炭素源および有機栄養
源を含有する液体培地にて振盪培養または通気攪拌培養
し，菌糸体を増殖させる工程；（ｂ）該菌糸体を直ちに
静置条件下に移して静置培養する工程；および（ｃ）得
られた菌糸体培養物からガノデリン酸類を抽出する工程
を包含し，そのことにより上記目的が達成される。

【０００７】本発明のマンネンタケ菌糸体培養物は，上
記静置培養により得られる。この培養物は，マンネンタ
ケ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌｕｃｉｄｕｍ）の子実体に
特有のガノデリン酸類と，菌糸体に特有のガノデリン酸
類とを含有する。

【０００８】好適な実施態様においては，上記子実体に
特有のガノデリン酸類はガノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｃ１
，Ｃ２，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，ＩおよびＫでなる群から
選択される少なくとも一種であり，前記菌糸体に特有の
ガノデリン酸類はガノデリン酸Ｍａ〜Ｍｋ，Ｏ，Ｐ，Ｑ
，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｕ，Ｖ，Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺでなる群か
ら選択される少なくとも一種である。

【０００９】本発明の方法に用いられる上記液体培地に
含有される炭素源としては，グルコース，フルクトース
などの単糖類；シュークロース，マルトースなどの少糖
類；およびセルロース，デンプンなどの多糖類のうちの
少なくとも一種が用いられる。これらの炭素源は，通常
，培地中に２〜６重量％の割合で含有される。

【００１０】有機栄養源としては，各種培地に一般に用
いられる天然物由来の栄養源がいずれも利用され得る。 例えば，米ぬか，コーンスティープリカー，ペプトン，
肉エキス，小麦胚芽などの穀類胚芽，麦芽エキス，酵母
エキス，乾燥ビール酵母末，ソイトン，コーンミール，
ジャガイモエキスなどが利用され得る。これらの有機栄
養源は，通常，培地中に０．２〜１．０重量％の割合で
含有される。

【００１１】上記液体培地は常法に従って調製すればよ
く，通常，１２０〜１３０℃で１５〜３０分間滅菌処理
した後，マンネンタケ菌糸体の培養に用いられる。マン
ネンタケ菌糸体の培養は，該液体培地に適当量の種菌糸
を接種し，好気的条件下に行われる。

【００１２】用いる種菌糸は，担子菌類に属するセダナ
シタケ目サルノコシカケ科マンネンタケのものであれば
いずれでもよく，例えば，子実体の人工栽培を行う農家
より入手できる。

【００１３】本発明方法によりガノデリン酸類の製造を
行なうには，まず，上記液体培地に種菌糸を接種し（例
えば，１リットル容の容器に入れた液体培地に種菌糸約
１０〜２０ｍｇを接種するのが適当である），培養を行
なう。 培養温度は２３〜３０℃，好ましくは約２５℃であり，
例えば，暗所で回転振盪培養（１００〜２００ｒｐｍ）
を行なうことにより，あるいは通気攪拌培養を行なうこ
とにより行われる。このような培養により得られる菌糸
体には，マンネンタケ菌糸体に特有のガノデリン酸類（
ガノデリン酸Ｍａ〜Ｍｋ，Ｏ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｕ
，Ｖ，Ｗ，Ｘ，ＹおよびＺ）のみが含有され，子実体に
特有のガノデリン酸類（ガノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｃ１
，Ｃ２，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ，ＩおよびＫ）は含有され
ない。

【００１４】次いで，増殖した培養菌糸体を静置条件下
に移し，静置培養を行なう。上記液体培地による培養に
おいて，例えば，培地１リットルあたりの菌糸体重量（
乾燥物）が６〜１２ｇになった時点，あるいは液体培地
成分の残存濃度が初期培地の２０〜４０％になった時点
で，静地培養に切りかえるのが適当である。静置培養は
無菌的または非無菌的（解放的）のいずれの条件でもよ
く，菌糸体培養物はフラスコのままで，小型容器に小分
けして，あるいは大型容器に流し込み広げて培養され得
る。静置培養の温度条件は，通常２３〜３０℃，好まし
くは２５〜２８℃であり，培地表面が白色の菌糸体によ
りおおわれるまで，通常３〜４日間培養を続ける。この
ようにして得られる菌糸体培養物には，マンネンタケ子
実体に特有のガノデリン酸類および菌糸体に特有のガノ
デリン酸類の両方が含有される。

【００１５】このようにして得られた菌糸体培養物を必
要に応じて乾燥させた後，各種溶媒，例えば，水，アル
コール（メタノール，エタノール，ｎ−ブタノールなど
），クロロホルム，エーテル，ベンゼン，ヘキサン，酢
酸エチルまたはこれらの混合液を用いて抽出することに
より，ガノデリン酸類が抽出される。このようにして，
例えば，静置培養によって得られる菌糸体培養物の乾燥
物１ｇあたり２．５〜１０．０ｍｇのガノデリン酸類が
得られる。これらのガノデリン酸類を高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）により分析すると，マンネンタ
ケ子実体に特有のガノデリン酸類および菌糸体に特有の
ガノデリン酸類の両方が確認される。例えば，ガノデリ
ン酸Ａを指標物質として下記のＨＰＬＣ条件で分析する
と，ガノデリン酸Ａをはじめとしてガノデリン酸Ｂ，Ｃ
などの子実体に特有のガノデリン酸類が含有されている
ことが確認される。

【００１６】 検　　出　　器：日本分光製８７５−ＵＶカ　　ラ　　
ム：オクタデシリル化シリカゲル充填カラム（４．６×
２５０ｍｍ） カラム温度：４０℃ 移　　動　　相：２％酢酸水溶液／アセトニトリル＝２
／１流　　　　　　量：１ｍｌ／分 検　出　波長：２５４ｎｍ また，ガノデリン酸Ｓを指標物質として下記のＨＰＬＣ
条件で分析すると，ガノデリン酸Ｓをはじめとしてガノ
デリン酸Ｔ，ガノデリン酸Ｒなどの菌糸体に特有のガノ
デリン酸類が含有されていることが確認される。

【００１７】 検　　出　　器：日本分光製８７５−ＵＶカ　　ラ　　
ム：オクタデシリル化シリカゲル充填カラム（４．６×
１５０ｍｍ） カラム温度：室温 移　　動　　相：リン酸緩衝液＊／メタノール＝９／２
０（＊リン酸二水素カリウム−リン酸水素二ナトリウム
，ｐＨ６．５）流　　　　　　量：１ｍｌ／分 検　出　波長：２１０ｎｍ このように，本発明により，マンネンタケ菌糸体に特有
のガノデリン酸類とともに，従来マンネンタケ菌糸体か
らは得られなかった子実体に特有のガノデリン酸類を含
有する，薬理作用の高い菌糸体培養物が得られる。この
菌糸体培養物から得られるガノデリン酸類は，医薬品ま
たは健康食品として広く利用され得る。

【００１８】

【実施例】本発明を以下の実施例につき説明する。

【００１９】（実施例１）マンネンタケの菌糸体をポテ
ト，デキストロース寒天培地に接種し，２５℃，暗所に
て１４日間静置培養してマンネンタケ種菌糸を得た。次
に，炭素源としてのグルコース（２ｗ／ｖ％）と，有機
栄養源としてのコーンスティープリカー（１ｗ／ｖ％）
とを滅菌水に分散することにより，液体培地を調製した
。この培地３００ｍｌを１リットル容のマイヤーフラス
コに分注し，シリコーン製の栓をしてアルミ箔をかぶせ
た後，１２０℃にて２０分間滅菌処理をした。これに上
記種菌糸約１０〜２０ｍｇを接種し，回転式振盪培養器
（１７０ｒｐｍ）を用いて２５℃，暗所にて菌糸体乾燥
物重量が培地１リットルあたり１２ｇになるまで培養を
続けた。その後，直ちにマイヤーフラスコを静置条件下
に移し，２５℃，暗所にて，培養物の表面が白色菌糸で
おおわれるまで７日間静置培養を続けた。

【００２０】得られた菌糸体培養物を採取し，５０℃の
熱風乾燥機中で乾燥させて，乾燥菌糸体培養物を得た。 この乾燥培養物１０ｇを正確に量り，これに２０倍量の
５０％エタノールを加え，よく振り混ぜた後，濾過した
。濾液を減圧下で濃縮し，水５０ｍｌに分散させた後，
クロロホルム５０ｍｌで抽出した。得られたクロロホル
ム抽出液に５％炭酸水素ナトリウム水溶液５０ｍｌを加
えて抽出し，水層を得た。この水層を２Ｎ塩酸を用いて
ｐＨ３に調整し，さらにクロロホルムで抽出を行った。 このクロロホルム抽出液を減圧下に濃縮して，これをガ
ノデリン酸画分とした。 ガノデリン酸画分の重量は，上記菌糸体乾燥物１ｇあた
り１０．５ｍｇであった。さらに，この濃縮物（ガノデ
リン酸画分）をエタノールに溶解させて試料溶液とし，
ＨＰＬＣにて分析した。　　まず，マンネンタケ子実体
に含有されるガノデリン酸類の主要成分であるガノデリ
ン酸Ａを指標物質として，下記のＨＰＬＣ条件で試料溶
液を分析した。

【００２１】 検　　出　　器：日本分光製８７５−ＵＶカ　　ラ　　
ム：オクタデシリル化シリカゲル充填カラム（４．６×
２５０ｍｍ） カラム温度：４０℃ 移　　動　　相：２％酢酸水溶液／アセトニトリル＝２
／１流　　　　　　量：１ｍｌ／ｍｉｎ 検　出　波長：２５４ｎｍ その結果，上記ガノデリン酸画分１０．５ｍｇには，ガ
ノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃなどの子実体に特有のガノデリン
酸類が４．２ｍｇ含まれていた。このことから，菌糸体
を上記培養条件で培養することにより，菌糸体培養物は
子実体に特有のガノデリン酸類を生産することが確認さ
れた。

【００２２】次いで，マンネンタケ菌糸体に含有される
ガノデリン酸類の主要成分であるガノデリン酸Ｓを指標
物質として，下記のＨＰＬＣ条件で試料溶液を分析した
。

【００２３】 検　　出　　器：日本分光製８７５−ＵＶカ　　ラ　　
ム：オクタデシリル化シリカゲル充填カラム（４．６×
１５０ｍｍ） カラム温度：室温 移　　動　　相：リン酸緩衝液＊／メタノール＝９／２
０（＊リン酸二水素カリウム−リン酸水素二ナトリウム
，ｐＨ６．５）流　　　　　　量：１ｍｌ／分 検　出　波長：２１０ｎｍ その結果，上記ガノデリン酸画分１０．５ｍｇには，ガ
ノデリン酸Ｓ，Ｔ，Ｒなどの菌糸体に特有のガノデリン
酸類が４．８ｍｇ含まれていた。

【００２４】このように，菌糸体を上記培養条件で培養
することにより，菌糸体培養物には子実体に特有のガノ
デリン酸類と，菌糸体に特有のガノデリン酸類とが含有
されるようになることが明らかとなった。

【００２５】（実施例２）実施例１と同様にして，マン
ネンタケ種菌糸の回転振盪培養を２５℃の暗所にて７日
間行なった。液体培地成分の残存濃度が初期培地の２０
％になった時点で上記回転振盪培養をやめ，培養物を角
型皿状容器に広げて，１４日間静置培養を行なった。

【００２６】得られた菌糸体培養物を実施例１と同様に
採取し，乾燥させた後に抽出して分析した結果，乾燥物
試料１ｇあたり１２．２ｍｇのガノデリン酸画分が得ら
れた。そのうち，ガノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃなどの子実体
に特有のガノデリン酸類は４．８ｍｇ，そしてガノデリ
ン酸Ｓ，Ｔ，Ｒなどの菌糸体に特有のガノデリン酸類は
５．１ｍｇであった。

【００２７】（実施例３）実施例２と同様にしてマンネ
ンタケ種菌糸の回転振盪培養を７日間行い，液体培地成
分の残存濃度が初期培地の２０％になった時点で，培養
物を実施例２よりも大きな表面積の角型皿状容器に広げ
て１４日間静置培養した。

【００２８】得られた菌糸体培養物を実施例１と同様に
採取し，乾燥させた後に抽出して分析した結果，乾燥物
試料１ｇあたり１６．３ｍｇのガノデリン酸画分が得ら
れた。そのうち，ガノデリン酸Ａ，Ｂ，Ｃなどの子実体
に特有のガノデリン酸類は７．６ｍｇ，そしてガノデリ
ン酸Ｓ，Ｔ，Ｒなどの菌糸体に特有のガノデリン酸類は
７．８ｍｇであった。

【００２９】このように，表面積を大きくして静置培養
することにより，子実体に特有のガノデリン酸類と菌糸
体に特有のガノデリン酸類とを，同時に高濃度で含有す
る菌糸体培養物が得られることがわかった。

【００３０】（比較例１）実施例１と同様にして，２５
℃の暗所にてマンネンタケ種菌糸の回転振盪培養を１４
日間行ったが，その後の静置培養は行わなかった。

【００３１】回転振盪培養により得られた菌糸体培養物
を実施例１と同様に採取し，乾燥させた後に抽出して分
析した。その結果，乾燥物試料１ｇあたり４．２ｍｇの
ガノデリン酸画分が得られた。そのうち菌糸体に特有の
ガノデリン酸類が３．２ｍｇ検出されたが，子実体に特
有のガノデリン酸類は検出されなかった。

【００３２】このように，回転振盪培養のみでその後の
静置培養を行わなかった場合は，菌糸体に特有のガノデ
リン酸類のみが生産され，子実体に特有のガノデリン酸
類は生産されないことが確認された。（比較例２）実施
例１と同様にして，２５℃の暗所にてマンネンタケ種菌
糸の回転振盪培養を６週間行ったが，その後の静置培養
は行わなかった。

【００３３】回転振盪培養により得られた菌糸体培養物
を実施例１と同様に採取し，乾燥させた後に抽出して分
析した。その結果，乾燥物試料１ｇあたり４．８ｍｇの
ガノデリン酸画分が得られた。そのうち菌糸体に特有の
ガノデリン酸類が３．８ｍｇ検出されが，子実体に特有
のガノデリン酸類は比較例１と同様に検出されなかった
。

【００３４】このように，回転振盪培養のみを６週間と
長期に行っても，静置培養を行わなかった場合には，比
較例１と同様に菌糸体に特有のガノデリン酸類のみが生
産され，子実体に特有のガノデリン酸類は生産されない
ことが確認された。

【００３５】（比較例３）天然のマンネンタケ子実体を
，実施例１と同様にして乾燥させた後に抽出し，分析し
た。その結果，乾燥物試料１ｇあたり１８ｍｇのガノデ
リン酸画分が得られた。そのうち子実体に特有のガノデ
リン酸類が１６．２ｍｇ検出されたが，菌糸体に特有の
ガノデリン酸類は全く検出されなかった。

【００３６】このように，天然のマンネンタケ子実体に
は菌糸体に特有のガノデリン酸類は全く含まれていない
ことが確認された。

【００３７】

【発明の効果】本発明によれば，このように，マンネン
タケ菌糸体に特有のガノデリン酸類とともに，従来マン
ネンタケ菌糸体からは得られなかった子実体に特有のガ
ノデリン酸類を含有する菌糸体培養物が提供される。こ
の菌糸体培養物から容易かつ大量に種々のガノデリン酸
類を得ることができる。このようにして得られたガノデ
リン酸類，あるいは上記菌糸体培養物は，医薬品または
健康食品として利用され得る。

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（ａ）マンネンタケ（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ
   　ｌｕｃｉｄｕｍ）の種菌糸を炭素源および有機栄養源
   を含有する液体培地にて振盪培養または通気攪拌培養し
   ，菌糸体を増殖させる工程；（ｂ）該菌糸体を直ちに静
   置条件下に移して静置培養する工程；および（ｃ）得ら
   れた菌糸体培養物からガノデリン酸類を抽出する工程；
   を包含する，ガノデリン酸類の製造方法。
2. 【請求項２】前記ガノデリン酸が，マンネンタケの子実
   体に特有のガノデリン酸類と，菌糸体に特有のガノデリ
   ン酸類とを含有する，請求項１に記載の方法。
3. 【請求項３】前記ガノデリン酸が，ガノデリン酸Ａから
   ガノデリン酸Ｚでなる群から選択される少なくとも１種
   である，請求項１に記載の方法。
4. 【請求項４】前記子実体に特有のガノデリン酸類がガノ
   デリン酸Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ，Ｈ
   ，ＩおよびＫでなる群から選択される少なくとも一種で
   あり，前記菌糸体に特有のガノデリン酸類がガノデリン
   酸Ｍａ〜Ｍｋ，Ｏ，Ｐ，Ｑ，Ｒ，Ｓ，Ｔ，Ｕ，Ｖ，Ｗ，
   Ｘ，ＹおよびＺでなる群から選択される少なくとも一種
   である，請求項２に記載の方法。
5. 【請求項５】請求項１から４の方法のいずれかに記載の
   ，静置培養により得られる菌糸体培養物。