DE19911679C2 - Biologisch aktive Extrakte aus Pilzen der Art Ganoderma pfeifferi - Google Patents
Biologisch aktive Extrakte aus Pilzen der Art Ganoderma pfeifferiInfo
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Description
Die Erfindung betrifft biologisch aktive Extrakte aus Pilzen der Art Ganoderma pfeif
feri, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung. Aus dem Fruchtkörper oder aus
dem kultivierten Mycel der Spezies Ganoderma pfeifferi werden Extrakte gewonnen, die an
timikrobiell wirksam sind und sich als Konservierungsmittel, für pharmazeutische und kos
metische Zubereitungen, zur Bekämpfung von Infektionen sowie zum Einsatz in der Fisch
zucht eignen.
Pilze der Art Ganoderma werden in der chinesischen und japanischen Volksmedizin
seit ca. 4000 Jahren verwendet, besonders in der Behandlung von Hepatopathien, chronischer
Hepatitis, Hypertonie, Arthritis, Insomnia, Bronchitis, Asthma und Magenulcera. Von den
Ganoderma-Arten wurden Ganoderma lucidum und Ganoderma applanatum, die vor allem in
Südostasien und Europa verbreitet sind bzw. kultiviert werden, am stärksten auf verschiedene
pharmakologisch relevante Aktivitäten untersucht. Die wichtigste Wirkstoffgruppe der Pilze
sind Triterpene, die ein meistens ungesättigtes Lanostan als Grundkörper besitzen. Bis jetzt
konnten mehr als 100 Triterpenoide im Fruchtkörper und Mycel der Pilze gefunden und struk
turell aufgeklärt werden. Beispiele für aus dem Fruchtkörper von Ganoderma lucidum isolier
te Triterpenoide sind die Ganoderensäuren A-E, Ganodersäuren A und B, Lucidensäuren A, B
und C, Ganoderal B, Ganoderiol A und B sowie Ganoderol A und B.
Eine zweite Inhaltsstoffgruppe aus Ganoderma lucidum stellen die Polysaccharide
dar. Sie wurden sowohl aus dem Fruchtkörper als auch aus dem kultivierten Mycel isoliert.
Dabei handelt es sich um Glucanfraktionen, die in der Regel aus 1 → 3, 1 → 4 und 1 → 6-β-
glykosidisch verknüpften Glucoseeinheiten bestehen. Beispiele für die isolierten Glucane aus
dem Fruchtkörper stellen die Ganoderane A, B und C, die aus 1 → 3-β und 1 → 6-β-
glykosidisch verknüpften Glucoseeinheiten zusammengesetzt sind, dar. Aus Ganoderma
applanatum wurden ebenfalls Triterpene, Steroide und Polysaccharide isoliert. Vertreter der
Terpenen sind die Applanoxidinsäuren A bis G, die in vitro eine Hemmung der Tumorpromo
tion bewirkten. Pilze der Art Ganoderma pfeifferi sind von H. Kreisel ("Ganoderma pfeifferi
Bres., ein wenig bekannter Lackporling", Westfälische Pilzbriefe 2, 1-5, 1960 und "Zur
Verbreitung einiger Porlinge in Ostdeutschland", Gleditschia 26. 145-153, 1998 sowie von
Michael/Hennig: "Handbuch für Pilzfreunde", 2. Bd., S. 233, Gustav Fischer Verlag Jena
1960 beschrieben worden. Biologisch aktive Verbindungen des Pilzes Ganoderma pfeifferi
sind bis jetzt nicht bekannt (Lindequist, U.: "Monographie Ganoderma in: HAGERs Handbuch
der Pharmazeutischen Praxis", Hrsg.: W. Blaschek, R. Hänsel, K. Keller, J. Reichling,
H. Rimpler, G. Schneider; 5. Aufl., Folgeband 2, S. 750-761, Springer-Verlag Berlin, Heidel
berg, New York 1998; Mizuno, T., Kim, B. K.: "Ganoderma lucidum", Il-Yang Pharm. Co.,
Seoul, 1996; Buckingham, J. (Hrsg.): "Dictionary of Natural Products", Chapmann & Hall,
London, Bd. 7, S. 574-575, 1994).
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue antimikrobielle Pilzextrakte zu fin
den, die zur Bekämpfung von Infektionen geeignet sind. Die Aufgabe wurde durch die Bereit
stellung biologisch aktiver Extrakte aus dem Fruchtkörper und/oder aus dem kultivierten My
cel von Ganoderma pfeifferi durch Extraktion mit Lösungsmitteln gelöst. Aus der Vielzahl
der möglichen Extrakte von Pilzen der Art Ganoderma pfeifferi sind solche mit herausragen
der antimikrobieller Aktivität isoliert worden.
Überraschenderweise hat sich herausgestellt, dass mit verschiedenen Extraktionsme
thoden aus dem Pilz Ganoderma pfeifferi antimikrobiell wirksame Extrakte gewonnen werden
können, die in verschiedenen Bereichen der Human- und Veterinärmedizin angewandt werden
können und die gegen Keime, bei denen die Bekämpfung schwierig ist, wie z. B. Viren, gegen
Keime mit einer Antibiotikaresistenz sowie gegen fischpathogene Keime wirksam sind.
Erfindungsgemäß werden die biologisch aktiven Extrakte aus dem Fruchtkörper
und/oder aus dem kultivierten Mycel der Spezies Ganoderma pfeifferi gewonnen. Dabei wer
den je nach den angewandten Extraktionsbedingungen Extrakte mit unterschiedlicher biologi
scher Wirksamkeit erhalten. Mit lipophilen Extraktionsmitteln können überraschenderweise
Extrakte isoliert werden, die eine Wirksamkeit gegen grampositive Bakterien aufweisen. So
zeigen Dichlormethanextrakte eine antibakterielle Aktivität insbesondere gegen multiresisten
te grampositive Kokken. Nach Extraktion mit einwertigen Alkoholen werden Extrakte mit
einer Wirksamkeit gegen gramnegative Stäbchenbakterien erreicht. Alkoholische Extrakte
zeigen insbesondere eine Wirksamkeit gegen Bakterien der Gattung Pseudomonas, die mit
den Dichlormethanextrakten nicht erreicht wird. Es war auch nicht vorhersehbar, dass zum
Beispiel aus dem Rückstand der Dichlormethanextraktion mit der ethanolischen Extraktion
sowie aus dem Rückstand der Dichlormethanextraktion und der ethanolischen Extraktion mit
einer Heißwasserextraktion jeweils ein weiterer Extrakt gewonnen werden kann, der in der
Lage ist, multiresistente Bakterien zu hemmen.
Das erfindungsgemäße Verfahren besteht darin, dass aus dem Fruchtkörper und aus
dem kultivierten Mycel der Spezies Ganoderma pfeifferi mit Dichlormethan Extrakte hergestellt werden. Aus dem
Fruchtkörper, dem Mycel oder aus dem Rückstand der Extraktion mit Dichlormethan wird
durch Behandlung mit Alkoholen ein weiterer antimikrobiell wirksamer Extrakt gewonnen.
Aus dem Fruchtkörper, dem Mycel oder aus den Rückständen der Dichlormethanextraktion
und der alkoholischen Extraktion können mit Wasser weitere Extrakte gewonnen werden, die
sich auf Grund ihrer spezifischen antimikrobiellen Eigenschaften für die Bekämpfung speziel
ler Keime sowie für die Herstellung von Kombinationspräparaten eignen.
Das Wesen der Erfindung liegt in einer Kombination bekannter (z. B. der Extraktions
verfahren an sich) und neuer Elemente (Fruchtkörper und kultiviertes Mycel der Spezies Ga
noderma pfeifferi) die sich gegenseitig beeinflussen und in ihrer neuen Gesamtwirkung einen
Gebrauchsvorteil und den erstrebten Erfolg ergeben, der darin liegt, dass neue Substanzen und
Extrakte mit antimikrobieller Wirksamkeit zur Verfügung stehen.
Die erfinderische Verwendung der Extrakte liegt darin, dass sie als Konservierungs
mittel für technische Zwecke, für pharmazeutische und kosmetische Zubereitungen sowie zur
Anwendung in der Human- und Veterinärmedizin bei der Bekämpfung von Infektionen ge
eignet sind. Sie lassen sich ferner gegen multiresistente grampositive Keime sowie gegen
fischpathogene Bakterien und damit in der Fischzucht einsetzen.
Die Erfindung soll nachstehend an einigen Beispielen erläutert werden, ohne sich auf
diese Beispiele zu beschränken.
Der pulverisierte Fruchtkörper bzw. das gemahlene Mycel der Spezies Ganoderma
pfeifferi wurden in entsprechende Extraktionshülsen eingefüllt und mit der doppelten in den
Soxhlet passenden Menge von Dichlormethan ca. 24 h, bis keine Färbung mehr auftritt, extra
hiert.
Die Ausbeute betrug 4,2%.
Der Pilzrückstand wurde nach dem Verdunsten von Dichlormethan 3 bis 5mal je 2 h
mit 80% Ethanol unter ständigem Schütteln bei Raumtemperatur extrahiert und über einen
Büchnertrichter filtriert.
Die Ausbeute lag bei 8,5%.
Der Rückstand des ethanolischen Extraktes wurde 3mal mit destilliertem Wasser bei
70°C unter ständigem Rühren extrahiert und filtriert.
Es wurde eine Ausbeute von 2,5% erzielt.
Der zu prüfende Extrakt wurde im Agardiffusionstest auf bakteriostatische Wirksam
keit geprüft.
Die zu testenden Extrakte bzw. Substanzen wurden jeweils mit entsprechenden Lö
sungsmitteln (Dichlormethan, Methanol und Wasser) aufgelöst und auf Filterpapierplättchen
in verschiedenen Konzentrationen aufgetragen. Zur Kontrolle dienten Vergleichsplättchen,
die mit 25 µl des entsprechenden Lösungsmittels durchtränkt wurden. Als Referenzsubstanz
wurde Ampicillin (10 µg/Plättchen) eingesetzt. Die getrockneten Filterpapierplättchen wurden
abschließend auf die fertig hergestellten Agarplatten aufgelegt. Für die Fertigstellung der A
garplatten wurde mit einer Impföse eine stecknadelkopfgroße Menge an Testkeimkultur in 3 ml
einer sterilen 0,9%igen NaCl-Lösung suspendiert. Anschließend wurden 200 µl der Keim
suspension zu 20 ml sterilem, verflüssigtem und wenig warmen Nähragar zugesetzt und in
Petrischalen mit einem Durchmesser von 10 cm ausgegossen. Nach Auflegung der Plättchen
auf dem festen Agar wurden die Platten für ca. 2 bis 3 Stunden bei 8°C vorinkubiert. Danach
erfolgte eine Inkubation der Platten im Inkubationsschrank bei 37°C für 24 Stunden. Micro
coccus flavus bildete eine Ausnahme. Diese Kultur wurde nur bei Raumtemperatur gelagert,
da der Keim sein Wachstumsoptimum bei 20°C erreicht.
Die Auswertung der Platten erfolgte durch Ausmessen der Durchmesser der Hemm
höfe. Sämtliche Arbeiten erfolgten unter aseptischen Bedingungen.
Der zu prüfende Extrakt wurde im Agardiffusionstest auf bakteriostatische Wirksam
keit geprüft (Methodik s. Beispiel 4).
Der zu prüfende Extrakt wurde im Agardiffusionstest auf bakteriostatische Wirksam
keit geprüft (Methodik s. Beispiel 4).
Die Prüfung erfolgte im Agardiffusionstest (Methodik s. Beispiel 4).
Die Prüfung erfolgte im Agardiffusionstest (Methodik s. Beispiel 4).
Die Prüfung erfolgte im Agardiffusionstest (Methodik s. Beispiel 4).
Heliobacter pylori ist der Erreger der chronischen Typ B-Gastritis, der in der Patho
genese der gastroduodenalen Ulkuskrankheit sowie als Cofaktor bei der Entstehung von Ma
lignomen des Magens eine Rolle spielt. Im Hemmhoftest waren folgende Extrakte aus Gano
derma pfeifferi wirksam.
Der kaltwässrige Extrakt Nr. 31 war dagegen ohne Wirkung.
Claims (15)
1. Biologisch aktiver Extrakt mit antimikrobieller Aktivität, erhalten aus dem Fruchtkörper
und/oder dem kultivierten Mycel von Ganoderma pfeifferi durch Extraktion mit Lö
sungsmitteln.
2. Extrakt nach Anspruch 1, erhalten durch eine Extraktion des Fruchtkörpers und/oder des
kultivierten Mycels mit einem lipophilen Lösungsmittel.
3. Extrakt nach Anspruch 2, erhalten durch eine Extraktion des Fruchtkörpers und/oder des
kultivierten Mycels mit Dichlormethan.
4. Extrakt nach Anspruch 1, erhalten durch eine Extraktion des Fruchtkörpers und/oder des
kultivierten Mycels mit einwertigen Alkoholen.
5. Extrakt nach Anspruch 1, erhalten durch eine Wasserextraktion des Fruchtkörpers
und/oder des kultivierten Mycels.
6. Extrakt nach den Ansprüchen 1 und 2, erhalten durch eine Extraktion des Rückstandes,
der bei der Extraktion mit lipophilen Lösungsmitteln nach Anspruch 2 erhalten wird.
7. Extrakt nach den Ansprüchen 1 bis 3 und 6, erhalten durch eine Ethanolextraktion des
Rückstandes einer Dichlormethanextraktion.
8. Extrakt nach den Ansprüchen 1 bis 3 und 6, erhalten durch eine Wasserextraktion des
Rückstandes einer Dichlormethanextraktion.
9. Extrakt nach den Ansprüchen 1 bis 3 und 6 bis 8, erhalten durch eine Wasserextraktion
des Rückstandes einer Dichlormethan- und Ethanolextraktion.
10. Extrakt nach den Ansprüchen 1 und 4, erhalten durch eine Wasserextraktion des Rück
standes einer Ethanolextraktion.
11. Verfahren zur Gewinnung biologisch aktiver Extrakte aus dem Fruchtkörper und/oder
dem kultivierten Mycel von Ganoderma pfeifferi nach den Ansprüchen 1 bis 10, dadurch
gekennzeichnet, dass
- a) aus dem Fruchtkörper und/oder kultivierten Mycel ein Dichlormethanextrakt gewon nen wird,
- b) aus dem Fruchtkörper und/oder kultivierten Mycel oder aus dem Rückstand der Dichlormethanextraktion durch Behandlung mit Alkohol ein Extrakt gewonnen wird,
- c) aus dem Fruchtkörper und/oder kultivierten Mycel oder aus den Rückständen der Dichlormethanextraktion und der alkoholischen Extraktion mit Wasser ein Extrakt gewonnen wird.
12. Verwendung biologisch aktiver Extrakte aus Ganoderma pfeifferi nach den Ansprüchen 1
bis 11 als Substanzen und als Extrakte mit antimikrobieller Wirksamkeit, als Konservie
rungsmittel für technische Zwecke, für pharmazeutische und kosmetische Zubereitungen
sowie zur Anwendung in der Human- und Veterinärmedizin bei der Bekämpfung von In
fektionen.
13. Verwendung nach Anspruch 12 zum Einsatz bei multiresistenten grampositiven Keimen.
14. Verwendung nach den Ansprüchen 12 und 13 gegen fischpathogene Bakterien und zum
Einsatz in der Fischzucht.
15. Verwendung nach den Ansprüchen 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass die Extrakte
aus dem Fruchtkörper und/oder dem kultivierten Mycel von Ganoderma pfeifferi allein
sowie in Kombination untereinander eingesetzt werden.
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|---|---|---|---|
| DE19911679A DE19911679C2 (de) | 1999-03-09 | 1999-03-09 | Biologisch aktive Extrakte aus Pilzen der Art Ganoderma pfeifferi |
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1999
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|---|
| Chemical Abstract Vol. 122, Nr. 286380 * |
| Chemical Abstract Vol. 131, Nr. 182146 * |
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