JPH04279589A - 新規スクアレンシンテターゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明が解決しようとする課題】高コレステロール血症
は、動脈硬化のような虚血性心血管症の主要な危険要因
の１つであることが知られている。この症状を治療する
ために、胆汁酸の封鎖剤が使用されている。胆汁酸封鎖
剤はある程度有効であるが、大量に、即ち一度に数グラ
ム使用せねばならず、しかも極めて味が悪い。

【０００２】現在市販のＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）（
ロバスタチン）は、酵素ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを
阻害することによりコレステロール生合成を制限する機
能を果たす、極めて活性な抗高コレステロール血症剤の
１つである。

【０００３】スクアレンシンテターゼは、新たなコレス
テロール生合成経路の最初の必須段階（ｃｏｍｍｉｔｔ
ｅｄ　　ｓｔｅｐ）に関与する酵素である。この酵素は
、２分子のファルネシルピロリン酸の還元二量化を触媒
してスクアレンを形成する酵素である。この必須段階で
コレステロールを阻害する際、ユビキノン、ドリコール
及びイソペンテニルｔ−ＲＮＡに対する生合成経路は妨
げられるべきではない。

【０００４】これまでスクアレンシンテターゼを阻害す
る手段として、Ｐ．Ｏｒｔｉｚ　　ｄｅ　　Ｍｏｎｔｅ
ｌｌａｎｏら，Ｊ．Ｍｅｄ　　Ｃｈｅｍ．２０，２４３
（１９７７）及びＥ．Ｊ．Ｃｏｒｅｙ及びＲ．Ｖｏｌａ
ｎｔｅ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９８，１２９
１（１９７６）に記載のごとき化合物を含むピロリン酸
及びその類縁体が使用されてきた。Ｓ．Ｂｉｌｌｅｒ（
米国特許第４，８７１，７２１号）は、スクアレンシン
テターゼの阻害剤としてイソプレノイド（ホスフィニル
メチル）リン酸を記載している。

【０００５】本発明は、スクアレンシンテターゼのリン
非含有阻害剤を提供する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、スクアレンシ
ンテターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）：

【０００７】

【化６】 〔式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は各々独立に、ａ）Ｈ、 ｂ）Ｃ１−５アルキル、 ｃ）ｉ）フェニル、 ｉｉ）メチル、メトキシ、ハロゲン（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、
Ｆ）またはヒドロキシで置換されたフェニルからなる群
から選択される１つで置換されたＣｌ−５アルキルから
選択される〕の新規の化合物、またはＺ１、Ｚ２及びＺ
３の少なくとも１つが水素である式（Ｉ）の化合物の医
薬的に許容可能な塩に係わる。

【０００８】本発明の１つの実施態様は、２，８−ジオ
キサビシクロ［３．２．１］オクタン環の相対立体化学
配置が、

【０００９】

【化７】 である式（Ｉ）の化合物である。本明細書においてジオ
キサビシクロ［３．２．１］オクタン環の立体化学配置
が記載してあるところでは、示した配置は相対的なもの
である。実際の構造は、記載のものかまたはその鏡像異
性体となり得る。

【００１０】上記実施態様の例は、３位、６位及び７位
における相対配置が、

【００１１】

【化８】 である構造式（Ｉ）の化合物である。

【００１２】この実施態様の１つのクラスには、４位の
相対配置が、

【００１３】

【化９】 である構造式（Ｉ）の化合物がある。

【００１４】このクラスの化合物の例は、このＺ１、Ｚ
２及びＺ３の各々が水素である化合物またはその医薬的
に許容可能な塩である。Ｚ１、Ｚ２及びＺ３の各々が水
素である化合物を本明細書では化合物Ａと表記する。

【００１５】このクラスの更に別の化合物の例は、Ｚ１
、Ｚ２及びＺ３の１つ以上が、Ｃ１−５アルキル、或い
は、フェニル、またはメチル、メトキシ、ハロゲン（Ｃ
ｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ）もしくはヒドロキシで置換されたフ
ェニルで置換されたＣｌ−５アルキルである化合物であ
る。特定の例においてはＺ１、Ｚ２及びＺ３は各々がメ
チルである。この化合物を本明細書においては化合物Ｂ
と表記する。

【００１６】式（Ｉ）の化合物は、不稔菌糸体と認めら
れた新規の菌株ＭＦ５４５３を使用する好気的発酵にお
いて調製される。ＭＦ５４５３の突然変異体も本発明の
化合物を産生し得、本発明に含まれる。

【００１７】菌株ＭＦ５４５３は、スペイン，Ｚａｒａ
ｇｏｚａのＪａｌｏｎ川から採取した水試料から単離さ
れた真菌類である。この菌株は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　　
Ｔｙｐｅ　　Ｃｕｌｔｕｒｅ　　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ
（１２３０１　　ＰａｒｋｌａｗｎＤｒｉｖｅ，Ｒｏｃ
ｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ　　２０８５２）にＡＴＣＣ　　２
０９８６で寄託されている。

【００１８】微生物ＭＦ５４５３は以下の形態学的特性
を示す：ジャガイモデキストロース寒天（Ｄｉｆｃｏ）
において２５℃で連続蛍光照射すると２週間で直径２２
〜２４ｍｍのコロニ−を、また、シカ糞抽出物寒天（Ｍ
ｙｃｏｌｏｇｙ　　Ｇｕｉｄｅｂｏｏｋ，培地Ｍ−１１
，ｐ．６６０）において２５℃，２週間で直径４０〜４
５ｍｍのコロニーを形成する。ジャガイモデキストロー
ス寒天上のコロニーは、中程度の厚さ、即ち深さ１〜２
ｍｍの菌糸体からなり、その中央部は綿毛状で周縁に向
かってフェルト状からベルベット状になる不透明の同心
の畝模様を呈しており、ところによっては菌糸体のテキ
スチャ及び色が異なるセクターを形成しているが、周縁
を通して、主要な菌糸が浸没した外縁部分はない。コロ
ニーの色は最初は白色または幾分白色の気生菌糸であり
、直ぐにクリーム色、即ちＣｒｅａｍ　　Ｃｏｌｏｒ、
Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ　　Ｂｕｆｆ（Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｒ
．Ｃｏｌｏｒ　　Ｓｔａｎｄａｒｄｓ　　ａｎｄ　　Ｎ
ｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，ワシントンＤＣ，１９１２か
ら引用の色名）になり、最後に淡灰色から灰色、即ちＬ
ｉｇｈｔ　　Ｏｌｉｖｅ−Ｇｒａｙ，Ｇｒａｙ，Ｐａｌ
ｌｉｄＮｅｕｔｒａｌ　　Ｇｒａｙ，Ｎｅｕｔｒａｌ　
　Ｇｒａｙ，Ｇｕｌｌ　　Ｇｒａｙ，Ｄｅｅｐ　　Ｇｕ
ｌｌ　　Ｇｒａｙになる。コロニーは、灰色がかった茶
色から黄茶色またはクリーム色、即ちＣｉｎｎａｍｏｎ
−Ｄｒａｂ，Ｃｉｎｎａｍｏｎ，Ｏｃｈｒａｃｅｏｕｓ
−Ｂｕｆｆ，Ａｎｔｉｍｏｎｙ　　Ｙｅｌｌｏｗ，Ｗａ
ｒｍＢｕｆｆ，Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ　　Ｂｕｆｆに反転
する。臭い及び浸出物はない。

【００１９】菌糸は形態学的には子嚢菌類であり、未分
化であり、隔膜があり、直径１．５〜３．５μｍに枝分
かれし、水及びＫＯＨの中でヒアリンである。コーンミ
ール寒天、干し草抽出物寒天、オートミール寒天、糞抽
出物寒天及びモルト抽出物寒天のいずれかにおいて、連
続照射及び１２／１２時間の暗転サイクル両方でインキ
ュベートすることを含む調査対象培養条件のいずれにお
いても、生殖構造体（ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　　ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒｅ）は形成されなかった。

【００２０】本発明の化合物は、上述の微生物を、同化
可能な炭素源及び窒素源を含む水性栄養培地において好
ましくは好気条件下に培養することにより得ることがで
きる。栄養培地は無機塩類及び消泡剤を含有することも
できる。

【００２１】栄養培地における好ましい炭素源は、グル
コース、グリセリン、澱粉、デキストリンなどの炭水化
物である。他の炭素源としては、マルトース、マンノー
ス、スクロースなどを挙げることができる。更に、オー
ト粉、コーンミール、穀粒、とうもろこしなどの複合栄
養源も使用可能な炭素を供給し得る。培地に使用される
炭素源の厳密な量は、培地中の他の成分に一部依存する
が、通常は０．５〜５重量％の範囲の量である。かかる
炭素源は所与の培地で個々に使用することもできるし、
同じ培地中に幾つかの源を組み合わせて使用することも
できる。

【００２２】好ましい窒素源は、グリシン、メチオニン
、プロリン、トレオニンなどのアミノ酸や、酵母抽出物
（加水分解物、自己分解物）、乾燥酵母、トマトペース
ト、ダイズミール、ペプトン、コーン浸漬液、蒸留カス
、モルト抽出物などの複合体源である。アンモニウム塩
（例えば硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸
アンモニウムなど）のような無機窒素源を使用すること
もできる。種々の窒素源を単独でまたは組み合わせて、
培地の０．２〜９０重量％の量で使用することができる
。

【００２３】炭素源及び窒素源は一般に組み合わせて使
用されるが、純粋形態である必要はない。成長因子であ
る微量元素、ビタミン及び無機栄養素を含むより純粋で
ない材料を使用することもできる。（限定的ではないが
）炭酸カルシウム、リン酸ナトリウムもしくはカリウム
、塩化ナトリウムもしくはカリウム、マグネシウム塩、
銅塩、コバルト塩などの無機塩類を培地に加えることも
できる。更に、マンガン、鉄、モリブデン、亜鉛などの
微量金属も含まれる。更に必要であれば、特に培地が激
しく泡立つ場合には、ポリエチレングリコールまたはシ
リコーンのような消泡剤を加えてもよい。

【００２４】本発明の化合物を製造する好ましい方法は
、産生微生物の胞子または菌糸体を適当な培地中に接種
し、好気条件下に培養することからなる。

【００２５】発酵過程は一般に、まず保存されていた種
菌を栄養種培地中に接種し、ときには２段階方法によっ
て、活性化合物の産生においてシードとして使用する生
物体を増殖させることである。接種後にフラスコを、２
０〜３０℃、好ましくは２５〜２８℃の温度で振盪しな
がらインキュベートする。振盪速度は、最高４００ｒｐ
ｍ、好ましくは２００〜２２０ｒｐｍの範囲とし得る。 シードフラスコは２〜１０日間、好ましくは２〜４日間
インキュベートする。通常は２〜４日間で十分に増殖し
、培養体を生産培地フラスコに接種するのに使用し得る
ようになる。特により大きな容器とするときには、第２
段階のシード増殖を使用することができる。これを行う
ときには、増殖した培養体の一部を第２のシードフラス
コに接種し、これを同様の条件下であるがより短い時間
インキュベートする。

【００２６】接種後、（液体発酵培地を使用するかまた
は固体発酵培地を使用するかに従って）振盪しながらま
たは振盪せずに３〜３０日間、好ましくは４〜１４日間
、発酵生産培地をインキュベートする。発酵は、２０〜
４０℃の温度で好気的に実施する。振盪するのであれば
それは２００〜４００ｒｐｍの速度とすることができる
。最適な結果を得るためには、温度は２２〜２８℃、最
も好ましくは２４〜２６℃の範囲とする。活性化合物を
産生させるのに適した栄養培地のｐＨは３．５５〜８．
５、最も好ましくは５．０〜７．５の範囲である。 所望の化合物を産生させるのに適した期間の後、発酵フ
ラスコを回収し、活性化合物を単離する。

【００２７】水性菌糸体発酵のｐＨは、好ましくは５０
％メタノールのような水混和性溶剤と混合してｐＨ１〜
９（好ましくは３〜５）に調整し、菌糸体を濾過する。 活性化合物は、以下の諸法によって水性濾液から単離す
ることができる： １．好ましくはｐＨを３〜５に調整した後に、水性濾液
を水混和性溶剤（例えばメチルエチルケトン、酢酸エチ
ル、ジエチルエーテルまたはジクロロメタン）中に液体
−液体抽出する方法。

【００２８】２．有機マトリックス（例えばＳＰ２０７
またはＨＰ−２０）上で水性濾液を固体−液体抽出し、
９０／１０　メタノール／水または９０／１０　アセト
ン／水のような有機溶剤（水性または非水性）で溶出す
る方法。

【００２９】３．水性濾液から得られた活性化合物をイ
オン交換樹脂（例えばＤｏｗｅｘ１（Ｃｌ−）またはＤ
ｏｗｅｘ５０（Ｃａ２＋））上に吸着させ、高イオン強
度の有機／水性溶剤（例えば９０／１０　メタノール／
３０％ＮＨ４Ｃｌ水溶液）で溶出する方法。得られた物
質は次いで、上述の方法１または２を使用して脱塩する
ことができる。

【００３０】上記３つの方法の各々は、活性化合物を更
に精製するのにも使用することができる。

【００３１】上記方法で得られた活性化合物を含有する
フラクションを真空下に乾燥し、粗活性化合物を残すこ
とができる。次いで粗活性化合物に一般には、吸着及び
分配クロマトグラフィー並びに沈澱のような幾つかの分
離ステップを実施する。各分離ステップにおいて、フラ
クションを回収し、アッセイ及び／またはＨＰＬＣ分析
の結果に基づいて混合する。

【００３２】イオン性または非イオン性吸着剤を含む通
常のカラムクロマトグラフィーを使用することにより、
クロマトグラフィーによる分離を実施することができる
。吸着剤がシリカゲルである場合には、溶離剤としては
アルコール／塩素化炭化水素／有機酸の混合物、例えば
メタノール／クロロホルム／酢酸／水が有効である。 逆相クロマトグラフィーにおいては、好ましい吸着剤は
Ｃ８結合相シリカゲルである。逆相クロマトグラフィー
に好ましい溶離剤は、低ｐＨの緩衝したアセトニトリル
及び水の混合物、例えば０．１％リン酸またはトリフル
オロ酢酸である。活性化合物は、非極性溶剤からキニン
塩として沈澱させることができる。沈澱に好ましい溶剤
はジエチルエーテルである。

【００３３】本発明は更に、コレステロール生合成を阻
害する方法であって、かかる治療が必要な患者に、構造
式（Ｉ）で表される化合物またはその医薬的に許容可能
な塩を非毒性で治療上有効な量を投与することからなる
方法にも係わる。特に本発明の化合物は、動脈硬化、高
脂質血症、家族性コレステロール過剰血症などのヒトの
疾患を治療する上で抗高コレステロール血症剤として有
効である。かかる化合物は、カプセル、錠剤、注射可能
な製剤などの形態で経口的または非経口的に投与するこ
とができるが、一般には経口ルートを使用するのが望ま
しい。投与量は、ヒト患者の年齢、病状、体重及び他の
条件に従って変えることができるが、成人の１日の投与
量は約２０ｍｇ〜２０００ｍｇ（好ましくは２０〜１０
０ｍｇ）の範囲とし、これを２〜４回に分けて投与する
ことができる。必要に応じより多くの投与量を使用する
のが望ましい場合もある。

【００３４】本発明の化合物の医薬的に許容可能な塩と
しては、ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシ
ウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛のようなカチオン
から、並びに、アンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メ
チル−グルカミン、リシン、アルギニン、オルニチン、
コリン、Ｎ−Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロ
ロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−
ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジ
ン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン及びテト
ラメチルアンモニウムヒドロキシドのような塩基から形
成されるものを挙げることができる。本発明は、式（Ｉ
）のカルボキシル基の１つ、２つまたは３つの塩を含む
。

【００３５】本発明の化合物は、消化管内の再吸収され
ない形態の胆汁酸を結合し得る医薬的に許容可能な無毒
カチオン性ポリマーと併用投与し得る。このようなポリ
マーの例としては、コレスチルアミン、コレスチポール
及びポリ［メチル−（３−トリメチルアミノプロピル）
イミノ−トリメチレンジハロゲン化物］を挙げることが
できる。本発明の化合物と上記ポリマーとの相対量は１
：１００〜１：１５，０００とする。

【００３６】本発明の代表的化合物の固有スクアレンシ
ンテターゼ阻害活性を以下に記載する標準的なｉｎ　ｖ
ｉｔｒｏ方法によって測定した。

【００３７】ミクロソームの調製 雄のＣｈａｒｌｅｓ　　Ｒｉｖｅｒ　　ＣＤラット（１
２０〜１５０ｇ）に０．１％ロバスタチンを含む餌を４
日間与えた。かかるラットから採取した肝臓を、Ｐｏｔ
ｔｅｒ−Ｅｌｖｅｈｊｅｍ型組織破砕機を用いて、氷冷
した５０ｍＭ　　ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエ
チル）−１−ピペラジン−エタンスルホン酸），５ｍＭ
　　ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸），ｐＨ７
．５　　５容積（ｍｌ／ｇ）中でホモジネート化した。 このホモジネートを４℃，２０，０００ｘｇ，１５分間
で２回遠心分離した。ペレットはその都度廃棄した。次
いで上清を４℃，１００，０００ｘｇで１時間遠心分離
した。得られたミクロソームペレットを、もとのホモジ
ネートの容積の５分の１の容積の上述のホモジネート用
緩衝液中に懸濁させた。このミクロソーム調製物はタン
パク質濃度約７ｍｇ／ｍｌを有した。ミクロソーム懸濁
液をアリコートにして−７０℃で保存した。かかるアリ
コート中のスクアレンシンテターゼ活性は少なくとも数
カ月間は安定である。

【００３８】プレニルトランスフェラーゼの一部精製放
射性元素標識したファルネシルピロリン酸の酵素合成に
使用するためプレニルトランスフェラーゼを精製した。 プレニルトランスフェラーゼをＲｉｌｌｉｎｇの方法（
Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎ　　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　　
１１０，１２５〜１２９（１９８５）に記載の方法）に
よって分析した。１活性単位は、標準アッセイにおいて
３０℃で１分間にファルネシルピロリン酸１μモルを産
生する酵素の量と定義される。

【００３９】５％コレスチルアミン及び０．１％ロバス
タチンを餌として与えた生後４０日の雄ラット２３匹の
肝臓をワーリングブレンダーにおいて、アプロチニン１
ｍｌ当たり０．１トリプシン阻害単位を含む１０ｍＭメ
ルカプトエタノール，２ｍＭＥＤＴＡ，２５μＭロイペ
プチン，０．００５％フェニルメチルスルホニルフルオ
ライド，ｐＨ７．０（１リットル）中でホモジネート化
した。このホモジネートを２０，０００ｘｇで２０分間
遠心分離した。上清を６Ｎ　　ＨＯＡｃでｐＨ５，５に
調整し、１００，０００ｘｇで１時間遠心分離した。こ
の上清を３ＮＫＯＨでｐＨ７．０に調整し、３５〜６０
％硫酸アンモニウムフラクションを採取した。６０％ペ
レットを、１０ｍＭリン酸カリウム，１０ｍＭメルカプ
トエタノール，１ｍＭ　　ＥＤＴＡ　　ｐＨ７．０（緩
衝液Ａ）６０ｍｌ中に再度溶解し、緩衝液Ａ（１リット
ル）を２回取換えて透析した。この透析フラクションを
、緩衝液Ａで平衡化したＤＥＡＥ−セファロース４Ｂを
含む１２．５×５ｃｍのカラムに与えた。このカラムを
７００ｍｌの緩衝液Ａと、緩衝液Ａから１００ｍＭリン
酸カリウム，１０ｍＭメルカプトエタノール，１ｍＭ　
　ＥＤＴＡ，ｐＨ７．０までの勾配を含む液１Ｌとで洗
浄した。０．２０単位／ｍｇ以上の比活性を有するフラ
クションを混合し、固体硫酸アンモニウムを加えて６０
％飽和液とし、ペレットを形成した。このペレットを、
１０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ，１０ｍＭ　　β−メルカプトエ
タノール，ｐＨ７．０（緩衝液Ｂ）８ｍｌ中に溶解した
。再溶解したペレットを、１．５容積の飽和硫酸アンモ
ニウムを緩衝液Ｂ中に加えることにより、硫酸アンモニ
ウム６０％飽和にした。この硫酸アンモニウム懸濁液は
３．５単位／ｍｌを含み、比活性は０．２３単位／ｍｇ
であり、イソペンテニルピロリン酸イソメラーゼ活性は
含まなかった。この硫酸アンモニウム懸濁液を、［４−
１４Ｃ］ファルネシル−ピロリン酸の合成に使用すると
、その活性は、４℃で少なくとも６カ月間保存しても安
定であった。

【００４０】［４−１４Ｃ］ファルネシル−ピロリン酸
の酵素合成 　　溶剤（エタノール：０．１５Ｎ　　ＮＨ４ＯＨ，１
：１）を５５μＣｉの［４−１４Ｃ］イソペンテニル−
ピロリン酸（４７．９μＣｉ／μモル）から回転蒸発に
よって除去した。１００ｍＭ　　Ｔｒｉｓ，１０ｍＭ　
　ＭｇＣｌ２，４ｍＭジチオトレイトール　　ｐＨ７．
５　　６００μｌを加え、この溶液を１．５ｍｌＥｐｐ
ｅｎｄｏｒｆ遠心分離管に移した。ゲラニル−ピロリン
酸，２０ｍＭ溶液２５０μｌ及びプレニルトランスフェ
ラーゼの硫酸アンモニウム懸濁液５０μｌを加えて反応
を開始させた。このインキュベートは容積９００μｌ中
に、５μモルのゲラニルピロリン酸、１．１５μモルの
イソペンテニルピロリン酸、６μモルのＭｇＣｌ２及び
０．１８単位のプレニルトランスフェラーゼを含んでい
た。インキュベートは３７℃で実施した。インキュベー
トの間にこの混合物は、ファルネシルピロリン酸のマグ
ネシウム錯体が溶液から沈澱して新たに形成されるにつ
れて不透明な白色に変わった。Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ遠心
分離管において１４，０００ｒｐｍで３分間遠心分離す
ることにより、［４−１４Ｃ］ファルネシルピロリン酸
を回収し、上清を除去し、ペレットを、５０ｍＭ　　Ｈ
ＥＰＥＳ，５ｍＭ　　ＥＤＴＡ，ｐＨ７．５　　１．０
ｍｌ中に溶解した。 ［４−１４Ｃ］ファルネシルピロリン酸の収量は５０．
７μＣｉ（９２％）であった。［４−１４Ｃ］ファルネ
シルピロリン酸をアリコートにして−７０℃で保存した
。

【００４１】スクアレンシンテターゼアッセイ１６×１
２５ｍｍのねじ蓋付き試験管において反応を実施した。 以下の溶液から検定用混合物１回分を調製した： 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１アッセイ　
　　　５０アッセイ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　当たりのμｌ　　当たりの容積１．２５０ｍＭ　
　Ｈｅｐｅｓ　　ｐＨ７．５　　　　　　　　　　２０
　　　　　　　　１０００２．ＮａＦ　　１１０ｍＭ　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１０　　　　　　　　　　５００３．ＭｇＣｌ２　　５
５ｍＭ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　１０　　　　　　　　　　５００４．ジチオトレ
イトール　　３０ｍＭ　　　　　　　　　　　　　　　
　１０　　　　　　　　　　５００５．ＮＡＤＰＨ　　
１０ｍＭ（新たに調製したもの）　　１０　　　　　　
　　　　５００６．［４−１４Ｃ］ファルネシル−ピロ
リン酸　　　　　　　　３．０　　　　　　　　１５０
　　　　　　４７．９μＣｉ／μモル　　及び　　　　
　　０．０２５μＣｉ／３．０μｌ７．Ｈ２Ｏ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　２４　　　　　　　　１２００こ
のアッセイミックスを真空下に脱気し、次いでＮ２でフ
ラッシュした。スクアレンシンテターゼ阻害物質の溶液
をＤＭＳＯまたはＭｅＯＨのいずれかにおいて調製し、
もとのホモジネート用緩衝液を用いてミクロソームタン
パク質の１：１２０希釈液をつくった。各反応に対して
アッセイミックス８７μｌを阻害物質溶液（コントロー
ルにおいてはＤＭＳＯまたはＭｅＯＨ）３μｌと合わせ
、水浴中で３０℃に暖め、次いでミクロソームタンパク
質の１：１２０希釈液１０μｌ（アッセイにおけるタン
パク質の合計は０．６μｇであった）を加えることによ
り反応を開始させた。２０分後、４０％ＫＯＨ及び９５
％ＥｔＯＨの１：１ミックス１００μｌを加えることに
より反応を停止させた。反応が停止したミックスを６５
℃で３０分間加熱し、冷却し、ヘプタン１０ｍｌを加え
、激しく撹拌した。次いで活性アルミナ２ｇを加え、再
度撹拌し、アルミナを沈降させ、ヘプタン層５ｍｌを除
去した。シンチレーション液１０ｍｌをヘプタン溶液に
加え、液体シンチレーション計数によって放射能を測定
した。

【００４２】％阻害は、式： 　　　　　　｛１−（試料−ブランク）／（対照−ブラ
ンク）｝×１００によって計算される。

【００４３】試験化合物の濃度対％阻害の対数をプロッ
トすることによりＩＣ５０値を決定した。ＩＣ５０は、
かかるプロットから決定される５０％阻害を与える阻害
物質の濃度である。

【００４４】本発明の化合物の固有スクアレンシンテタ
ーゼ阻害活性を表わすＩＣ５０データを以下の表に示す
。

【００４５】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　スクアレンシンテターゼ　
　　　化合物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ＩＣ５０　　　　
　　　　　　　　化合物Ａ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　≦５μＭ
　　　　化合物Ｂ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　≦５μＭ更に本発
明の化合物は、ブロスまたは寒天希釈法によって決定さ
れるように広範囲の抗菌活性を示す。この化合物は特に
、Ｃａｎｄｉｄａ　　ａｌｂｉｃａｎｓ及びＣｒｙｐｔ
　　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓを含む糸状菌及び酵母に対し
て活性を示す。糸状菌及び酵母の感度を、マイクロタイ
ターフォーマット（ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ　　ｆｏｒｍ
ａｔ）における阻害物質希釈アッセイを使用して測定し
た。被検化合物をＤＭＳＯ中に２ｍｇ／ｍｌの割合で溶
解し、マイクロタイター皿において０．１Ｍリン酸緩衝
液，ｐＨ７．０中に１００〜０．００６μｇ／ｍｌの一
連の割合で溶解した。１．５％寒天を含む抗生培地＃３
に胞子を、１ウェル当たり１．５×１０３コロニー形成
単位を加えるように接種することにより、糸状菌を試験
するための標準化胞子懸濁液を調製した。マイクロタイ
ターウェルに、化合物を含有する緩衝液５０μｌと接種
培地５０μｌとを充填した。１％デキストロースを含む
酵母窒素ベース（ＹＮＢ／Ｇ）に、酵母形態学的（ＹＭ
）培地において３５℃で一晩増殖させた酵母培養体のア
リコートを接種し、ＹＮＢ／Ｇで希釈し、最終濃度１．
５〜７．５×１０３のコロニー形成単位／ウェルを得る
ことにより、酵母の感度を測定した。１ウェル当たり１
５０μｌの接種培地を加えた。酵母の感度を試験するた
めに、被検化合物を１０％ＤＭＳＯ水溶液に２．５６ｍ
ｇ／ｍｌの割合で溶解した。この化合物をＹＮＢ／Ｇで
１２８〜０．０６μｇ／ｍｌの一連の割合で希釈した。 ウェルに阻害物質含有培地１５０μｌを充填した。 最低阻害濃度（ＭＩＣ）とは、糸状菌に対しては２８℃
で４２時間、酵母に対しては２８℃で２４時間インキュ
ベートした後の可視の増殖を妨げる最低の濃度と定義さ
れる。μｇ／ｍｌで表される最低殺菌濃度とは、増殖を
完全に妨げるかまたは３以下のコロニーの増殖を許す阻
害物質の最低濃度と定義される。抗菌活性の最低阻害濃
度及び最低殺菌濃度を表わすデータを以下に示す：　　
　　　　　　　　　　　　　　　　最低阻害濃度（ｍｃ
ｇ／ｍｌ）　　微生物　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　化合物Ａ　　　　化合物Ｂ　　糸状菌 Ａ．ｆｕｍｉｇａｔｕｓ　　ＭＦ４８３９　　　　　　
　　　　　　　　　　６．２　　　　＞１２８Ａ．ｆｌ
ａｖｕｓ　　ＭＦ３８３　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　６．２　　　　＞１２８Ａ．ｎｉ
ｇｅｒ　　ＭＦ４４２　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　２５　　　　　　　　　　　　−Ｆ
ｕｓ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　　ＭＦ４０１４　　　　　
　＞１００　　　　　　　　　　　　−Ｐｅｎ．ｉｔａ
ｌｉｃｕｍ　　ＭＦ２８１９　　　　　　　　　　　　
　　６．２　　　　　　　　−Ｃｏｃｈ．ｍｉｙａｂｅ
ａｎｕｓ　　ＭＦ４６２６　　　　　　　　１．６　　
　　　　　　−Ｔ．Ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ　　
ＭＦ４８６４　　　　　　４　　　　　　　　＞１２８
　　酵母　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　化合物Ａ
　　　　　　化合物ＢＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ　　ＭＹ１
０５５　　　　　　　　　　　　　　　　　　８　　　
　　　　　＞１２８Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　　ＭＹ
１０１２　　　　　　　　　　　　　　４　　　　　　
　　＞１２８Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　　ＭＹ１
０１０　　　　　　　　　　８　　　　　　　　＞１２
８Ｃｒｙｐｔ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　　ＭＹ１０５１
　　　　　　１　　　　　　　　＞１２８　　　　　　
　　　　　　　　　　　　最低殺菌濃度（μｇ／ｍｌ）
　　酵母　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　化合物Ａ
　　　　　　化合物ＢＣ．ａｌｂｉｃａｎｓ　　ＭＹ１
０５５　　　　　　　　　　　　　　　　　　４　　　
　　　　　＞１２８Ｃ．ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ　　ＭＹ
１０１２　　　　　　　　　　　　　　２　　　　　　
　　＞１２８Ｃ．ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ　　ＭＹ１
０１０　　　　　　　　　　２　　　　　　　　＞１２
８Ｃｒｙｐｔ．ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ　　ＭＹ１０５１
　　　　　　０．５　　　　＞１２８更に本発明は、真
菌感染を治療する方法であって、かかる治療が必要な生
物体に、構造式（Ｉ）で表される化合物またはその医薬
的に許容可能な塩を非毒性で治療上有効な量投与するこ
とからなる方法にも係わる。上述のＭＩＣ及びＭＦＣデ
ータに基づくと、抗菌治療における単位投与量として一
般に２〜５ｍｇ／ｋｇを使用すべきであることが決定さ
れる。

【００４６】本発明の化合物は、抗菌組成物の種々の用
途に使用するように適合し得る。かかる使用においては
化合物を、一般には界面活性分散剤の助成により、哺乳
動物（例えばヒト）、鳥類、爬虫類に感染する病原体の
コントロールに使用するか、土壌または植物体部位にお
ける農業上の真菌類コントロールに使用するか、または
無生物における真菌類のコントロールに使用するかに従
ってその特性が変わり得る生物学的に不活性な担体と混
合することができる。

【００４７】医療用組成物においては本発明の化合物は
、それが局所用、非経口用または経口用であるかに応じ
て、適当な医薬的に許容可能な担体と混合することがで
きる。

【００４８】前記用途が局所的であるならば、薬剤は、
白油（ｗｈｉｔｅ　　ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ）、無水ラニ
リン、セチルアルコール、コールドクリーム、モノステ
アリン酸グリセリル、ローズ水のような通常のクリーム
または軟膏に調製することができる。

【００４９】非経口用であるならば化合物は、水中の０
．８５％塩化ナトリウムもしくは５％デキストロース、
または他の医薬的に許容可能な組成物のような通常の非
経口溶液に調製することができる。

【００５０】経口投与用の組成物は、薬剤成分を、液体
製剤用には液体担体カオリン、エチルセルロース、界面
活性分散剤を含む任意の通常の医薬媒体と、一般にステ
アリン酸カルシウムのような潤滑剤と、更に結合剤、崩
壊剤などとをよく混合することにより調製することがで
きる。

【００５１】かかる組成物は、所望の抗菌効果を得るの
に十分な量で投与する。医療用途においてはかかる方法
は、治療が必要な患者に式（Ｉ）の化合物を治療上有効
な抗菌量投与することからなる。適当な投与量は、患者
の年齢、症状、体重及び他の条件に従って変わる。局所
使用においては、かかる組成物を、コントロールが必要
とされる領域に直接塗布する。体内投与においては、か
かる組成物を注射するかまたは経口投与することができ
る。

【００５２】非医療用途においては本発明の生成物は、
単独でまたは混合物として不活性担体中に配合した組成
物に使用することができる。かかる不活性担体としては
、微粉砕した乾燥のまたは液体の希釈剤、増量剤、充填
剤、コンディショナー及び賦形剤（種々のクレー、珪藻
土、タルクなど），水及び種々の有機液体（低級アルカ
ノール（例えばエタノール及びイソプロパノール）、ケ
ロセン、ベンゼン、トルエン及び他の石油留分）または
これらの混合物を挙げることができる。

【００５３】かかる組成物は、保護されるべき培地の表
面に与えたりまたは培地に配合することができる。コメ
胴枯れ病、トマト成長後期斑点病及び成長前期斑点病、
コムギさび病、マメうどん粉病、並びにトマトＦｕｓａ
ｒｉｕｍ立枯れ病のコントロールにおいては、局所使用
であればかかる組成物を植物に直接投与し、全身的使用
であれば土壌に投与することができる。この方法は、保
護されるべき感染植物、土壌または培地に式（Ｉ）の化
合物を抗菌有効量投与することからなる。

【００５４】

【実施例】以下の実施例は、式（Ｉ）の化合物の調製と
、それらの医薬組成物への配合とを示すが、これらは請
求の範囲に記載の本発明を制限するものではない。化合
物Ａを得る好ましい経路は実施例２に示す。

【００５５】以下の実施例に使用した培地の組成は以下
の通りである。

【００５６】ＫＦシード培地 ｐＨ６．８に調整（殺菌前） ５０ｍｌ／バッフルなしの２５０ｍｌエーレンマイヤー
フラスコ オートクレーブ２０分間（１２１℃，１５ｐｓｉ）以上
を１Ｌの０．６Ｎ　　ＨＣｌ中に溶解。

【００５７】 ＭＢＭ産生培地　　　　　　　　　　　　　　ｇ／Ｌモ
ルト抽出物（Ｄｉｆｃｏ）　　　　５．０グルコース　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１５．０ペプトン
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０
ＫＨ２ＰＯ４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１．０ＭｇＳＯ４　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　０．５蒸留水　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１０００．０ｍｌ（ｐＨ調整なし） ４５ｍｌ／バッフルなしの２５０ｍｌエーレンマイヤー
フラスコ オートクレーブ１５分間（１２１℃，１５ｐｓｉ）実施
例１ 化合物Ａの調製 Ａ．ＭＦ５４５３の培養 ガラススコップ１杯分の原土壌を使用し、菌株ＭＦ５４
５３をＫＦシード培地に接種した。このＫＦシードフラ
スコを２５℃，２２０ｒｐｍ，湿度８５％で７３時間イ
ンキュベートした。このインキュベートの最後に、２．
０ｍｌアリコートを７５個のＭＢＭ生産培地フラスコの
各々に無菌状態で移した。次いでこれらの生産フラスコ
を２５℃，２２０ｒｐｍ，湿度８５％でインキュベート
した。発酵期間は１４日間であった。フラスコを以下の
ように回収した。バイオホモジナイザー／ミキサー（Ｂ
ｉｏｓｐｅｃ　　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　　Ｉｎｃ．Ｂａｒ
ｔｌｅｓｖｉｌｌｅ，ＯＫ）を使用して高速で２０秒間
増殖菌糸体をホモジナイズし、次いでメタノール４５ｍ
ｌを各フラスコに加えた（最終メタノール濃度は約５０
％とした）。次いでフラスコを振盪器に戻し、２２０ｒ
ｐｍで３０分間振盪した。次いでフラスコの内容物をプ
ールした。

【００５８】Ｂ．化合物Ａの単離 ｐＨ４．５を示す５０％メタノールでホモジナイズし菌
抽出物６リットルを以下の単離工程に使用した。菌糸体
をセライトで濾過し、回収した菌糸体を、５０％メタノ
ール３Ｌと一緒に一晩撹拌し、もう一度濾過することに
より再度抽出した。

【００５９】５０％メタノールと混合した抽出物（９Ｌ
）を水で希釈して２５％メタノールとし（合計容積１８
Ｌ）、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ　　ＨＰ−２０カラム（７
５０ｍｌ）に流量８０ｍｌ／分で与えた。カラムを水（
１Ｌ）で洗浄し、５０／５０メタノール／Ｈ２Ｏ（１Ｌ
）、６０／４０　メタノール／Ｈ２Ｏ（１Ｌ）、８０／
２０　メタノール／Ｈ２Ｏ（２Ｌ）、９０／１０　メタ
ノール／Ｈ２Ｏ（１Ｌ）、１００％メタノール（２Ｌ）
からなる段階的勾配をもつメタノールと１００％アセト
ン（１Ｌ）とで溶出させた。５０／５０〜９０／１０　
メタノール／Ｈ２Ｏからのフラクションを混合し、水で
希釈して３５／６５　メタノール／Ｈ２Ｏとした（合計
容積１０Ｌ）。

【００６０】１０Ｌの３５／６５　メタノール／Ｈ２Ｏ
を１．０ＮＨＣｌ（２０ｍｌ）を用いてｐＨ３．０に酸
性化し、ＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ層
を分離し、溶剤を真空下に除去すると、オレンジ色のオ
イル２６０ｍｇが得られた。

【００６１】オレンジ色オイルの一部分（１０％）をメ
タノール１ｍｌ中に溶解し、１０ｍＭリン酸カリウム（
ｐＨ６．５）０．８ｍｌで希釈すると幾らか沈澱が生じ
た。この懸濁液を分離用ＨＰＬＣカラム（Ｗｈａｔｍａ
ｎ　　Ｍａｇｎｕｍ２０　　Ｃ１８，２２ｍｍ　　ＩＤ
×２５ｃｍ，８ｍｌ／分）に適用した。初期移動相は６
０／４０　メタノール／１０ｍＭ　　Ｋ３ＰＯ４，ｐＨ
６．５であったが、２０分後、移動相は８０／２０　メ
タノール／１０ｍＭ硫酸カリウム，ｐＨ６．５に変わっ
た。各フラクションを８ｍｌずつ回収し、３１〜３３分
のフラクション（２）を混合し、水で希釈して３５％メ
タノールとし、１０％ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、Ｅｔ
ＯＡｃで抽出した。溶剤を真空下に除去すると、透明で
わずかに黄色のオイル状の標題化合物が得られた。

【００６２】実施例２ 化合物Ａの調製 Ａ．ＭＦ５４５３の培養 シード培地（ＫＦ）５４ｍＬを含む２５０ｍＬエーレン
マイヤーフラスコにＭＦ５４５３を接種し、２５℃，湿
度８５％，２２０ｒｐｍで７２時間インキュベートした
。培養体１０ｍＬを、ＫＦシード培地５００ｍＬを含む
３つの２リットルエーレンマイヤーフラスコの各々に移
した。これらのフラスコを２５℃，湿度８５％，２２０
ｒｐｍで４４時間培養した。得られた培養体７５０ｍＬ
を、ＭＢＭ生産培地１５Ｌを含む２２リットル発酵器２
つにそれぞれ接種した。殺菌条件は、１２２℃，１５ｐ
ｓｉ，２５分間とした。殺菌後の培地のｐＨは５．０で
あった。発酵条件は、２５℃，振盪速度３００ｒｐｍ，
流量４．５Ｌ／分，背圧５ｐｓｉとした。かかる条件下
に３５７時間培養した後にバッチを回収した。

【００６３】Ｂ．化合物Ａの単離 ３つの独立の発酵生成物（３Ｌ）、（１０Ｌ）及び（１
０Ｌ）を以下の単離工程に使用した。３Ｌ発酵生成物は
実施例１Ａに従って培養し、１０Ｌ発酵生成物の各々は
、実施例２Ａの方法に従って培養した。各発酵生成物を
セライトによって濾過し、菌糸体を個々に、それぞれ１
Ｌ、３Ｌ及び３Ｌの５０％メタノール（２Ｘ）を用いて
一晩で抽出した。

【００６４】濾液及び抽出物を全て混合し、水で希釈し
て２５％メタノールとした（合計容積４５Ｌ）。これを
Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ　　ＨＰ−２０カラム（１．５Ｌ
）に流量１００ｍｌ／分で与えた。次いでカラムを水（
４Ｌ）と４０％メタノール（６Ｌ）とで洗浄した。次い
でカラムを、１００％メタノール（６Ｌ）で溶出させた
。

【００６５】１００％メタノールＨＰ−２０溶出液を１
０ｍＭ　　Ｈ３ＰＯ４（６Ｌ，合計容積１２Ｌ）で希釈
し、ＣＨ２Ｃｌ２（４Ｌ）で抽出した。溶剤を真空下に
除去すると２１ｇの黄色オイル状物が得られた。

【００６６】上記濃縮物をメタノール（５００ｍｌ）中
に溶解し、２０ｍＭ　　Ｋ３ＰＯ４，ｐＨ７．０（５０
０ｍｌ）で希釈した。この溶液をＤｏｗｅｘ　　１×２
（Ｃｌ−）カラム（３５０ｍｌ）に流量２５ｍｌ／分で
与えた。次いでカラムを、５０／５０　メタノール／水
（２Ｌ）及び５０／５０　メタノール／３％ＮａＣｌ溶
液（１Ｌ）で洗浄し、生成物を９０／１０　メタノール
／３０％ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２Ｌ）で溶出させた。メタ
ノール／ＮＨ４Ｃｌ溶出液を２０ｍＭ　　Ｈ３ＰＯ４（
２Ｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２Ｌ）で抽出した。溶
剤を真空下に除去すると濃オレンジ色オイル状物が得ら
れた。

【００６７】オレンジ色オイル状物の一部（２４ｍｇ）
をメタノール１ｍｌ中に溶解し、１０ｍＭ　　Ｈ３ＰＯ
４を０．４ｍｌ加えると幾らか曇りが生じた。この懸濁
液を分離用ＨＰＬＣカラム（Ｗｈａｔｍａｎ　　Ｍａｇ
ｎｕｍ　　２０　　Ｃ１８，２２ｍｍＩＤ×２５ｃｍ，
８ｍｌ／分，移動相８０／２０　メタノール／１０ｍＭ
　　Ｈ３ＰＯ４，ｐＨ２．５）に与えた。１６〜２０分
間に溶出したフラクションを混合し、５０ｍＭ　　Ｈ３
ＰＯ４（５０ｍｌ）で希釈し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×７ｍ
ｌ）で抽出した。ＣＨ２Ｃｌ２を真空下に除去するとわ
ずかに黄色がかったオイル状物が得られた。この材料は
、実施例１で単離した化合物Ａと同一の１Ｈ−ＮＭＲ及
びＵＶスペクトルを示した。

【００６８】実施例３ 本発明の化合物の経口組成物の特定の実施態様として、
実施例１で得られた化合物２０ｍｇを、サイズ０の硬ゼ
ラチンカプセルに充填して合計量５８０〜５９０ｍｇを
与えるのに十分な微粉末状ラクトースと合わせて調製し
た。

【００６９】実施例４ アンモニウム塩の調製 化合物（Ｉ）の遊離酸の試料０．１ｍｍｏｌを酢酸エチ
ル１０ｍｌ中に溶解した。得られた溶液を気体アンモニ
アで飽和すると、溶液からアンモニウム塩が沈澱した。

【００７０】実施例５ カリウム塩の調製 化合物（Ｉ）の遊離酸０．１ｍｍｏｌをメタノール１０
ｍｌ中に溶解した溶液を水酸化カリウム０．３ｍｍｏｌ
を含有する水溶液またはメタノール液で処理した。溶剤
を蒸発するとトリカリウム塩が得られた。０．１〜０．
３ｍｍｏｌの水酸化カリウムを加えると、その組成が加
えた水酸化カリウムの量に正確に依存するモノカリウム
塩、ジカリウム塩及びトリカリウム塩の混合物が同様に
得られた。

【００７１】同様に、化合物（Ｉ）のナトリウム塩及び
リチウム塩を形成することができる。

【００７２】実施例６ カルシウム塩の調製 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ｍｍｏｌを６：４　メ
タノール／水　２０ｍｌ中に溶解した溶液を水酸化カル
シウム０．１ｍｍｏｌの水溶液で処理した。溶剤を蒸発
すると対応するカルシウム塩が得られた。

【００７３】実施例７ エチレンジアミン塩の調製 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ｍｍｏｌをメタノール
１０ｍｌ中に溶解した溶液をエチレンジアミン０．１ｍ
ｍｏｌで処理した。溶剤を蒸発するとエチレンジアミン
塩が得られた。

【００７４】この方法は、Ｎ，Ｎ”−ジベンジルエチレ
ンジアミン塩の調製にも適用し得る。

【００７５】実施例８ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩の調製式（
Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ｍｍｏｌをメタノール１０
ｍｌ中に溶解した溶液に、メタノール１０ｍｌ中に０．
１〜０．３ｍｍｏｌのトリス（ヒドロキシメチル）アミ
ノメタンを溶解した溶液を加えた。溶剤を蒸発すると化
合物（Ｉ）の対応する塩形態が得られた。この塩の厳密
な組成は加えたアミンのモル比によって決定される。

【００７６】この方法は、限定的ではないが、ジエタノ
ールアミン及びジエチルアミンのような他のアミンにも
適用し得る。

【００７７】実施例９ Ｌ−アルギニン塩の調製 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ｍｍｏｌを６：４　メ
タノール／水　１０ｍｌ中に溶解した溶液を、０．１〜
０．３ｍｍｏｌのＬ−アルギニン水溶液で処理した。溶
剤を蒸発すると標題の塩が得られた。この塩の厳密な組
成は、アミノ酸の化合物（Ｉ）の遊離酸に対するモル比
によって決定される。

【００７８】同様に、Ｌ−オルニチン、Ｌ−リシン及び
Ｎ−メチルグルカミンの塩も調製される。

【００７９】実施例１０ 化合物Ｂの調製（方法１） 化合物Ａ　９０ｍｇを酢酸エチル５ｍｌ中に溶解した溶
液をわずかに過剰のエーテルジアゾメタンで処理した。 ５分後に過剰のジアゾメタンを除去し、溶剤を蒸発する
と化合物Ｂが得られた。

【００８０】実施例１１ 化合物Ｂの調製（方法２） 化合物Ａ　２ｍｇをアセトニトリル０．５ｍｌ中に溶解
した溶液を室温で、１０当量のＤＢＵ及び１０当量のＭ
ｅＩで処理した。２時間後、反応生成物をジクロロメタ
ン１０ｍｌで希釈し、０．１Ｍリン酸１０ｍｌ、水１０
ｍｌ、飽和重炭酸ナトリウム１０ｍｌ及び水１０ｍｌで
順次洗浄した。硫酸ナトリウムで脱水した後、有機層を
濃縮し、残留物を、ヘキサン及び酢酸エチルの混合物を
用いシリカゲルでクロマトグラフィーを実施すると化合
物Ｂが得られた。

【００８１】実施例１１の方法は、１）エチル及び他の
低級アルキルエステル、及び２）ベンジル及び置換ベン
ジルエステルのような他のエステル誘導体の調製にも適
している。

【００８２】質量分析データ Ｆｉｎｎｉｇａｎ−ＭＡＴモデル　ＭＡＴ２１２（電子
衝撃（ＥＩ），９０ｅＶ）、ＭＡＴ　　９０（高速原子
衝撃（ＦＡＢ））及びＴＳＱ７０Ｂ（ＦＡＢ，ＥＩ）質
量分析計において質量スペクトルを記録した。内部標準
としてペルフルオロケロセン（ＰＦＫ）またはペルフル
オロポリプロピレンオキシド（Ｕｌｔｒａｍａｒｋ　　
Ｕｌ６００Ｆ）を使用し高分解能（ＨＲ−ＥＩ）で正確
な質量測定を実施した。ＢＳＴＦＡ−ピリジンの１：１
混合物を用いて室温でトリメチルシリル誘導体を調製し
た。

【００８３】１３Ｃ　ＮＭＲデータ Ｖａｒｉａｎ　　ＸＬ４００分析計で、ＣＤ３ＯＤ中１
００ＭＨｚにおける化合物Ａの１３Ｃ　ＮＭＲスペクト
ルを記録した。内部標準として４９．０ｐｐｍにピーク
を示す溶剤を使用し、ゼロｐｐｍであるテトラメチルシ
ラン（ＴＭＳ）に対する化学シフトをｐｐｍで示す。化
合物Ｂの１３Ｃ　ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ　
　ＸＬ３００分析計で、内部標準として１２８．０ｐｐ
ｍにピークを示す溶剤を使用しＣ６Ｄ６中７５ＭＨｚ（
周囲温度）において記録した。

【００８４】１Ｈ　ＮＨＲスペクトル Ｖａｒｉａｎ　　ＸＬ４００分析計で、ＣＤ３ＯＤ及び
Ｃ６Ｄ６中４００ＭＨｚにおける１Ｈ　ＮＭＲスペクト
ルを記録した。化学シフトは、内部標準として３．３０
ｐｐｍ（ＣＤ３ＯＤ）及び７．１５ｐｐｍ（Ｃ６Ｄ６）
にピークを示す溶剤を使用し、ゼロｐｐｍであるＴＭＳ
に対するｐｐｍで示される。

【００８５】構造式（Ｉ）の化合物の物理的特性化合物
Ａ−Ｚ１、Ｚ２及びＺ３の各々が水素である構造式（Ｉ
）の化合物 質量分析データ 上記化合物は、ＦＡＢ−ＭＳによる分子量６９０を有す
る（観測結果　ｍ／ｚ６９１において［Ｍ＋Ｈ］＋、及
び、ｍ／ｚ７１５において酢酸リチウムの付加［Ｍ・Ｌ
ｉ３＋Ｌｉ］＋（即ちトリリチウム塩のリチウム付加物
））。ペンタ−トリメチルシリル誘導体のＨＲ−ＥＩ測
定によって分子式Ｃ３５Ｈ４６Ｏ１４が決定された（Ｃ
３５Ｈ４６Ｏ１４＋（ＳｉＣ３Ｈ８）５に対する計算値
１０５０．４８６４、測定値１０５０．４８２９）。以
下のごとき他の重要フラグメントイオンがシリルスペク
トル中に認められた：［Ｍ−ＡｃＯＨ］＋，Ｃ３３Ｈ４
４Ｏ１３＋（ＳｉＣ３Ｈ８）５に対する計算値９９０．
４５９７，測定値９９０．４６２５；Ｃ２３Ｈ２５Ｏ１
０＋（ＳｉＣ３Ｈ８）４に対する計算値７４９．３０１
５，測定値７４９．３０２２；［Ｍ−（ＣＯ２Ｈ＋Ｓｉ
Ｃ３Ｈ８）］＋，Ｃ３４Ｈ４５Ｏ１２＋（ＳｉＣ３Ｈ８
）４に対する計算値９３３．４４５８，測定値９３３．
４４５０；Ｃ１６Ｈ２３Ｏ８＋（ＳｉＣ３Ｈ８）４に対
する計算値６３１．２９７４，測定値６３１．２９４４
。

【００８６】１Ｈ　ＮＭＲスペクトル（ＣＤ３ＯＤ，４
０℃）：図１参照 １３Ｃ　ＮＭＲ化学シフト（ＣＤ３ＯＤ，４０℃）：１
１．５，１４．３，１９．４，２０．６，２１．０，２
６．７，３０．８，３３．３，３５．２，３５．６，３
７．９，４１．０，４４．５，７５．８，７６．８，８
０．４，８１．３，８２．７，９１．３，１０６．９，
１１１．７，１２０．０，１２７．０，１２９．４（２
×），１３０．３（２×），１４１．７，１４７．９，
１５７．６，１６６．８，１６８．７，１７０．３，１
７２．２，１７２．７ｐｐｍ。

【００８７】ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｍａｘ　　２０９ｎｍ
（ε＝３６，０００） ＩＲ（遊離酸として、ＺｎＳｅ上のフィルム）：３４０
０−２５００ｂｒ，２９６０，２９３０，２８７５，１
７４５−１７００，１６５０，１４５０，１３７５，１
２８０−１２２５，１１８５，１１３５，１０２０，９
８５，７５０及び７００ｃｍ−１。

【００８８】化合物Ｂ−化合物Ａのトリメチルエステル
、即ちＺ１、Ｚ２及びＺ３の各々がメチルである構造式
（Ｉ）の化合物。

【００８９】質量分析データ 上記化合物は、ＥＩ−ＭＳによる分子量７３２を有し、
ジ−（トリメチルシリル）誘導体を形成する。ＨＲ−Ｅ
Ｉ測定によって分子式Ｃ３８Ｈ５２Ｏ１４が決定された
（計算値７３２．３３５７、測定値７３２．３３２９）
。

【００９０】１Ｈ　ＮＭＲスペクトル（Ｃ６Ｄ６，２２
℃）：図２参照 １３Ｃ　ＮＭＲ化学シフト（Ｃ６Ｄ６，７５ＭＨｚ）：
１１．３，１４．０，１８．９，２０．２，２０．６，
２６．３，３０．０，３２．１，３４．６，３４．７，
３７．１，４０．２，４３．３，５１．９，５２．１，
５３．３，７５．３，７６．２，７８．８，８２．０，
８２．８，８９．８，１０６．２，１１１．８，１１８
．８，１２６．２，１２８．６（２×），１２９．６（
２×），１４０．９，１４６．６，１５７．２，１６６
．０，１６６．５，１６７．２，１６９．５，１７０．
３ｐｐｍ。

【図面の簡単な説明】

【図１】化合物Ａの１Ｈ　ＮＭＲスペクトルを示す。

【図２】化合物Ｂの１Ｈ　ＮＭＲスペクトルを示す。

【化１０】

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　構造式（Ｉ）： 【化１】 〔式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は各々独立に、ａ）Ｈ、 ｂ）Ｃ１−５アルキル、 ｃ）ｉ）フェニル、 ｉｉ）メチル、メトキシ、ハロゲン（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、
   Ｆ）またはヒドロキシで置換されたフェニルからなる群
   から選択される１つで置換されたＣｌ−５アルキルから
   選択される〕の化合物、またはＺ１、Ｚ２及びＺ３の少
   なくとも１つが水素である式（Ｉ）の化合物の医薬的に
   許容可能な塩。
2. 【請求項２】　　構造式（Ｉ）の相対配置が、【化２】 である請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】　　Ｚ１、Ｚ２及びＺ３の各々が水素であ
   る請求項２に記載の化合物またはその医薬的に許容可能
   な塩。
4. 【請求項４】　　Ｚ１、Ｚ２及びＺ３の各々がメチルで
   ある請求項２に記載の化合物。
5. 【請求項５】　　非毒性で治療上有効量の請求項１の化
   合物と医薬的に許容可能な担体とを含有する医薬組成物
   。
6. 【請求項６】　　高コレステロール血症の治療が必要な
   患者に非毒性で治療上有効量の請求項１の化合物を投与
   することからなるこの種の化合物の用途。
7. 【請求項７】　　構造式： 【化３】 の化合物を回収可能な量で産生し得るＭＦ５４５３（Ａ
   ＴＣＣ　　２０９８６）の菌株またはその活性突然変異
   体。
8. 【請求項８】　　増殖が制御されるべき部位（但しヒト
   の身体を除く）に、式（Ｉ）： 【化４】 〔式中、Ｚ１、Ｚ２及びＺ３は各々独立に、ａ）Ｈ、 ｂ）Ｃ１−５アルキル、 ｃ）ｉ）フェニル、 ｉｉ）メチル、メトキシ、ハロゲン（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、
   Ｆ）またはヒドロキシで置換されたフェニルからなる群
   から選択される１つで置換されたＣｌ−５アルキルから
   選択される〕の化合物、またはＺ１、Ｚ２及びＺ３の少
   なくとも１つが水素である式（Ｉ）の化合物の医薬的に
   許容可能な塩を抗菌有効量適用することからなる真菌類
   の増殖を阻害する方法。
9. 【請求項９】　　ヒト以外の生体において真菌類の増殖
   を阻害する方法であって、かかる治療が必要な生体に請
   求項８の化合物を経口、非経口または全身投与すること
   からなる方法。
10. 【請求項１０】　　前記化合物が、 【化５】 からなる群から選択される請求項９に記載の方法。