JPWO2005061461A1 - ヒートショックプロテイン９０（ｈｓｐ９０）ファミリー蛋白質阻害剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、抗腫瘍剤等の医薬品として有用な式（Ｉ）（式中、Ｒ２は水素またはメチルを表し、Ｒ１１およびＲ１８は同一または異なって、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表し、Ｒ１７は水素、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表す）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するヒートショックプロテイン９０（ｈｓｐ９０）ファミリー蛋白質阻害剤等を提供する。

Description

本発明は、抗腫瘍剤や血管新生阻害剤等の医薬品に有用なヒートショックプロテイン９０（ｈｓｐ９０）ファミリー蛋白質阻害剤、およびベンゼノイドテンサマイシン誘導体に関する。

ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質としては、ｈｓｐ９０α蛋白質、ｈｓｐ９０β蛋白質、ｇｒｐ９４、ｈｓｐ７５／ＴＲＡＰ１等が知られている［例えば、“ファーマコロジー＆セラピューティクス（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）”，１９９８年，第７９巻，ｐ．１２９−１６８および“モレキュラー・エンドクリノロジー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）”，１９９９年，第１３巻，ｐ．１４３５−１４４８参照］。
従来、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質に結合する化合物としては、ゲルダナマイシン（Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、ハービマイシン（Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ）等のベンゾキノンアンサマイシン系抗生物質および、ラディシコール（Ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）が知られている（例えば、“セル・ストレス＆シャペロンズ（Ｃｅｌｌ Ｓｔｒｅｓｓ ＆ Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ）”，１９９８年，第３巻，ｐ．１００−１０８および“ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）”，１９９９年，第４２巻，ｐ．２６０−２６６等参照）。これらの化合物はいずれもｈｓｐ９０ファミリータンパク質に結合し、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質の機能を阻害することにより抗腫瘍活性等の薬理活性を示すことが報告されている。したがって、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質に結合する化合物は、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質、またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質（ｈｓｐ９０ ｃｌｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）が関与する疾患の治療薬として有用であると考えられる。
ゲルダナマイシン誘導体（例えば、“インベスティゲーショナル・ニュー・ドラッグス（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ）”，１９９９年，第１７巻，ｐ．３６１−３７３等参照）およびラディシコール誘導体（例えば、“キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）”，１９９９年，第５９巻，ｐ．２９３１−２９３８、“ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）”，２０００年，第９６巻，ｐ．２２８４−２２９１、“キャンサー・ケモセラピー＆ファーマコロジー（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）”，２００１年，第４８巻，ｐ．４３５−４４５等参照）は、抗腫瘍効果を示すことが報告されている。

また、ノボビオシン（Ｎｏｖｏｂｉｏｃｉｎ）およびＰＵ３がｈｓｐ９０ファミリー蛋白質に結合する化合物として報告されている（例えば、“ジャーナル・オブ・ナショナル・キャンサー・インスティチュート（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）”，２０００年，第９２巻，ｐ．２４２−２４８および“ケミストリー＆バイオロジー（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ）”，２００１年，第８巻，ｐ．２８９−２９９等参照）。
一方、ベンゼノイドアンサマイシン誘導体としては、レブラスタチン（Ｒｅｂｌａｓｔａｔｉｎ）、アウトリティミシン（Ａｕｔｏｌｙｔｉｍｙｃｉｎ）および１７−Ｏ−デメチルレブラスタチン（１７−Ｏ−Ｄｅｍｅｔｈｙｌｒｅｂｌａｓｔａｔｉｎ）が知られている。Ｒｅｂｌａｓｔａｔｉｎは、網膜芽細胞腫（Ｒｂ）蛋白質のリン酸化を阻害することにより細胞周期をＧ１期で停止させると報告されている（例えば、特開平９−２８６７７９号公報および“ジャーナル・オブ・アンティバイオティクス（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）”，２０００年，第５３巻，ｐ．１３１０−１３１２等参照）。また、Ａｕｔｏｌｙｔｉｍｙｃｉｎや１７−Ｏ−Ｄｅｍｅｔｈｙｌｒｅｂｌａｓｔａｔｉｎは抗ＨＳＶ−１剤（例えば、“チャイニーズ・ケミストリー・レターズ（Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ）”，２００１年，第１２巻，ｐ．９０３−９０６等参照）やオンコスタチン（Ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ）Ｍ阻害剤（例えば、“ジャーナル・オブ・アンティバイオティクス（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）”，２０００年，第５３巻，ｐ．６５７−６６３等参照）として報告されている。

本発明の目的は、医薬品として有用なｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤を提供することにある。より具体的には癌等の予防および／または治療に有用な医薬を提供することが本発明の目的である。本発明のさらに別の目的は、抗腫瘍剤、血管新生阻害剤等といったｈｓｐ９０ファミリー蛋白質およびｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質に関連する種々の疾患の治療剤や、抗菌剤等の医薬品の有効成分として有用な新規ベンゼノイドアンサマイシン誘導体を提供することにある。
本発明は、以下の（１）〜（２９）に関する。
（１）式（Ｉ）

（式中、Ｒ^２は水素またはメチルを表し、Ｒ^１１およびＲ^１８は同一または異なって、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表し、Ｒ^１７は水素、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表す）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体［以下、式（Ｉ）で表される化合物を化合物（Ｉ）という。他の式番号の化合物についても同様である］またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するヒートショックプロテイン９０（ｈｓｐ９０）ファミリー蛋白質阻害剤。
（２）Ｒ^１７が水素である前記（１）記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（３）Ｒ^２が水素である前記（１）または（２）記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（４）Ｒ^２がメチルであり、Ｒ^１１が置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである前記（１）または（２）に記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（５）Ｒ^１１がヒドロキシである前記（１）〜（３）のいずれかに記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（６）Ｒ^２がメチルであり、Ｒ^１１がヒドロキシであり、Ｒ^１７が水素またはヒドロキシであり、Ｒ^１８がヒドロキシである前記（１）に記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（７）Ｒ^１８が置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである前記（１）〜（５）のいずれかに記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（８）Ｒ^１８が置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである前記（１）〜（５）のいずれかに記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（９）式（Ｉａ）

（式中、Ｒ^２ａ、Ｒ^１１ａ、Ｒ^１７ａおよびＲ^１８ａは、それそれＲ^２、Ｒ^１１、Ｒ^１７およびＲ^１８と同義であるが、Ｒ^２ａがメチルであり、かつＲ^１１ａおよびＲ^１８ａの両方がヒドロキシであるとき、Ｒ^ｌ７ａは水素、ヒドロキシおよびメトキシのいずれでもない）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
（１０）Ｒ^２ａが水素である前記（９）記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
（１１）Ｒ^１７ａが水素である前記（９）または（１０）記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
（１２）Ｒ^１１ａおよびＲ^１８ａの一方または両方が、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである前記（９）〜（１１）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
（１３）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
（１４）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
（１５）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するｈｓｐ９０ファミリー蛋白質またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質が関与する疾患の治療剤。
（１６）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
（１７）化合物（Ｉ）またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とするｈｓｐ９０ファミリー蛋白質を阻害する方法。
（１８）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とする悪性腫瘍の治療方法。
（１９）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とするｈｓｐ９０ファミリー蛋白質またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質が関与する疾患の治療方法。
（２０）前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とするｈｓｐ９０ファミリー蛋白質を阻害する方法。
（２１）ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤の製造のための化合物（Ｉ）またはその薬理学的に許容される塩の使用。
（２２）抗腫瘍剤の製造のための前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
（２３）ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質が関与する疾患の治療剤の製造のための前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
（２４）ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤の製造のための前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
（２５）式（Ｉｂ）

で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体を生産する、ストレプトマイセス属に属する微生物。
（２６）ストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１［Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６ 郵便番号３０５−８５６６）受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４］株。
（２７）前記（２５）に記載の微生物を培養し、得られた培養液から産生された化合物を単離する工程を包含する、化合物（Ｉｂ）の製造方法。
（２８）ストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４）株を培養し、得られた培養液から産生された化合物を単離する工程を包含する、前記（９）〜（１２）のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体の製造方法。
（２９）ストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４）株を培養し、得られた培養液から産生された化合物を単離する工程を包含する、化合物（Ｉｂ）の製造方法。
化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）の各基の定義において、低級アルコキシの低級アルキル部分としては、例えば炭素数１〜８の直鎖もしくは分枝状のアルキルまたは炭素数３〜８のシクロアルキルがあげられる。炭素数１〜８の直鎖もしくは分枝状のアルキルとしては、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ｔｅｒｔ−ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等があげられ、炭素数３〜８のシクロアルキルとしては、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル等があげられる。
低級アルカノイルオキシの低級アルカノイル部分としては、例えば直鎖または分枝状の炭素数１〜７のアルカノイル、具体的には、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、イソバレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル等があげられる。
置換低級アルコキシおよび置換低級アルカノイルオキシにおける置換基としては、同一または異なって例えば置換数１〜３の、具体的にはヒドロキシ、シアノ、カルボキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシ等があげられる。置換位置は、特に限定されない。ここで、低級アルコキシは、前記低級アルコキシと同義であり、置換低級アルコキシにおける置換基としては、同一または異なって例えば置換数１〜３のヒドロキシ等があげられる。
化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）の中には、幾何異性体、光学異性体等の立体異性体が存在し得るものもあるが、これらを含め、全ての可能な異性体およびそれらの混合物が本発明のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤に使用できる。また、同様に化合物（Ｉａ）の可能な異性体およびそれらの混合物は本発明の化合物に包含される。
化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）の薬理学的に許容される塩は、例えば薬理学的に許容される金属塩、アンモニウム塩、酸付加塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等を包含する。薬理学的に許容される金属塩としては、例えばリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられ、薬理学的に許容されるアンモニウム塩としては、例えばアンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩があげられ、薬理学的に許容される酸付加塩としては、例えば塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩等の有機酸塩があげられ、薬理学的に許容される有機アミン付加塩としては、例えばモルホリン、ピペリジン等の付加塩があげられ、薬理学的に許容されるアミノ酸付加塩としては、例えばグリシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン等の付加塩があげられる。
また、化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）ならびにそれらの薬理学的に許容される塩は、水または各種溶媒との付加物の形で存在することもあるが、それらの付加物も本発明のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤に使用できる。また、同様に化合物（Ｉａ）の水または各種溶媒との付加物は本発明の化合物に包含される。
化合物（Ｉ）もしくは化合物（Ｉａ）またはその薬理学的に許容される塩はｈｓｐ９０ファミリー蛋白結合活性を有しており、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白が関与している種々の疾患に対して予防および／または治療のための医薬として用いることができる。化合物（Ｉ）もしくは化合物（Ｉａ）またはその薬理学的に許容される塩は、そのまま単独で投与することも可能であるが、通常各種の医薬製剤として提供するのが望ましい。また、それら医薬製剤は、動物および人に使用されるものである。
ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害とは、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質とｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質（ｈｓｐ９０ ｃｌｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）との結合を阻害することを意味する。ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質としては、例えばｈｓｐ９０α蛋白質、ｈｓｐ９０β蛋白質、ｇｒｐ９４、ｈｓｐ７５／ＴＲＡＰ１等があげられる［例えば、“ファーマコロジー＆セラピューティクス（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）”，１９９８年，第７９巻，ｐ．１２９−１６８および“モレキュラー・エンドクリノロジー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）”，１９９９年，第１３巻，ｐ．１４３５−１４４８参照］。ｈｓｐ９０ ｃｌｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎとしては、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質であればいずれでもよいが、例えばＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、Ｂｃｒ−Ａｂｌ、ｓｒｃ、Ｒａｆ−１、ＡＫＴ、Ｆｌｔ−３、ＰＬＫ、Ｗｅｅ１、ＦＡＫ、ｃＭＥＴ、ｈＴＥＲＴ、ＨＩＦ１−α、変異ｐ５３、エストロゲン受容体等があげられる［例えば、“エキスパート・オピニオン・オン・バイオロジカル・セラピー（Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ）”，２００２年，第２巻，ｐ．３−２４参照］。
また、前述したように、例えばゲルダナマイシン（Ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ）、ハービマイシン（Ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ）等のベンゾキノンアンサマイシン系抗生物質および、ラディシコール（Ｒａｄｉｃｉｃｏｌ）が知られている（例えば、“セル・ストレス＆シャペロンズ（Ｃｅｌｌ Ｓｔｒｅｓｓ ＆ Ｃｈａｐｅｒｏｎｅｓ）”，１９９８年，第３巻，ｐ．１００−１０８および“ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）”，１９９９年，第４２巻，ｐ．２６０−２６６等参照）。これらの化合物はいずれもｈｓｐ９０ファミリータンパク質に結合し、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質の機能を阻害することにより抗腫瘍活性等の薬理活性を示すことが報告されている。
ゲルダナマイシン誘導体（例えば、“インベスティゲーショナル・ニュー・ドラッグス（Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ Ｎｅｗ Ｄｒｕｇｓ）”，１９９９年，第１７巻，ｐ．３６１−３７３等参照）およびラディシコール誘導体（例えば、“キャンサー・リサーチ（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）”，１９９９年，第５９巻，ｐ．２９３１−２９３８、“ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）”，２０００年，第９６巻，ｐ．２２８４−２２９１、“キャンサー・ケモセラピー＆ファーマコロジー（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ）”，２００１年，第４８巻，ｐ．４３５−４４５等参照）は、抗腫瘍効果を示すことが報告されている。
したがって、化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）ならびにそれらの薬理学的に許容される塩は、ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質、またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質（ｈｓｐ９０ ｃｌｉｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）が関与する疾患の治療薬（例えば、抗腫瘍剤等、具体的には乳癌等の固形癌の治療薬、骨髄性白血病等の血液癌の治療薬等）として有用であると考えられる。
本発明に係わる医薬製剤は、活性成分として化合物（Ｉ）もしくは化合物（Ｉａ）またはその薬理学的に許容される塩を単独で、あるいは任意の他の治療のための有効成分との混合物として含有することができる。また、それら医薬製剤は、活性成分を薬理学的に許容される一種もしくはそれ以上の添加剤と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。
投与経路は、治療に際し最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口または、例えば静脈内等の非経口をあげることができる。
投与形態としては、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、注射剤等があげられる。
経口投与に適当な、例えば錠剤等は、乳糖等の賦形剤、トウモロコシデンプン等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤等を用いて製造できる。
非経口投与に適当な、例えば注射剤の場合は、塩溶液、ブドウ糖溶液または塩溶液とブドウ糖溶液の混合液等を用いて製造できる。
化合物（Ｉ）もしくは化合物（Ｉａ）またはその薬理学的に許容される塩の投与量および投与回数は、投与形態、患者の年齢、体重、治療すべき症状の性質もしくは重篤度により異なるが、通常経口の場合、成人一人当り０．０１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは０．０５〜５０ｍｇを１日１回ないし数回投与する。静脈内投与等の非経口投与の場合、成人一人当り０．００１〜１００ｍｇ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇを１日１回ないし数回投与する。しかしながら、これら投与量および投与回数に関しては、前述の種々の条件により変動する。
本発明の化合物の製造方法は特に限定されないが、例えば、以下に説明する工程に従って製造することができる。
製造法１
化合物（Ｉ）のうち、Ｒ^２が水素であり、Ｒ^１１およびＲ^１８がヒドロキシであり、Ｒ^１７が水素である化合物（Ｉｂ）は、ストレプトマイセス属に属し式（Ｉｂ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中に化合物（Ｉｂ）を生成蓄積させ、該培養物から化合物（Ｉｂ）を採取することによって製造される。
式（Ｉｂ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体生産能を有する微生物としては、ストレプトマイセス属に属し、式（Ｉｂ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体生産能を有する菌株であればいずれの菌株でも用いることができる。またこれらの菌株を人工的変異方法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理等によって変異させた変異株または自然的に変異した変異株でも、式（Ｉｂ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体生産能を有するものであれば本発明に用いることができる。具体的に好適な例として、ストレプトマイセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）ＥＨ２１株があげられる。
本発明者らは、土壌より新たに分離したストレプトマイセス属に属するＥＨ２１株が、化合物（Ｉｂ）を生産することを見い出した。また、本発明者らは、上記ＥＨ２１株が、化合物（Ｉ）のうちＲ^２がメチルであり、Ｒ^１１およびＲ^１８がヒドロキシであり、Ｒ^１７が水素、ヒドロキシまたはメトキシである化合物（ＩＩ）を生産することも見い出した。
化合物（Ｉｂ）を生産する代表菌株ＥＨ２１は、土壌より分離したもので、その菌学的性質は次のとおりである。
土壌より新たに分離したストレプトマイセス属に属する放線菌ＥＨ２１株の形態、培養性状、生理的性質における特徴を記述する。
１．形態的性質
１）菌糸
気菌糸形成：有
気菌糸の分断および運動性：無
基生菌糸の分断および運動性：無
２）胞子
胞子の形成の有無および着生位置：気菌糸に形成
胞子嚢の形成の有無および着生位置：無
胞子柄上で連鎖する胞子の数：１０個以上
多数の胞子が連鎖する場合の形状：コイル状
胞子の特徴
表面構造：シワ状
形状および大きさ：桿形、約１．０〜１．３ｘ１．９μｍ
運動性および鞭毛の存在：無
３）その他
厚膜胞子：無
集束菌糸：無
疑似胞子嚢：無
菌糸の分裂様式：単純分枝
２．培養的性質
ＥＨ２１株は、一般に使用されている合成および天然培地で普通もしくは旺盛な生育を示し、基生菌糸はうすい黄色からこい赤みの黄色を示す。培地により黄色系統の可溶性色素が産生されることもある。
各種培地上で２８℃、１４日間培養したときの生育および色の特徴を下記に示す。なお、色の表示はＪＩＳ色名帳（財団法人日本規格協会）による色の分類に従った。
１）シュクロース・硝酸塩寒天培地
生育状態：貧弱
基生菌糸の色調：ごくうすい黄〜黄みの白（７．５Ｙ ９／３〜５Ｙ ９／１）
気菌糸の着生状態とその色調：旺盛、黄みの暗い灰色〜白（５Ｙ ４／１〜Ｎ ９．５）
可溶性色素：無
２）グルコース・アスパラギン寒天培地
生育状態：貧弱
基生菌糸の色調：くすんだ黄〜うすい黄（５Ｙ ７．５／７〜５Ｙ ９／６）
気菌糸の着生状態とその色調：普通、白（Ｎ９．５）
可溶性色素：無
３）グリセリン・アスパラギン寒天培地
生育状態：普通
基生菌糸の色調：くすんだ赤みの黄〜うすい黄（１０ＹＲ ７／７〜５Ｙ ９／６）
気菌糸の着生状態とその色調：貧弱、白（Ｎ９．５）
可溶性色素：産生（黄色）
４）スターチ・無機塩寒天培地
生育状態：旺盛
基生菌糸の色調：ごくうすい黄〜うすい黄（１０ＹＲ ９／３〜５Ｙ ９／６）
気菌糸の着生状態とその色調：旺盛、赤み灰色〜白（５Ｒ ５．５／１〜Ｎ ９．５）
可溶性色素：無
５）チロシン寒天培地
生育状態：普通
基生菌糸の色調：こい赤みの黄〜うすい黄（１０ＹＲ ５．５／１０〜５Ｙ ９／６）
気菌糸の着生状態とその色調：貧弱、明るい灰黄（７．５Ｙ ８／３）
可溶性色素：わずかに産生（黄）
６）栄養寒天培地
生育状態：旺盛
基生菌糸の色調：うすい赤みの黄（１０ＹＲ ８．５／６）
気菌糸の着生状態とその色調：貧弱、ごくうすい黄（１０ＹＲ ９／３）
可溶性色素：無
７）イースト・麦芽寒天培地
生育状態：旺盛
基生菌糸の色調：くすんだ黄赤〜灰黄赤（５ＹＲ ６／７〜５ＹＲ ５／３）
気菌糸の着生状態とその色調：旺盛、灰色〜白（Ｎ ５．５〜Ｎ ９．５）
可溶性色素：無
８）オートミール寒天培地
生育状態：旺盛
基生菌糸の色調：うすい赤みの黄〜ごくうすい黄（１０ＹＲ ８．５／６〜１０ＹＲ ９／３）
気菌糸の着生状態とその色調：旺盛、黄みの暗い灰色〜白（５Ｙ ４／１〜Ｎ ９．５）
可溶性色素：無
３．生理学的性質
ＥＨ２１株の生理的諸性質を以下に示す。生育温度範囲は１４日間培養後、その他は２８℃、２週間培養後の結果を記述する。
１）生育温度範囲：１５．０℃〜４３．５℃、最適温度３９℃付近。
２）ゼラチンの液化：無
３）スターチの加水分解：有
４）脱脂粉乳の凝固およびペプトン化：ペプトン化有
５）メラニン様色素の生成
ａ）ペプトン・イースト・鉄寒天培地：無
ｂ）チロシン寒天培地：無
６）炭素源の利用性
基礎培地はプリードハム・ゴトリーブ寒天培地を使用した。
以下、＋は利用することを、−は利用しないことを示す。
Ｌ−アラビノース：＋
Ｄ−キシロース ：＋
Ｄ−グルコース ：＋
シュクロース ：＋
ラフィノース ：＋
Ｄ−フルクトース：＋
ラムノース ：＋
イノシトール ：＋
Ｄ−マンニトール：＋
４．化学分類的性質
１）菌体中のジアミノピメリン酸の光学異性体：ＬＬ型
以上、形態的には気中菌糸に胞子鎖が形成されること、胞子嚢の形成が無いこと、および基生菌糸が分断しないこと、化学分類的には細胞壁がＩ型（ＬＬ−ジアミノピメリン酸）であることから、本菌株は放線菌の中でストレプトマイセス属に分類される。
従って、本菌株をストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１）と命名し、平成１５年（２００３年）１２月１６日付けで独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１丁目１番地１中央第６ 郵便番号３０５−８５６６）に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４として寄託した。
本発明のベンゼノイドアンサマイシン誘導体生産菌の培養に際しては、通常の放線菌の培養法が適用される。培地としては、微生物の資化し得る炭素源、窒素源、無機イオンおよび有機栄養源等より選択されたもの適宜含有する培地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用できる。
炭素源としては、グルコース、澱粉、デキストリン、マンノース、フルクトース、シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜等が単独または組合せて用いられる。さらに、菌の資化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸等も用いられる。
窒素源としては、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大豆粉、さなぎ粉、カザミノ酸等が単独または組合せて用いられる。
そのほか、必要に応じて塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウム、リン酸マグネシウム・８水塩、硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅等の無機塩類を加える。さらに、使用菌の生育やベンゼノイドアンサマイシン誘導体の生産を促進する微量成分を適当に添加することができる。
培養法としては、液体培養法、特に深部攪拌培養法が適している。培養は、１６〜３７℃、好ましくは２５〜３２℃の温度で、ｐＨ４〜１０、好ましくはｐＨ６〜８で行われ、培地のｐＨ調整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液等が用いられる。培養は通常１〜１０日で完了するが、化合物（Ｉｂ）または化合物（ＩＩ）が培養液中および菌体中に生成蓄積され、培養物中の生成量が最大に達したときに培養を停止することが好ましい。
培養物中に蓄積した化合物（Ｉｂ）または化合物（ＩＩ）を培養物から単離精製するに際しては、通常の微生物代謝産物を培養物から単離精製するために常用される方法に従って行われる。例えば、培養物に直接メタノール、エタノール、２−プロパノール、アセトンを加え、活性成分の抽出を行うか、２−ブタノン、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−ブタノールで２層分配抽出を行なうことにより活性成分を抽出する。培養物を濾過により培養濾液と菌体とに分け、菌体からクロロホルム、アセトン、メタノール等の溶剤で菌体成分を抽出する。ついで、抽出液または培養濾液をポリスチレン系吸着剤、例えばダイヤイオンＨＰ−２０、ＨＰ−２０ｓｓ（三菱化学社製）等に通塔して活性成分を吸着させ、ついでメタノール、アセトン等で溶出する。次に、例えばセファデックスＬＨ−２０、トヨパールＨＷ４０等によるゲルろ過やオクタデシル基結合型シリカゲル（ＯＤＳ）等によるカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、シリカゲルによるカラムクロマトグラフィー等により、化合物（Ｉｂ）または化合物（ＩＩ）を得る。なお、培養、単離精製操作中の化合物（Ｉｂ）または化合物（ＩＩ）の検出は、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等により行なう。
製造法２
工程１
化合物（Ｉａ）のうち、Ｒ^１１ａおよびＲ^１８ａがヒドロキシまたは置換もしくは非置換の低級アルコキシであり、Ｒ^１７ａが水素、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換の低級アルコキシであり、Ｒ^１１ａ、Ｒ^１７ａおよびＲ^１８ａのうち少なくとも１つが置換もしくは非置換の低級アルコキシである化合物（ＩＩＩ）は、化合物（ＩＶ）｛前記化合物（Ｉｂ）、化合物（ＩＩ）または化合物（ＩＩ）より有機合成化学で常用される公知の方法［例えば、Ｒ．Ｃ．ラロック（Ｌａｒｏｃｋ）著，“コンプリヘンシブ・オーガニック・トランスフォーメーションズ（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ）”，アメリカ，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．），１９８９年参照］によって製造できる｝から合成することができる。

（式中、Ｒ^２ａは前記と同義であり、Ｒ^１１−３およびＲ^１８−３はヒドロキシまたは置換もしくは非置換の低級アルコキシを表し、Ｒ^１７−３は水素、ヒドロキシまたは置換もしくは非置換の低級アルコキシを表し、Ｒ^１１−３、Ｒ^１７−３およびＲ^１８−３のうち少なくとも１つは置換もしくは非置換の低級アルコキシを表し、Ｒ^１７−３が水素のとき、Ｒ^１７−４は水素を表し、Ｒ^１７−３がメトキシのとき、Ｒ^１７−４はヒドロキシまたはメトキシを表し、Ｒ^１７−３がメトキシを除く置換もしくは非置換の低級アルコキシまたはヒドロキシのとき、Ｒ^１７−４はヒドロキシを表す）
化合物（ＩＩＩ）は化合物（ＩＶ）を適当なアルキル化剤を用いて、不活性溶媒中、必要に応じて１〜１００当量の塩基存在下、ヒドロキシをアルキル化することにより合成することができる。不活性溶煤としては、例えばメタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、クロロホルムまたはジクロロメタン等があげられる。塩基としては、例えば水素化ナトリウム、酸化銀、炭酸カリウ厶、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリンまたは１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレン等があげられる。用いられる適当なアルキル化剤は、通常ヒドロキシをアルキル化する方法に用いられるものであればいずれでも良く、例えばトリメチルシリルジアゾメタン、アルキルハライド、アルコキシアルキルハライド、アルカンスルホン酸アルキルエステルまたはトリアルコキシテトラフルオロボレート等があげられる。反応温度は−３０℃〜１５０℃が好ましく、反応時間は通常５分〜１５０時間である。
化合物（ＩＩＩ）のうち、Ｒ^１１−３、Ｒ^１７−３およびＲ^１８−３のうち少なくとも１つがヒドロキシである化合物は、反応条件やアルキル化剤の当量を調節することにより、当該ヒドロキシが、置換もしくは非置換の低級アルコキシとなった化合物との混合物として得られる場合があり、有機合成化学で常用される分離精製法、例えば、濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して単離精製することができる。また、必要に応じてヒドロキシ基の保護、脱保護［例えば、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著，“プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）”，アメリカ，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．），１９８１年参照］を行うことにより、目的化合物を選択的に製造することができる。
工程２
化合物（Ｉａ）のうち、Ｒ^１１ａおよびＲ^１８ａがヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシであり、Ｒ^１７ａが水素、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシであり、Ｒ^１１ａ、Ｒ^１７ａおよびＲ^１８ａの少なくとも１つが置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである化合物（Ｖ）は、化合物（ＶＩ）［前記化合物（ＩＩＩ）または化合物（ＩＶ）］から合成することができる。

（式中、Ｒ^２ａは前記と同義であり、Ｒ^１１−５およびＲ^１８−５はヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表し、Ｒ^１７−５は水素、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表し、Ｒ^１１−５、Ｒ^１７−５およびＲ^１８−５のうち少なくとも１つは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表し、Ｒ^１１−５が置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシまたはヒドロキシの場合、Ｒ^１１−６はヒドロキシであり、Ｒ^１１−５が置換もしくは非置換の低級アルコキシの場合、Ｒ^１１−６はＲ^１１−５と同じく置換もしくは非置換の低級アルコキシを表し、Ｒ^１７−５が置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシまたはヒドロキシの場合、Ｒ^１７−６はヒドロキシを表し、Ｒ^１７−５が水素または置換もしくは非置換の低級アルコキシの場合、Ｒ^１７−６はＲ^１７−５と同じく水素または置換もしくは非置換の低級アルコキシを表し、Ｒ^１８−５が置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシまたはヒドロキシの場合、Ｒ^１８−６はヒドロキシを表し、Ｒ^１８−５が置換もしくは非置換の低級アルコキシの場合、Ｒ^１８−６はＲ^１８−５と同じく置換もしくは非置換の低級アルコキシを表す）
化合物（Ｖ）は化合物（ＶＩ）を、無溶媒または溶媒中、１当量〜溶媒量の塩基存在下、１〜１００当量の適当なアルカノイル化剤を用いて、ヒドロキシをアルカノイル化することにより合成することができる。溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、クロロホルムまたはジクロロメタン等があげられる。塩基としては、例えばピリジン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、エチルジイソプロピルアミンまたは４−ジメチルアミノピリジン等があげられる。用いられるアルカノイル化剤は、通常、ヒドロキシをアルカノイル化する方法に用いられるものであればいずれでも良く、例えば酸無水物よたは酸ハライドがあげられる。反応温度は−３０℃〜１５０℃が好ましく、反応時間は通常５〜１５０時間である。
また、化合物（Ｖ）は化合物（ＶＩ）を、溶媒中で、１〜１００当量の塩基および１〜１００当量の縮合剤存在下、１〜１００当量のカルボン酸と反応させることによっても合成できる。溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、クロロホルムまたはジクロロメタン等があげられる。塩基としては、例えばピリジン、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、エチルジイソプロピルアミンまたは４−ジメチルアミノピリジン等があげられる。縮合剤としては、例えば１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドまたはカルボニルジイミダゾール等があげられる。反応温度は−３０℃〜１５０℃が好ましく、反応時間は通常５〜１５０時間である。
さらに必要により、引き続き水、メタノール、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、クロロホルム、またはジクロロメタン等の溶媒中、必要に応じて０．１〜１０００当量の炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、ナトリウムメチラート等の塩基と反応させることによりアルカノイル化を目的としないヒドロキシがアルカノイル化された化合物において該アルカノイル基を除去することができる。反応温度は−３０℃〜１５０℃が好ましく、反応時間は通常５分〜１５０時間である。
また、化合物（Ｖ）のうち、Ｒ^１１−５、Ｒ^１７−５およびＲ^１８−５のうち少なくとも１つがヒドロキシである化合物が、反応条件やアルカノイル化剤の当量を調節することにより、該ヒドロキシが、置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシとなった化合物との混合物として得られる場合があり、工程２と同様に単離精製または選択的に製造することができる。
上記工程１および工程２における中間体および目的化合物は、有機合成化学で常用される分離精製法、例えば、濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して単離精製することができる。また、中間体においては特に精製することなく次の反応に供することも可能である。
さらに、有機合成化学で常用される公知の方法［例えば、Ｒ．Ｃ．ラロック（Ｌａｒｏｃｋ）著，“コンプリヘンシブ・オーガニック・トランスフォーメーションズ（Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ）”，アメリカ，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．），１９８９年参照］によって各官能基を変換して種々の化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）を製造することもできる。また、必要に応じて各官能基の保護、脱保護［例えば、グリーン（Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ）著，“プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）”，アメリカ，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ・インコーポレイテッド（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，１９８１年参照］を組み合わせ、種々の官能基を持つ目的化合物を製造することができる。
化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）の塩を取得したいとき、化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）が塩の形で得られるときはそのまま精製すればよく、また、遊離の形で得られるときは、化合物（Ｉ）および化合物（Ｉａ）を適当な溶媒に溶解または懸濁し、酸または塩基を加えて単離、精製すればよい。
本発明の活性成分として好適に用いられる化合物（Ｉ）の代表的化合物を以下に示し、それらの製造法は後述の参考例に示す。ただし、本発明の活性成分はこれらの化合物に限定されることはない。

次に、代表的な化合物（Ｉ）の薬理作用について試験例により具体的に説明する。
試験例１ ｈｓｐ９０タンパク質結合活性試験
文献［“アーカイブズ・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ）”，１９９０年，２８２巻，ｐ．２９０−２９６参照］に記載の方法に従って、ウシ脳から精製したｈｓｐ９０蛋白質（純度５８％）をトリス緩衝化生理食塩水（ＴＢＳ、ｐＨ７．４）にて１μｇ／ｍＬになるように希釈し、住友ベークライト社製９６穴ＥＬＩＳＡアッセイプレートに７５μＬ／ウェルの量で分注後、４℃にて１晩放置して固相化した。上清を除去し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＴＢＳを３００μＬ／ウェルの量で分注してブロッキングを行なった。ブロッキング液を除去後、０．０５％ツィーン２０を含むトリス緩衝化生理食塩水（ＴＢＳＴ）を５００μＬ／ウェルの量加えて固相を洗浄する操作を３回繰り返した。被験化合物を、ＴＢＳＴを用いて最高濃度０．５ｍｍｏｌ／Ｌから１０平方根倍で８段階希釈した各溶液を調製した。この被験化合物溶液を、プロテアーゼ阻害剤コンプリートＥＤＴＡ−フリー（ロシュ社製）およびペファブロック ＳＣ（Ｐｅｆａｂｌｏｃ ＳＣ，ロシュ社製）をそれぞれ１錠／４０ｍＬおよび０．４ｍｍｏｌ／Ｌの濃度で含むＴＢＳＴを８０μＬ／ウェルの量であらかじめ分注したアッセイプレートに、２０μＬ／ウェルの量で添加し、室温で１時間放置した。ここで、アッセイのポジティブコントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を終濃度１μＬ／ウェルで、ネガティブコントロールとしてラディシコールを終濃度０．２５μｍｏｌ／Ｌで、被験化合物と同一プレートに並べて被験化合物と同様の操作を行った。最終濃度０．１μｍｏｌ／Ｌになるように、式（Ａ）で示されるビオチン化ラディシコール［“バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）”，２００２年，１０巻，ｐ．３４４５−３４５４参照］を加え、さらに室温で１時間放置して、固相化したｈｓｐ９０蛋白質に対する被験化合物の結合の競合反応を行なった。

反応液を除去後、ＴＢＳＴを５００μＬ／ウエルの量加えて固相を洗浄する操作を３回繰り返した。ユーロピウム標識ストレプトアビジン［ワラック・オイ（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ）社製］をアッセイ用緩衝液［ワラック・オイ（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ）社製］にて最終濃度０．１μｇ／ｍＬになるように希釈し、１００μＬ／ウェルの量で分注した後、室温で１時間放置して、ビオチン−アビジン結合反応を行なった。反応液を除去後、ＴＢＳＴを５００μＬ／ウェルの量加えて固相を洗浄する操作を３回繰り返した。蛍光増強溶液［ワラック オイ（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ）社製］を１００μＬ／ウェルの量で加え、室温で５分間発色反応を行い、マルチラベルカウンター［ＡＲＶＯ^ＴＭ、ワラック オイ（Ｗａｌｌａｃ Ｏｙ）社製］を用いて、励起波長３４０ｎｍ、測定波長６１５ｎｍで時間分解蛍光を測定した。ポジティブコントロールの時間分解蛍光の測定値を結合率１００％、ネガティブコントロールの測定値を結合率０％として、被験化合物がビオチン化ラディシコールとｈｓｐ９０との結合を５０％阻害する濃度ＩＣ_５０（ｎｍｏｌ／Ｌ）を算出した。
結果を第２表に示す。

試験例２ ヒト乳癌由来ＫＰＬ−４細胞に対する増殖阻害試験
９６穴マイクロプレート（ヌンク社製）中に、１ウェルあたり２０００個のヒト乳癌由来ＫＰＬ−４細胞をまきこみ、１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）を含むダルベッコ変性イーグル培地中（ＤＭＥＭ）、５％炭酸ガスインキュベーター内で３７℃、２４時間前培養を行った。その後、１０ｍｍｏｌ／Ｌに調製した各被験化合物のＤＭＳＯ溶液を、培養用培地で段階的に希釈し、１ウェルあたり合計１００μＬになるように添加した。その後、３７℃でさらに７２時間、５％炭酸ガスインキュベーター内で培養した。培養終了後、培養用培地で２倍希釈したＷＳＴ−１｛４−［３−（４−ヨードフェニル）−２−（４−ニトロフェニル）−２Ｈ−５−テトラゾリオ］−１，３−ベンゼンジスルホン酸（４−［３−（４−Ｉｏｄｏｐｈｅｎｙｌ）−２−（４−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−５−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｏ］−１，３−ｂｅｎｚｅｎｅ ｄｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ）標識混合物（ロシュ・ダイアグノスティックス社製）｝を、１ウェルあたり２０μＬずつ添加した後、５％炭酸ガスインキュベーター内で３７℃、１時間培養し、マイクロプレート分光光度計（バイオラッド社製、Ｍｏｄｅｌ ５５０）を用い、４５０ｎｍと６５５ｎｍでの吸光度を測定した。細胞増殖阻害活性は５０％増殖阻害濃度ＧＩ_５０で示した。ＧＩ_５０算出方法を以下に記す。各ウェルの４５０ｎｍでの吸光度から６５５ｎｍでの吸光度を減じた値（差吸光度）を算出した。被験化合物未処理の細胞で得られた差吸光度を１００％とし、試験濃度の化合物で処理した細胞で得られた差吸光度と比較することにより、細胞の増殖を５０％阻害する化合物の濃度を算出し、それをＧＩ_５０で示した。結果を第３表に示す。第３表によれば、被験化合物は、ヒト乳癌由来ＫＰＬ−４細胞に対する細胞増殖阻害活性を示し、抗腫瘍剤として有用である。

試験例３ 細胞内ｈｓｐ９０クライアント蛋白質Ｒａｆ−１およびＥｒｂＢ２の消失作用
２４穴マイクロプレート（ヌンク社製）中に、１ウェルあたり５００００個のヒト乳癌由来ＫＰＬ−４細胞をまきこみ、１０％牛胎児血清（ＦＣＳ）を含むダルベッコ変性イーグル培地中（ＤＭＥＭ）、５％炭酸ガスインキュベーター内で３７℃、２４時間前培養を行った。その後、１０μｍｏｌ／Ｌに調製した各被験化合物のＤＭＳＯ溶液を、培養用培地で段階的に希釈し、試験濃度になるように各ウェルに添加した。その後、３７℃でさらに４０時間、５％炭酸ガスインキュベーター内で培養した。冷却した溶解用緩衝液［５０ｍｍｏｌ／Ｌ ヘペス（ＨＥＰＥＳ）ＮａＯＨ，ｐＨ７．４，２５０ｍｍｏｌ／Ｌ食塩（ＮａＣｌ），１ｍｍｏｌ／Ｌエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ），１％ノニデットＰ−４０（ＮＰ−４０），１ｍｍｏｌ／Ｌジチオスレイトール（ＤＴＴ），１ｍｍｏｌ／Ｌフッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ），５μｇ／ｍＬロイペプチン（ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ）］を用い、４℃において細胞を３０分間溶解した後、２００００Ｇで１０分間遠心した。得られた上清の蛋白質濃度を測定し、各レーンあたり同一蛋白質量になるよう試料を調製した後、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により蛋白質の分離を行なった。分離された蛋白質試料は、ポリビニリデンジフルオライド（ＰＶＤＦ）膜（ミリポア社）に移した後、１次抗体として、抗ＥｒｂＢ２抗体［ａｎｔｉ−ｃ−Ｎｅｕ、Ａｂ−３、オンコジーン（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ）社製］、抗Ｅｒｋ−２抗体［ａｎｔｉ−Ｅｒｋ２、アップステート・バイオテクノロジー（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）社製］、抗Ｒａｆ−１抗体［ａｎｔｉ−Ｒａｆ−１（Ｃ−１２）、サンタ・クルーズ・バイオテクノロジー（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）社製］を加え、膜上の蛋白質と反応させた。その後、２次抗体として、それぞれの１次抗体と反応する西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）標識２次抗体［抗ウサギＩｇ抗体、または抗マウスＩｇ抗体、アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）社］を反応させた。検出はＥＣＬ試薬［ピアス（ＰＩＥＲＣＥ）社製］を用いて行い、Ｘ線フィルム上に得られたバンドを検分し、非ｈｓｐ９０クライアント蛋白であるＥｒｋ−２を対照に、ＥｒｂＢ２およびＲａｆ−１の消失が検出されはじめた濃度を最小有効濃度とした（第１図）。結果を第４表に示す。第４表によれば、被験化合物は、ヒト乳癌の増殖・悪性化に関与するＲａｆ−１およびＥｒｂＢ２に対する選択的な消失作用を有することから、ヒト乳癌の治療薬として有用であると考えられる。

試験例４ 表面マーカーの発現を指標にしたヒト慢性骨髄性白血病細胞Ｋ５６２株に対する分化誘導活性の測定
転座遺伝子産物であるＢｃｒ−Ａｂｌはヒト慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の原因遺伝子として知られているが、この蛋白自体がｈｓｐ９０のクライアント蛋白であり、Ｂｃｒ−Ａｂｌ発現ヒト慢性骨髄性白血病細胞Ｋ５６２株に対してｒａｄｉｃｉｃｏｌならびにその誘導体、あるいはｂｅｎｚｏｑｕｉｎｏｎ ａｎｓａｍｙｃｉｎ系化合物（ｇｅｌｄａｎａｍｙｃｉｎ，ｈｅｒｂｉｍｙｃｉｎ Ａ）等のｈｓｐ９０阻害剤を作用させるとＢｃｒ−Ａｂｌの機能を間接的に阻害する結果、抗細胞活性を示すとともに白血病細胞を赤芽球系細胞へと分化させる活性を示すことが報告されている［“ブラッド（Ｂｌｏｏｄ）”，２０００年，９６巻，ｐ．３３１２−３３１８参照］。そこで、ベンゼノイドアンサマイシン誘導体のｈｓｐ９０阻害作用と白血病治療薬としての有用性を明らかにすることを目的として、以下の方法でＫ５６２細胞に対する分化誘導活性測定を実施した。
Ｋ５６２細胞（１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）を６ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ（ファルコン社）に各ｗｅｌｌに５ｍＬずつ播種後、ＤＭＳＯにて各濃度に希釈した被験化合物を０．１％添加した。薬剤を添加した細胞を３７℃、５％ＣＯ_２条件下にて４０時間培養後、抗細胞活性測定用に０．２ｍＬの細胞液をサンプリングして１０ｍＬセルパック（東亜医用電気）に懸濁し、自動血球計数装置Ｆ−３００（東亜医用電気）にて細胞数を測定した。また、残りの細胞液は１５ｍＬ ｔｕｂｅ（ファルコン社）に移し１０００ｒｐｍで１０分間の遠心操作後、培地を吸引除去し、更に同様の操作でリン酸緩衝液（ＰＢＳ）にて細胞を洗浄した。洗浄後遠心操作にて集めた細胞を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳに縣濁し、赤芽球に特異的な発現が認められる細胞表面マーカー蛋白であるグリコフォリン Ａ［Ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ Ａ（ＧＰＡ）］に対する一次抗体｛マウス抗ＧＰＡ抗体［ｍｏｕｓｅ ａｎｔｉ ＧＰＡ ａｎｔｉｂｏｄｙ（ファーミンジェン社）］｝を最終濃度２．５μｇ／ｍＬになるように添加した。氷上で３０分間反応後、ＰＢＳにて再度細胞を洗浄後、再び０．１％ＢＳＡを含むＰＢＳに縣濁し、二次抗体としてウサギ抗マウスＩｇＧ−ＦＩＴＣ共役体［ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ ｍｏｕｓｅ ＩｇＧ−ＦＩＴＣ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ（ベクター社）］を最終濃度２μｇ／ｍＬになるように添加した。氷上で３０分間反応後、ＰＢＳで洗浄して得られた細胞を、２．５％グルタールアルデヒドを含むＰＢＳ溶液にて固定した。得られた細胞サンプルはＦＡＣＳｃａｎ（ベクトン ディキンソン社）により、赤芽球系分化度の指標としてＧＰＡ表面抗原の発現量（ＦＩＴＣの蛍光波長５１５−５４５ｎｍ）を１０，０００細胞について測定した。
第２図に化合物６（化合物１のアセチル体）を用いた実験の結果を示す。対照化合物の式（Ｂ）

で表されるＲａｄｉｃｉｃｏｌ誘導体［“バイオオーガニック・アンド・メディシナル・ケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）”，２００２年，１０巻，ｐ．３４４５−３４５４参照］と同様にＫ５６２細胞の増殖阻害を示すとともに、相関して赤芽球系マーカーの増加がみられ、ｈｓｐ９０阻害剤の活性の一つである分化誘導活性を有することが確認できた。第５表に示すように、評価を行った他のベンゼノイドアンサマイシン誘導体にも同様の活性を確認した。
第２図において、抗細胞活性は、培養４０時間後における被験化合物未処理細胞の細胞数を１００％とした場合の相対値で表した。分化誘導活性は、培養４０時間後における被験化合物未処理細胞を２次抗体のみで標識した細胞のＧＰＡ発現量（蛍光強度）をベースラインとして１００００細胞のうち蛍光強度が増加した細胞の比率として表した。

第１図 Ａは化合物１の細胞内Ｈｓｐ９０クライアント蛋白質Ｒａｆ−１およびＥｒｂＢ２の消失作用を表す図である。同様に、Ｂは化合物２、Ｃは化合物４、Ｄは化合物６について表す図である。
第２図 化合物６およびＲａｄｉｃｉｃｏｌ誘導体のＫ５６２細胞に対する抗細胞活性および分化誘導活性を示した図である。

符号の説明

▲：化合物６の抗細胞活性
△：化合物６の分化誘導活性
●：Ｒａｄｉｃｉｃｏｌ誘導体の抗細胞活性
○：Ｒａｄｉｃｉｃｏｌ誘導体の分化誘導活性

以下に、本発明の態様を実施例および参考例で説明する。

ストレプトマイセス・スピーシーズＥＨ２１株による化合物４の製造
第一種培地および第二種培地としては、グルコース１０ｇ／Ｌ、可溶性デンプン１０ｇ／Ｌ、肉エキス３ｇ／Ｌ、酵母抽出物５ｇ／Ｌ、トリプトン５ｇ／Ｌ、リン酸二水素カリウム１ｇ／Ｌの組成の培地（ｐＨ７．０）を用いた。グリセロール保存した種菌を、７０ｍＬ容試験管に入れた１０ｍＬの第一種培地に０．５ｍＬずつ合計８本に植菌し、２８℃で１９２時間振盪培養を行った。この第一種培養液を、３００ｍＬ容三角フラスコに入った５０ｍＬの第二種培地に２．５ｍＬずつ合計３１本に植菌し、２８℃で９６時間振盪培養した。得られた第二種培養液を、５Ｌ容ジャーファーメンターに入れた主発酵培地３Ｌに７５ｍＬずつ１２本（合計３６Ｌ）植菌し、２８℃で１４４時間通気撹拌培養（回転数２００ｒｐｍ）を行った。主発酵培地としては、グルコース１０ｇ／Ｌ、可溶性デンプン１０ｇ／Ｌ、さなぎ粉１０ｇ／Ｌ、ほうじ茶５ｇ／Ｌ、酵母抽出物２ｇ／Ｌ、ニトロフミン酸０．２５ｇ／Ｌ、ＭＯＰＳ２ｇ／Ｌ、硫酸亜鉛・７水塩１０ｍｇ／Ｌ、硫酸マンガン・５水塩１０ｍｇ／Ｌ、硫酸鉄（ＩＩ）・７水塩１０ｍｇ／Ｌ、塩化コバルト・６水塩１０ｍｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム・７水塩０．５ｇ／Ｌの組成の培地（ｐＨ６．４）を用いた。
得られた発酵培養液２９Ｌに濾過助剤（ラヂオライト６００、昭和化学工業社製）を１０％の割合で添加後、吸引濾過を行って、培養濾液と菌体とに分けた。分別した菌体にメタノール１６Ｌを加えて充分に撹拌抽出し、再度吸引濾過機により濾過し、得られたメタノール抽出液を水で３倍希釈して４８Ｌの菌体抽出液とした。培養濾液と菌体抽出液はそれぞれ別々にダイヤイオンＨＰ−２０を２Ｌ充填したカラムに通塔して活性成分を吸着させた。それぞれのカラムを３０％メタノール水溶液で洗浄後、５０％および７５％メタノール水溶液で活性成分を溶出させた。次にそれぞれの活性画分をダイヤイオンＨＰ−２０ｓｓを５００ｍＬ充填したカラムに通塔して活性成分を吸着させた後、それぞれのカラムを５０％メタノール水溶液で洗浄後、６０％および７０％メタノール水溶液で活性成分を溶出させた。培養濾液由来の活性画分は減圧下で有機溶媒を留去した後、残渣をメタノールに溶解し、そこに３５ｍＬのシリカゲルを加え、メタノールを留去することにより活性成分をシリカゲルに吸着させた。次いで、シリカゲル３００ｍＬを充填したカラムの上に活性成分を吸着させたシリカゲルを乗せ、メタノール／クロロホルム混液で展開したところ、１０％および２０％メタノール／クロロホルム画分にそれぞれ活性成分が溶出した。菌体抽出液由来の活性画分も同様に７５ｍＬのシリカゲルに吸着させた後、既に充填してある３００ｍＬのシリカゲルの上にのせ、メタノール／クロロホルム混液で展開したところ、１０％メタノール／クロロホルム画分に活性成分が溶出した。上清由来と菌体抽出液由来の活性画分を混合し、逆相シリカゲルＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤＳ−ＡＱ １２０−Ｓ５Ｏ ４００ｍＬ ＭＭ ｃｏｌｕｍｎ（流速２．５ｍＬ／ｍｉｎ、移動相５５％メタノール水溶液）にて精製をおこない、保持時間２６０〜３２５分に溶出する活性画分をさらに分取高速液体クロマトグラフィー（カラムＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ，φ２０×２５０ｍｍ、カラム温度３５℃、流速８ｍＬ／ｍｉｎ、移動相２５％アセトニトリル水溶液）で保持時間２５〜２８分の活性画分を分取した。さらに、分取薄層クロマトグラフィー［メタノール／クロロホルム混液（１：９）］にて精製を行って化合物４を７．２ｍｇ得た。
化合物４の物理化学的性質は、以下に示すとおりである。
なお、物理化学的性質は以下の機器により測定した。
ＦＡＢマススペクトルおよび高分解能ＦＡＢマススペクトル：日本電子ＪＭＳ−ＨＸ／ＨＸ１１０Ａ型質量分析装置
核磁気共鳴スペクトル：Ｂｒｕｋｅｒ ＡＭ−５００（５００ＭＨｚ）
化合物４の物理化学的データ
性状：白色粉末状物質
分子式：Ｃ_２７Ｈ_４０Ｎ_２Ｏ_７
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：５０５［Ｍ＋Ｈ］^＋，５０３［Ｍ−Ｈ］⁻
高分解能ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：
実測値 ５０３．２７５０
理論値 ５０３．２７４２（Ｃ_２７Ｈ_３９Ｎ_２Ｏ_７として）
^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（ＣＤ_３ＯＤ）
０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０２（１Ｈ，ｍ），１．３２（１Ｈ，ｍ），１．３４（３Ｈ，ｓ），１．４４（１Ｈ，ｍ），１．６４（１Ｈ，ｍ），１．９７（１Ｈ，ｍ），２．３０（２Ｈ，ｍ），２．３２（１Ｈ，ｍ），２．３５（１Ｈ，ｍ），２．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１２．９Ｈｚ），３．０８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，２．９Ｈｚ，１０．０Ｈｚ），３．２８（１Ｈ，ｍ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．４０（３Ｈ，ｓ），３．４６（１Ｈ，ｍ），４．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），５．２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），５．９６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，２．０Ｈｚ，１５．６Ｈｚ），６．３４（１Ｈ，ｍ），６．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２．２Ｈｚ），６．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，２．２Ｈｚ），６．９２（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，６．４Ｈｚ，１５．９Ｈｚ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：δ（ＣＤ_３ＯＤ）
１１．７，１８．１，１９．３，２７．３，２９．４，３２．１，３４．９，３６．５，４４．１，５６．７，６０．２，７４．３，８０．２，８２．７，８４．６，１１０．３，１１６．７，１２０．９，１２２．６，１３１．２，１３５．８，１４３．６，１４６．５，１５９．０，１６９．５ｐｐｍ．
溶解性：メタノールおよびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に可溶
薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値０．１２
薄層：シリカゲルＴＬＣ（Ｍｅｒｃｋ社製）
展開溶媒：メタノール／クロロホルム混液（１：９）
参考例１ 化合物１、２、３の製造
実施例１によって得られた発酵培養液２９Ｌに濾過助剤（ラヂオライト６００、昭和化学工業社製）を１０％の割合で添加後、吸引濾過を行って、培養濾液と菌体とに分けた。分別した菌体にメタノール１６Ｌを加えて充分に撹拌抽出し、再度吸引濾過機により濾過し、得られたメタノール抽出液を水で３倍希釈して４８Ｌの菌体抽出液とした。培養濾液と菌体抽出液はそれぞれ別々にダイヤイオンＨＰ−２０を２Ｌ充填したカラムに通塔して活性成分を吸着させた。それぞれのカラムを３０％メタノール水溶液で洗浄後、５０％および７５％メタノール水溶液で活性成分を溶出させた。次にそれぞれの活性画分をダイヤイオンＨＰ−２０ｓｓを５００ｍＬ充填したカラムに通塔して活性成分を吸着させた後、それぞれのカラムを５０％メタノール水溶液で洗浄後、６０％および７０％メタノール水溶液で活性成分を溶出させた。培養濾液由来の活性画分は減圧下で有機溶媒を留去した後、残渣をメタノールに溶解し、そこに３５ｍＬのシリカゲルを加え、メタノールを留去することにより活性成分をシリカゲルに吸着させた。次いで、シリカゲル３００ｍＬを充填したカラムの上に活性成分を吸着させたシリカゲルを乗せ、メタノール／クロロホルム混液で展開したところ、１０％および２０％メタノール／クロロホルム画分にそれぞれ活性成分が溶出した。菌体抽出液由来の活性画分も同様に７５ｍＬのシリカゲルに吸着させた後、既に充填してある３００ｍＬのシリカゲルの上にのせ、メタノール／クロロホルム混液で展開したところ、１０％メタノール／クロロホルム画分に活性成分が溶出した。上清由来と菌体抽出液由来の活性画分を混合し、逆相シリカゲルＹＭＣ−ＧＥＬ ＯＤＳ−ＡＱ １２０−Ｓ５０ ４００ｍＬ ＭＭ ｃｏｌｕｍｎ（流速２．５ｍＬ／ｍｉｎ、移動相５５％メタノール水溶液）にて、保持時間３８５〜４８０分、３２５〜３８５分および２６０〜３２５分の各活性画分（５５％メタノール）を得た。保持時間３８５〜４８０分の活性画分（５５％メタノール）の溶媒を留去後、ジクロロメタンで粉末化を行って化合物１を９０．４ｍｇ得た。また、保持時間３２５〜３８５分の活性画分（５５％メタノール）を、さらに分取高速液体クロマトグラフィー（カラムＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳφ２０×２５０ｍｍ、カラム温度３５℃、流速８ｍＬ／ｍｉｎ、移動相３０％アセトニトリル水溶液）で保持時間２０〜２１分の活性画分を分取し、化合物２を２３．０ｍｇ得た。また、保持時間２６０〜３２５分の活性画分（５５％メタノール）を、さらに分取高速液体クロマトグラフィー（カラムＩｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳφ２０×２５０ｍｍ、カラム温度３５℃、流速８ｍＬ／ｍｉｎ、移動相２５％アセトニトリル水溶液）で保持時間２８〜３０分の活性画分を分取し、化合物３を２５．４ｍｇ得た。
化合物１
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：５４７（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，３２３Ｋ）
０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．９１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），１．２２（１Ｈ，ｍ），１．３３−１．４４（２Ｈ，ｍ），１．４７（３Ｈ，ｓ），１．５４（１Ｈ，ｍ），１．６９（３Ｈ，ｓ），１．７６（１Ｈ，ｍ），２．１３（１Ｈ，ｍ），２．２１（１Ｈ，ｍ），２．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１３．８Ｈｚ），２．４１（１Ｈ，ｍ），２．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．３ｚ，１３．４Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，３．９Ｈｚ，９．１Ｈｚ），３．２３（３Ｈ，ｓ），３．２８（１Ｈ，ｍ），３．３２（１Ｈ，ｍ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．６５（３Ｈ，ｓ），４．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），４．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），５．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），５．９０（１Ｈ，ｂｒ，ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），６．３３（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．３４（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．９１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）９．０４（１Ｈ，ｂｒ ｓ）６．９１（１Ｈ，ｓ）ｐｐｍ．
^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル：δ（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６，３２３Ｋ）
１１．６，１２．８，１５．７，２０．０，２３．６，２９．７，３１．０，３３．５，３４．６，３５．７，５６．３，５８．０，５９．６，７３．９，７９．６，８０．４，８１．１，１０７．１，１１４．５，１２９．６，１３２．２，１３３．３，１３３．５，１３４．４，１４２．６，１４９．６，１５６．０，１７０．０ｐｐｍ．
化合物２
ＥＳＩマススペクトル（ｍ／ｚ）：５１７（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（３００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）
０．７１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０６−１．３０（３Ｈ，ｍ），１．４０（３Ｈ，ｓ），１．５８（１Ｈ，ｍ），１．７７（３Ｈ，ｓ），１．９２（１Ｈ，ｍ），２．０８（１Ｈ，ｍ），２．２３（１Ｈ，ｍ），２．３１−２．３７（２Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１３．２Ｈｚ），３．０４（１Ｈ，ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．３９（３Ｈ，ｓ），３．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，９．２Ｈｚ），５．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．９Ｈｚ），５．７０（１Ｈ，ｍ），６．２３（１Ｈ，ｓ），６．３２（１Ｈ，ｍ），６．５１（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）ｐｐｍ．
化合物３
ＥＳＩマススペクトル（ｍ／ｚ）：５３３（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）
０．７５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０４−１．２５（３Ｈ，ｍ），１．３８（３Ｈ，ｓ），１．６０（１Ｈ，ｍ），１．６６（３Ｈ，ｓ），１．７９（１Ｈ，ｍ），１．９９−２．１９（２Ｈ，ｍ），２．２４−２．３８（２Ｈ，ｍ），２．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１３．４Ｈｚ），２．９７（１Ｈ，ｍ），３．２１（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），４．２６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），５．７０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．１５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．４５（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），６．６７（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），７．８６（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），９．０８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），９．２１２（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）ｐｐｍ．

化合物５
化合物１、１．３ｍｇ（０．００２４ｍｍｏｌ）をメタノール／アセトニトリル混液（１：９）１ｍＬに溶解し、１００μＬ（０．２ｍｍｏｌ）２ｍｏｌ／Ｌトリメチルシリルジアゾメタン・ヘキサン溶液を添加し室温で攪拌した。２時間１５分後に溶媒を留去した。残渣を分取薄層クロマトグラフィー［メタノール／クロロホルム混液（１：９）］で精製し、化合物５を０．３ｍｇ（収率２３％）得た。
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：５６１（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．０５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．８５（３Ｈ，ｓ），２．００（１Ｈ，ｍ），２．２５（１Ｈ，ｍ），２．３５−２．７０（４Ｈ，ｍ），３．１２（１Ｈ，ｍ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．３５（１Ｈ，ｍ），３．４００（３Ｈ，ｓ），３．６４（１Ｈ，ｍ），３．７４（３Ｈ，ｓ），３．８６（３Ｈ，ｓ），４．７６（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），５．１８（１Ｈ，ｍ），５．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），６．０３（１Ｈ，ｍ），６．４０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．９０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）ｐｐｍ．

化合物６、化合物８
化合物１ １．２ｍｇ（０．００２２ｍｍｏｌ）をピリジン５００μＬに溶解し、１０μＬ（０．１１ｍｍｏｌ）の無水酢酸を添加し室温で攪拌した。２時間後に水を加え酢酸エチルで抽出を行なった。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去後分取薄層クロマトグラフィー［メタノール／クロロホルム混液（７：９３）］で精製し、化合物６を０．５ｍｇ（収率３８％）、化合物８を０．５ｍｇ（収率３６％）得た。
化合物６
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：５８９（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
０．８５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．０７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．８５（３Ｈ，ｓ），２．０５（１Ｈ，ｍ），２．３１７（３Ｈ，ｓ），２．２０−２．６０（５Ｈ，ｍ），３．１４（１Ｈ，ｍ），３．３４（３Ｈ，ｓ），３．４０（３Ｈ，ｓ），３．６４（１Ｈ，ｍ），３．７２（３Ｈ，ｓ），４．８０（２Ｈ，ｂｒ ｓ），５．２０（１Ｈ，ｍ），５．３７（１Ｈ，ｍ），６．０２（１Ｈ，ｍ），６．７２３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），７．３５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．０５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）ｐｐｍ．
化合物８
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：６３１（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
１．００（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．８７８（３Ｈ，ｓ），２．０９８（３Ｈ，ｓ），２．３１２（３Ｈ，ｓ），２．７２−２．８０（２Ｈ，ｍ），３．２４（１Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ），３．４２（３Ｈ，ｓ），３．７３（３Ｈ，ｓ），４．７２（２Ｈ，ｂｒ．ｓ），４．９１（１Ｈ，ｍ），５．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）５．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），６．０８（１Ｈ，ｍ），６．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．３０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）ｐｐｍ．

化合物７
化合物８をメタノール５００μＬに溶解し、室温で５００μＬの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し攪拌した。２０分後にクロロホルム−１ｍｏｌ／Ｌ塩酸混液で抽出を行なった。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去後分取薄層クロマトグラフィー［メタノール／クロロホルム混液（１：９）］で精製し、化合物７を１．２ｍｇ得た。
ＦＡＢマススペクトル（ｍ／ｚ）：５８９（Ｍ−１）^−
１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：δ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）
０．９５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．１２−１．４９（４Ｈ，ｍ），１．５３（３Ｈ，ｓ），１．８２（１Ｈ，ｍ），１．８７（３Ｈ，ｓ），２．１０（３Ｈ，ｓ），２．２３−２．４１（３Ｈ，ｍ），２．６５−２．７０（２Ｈ，ｍ），３．２５（１Ｈ，ｍ），３．３６（３Ｈ，ｓ），３．４２（３Ｈ，ｓ），３．７６（３Ｈ，ｓ），４．７０（２Ｈ，ｂｒ ｓ），４．９３（１Ｈ，ｍ），５．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）５．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），５．７０（１Ｈ，ｓ），６．０３（１Ｈ，ｍ），６．３３（１Ｈ，ｍ），７．４９（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），８．０８（１Ｈ，ｂｒ．ｓ）ｐｐｍ．

常法により、次の組成からなる錠剤を調製する。４０ｇの化合物４と、乳糖２８６．８ｇおよびトウモロコシデンプン６０ｇを混合し、これにヒドロキシプロピルセルロースの１０％水溶液１２０ｇを加える。この混合物を常法により練合し、造粒して乾燥させた後、整粒し打錠用顆粒とする。これにステアリン酸マグネシウム１．２ｇを加えて混合し、径８ｍｍの杵をもった打錠機（クリーンプレスコレクト１２菊水製作所製）で打錠を行って、錠剤（１錠あたり活性成分２０ｍｇを含有する）を得る。
処方 化合物４ ２０ ｍｇ
乳糖 １４３．４ｍｇ
トウモロコシデンプン ３０ ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ６ ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．６ｍｇ
２００ｍｇ

常法により、次の組成からなる錠剤を調製する。４０ｇの化合物６と、乳糖２８６．８ｇおよびトウモロコシデンプン６０ｇを混合し、これにヒドロキシプロピルセルロースの１０％水溶液１２０ｇを加える。この混合物を常法により練合し、造粒して乾燥させた後、整粒し打錠用顆粒とする。これにステアリン酸マグネシウム１．２ｇを加えて混合し、径８ｍｍの杵をもった打錠機（クリーンプレスコレクト１２菊水製作所製）で打錠を行って、錠剤（１錠あたり活性成分２０ｍｇを含有する）を得る。
処方 化合物６ ２０ ｍｇ
乳糖 １４３．４ｍｇ
トウモロコシデンプン ３０ ｍｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ６ ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ０．６ｍｇ
２００ｍｇ

常法により、次の組成からなる注射剤を調製する。１ｇの化合物７と、塩化ナトリウム９ｇを常法により注射用蒸留水で１０００ｍＬに溶解する。得られた溶液を０．２μｍのディスポーザブル型メンブランフィルターを用いて無菌濾過後、ガラスバイアルに２ｍＬずつ無菌的に充填して、注射剤（１バイアルあたり活性成分２ｍｇを含有する）を得る。
処方 化合物７ ２ ｍｇ
塩化ナトリウム １８ ｍｇ
注射用蒸留水 適量
２．００ｍＬ

本発明によれば、抗腫瘍剤等の医薬品として有用な、ベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤等が提供される。

Claims (29)

1. 式（Ｉ）
   

   

   （式中、Ｒ^２は水素またはメチルを表し、Ｒ^１１およびＲ^１８は同一または異なって、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表し、Ｒ^１７は水素、ヒドロキシ、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシを表す）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するヒートショックプロテイン９０（ｈｓｐ９０）ファミリー蛋白質阻害剤。
2. Ｒ^１７が水素である請求の範囲１記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
3. Ｒ^２が水素である請求の範囲１または２記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
4. Ｒ^２がメチルであり、Ｒ^１１が置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである請求の範囲１または２記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
5. Ｒ^１１がヒドロキシである請求の範囲１〜３のいずれかに記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
6. Ｒ^２がメチルであり、Ｒ^１１がヒドロキシであり、Ｒ^１７が水素またはヒドロキシであり、Ｒ^１８がヒドロキシである請求の範囲１記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
7. Ｒ^１８が置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである請求の範囲１〜５のいずれかに記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
8. Ｒ^１８が置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである請求の範囲１〜５のいずれかに記載のｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
9. 式（Ｉａ）
   

   

   （式中、Ｒ^２ａ、Ｒ^１１ａ、Ｒ^１７ａおよびＲ^１８ａは、それぞれＲ^２、Ｒ^１１、Ｒ^１７およびＲ^１８と同義であるが、Ｒ^２ａがメチルであり、かつＲ^１１ａおよびＲ^１８ａの両方がヒドロキシであるとき、Ｒ^１７ａは水素、ヒドロキシおよびメトキシのいずれでもない）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
10. Ｒ^２ａが水素である請求の範囲９記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
11. Ｒ^１７ａが水素である請求の範囲９または１０記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
12. Ｒ^１１ａおよびＲ^１８ａの一方または両方が、置換もしくは非置換の低級アルコキシまたは置換もしくは非置換の低級アルカノイルオキシである請求の範囲９〜１１のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
13. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
14. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する抗腫瘍剤。
15. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するｈｓｐ９０ファミリー蛋白質またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質が関与する疾患の治療剤。
16. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有するｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤。
17. 請求の範囲１に記載の式（Ｉ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とするｈｓｐ９０ファミリー蛋白質を阻害する方法。
18. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とする悪性腫瘍の治療方法。
19. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とするｈｓｐ９０ファミリー蛋白質またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質が関与する疾患の治療方法。
20. 請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の有効量を投与することを特徴とするｈｓｐ９０ファミリー蛋白質を阻害する方法。
21. ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤の製造のための請求の範囲１に記載の式（Ｉ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
22. 抗腫瘍剤の製造のための請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
23. ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質またはｈｓｐ９０ファミリー蛋白質が結合する蛋白質が関与する疾患の治療剤の製造のための請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
24. ｈｓｐ９０ファミリー蛋白質阻害剤の製造のための請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体またはその薬理学的に許容される塩の使用。
25. 式（Ｉｂ）
    

    

    で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体を生産する、ストレプトマイセス属に属する微生物。
26. ストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４）株。
27. 請求の範囲２５記載の微生物を培養し、得られた培養液から産生された化合物を単離する工程を包含する、請求の範囲２５に記載の式（Ｉｂ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体の製造方法。
28. ストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４）株を培養し、得られた培養液から産生された化合物を単離する工程を包含する、請求の範囲９〜１２のいずれかに記載のベンゼノイドアンサマイシン誘導体の製造方法。
29. ストレプトマイセス・エスピーＥＨ２１（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．ＥＨ２１、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−０８５７４）株を培養し、得られた培養液から産生された化合物を単離する工程を包含する、請求の範囲２５に記載の式（Ｉｂ）で表されるベンゼノイドアンサマイシン誘導体の製造方法。

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