JPH07173123A - コレステロール低下剤 - Google Patents
コレステロール低下剤Info
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- JPH07173123A JPH07173123A JP4206802A JP20680292A JPH07173123A JP H07173123 A JPH07173123 A JP H07173123A JP 4206802 A JP4206802 A JP 4206802A JP 20680292 A JP20680292 A JP 20680292A JP H07173123 A JPH07173123 A JP H07173123A
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- compound
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- toxic
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- therapeutically effective
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C235/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms
- C07C235/70—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
- C07C235/72—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C235/76—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by oxygen atoms having carbon atoms of carboxamide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of an unsaturated carbon skeleton
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
- C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
- C07D209/10—Indoles; Hydrogenated indoles with substituted hydrocarbon radicals attached to carbon atoms of the hetero ring
- C07D209/18—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D209/20—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals substituted additionally by nitrogen atoms, e.g. tryptophane
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】 トリコデルマ・ビリデが生産する一般式Ｉ
〔Ｒは
等で、Ｚ１，Ｚ２及びＺ３は独立してａ）Ｈ、ｂ）Ｃ
１−５アルキル又は、ｃ）ｉ）フェニル又はii）メチ
ル、メトキシ、ハロゲン又はヒドロキシで置換されたフ
ェニルで置換されたＣ１−５アルキルである〕の化合物
及びその製造法。 【効果】 スクアレンシンターゼ阻害剤であってコレス
テロール低下剤として、さらに抗真菌剤として有用であ
り、またファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ及
び癌遺伝子タンパク質Ｒａｓのファルネシル化の阻害剤
であって癌の治療に有効である。
１−５アルキル又は、ｃ）ｉ）フェニル又はii）メチ
ル、メトキシ、ハロゲン又はヒドロキシで置換されたフ
ェニルで置換されたＣ１−５アルキルである〕の化合物
及びその製造法。 【効果】 スクアレンシンターゼ阻害剤であってコレス
テロール低下剤として、さらに抗真菌剤として有用であ
り、またファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ及
び癌遺伝子タンパク質Ｒａｓのファルネシル化の阻害剤
であって癌の治療に有効である。
Description
【０００１】高コレステロール血症はアテローム性動脈
硬化症のような心臓血管系疾患の主要な病因要素の１つ
であることが知られている。胆汁酸吸収剤はこの症状を
治療するために用いられており、やや有効のようである
が、大量即ち一時に数グラムを消費せねばならず美味と
はとても言えない。
硬化症のような心臓血管系疾患の主要な病因要素の１つ
であることが知られている。胆汁酸吸収剤はこの症状を
治療するために用いられており、やや有効のようである
が、大量即ち一時に数グラムを消費せねばならず美味と
はとても言えない。
【０００２】現在市販されているＭＥＶＡＣＯＲ（商品
名）（ロバスタチン）及びＺＯＣＯＲ（商品名）（シン
バスタチン）は酵素ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素を阻害する
ことによりコレステロール生合成を制限することによっ
て機能する強力な抗高コレステロール血症剤群の薬剤で
ある。スクアレンシンターゼ（スクアレンシンテターゼ
とも呼ばれる）はデノボのコレステロール生合成経路の
最初の関連段階に関与する酵素である。この酵素は２分
子のファルネシルピロリン酸の還元的二量化を触媒して
スクアレンを生成する。コレステロールに向けたこの前
駆段階の阻害がユビキノン、ドリコール及びイソペンテ
ニルｔ−ＲＮＡへの生合成経路を妨害してはならない。
名）（ロバスタチン）及びＺＯＣＯＲ（商品名）（シン
バスタチン）は酵素ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素を阻害する
ことによりコレステロール生合成を制限することによっ
て機能する強力な抗高コレステロール血症剤群の薬剤で
ある。スクアレンシンターゼ（スクアレンシンテターゼ
とも呼ばれる）はデノボのコレステロール生合成経路の
最初の関連段階に関与する酵素である。この酵素は２分
子のファルネシルピロリン酸の還元的二量化を触媒して
スクアレンを生成する。コレステロールに向けたこの前
駆段階の阻害がユビキノン、ドリコール及びイソペンテ
ニルｔ−ＲＮＡへの生合成経路を妨害してはならない。
【０００３】スクアレンシンターゼを阻害しようとする
これまでの試みはP.Ortiz de Montellano 等、J.Med.Ch
em. ２０、２４３（１９７７）、E.J.Corey,R.Volante,
J.Am.Chem.Soc.９８、１２９１（１９７６）及びS.Bill
erの米国特許第５，０２５，００３号に記載されるピロ
リン酸又はピロリン酸類縁体含有化合物を使用するもの
であった。S.Billerの米国特許第４，８７１，７２１号
はスクアレンシンテターゼの阻害剤としてイソプレノイ
ド（ホスフィニルメチル）ホスホネートを記載してい
る。米国特許第５，０９６，９２３号、同第５，０２
６，５５４号及び同第５，１０２，９０７号及び１９９
０年３月２１日出願の米国特許出願第４９６，７３４号
及び１９９１年５月１０日出願の同第６９８，７６６号
はスクアレンシンターゼ阻害剤として有効なリンを含ま
ない置換２，８−ジオキサビシクロ〔３．２．１〕オク
タン誘導体を、１９９１年５月１７日出願の米国特許出
願第７０１，９２２号はスクアレンシンテターゼ阻害剤
として有効な置換キスクリジニルオキサジアゾールを記
載している。更に、J.Antibiotics ４５：６３９−６５
８（１９９２）はスクアレスタチンについて記載してい
る。
これまでの試みはP.Ortiz de Montellano 等、J.Med.Ch
em. ２０、２４３（１９７７）、E.J.Corey,R.Volante,
J.Am.Chem.Soc.９８、１２９１（１９７６）及びS.Bill
erの米国特許第５，０２５，００３号に記載されるピロ
リン酸又はピロリン酸類縁体含有化合物を使用するもの
であった。S.Billerの米国特許第４，８７１，７２１号
はスクアレンシンテターゼの阻害剤としてイソプレノイ
ド（ホスフィニルメチル）ホスホネートを記載してい
る。米国特許第５，０９６，９２３号、同第５，０２
６，５５４号及び同第５，１０２，９０７号及び１９９
０年３月２１日出願の米国特許出願第４９６，７３４号
及び１９９１年５月１０日出願の同第６９８，７６６号
はスクアレンシンターゼ阻害剤として有効なリンを含ま
ない置換２，８−ジオキサビシクロ〔３．２．１〕オク
タン誘導体を、１９９１年５月１７日出願の米国特許出
願第７０１，９２２号はスクアレンシンテターゼ阻害剤
として有効な置換キスクリジニルオキサジアゾールを記
載している。更に、J.Antibiotics ４５：６３９−６５
８（１９９２）はスクアレスタチンについて記載してい
る。
【０００４】最近ではリンを含まないスクアレンシンタ
ーゼの阻害剤である天然産物のあるもの及びそれらのエ
ステルが真菌増殖を阻止するのに有効であることが示さ
れている。この有用性は米国特許第５，０２６，５５４
号に記載される。本発明は真菌増殖を阻止するためのス
クアレンシンターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）の化合物
の用途に関する。
ーゼの阻害剤である天然産物のあるもの及びそれらのエ
ステルが真菌増殖を阻止するのに有効であることが示さ
れている。この有用性は米国特許第５，０２６，５５４
号に記載される。本発明は真菌増殖を阻止するためのス
クアレンシンターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）の化合物
の用途に関する。
【０００５】本発明はまた癌遺伝子タンパク質Ｒａｓの
ファルネシルを阻害するためのファルネシル−タンパク
質トランスフェラーゼ阻害剤としての構造式（Ｉ）の化
合物の用途、及び癌治療に関する。Ｒａｓ遺伝子は大腸
癌、外分泌膵癌及び骨髄性白血病を含む多くのヒト癌に
おいて活性化していることが見出されている。Ｒａｓ作
用の生物学的及び生化学的研究によりＲａｓが細胞膜に
局在し、細胞をトランスフォームするためにはＧＴＰと
結合しなければならないのでＲａｓがＧ調節タンパク質
のように作用することが示されている(Gibbs.J. 等、Mi
crobiol.Rev.５３：１７１−２８６（１９８９）。癌細
胞におけるＲａｓ形態は変異しておりそのタンパク質は
正常細胞におけるＲａｓと区別される少なくとも３つの
翻訳後修飾がＲａｓ膜の局在化と関係しており、この３
つの修飾は全てＲａｓのＣ末端で起こる。ＲａｓＣ末端
は”ＣＡＡＸ”即ち、”Ｃｙｓ−Ａａａ1 −Ａａａ2 −
Ｘａａ”ボックス（Ａａａは脂肪族アミノ酸であり、Ｘ
ａａはどのアミノ酸でもよい）と呼ばれる配列モチーフ
を含む（Willumsen 等、Nature３１０：５８３−５８６
（１９８４））。このモチーフを有する他のタンパク質
としてはＲｈｏ、真菌配偶因子、核ラミン及びトランス
デューシンのγサブユニットのようなＲａｓ関連ＧＴＰ
結合タンパク質がある。
ファルネシルを阻害するためのファルネシル−タンパク
質トランスフェラーゼ阻害剤としての構造式（Ｉ）の化
合物の用途、及び癌治療に関する。Ｒａｓ遺伝子は大腸
癌、外分泌膵癌及び骨髄性白血病を含む多くのヒト癌に
おいて活性化していることが見出されている。Ｒａｓ作
用の生物学的及び生化学的研究によりＲａｓが細胞膜に
局在し、細胞をトランスフォームするためにはＧＴＰと
結合しなければならないのでＲａｓがＧ調節タンパク質
のように作用することが示されている(Gibbs.J. 等、Mi
crobiol.Rev.５３：１７１−２８６（１９８９）。癌細
胞におけるＲａｓ形態は変異しておりそのタンパク質は
正常細胞におけるＲａｓと区別される少なくとも３つの
翻訳後修飾がＲａｓ膜の局在化と関係しており、この３
つの修飾は全てＲａｓのＣ末端で起こる。ＲａｓＣ末端
は”ＣＡＡＸ”即ち、”Ｃｙｓ−Ａａａ1 −Ａａａ2 −
Ｘａａ”ボックス（Ａａａは脂肪族アミノ酸であり、Ｘ
ａａはどのアミノ酸でもよい）と呼ばれる配列モチーフ
を含む（Willumsen 等、Nature３１０：５８３−５８６
（１９８４））。このモチーフを有する他のタンパク質
としてはＲｈｏ、真菌配偶因子、核ラミン及びトランス
デューシンのγサブユニットのようなＲａｓ関連ＧＴＰ
結合タンパク質がある。
【０００６】イソプレノイドファルネシルピロリン酸
（ＦＰＰ）によるＲａｓのファルネシル化は生体内では
Ｃｙｓ上で起りチオエーテル結合を生成する（Hancock
等、Cell、５７：１１６７（１９８９）；Casey 等、Pr
oc.Natl.Acad.Sci. ＵＳＡ８６：８３２３（１９８
９））。更にＨａ−Ｒａｓ及びＮ−ＲａｓはＣ末端ファ
ルネシル受容体近傍のＣｙｓ残基でチオエステルの生成
を経てパルミトイル化される（Gutierrez 等、EMBO J.
８：１０９３−１０９８（１９８９）；Hancock 等、Ce
ll５７：１１６７−１１７７（１９８９））。Ki−Ｒａ
ｓはパルミテート受容体のＣｙｓがない。ＲａｓＣ末端
基の最後の３アミノ酸はタンパク質分解的に除去され、
メチルエステル化が新しいＣ末端で生じる（Hancock
等、前出文献）。真菌配偶因子及び哺乳動物核ラミンは
同一の修飾段階を通る。(Anderegg 等、J.Biol.Chem.２
６３：１８２３６（１９８８）；Farnsworth等、J.Bio
l.Chem.２６４：２０４２２（１９８９））．
（ＦＰＰ）によるＲａｓのファルネシル化は生体内では
Ｃｙｓ上で起りチオエーテル結合を生成する（Hancock
等、Cell、５７：１１６７（１９８９）；Casey 等、Pr
oc.Natl.Acad.Sci. ＵＳＡ８６：８３２３（１９８
９））。更にＨａ−Ｒａｓ及びＮ−ＲａｓはＣ末端ファ
ルネシル受容体近傍のＣｙｓ残基でチオエステルの生成
を経てパルミトイル化される（Gutierrez 等、EMBO J.
８：１０９３−１０９８（１９８９）；Hancock 等、Ce
ll５７：１１６７−１１７７（１９８９））。Ki−Ｒａ
ｓはパルミテート受容体のＣｙｓがない。ＲａｓＣ末端
基の最後の３アミノ酸はタンパク質分解的に除去され、
メチルエステル化が新しいＣ末端で生じる（Hancock
等、前出文献）。真菌配偶因子及び哺乳動物核ラミンは
同一の修飾段階を通る。(Anderegg 等、J.Biol.Chem.２
６３：１８２３６（１９８８）；Farnsworth等、J.Bio
l.Chem.２６４：２０４２２（１９８９））．
【０００７】Ｒａｓファルネシル化の生体内阻害はロバ
スタチン(Merck & Co. Rahway.NJ)及びコンパクチン(Ha
ncock等、前出文献：Casey 等前出文献；Schafer 等、S
cience ２４５：３７９（１９８９））を用いて示され
ている。これらの薬剤は律速酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡ
還元酵素を阻害するが、この酵素はポリイソプレノイ
ド、及びファルネシルピロリン酸前駆体を生成する酵素
である。前駆体としてファルネシルピロリン酸を用いる
ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼがＲａｓフ
ァルネシル化に関与していることが示されている。Reis
s 等、Cell、６２：８１−８８（１９９０）；Schaber
等、J.Biol.Chem.２６５：１４７０１−１４７０４（１
９９０）；Schafer 等、Science 、２４９：１１３３−
１１３９（１９９０）；Manne 等、Proc.Natl.Acad.Sc
i. ＵＳＡ，８７：７５４１−７５４５（１９９０）。
スタチン(Merck & Co. Rahway.NJ)及びコンパクチン(Ha
ncock等、前出文献：Casey 等前出文献；Schafer 等、S
cience ２４５：３７９（１９８９））を用いて示され
ている。これらの薬剤は律速酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡ
還元酵素を阻害するが、この酵素はポリイソプレノイ
ド、及びファルネシルピロリン酸前駆体を生成する酵素
である。前駆体としてファルネシルピロリン酸を用いる
ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼがＲａｓフ
ァルネシル化に関与していることが示されている。Reis
s 等、Cell、６２：８１−８８（１９９０）；Schaber
等、J.Biol.Chem.２６５：１４７０１−１４７０４（１
９９０）；Schafer 等、Science 、２４９：１１３３−
１１３９（１９９０）；Manne 等、Proc.Natl.Acad.Sc
i. ＵＳＡ，８７：７５４１−７５４５（１９９０）。
【０００８】ファルネシル−タンパク質トランスフェラ
ーゼを阻害してそれによるＲａｓタンパク質のファルネ
シル化を阻害するとＲａｓが正常細胞を癌細胞にトラン
スフォームできなくなる。驚くことに本発明の化合物は
Ｒａｓファルネシル化を阻害して可溶性Ｒａｓを生成さ
せ、下記で示されるようにＲａｓ機能の有力な負の阻害
剤として作用することができる。癌細胞中では可溶性Ｒ
ａｓは有力な負の阻害剤になることができるが、正常細
胞中の可溶性Ｒａｓは阻害剤とはならない。細胞質に局
在化し（Ｃｙｓ−Ａａａ1 −Ａａａ2 −Ｘａａボックス
膜ドメインは存在しない）活性化された（ＧＴＰａｓｅ
活性が欠損しているため、ＧＴＰに結合したままであ
る）Ｒａｓの形態は膜結合Ｒａｓ機能に対する有力な負
のＲａｓ阻害剤として作用する（Gibbs 等、Proc.Natl.
Acad.Sci. ＵＳＡ８６：６６３０−６６３４（１９８
９））。正常なＧＴＰａｓｅ活性を有するＲａｓの細胞
質局在化形態は阻害剤として作用しない。Gibbs 等（前
出文献）はアフリカツメガエル卵母細胞及び哺乳動物細
胞におけるこの効果を示している。
ーゼを阻害してそれによるＲａｓタンパク質のファルネ
シル化を阻害するとＲａｓが正常細胞を癌細胞にトラン
スフォームできなくなる。驚くことに本発明の化合物は
Ｒａｓファルネシル化を阻害して可溶性Ｒａｓを生成さ
せ、下記で示されるようにＲａｓ機能の有力な負の阻害
剤として作用することができる。癌細胞中では可溶性Ｒ
ａｓは有力な負の阻害剤になることができるが、正常細
胞中の可溶性Ｒａｓは阻害剤とはならない。細胞質に局
在化し（Ｃｙｓ−Ａａａ1 −Ａａａ2 −Ｘａａボックス
膜ドメインは存在しない）活性化された（ＧＴＰａｓｅ
活性が欠損しているため、ＧＴＰに結合したままであ
る）Ｒａｓの形態は膜結合Ｒａｓ機能に対する有力な負
のＲａｓ阻害剤として作用する（Gibbs 等、Proc.Natl.
Acad.Sci. ＵＳＡ８６：６６３０−６６３４（１９８
９））。正常なＧＴＰａｓｅ活性を有するＲａｓの細胞
質局在化形態は阻害剤として作用しない。Gibbs 等（前
出文献）はアフリカツメガエル卵母細胞及び哺乳動物細
胞におけるこの効果を示している。
【０００９】Ｒａｓファルネシル化を遮断するために本
発明の化合物を投与すると膜中のＲａｓ量を減少させる
ばかりでなくＲａｓが細胞質中に蓄積してくる。活性化
Ｒａｓを有する腫瘍細胞では、細胞質プールは膜結合Ｒ
ａｓ機能に対するもう１つの拮抗剤として作用する。正
常なＲａｓを有する正常な細胞ではＲａｓの細胞質プー
ルは拮抗薬として作用しない。ファルネシル化を完全に
阻害しないときはファルネシル化されたタンパク質は機
能し続けることができる。ファルネシル−タンパク質ト
ランスフェラーゼ活性は化合物用量を調節することによ
って低下又は完全に阻害される。化合物用量を調節する
ことによってファルネシルタンパク質トランスフェラー
ゼ酵素活性を低下させることはこの酵素を利用する他の
代謝過程を妨害するような望ましくない副作用の可能性
を避けるのに有効である。
発明の化合物を投与すると膜中のＲａｓ量を減少させる
ばかりでなくＲａｓが細胞質中に蓄積してくる。活性化
Ｒａｓを有する腫瘍細胞では、細胞質プールは膜結合Ｒ
ａｓ機能に対するもう１つの拮抗剤として作用する。正
常なＲａｓを有する正常な細胞ではＲａｓの細胞質プー
ルは拮抗薬として作用しない。ファルネシル化を完全に
阻害しないときはファルネシル化されたタンパク質は機
能し続けることができる。ファルネシル−タンパク質ト
ランスフェラーゼ活性は化合物用量を調節することによ
って低下又は完全に阻害される。化合物用量を調節する
ことによってファルネシルタンパク質トランスフェラー
ゼ酵素活性を低下させることはこの酵素を利用する他の
代謝過程を妨害するような望ましくない副作用の可能性
を避けるのに有効である。
【００１０】これらの化合物はファルネシル−タンパク
質トランスフェラーゼの阻害剤である。ファルネシル−
タンパク質トランスフェラーゼはＲａｓＣＡＡＸボック
スのＣｙｓチオール基をファルネシル基と共有結合的に
修飾するのにファルネシルピロリン酸を利用する。ＨＭ
Ｇ−ＣｏＡ還元酵素の阻害によるファルネシルピロリン
酸生合成の阻害は生体内でＲａｓ膜局在化を遮断しＲａ
ｓ機能を阻害する。ファルネシル−タンパク質トランス
フェラーゼの阻害は更に特異的であり、イソプレン生合
成の一般的阻害剤の場合よりも副作用を伴わない。
質トランスフェラーゼの阻害剤である。ファルネシル−
タンパク質トランスフェラーゼはＲａｓＣＡＡＸボック
スのＣｙｓチオール基をファルネシル基と共有結合的に
修飾するのにファルネシルピロリン酸を利用する。ＨＭ
Ｇ−ＣｏＡ還元酵素の阻害によるファルネシルピロリン
酸生合成の阻害は生体内でＲａｓ膜局在化を遮断しＲａ
ｓ機能を阻害する。ファルネシル−タンパク質トランス
フェラーゼの阻害は更に特異的であり、イソプレン生合
成の一般的阻害剤の場合よりも副作用を伴わない。
【００１１】既にＣＡＡＸ配列を有するテトラペプチド
がＲａｓファルネシル化を阻害することは実証されてい
る(Schaber等、前出文献：Reiss 等、前出文献；Reiss
等、ＰＮＡＳ、８８：７３２−７３６（１９９１））。
しかし報告されたファルネシルトランスフェラーゼの阻
害剤は細胞内で代謝的に不安定であるか不活性である。
本発明の化合物を含有する医薬組成物及びファルネシル
−タンパク質トランスフェラーゼ及び癌遺伝子タンパク
質Ｒａｓのファルネシル化を阻害するこれらの組成物を
使用する治療方法が本明細書で記載される。本発明はス
クアレンシンターゼのリンを含まない阻害剤を提供す
る。
がＲａｓファルネシル化を阻害することは実証されてい
る(Schaber等、前出文献：Reiss 等、前出文献；Reiss
等、ＰＮＡＳ、８８：７３２−７３６（１９９１））。
しかし報告されたファルネシルトランスフェラーゼの阻
害剤は細胞内で代謝的に不安定であるか不活性である。
本発明の化合物を含有する医薬組成物及びファルネシル
−タンパク質トランスフェラーゼ及び癌遺伝子タンパク
質Ｒａｓのファルネシル化を阻害するこれらの組成物を
使用する治療方法が本明細書で記載される。本発明はス
クアレンシンターゼのリンを含まない阻害剤を提供す
る。
【００１２】以下本発明を詳細に説明する。本発明はス
クアレンシンターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）：
クアレンシンターゼ阻害剤である構造式（Ｉ）：
【化３】 〔式中Ｒは
【化４】 であり；Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 は独立して ａ）Ｈ ｂ）Ｃ1-5 アルキル又は ｃ）i)フェニル又は ii)メチル、メトキシ、ハロゲン（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、
Ｉ）又はヒドロキシで置換されたフェニルで置換された
Ｃ1-5 アルキルである〕を有する新規な化合物又は式
（Ｉ）の化合物の薬学的に許容しうる塩に関する。
Ｉ）又はヒドロキシで置換されたフェニルで置換された
Ｃ1-5 アルキルである〕を有する新規な化合物又は式
（Ｉ）の化合物の薬学的に許容しうる塩に関する。
【００１３】下位化合物の１つはＲがｐ−ヒドロキシベ
ンジルである化合物である。この下位化合物の具体例は
Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物又はその薬
学的に許容しうる塩である。Ｒがｐ−ヒドロキシベンジ
ルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物
を以後化合物Ａと呼ぶ。更にこの下位化合物の例示とし
てはＲがｐ−ヒドロキシベンジルでありＺ1 、Ｚ2 又は
Ｚ3 の１個以上がＣ1-5 アルキル、置換基がメチル、メ
トキシ、ハロゲン又はヒドロキシである置換フェニル又
はフェニルで置換されたＣ1-5 アルキルである化合物で
ある。特定の具体例としてはＲがｐ−ヒドロキシベンジ
ルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々メチルである。こ
の化合物を以後化合物Ｂと呼ぶ。別の下位化合物はＲが
ベンジルである化合物である。この下位化合物の具体例
はＲがベンジルでありＺ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素で
ある化合物又はその薬学的に許容しうる塩である。Ｒが
ベンジルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である
化合物を以後化合物Ｃと呼ぶ。更にこの下位化合物の例
示としてはＲがベンジルでありＺ1 、Ｚ2 又はＺ3 の１
個以上がＣ1-5 アルキル、置換基がメチル、メトキシ、
ハロゲン又はヒドロキシである置換フェニル又はフェニ
ルで置換されたＣ1-5 アルキルである。第３の下位化合
物はＲが−ＣＨ2 −３−インドリルであり、Ｚ1 、Ｚ2
及びＺ3 が各々水素である化合物又はその薬学的に許容
しうる塩である。Ｒが−ＣＨ2−３−インドリルであ
り、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物を以後
化合物Ｄと呼ぶ。更にこの下位化合物としてはＲが−Ｃ
Ｈ2 −３−インドリルでありＺ1 、Ｚ2又はＺ3 の１個
以上がＣ1-5 アルキル、置換基がメチル、メトキシ、ハ
ロゲン又はヒドロキシである置換フェニル又はフェニル
で置換されたＣ1-5 アルキルである化合物である。
ンジルである化合物である。この下位化合物の具体例は
Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物又はその薬
学的に許容しうる塩である。Ｒがｐ−ヒドロキシベンジ
ルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物
を以後化合物Ａと呼ぶ。更にこの下位化合物の例示とし
てはＲがｐ−ヒドロキシベンジルでありＺ1 、Ｚ2 又は
Ｚ3 の１個以上がＣ1-5 アルキル、置換基がメチル、メ
トキシ、ハロゲン又はヒドロキシである置換フェニル又
はフェニルで置換されたＣ1-5 アルキルである化合物で
ある。特定の具体例としてはＲがｐ−ヒドロキシベンジ
ルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々メチルである。こ
の化合物を以後化合物Ｂと呼ぶ。別の下位化合物はＲが
ベンジルである化合物である。この下位化合物の具体例
はＲがベンジルでありＺ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素で
ある化合物又はその薬学的に許容しうる塩である。Ｒが
ベンジルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である
化合物を以後化合物Ｃと呼ぶ。更にこの下位化合物の例
示としてはＲがベンジルでありＺ1 、Ｚ2 又はＺ3 の１
個以上がＣ1-5 アルキル、置換基がメチル、メトキシ、
ハロゲン又はヒドロキシである置換フェニル又はフェニ
ルで置換されたＣ1-5 アルキルである。第３の下位化合
物はＲが−ＣＨ2 −３−インドリルであり、Ｚ1 、Ｚ2
及びＺ3 が各々水素である化合物又はその薬学的に許容
しうる塩である。Ｒが−ＣＨ2−３−インドリルであ
り、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物を以後
化合物Ｄと呼ぶ。更にこの下位化合物としてはＲが−Ｃ
Ｈ2 −３−インドリルでありＺ1 、Ｚ2又はＺ3 の１個
以上がＣ1-5 アルキル、置換基がメチル、メトキシ、ハ
ロゲン又はヒドロキシである置換フェニル又はフェニル
で置換されたＣ1-5 アルキルである化合物である。
【００１４】式（Ｉ）の化合物はトリコデルマ・ビリデ
(Trichoderma viride)Pers. として同定された新規な真
菌培養株ＭＦ５６２８又はその変異株を使用する好気的
発酵方法で製造される。変異株とはゲノム上のある遺伝
子が修飾されている微生物であって、式（Ｉ）の化合物
を回収可能な量で生産するための微生物の能力に関与す
る遺伝子又は遺伝子群は機能し遺伝しているものをさ
す。トリコデルマ・ビリデは世界中の多くの土壌及び有
機基質に存在する一般的で地理的に広く分布している微
生物である。培養株ＭＦ５６２８はミクロネシア連邦、
ポンペイ（以前にはアセンション島）のコロニアで採集
した土壌から単離した真菌、トリコデルマ・ビリデPer
s. である。この培養株はブタペスト条約の規約に基づ
き１９９１年７月３０日にＡＴＣＣ７４０８４として１
２３０１パークラウンドライブ、ロックビルＭＤ２０８
５２のアメリカンタイプカルチュアコレクションに寄託
されている。トリコデルマ属の中でこの菌株は、胞子を
生じない末端付属器が分生子柄上になく、梗子が長く先
細で規則的な樹枝状に配列しており、分生子が大部分球
形に近く粗面であるためにトリコデルマ・ビリデ種集合
体(aggregates)に帰属される（Rifai.M.A.１９６９、Ar
evision of the genus Trichoderma.CMI MycologicalPa
per１１６：１−５６）。
(Trichoderma viride)Pers. として同定された新規な真
菌培養株ＭＦ５６２８又はその変異株を使用する好気的
発酵方法で製造される。変異株とはゲノム上のある遺伝
子が修飾されている微生物であって、式（Ｉ）の化合物
を回収可能な量で生産するための微生物の能力に関与す
る遺伝子又は遺伝子群は機能し遺伝しているものをさ
す。トリコデルマ・ビリデは世界中の多くの土壌及び有
機基質に存在する一般的で地理的に広く分布している微
生物である。培養株ＭＦ５６２８はミクロネシア連邦、
ポンペイ（以前にはアセンション島）のコロニアで採集
した土壌から単離した真菌、トリコデルマ・ビリデPer
s. である。この培養株はブタペスト条約の規約に基づ
き１９９１年７月３０日にＡＴＣＣ７４０８４として１
２３０１パークラウンドライブ、ロックビルＭＤ２０８
５２のアメリカンタイプカルチュアコレクションに寄託
されている。トリコデルマ属の中でこの菌株は、胞子を
生じない末端付属器が分生子柄上になく、梗子が長く先
細で規則的な樹枝状に配列しており、分生子が大部分球
形に近く粗面であるためにトリコデルマ・ビリデ種集合
体(aggregates)に帰属される（Rifai.M.A.１９６９、Ar
evision of the genus Trichoderma.CMI MycologicalPa
per１１６：１−５６）。
【００１５】トリコデルマ・ビリデとして同定された培
養株ＭＦ５６２８は下記の形態学的特徴を示す。コロニ
ーは最も標準的な真菌的培地で急速に発育する。コーン
ミール、寒天、麦芽エキス寒天又はオートミール寒天で
は２７℃において４８時間で４０−４５mmに達し約５日
間で９cmプレートをおおう。まず麦芽エキス寒天のコロ
ニーは透明から白色でまばらからゆるい羊毛状で成熟す
ると分生子形成のために暗黄緑色から暗緑色、Dark Gre
en,Park Yellowish Green であり、裏面はオリーブイエ
ローからLight Yellowish Olive である（大文字で始ま
る色名はRidgway.R.１９１２、Color Standards and No
menclaTure,Washington.D.C.による）。コーンミール寒
天では分生子柄が束状になり、透明な菌糸ゾーンと交互
に同心性の輪を形成する。麦芽エキス及びオートミール
寒天では分生子柄は寒天表面上に均一に発育する。
養株ＭＦ５６２８は下記の形態学的特徴を示す。コロニ
ーは最も標準的な真菌的培地で急速に発育する。コーン
ミール、寒天、麦芽エキス寒天又はオートミール寒天で
は２７℃において４８時間で４０−４５mmに達し約５日
間で９cmプレートをおおう。まず麦芽エキス寒天のコロ
ニーは透明から白色でまばらからゆるい羊毛状で成熟す
ると分生子形成のために暗黄緑色から暗緑色、Dark Gre
en,Park Yellowish Green であり、裏面はオリーブイエ
ローからLight Yellowish Olive である（大文字で始ま
る色名はRidgway.R.１９１２、Color Standards and No
menclaTure,Washington.D.C.による）。コーンミール寒
天では分生子柄が束状になり、透明な菌糸ゾーンと交互
に同心性の輪を形成する。麦芽エキス及びオートミール
寒天では分生子柄は寒天表面上に均一に発育する。
【００１６】菌糸は透明、有隔、滑壁であり、幅２．６
−３．８μm 、厚膜胞子を形成し、これは球形から亜球
形で滑かで直径５．７−９．５μm である。分生子柄は
コロニーの表面から発生し、しばしばクッション状の分
生子のイボとして凝集し、１本又は２〜３本がまとまっ
て対生あるいは輪生配列としてひんぱんに広角分岐し、
分岐は頂端に向かって長さが短くなり梗子で終わる。分
生子発生細胞は内分芽型、梗子状で細いフラスコ形で細
長く、頂端で細くなっており、５．７−９．５×２μm
、まっすぐかわずかに湾曲しており、単一または２〜
３個のグループをなし、分生子分岐に対して広い角度に
出ており、規則的な樹枝状を形成し、決して一緒に密に
集合しない。分生子はほぼ球形から卵形で３．０−４．
５×２．６−３．０μm 、ＫＯＨで淡緑色を呈しわずか
に粗面で梗子の尖端で房状に集積している。
−３．８μm 、厚膜胞子を形成し、これは球形から亜球
形で滑かで直径５．７−９．５μm である。分生子柄は
コロニーの表面から発生し、しばしばクッション状の分
生子のイボとして凝集し、１本又は２〜３本がまとまっ
て対生あるいは輪生配列としてひんぱんに広角分岐し、
分岐は頂端に向かって長さが短くなり梗子で終わる。分
生子発生細胞は内分芽型、梗子状で細いフラスコ形で細
長く、頂端で細くなっており、５．７−９．５×２μm
、まっすぐかわずかに湾曲しており、単一または２〜
３個のグループをなし、分生子分岐に対して広い角度に
出ており、規則的な樹枝状を形成し、決して一緒に密に
集合しない。分生子はほぼ球形から卵形で３．０−４．
５×２．６−３．０μm 、ＫＯＨで淡緑色を呈しわずか
に粗面で梗子の尖端で房状に集積している。
【００１７】本発明の化合物は資化される炭素源及び窒
素源を含む水性栄養培地中で好ましくは好気的条件下で
上記微生物を培養することによって得ることができる。
栄養培地は鉱酸塩及び消泡剤も含んでよい。栄養培地中
の好ましい炭素源はグルコース、グリセリン、スター
チ、デキストラン等の炭水化物である。マルトース、マ
ンノース、スクロース等の他の炭素源も含められる。更
にオート麦粉、コーンミール、キビ、コーン等の複合栄
養源は使用しうる炭素である。用いられる炭素源の正確
な量は幾分培地中の他の成分に左右されるが、通常は
０．５−５重量％の範囲にある量である。これらの炭素
源は別々に用いられたり、一つの培地中に数種組合わせ
て用いることができる。
素源を含む水性栄養培地中で好ましくは好気的条件下で
上記微生物を培養することによって得ることができる。
栄養培地は鉱酸塩及び消泡剤も含んでよい。栄養培地中
の好ましい炭素源はグルコース、グリセリン、スター
チ、デキストラン等の炭水化物である。マルトース、マ
ンノース、スクロース等の他の炭素源も含められる。更
にオート麦粉、コーンミール、キビ、コーン等の複合栄
養源は使用しうる炭素である。用いられる炭素源の正確
な量は幾分培地中の他の成分に左右されるが、通常は
０．５−５重量％の範囲にある量である。これらの炭素
源は別々に用いられたり、一つの培地中に数種組合わせ
て用いることができる。
【００１８】好ましい窒素源はグリシン、メチオニン、
プロリン、トレオニン等のアミノ酸及び酵母エキス（加
水分解物、自己分解物）、乾燥酵母、トマトペースト、
大豆ミール、ペプトン、コーンスティープリカー、ディ
スティラーズソリュブル、麦芽エキス等の複合源であ
る。アンモニウム塩（例えば硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム等）のような無機窒素
源も使用することができる。種々の窒素源は単独あるい
は併用した状態で培地中で０．２−７０重量％の範囲に
ある量で使用することができる。炭素源及び窒素源は一
般的に併用して用いられるが、純粋な形である必要はな
い。発育因子、ビタミン及び鉱酸栄養源を微量に含む純
粋でない物質も使用される。また炭酸カルシウム、リン
酸ナトリウム又はカリウム、塩化ナトリウム又はカリウ
ム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩（これらに限定
されない）等の鉱酸塩も培地に加えられる。またマンガ
ン、鉄、モリブデン、亜鉛等の微量金属も含まれる。更
に必要な場合、特に培地の泡立ちが深刻である場合ポリ
エチレングリコール又はシリコーンのような消泡剤が加
えられる。
プロリン、トレオニン等のアミノ酸及び酵母エキス（加
水分解物、自己分解物）、乾燥酵母、トマトペースト、
大豆ミール、ペプトン、コーンスティープリカー、ディ
スティラーズソリュブル、麦芽エキス等の複合源であ
る。アンモニウム塩（例えば硝酸アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、リン酸アンモニウム等）のような無機窒素
源も使用することができる。種々の窒素源は単独あるい
は併用した状態で培地中で０．２−７０重量％の範囲に
ある量で使用することができる。炭素源及び窒素源は一
般的に併用して用いられるが、純粋な形である必要はな
い。発育因子、ビタミン及び鉱酸栄養源を微量に含む純
粋でない物質も使用される。また炭酸カルシウム、リン
酸ナトリウム又はカリウム、塩化ナトリウム又はカリウ
ム、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩（これらに限定
されない）等の鉱酸塩も培地に加えられる。またマンガ
ン、鉄、モリブデン、亜鉛等の微量金属も含まれる。更
に必要な場合、特に培地の泡立ちが深刻である場合ポリ
エチレングリコール又はシリコーンのような消泡剤が加
えられる。
【００１９】本発明の化合物の好ましい生産方法は産生
微生物の胞子又は菌糸を適切な培地に植菌し、次いで好
気的条件下で培養することからなる。式（Ｉ）の化合物
はＭＦ５６２８（ＡＴＣＣ７４０８４）培養株の好気的
発酵から単離される。ＭＦ５６２８（ＡＴＣＣ７４０８
４）の培養株とは実質的にその天然土壌混入物がなく構
造式（Ｉ）の化合物を回収しうる量で生成することがで
きるものとして定義される。ＭＦ５６２８（ＡＴＣＣ７
４０８４）の生物学的に純粋な培養株も用いられる。
微生物の胞子又は菌糸を適切な培地に植菌し、次いで好
気的条件下で培養することからなる。式（Ｉ）の化合物
はＭＦ５６２８（ＡＴＣＣ７４０８４）培養株の好気的
発酵から単離される。ＭＦ５６２８（ＡＴＣＣ７４０８
４）の培養株とは実質的にその天然土壌混入物がなく構
造式（Ｉ）の化合物を回収しうる量で生成することがで
きるものとして定義される。ＭＦ５６２８（ＡＴＣＣ７
４０８４）の生物学的に純粋な培養株も用いられる。
【００２０】発酵法は一般的にまず保存培養源を栄養種
培地に植菌し、しばしば２段階で、活性化合物の生産に
種菌として使用する微生物を増殖させるものである。植
菌後、フラスコを２０−３０℃好ましくは２５−２８℃
の温度で攪拌しながらインキュベートする。攪拌速度は
４００rpm まで、好ましくは２００−２２０rpm であ
る。種フラスコは２−１０日、好ましくは２−４日かけ
てインキュベートする。通常２−４日で十分に生育が起
ったらこの培養を用いて生産培地フラスコに接種する。
特に大きな容器へ移す場合第２段階の種菌増殖物が用い
られる。これを行なう場合、培養増殖物の一部を第２の
種フラスコに接種するために用い同様の条件下で時間を
短くしてインキュベートする。植菌後、発酵生産培地を
攪拌して又はせずに（液体又は固形発酵培地を使用する
かどうかによる）３−３０日好ましくは６−２２日かけ
てインキュベートする。発酵は２０−４０℃の温度で好
気的に行なわれる。攪拌する場合には２００−４００rp
m の速度が用いられる。最適な結果を得るには温度範囲
は２２−２８℃、最も好ましくは２４−２６℃である。
活性化合物の生産に適切な栄養培地のpHは３．５−８．
５、最も好ましくは５．０−７．５である。所望化合物
の生産に適切な期間の後、発酵フラスコを回収し、活性
化合物を単離する。エステル又はケトンのようなアルコ
ール性又は酸素化溶媒が本発明の化合物を固形発酵培地
から抽出するために用いられる。固形発酵の抽出に好ま
しい溶媒はメチルエチルケトン（ＭＥＫ）である。溶媒
と発酵培地の混合液を激しく攪拌し濾過する。得られた
ＭＥＫ層をヘキサンで洗浄し、真空中で濃縮乾固してア
ニオン交換クロマトグラフィーにかける。好ましい樹脂
はBio Rad AG４−X ４（アセテート）である。カラムを
６：４のアセトニトリル（ＣＨ3 ＣＮ）：水で洗浄し化
合物を酸性溶液で溶離する。好ましい溶出液は０．１６
Ｎ硫酸を含む６：４のＣＨ3 ＣＮ：水である。溶出液を
酢酸エチルで抽出し、濃縮して粗化合物を得る。
培地に植菌し、しばしば２段階で、活性化合物の生産に
種菌として使用する微生物を増殖させるものである。植
菌後、フラスコを２０−３０℃好ましくは２５−２８℃
の温度で攪拌しながらインキュベートする。攪拌速度は
４００rpm まで、好ましくは２００−２２０rpm であ
る。種フラスコは２−１０日、好ましくは２−４日かけ
てインキュベートする。通常２−４日で十分に生育が起
ったらこの培養を用いて生産培地フラスコに接種する。
特に大きな容器へ移す場合第２段階の種菌増殖物が用い
られる。これを行なう場合、培養増殖物の一部を第２の
種フラスコに接種するために用い同様の条件下で時間を
短くしてインキュベートする。植菌後、発酵生産培地を
攪拌して又はせずに（液体又は固形発酵培地を使用する
かどうかによる）３−３０日好ましくは６−２２日かけ
てインキュベートする。発酵は２０−４０℃の温度で好
気的に行なわれる。攪拌する場合には２００−４００rp
m の速度が用いられる。最適な結果を得るには温度範囲
は２２−２８℃、最も好ましくは２４−２６℃である。
活性化合物の生産に適切な栄養培地のpHは３．５−８．
５、最も好ましくは５．０−７．５である。所望化合物
の生産に適切な期間の後、発酵フラスコを回収し、活性
化合物を単離する。エステル又はケトンのようなアルコ
ール性又は酸素化溶媒が本発明の化合物を固形発酵培地
から抽出するために用いられる。固形発酵の抽出に好ま
しい溶媒はメチルエチルケトン（ＭＥＫ）である。溶媒
と発酵培地の混合液を激しく攪拌し濾過する。得られた
ＭＥＫ層をヘキサンで洗浄し、真空中で濃縮乾固してア
ニオン交換クロマトグラフィーにかける。好ましい樹脂
はBio Rad AG４−X ４（アセテート）である。カラムを
６：４のアセトニトリル（ＣＨ3 ＣＮ）：水で洗浄し化
合物を酸性溶液で溶離する。好ましい溶出液は０．１６
Ｎ硫酸を含む６：４のＣＨ3 ＣＮ：水である。溶出液を
酢酸エチルで抽出し、濃縮して粗化合物を得る。
【００２１】更に逆相高圧液体クロマトグラフィー（Ｒ
Ｐ−ＨＰＬＣ）を用いて精製される。このクロマトグラ
フィーに好ましい吸着剤はオクタデシルシラン結合相シ
リカゲルである。ＲＰ−ＨＰＬＣに好ましい溶離液は例
えば０．１％リン酸又はトリフルオロ酢酸で低いpHに緩
衝化した水とアセトニトリルの混合液である。
Ｐ−ＨＰＬＣ）を用いて精製される。このクロマトグラ
フィーに好ましい吸着剤はオクタデシルシラン結合相シ
リカゲルである。ＲＰ−ＨＰＬＣに好ましい溶離液は例
えば０．１％リン酸又はトリフルオロ酢酸で低いpHに緩
衝化した水とアセトニトリルの混合液である。
【００２２】更に高速向流クロマトグラフィーを用いて
精製することもできる。好ましい溶媒系はヘキサン：酢
酸エチル：メタノール：０．１％水性リン酸（５：５：
５：５）の混合液である。好ましい装置はＰ．Ｃ．Inc
（Potomac, Maryland,ＵＳＡ）によって製造されたＩＴ
Ｏ多層−コイルであるが他の向流クロマトグラフィー装
置も用いられる。
精製することもできる。好ましい溶媒系はヘキサン：酢
酸エチル：メタノール：０．１％水性リン酸（５：５：
５：５）の混合液である。好ましい装置はＰ．Ｃ．Inc
（Potomac, Maryland,ＵＳＡ）によって製造されたＩＴ
Ｏ多層−コイルであるが他の向流クロマトグラフィー装
置も用いられる。
【００２３】化合物Ａ、Ｃ又はＤのエステルは化合物
Ａ、Ｃ又はＤを乾燥有機溶媒好ましくはテトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ）に０−３０℃で溶解し、適切に置換され
たイソウレアで８−２４時間処理し、そのウレアを濾過
することによって調製される。濾液を減圧下で濃縮して
所望のエステルを得る。
Ａ、Ｃ又はＤを乾燥有機溶媒好ましくはテトラヒドロフ
ラン（ＴＨＦ）に０−３０℃で溶解し、適切に置換され
たイソウレアで８−２４時間処理し、そのウレアを濾過
することによって調製される。濾液を減圧下で濃縮して
所望のエステルを得る。
【００２４】本発明はまた構造式（Ｉ）によって示され
る化合物の非毒性の治療的に有効な量及びその薬学的に
許容しうる塩をそのような治療を必要としている患者に
投与することからなるコレステロール生合成阻害の方法
に関する。詳細には、本発明の化合物はヒトにおいて抗
高コレステロール血症剤として、アテローム性動脈硬化
症、高脂血症、家族性高コレステロール血症及び類似疾
患の治療に有効である。これらはカプセル、錠剤、注射
用製剤として経口又は非経口投与される。通常経口経路
を使用することが望ましい。投与量はヒト患者の年令、
重篤度、体重及び他の条件によって異なるが、成人に対
する日用量は約２０−２０００mg（好ましくは２０−１
００mg）の範囲内であり、２−４回に分けて投与され
る。これより多い投与量は必要に応じて有利に用いられ
る。
る化合物の非毒性の治療的に有効な量及びその薬学的に
許容しうる塩をそのような治療を必要としている患者に
投与することからなるコレステロール生合成阻害の方法
に関する。詳細には、本発明の化合物はヒトにおいて抗
高コレステロール血症剤として、アテローム性動脈硬化
症、高脂血症、家族性高コレステロール血症及び類似疾
患の治療に有効である。これらはカプセル、錠剤、注射
用製剤として経口又は非経口投与される。通常経口経路
を使用することが望ましい。投与量はヒト患者の年令、
重篤度、体重及び他の条件によって異なるが、成人に対
する日用量は約２０−２０００mg（好ましくは２０−１
００mg）の範囲内であり、２−４回に分けて投与され
る。これより多い投与量は必要に応じて有利に用いられ
る。
【００２５】更に本発明は酵素スクアレンシンターゼの
阻害方法であって構造式（Ｉ）によって示される化合物
の非毒性の治療的に有効な量及びその薬学的に許容しう
る塩をこのような治療を必要としている患者に投与する
ことからなる方法に関する。詳細には本発明の化合物は
ヒトにおける抗高コレステロール血症剤としてアテロー
ム性動脈硬化症、高脂血症、家族性高コレステロール血
症及び類似疾患の治療に有効である。これらはカプセ
ル、錠剤、注射用製剤等として経口又は非経口投与され
る。通常経口経路を使用することが望ましい。投与量は
ヒト患者の年令、重篤度、体重及び他の条件によって異
なるが成人に対する日用量は約２０−２０００mg（好ま
しくは２０−１００mg）の範囲内であり、２−４回に分
けて投与される。これより多い投与量は必要に応じて有
利に使用される。
阻害方法であって構造式（Ｉ）によって示される化合物
の非毒性の治療的に有効な量及びその薬学的に許容しう
る塩をこのような治療を必要としている患者に投与する
ことからなる方法に関する。詳細には本発明の化合物は
ヒトにおける抗高コレステロール血症剤としてアテロー
ム性動脈硬化症、高脂血症、家族性高コレステロール血
症及び類似疾患の治療に有効である。これらはカプセ
ル、錠剤、注射用製剤等として経口又は非経口投与され
る。通常経口経路を使用することが望ましい。投与量は
ヒト患者の年令、重篤度、体重及び他の条件によって異
なるが成人に対する日用量は約２０−２０００mg（好ま
しくは２０−１００mg）の範囲内であり、２−４回に分
けて投与される。これより多い投与量は必要に応じて有
利に使用される。
【００２６】本発明の化合物の薬学的に許容しうる塩は
ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リ
チウム、マグネシウム、亜鉛のようなカチオンおよびア
ンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルタミ
ン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ−
Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイ
ン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフ
ェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタン及び水酸化テトラメ
チルアンモニウムのような塩基から生成されるものを含
む。本明細書で含まれる塩はカルボキシル基の１、２又
は３個全てが塩であるものを含む。これらの塩は標準的
方法によって調製される。
ナトリウム、カリウム、アルミニウム、カルシウム、リ
チウム、マグネシウム、亜鉛のようなカチオンおよびア
ンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルタミ
ン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ−
Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイ
ン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフ
ェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス
（ヒドロキシメチル）アミノメタン及び水酸化テトラメ
チルアンモニウムのような塩基から生成されるものを含
む。本明細書で含まれる塩はカルボキシル基の１、２又
は３個全てが塩であるものを含む。これらの塩は標準的
方法によって調製される。
【００２７】本発明の化合物はまたコレステロール生合
成の生合成経路において別の酵素を阻害するような他の
コレステロール低下剤と併用して投与することもでき
る。そのような薬剤の具体例としてはＨＭＧ−ＣｏＡ還
元酵素阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤及びス
クアレンエポキシダーゼ阻害剤があるがこれらに限定さ
れない。そのようなＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の具
体例はロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン
及びフルバスタチンである。ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ
阻害剤の具体例は米国特許第４，８０６，５６４号、同
第４，８１６，４７７号、同第４，８４７，２７１号及
び同第４，７５１，２３７号に開示されるβ−ラクトン
誘導体、米国特許第４，９８３，５９７号及び１９９０
年６月２０日出願の米国特許出願第０７／５４０，９９
２号に開示されるβ−ラクタム誘導体及び欧州特許公報
第０４１１７０３号に開示される置換オキサシクロプロ
パン類縁体である。スクアレンエポキシダーゼ阻害剤の
具体例は欧州特許公報第０３１８８６０号及び日本特許
公報第０２１６９−５７１Ａ号に開示される。ＬＤＬ−
レセプター遺伝子インデューサー分子は１９９１年３月
１８日に出願の米国特許出願第０７／６７０，６４０号
に開示される。投与される他のコレステロール低下剤と
してはナイアシン、プロブコール、フィブリン酸：クロ
フィブレート及びゲンフィブロジル及びＬＤＬ−レセプ
ター遺伝子インデューサーがある。このような代表的な
併用剤は式（Ｉ）の化合物約１０−４００mg及びＨＭＧ
−ＣｏＡ還元酵素阻害剤約２０−１００mg、ＨＭＧ−Ｃ
ｏＡシンターゼ阻害剤２０−２００mg又はスクアレンエ
ポキシダーゼ阻害剤１−２００mg又はプロブコール２５
０−１０００mg又はゲンフィブロジル６００−１２００
mg又はクロフィブレート１−２ｇ又はナイアシン３−６
ｇ又はＬＤＬ−レセプター遺伝子インデューサー２０−
３００mgを含むものである。
成の生合成経路において別の酵素を阻害するような他の
コレステロール低下剤と併用して投与することもでき
る。そのような薬剤の具体例としてはＨＭＧ−ＣｏＡ還
元酵素阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤及びス
クアレンエポキシダーゼ阻害剤があるがこれらに限定さ
れない。そのようなＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の具
体例はロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン
及びフルバスタチンである。ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ
阻害剤の具体例は米国特許第４，８０６，５６４号、同
第４，８１６，４７７号、同第４，８４７，２７１号及
び同第４，７５１，２３７号に開示されるβ−ラクトン
誘導体、米国特許第４，９８３，５９７号及び１９９０
年６月２０日出願の米国特許出願第０７／５４０，９９
２号に開示されるβ−ラクタム誘導体及び欧州特許公報
第０４１１７０３号に開示される置換オキサシクロプロ
パン類縁体である。スクアレンエポキシダーゼ阻害剤の
具体例は欧州特許公報第０３１８８６０号及び日本特許
公報第０２１６９−５７１Ａ号に開示される。ＬＤＬ−
レセプター遺伝子インデューサー分子は１９９１年３月
１８日に出願の米国特許出願第０７／６７０，６４０号
に開示される。投与される他のコレステロール低下剤と
してはナイアシン、プロブコール、フィブリン酸：クロ
フィブレート及びゲンフィブロジル及びＬＤＬ−レセプ
ター遺伝子インデューサーがある。このような代表的な
併用剤は式（Ｉ）の化合物約１０−４００mg及びＨＭＧ
−ＣｏＡ還元酵素阻害剤約２０−１００mg、ＨＭＧ−Ｃ
ｏＡシンターゼ阻害剤２０−２００mg又はスクアレンエ
ポキシダーゼ阻害剤１−２００mg又はプロブコール２５
０−１０００mg又はゲンフィブロジル６００−１２００
mg又はクロフィブレート１−２ｇ又はナイアシン３−６
ｇ又はＬＤＬ−レセプター遺伝子インデューサー２０−
３００mgを含むものである。
【００２８】本発明の化合物はまた胃腸管に再吸収され
ない形で胆汁酸を結合することができる薬学的に許容し
うる非毒性のカチオンポリマーと併用投与できる。その
ようなポリマーの具体例としてはコレスチラミン、コレ
スチポール及びポリ〔メチル−（３−トリメチル）アミ
ノプロピル〕イミノ−トリメチレンジハライドがある。
本発明の化合物とこれらのポリマーの併用投与の相対量
は１：１０００と１：１５，０００(w/w) のあいだであ
る。
ない形で胆汁酸を結合することができる薬学的に許容し
うる非毒性のカチオンポリマーと併用投与できる。その
ようなポリマーの具体例としてはコレスチラミン、コレ
スチポール及びポリ〔メチル−（３−トリメチル）アミ
ノプロピル〕イミノ−トリメチレンジハライドがある。
本発明の化合物とこれらのポリマーの併用投与の相対量
は１：１０００と１：１５，０００(w/w) のあいだであ
る。
【００２９】本発明の代表的な化合物の固有のスクアレ
ンシンターゼ阻害活性は下記の標準的試験管内プロトコ
ールによって測定した。ヒトＨｅｐＧ２細胞酵素の調製 １．原料：ＨＥＰＧ２ 細胞系（肝臓、肝芽腫、ヒト）
ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＨＢ８０６５ ２．細胞培養及び維持 培養基：非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム及び１
０％ウシ胎児血清を含む最少必須培地（ＭＥＭ）。培地
は１週間に２回交換した。１週間で集密単層を得た。下
記に示される増殖培地を調製した。
ンシンターゼ阻害活性は下記の標準的試験管内プロトコ
ールによって測定した。ヒトＨｅｐＧ２細胞酵素の調製 １．原料：ＨＥＰＧ２ 細胞系（肝臓、肝芽腫、ヒト）
ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＨＢ８０６５ ２．細胞培養及び維持 培養基：非必須アミノ酸、ピルビン酸ナトリウム及び１
０％ウシ胎児血清を含む最少必須培地（ＭＥＭ）。培地
は１週間に２回交換した。１週間で集密単層を得た。下
記に示される増殖培地を調製した。
【００３０】
【表１】溶液 容量 (ml) １．アール塩類及びＬ−グルタミンを含むＭＥＭ １０００ （Ｇｉｂｃｏ＃３２０−１０９０ＡＫ） ２．ペニシリン（１０，０００単位／ml）、 ストレプトマイシン（１０，０００mg／ml）、 Ｇｉｂｃｏ＃６００−５１４０ＰＧ １０ ３．ＭＥＭピルビン酸ナトリウム、１０mM （１００×）Ｇｉｂｃｏ＃３２０−１１４０ １０ ４．ＭＥＭ非必須アミノ酸 １０mM（１００×）Ｇｉｂｃｏ＃３２０−１１４０ＡＧ １０ ５．Ｌ−グルタミン、２００mM（１００×）、 Ｇｉｂｃｏ＃３２０−５０３０ＡＧ １０ ６．特定Hyclone ウシ胎児血清、Hyclone ＃Ａ−ＩＩＩ−Ｌ １００
【００３１】継代培養：培地を除去し、ＰＢＳ（リン酸
平衡化食塩水１５．６mM、pH７．０）で洗浄した。トリ
プシン（０．２５％）−ＥＤＴＡ（０．０２％）を含む
新しいハンクス液を加え、フラスコを１分間放置した後
トリプシンを除去した。細胞が離れるまでフラスコを３
７℃でインキュベートした。新しい培地を加え、細胞を
分散させ、新しいフラスコに分配した。 継代培養比：１：６。 脱脂血清の調製：ウシ胎児血清（１００ml）及びＣＡＢ
−Ｏ−Ｓｉｌ（２ｇ）を４℃で一晩攪拌し、１６，００
０rpm で５時間遠心した。上清をろ過してから血清は４
℃で保存した。１０％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ中で生
育した細胞を１０％脱脂血清を含むＭＥＭに移して４８
時間後に細胞を回収した。 回収：培地を取り出し、細胞をＰＢＳで洗浄した。トリ
プシン（０．２５％）−ＥＤＴＡ（０．０２％）を含む
新しいハンクス液を加えて放置した後除去した。細胞が
離れるまでフラスコを３７℃でインキュベートした。Ｍ
ＥＭ培地（６ml／フラスコ）を加えて細胞を浮遊させ、
遠心管中に集めた。細胞を１，０００rpm で５分間遠心
した。細胞ペレットをＰＢＳに再浮遊させ、再遠心し
た。細胞を計数（１８フラスコ（７５cm2 ）から２．５
×１０9 生じる）し、５mMＭｇＣｌ2 、２mMＭｎＣｌ
2 、１０mMＤＴＴ、pH７．５を含む５０mMＨＥＰＥＳ
（Ｎ−〔２−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ’−
〔２−エタン−スルホン酸〕（酵素懸濁用バッファ）１
０mlに再懸濁した。
平衡化食塩水１５．６mM、pH７．０）で洗浄した。トリ
プシン（０．２５％）−ＥＤＴＡ（０．０２％）を含む
新しいハンクス液を加え、フラスコを１分間放置した後
トリプシンを除去した。細胞が離れるまでフラスコを３
７℃でインキュベートした。新しい培地を加え、細胞を
分散させ、新しいフラスコに分配した。 継代培養比：１：６。 脱脂血清の調製：ウシ胎児血清（１００ml）及びＣＡＢ
−Ｏ−Ｓｉｌ（２ｇ）を４℃で一晩攪拌し、１６，００
０rpm で５時間遠心した。上清をろ過してから血清は４
℃で保存した。１０％ウシ胎児血清を含むＭＥＭ中で生
育した細胞を１０％脱脂血清を含むＭＥＭに移して４８
時間後に細胞を回収した。 回収：培地を取り出し、細胞をＰＢＳで洗浄した。トリ
プシン（０．２５％）−ＥＤＴＡ（０．０２％）を含む
新しいハンクス液を加えて放置した後除去した。細胞が
離れるまでフラスコを３７℃でインキュベートした。Ｍ
ＥＭ培地（６ml／フラスコ）を加えて細胞を浮遊させ、
遠心管中に集めた。細胞を１，０００rpm で５分間遠心
した。細胞ペレットをＰＢＳに再浮遊させ、再遠心し
た。細胞を計数（１８フラスコ（７５cm2 ）から２．５
×１０9 生じる）し、５mMＭｇＣｌ2 、２mMＭｎＣｌ
2 、１０mMＤＴＴ、pH７．５を含む５０mMＨＥＰＥＳ
（Ｎ−〔２−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ’−
〔２−エタン−スルホン酸〕（酵素懸濁用バッファ）１
０mlに再懸濁した。
【００３２】細胞抽出物：細胞懸濁液を氷上で２分間超
音波処理（プローブソニケーターセッティング＃６０．
パルス）した。１分間氷上で冷却した後、顕微鏡で見て
細胞の９０％以上が破壊されるまで音波処理を繰り返し
た。上清を１０，０００rpmで１０分間遠心し、上清を
きれいな試験管に移し２０，０００rpm で２０分間遠心
した。ＨｅｐＧ２酵素標品を３４，０００rpm で遠心し
て細胞質及びミクロソーム酵素を分けた。スクアレンシ
ンターゼを含有する３４，０００rpm 遠心により得られ
た沈降物を酵素懸濁用バッファ５mlに再懸濁した。酵素
懸濁液を希釈し、基質として３μＭ 3Ｈ−ファルネシル
ピロリン酸を用いるスクアレンシンターゼアッセイを行
なうために使用した。
音波処理（プローブソニケーターセッティング＃６０．
パルス）した。１分間氷上で冷却した後、顕微鏡で見て
細胞の９０％以上が破壊されるまで音波処理を繰り返し
た。上清を１０，０００rpmで１０分間遠心し、上清を
きれいな試験管に移し２０，０００rpm で２０分間遠心
した。ＨｅｐＧ２酵素標品を３４，０００rpm で遠心し
て細胞質及びミクロソーム酵素を分けた。スクアレンシ
ンターゼを含有する３４，０００rpm 遠心により得られ
た沈降物を酵素懸濁用バッファ５mlに再懸濁した。酵素
懸濁液を希釈し、基質として３μＭ 3Ｈ−ファルネシル
ピロリン酸を用いるスクアレンシンターゼアッセイを行
なうために使用した。
【００３３】酵母酵素の調製 Ｓ．セレビシエ(S.cerevisiae)Ｗ３０３−１Ａ（ＭＡＴ
ａ ａｄｅ２−１ ｃａｎ１−１００ ｈｉｓ３−１
１，１５ ｌｅｕ２−３， １１２ｔｒｐ１−１ｕｒａ
３−１）を３０℃で２４時間アデニン２０μｇ／mlを加
えたＹＰＤ培地（２％酵母エキス、１％バクト−ペプト
ン、２％グルコース）中で発育させた。細胞を洗浄し、
最少量の破壊バッファ（１００mMＫＰＯ4 、pH７．４、
３mMＭＤＴＴ、１mMＰＭＳＦ）に再懸濁した。０．５mm
ガラスビーズ１００ｇの入ったビード−ビーターセルデ
ィスラプター(Biospec Products,Bartlesville,OK)の小
チェンバーに細胞を加えた。チェンバーにバッファを一
杯になるまで加え、密閉したチェンバーのまわりに氷を
詰め、サイクルの間に２分間の冷却期間を置き３０秒で
４サイクル処理した。位相差顕微鏡により細胞破壊を測
定すると＞９０％であった。ガラスビーズをワットマン
濾紙で除去し濾液を氷浸フィルターフラスコに集めた。
抽出液を１５００xg、４℃で１０分間遠心した。破壊さ
れない細胞及び細胞壁を含有する沈降物（Ｐ１）を捨て
た。上清（Ｓ１）を３００００xg、４℃で３０分間遠心
した。沈降物（Ｐ２）は全スクアレンシンターゼ活性の
約２／３を含有した。上清（Ｓ２）を１００，０００x
g、４℃で６０分間遠心すると残りの活性（Ｐ３）を沈
降させることができる。沈降物画分を２５％グリセリン
を含有する破壊用バッファに１０−２０mg／mlタンパク
質となるよう懸濁させた。活性は−８０℃において数ヶ
月間安定であった。
ａ ａｄｅ２−１ ｃａｎ１−１００ ｈｉｓ３−１
１，１５ ｌｅｕ２−３， １１２ｔｒｐ１−１ｕｒａ
３−１）を３０℃で２４時間アデニン２０μｇ／mlを加
えたＹＰＤ培地（２％酵母エキス、１％バクト−ペプト
ン、２％グルコース）中で発育させた。細胞を洗浄し、
最少量の破壊バッファ（１００mMＫＰＯ4 、pH７．４、
３mMＭＤＴＴ、１mMＰＭＳＦ）に再懸濁した。０．５mm
ガラスビーズ１００ｇの入ったビード−ビーターセルデ
ィスラプター(Biospec Products,Bartlesville,OK)の小
チェンバーに細胞を加えた。チェンバーにバッファを一
杯になるまで加え、密閉したチェンバーのまわりに氷を
詰め、サイクルの間に２分間の冷却期間を置き３０秒で
４サイクル処理した。位相差顕微鏡により細胞破壊を測
定すると＞９０％であった。ガラスビーズをワットマン
濾紙で除去し濾液を氷浸フィルターフラスコに集めた。
抽出液を１５００xg、４℃で１０分間遠心した。破壊さ
れない細胞及び細胞壁を含有する沈降物（Ｐ１）を捨て
た。上清（Ｓ１）を３００００xg、４℃で３０分間遠心
した。沈降物（Ｐ２）は全スクアレンシンターゼ活性の
約２／３を含有した。上清（Ｓ２）を１００，０００x
g、４℃で６０分間遠心すると残りの活性（Ｐ３）を沈
降させることができる。沈降物画分を２５％グリセリン
を含有する破壊用バッファに１０−２０mg／mlタンパク
質となるよう懸濁させた。活性は−８０℃において数ヶ
月間安定であった。
【００３４】スクアレンシンターゼアッセイ 反応は８本の１．２mlポリプロピレン管で行なった。全
容量０．１４０ml中標準的反応混合液はＨＥＰＥＳ−Ｎ
ａ＋バッファpH７．５ ５０mM、ＮＡＤＰＨ１mM、Ｍｇ
Ｃｌ2 ５．５mM、ＫＦ１１mM、ＤＴＴ３mM、タービナ
フィン（酵母スクアレンエポキシダーゼ阻害剤、Ｓａｎ
ｄｏｚＳＦ８６−３２７）又は哺乳類スクアレンエポキ
シダーゼ阻害剤（ＢａｎｙｕＦＷ−４３９Ｈ）１μｇ／
ml、ファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）５μＭ（ＮＥ
Ｎ）、3 Ｈ−ファルネシルピロリン酸０．２５μＣｉ
（ＮＥＮ、２０Ｃｉ／ミリモル）、酵素標品として０．
１μｇ酵母タンパク質又は０．４μｇＨｅｐＧ２タンパ
ク質及び試験試料含むＤＮＳＯ５μｌを含有させた。Ｆ
ＰＰ／3 Ｈ−ＦＰＰを除く全アッセイ成分を３０℃で１
２分間プレインキュベートして阻害剤を酵素に結合させ
た。ＦＰＰ／3 Ｈ−ＦＰＰを加えて反応を開始させた。
３０℃で１２分後エタノール０．２mlを加えて反応を停
止させた。反応生成物をキャリアスクアレン０．４μｌ
を含有するヘプタン０．４mlで抽出した。ヘプタン抽出
液０．２mlを液体シンチレーションで計数した。ＩＣ50
は薬剤力価測定によるデータの対数曲線から求めた対照
（阻害剤を含まない）酵素活性の５０％を示す阻害剤の
濃度として求めた。阻害％は下記式によって算出する： ｛（対照−試料）／（対照−ブランク）｝×１００ ＩＣ50値は阻害％に対する試験化合物の濃度の対数をプ
ロットすることによって求めた。ＩＣ50はこれらのプロ
ットから求めた５０％阻害を示す阻害剤の濃度である。
下記は本発明の化合物の固有スクアレンシンターゼ阻害
活性のＩＣ50の代表例である。
容量０．１４０ml中標準的反応混合液はＨＥＰＥＳ−Ｎ
ａ＋バッファpH７．５ ５０mM、ＮＡＤＰＨ１mM、Ｍｇ
Ｃｌ2 ５．５mM、ＫＦ１１mM、ＤＴＴ３mM、タービナ
フィン（酵母スクアレンエポキシダーゼ阻害剤、Ｓａｎ
ｄｏｚＳＦ８６−３２７）又は哺乳類スクアレンエポキ
シダーゼ阻害剤（ＢａｎｙｕＦＷ−４３９Ｈ）１μｇ／
ml、ファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）５μＭ（ＮＥ
Ｎ）、3 Ｈ−ファルネシルピロリン酸０．２５μＣｉ
（ＮＥＮ、２０Ｃｉ／ミリモル）、酵素標品として０．
１μｇ酵母タンパク質又は０．４μｇＨｅｐＧ２タンパ
ク質及び試験試料含むＤＮＳＯ５μｌを含有させた。Ｆ
ＰＰ／3 Ｈ−ＦＰＰを除く全アッセイ成分を３０℃で１
２分間プレインキュベートして阻害剤を酵素に結合させ
た。ＦＰＰ／3 Ｈ−ＦＰＰを加えて反応を開始させた。
３０℃で１２分後エタノール０．２mlを加えて反応を停
止させた。反応生成物をキャリアスクアレン０．４μｌ
を含有するヘプタン０．４mlで抽出した。ヘプタン抽出
液０．２mlを液体シンチレーションで計数した。ＩＣ50
は薬剤力価測定によるデータの対数曲線から求めた対照
（阻害剤を含まない）酵素活性の５０％を示す阻害剤の
濃度として求めた。阻害％は下記式によって算出する： ｛（対照−試料）／（対照−ブランク）｝×１００ ＩＣ50値は阻害％に対する試験化合物の濃度の対数をプ
ロットすることによって求めた。ＩＣ50はこれらのプロ
ットから求めた５０％阻害を示す阻害剤の濃度である。
下記は本発明の化合物の固有スクアレンシンターゼ阻害
活性のＩＣ50の代表例である。
【００３５】
【表２】 スクアレンシンターゼ阻害 ＩＣ50（μｇ／ml） 化合物 酵母酵素 ＨｅｐＧ２酵素 化合物Ａ ７．５ ４１．６ 化合物Ｃ １ １９．３ 化合物Ｄ ０．２２ ０．２９
【００３６】また本発明の微生物の発酵で生成される化
合物の固有スクアレンシンターゼ阻害活性は下記の標準
的試験管内プロトコールによって測定される。
合物の固有スクアレンシンターゼ阻害活性は下記の標準
的試験管内プロトコールによって測定される。
【００３７】ラット肝ミクロソームの調製 雄のＣＨＡＲＬＥＳ ＲＩＶＥＲ ＣＤラット（１２０
〜１５０ｇ）に０．１％ロバスタチンを含有する食餌を
４日間与えた。これらのラットからの肝臓を氷冷５０mM
ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペ
ラジン−エタンスルホン酸１．５mMＥＤＴＡ（エチレン
ジアミン四酢酸）pH７．５ ５容量（ml／ｇ）中でポッ
ター−エルベム型組織粉砕機を用いてホモジナイズし
た。ホモジネートを２０，０００xg、４℃で１５分間２
回遠心し、そのつど沈降物を捨てた。次いで上清を１０
０，０００xg、４℃で１時間遠心した。得られたミクロ
ソーム沈降物をもとのホモジネートの１／５量に等しい
上記ホモジナイズ用バッファに再懸濁させた。このミク
ロソーム標品はタンパク質濃度約７mg／mlを有する。こ
のミクロソーム浮遊液を分注して−７０℃で貯蔵した。
これらのスクアレンシンターゼ活性は少なくとも数ヶ月
間安定である。
〜１５０ｇ）に０．１％ロバスタチンを含有する食餌を
４日間与えた。これらのラットからの肝臓を氷冷５０mM
ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペ
ラジン−エタンスルホン酸１．５mMＥＤＴＡ（エチレン
ジアミン四酢酸）pH７．５ ５容量（ml／ｇ）中でポッ
ター−エルベム型組織粉砕機を用いてホモジナイズし
た。ホモジネートを２０，０００xg、４℃で１５分間２
回遠心し、そのつど沈降物を捨てた。次いで上清を１０
０，０００xg、４℃で１時間遠心した。得られたミクロ
ソーム沈降物をもとのホモジネートの１／５量に等しい
上記ホモジナイズ用バッファに再懸濁させた。このミク
ロソーム標品はタンパク質濃度約７mg／mlを有する。こ
のミクロソーム浮遊液を分注して−７０℃で貯蔵した。
これらのスクアレンシンターゼ活性は少なくとも数ヶ月
間安定である。
【００３８】プレニルトランスフェラーゼの部分的精製 放射能標識ファルネシルピロリン酸の酵素合成に使用す
るためにプレニルトランスフェラーゼを精製した。プレ
ニルトランスフェラーゼはRilling(Methods inEnzymolo
gy １１０、１２５−１２９（１９８５））の方法でア
ッセイし、活性単位を標準的アッセイにおいて３０℃１
分当たり１μモルのファルネシルピロリン酸を生成する
酵素量として定義する。５％コレスチラミンと０．１％
ロバスタチンを与えて飼育した２３匹の４０日令雄ラッ
トの肝臓を０．１トリプシン阻害単位のアプロチニン１
mlを含有する下記組成の液１Ｌ中に入れワーリングブレ
ンダーでホモジナイズした。１０mMメルカプトエタノー
ル、２mMＥＤＴＡ、２５mMロイペプチン、０．００５％
フェニルメチルスルホニルフルオリドpH７．０。ホモジ
ネートを２０，０００xgで２０分間遠心した。上清を６
Ｎ ＨＯＡｃでpH５．５に調整し、１００，０００xgで
１時間遠心した。この上清を３Ｎ ＫＯＨでpH７．０に
調整し、３５−６０％硫酸アンモニウム沈澱画分をとっ
た。この６０％沈澱物を１０mMリン酸カリウム、１０mM
メルカプトエタノール、１mMＥＤＴＡpH７．０（バッフ
ァＡ）６０mlに再溶解し、バッファＡ１リットルを２回
交換して透析した。この透析画分をバッファＡで平衡化
したＤＥＡＥ−セファロース４Ｂの１２．５×５cmカラ
ムに加えた。カラムをバッファＡ７００mlで洗浄し、さ
らにバッファＡから１００mMリン酸カリウム、１０mMメ
ルカプトエタノール、１mMＥＤＴＡ、pH７．０までの１
リットル勾配で洗浄した。０．２０単位／mg以上の比活
性を有する画分を合わせ、固形硫酸アンモニウムを６０
％飽和になるように加え、沈降させた。この沈降物を１
０mMトリス、１０mMβ−メルカプトエタノールpH７．０
（バッファＢ）８mlに溶解した。再溶解した沈降物をバ
ッファＢ中の飽和硫酸アンモニウム１．５容量を加える
ことによって硫酸アンモニウム６０％飽和とした。この
硫酸アンモニウム懸濁液は３．５単位／mlを含み、比活
性０．２３単位／mgであり、イソペンテニルピロリン酸
イソメラーゼ活性を含まなかった。この硫酸アンモニウ
ム懸濁液を〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸の合成
に使用し、その活性は４℃で少なくとも６ヶ月間は安定
であった。
るためにプレニルトランスフェラーゼを精製した。プレ
ニルトランスフェラーゼはRilling(Methods inEnzymolo
gy １１０、１２５−１２９（１９８５））の方法でア
ッセイし、活性単位を標準的アッセイにおいて３０℃１
分当たり１μモルのファルネシルピロリン酸を生成する
酵素量として定義する。５％コレスチラミンと０．１％
ロバスタチンを与えて飼育した２３匹の４０日令雄ラッ
トの肝臓を０．１トリプシン阻害単位のアプロチニン１
mlを含有する下記組成の液１Ｌ中に入れワーリングブレ
ンダーでホモジナイズした。１０mMメルカプトエタノー
ル、２mMＥＤＴＡ、２５mMロイペプチン、０．００５％
フェニルメチルスルホニルフルオリドpH７．０。ホモジ
ネートを２０，０００xgで２０分間遠心した。上清を６
Ｎ ＨＯＡｃでpH５．５に調整し、１００，０００xgで
１時間遠心した。この上清を３Ｎ ＫＯＨでpH７．０に
調整し、３５−６０％硫酸アンモニウム沈澱画分をとっ
た。この６０％沈澱物を１０mMリン酸カリウム、１０mM
メルカプトエタノール、１mMＥＤＴＡpH７．０（バッフ
ァＡ）６０mlに再溶解し、バッファＡ１リットルを２回
交換して透析した。この透析画分をバッファＡで平衡化
したＤＥＡＥ−セファロース４Ｂの１２．５×５cmカラ
ムに加えた。カラムをバッファＡ７００mlで洗浄し、さ
らにバッファＡから１００mMリン酸カリウム、１０mMメ
ルカプトエタノール、１mMＥＤＴＡ、pH７．０までの１
リットル勾配で洗浄した。０．２０単位／mg以上の比活
性を有する画分を合わせ、固形硫酸アンモニウムを６０
％飽和になるように加え、沈降させた。この沈降物を１
０mMトリス、１０mMβ−メルカプトエタノールpH７．０
（バッファＢ）８mlに溶解した。再溶解した沈降物をバ
ッファＢ中の飽和硫酸アンモニウム１．５容量を加える
ことによって硫酸アンモニウム６０％飽和とした。この
硫酸アンモニウム懸濁液は３．５単位／mlを含み、比活
性０．２３単位／mgであり、イソペンテニルピロリン酸
イソメラーゼ活性を含まなかった。この硫酸アンモニウ
ム懸濁液を〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸の合成
に使用し、その活性は４℃で少なくとも６ヶ月間は安定
であった。
【００３９】〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸の酵
素合成 溶媒（エタノール：０．１５Ｎ ＮＨ4 ＯＨ、１：１）
を５５ｍＣｉの〔４−14Ｃ〕イソペンテニルピロリン酸
（４７．９ｍＣｉ／ミリモル）からロータリーエバポレ
ーターによって除去した。これに１００mMトリス、１０
mMＭｇＣｌ2 、４mMジチオスレイトールpH７．５の６０
０μｌを加え、この溶液を１．５mlのエッペンドルフ遠
心管に移した。ゲラニルピロリン酸２０mM溶液２５０μ
ｌ及びフェニルトランスフェラーゼの硫酸アンモニウム
浮遊液５０μｌを反応を加えて反応を開始させた。この
インキュベーションは９００μｌ容量中５ミリモルのゲ
ラニルピロリン酸、１．１５ミリモルのイソペンテニル
ピロリン酸、６ミリモルのＭｇＣｌ2 及び０．１８単位
のプレニルトランスフェラーゼを含有した。インキュベ
ーションは３７℃で行なった。インキュベーション中新
しく生成されたファルネシルピロリン酸のマグネシウム
複合体が溶液から沈殿するにつれて混合液が白色に濁っ
た。〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸をエッペンド
ルフ遠心管で１４，０００rpm ３分間遠心して集め、上
清を除去し、沈降物を５０mMＨＥＰＥＳ、５mMＥＤＴＡ
pH７．５ １．０mlに溶解した。収量は５０．７ｍＣｉ
（９２％）の〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸であ
った。〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸を分注して
−７０℃で貯蔵した。
素合成 溶媒（エタノール：０．１５Ｎ ＮＨ4 ＯＨ、１：１）
を５５ｍＣｉの〔４−14Ｃ〕イソペンテニルピロリン酸
（４７．９ｍＣｉ／ミリモル）からロータリーエバポレ
ーターによって除去した。これに１００mMトリス、１０
mMＭｇＣｌ2 、４mMジチオスレイトールpH７．５の６０
０μｌを加え、この溶液を１．５mlのエッペンドルフ遠
心管に移した。ゲラニルピロリン酸２０mM溶液２５０μ
ｌ及びフェニルトランスフェラーゼの硫酸アンモニウム
浮遊液５０μｌを反応を加えて反応を開始させた。この
インキュベーションは９００μｌ容量中５ミリモルのゲ
ラニルピロリン酸、１．１５ミリモルのイソペンテニル
ピロリン酸、６ミリモルのＭｇＣｌ2 及び０．１８単位
のプレニルトランスフェラーゼを含有した。インキュベ
ーションは３７℃で行なった。インキュベーション中新
しく生成されたファルネシルピロリン酸のマグネシウム
複合体が溶液から沈殿するにつれて混合液が白色に濁っ
た。〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸をエッペンド
ルフ遠心管で１４，０００rpm ３分間遠心して集め、上
清を除去し、沈降物を５０mMＨＥＰＥＳ、５mMＥＤＴＡ
pH７．５ １．０mlに溶解した。収量は５０．７ｍＣｉ
（９２％）の〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸であ
った。〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸を分注して
−７０℃で貯蔵した。
【００４０】スクアレンシンターゼアッセイ 反応は１６×１２５mmのねじ蓋試験管で行なった。バッ
チアッセイ混合液を下記溶液から調製した。
チアッセイ混合液を下記溶液から調製した。
【００４１】
【表３】 １アッセイ当たりのml ５０アッセイの容量 １．２５０mMＨＥＰＥＳpH７．５ ２０ １０００ ２．ＮａＦ１１０mM １０ ５００ ３．ＭｇＣｌ2 ５５mM １０ ５００ ４．ジチオトレイトール３０mM １０ ５００ ５．ＮＡＤＰＨ１０mM（用時調製） １０ ５００ ６．〔４−14Ｃ〕ファルネシルピロリン酸 ４７．９ｍＣｉ／ミリモル、 及び０．０２５ｍＣｉ／３．０ml ３．０ １５０ ７．Ｈ2 Ｏ ２４ １２００
【００４２】このアッセイ混合液を真空下で脱気し、Ｎ
2 でフラッシュした。スクアレンシンターゼ阻害剤の溶
液をＤＭＳＯ又はＭｅＯＨで調製し、ミクロソームタン
パク質の１：１２０希釈液を最初のホモジナイズ用バッ
ファを用いて調製した。各反応用にアッセイ混合液８７
μｌを阻害溶液３μｌ（対照としてＤＭＳＯ又はＭｅＯ
Ｈ）と取り、水浴中で３０℃に温め、次いでミクロソー
ムタンパク質の１：１２０希釈液（アッセイ中のタンパ
ク質合計０．６mg）を加えて反応を開始した。２０分後
４０％ＫＯＨと９５％ＥｔＯＨの１：１混合液１００μ
ｌを加えて反応を停止した。停止した混合液を６５℃で
３０分間加熱し、冷却した。ヘプタン１０mlを加え、混
合液を攪拌した。次いで活性アルミナ２ｇを加え、混合
液を再度攪拌し、アルミナを沈降させ、ヘプタン層５ml
を取り出した。シンチレーション液１０mlをヘプタン液
に加え放射能を液体シンチレーション計数によって求め
た。阻害％は下記式によって算出する： １−｛〔試料−ブランク〕／〔対照−ブランク〕｝×１
００ 下記データは本発明の化合物のスクアレンシンターゼ阻
害特性の代表例である。
2 でフラッシュした。スクアレンシンターゼ阻害剤の溶
液をＤＭＳＯ又はＭｅＯＨで調製し、ミクロソームタン
パク質の１：１２０希釈液を最初のホモジナイズ用バッ
ファを用いて調製した。各反応用にアッセイ混合液８７
μｌを阻害溶液３μｌ（対照としてＤＭＳＯ又はＭｅＯ
Ｈ）と取り、水浴中で３０℃に温め、次いでミクロソー
ムタンパク質の１：１２０希釈液（アッセイ中のタンパ
ク質合計０．６mg）を加えて反応を開始した。２０分後
４０％ＫＯＨと９５％ＥｔＯＨの１：１混合液１００μ
ｌを加えて反応を停止した。停止した混合液を６５℃で
３０分間加熱し、冷却した。ヘプタン１０mlを加え、混
合液を攪拌した。次いで活性アルミナ２ｇを加え、混合
液を再度攪拌し、アルミナを沈降させ、ヘプタン層５ml
を取り出した。シンチレーション液１０mlをヘプタン液
に加え放射能を液体シンチレーション計数によって求め
た。阻害％は下記式によって算出する： １−｛〔試料−ブランク〕／〔対照−ブランク〕｝×１
００ 下記データは本発明の化合物のスクアレンシンターゼ阻
害特性の代表例である。
【表４】 化合物 スクアレンシンターゼ ＩＣ50 化合物Ａ １５μＭ
【００４３】本発明の化合物はまた液体培地希釈法によ
って定量される広範囲抗真菌スペクトル活性を示す。こ
れらの化合物はカンジダ・アルビカンス（Candida albi
cans) 及びウスチラゴ・ゼエ(Ustilago zeae) を含む糸
状菌及び酵母に対して特に活性である。糸状菌及び酵母
の感受性はマイクロタイター方式の阻害剤希釈アッセイ
を用いて求めた。化合物をＤＭＳＯに２mg／mlで溶解
し、ＤＭＳＯ１００μｌで希釈した。接種菌が１×対数
増殖期のカンジダ、クリプトコッカス(Cryptococcus)及
びウスチラゴ細胞を新しいＹＮＢ／Ｇ（２％グルコース
を加えたDifco Yeast Nitrogen Base)及びＹＣＢ／Ｇｌ
ｕ（２mM１−グルタミン酸を含むDifco Yeast Carbon B
ase)で希釈して１０4 細胞／mlとした。アスペルギルス
胞子は十分に胞子形成されたSabouraud Dextrose Agar
斜面からTween ８０で回収し、接種菌１×１０3 胞子／
mlを得るように培地で希釈した。ウェルを接種済培地１
５０μｌで満たした。試験される最終薬剤濃度は４０〜
０．３１３μｇ／mlの範囲にあった。マイクロタイター
プレートを２９℃で２０〜４８時間インキュベートし
た。最小阻止濃度（ＭＩＣ）は酵母に対して２９℃で２
０時間、糸状菌に対して２９℃で２４〜４８時間インキ
ュベーション後に肉眼で認められる増殖が起らない最低
濃度として定義する。下記に示される最小阻止濃度デー
タは抗真菌活性の代表例である。
って定量される広範囲抗真菌スペクトル活性を示す。こ
れらの化合物はカンジダ・アルビカンス（Candida albi
cans) 及びウスチラゴ・ゼエ(Ustilago zeae) を含む糸
状菌及び酵母に対して特に活性である。糸状菌及び酵母
の感受性はマイクロタイター方式の阻害剤希釈アッセイ
を用いて求めた。化合物をＤＭＳＯに２mg／mlで溶解
し、ＤＭＳＯ１００μｌで希釈した。接種菌が１×対数
増殖期のカンジダ、クリプトコッカス(Cryptococcus)及
びウスチラゴ細胞を新しいＹＮＢ／Ｇ（２％グルコース
を加えたDifco Yeast Nitrogen Base)及びＹＣＢ／Ｇｌ
ｕ（２mM１−グルタミン酸を含むDifco Yeast Carbon B
ase)で希釈して１０4 細胞／mlとした。アスペルギルス
胞子は十分に胞子形成されたSabouraud Dextrose Agar
斜面からTween ８０で回収し、接種菌１×１０3 胞子／
mlを得るように培地で希釈した。ウェルを接種済培地１
５０μｌで満たした。試験される最終薬剤濃度は４０〜
０．３１３μｇ／mlの範囲にあった。マイクロタイター
プレートを２９℃で２０〜４８時間インキュベートし
た。最小阻止濃度（ＭＩＣ）は酵母に対して２９℃で２
０時間、糸状菌に対して２９℃で２４〜４８時間インキ
ュベーション後に肉眼で認められる増殖が起らない最低
濃度として定義する。下記に示される最小阻止濃度デー
タは抗真菌活性の代表例である。
【００４４】
【表５】 最小阻止濃度（μg／ml）微生物 培地 Ａ Ｃ Ｄ カンジダ・アルビカンス ＹＮＢ／Ｇ 40 ＞40 ＞40 ＭＹ１０５５ ＹＣＢ／Ｇｌｕ 5 2.5 20 クリプトコッカス・ ＹＮＢ／Ｇ 40 ＞40 40 ネオフォーマンスMY2061 ＹＣＢ／Ｇｌｕ 1.25 1.25 10 クリプトコッカス・ ＹＮＢ／Ｇ ＞40 ＞40 ＞40 ネオフォーマンスMY2062 ＹＣＢ／Ｇｌｕ 2.5 5 10 ウスチラゴ・ゼエ ＹＮＢ／Ｇ 5 10 20 ＭＦ１９９６ ＹＣＢ／Ｇｌｕ 1.25 2.5 2.5 アスペルギルス・ ＹＮＢ／Ｇ ＞40 ＞40 ＞40 フミガッスＭＦ４８３９ ＹＣＢ／Ｇｌｕ 0.625 0.625 1.25
【００４５】このように本発明はまた真菌増殖の阻止方
法であって式（Ｉ）の化合物の抗真菌的に有効な量を増
殖が制御されるべき領域に使用することからなる方法に
関する。更に本発明は真菌感染症の治療方法であって構
造式（Ｉ）によって示される化合物及びその薬学的に許
容しうる塩の非毒性の治療的に有効な量をそのような治
療を必要としている生物に投与することからなる方法に
関する。抗真菌治療の場合、一般的に２から約２０mg／
kgが単位用量として使用しなければならないことが、上
記ＭＩＣデータに基づいて決定される。本発明の化合物
は抗真菌組成物の種々の応用において使用されるのに適
応することができる。そのように使用する場合化合物は
生物学的に不活性な担体と一般的には界面活性分散剤の
助剤と共に混和されるがその種類はその用途が人間のよ
うな哺乳類又は鳥類又は爬虫類に感染する病原体の制御
用か土壌又は植物関係のような農業における真菌の制御
用かあるいは無生物における真菌の制御用であるかによ
って異なる。
法であって式（Ｉ）の化合物の抗真菌的に有効な量を増
殖が制御されるべき領域に使用することからなる方法に
関する。更に本発明は真菌感染症の治療方法であって構
造式（Ｉ）によって示される化合物及びその薬学的に許
容しうる塩の非毒性の治療的に有効な量をそのような治
療を必要としている生物に投与することからなる方法に
関する。抗真菌治療の場合、一般的に２から約２０mg／
kgが単位用量として使用しなければならないことが、上
記ＭＩＣデータに基づいて決定される。本発明の化合物
は抗真菌組成物の種々の応用において使用されるのに適
応することができる。そのように使用する場合化合物は
生物学的に不活性な担体と一般的には界面活性分散剤の
助剤と共に混和されるがその種類はその用途が人間のよ
うな哺乳類又は鳥類又は爬虫類に感染する病原体の制御
用か土壌又は植物関係のような農業における真菌の制御
用かあるいは無生物における真菌の制御用であるかによ
って異なる。
【００４６】治療用組成物の場合、化合物は薬学的に許
容しうる担体と混和されその種類は組成物が局所、非経
口又は経口用であるかによって異なる。適用が局所用で
ある場合、薬剤は白色ワセリン、無水ラノリン、セチル
アルコール、コールドクリーム、グリセリルモノステア
レート、ローズ水等の従来のクリーム剤及び軟膏に処方
される。非経口用の場合化合物は水中０．８５％塩化ナ
トリウム又は５％デキストロースのような従来の非経口
液剤又は他の薬学的に許容しうる組成物に処方される。
経口投与用組成物は液体製剤の場合水、グリコール、オ
イル、アルコール等の液状担体及びカプセル剤、錠剤の
ような固形製剤の場合、デンプン、砂糖、カオリン、エ
チルセルロース、界面活性分散剤のような固形担体を含
む任意の通常の医薬媒体と一般的にはステアリン酸カル
シウムのような滑沢剤と、結合剤、崩壊剤等と緊密に混
合して調製される。次いでこれらの組成物は所望の抗真
菌作用を十分得る量で投与される。治療用の場合、方法
は式Ｉの化合物の治療的に有効な抗真菌量を治療を必要
としている患者に投与することからなる。適切な投与量
は年令、重篤度、体重及び他の条件によって異なる。局
所用の場合、組成物は制御が所望される面に直接塗布さ
れる。内科的投与の場合、組成物は注射によるか又は経
口的に投与される。
容しうる担体と混和されその種類は組成物が局所、非経
口又は経口用であるかによって異なる。適用が局所用で
ある場合、薬剤は白色ワセリン、無水ラノリン、セチル
アルコール、コールドクリーム、グリセリルモノステア
レート、ローズ水等の従来のクリーム剤及び軟膏に処方
される。非経口用の場合化合物は水中０．８５％塩化ナ
トリウム又は５％デキストロースのような従来の非経口
液剤又は他の薬学的に許容しうる組成物に処方される。
経口投与用組成物は液体製剤の場合水、グリコール、オ
イル、アルコール等の液状担体及びカプセル剤、錠剤の
ような固形製剤の場合、デンプン、砂糖、カオリン、エ
チルセルロース、界面活性分散剤のような固形担体を含
む任意の通常の医薬媒体と一般的にはステアリン酸カル
シウムのような滑沢剤と、結合剤、崩壊剤等と緊密に混
合して調製される。次いでこれらの組成物は所望の抗真
菌作用を十分得る量で投与される。治療用の場合、方法
は式Ｉの化合物の治療的に有効な抗真菌量を治療を必要
としている患者に投与することからなる。適切な投与量
は年令、重篤度、体重及び他の条件によって異なる。局
所用の場合、組成物は制御が所望される面に直接塗布さ
れる。内科的投与の場合、組成物は注射によるか又は経
口的に投与される。
【００４７】非医療用の場合、本発明の生成物は単独で
又は混合物として微細乾燥又は液状希釈剤、増量剤、充
填剤、コンディショナー及び賦形剤例えば種々のクレ
ー、ケイソウ土、タルク等、又は水及び低級アルカノー
ル、例えばエタノール及びイソプロパノール又はケロセ
ン、ベンゼン、トルエン及び他の石油留分又はその混合
物のような種々の有機液体を含む不活性担体中に組成物
として使用される。これらの組成物は防御される媒体の
表面に使用するか取り込むことによって使用される。米
のいもち病、トマト疫病、トマト輪紋病、小麦の赤さび
病、豆のうどんこ病及びトマトの萎ちょう病(Fusarium
Wilt) の防御の場合、組成物は局所的に植物に直接使用
するか、全身用に土壌に投与される。この方法は式Ｉの
化合物の抗真菌的に有効な量を防御される被害植物、土
壌又は媒体に投与することからなる。式Ｉの化合物はま
た下記に示されるようにファルネシル−トランスフェラ
ーゼ阻害を示す。
又は混合物として微細乾燥又は液状希釈剤、増量剤、充
填剤、コンディショナー及び賦形剤例えば種々のクレ
ー、ケイソウ土、タルク等、又は水及び低級アルカノー
ル、例えばエタノール及びイソプロパノール又はケロセ
ン、ベンゼン、トルエン及び他の石油留分又はその混合
物のような種々の有機液体を含む不活性担体中に組成物
として使用される。これらの組成物は防御される媒体の
表面に使用するか取り込むことによって使用される。米
のいもち病、トマト疫病、トマト輪紋病、小麦の赤さび
病、豆のうどんこ病及びトマトの萎ちょう病(Fusarium
Wilt) の防御の場合、組成物は局所的に植物に直接使用
するか、全身用に土壌に投与される。この方法は式Ｉの
化合物の抗真菌的に有効な量を防御される被害植物、土
壌又は媒体に投与することからなる。式Ｉの化合物はま
た下記に示されるようにファルネシル−トランスフェラ
ーゼ阻害を示す。
【００４８】ファルネシル−トランスフェラーゼアッセ
イ Ｉ．アッセイに必要な溶液の調製 ｉ．１．０Ｍ ＭｇＣｌ2 （ＭＷ＝２０３．３） ＭｇＣｌ2 ２０３．３ｇを蒸留水１．０リットルに溶解
し滅菌フィルターで濾過し、４℃で貯蔵した。 ii．１．１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ＭＷ＝２３８．３）及び５
５．５mMＭｇＣｌ2 蒸留水７００mlにＨＥＰＥＳ２６４．５ｇを加え、次に
１．０Ｍ ＭｇＣｌ2５６mlを加えた。水酸化ナトリウ
ムでpHを７．５に調整し、容量を１０００mlとした。こ
の溶液を滅菌フィルターで濾過し４℃で貯蔵した。 iii.０．５Ｍジチオスレイトール（ＤＴＴ、ＭＷ＝１５
４．２４） ＤＴＴ７７．１２mgを蒸留水１．０mlに溶解した。ＤＴ
Ｔが溶液になるように１０Ｎ ＮａＯＨを２、３滴加え
た。０．５Ｍ ＤＴＴを５００μl ずつに分け、−２０
℃で貯蔵した。 iv．アッセイバッファの調製（毎日新しく調製） １．０Ｍ ＨＥＰＥＳ、pH７．５、５０mMＭｇＣｌ2 及
び５０mMＤＴＴからなる１０Ｘバッファを得るために
０．５Ｍ ＤＴＴ１００μl を１．１Ｍ ＨＥＰＥＳ、
pH７．５及び５５．５mMＭｇＣｌ2 ９００μl に加え
た。 ｖ．非標識ファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）の調製 非標識ＦＰＰ（ＭＷ＝４３３．３）は１．８mM（１mg／
１．２８ml）溶液として入手した。この溶液を水で２μ
M に希釈し、毎週新しく調製し−２０℃で貯蔵した。非
標識ＦＰＰを調製する場合ガラス管を使用した。 vi． 3 Ｈ−ＦＰＰの調製 3 Ｈ−ＦＰＰ（ＮＥＮ＃ＮＥＴ−１０４２、ＭＷ＝４３
３．３）はＮＥＮから入手したビンから直接使用した。
3 Ｈ−ＦＰＰの貯蔵濃度は２５μM であった。 vii.全体及び未知試料用反応混合液の調製（氷上） 反応混合液を下記のように調製した：
イ Ｉ．アッセイに必要な溶液の調製 ｉ．１．０Ｍ ＭｇＣｌ2 （ＭＷ＝２０３．３） ＭｇＣｌ2 ２０３．３ｇを蒸留水１．０リットルに溶解
し滅菌フィルターで濾過し、４℃で貯蔵した。 ii．１．１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ＭＷ＝２３８．３）及び５
５．５mMＭｇＣｌ2 蒸留水７００mlにＨＥＰＥＳ２６４．５ｇを加え、次に
１．０Ｍ ＭｇＣｌ2５６mlを加えた。水酸化ナトリウ
ムでpHを７．５に調整し、容量を１０００mlとした。こ
の溶液を滅菌フィルターで濾過し４℃で貯蔵した。 iii.０．５Ｍジチオスレイトール（ＤＴＴ、ＭＷ＝１５
４．２４） ＤＴＴ７７．１２mgを蒸留水１．０mlに溶解した。ＤＴ
Ｔが溶液になるように１０Ｎ ＮａＯＨを２、３滴加え
た。０．５Ｍ ＤＴＴを５００μl ずつに分け、−２０
℃で貯蔵した。 iv．アッセイバッファの調製（毎日新しく調製） １．０Ｍ ＨＥＰＥＳ、pH７．５、５０mMＭｇＣｌ2 及
び５０mMＤＴＴからなる１０Ｘバッファを得るために
０．５Ｍ ＤＴＴ１００μl を１．１Ｍ ＨＥＰＥＳ、
pH７．５及び５５．５mMＭｇＣｌ2 ９００μl に加え
た。 ｖ．非標識ファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）の調製 非標識ＦＰＰ（ＭＷ＝４３３．３）は１．８mM（１mg／
１．２８ml）溶液として入手した。この溶液を水で２μ
M に希釈し、毎週新しく調製し−２０℃で貯蔵した。非
標識ＦＰＰを調製する場合ガラス管を使用した。 vi． 3 Ｈ−ＦＰＰの調製 3 Ｈ−ＦＰＰ（ＮＥＮ＃ＮＥＴ−１０４２、ＭＷ＝４３
３．３）はＮＥＮから入手したビンから直接使用した。
3 Ｈ−ＦＰＰの貯蔵濃度は２５μM であった。 vii.全体及び未知試料用反応混合液の調製（氷上） 反応混合液を下記のように調製した：
【００４９】
【表６】 試薬 貯蔵濃度 使用容量／アッセイ ２０μl の濃度 アッセイの 最終濃度 3 Ｈ−ＦＰＰ ２５μM ０．２μl ０．２５μM ５０nM 無標識ＦＰＰ ２０００nM １１．２５μl １．１２５μM ２２５nM ras-CVLS １mg/ml ６．３μl １５μM ３μM （４７．６２μM ） ｄ−Ｈ2 Ｏ ２．２５μl 全容量 ２０μl
【００５０】またブランク反応混合液は負の対照ｒａｓ
−タンパク質を用いて調製し全体／試料反応混合液にｒ
ａｓ−ＣＶＬＳを加えた。表１のブランク反応混合液を
調製するためにこの容量を使用した。 viii．ファルネシルトランスフェラーゼ溶液の調製 下記に示すようにファルネシルトランスフェラーゼ溶液
を調製した。ファルネシルトランスフェラーゼ混合液を
使用直前に調製した。
−タンパク質を用いて調製し全体／試料反応混合液にｒ
ａｓ−ＣＶＬＳを加えた。表１のブランク反応混合液を
調製するためにこの容量を使用した。 viii．ファルネシルトランスフェラーゼ溶液の調製 下記に示すようにファルネシルトランスフェラーゼ溶液
を調製した。ファルネシルトランスフェラーゼ混合液を
使用直前に調製した。
【表７】 試薬 貯蔵濃度 使用容量／アッセイ ｄ−Ｈ2 Ｏ １４．０μl バッファ 貯蔵液＝１０Ｘ １０．０μl Ｆ．トランスフェラーゼ 貯蔵液＝１mg/ml １．０μl 全容量 ２５μl ix．１００％エタノール中１．０Ｍ ＨＣｌの調製 エタノール中１．０Ｍ ＨＣｌを得るために濃ＨＣｌ
（１１．６Ｍ）４３mlを１００％エタノール４５７mlと
混合することによって停止用溶液を調製した。
（１１．６Ｍ）４３mlを１００％エタノール４５７mlと
混合することによって停止用溶液を調製した。
【００５１】Ｖ．アッセイのステップ ｉ．アッセイ容量は１００μl とし、試験される試料の
容量は５μl とし、インキュベーション時間は室温で６
０分である。 ii．オートマチックピペッティングステーション（ＴＥ
ＣＡＮ８０００／５０５）により水５０μl と試料５μ
l をアッセイ管に加えた。 iii.ｒａｓ−ＣＶＬＳ反応混合液（２０μl ）を全体及
び未知試料に手で加えた。負の対照ｒａｓ−タンパク質
反応混合液（２０μl ）をブランク管に手で加えた。 iv．反応を開始させるためにファルネシルトランスフェ
ラーゼ混合液（２５μl ）を全アッセイ管に手で加え、
アッセイ管を室温で６０分間保持した。 ｖ．アッセイ管を氷浴に５分間入れて反応を停止させ
た。 vi. 次いで１００％エタノール中１．０Ｍ ＨＣｌ
１．０mlを各管に加えた。ＦＰＰの加水分解を促進する
ためにアッセイ管（蓋なし）を３７℃で６０分間インキ
ュベートした。 vii.ＴＯＭＴＥＣ９６−ウェルハーベスター（先端を伸
長した６×１６のもの又はＳＫＡＴＲＯＮセルハーベス
ター）によってＬＫＢ二倍厚フィルターマットにアッセ
イ管の内容を回収した。 viii．細胞ハーベスターを調整して各ウェルを１００％
エタノール１０mlで洗浄した。 ix．フィルターマットを乾燥するためにフィルターマッ
トをマイクロ波オーブンで６−８分加熱した。 ｘ．フィルターマットを計数バックに入れＬＫＢβ−シ
ンチカクテル３０mlを加え、フィルターマットをＬＫＢ
β−プレートカウンターで１２０秒間計数した。
容量は５μl とし、インキュベーション時間は室温で６
０分である。 ii．オートマチックピペッティングステーション（ＴＥ
ＣＡＮ８０００／５０５）により水５０μl と試料５μ
l をアッセイ管に加えた。 iii.ｒａｓ−ＣＶＬＳ反応混合液（２０μl ）を全体及
び未知試料に手で加えた。負の対照ｒａｓ−タンパク質
反応混合液（２０μl ）をブランク管に手で加えた。 iv．反応を開始させるためにファルネシルトランスフェ
ラーゼ混合液（２５μl ）を全アッセイ管に手で加え、
アッセイ管を室温で６０分間保持した。 ｖ．アッセイ管を氷浴に５分間入れて反応を停止させ
た。 vi. 次いで１００％エタノール中１．０Ｍ ＨＣｌ
１．０mlを各管に加えた。ＦＰＰの加水分解を促進する
ためにアッセイ管（蓋なし）を３７℃で６０分間インキ
ュベートした。 vii.ＴＯＭＴＥＣ９６−ウェルハーベスター（先端を伸
長した６×１６のもの又はＳＫＡＴＲＯＮセルハーベス
ター）によってＬＫＢ二倍厚フィルターマットにアッセ
イ管の内容を回収した。 viii．細胞ハーベスターを調整して各ウェルを１００％
エタノール１０mlで洗浄した。 ix．フィルターマットを乾燥するためにフィルターマッ
トをマイクロ波オーブンで６−８分加熱した。 ｘ．フィルターマットを計数バックに入れＬＫＢβ−シ
ンチカクテル３０mlを加え、フィルターマットをＬＫＢ
β−プレートカウンターで１２０秒間計数した。
【００５２】VI．結果及び検討 下記等式に従って阻害％を算出した： 阻害％＝｛〔全体−試料〕／〔全体−ブランク〕｝×１
００ 下記に示されるファルネシルトランスフェラーゼデータ
は試験化合物が試験管内でＲａｓファルネシル化を阻害
する能力の測定値である。
００ 下記に示されるファルネシルトランスフェラーゼデータ
は試験化合物が試験管内でＲａｓファルネシル化を阻害
する能力の測定値である。
【表８】化合物 ＩＣ50（μM ） 化合物Ａ ８ 化合物Ｃ ４．５ 化合物Ｄ ３．３
【００５３】構造式（Ｉ）の化合物を含有する医薬組成
物はファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ及び
癌遺伝子タンパク質Ｒａｓのファルネシル化を阻害す
る。これらの化合物は哺乳動物特にヒト用の医薬剤とし
て有効である。これらの化合物は癌の治療に使用するた
めに患者に投与される。本発明の化合物で治療される癌
の種類の例としては大腸癌、外分泌膵癌及び骨髄性白血
病があるがこれらに限定されない。本発明の化合物は単
独で又は好ましくは標準的な医薬実施に従って医薬組成
物として薬学的に許容しうる担体もしくは希釈剤、場合
によってはミョウバンのような既知のアジュバントと組
合わせて哺乳動物好ましくはヒトに投与される。化合物
は経口又は非経口投与することができ、静脈内、筋肉
内、腹腔内、皮下及び局所投与を含む。
物はファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ及び
癌遺伝子タンパク質Ｒａｓのファルネシル化を阻害す
る。これらの化合物は哺乳動物特にヒト用の医薬剤とし
て有効である。これらの化合物は癌の治療に使用するた
めに患者に投与される。本発明の化合物で治療される癌
の種類の例としては大腸癌、外分泌膵癌及び骨髄性白血
病があるがこれらに限定されない。本発明の化合物は単
独で又は好ましくは標準的な医薬実施に従って医薬組成
物として薬学的に許容しうる担体もしくは希釈剤、場合
によってはミョウバンのような既知のアジュバントと組
合わせて哺乳動物好ましくはヒトに投与される。化合物
は経口又は非経口投与することができ、静脈内、筋肉
内、腹腔内、皮下及び局所投与を含む。
【００５４】本発明による化学療法化合物を経口使用す
る場合、選択された化合物は例えば錠剤あるいはカプセ
ル剤として又は水溶液あるいは懸濁液として投与され
る。経口使用の場合、錠剤に通常使用される担体として
はラクトース及びコーンスターチが挙げられステアリン
酸マグネシウムのような滑沢剤が通常加えられる。カプ
セルとして経口投与する場合には有用な希釈剤としてラ
クトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使
用するのに水性懸濁液剤が必要な場合には活性成分は乳
化剤及び懸濁化剤と組合わせて用いられる。希望する場
合には一定の甘味剤及び／又は香味剤も加えられる。筋
肉内、腹腔内、皮下及び静脈内使用の場合活性成分の滅
菌溶液が通常使用され、液のpHは適切に調整され且つ緩
衝化されなければならない。静脈内使用の場合、溶質の
全濃度は溶液が等張になるように調節されなければなら
ない。
る場合、選択された化合物は例えば錠剤あるいはカプセ
ル剤として又は水溶液あるいは懸濁液として投与され
る。経口使用の場合、錠剤に通常使用される担体として
はラクトース及びコーンスターチが挙げられステアリン
酸マグネシウムのような滑沢剤が通常加えられる。カプ
セルとして経口投与する場合には有用な希釈剤としてラ
クトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。経口使
用するのに水性懸濁液剤が必要な場合には活性成分は乳
化剤及び懸濁化剤と組合わせて用いられる。希望する場
合には一定の甘味剤及び／又は香味剤も加えられる。筋
肉内、腹腔内、皮下及び静脈内使用の場合活性成分の滅
菌溶液が通常使用され、液のpHは適切に調整され且つ緩
衝化されなければならない。静脈内使用の場合、溶質の
全濃度は溶液が等張になるように調節されなければなら
ない。
【００５５】本発明はまた癌の治療方法であって薬学的
に許容しうる担体又は希釈剤と共にあるいは単独で本発
明の化合物の治療的に有効な量からなる医薬組成物を投
与することからなる方法を含む。本発明の適切な組成物
としては本発明の化合物及び薬理学的に許容しうる担体
例えば食塩水をpHレベル例えば７．４にしたものからな
る水性液剤が挙げられる。液剤はボラス局所注入によっ
て患者の筋肉内血流に導入される。本発明による化合物
をヒトに投与する場合日用量は通常患者の年令、体重及
び応答によって変更されるのが普通であり、また患者の
症状の重さの程度を考慮して処方する医師により決定さ
れる。１つの典型的な応用例としては化合物の適切な量
が癌の治療を受ける患者に投与される。投与は１日約
０．１−２０mg／kg哺乳動物体重、好ましくは１日約
０．５−１０mg／kg哺乳動物体重のあいだとなる量であ
る。下記実施例は式（Ｉ）の化合物の製造及び医薬組成
物への混合を具体的に説明するがこのままで本明細書に
添えられている特許請求の範囲に示される発明を限定す
るものとして解釈されるべきではない。
に許容しうる担体又は希釈剤と共にあるいは単独で本発
明の化合物の治療的に有効な量からなる医薬組成物を投
与することからなる方法を含む。本発明の適切な組成物
としては本発明の化合物及び薬理学的に許容しうる担体
例えば食塩水をpHレベル例えば７．４にしたものからな
る水性液剤が挙げられる。液剤はボラス局所注入によっ
て患者の筋肉内血流に導入される。本発明による化合物
をヒトに投与する場合日用量は通常患者の年令、体重及
び応答によって変更されるのが普通であり、また患者の
症状の重さの程度を考慮して処方する医師により決定さ
れる。１つの典型的な応用例としては化合物の適切な量
が癌の治療を受ける患者に投与される。投与は１日約
０．１−２０mg／kg哺乳動物体重、好ましくは１日約
０．５−１０mg／kg哺乳動物体重のあいだとなる量であ
る。下記実施例は式（Ｉ）の化合物の製造及び医薬組成
物への混合を具体的に説明するがこのままで本明細書に
添えられている特許請求の範囲に示される発明を限定す
るものとして解釈されるべきではない。
【００５６】下記実施例で使用される培地の組成を以下
に挙げる：
に挙げる：
【表９】 ＫＦ種培地 微量元素ミックス＃２ １リットル当たり ｇ／リットル コーンスティープ ５ｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １．０ リカー トマトペースト ４０ｇ ＭｎＳＯ4 ・４Ｈ2 Ｏ １．０ オート麦粉 １０ｇ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．０２５ セレロース １０ｇ ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．１ 微量元素ミックス＃２ １０ml Ｈ3 ＢＯ3 ０．０５６ 蒸留水 １０００ml （ＮＨ4 ）6 Ｍｏ7 Ｏ24・ ４Ｈ2 Ｏ ０．０１９ pH６．８に調整（滅菌前） ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．２ ５０ml／バッフル付きでない ２５０ml三角フラスコ ０．６Ｎ ＨＣｌ １リットルに溶解する ２０分オートクレーブにかける （１２１℃、１５psi ）固形基質生産培地 固形基質培地はバッフル付きでない２５０ml三角フラス
コ中で調製するＢＲＦ 玄米 ５．０ｇ／フラスコ 基礎液体＃３ ２０．０ml／フラスコ １５分オートクレーブにかける（１２１℃、１５psi ） 蒸留水１５．０ml／フラスコを加える ２０分オートクレーブにかける（１２１℃、１５psi ）
コ中で調製するＢＲＦ 玄米 ５．０ｇ／フラスコ 基礎液体＃３ ２０．０ml／フラスコ １５分オートクレーブにかける（１２１℃、１５psi ） 蒸留水１５．０ml／フラスコを加える ２０分オートクレーブにかける（１２１℃、１５psi ）
【００５７】
【実施例】実施例１ 化合物Ａの製造 Ａ．ＭＦ５６２８の培養 滅菌した土壌中で保存した菌糸及び胞子の混合物を用
い、ＭＦ５６２８株を３ＫＦ種培地フラスコに植菌し
た。このＫＦ種フラスコを２５℃、２２０rpm 、湿度８
５％で７４時間インキュベートした。このインキュベー
ションの終わりに３本の種フラスコからの培養増殖をプ
ールし次に５０本のＢＲＦ固形生産培地フラスコの各々
に２．０mlずつ無菌的に移した。次いでこれらの生産フ
ラスコを２５℃、湿度８５％で２１日間静的にインキュ
ベートした。回収時に各ＢＲＦ生産フラスコにメチルエ
チルケトン（ＭＥＫ）５０mlを加え、固形増殖物を手で
小片にほぐした。更に菌塊を細くしまた溶媒と細胞の接
触を良くするために溶媒処理フラスコを旋回振盪機に戻
し２２０rpm で３０分間アジテーションした。振盪後、
フラスコの全内容物（固形分及び全部）を２リットルの
フラスコに注ぎ入れてこれらのフラスコの内容物をプー
ルした。
い、ＭＦ５６２８株を３ＫＦ種培地フラスコに植菌し
た。このＫＦ種フラスコを２５℃、２２０rpm 、湿度８
５％で７４時間インキュベートした。このインキュベー
ションの終わりに３本の種フラスコからの培養増殖をプ
ールし次に５０本のＢＲＦ固形生産培地フラスコの各々
に２．０mlずつ無菌的に移した。次いでこれらの生産フ
ラスコを２５℃、湿度８５％で２１日間静的にインキュ
ベートした。回収時に各ＢＲＦ生産フラスコにメチルエ
チルケトン（ＭＥＫ）５０mlを加え、固形増殖物を手で
小片にほぐした。更に菌塊を細くしまた溶媒と細胞の接
触を良くするために溶媒処理フラスコを旋回振盪機に戻
し２２０rpm で３０分間アジテーションした。振盪後、
フラスコの全内容物（固形分及び全部）を２リットルの
フラスコに注ぎ入れてこれらのフラスコの内容物をプー
ルした。
【００５８】Ｂ．化合物Ａの単離 上記ＢＲＦ培地中の２１日固形発酵を室温で更に１．５
時間攪拌しながらメチルエチルケトン（ＭＥＫ）２５０
０mlで抽出した。次いで抽出発酵をセライト（商品名）
で濾過した。ＭＥＫ抽出液の一部（３００ml）を真空中
で濃縮乾固した。得られた残留物をヘキサン５０mlとメ
タノール５０mlで分配した。メタノール層を真空中で濃
縮乾固した。残留物を１：１のＭｅＯＨ：１００mMＮａ
ＯＡＣ、pH４．８ １００mlに溶解し、再びヘキサン５
０mlで抽出した。次いで水性メタノール層を１：１のＭ
ｅＯＨ：１００mMＮａＯＡＣpH４．８（平衡バッファ）
で平衡化したBio Rad、ＡＧ４−×４（アセテート）
（容量＝２８ml、２５mm×５０mm、１００−２００メッ
シュ）のカラムに１５０ml／時間で負荷した。次いでカ
ラムを平衡バッファ１００ml次に６：４のアセトニトリ
ル（ＣＨ3 ＣＮ）：Ｈ2 Ｏ １００mlで洗浄した。カラ
ムを０．１６Ｎ硫酸を含む６：４のＣＨ3 ＣＮ：Ｈ2 Ｏ
で溶離して８mlづつの画分を集めた。粗化合物Ａを含有
している画分２１−３０（６．０−８．６カラム容量）
をプール（容量＝１００ml、pH２．５４）し、酢酸エチ
ル１００mlで抽出した。酢酸エチル層を真空中で濃縮し
て粗化合物Ａ３８４mgを得、これをメタノール２０mlに
溶解した。メタノール中の粗化合物Ａの一部（５．２m
l、１００mg）をＨＰＬＣ移動相１mlに溶解した。この
溶液をWhatman Partisil １０ ＯＤＳ３（２２mm×２
５cm）に０．１％Ｈ3 ＰＯ4 を含有する４５％ＣＨ3 Ｃ
Ｎ／５５％Ｈ2 Ｏを２０ml／分で流すクロマトグラフィ
ーにかけた。カラムを２２０nmでモニターし、０．４分
（８ml）で分画した。化合物Ａは画分４４−４９に溶離
してきた。分析用ＨＰＬＣ（Partisil ５ ＯＤＳ３、
４．６mm×２５cm、０．１％Ｈ3 ＰＯ4 を含有する５５
％ＣＨ3 ＣＮ／Ｈ2 Ｏ、流速１．０ml／分、２２０nmで
検出）は画分４４−４９が実質的に純粋な化合物、ｔｒ
＝４．２５’を含むことを示した。画分４４−４９をプ
ールし、等量（４８ml）のＣＨ2 Ｃｌ2 で抽出し、ＣＨ
2 Ｃｌ2層を除去し無水Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥し、真空中
で濃縮して純粋な化合物Ａ２０．６mgを得た。
時間攪拌しながらメチルエチルケトン（ＭＥＫ）２５０
０mlで抽出した。次いで抽出発酵をセライト（商品名）
で濾過した。ＭＥＫ抽出液の一部（３００ml）を真空中
で濃縮乾固した。得られた残留物をヘキサン５０mlとメ
タノール５０mlで分配した。メタノール層を真空中で濃
縮乾固した。残留物を１：１のＭｅＯＨ：１００mMＮａ
ＯＡＣ、pH４．８ １００mlに溶解し、再びヘキサン５
０mlで抽出した。次いで水性メタノール層を１：１のＭ
ｅＯＨ：１００mMＮａＯＡＣpH４．８（平衡バッファ）
で平衡化したBio Rad、ＡＧ４−×４（アセテート）
（容量＝２８ml、２５mm×５０mm、１００−２００メッ
シュ）のカラムに１５０ml／時間で負荷した。次いでカ
ラムを平衡バッファ１００ml次に６：４のアセトニトリ
ル（ＣＨ3 ＣＮ）：Ｈ2 Ｏ １００mlで洗浄した。カラ
ムを０．１６Ｎ硫酸を含む６：４のＣＨ3 ＣＮ：Ｈ2 Ｏ
で溶離して８mlづつの画分を集めた。粗化合物Ａを含有
している画分２１−３０（６．０−８．６カラム容量）
をプール（容量＝１００ml、pH２．５４）し、酢酸エチ
ル１００mlで抽出した。酢酸エチル層を真空中で濃縮し
て粗化合物Ａ３８４mgを得、これをメタノール２０mlに
溶解した。メタノール中の粗化合物Ａの一部（５．２m
l、１００mg）をＨＰＬＣ移動相１mlに溶解した。この
溶液をWhatman Partisil １０ ＯＤＳ３（２２mm×２
５cm）に０．１％Ｈ3 ＰＯ4 を含有する４５％ＣＨ3 Ｃ
Ｎ／５５％Ｈ2 Ｏを２０ml／分で流すクロマトグラフィ
ーにかけた。カラムを２２０nmでモニターし、０．４分
（８ml）で分画した。化合物Ａは画分４４−４９に溶離
してきた。分析用ＨＰＬＣ（Partisil ５ ＯＤＳ３、
４．６mm×２５cm、０．１％Ｈ3 ＰＯ4 を含有する５５
％ＣＨ3 ＣＮ／Ｈ2 Ｏ、流速１．０ml／分、２２０nmで
検出）は画分４４−４９が実質的に純粋な化合物、ｔｒ
＝４．２５’を含むことを示した。画分４４−４９をプ
ールし、等量（４８ml）のＣＨ2 Ｃｌ2 で抽出し、ＣＨ
2 Ｃｌ2層を除去し無水Ｎａ2 ＳＯ4 で乾燥し、真空中
で濃縮して純粋な化合物Ａ２０．６mgを得た。
【００５９】実施例２ 化合物Ｃの製造 Ａ．ＭＦ５６２８の培養 培養ＭＦ５６２８を実施例１、工程Ａの方法に従って培
養した。 Ｂ．化合物Ｃの単離 実施例１パートＢのＭＥＫ抽出液１５００ml部を化合物
Ａの調製について記載したようにBio Rad ＡＧ４×４で
処理して粗化合物Ａ、Ｃ及びＤの混合物１．９４ｇを得
た。この混合物の一部（０．９５ｇ）をＰ．Ｃ．Inc.
（１１８０５KimPlace.Potomac,Maryland. ＵＳＡ）に
よって製造された高速向流クロマトグラフィーによって
分離した。粗混合液を真空中で濃縮乾固し、ヘキサン５
部、酢酸エチル５部、メタノール５部、０．１％水性Ｈ
3 ＰＯ4 ５部からなる溶媒系の上相４mlと下相４mlにそ
れぞれ溶解した。この試料を上記溶媒系の下相で完全に
満たした＃１０分取用多層コイル（Ｐ．Ｃ．Inc.）の末
端に加えた。次いでこのコイルを上記溶媒系の上相を用
いてカラムの末端からカラムの先端に３．０ml／分で前
向きの回転速度８００rpm で溶出した。画分を７．５ml
づつ集め、化合物Ａの調製について実施例１パートＢで
記載したようにＲＰ ＨＰＬＣによって分析した。画分
７５−９５は化合物Ｃ９５mgを含有した。
養した。 Ｂ．化合物Ｃの単離 実施例１パートＢのＭＥＫ抽出液１５００ml部を化合物
Ａの調製について記載したようにBio Rad ＡＧ４×４で
処理して粗化合物Ａ、Ｃ及びＤの混合物１．９４ｇを得
た。この混合物の一部（０．９５ｇ）をＰ．Ｃ．Inc.
（１１８０５KimPlace.Potomac,Maryland. ＵＳＡ）に
よって製造された高速向流クロマトグラフィーによって
分離した。粗混合液を真空中で濃縮乾固し、ヘキサン５
部、酢酸エチル５部、メタノール５部、０．１％水性Ｈ
3 ＰＯ4 ５部からなる溶媒系の上相４mlと下相４mlにそ
れぞれ溶解した。この試料を上記溶媒系の下相で完全に
満たした＃１０分取用多層コイル（Ｐ．Ｃ．Inc.）の末
端に加えた。次いでこのコイルを上記溶媒系の上相を用
いてカラムの末端からカラムの先端に３．０ml／分で前
向きの回転速度８００rpm で溶出した。画分を７．５ml
づつ集め、化合物Ａの調製について実施例１パートＢで
記載したようにＲＰ ＨＰＬＣによって分析した。画分
７５−９５は化合物Ｃ９５mgを含有した。
【００６０】実施例３ 化合物Ｄの製造 Ａ．ＭＦ５６２８の培養 ＭＦ５６２８株を実施例１、工程Ａの方法に従って培養
した。 Ｂ．化合物Ｄの単離 化合物Ｄの単離は実施例２に記載したように行なった。
高速向流分離の画分１２０−１６０は粗化合物Ｄ３０mg
を含有した。この混合液の半量（１５mg）を更に溶液Ａ
及びＢの１：１混合液を用いて４．０ml／分で溶出する
カラムPhenomenex Ultracarb５ ＯＤＳ３０、１５cm×
１０mmカラムによるクロマトグラフィーで精製した。溶
液Ａはアセトニトリル４００ml及び０．１％Ｈ3 ＰＯ4
を含む水６００mlであり溶液Ｂはアセトニトリル７５０
ml及び０．１％Ｈ3 ＰＯ4 を含む水２５０mlからなる。
各々２mlづつ画分を集め番号２４−２７をプールし、等
量のＨ2 Ｏを加え溶液を等量のＥｔＯＡｃで抽出した。
ＥｔＯＡｃ層を真空中で濃縮乾固し、化合物Ｄ １０．
２mgを含有した。
した。 Ｂ．化合物Ｄの単離 化合物Ｄの単離は実施例２に記載したように行なった。
高速向流分離の画分１２０−１６０は粗化合物Ｄ３０mg
を含有した。この混合液の半量（１５mg）を更に溶液Ａ
及びＢの１：１混合液を用いて４．０ml／分で溶出する
カラムPhenomenex Ultracarb５ ＯＤＳ３０、１５cm×
１０mmカラムによるクロマトグラフィーで精製した。溶
液Ａはアセトニトリル４００ml及び０．１％Ｈ3 ＰＯ4
を含む水６００mlであり溶液Ｂはアセトニトリル７５０
ml及び０．１％Ｈ3 ＰＯ4 を含む水２５０mlからなる。
各々２mlづつ画分を集め番号２４−２７をプールし、等
量のＨ2 Ｏを加え溶液を等量のＥｔＯＡｃで抽出した。
ＥｔＯＡｃ層を真空中で濃縮乾固し、化合物Ｄ １０．
２mgを含有した。
【００６１】実施例４ アンモニウム塩の製造 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ミリモル試料を酢酸エ
チル１０mlに溶解する。得られた液体を気体のアンモニ
アで飽和すると溶液からアンモニウム塩が沈殿する。
チル１０mlに溶解する。得られた液体を気体のアンモニ
アで飽和すると溶液からアンモニウム塩が沈殿する。
【００６２】実施例５ カリウム塩の製造 メタノール１０ml中に溶解した式（Ｉ）の化合物の遊離
酸０．１ミリモルを水酸化カリウム０．３ミリモルを含
有する水性又はメタノール性溶液で処理する。溶媒を蒸
発させてトリカリウム塩を得る。水酸化カリウム０．１
−０．３ミリモルを加えるとそれに対応してモノカリウ
ム、ジカリウム及びトリカリウム塩の混合物を得、この
組成は加える水酸化カリウムの正確な量に左右される。
同様の方法でナトリウム及びリチウム塩を生成させるこ
とができる。
酸０．１ミリモルを水酸化カリウム０．３ミリモルを含
有する水性又はメタノール性溶液で処理する。溶媒を蒸
発させてトリカリウム塩を得る。水酸化カリウム０．１
−０．３ミリモルを加えるとそれに対応してモノカリウ
ム、ジカリウム及びトリカリウム塩の混合物を得、この
組成は加える水酸化カリウムの正確な量に左右される。
同様の方法でナトリウム及びリチウム塩を生成させるこ
とができる。
【００６３】実施例６ カルシウム塩の製造 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ミリモルの６：４のメ
タノール：水溶液２０mlを水酸化カルシウム０．１ミリ
モルの水溶液で処理する。溶媒を蒸発させて対応するカ
ルシウム塩を得る。
タノール：水溶液２０mlを水酸化カルシウム０．１ミリ
モルの水溶液で処理する。溶媒を蒸発させて対応するカ
ルシウム塩を得る。
【００６４】実施例７ エチレンジアミン塩の製造 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ミリモルのメタノール
溶液１０mlをエチレンジアミン０．１ミリモルで処理す
る。溶媒を蒸発させてエチレンジアミン塩を得る。この
方法はＮ，Ｎ”−ジベンジルエチレンジアミン塩の製造
にも使用することができる。
溶液１０mlをエチレンジアミン０．１ミリモルで処理す
る。溶媒を蒸発させてエチレンジアミン塩を得る。この
方法はＮ，Ｎ”−ジベンジルエチレンジアミン塩の製造
にも使用することができる。
【００６５】実施例８ トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩の製造 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ミリモルのメタノール
溶液１０mlに、メタノール１０mlに溶解したトリス（ヒ
ドロキシメチル）アミノメタン０．１−０．３ミリモル
を加える。溶媒を蒸発させると対応する塩を得、その正
確な組成は加えられるアミンのモル比によって決まる。
同様にＬ−オルニチン、Ｌ−リシン及びＮ−メチルグル
タミンの塩が製造される。
溶液１０mlに、メタノール１０mlに溶解したトリス（ヒ
ドロキシメチル）アミノメタン０．１−０．３ミリモル
を加える。溶媒を蒸発させると対応する塩を得、その正
確な組成は加えられるアミンのモル比によって決まる。
同様にＬ−オルニチン、Ｌ−リシン及びＮ−メチルグル
タミンの塩が製造される。
【００６６】実施例９ Ｌ−アルギニン塩の製造 式（Ｉ）の化合物の遊離酸０．１ミリモルの６：４のメ
タノール：水溶液２０mlをＬ−アルギニン０．１−０．
３ミリモルの水溶液で処理する。溶媒を蒸発させると標
記塩を得、この正確な組成は式（Ｉ）の遊離酸に対して
用いられるアミノ酸のモル比によって決まる。同様にＬ
−オルニチン、Ｌ−リシン及びＮ−メチルグルタミンの
塩が製造される。
タノール：水溶液２０mlをＬ−アルギニン０．１−０．
３ミリモルの水溶液で処理する。溶媒を蒸発させると標
記塩を得、この正確な組成は式（Ｉ）の遊離酸に対して
用いられるアミノ酸のモル比によって決まる。同様にＬ
−オルニチン、Ｌ−リシン及びＮ−メチルグルタミンの
塩が製造される。
【００６７】実施例１０ 化合物Ｂ（方法１）の製造 化合物Ａ（０．６mg）をジエチルエーテル１mlに溶解
し、０℃で攪拌した。この溶液が黄色になるまでエーテ
ル性シアナミドを滴下した。この溶液を窒素気流下で蒸
発させて化合物Ｂを得た。化合物Ｃ及びＤから出発する
と上記方法に従って対応するトリメチルエステルが製造
される。
し、０℃で攪拌した。この溶液が黄色になるまでエーテ
ル性シアナミドを滴下した。この溶液を窒素気流下で蒸
発させて化合物Ｂを得た。化合物Ｃ及びＤから出発する
と上記方法に従って対応するトリメチルエステルが製造
される。
【００６８】実施例１１ 化合物Ｂ（方法２）の製造 化合物Ａ５mgを含むメタノール（５ml）に新しく蒸留し
たジアゾメタン（２．０５Ｍ）を含むエーテル２mlを加
えた。５分後溶媒を除去するとトリメチルエステル（化
合物Ｂ）を油状物として得る。化合物Ｃ及びＤから出発
すると上記方法に従って対応するトリメチルエステルが
製造される。
たジアゾメタン（２．０５Ｍ）を含むエーテル２mlを加
えた。５分後溶媒を除去するとトリメチルエステル（化
合物Ｂ）を油状物として得る。化合物Ｃ及びＤから出発
すると上記方法に従って対応するトリメチルエステルが
製造される。
【００６９】実施例１２ 化合物Ｂ（方法３）の製造 化合物Ａ５mgを含むテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）０．
５mlを３当量のＮ，Ｎ’−ジイソプロピル−Ｏ−ベンジ
ルイソウレアで室温において１８時間処理する。次いで
反応混合液を−１５℃に冷却し、濾過してウレアを除去
する。濾液を減圧下で濃縮して化合物Ｂを得る。実施例
１２の方法はまた適切に置換されたイソウレアを用いる
１）メチル及び他の低級アルキル及び２）置換ベンジル
エステルのような他のエステル誘導体の製造に適して
る。用いられる置換イソウレアの当量数を変更すること
によってモノ、ジ及びトリ置換エステルが選択的に製造
される。実施例１０の方法はまた化合物Ｃ及びＤのモ
ノ、ジ及びトリ置換エステルの製造に適している。
５mlを３当量のＮ，Ｎ’−ジイソプロピル−Ｏ−ベンジ
ルイソウレアで室温において１８時間処理する。次いで
反応混合液を−１５℃に冷却し、濾過してウレアを除去
する。濾液を減圧下で濃縮して化合物Ｂを得る。実施例
１２の方法はまた適切に置換されたイソウレアを用いる
１）メチル及び他の低級アルキル及び２）置換ベンジル
エステルのような他のエステル誘導体の製造に適して
る。用いられる置換イソウレアの当量数を変更すること
によってモノ、ジ及びトリ置換エステルが選択的に製造
される。実施例１０の方法はまた化合物Ｃ及びＤのモ
ノ、ジ及びトリ置換エステルの製造に適している。
【００７０】質量スペクトルデータ Finnigan−ＭＡＴモデルＭＡＴ２１２（電子衝撃、Ｅ
Ｉ、９０eV）及びＴＳＱ７０Ｂ（高速原子衝撃、ＦＡ
Ｂ、ＥＩ、７０eV）質量分析計により質量スペクトルを
記録した。正確な質量測定は内部標準としてパーフルオ
ロケロセン（ＰＦＫ）を用い、高分解能（ＨＲ−ＥＩ）
で行なった。ＦＡＢモードはマトリックスとして酢酸リ
チウムで処理した５：１のジチオスレイトール／ジチオ
−エリスリトール（ＤＴＴ／ＤＴＥ、陰イオンモード）
ＤＴＴ／ＤＴＥ及び酢酸で処理したチオグリセリン（陽
イオンモード）を用いた。 13Ｃ ＮＭＲデータ Varian ＸＬ−３００分光計によりＣＤ3 ＯＤ中７５Ｍ
Hzの13Ｃ ＮＭＲスペクトルを記録した。ケミカルシフ
トは内部標準として４９．０ppm （ＣＤ3 ＯＤ）の溶媒
ピークに相対するppm として示す。 1 Ｈ ＮＭＲスペクトル Varian ＸＬ−３００分光計により３００ＭHzの1 Ｈ
ＮＭＲスペクトルを記録した。ケミカルシフトは内部標
準として３．３０ppm の溶媒ピークに相対するppm とし
て示す。
Ｉ、９０eV）及びＴＳＱ７０Ｂ（高速原子衝撃、ＦＡ
Ｂ、ＥＩ、７０eV）質量分析計により質量スペクトルを
記録した。正確な質量測定は内部標準としてパーフルオ
ロケロセン（ＰＦＫ）を用い、高分解能（ＨＲ−ＥＩ）
で行なった。ＦＡＢモードはマトリックスとして酢酸リ
チウムで処理した５：１のジチオスレイトール／ジチオ
−エリスリトール（ＤＴＴ／ＤＴＥ、陰イオンモード）
ＤＴＴ／ＤＴＥ及び酢酸で処理したチオグリセリン（陽
イオンモード）を用いた。 13Ｃ ＮＭＲデータ Varian ＸＬ−３００分光計によりＣＤ3 ＯＤ中７５Ｍ
Hzの13Ｃ ＮＭＲスペクトルを記録した。ケミカルシフ
トは内部標準として４９．０ppm （ＣＤ3 ＯＤ）の溶媒
ピークに相対するppm として示す。 1 Ｈ ＮＭＲスペクトル Varian ＸＬ−３００分光計により３００ＭHzの1 Ｈ
ＮＭＲスペクトルを記録した。ケミカルシフトは内部標
準として３．３０ppm の溶媒ピークに相対するppm とし
て示す。
【００７１】構造Ｉの化合物の物理的性質 化合物Ａ−構造（Ｉ）のＲがｐ−ヒドロキシベンジルで
あり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物。質量スペクトルデータ この化合物はＦＡＢ ＭＳ（ｍ／ｚ５９０に〔Ｍ−Ｈ〕
- 及びｍ／ｚ５９２に〔Ｍ＋Ｈ〕+ が見られる）により
分子量５９１を有する。分子式はトリメチルエステルの
正確な質量測定によって求めた（Ｃ33Ｈ45ＮＯ8 に対す
る計算値５８３．３１４５Ｍ−（ＣＨ3 ＯＨ＋Ｈ2
Ｏ）、実測値５８３．３１３１）。
あり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物。質量スペクトルデータ この化合物はＦＡＢ ＭＳ（ｍ／ｚ５９０に〔Ｍ−Ｈ〕
- 及びｍ／ｚ５９２に〔Ｍ＋Ｈ〕+ が見られる）により
分子量５９１を有する。分子式はトリメチルエステルの
正確な質量測定によって求めた（Ｃ33Ｈ45ＮＯ8 に対す
る計算値５８３．３１４５Ｍ−（ＣＨ3 ＯＨ＋Ｈ2
Ｏ）、実測値５８３．３１３１）。
【化５】
【００７２】化合物Ｂ−化合物Ａのトリメチルエステル
即ち構造（Ｉ）のＲがｐ−ヒドロキシベンジルであり、
Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々メチルである化合物。質量スペクトルデータ この化合物はＦＡＢ−ＭＳにより分子量６３３を有する
（ｍ／ｚ６４０に〔Ｍ＋Ｌｉ〕+ がある）。
即ち構造（Ｉ）のＲがｐ−ヒドロキシベンジルであり、
Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々メチルである化合物。質量スペクトルデータ この化合物はＦＡＢ−ＭＳにより分子量６３３を有する
（ｍ／ｚ６４０に〔Ｍ＋Ｌｉ〕+ がある）。
【化６】
【００７３】化合物Ｃ−構造（Ｉ）のＲがベンジルであ
り、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物。質量スペクトルデータ ：この化合物はＦＡＢ−ＭＳによ
り分子量５７５を有する。
り、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である化合物。質量スペクトルデータ ：この化合物はＦＡＢ−ＭＳによ
り分子量５７５を有する。
【化７】
【化８】
【００７４】化合物Ｄ−構造（Ｉ）のＲが−ＣＨ2 −３
−インドリルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素で
ある化合物。質量スペクトルデータ この化合物はＦＡＢ−ＭＳにより分子量６１４を有す
る。
−インドリルであり、Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素で
ある化合物。質量スペクトルデータ この化合物はＦＡＢ−ＭＳにより分子量６１４を有す
る。
【化９】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 ９０７７３０ (32)優先日 1992年７月９日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (72)発明者 ガイ エッチ．ハリス アメリカ合衆国，07016 ニュージャーシ ィ，クランフォード，シャドウローン ウ ェイ 308 (72)発明者 リーユアン フアング アメリカ合衆国，07060 ニュージャーシ ィ，ウォッチュング，ウィル レーン 33 (72)発明者 ロザリンド エフ．ジェンキンス アメリカ合衆国，08873 ニュージャーシ ィ，ソマーセット，ラファイエット アヴ ェニュー 81 (72)発明者 イー．トレィシー ターナー ジョーンズ アメリカ合衆国，92075 カリフォルニア, ソロナビーチ，ハイランド ドライヴ 805 (72)発明者 ユー リン コング アメリカ合衆国，08820 ニュージャーシ ィ，エジソン，ブライアント アヴェニュ ー 57 (72)発明者 マリア サンドリノ メインツ アメリカ合衆国，08873 ニュージャーシ ィ，ソマーセット，アボット ロード 24 (72)発明者 メアリ ナリン オムステッド アメリカ合衆国，07934 ニュージャーシ ィ，グラッドストン，ディア パス 13 (72)発明者 マリア テレサ ディエス スペイン国，28010 マドリッド，シー ／オリド，４ (72)発明者 フェルナンド ペラエツ スペイン国，28038 マドリッド，シー ／カミノ デ ヴァルデッリバス，10 (72)発明者 ジェームス エー．ミリガン アメリカ合衆国，08859 ニュージャーシ ィ，パーリン，パークウェイ プレイス ８ (72)発明者 ジャネット シー．オニシ アメリカ合衆国，07092 ニュージャーシ ィ，マウンテンサイド，チェリー ヒル ロード 350 (72)発明者 ラッセル ビー．リンガム アメリカ合衆国，07060 ニュージャーシ ィ，ウォッチュング，ヨアンナ レーン ５ (72)発明者 デボラ ツィンク アメリカ合衆国，07726 ニュージャーシ ィ，マナラパン，ブレンハイム ロード 37
Claims (10)
- 【請求項１】 構造式（Ｉ） 【化１】 〔式中Ｒは 【化２】 であり；Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 は各々独立して ａ）Ｈ ｂ）Ｃ1-5 アルキル又は ｃ）i)フェニル、又は ii)メチル、メトキシ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、Ｆ又はヒドロ
キシで置換されたフェニルで置換されたＣ1-5 アルキル
である〕を有する化合物又は式（Ｉ）の化合物の薬学的
に許容しうる塩。 - 【請求項２】 Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々水素である請
求項１記載の化合物又はその薬学的に許容しうるモノ、
ジ又はトリ塩。 - 【請求項３】 Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々メチルである
請求項１記載の化合物。 - 【請求項４】 請求項１記載の化合物の非毒性の治療的
に有効な量及び薬学的に許容しうる担体からなる医薬組
成物。 - 【請求項５】 胃腸管に再吸収されない形で胆汁酸を結
合することができる薬学的に許容しうる非毒性カチオン
ポリマーと組合わせた請求項１記載の化合物の非毒性の
治療的に有効な量及び薬学的に許容しうる担体とからな
る医薬組成物。 - 【請求項６】ａ）ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、 ｂ）ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼ阻害剤、 ｃ）スクアレンエポキシダーゼ阻害剤、 ｄ）プロブコール、 ｅ）ナイアシン、 ｆ）ゲンフィブロジル、 ｇ）クロフィブレート及び ｈ）ＬＤＬ−レセプター遺伝子誘導物質 からなる群から選択されるコレステロール低下剤の非毒
性の治療的に有効な量と組合わせた請求項１記載の化合
物の非毒性の治療的に有効な量からなる医薬組成物。 - 【請求項７】 高コレステロール血症の治療方法であっ
て請求項１記載の化合物の非毒性の治療的に有効な量を
そのような治療を必要としている患者に投与することか
らなる方法。 - 【請求項８】 真菌増殖の阻止方法であって増殖が抑制
されるべき領域に請求項１記載の化合物の抗真菌的に有
効な量を使用することからなる方法。 - 【請求項９】 ファルネシル−タンパク質トランスフェ
ラーゼ及び癌遺伝子タンパク質Ｒａｓを阻害する方法で
あって請求項１記載の化合物の治療的に有効な量をその
ような治療を必要としている患者に投与することからな
る方法。 - 【請求項１０】 Ｚ1 、Ｚ2 及びＺ3 が各々Ｈである請
求項１記載の化合物の製造方法であってトリコデルマ・
ビリデ（ＡＴＣＣ７４０８４）又はその変異株を該化合
物の生成に適した条件下で培養し、化合物を回収するこ
とからなる方法。
Applications Claiming Priority (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US73995091A | 1991-08-02 | 1991-08-02 | |
| US73975891A | 1991-08-02 | 1991-08-02 | |
| US73993291A | 1991-08-02 | 1991-08-02 | |
| US739932 | 1991-08-02 | ||
| US739758 | 1991-08-02 | ||
| US739950 | 1991-08-02 | ||
| US90773092A | 1992-07-09 | 1992-07-09 | |
| US907730 | 1992-07-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07173123A true JPH07173123A (ja) | 1995-07-11 |
Family
ID=27505616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4206802A Pending JPH07173123A (ja) | 1991-08-02 | 1992-08-03 | コレステロール低下剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0526936A3 (ja) |
| JP (1) | JPH07173123A (ja) |
| CA (1) | CA2074999A1 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005005372A1 (ja) * | 2003-07-09 | 2005-01-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 抗ｈｃｖ作用を有する化合物およびその製法 |
| WO2006016657A1 (ja) * | 2004-08-11 | 2006-02-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hcv感染症を治療または予防するための薬剤 |
| JP2006077004A (ja) * | 2004-08-11 | 2006-03-23 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 抗ｈｃｖ作用を有する化合物およびそれを含む医薬組成物 |
| JP2006232852A (ja) * | 2003-02-12 | 2006-09-07 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | ウイルス治療薬 |
| JP2013166776A (ja) * | 2006-07-05 | 2013-08-29 | Univ D'aix-Marseille | ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を含む治療剤 |
| US8957199B2 (en) | 2008-11-26 | 2015-02-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Oligoribonucleotide or peptide nucleic acid capable of inhibiting activity of hepatitis C virus |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5783593A (en) * | 1993-11-04 | 1998-07-21 | Abbott Laboratories | Inhibitors of squalene synthetase and protein farnesyltransferase |
| US5631401A (en) * | 1994-02-09 | 1997-05-20 | Abbott Laboratories | Inhibitors of protein farnesyltransferase and squalene synthase |
| ES2209140T3 (es) | 1997-06-09 | 2004-06-16 | Takara Bio Inc. | Sustancias tkr2449 fisiologicamente activas, procedimientos para producir las mismas y microorganismo. |
| CN100502853C (zh) * | 2003-02-12 | 2009-06-24 | 中外制药株式会社 | 抗病毒药 |
| MY141506A (en) * | 2003-02-12 | 2010-05-14 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Virus therapeutic drug |
| CN102247342B (zh) * | 2011-05-16 | 2013-10-30 | 中国科学院化学研究所 | 烷基异脲类化合物的新用途 |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4231938A (en) * | 1979-06-15 | 1980-11-04 | Merck & Co., Inc. | Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation |
| US4847271A (en) | 1986-01-27 | 1989-07-11 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic β-lactones |
| US4751237A (en) | 1986-01-27 | 1988-06-14 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic beta-lactones |
| US4816477A (en) | 1987-05-26 | 1989-03-28 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic β-lactones |
| US4806564A (en) | 1987-05-26 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Antihypercholesterolemic beta-lactones |
| NZ227042A (en) | 1987-11-27 | 1991-05-28 | Banyu Pharma Co Ltd | Substituted alkylamine derivatives and pharmaceutical compositions |
| US4871721A (en) | 1988-01-11 | 1989-10-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Phosphorus-containing squalene synthetase inhibitors |
| EP0375133A1 (en) * | 1988-11-14 | 1990-06-27 | The Upjohn Company | Alpha-amino-indole-3-acetic acids useful as anti-diabetic, anti-obesity and anti-atherosclerotic agents |
| US5064856A (en) | 1989-07-31 | 1991-11-12 | Merck & Co., Inc. | Novel hmg-coa synthase inhibitors |
| US4983597A (en) | 1989-08-31 | 1991-01-08 | Merck & Co., Inc. | Beta-lactams as anticholesterolemic agents |
| US5025003A (en) | 1989-09-18 | 1991-06-18 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Isoprenoid phosphinylformic acid squalene synthetase inhibitors |
| US5132320A (en) | 1990-03-21 | 1992-07-21 | Merck & Co., Inc. | Squalene synthetase inhibitors |
| US5096923A (en) | 1990-03-21 | 1992-03-17 | Merck & Co., Inc. | Novel squalene synthetase inhibitors |
| US5120729A (en) | 1990-06-20 | 1992-06-09 | Merck & Co., Inc. | Beta-lactams as antihypercholesterolemics |
| US5026554A (en) | 1990-09-13 | 1991-06-25 | Merck & Co., Inc. | Method of inhibiting fungal growth using squalene synthetase inhibitors |
| NZ239663A (en) * | 1990-09-13 | 1993-07-27 | Merck & Co Inc | Ester derivatives of dioxabicyclo(3,2,1)-octane, medicaments, and a fungus which makes them |
| US5102907A (en) | 1990-09-13 | 1992-04-07 | Merck & Co., Inc. | Novel squalene synthetase inhibitors |
| US5182298A (en) | 1991-03-18 | 1993-01-26 | Merck & Co., Inc. | Cholesterol lowering agents |
| US5135935A (en) | 1991-05-17 | 1992-08-04 | Merck & Co., Inc. | Squalene synthetase inhibitors |
-
1992
- 1992-07-25 EP EP19920202300 patent/EP0526936A3/en not_active Withdrawn
- 1992-07-30 CA CA002074999A patent/CA2074999A1/en not_active Abandoned
- 1992-08-03 JP JP4206802A patent/JPH07173123A/ja active Pending
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| JP2006232852A (ja) * | 2003-02-12 | 2006-09-07 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | ウイルス治療薬 |
| WO2005005372A1 (ja) * | 2003-07-09 | 2005-01-20 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 抗ｈｃｖ作用を有する化合物およびその製法 |
| US7378446B2 (en) | 2003-07-09 | 2008-05-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Compound having anti-HCV activity and process for producing the same |
| WO2006016657A1 (ja) * | 2004-08-11 | 2006-02-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Hcv感染症を治療または予防するための薬剤 |
| JP2006077004A (ja) * | 2004-08-11 | 2006-03-23 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 抗ｈｃｖ作用を有する化合物およびそれを含む医薬組成物 |
| US8183005B1 (en) | 2004-08-11 | 2012-05-22 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Pharmaceutical agents for treating HCV infections |
| JP2013166776A (ja) * | 2006-07-05 | 2013-08-29 | Univ D'aix-Marseille | ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤およびファルネシルピロリン酸合成酵素阻害剤を含む治療剤 |
| US8957199B2 (en) | 2008-11-26 | 2015-02-17 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Oligoribonucleotide or peptide nucleic acid capable of inhibiting activity of hepatitis C virus |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2074999A1 (en) | 1993-02-03 |
| EP0526936A2 (en) | 1993-02-10 |
| EP0526936A3 (en) | 1993-05-05 |
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|---|---|---|---|
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