JPH0420293A - リン脂質誘導体の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はリポソーム形成能にすぐれたホスファチジル基
を２個有するリン脂質誘導体をホスホリパーゼＤを用い
て好収率で製造する方法に関する。

ホスファチジル基を２個有するリン脂質としては天然に
はジホスフブチジルリセロール（カルシオリビン）か知
られている。このリン脂質は動植物や微生物に広く分布
しているが、その含有率が低いため大量に得ることは困
難である。また、キャベツのホスホリパーゼＤのホスフ
ァグージル基転移活性を利用して、ホスファチジルグリ
セロール２分子からカルシオリビンを生成する報告（Ｂ
ｌｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、、　２１０
．　３５０．　１９７０）もみられるが、この反応によ
るカルシオリビンの生成はごく僅かである。

一方、本発明者らは、キャベツのホスホリパーゼＤとは
ホスファチジル基転移反応において著しく性質か異なる
ホスホリパーゼＤを発見し、そのホスホリパーゼＤを用
いたリン脂質誘導体の製造法を提案した（特開昭５９−
１８７７９２号公報、特開昭６Ｃ１−４１４９４号公報
及び特開昭６１８８８８６号公報参照）。この提案では
、従来公知のキャベツのホスホリパーゼＤでは転移しな
い各種アルコール化合物の一級アルコール基に対してホ
スファチジル基転移反応を生起することが開示されてい
る。例えば、特開昭６１−８８８８６号公報には、リン
脂質と多価アルコールとを該ホスホリパーゼＤの存在下
に反応させることが開示されているが、そこに開示され
ている具体的方法によっては、ホスファチジル基を２個
有するリン脂質誘導体（以下、「二量体リン脂質」とい
うことかある）を好収率で取得することは困難である。

そこで、本発明者らは、リポソーム形成能にすぐれた二
量体リン脂質を好収率で製造する方法につき鋭意検討を
行なった結果、今回、リン脂質と多価アルコールとをホ
スホリパーゼＤの存在下に反応させることにより得られ
るホスファチジル基を１個有するリン脂質（以下、「−
量体リン脂質」ということがある）に、新たにリン脂質
を加えてホスホリパーゼＤの存在下にさらに反応を行な
うと、全く意外にも、二量体リン脂質が極めて良好な収
率で得られることを見い出し、本発明を完成するに至っ
た。

かくして、本発明によれば、式 ％式％ 式中、 Ｒ１はアルキル基又はアシル基を表わし、Ｒ２は水素原
子、アルキル基又はアシル基を表わし、 Ｒ３はアルコキシ基、水酸基もしくはオキソ基で置換さ
れていてもよいアルキレン基又は式−０（−Ｙ−０−）
−７の基を表わし、ここでＹは置換されていてもよい炭
素数２〜４のアルキレン基を表わし、ｎは２〜５０、好
ましくは２〜３０であり、 Ｍは水素又は塩形成性原子もしくは原子団を表わす、 で示されるモノホスファチジル化合物（−量体リン脂質
）を式 ％式％ Ｒ１、Ｒ”及びＭは前記の意味を有し、Ｘは−ＣＨ２Ｃ
Ｈ３Ｎ”（ＣＨ３）３・０Ｈ−１ＣＨ２ＣＨ、Ｎ　Ｈ２
又は−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ、ＯＨを表わず、 で示されるリン脂質とホスホリパーゼＤの存在下に反応
させることを特徴とする式 ％式％ ： 式中、 Ｒ’、Ｒ２、Ｒ”及びＭは前記の意味を有する で示されるリン脂質誘導体の製造法が提供される。

上記式中、［−アルキル基」は直鎖状又は分岐鎖状のい
ずれであってもよく、例えは、メチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、イソブグル、５ｅｃ−ブチ
ル、ｔｅｒｌ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル
、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、デシル、ウ
ンデシル、ドデシル、テトラヒドロ、ベンタデノル、ヘ
プタデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル
、エイコシル、ヘネイコ／ル、トコノル、トリコシル、
ヘキサコシル、トリアコンチル、オフタコシル等が挙げ
られる。Ｒ１及び／又はＲ２が表わしうるアルキル基と
しては一般に炭素数か６〜３２、好ましくは８〜２４の
比較的長鎖のものか適している。

「アシル基」は有機酸の酸官能基部分からＯＨを除いた
残基であり、代表的にはＲ’−Ｃｏ−で示される基が包
含される。ここでＲ４は有機カルボン酸からカルボキシ
ル基（ＣＯＯＨ）を除いた残基を表わし、例えば、上記
した如きアルキル基の他に、ヘプテニル、オクテニル、
ノネイル、ウンデケニル、］・リデケニル、ペンタデケ
ニル、ヘプタデシル、ノナデケニル、へ不イコセニル、
トリコセニル、ｌ−リアンコンテニル、ペンタデカジェ
ニル、ヘプタデカジェニル、ノナデカジェニル、ヘネイ
コザジエニル、ノナデカトリエニル、ヘプタデカテトラ
エニル、ノナデカＪテトラエニル、ノリデカペンタエニ
ル、エイコサペンタエニル、へ不イコヘキサエニル等の
アルケニル基か挙げられる。しかして、そのようなアシ
ル基の具体例として、例えは、ヘキヅノイル、オクタノ
イル、デカノイル、ラウロイル、ミリストイル、バルミ
トイル、パルミトオレオイル、オレオイル、ステアロイ
ル、リルオイル、リルノイル、アラキトノイル、ベヘノ
イル、ドコヅヘギサノイル、エイコザペンタノイル等か
挙げられる。

［アルコキン基−１はアルキル部分が前記の意味を有す
るアルキル、オキソ基であり、例えば、メトキン、工Ｉ
・キン、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキ
ン等か挙げられ、一般に低級のものが好ましい。

ここで「低級」とは、この語が付された基又は化合物の
炭素数か６個以下、好ましくは４個以下であることを意
味する。

「アルキレン基」もまた直鎖状又は分岐鎖状いずれのタ
イプのものであってもよく、例えはメヂレン、エチレン
、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘギンレン、へ
ブチレン、オクチレン、ブチレン、ドデシレン、テトラ
ブチレン、ヘキサデシレン、オクタブチレン、エイコシ
レン、ドコシレン等が挙げられ、Ｒ３によって表わされ
うるアルキレン基としては一般に炭素数か１〜２０、好
ましくは１〜１０のものが適している。しかして、Ｒ３
によって表わされうる「アルコキシ基、水酸基モジくは
オキソ基で置換されたアルキレン基」の具体例には、ヒ
ドロキシメチレン、■、２−ジヒドロキンエチレン、Ｉ
、２．３−トリヒドロキンプロピレン、１　２．３　４
−テトラヒドロキンブチレン、１，２．３　４　５−ペ
ンタヒドロキシペンヂレン、メトキ／メチレン、１−メ
トキシエヂレン、１−オキソ−２，３，４−トリヒドロ
キシブチレン、■−オキソー２，３−ジヒドロキシプロ
ピレン、１−オキソ−２，３，４，５テトラヒドロキン
ペンチレン等か包含される。また、Ｙによって表わされ
る「置換されていてもよい炭素数２〜４のアルキレン基
」におけるアルキレン基上の置換基としては、例えは、
メチル、工チル、プロピル、水酸基等が挙げられる。し
かして、上記置換されていてもよい炭素数２〜４のアル
キレン基の具体例には、２−ヒドロキシ−プロピレン、
２．３−ジヒドロキン−ブチレン、ｌメチルプロピレン
、１−エチルプロピレン、■プロピルプロピレン、ｌ−
メチルブチレン等を例示することができる。

さらに、「塩形成性原子もしくは原子団」としては、例
えば、リチウム、カリウム、ナトリウムなとのアルカリ
金属；マグネシウム、カルシウム、バリウムなどのアル
カリ土類金属；アンモニウム；メチルアンモニウム、エ
チルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ジエチルア
ンモニウム、トリメチルアンモニウム、Ｉ−ジエチルア
ンモニウムなどの、モノ〜、ジーもしくはｌ・リーアル
キルアンモニウム基ニトリエタノールアンモニウム、ジ
ェタノールアンモニウムなとのアルキルアルコールアン
モニウム基等が挙げられる。

本発明の方法において、前記式（Ｉ）の−量体リン脂質
と前記式（ＴＩ）のリン脂質との反応に使用されるホス
ホリパーゼＤは、第一級水酸基を有する化合物にホスフ
ァチジル基を転移する作用を有するものである限り特に
制限はなく、動物、植物又は微生物由来の各種の酵素を
使用することかでさ、例えば、ノカルデイオプシス属の
微生物が生産するホスホリパーゼＤ（特公昭６３−６２
１９５号公報参照）、アクヂノマデュラ属の微生物か生
産するホスホリパーゼＤ（持分平］　−］、　７６７５
号公報参照）、ストレプトマイセス物か生産するホスホ
リパーゼＤ（持分平ｌー１２４７４号公報及び特開昭６
３−２１９３７３号公報参照）、キタザトスボリア属の
微生物が生産するホスホリパーゼＤ（特開昭６４−８０
２８５号公報参照）などを挙けることができる。

これら微生物によって生産されるホスホリパーゼＤは、
生菌体もしくはその乾燥物又はそれらの破砕物の形、或
いはそれらから分離ないし精製することにより得られる
粗酵素又は精製酵素の形で使用することができ、さらに
それらは必要に応じて、光硬化性樹脂、ウレタンプレポ
リマー、Ｋ−カラゲーナン等に包括固定化した形で用い
ることもできる。

上記ホスホリパーゼＤの使用量は厳密に制限されるもの
ではないが、一般には、式（Ｉ）の−量体リン脂質１ｇ
当り５〜２０，０００単位、好ましくは１０〜Ｉ　、０
　０　０単位の範囲内の量で用いるのか適当である。

式（Ｉ）の−量体リン脂質と式（ＩＩ）のリン脂質どの
反応は、通常、水性媒体中で約０〜約９。

°Ｃ、好ましくは約２０〜約６０’Ｃの温度で行なうこ
とができる。反応時間は他の反応条件によるが、大体１
〜７２時間程度とすることかできる。用いうろ水性媒体
としては水だけでもよいが、水とアルコールなどの水−
混和性有機溶媒との混合溶媒を用いてもよく、或いはさ
らｔこ場合によっては、ジエチルエーテル、ジイソプロ
ピルエーテルなどのエーテル系溶媒；ジクロロメタン、
四塩化炭素、クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素系
溶媒：酢酸エチノ呟酢酸メヂルなどのエステル系溶媒等
の水−不混和性有機溶媒を併用してもよい。さらに、酵
素の安定化剤として、例えは、塩化ナトリウム、塩化カ
ルシウムなどの金属塩、アルブミン、カゼイン等の蛋白
質、酢酸、クエン酸、リン酸等の緩衝剤等をホスホリパ
ーゼＤｉｇ当り０．０００１〜０．１　ｇの範囲内の量
で加えてもよい。

さらに反応系のｐＨは使用する酵素の安定ｐ　Ｈ範囲内
、好ましくは至適ｐ　Ｈに調節することが望ましい。

式（１）のモノホスファチジル化合物（−量体リン脂質
）に対する式（ＴＩ）のリン脂質の使用割合もまた厳密
に制限されるものではないが、式（１）のモノホスファ
チジル化合物１モルに対して式（ＩＩ）のリン脂質は一
般に０．５〜１．５モル、好マシくは０．７〜１．３モ
ルの範囲内で用いるのが好都合である。

原料として使用される前記式（ＩＴ）のリン脂質は天然
のもの又は合成されたもののいずれであってもよく、例
えば、卵レシチン、大豆レシチン、オキアミレシチンな
どの動植物から得られるリン脂質：これらリン脂質の抽
出分離、硬化処理、合成によって得られるホスファチジ
ルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファ
チジルグリセロール、Ｌ−α−レンチンジへキサデンル
、リゾホスファチジルコリンなどのリン脂質を挙げるこ
とかできる。

以上に述へた反応により生成する式（ＴＩＩ）の二量体
リン脂質は、前述した如き有機溶媒による抽出処理（反
応媒体と１−で水だけを用いた場合）や有機溶媒層の分
離処理（反応媒体に水−不混和性有機溶媒を併用した場
合）等によって反応系から回収することかでき、また、
回収した二量体リン脂質は必要に応して、溶媒分画、ノ
リ力ゲルクロマト、高速液体クロマトグラフィー、遠心
液々分配クロマトグラフィー等の適当な方法により更に
精製することができる。

上記本発明の方法において出発原料として用いる前記式
（Ｉ）のモノフブチジル化合物（−量体リン脂質）は、
例えは、前記式（ｌＩ）のリン脂質を式 ％式％（） 式中　Ｒ３は前記の意味を有する、 で示される多価アルコールとホスホリパーゼＤの存在下
に反応させることにより製造することかできる。

上記反応に使用される多価アルコールとしては、例えば
、フラクトース、セドヘプツロース、ソルボース、リブ
ロース、キンルロースなどの一級水酸基を２個有する単
糖類；グリセロール、エリスリト−ル、キシリト−ル、
リヒト−ル、アラヒドル、ソルヒト−ル、マンニトール
、ガラクチトル、セドヘプツロースなどの糖アルコール
；１゜４−ブタンジオール、１１６−ヘキサンジオール
、１８−オクタンジオールなどのジオール類ニジエチレ
ングリコール、＋−リエチレングリコール、分子量２０
０〜２，０００のポリエチレングリコル、ジプロピレン
グリコール、分子量２００〜２．０００のポリプロピレ
ングリコールなどのポリアルキレングリコール類；ジグ
リセリン、分子量３００〜７５０のポリグリセリンなと
のポリグリセリン類（縮合度２〜５０）等を挙げること
ができる。

上記式（Ｕ）のリン脂質と式（ＴＶ）の多価アルコール
とのホスホリパーゼＤの存在下での反応は、式（Ｉ）の
モノホスファチジル化合物（−量体リン脂質）と式（１
１）のリン脂質とのホスホリパーゼＤの存在下での反応
について前述したと同様の条件下に実施することかでき
る。ただし、上記式（ＴＶ）の多価アルコールは式（Ｉ
Ｉ）のリン脂質１モルに対して通常０．１〜１００モル
、好ましくは１〜ｌＯモルの範囲内で用いるのが適当で
ある。

上記反応により、一般に、−量体リン脂質と二量体リン
脂質の混合物が生成し、該−量体リン脂質は前述した如
き方法で反応系から回収又は単離した後に本発明の前記
方法に供することもできるが、上記反応で得られる反応
混合物又は反応培地に水−不混和性有機溶媒を用いた場
合にはその有機層に式（ＩＩ）のリン脂質を加えさらに
場合によってはホスホリパーゼＤを補充して、本発明に
従う反応を続けて行なってもよく、その方が効率的であ
る。

また、反応を連続的に行なう場合には、−段目の反応に
おいて未反応のまま残存している多価アルコールは本発
明の反応を行なうに先立ちできるだけ除去することが望
ましく、例えば、−段目の反応で得られる反応混合物又
は分離した有機層中の多価アルコール濃度は１０％（Ｗ
／Ｖ）以下、好ましくは５％（ｗ／ｖ）以下とするのが
好都合である。

以上述べた本発明の方法によれは、前記式（Ｉ）の二量
体リン脂質を好収率で製造することかできる。

本発明によって製造される二量体リン脂質は、例えば、
医薬品や化粧品におけるリポソーム形成剤として、或い
は乳化剤として利用することか期待される。

以下に、実施例により本発明を更に具体的に説明する。

以下において、ホスホリパーゼＤの活性測定法としては
特開昭６１３−１２３３８９号公報記載の方法を用いた
。また、アクチリマデューラ属及びノカルデイオプシス
属微生物由来のホスホリパーゼＤは、特開昭５９−１８
７７９２号公報に記載された方法により培養及び精製し
たものを使用しｌ−８さらに、二量体リン脂質の純度は
イアトロスキャンにより求めた。すなわち、クロマロッ
ドＳ■（ヤ［・ロン社製のシリカゲルロッド）にリン脂
質の２％クロロホルム溶液ｌμＱをスポットシ、クロロ
ホルム−エタノール−メタノール−水（６０：２５：１
５＋６）を展開溶媒として約１．　Ｏｃｍ展開し、イア
トロスキャン（ヤ］・ロン社製のイア］・ロスキャンＴ
Ｈ−１０）にかけ、ピーク面積比から二量体リン脂質の
生成量を求めた。

実施例１ 大豆レシチンエピクロン２００（ホスファチジルコリン
含量９８％、ルーカスマイヤー社製）ｌＯｇ、ジエチル
エーテル５０ｍＱ、分子量４００のポリエチレングリコ
ール（以下、ＰＥＧ４００という）２０ｇ、ＮａＣ１４
ｇ、水５０ｍ（＋にアクヂノマデューラ属微生物由来の
ホスホリパーゼＤ５００単位を加え３０００にて２４時
間−段目の１９〜 反応を行なった。反応終了後静置し二層分離を行ないジ
エチルエーテル層を回収した。このジエチルエーテル層
を５０ｍＱの１０％Ｎ　ａ　Ｃｌ溶液で洗浄した。大豆
レンチンエピクロン２００（ホスファチジルコリン含量
９８％、ル−カスマイヤー社製）９ｇ１ジエチルエーテ
ル４　！５ｍ（１、ＮａＣ１４ｇ、水！５０ｍＱ、上記
洗浄したジエチルエーテル層６０ｍ（ｌにアクグーノマ
デューラ属微生物由来のホスポリパーセＤ４５０単位を
加え３０°Ｃにてさらに２４時間反応を行なった。反応
後静置しジエチルエーテル層を回収し、エバポレータに
てこれを濃縮乾固した後乾燥器にて乾燥した。

得られジポス７ブチジルＰＥＧ４００　（二量体）の生
成量は９０％であり、収率は反応に使用したリン脂質に
対して１００％だった。

実施例２ ＤＰＰＣ（ジパルミトイルホスファデジルコリン、日本
粘化社製）１０ｇを用いて反応溶媒としてジクｒ７１ニ
アメタン５０ｍＱを用いる以外は、実施例１と同様に処
理しジホスフブチジルＰＥＧ４０Ｏ（二量体）を得た。

ジホス７ブチジルＰＥＧ４００の生成量は９０％で収率
は１００％だった。

実施例３ 大豆レシチンｒ−ｓ−１００８（硬化レシチン、日清製
油社製）Ｌｏｇを用いて反応溶媒としてジク・ロスタン
５０ｍρを用いる以外は、実施例１と同様に処理しジホ
スフブチジルＰＥＣ，４００（二量体）を得た。ジホス
フブチジルＰＥＧ４００の生成量は９０％で収率は１０
０％だった。

実施例４ トリエヂレングリコール、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ４００
．ＰＥＧ６００、ポリグリセリン５００、フラクｌ−−
ス、ンルビト−ル又はｌ　６−ヘキサンジオール２０Ｇ
をそれぞれ２００ｍＬ１容三角フラスコに取り、卵レシ
チンｐｃ９８　（キューピー社製）ＩＯｇ、ジクロロメ
タン５０＋＋＋１２、ＮａＣ１１４ｇ、水５０ｍρ、ノ
カルデイオプシス属微生物由来のホスホリパーゼＤ５０
０単位を加え３０℃にて２４時間反応を行なった。以後
実施例１と同様に行ない二量体リン脂質を調製した。

その結果を下記第１表に示す。

また、比較のため、卵レシチンＰＣ９８１０ｇ１ジクロ
ロメタン５０ｍ（＋、Ｎａ（：ｌ　　４ｇ。

水５０ｍＱにＰＥＧ６００をＩｇ、２ｇ、３ｇ又は５ｇ
を加えた後、ノカルデイオプシス属微生物由来のホスホ
リパーゼＤを５００単位加え一段反応を行ない二量体リ
ン脂質を調製した。その場合の二量体リン脂質の生成量
の最大値は４８％であった。同様の操作をアルコールの
種類を変えて行なった。その結果も下記第１表に示す。

第１表：二量体リン脂質の生成量 アルコ ル名 収率（％）＊ トリエヂレングリコ ＰＥＧ２００ １）ＥＧ４００ ＰＥＧｉ３ＱＱ ポリグリセリン５００ ７ラクトースソ ルヒトール を示す。

第１表の結果から二量体リン脂質の収率は本発明に従う
二段反応により５０％以上９０％程度になるか、−段反
応では最大でも５０％以下であることか分かる。

実施例５ 大豆レシチンエピクロン２００（ホスファチジルコリン
含量９８％、ルーカスマイヤー社製）ｌＯｇ，ジエチル
エーテル５０ｍ＋２，ＰＥＧ４００２０ｇ，ＮａＣ：Ｉ
　　４ｇ，水５０ｍ（＋にアクチノマデューラ属のホス
ホリパーゼＤ５００単位を加え３０°Ｃにて２４時間反
応を行なった。反応終了後静置し二層分離を行ないジエ
チルエーテル層を回収した。回収したジエチルエーテル
層を減圧下エバボレークーにて濃縮乾固し一量体リン脂
質と二量体リン脂質の混合物（−量体８２％、二量体１
８％）を得た。この混合物をシリカゲルクロマトにより
精製した。カラムはシリカゲル６０（メルク社製）３Ｘ
１．００ｃｍ，溶出液はクロロホルム／エタノール／メ
タノール／水（７　０／２　５／１　５／３）　、流速
は１００ｍ＋２／ｈｒで行なった。

試料は３回に分けて精製した。この操作により、量体リ
ン脂質５ｇ（純度９９％）を得た。

この−量体リン脂質５ｇと大豆レシチンエピクロン２０
０　　５ｇを５０ｍＱのジエチルエーテルに溶解した後
、ＮａＣＩ　　１４ｇ１水５０ｍＱ。

アクチノマデューラ属微生物由来のホスホリパーゼＤ２
５０単位を加え３０°Ｃにて２４時間反応を行なった。

反応後静置しジエチルエーテル層を回収し、エバポレー
タにてこれを濃縮乾固した後、幹燥器にて乾燥した。

得られたリン脂質の組成は、二量体リン脂質９０％、−
量体リン脂質４％、ホスファチジン酸３％、ホスファチ
ジルコリン３％で、収率は反応したリン脂質に対して１
００％たった。

比較例１ 大豆レシチンエピクロン２００（ホスファチジルコリン
含量９８％、ルーカスマイヤー社製）ｌＯｇ，ジエチル
エーテル５　０ｍＱ　、　ＰＥＧ４　０　０１−２５ｇ
．Ｎａ．ＣＩ　　４ｇ，水５ｆ）ｍｆ２にアクノマデュ
ーラ属微生物由来のホスホリパーゼＤ５００単位を加え
３０°Ｃにて２４時間反応を行なった。反応終了後静置
し二層分離を行ないジエチルエーテル層を回収し実施例
１と同様の方法により二量体リン脂質生成量を調べた。

また、ＰＥＧ４００　　１、２５ｇに変えＰＥＧ４００
を２　−　５　ｇ　％５ｇ、］Ｏｇ又は２０ｇを加え上
記したと同様に反応を行ない二量体リン脂質生成量を調
べた。これらの結果をまとめて第２表に示す。

第２表ニー段反応による二量体リン脂質生成量２、５２ １０　　　　　　　　　　　０、５ ２０　　　　　　　　　　０　、　２５ＰＣはホス７ア
チジルコリンを示す。

第２表の結果から一段反応では基質リン脂質とＰＥＧ４
００のモル比を変えても二量体リン脂質の収率は最大５
０％にしかならないことが分かる。

実施例６ 比較例１と同様にして反応した後、静置し二層分離を行
ないジエチルエーテル層を回収した。このンエヂルエー
デル層を５０ｍＱの１０％ＮａＣ１溶液で洗浄した。大
豆レンチンエピクロン２００３−］Ｏｇ、ジエチルエー
テル４５＋＋＋１２．Ｎａｃ＋　　４ｇ、水５０ｍ４、
Ｊ１記洗浄したジエチルエーテル層（−量体リン脂質と
二量体リン脂質の混合物）６０ｍ（＋にアクノマデュー
ラ属微生物由来のホスホリパーゼＤ４５０単位を加え３
０°Ｃにて２４時間反応を行なった。反応後静置しジエ
チルエーテル層を回収し、実施例１と同様にして二量体
リン脂質生成量を調べた。その結果を第３表に示す。

第３表：本発明に従う二段反応による二量体リン脂質生
成量ＰＥＧ４００添加量（ｇ）モル比（Ｔ）Ｃ／ＰＥＧ
４００）　ＰＣ添加量（ｇ）二量体リン脂質収率（％）
（−段反応）　　　　（−段反応）　　（二段反応）　
　（二段反応）２．５２ １０　　　　　　　　　　０．５ ２０　　　　　　　　　　０．２５ ＰＣはホスファチジルコリンを示す。

第３表の結果から二段反応では、−段目の反応での基質
リン脂質とＰＥＧ４００のモル比をとこに取っても二量
体リン脂質生成量は８０％以上になり第２表に示した一
段反応に比へ二量体リン脂質生成量か多いことが分かる
。

手続補 正　書　（自発） 平成２年６月２９日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 式中、 Ｒ＾１はアルキル基又はアシル基を表わし、Ｒ＾２は水
   素原子、アルキル基又はアシル基を表わし、 Ｒ＾３はアルコキシ基、水酸基もしくはオキソ基で置換
   されていてもよいアルキレン基 又は式▲数式、化学式、表等があります▼の基を表わし
   、こ こでＹは置換されていてもよい炭素数２〜 ４のアルキレン基を表わし、ｎは２〜５０ であり、 Ｍは水素又は塩形成性原子もしくは原子団 を表わす、 で示されるモノホスファチジル化合物を式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） 式中、 Ｒ＾１、Ｒ＾２及びＭは前記の意味を有し、Ｘは−ＣＨ
   ＿２ＣＨ＿２Ｎ＾＋（ＣＨ＿３）＿３・ＯＨ＾−、−Ｃ
   Ｈ＿２ＣＨ＿２ＮＨ＿２又は−ＣＨ＿２ＣＨ（ＯＨ）Ｃ
   Ｈ＿２ＯＨを表わす、 で示されるリン脂質とホスホリパーゼＤの存在下に反応
   させることを特徴とする式 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） 式中、 Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３及びＭは前記の意味を有する で示されるリン脂質誘導体の製造法。 ２、式（ I ）で示されるモノホスファチジル化合物を
   式（II）で示されるリン脂質を式 ＨＯ−ＣＨ＿２−Ｒ＾３−ＣＨ＿２−ＯＨ（IV）式中、
   Ｒ＾３は請求項１記載の意味を有する、で示される多価
   アルコールとホスホリパーゼＤの存在下に反応させるこ
   とにより製造する請求項１記載の方法。