JPH04187699A - 新規な利尿ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、新規な利尿ベプチドム二関し、より詳しくは
、従来の利尿ペプチドとは異なったタイプの心室組織細
胞から得られる利尿ペプチドに関する。また、本発明は
このペプチドの製造方法および、このペプチドを有効成
分とする薬剤組成物、特に降圧剤および利尿剤にも関す
る。

（従来の技術） 心臓或いは脳が体液バランス調節に重要な働きを担うホ
ルモンを分泌しでいるという報告がなされ、このような
ホルモンとして心房性ナトリウム利尿ペプチド（以下、
ＡＮＰと略す）および脳ナトリウム利尿ペプチド（以下
、ＢＮＰと略す）のアミノ酸配列が明らかにされている
。心房を主たるオリジンとするＡＮＰはヒト（寒川等、
ＢＢＲＣ１１８：　１３１−１３９．１９８４）　、ラ
ット（寒川等、ＢＢＲＣ１２１：　５８５−５９２．１
９８４）　、ブタ（Ｆｏｒｓｓｍａｎ等、Ｃｅ１ｌ　Ｔ
ｉ５ｓｕｅ　Ｒｅｓ、　２３８：　４２５−４３０．１
９８４）、ウナギ（竹井等、ＢＢＩＩＣ１６４：　５３
７−５４３．１９８９）等で構造が決定された。ＢＮＰ
はブタ　（須藤等、ＢＢＲＣ１５５：　７２６−７３２
、１９８８）、ヒト　（須藤等、ＢＢＲＣ１５９：　１
４２７−１４３４゜１９８９）、ラット（小島等ＢＢＲ
Ｃ１５９：　１４２０−１４２６゜１９８９）　、ウナ
ギ（竹井等、ＢＢＲＣ１７０：　８８３−８９Ｌ　１９
９０）等で構造決定された。また、ウナギＢＮＰに類似
した構造の、第２のブタＢＮＰ　　（Ｃ型ナトリウム利
尿ペプチド：　ＣＮＰ）が報告された（須藤等、ＢＢＩ
？Ｃ１６８：８６３−８７０．１９９０）。

上記のこれまでに見出された利尿ペプチドは、第１図に
示すように、いずれもシスティンとシスティン間のジス
ルフィド結合（Ｓ−５結合）により形成された１７個の
アミノ酸からなる環状構造（基本骨格）は高度に保存さ
れており、基本骨格内のアミノ酸の置換、あるいはＮ末
端やＣ末端から延びた部分のアミノ酸の数および種類に
違いが見られる。しかし、いずれのペプチドも、Ｃ末端
側システィンのＣ末端方向にはペプチド鎖は延びていな
いか、あっても６個までのアミノ酸からなるものである
。

（発明が解決しようとする課題） 前述のような、心房あるいは脳より単回された利尿ペプ
チドの構造解析や、血液中のこれらの利尿ペプチドの定
量により、体液バランス調節の機構がある程度解明され
たが、なお不明な部分があった。また、ヘテロジーナス
な測定方法（例えば、ヒトＡＮＰに特異的であるが、ラ
ノ）ＡＮＰを３０％は測り込む測定方法でラットを測定
する）による定量値と、ホモジーナスな測定方法（例え
ば、ラッ）ＡＮＰに特異的な測定方法でラットを測定す
る）による定量値との間に測り込み程度を換算しても一
致しないという矛盾点が見られた。

従って、体液バランス調節機構や高血圧の原因の解明に
はさらに他の利尿ペプチドを見出すことを含めた研究が
必要とされた。

（課題を解決するための手段） 本発明者等は、これまで発見されたものとは別種の利尿
ペプチドの存在を予測し、このペプチドの発見が体液バ
ランス調節機構や高血圧の原因解明に大きな役割を果た
すであろうとの推測のもとに研究を進めた。そして、従
来利尿ペプチドの単離材料として用いられていなかった
心室に注目することにより、心室組織細胞が産生ずる強
い降圧因子を見出し、この活性因子が新規な利尿ペプチ
ドであることをつきとめ、さらに検討を加えて本発明を
完成させた。

即ち、本発明は、主に心室組織細胞から得られ、１７個
のアミノ酸からなる利尿ペプチド基本骨格のＣ末端側の
システィンからＣ末端方向にアミノ酸が６個超結合した
、水・ナトリウム利尿作用、降圧作用および平滑筋弛緩
作用を有するペプチドを要旨とする。本発明者等はこの
ペプチドを心室ナトリウム利尿ペプチド（νｅｎｔｒｉ
ｃｕｌａｒ　ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ　ｐｅｐｔｉｄｅ
　：　Ｖ　Ｎ　Ｐ　）と命名した。以後、心室ナトリウ
ム利尿ペプチドをＶＮＰと略す。

主に心室から草創されるこのペプチドは、従来のＡＮＰ
やＢＮＰと同様の降圧作用、利尿作用および平滑筋弛緩
作用を示し、両末端がシスティンである１７個のアミノ
酸からなる基本構造を有する点で似ているが、基本構造
のＣ末端側ノスティンのＣ末端から延びる長いペプチド
鎖を有する点で従来のものと異なる。

また、分子量は、従来のものが３０００±３００程度で
あるのに対し、本発明のペプチドは４０００±４００で
ある点でも特徴がある。

本発明はさらに、次の一般式（１）で示されるアミノ酸
配列を有するペプチドおよびその塩である。

Ｘ−５ｅｒ−１ Ｘ−＾５ｎ−５ｅｒ−２ χ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−５ｅｒ−１ Ｘ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｒｌ−５ｅｒ−１χ−Ｌｙｓ
−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−５ｅｒ−のいずれかであり
、 Ｙは、 ＨＯ−、 ＨＯ−Ａｓｎ−、 ＨＯ−３ｅｒ−４ｓｎ−、 ＨＯ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ−、 ＨＯ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｓｎ−、ＨＯ−Ａｓ
ｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ−、ＨＯ−Ｇｌｙ
−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ−、ＨＯ−
Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−＾５ｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａ
ｓｎ−、ＨＯ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−３ｅｒ−Ａｓｎ−、）１０−Ｌｙｓ−Ｌｙ
ｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅｒ
−Ａｓｎ−、）１０−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ
−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−＾ｓｎ−
、ＨＯ−１ｉｅ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇ
　Ｉｙ−Ａ−ｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ−
、 ＨＯ−Ｐｈｅ−１１ｅ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ　−Ｔ
ｈｒ−Ｇ　ｌｙ−Ａｓｎ　−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅｒ−
Ａｓｎ−、 ＨＯ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−１１ｅ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙ
ｓ−Ｔｈｒ−Ｇ　１ｙ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−５ｅ
ｒ−Ａｓｎ−、 ＨＯ−Ａｓｎ−Ｇ　］　ｙ−Ｐｈｅ−＋１ｅ−Ｌｙｓ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｇ　］　ｙ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ− のいずれかであり、 Ｘは水素、Ｔｙｒ−または放射性アイソトープ標識体と
結合しうる官能基を意味する。ペプチド中の７ステイン
残基は相互にジスルフィド結合で架橋されていてもよい
。下線部以外のアミノ酸は他のアミノ酸で置換されてい
てもよい。） 上記−殺伐（１）においてＺおよびＹを除いた部分の、
システィンからシスティンまでの１７個のアミノ酸から
なるペプチド鎖がここでいう基本骨格に相当する。

ＸがＴｙｒ−または放射性アイソトープ標識体と結合し
ろる官能基である場合、本発明のペプチドを放射性アイ
ソトープで標識することができ、それにより、その血中
濃度の測定、あるいは半減期や作用部位の測定により本
発明ペプチドの代謝動態の解明に利用できる。

本願明細書および図面で使用するアミノ酸の略号は次の
意味である。

旦文主表記 ｃｒｙ　：　グリノン、　　　Ｌｅｕ　：　　ロイノン
、１１ｅ　：　イソロイシン、Ｓｅｒ　：　　セリン、
Ｔｈｒ：トレオニン、　　Ａｓｐ　：　　アスパラギン
酸Ａｓｎ　：　アスパラギン、Ｌｙｓ　：　　リシン、
Ａｒｇ　：　アルギニン、　　Ｃｙｓ　：　　システィ
ン、Ｐｈｅ　：　フェニルアラニン、 Ｍｅｔ　：　メチオニン、　Ｔｒｐ：）リプトファン、
Ｔｙｒ　：　チロシン 二叉主人起 Ｇニゲリシン、　　　　Ｌ　：　ロイシン、Ｉ：イソロ
イシン、　　Ｓ　：　セリン、Ｔ：　トレオニン、　　
　Ｄ：　アスパラギン酸Ｎ：アスパラギン、　Ｋ：　リ
シン、 Ｒ：アルギニン、　　　Ｃ：　システィン、Ｆ：フェニ
ルアラニン、 Ｍ：メチオニン、　　　Ｗ：　トリプトファン、Ａ：ア
ラニン、　　　　Ｑ：グルタミン、Ｖ：ハリン、　　　
　　Ｙ：チロシン ウナギ心室より得られるＶＮＰは、−殺伐（１）におい
てＺがＸ−Ｌｙｓ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−５ｅｒで
、Ｙが）１０−Ａｓｎ−ＧＩｙ−Ｐｈｅ−１１ｅ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−ＧＩｙ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ
−Ｌｅｕ−５ｅｒ−Ａｓｎ−で表されるペプチドであり
、３６個のアミノ酸からなる。

本発明においては、３６個のアミノ酸からなる完全なペ
プチドの形でなくても、Ｎ末端側システィンからＣ末端
側システィンまでの１７個のアミノ酸からなる利尿ペプ
チド基本骨格が保持された一般式（１）で表されるペプ
チドであればよい。これらのペプチドは後述のように利
尿作用、陵圧作用および平滑筋弛緩作用を有し、有用で
ある。

また、−殺伐（１）における基本骨格中、下線部のアミ
ノ酸はこの配列順位に位置することが必要だが、下線部
以外のアミノ酸については別の種類のアミノ酸でＷ換さ
れていてもよい。

本発明の利尿ペプチドの製造方法としては、該ペプチド
を産生ずる細胞より回収する方法がある。

産生細胞としては、ウナギ等の角類、鳥類、哺乳類ある
いは両生類等から摘出した心室組織細胞、それらを細胞
培養により増殖させた細胞、あるいは遺伝子組み換え手
段によって目的のペプチドを産生するよう番こした細胞
がある。これらの細胞より本発明の利尿ペプチドを単離
精製するには、抽出、ゲル濾過クロマトグラフィー、イ
オン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフ
ィー、電気泳動、再結晶等のペプチドの単離精製に通常
用いられる処理を組み合わせて行うことができ、特に逆
相の高速液体クロマトグラフィーを含む方法が好ましい
。

あるいは、このように単離精製したＶＮＰの分析により
判明したアミノ酸配列の情報に基づき、アミノ酸から化
学的に合成することができる。合成法としては、例えば
、Ｙａｎａｇｉｓａｗａ等の固相法アミノ酸合成法、液
相法アミノ酸合成法等の慣用のペプチド合成方法が使用
できる。

さらに本発明は、上記利尿ペプチドを有効成分とする薬
剤組成物、特に降圧剤および利尿剤に関する。

以下、ウナギを使用した場合の例について詳細に説明す
る。

ウナギは海水および淡水の両相を移動し生息するため、
外界のナトリウム濃度の激変に適応しうる体液バランス
調節機能を有し、この調節機能に強力な活性をもつ利尿
ペプチドが関与していることが期待される、またウナギ
の心房および脳から得られたＡＮＰおよびＢＮＰの構造
と活性が解明されている（特願平１−２１０８３６号お
よび特願平１−３３８９２２号として先に出ｉ１）ため
、調１！ｆｆ機構解明の対象とするのに適している。

ウナギＶＮＰの単離精製法の一例を次に示す。

まず、ウナギから心室を摘出する。ウナギを用いた場合
、新鮮な材料を多量に揃えることができる点で有利であ
る。心室組織細胞を細胞培養により増殖させて多量に得
ることも可能である。

心室組織を華留水中で煮沸し、冷却後、酢酸を添加しホ
モジナイズして抽出を行う。得られた抽出液を遠心分離
して上清を得、減圧乾固の後、酢酸に熔解し、アセトン
を加えて遠心分離する。沈渣を酢酸に溶解してゲル濾過
および脱塩を行う。

ヒヨコ直腸標本弛緩活性のあるフラクノヨンを、陽イオ
ン交換高速液体クロマトグラフィー、逆相高速液体クロ
マトグラフィーにより精製する。

このようにして得られたウナギＶＮＰを、自動アミノ酸
分解装置を用いたエドマン分解によってＮ末端より段階
的に切断し、高速液体クロマトグラフィーによってアミ
ノ酸配列を決定した。その結果は以下の通りである。

Ｈ−Ｌｙｓ−５ｅｒ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−５ｅｒ−Ｃｙｓ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−門ｅ　ｔ−Ａｓｐ
−Ａｒｇ−Ｉ　Ｉｅ−Ｇｌｙ−３ｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ
−Ｇ　ｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−八５ｎ−５ｅｒ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−
Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−１１ｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−０
）１また、得られたペプチドをアミノ酸分析して、次の
アミノ酸組成を得た。

Ａｓｐ　４．７　（５）　、ＣＭ−Ｃｙｓ　２．４　（
２）　、Ｓｅｒ　４．６　（５）Ｇａｙ　６．９　（６
）　、Ａｒｇ　２．１　（２）　、Ｔｈｒ　２．０　（
２）、Ｍｅｔ　０．９　（１）　、ｌｉｅ　１．９　（
２）　、Ｌｅｕ　２．２　（２）、Ｐｈｅ　２．５　（
３）　、Ｌｙｓ　５．０　（５）　、Ｔｒｐ　　（］）
、ただし、括弧内の数字は理論モル比である。

分子量は３．９３８であった。

合成ウナギＶＮＰを抗原として家兎に免疫して得た抗体
と、ウナギＶＮＰをＢｏｌｔｏｎ　ａｎｄ　Ｈｕｎｔｅ
ｒ法（Ｂｏ　ｌ　ｔｏｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ、　１
３３：　５２９−５３９．１９７３）で放射化した”２
５］−ＶＮＰを用いて、免疫学的定量法（ラジオイムノ
アッセイ）によってウナギにおけるＶＮＰの血中濃度を
測定した。また、同様の方法によってウナギＡＮＰの血
中の濃度も測定した。

ウナギＡＮＰ濃度が９５±３３　ｆｍｏｌｅ／　ｍｌ　
（ｎ　＝　１２）であるのに対して、ウナギＶＮＰｉｌ
１度は５３２±３６８　ｆｍｏｌｅ／〆（ｎ　＝１２）
と高濃度であった。このことより、生体内において、Ａ
ＮＰよりもＶ　Ｎ　Ｐの役割が大きいことが推測される
。

（作用） 本発明の、心室組織細胞により得られ、１７個のアミノ
酸からなる基本骨格のＣ末端側のノスティンからＣ末端
方向にアミノ酸が６個超伸長したペプチドは、水・ナト
リウム利尿作用、降圧作用および血管拡張作用を有する
。従って、利尿剤、陵圧剤および血管拡張剤等の治療剤
として利用できる。例えば、水分の過剰停滞が見られる
うっ血性心不全に対して利尿剤として５、また、血管拡
張効果が重要な役割を果たす高血圧症の治療に有用であ
る。

また、治療に用いられるだけでなく、生体の体液バラン
ス調節機能の解析や高血圧患者等の病態の解明の手がか
りともなり得る６ 治療剤として投与する場合は、静脈内注射、筋肉的注射
、皮下注射等の非経口的投与、あるいは経口投与により
、または点眼剤等の局所投与により行うことができるが
、本発明の場合、静脈内注射が好ましい。投与量は、０
．０１ｎ　ＩＩＩｏｌ　〜１００ｎ　ｍｏｌ／　ｋｇで
あり、静脈内注射の場合、体重および期待効果に応した
投与量を通常１〜１０〆の生理的食塩水に熔解して用い
る。

本発明のペプチドを薬剤としで用いる場合は、該ペプチ
ドおよび添加剤を含む乳剤、水和剤、錠剤、水溶液、粉
剤、粒剤、カプセル剤、乳剤等の種々の形態に製剤化し
て使用できる。

上記製剤化に用いる添加剤には薬理的に許容しうる賦形
剤、崩壊剤、潤滑剤、結合剤、分散剤、可塑剤、充填剤
、担体等が使用できる。賦形剤としては乳糖、ぶどう糖
等が、崩壊剤としては澱粉、寒天束等が、潤滑剤として
はタルク、流動パラフィン等が、結合剤としては単ンロ
ンブ、エタノール等が、分散剤としてはメチルセルロー
ス、エチルセルロース等が、可塑剤としてはグリセリン
、澱粉等が例示できる。

心室組織細胞より得られた完全なペプチドの他に、基本
骨格以外のアミノ酸の全部あるいは一部が欠如したペプ
チドについても、水　ナトリウム利尿作用、降圧作用お
よび血管拡張作用があることから、これらの作用自体は
基本骨格の存在により達成されると推測される。

心室組織細胞より得られた、従来の利尿ペプチドよりも
長いペプチド鎖を有するペプチドは、上記作用を長時間
持続させることができる、また、保存安定性の点で従来
の利尿ペプチドよりも優れていると考えられる。

実施例１ ウ　ギＶＮＰの　　・　＋１ ２５００匹のウナギから心室のみを摘出しく２２５ｇ）
、７倍量の蒸留水中で５分間煮沸した。冷却後、酢酸を
添加してＩＭとし、ポリトロンミキサーでホモジナイズ
することにより抽出を行った。得られた抽出液を２５０
００　Ｘ　ｇで３０分間遠心分離し、上清に冷却したア
セトンを滴加して６７％とした後、１６０００Ｘｇで３
０分間遠心分離して上清を得た。この上清を減圧乾固し
たのち、１Ｍ酢酸に溶解後アセトンを加えて９８．５％
とし、１６０００　ｘ　ｇで３０分間遠心分離した。そ
の沈渣を１Ｍ酢酸に再溶解し、セファデックスＧ２５（
ファルマシア製、５　Ｘ８２ｃｍ、溶離液：１Ｍ酢酸、
流速９６ｍｅ／ｈ、フラクションサイズ：６．５ｄ）で
ゲル濾過および脱塩を行った。

第２図に示すように、ヒヨコ直腸標本弛緩活性のあるフ
ラクションのうちピーク１を集め、その後の精製に用い
た。

１Ｍ！￥酸で平衡にしたＳＰ−セファデックスＣ−２５
（ファルマシア製、１．６　Ｘ　１７ｃｍ）にかけ、２
Ｍピリジン−１Ｍ酢酸液で溶出した。その溶出液を陽イ
オン交換高速液体クロマトグラフィー（日本分光製、Ｉ
ＥＣ−ＣＭ、７．５　Ｘ７５ｍｍ、流速１／分、フラク
ションサイズ２ｍりに供した。

１０％アセトニトリルを含むギ酸アンモニウム（ｐＨ６
，８）の１０ｍＭからＩＭの直線濃度勾配で溶出した（
３０分間）。ヒヨコ直腸標本弛緩活性のある両分を逆相
高速液体クロマトグラフィー（東ソー製、００５−１２
０Ｔ、４．６　Ｘ２５０　ｍｍ、流速１紙）分）ζ二か
け、０．１　％トリフルオロ酢酸を含むアセトニトリル
の１０％から６０％の直線濃度勾配で溶出しだ（４０分
間）。活性のある両分を再度、逆相高速液体クロマトグ
ラフィー（同上ンにかけ、０１％トリフルオロ酢酸を含
むアセトニトリルの２０％から４０％の直線濃度勾配で
溶出しく４０分間）、純粋なウナギＶＮＰを得た。さら
に、Ｓ−カルポキンルメチレート処理して、逆相高速液
体クロマトグラフィー（同上）にかけ再精製した。

実施例２ ウ　ギＶＮＰのム 実施例１で得られたペプチドと同しアミノ酸配列を有す
る３６個のアミノ酸からなるペプチドを、Ｙａｎａｇｉ
ｓａｗａ等の方法（Ｐｒｏ、　Ｎａ１１．＾ｃａｄ、　
Ｓｃｉ、　ｌｌ５Ａ　８５・６９６４−６９６７．１９
８８）に準して合成した３即ちアプライド・ハイオノス
テムズ社製全自動ペプチド合成機を用い、エフモノク（
Ｆｍｏｃ）法によるアミノ酸のカップリングを行った。

得られた直鎖ウナギＶＮＰのシスティンの保護基をヨウ
素による酸化によって除去すると同時にスルフィド結合
を形成させた。合成品は逆相高速液体クロマトグラフィ
ー　（Ｗａｔｅｒｓ　ＰｒｅｐＬＣＳｙｓｅｍ　５００
）によって精製した。

実施例１で用いた逆相高速液体クロマトグラフィー（東
ソー、００５−１２０７）によって再精製し、この合成
ペプチドが、実施例１でウナギ心室より単動精製した天
然のウナギＶＮＰと同一の溶出位置にあることを確認し
た。

実施例３ 実に例２　テ合成したペプチドを生理食塩水に溶解し、
■０−′モル／ｌ濃度の溶液を注射剤とした。

この注射剤を用いて降圧作用および利尿作用を検討した
。

広荻悲 １利尿作用］ ＳＤ系ランドの膀胱に挿入したカニユーレから尿を採取
する。同時に大腿静脈に挿入したカニユーレによって血
圧を測定する。ｄｅ　Ｂｏｌｄ等の方法（１゜Ｉｆｅ　
Ｓｃｉ、　２Ｂ：　８９−９４．１９８］）に準しる。

［降圧作用１ ウナギの背、膨大動脈にカニユーレを挿入し、血圧を測
定した。竹井等の方法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈｙｓｉ
ｏｌ、　、９１＾、　２９３−２９７．１９８８　ｉに
喉しる。

［平滑筋弛緩作用Ｉ ＣｕｒｒＩｃ等の発見した方法（Ｓｃｒｅｎｃｅ　２２
１　＋　５８５−５９２、１９８４）により、ヒヨコ直
腸標本弛緩活性を測定する。

その結果、降圧作用については第３図に示すように、利
尿作用については第４図Ｇ＝示すように確認された。

実施例４ 前記−殺伐においてＺ　＝Ｆｌ−Ｌｙｓ−５ｅｒ−Ｐｈ
ｅ−Ａｓｎ−５ｅｒ−であり、Ｙ　＝−Ａｓｎ−５ｅｒ
−Ｌｅｕ−ＯＨである、２５個のアミノ酸からなるペプ
チドを実施例２に記載の方法で化学的に合成した。

実施例５ 実施例４で合成したベブチドム二ついて、実施例３と同
様の方法で利尿作用を検討した。結果は１０ｎ　ｍｏｌ
ｅ／　ｋｇの投与でナトリウム排泄量の増加が３９μＥ
ｑであり、３６個のアミノ酸からなるペプチドと同程度
の利尿作用を示した。

（発明の効果） 以上詳述したように、本発明によれば、これまで見出さ
れた利尿ペプチドとは異なったタイプの、心室由来利尿
ペプチドが揚供できる。このペプチドは降圧作用、利尿
作用および平滑筋弛緩作用を示し、治療剤として有用で
あるのに加え、体液バランス調節機能や高血圧の原因解
明にも重要な役割を果たすことが期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は従来の利尿ペプチドのアミノ酸配列を示す図で
ある。 第２図はウナギ心室組織の粗抽出液をセファデックスＧ
２５によるゲル濾過にかけた場合の、各画分の紫外吸収
度（２８０ｎｍ）および、ヒヨコ直腸標本弛緩活性をウ
ナギＡ　Ｎ　Ｐ活性に換算した値（黒抜きバー）である
。 第３図は、ウナギに１大した種々の濃度のｖ　ＮＰの降
圧作用をウナギＡＮＰ　　（ｅ　ＡＮＰ）　、ウナギＢ
ＮＰ　　（ｅ　ＢＮＰ）およびヒトＡＮＰ（ｈＡＮＰ）
と比較した図である。 第４図は、ラットに圧入した種々の濃度のＶＮＰのナト
リウム利尿作用をウナギＡＮＰ（ｅＡＮＰ）、ウナギＢ
ＮＰ　　（ｅ　ＢＮＰ）およびヒトＡＮＰ（ｈＡＮＰ）
　と比較した同である。 ａｔｌい！’１（ＬＸｌｆ＼、ＩＪ”ｔ−（’＋１１１
ｆｉ−ゝフラクション階

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）主に心室組織細胞から得られ、１７個のアミノ酸
   からなる利尿ペプチド基本骨格のＣ末端側システインか
   らＣ末端方向にアミノ酸が６個超結合した、水・ナトリ
   ウム利尿作用、降圧作用および平滑筋弛緩作用を有する
   ペプチド。
2. （２）分子量が４０００±４００である請求項１記載の
   ペプチド。
3. （３）次の一般式で表されるペプチドおよびその塩。 【配列式があります。】 （式中、Ｚは、 【配列式があります。】 のいずれかであり、 Ｙは、 【配列式があります。】 のいずれかであり、 Ｘは水素、Ｔｙｒ−または放射性アイソトープ標識体と
   結合しうる官能基を意味する。ペプチド中のシステイン
   残基は相互にジスルフィド結合で架橋されていてもよい
   。下線部以外のアミノ酸は他のアミノ酸で置換されてい
   てもよい。）
4. （４）請求項１、２または３記載のペプチドを産生する
   細胞より該ペプチドを回収することを特徴とする請求項
   １、２または３記載のペプチドの製造方法。
5. （５）回収を高速液体クロマトグラフィーを含む方法に
   よって行う請求項４記載の方法。
6. （６）請求項１、２または３記載のペプチドまたはその
   塩を有効成分とし、薬剤的に許容しうる添加剤を含有す
   る薬剤組成物。
7. （７）請求項１、２または３記載のペプチドまたはその
   塩を有効成分とする降圧剤。
8. （８）請求項１、２または３記載のペプチドまたはその
   塩を有効成分とする利尿剤。