JPH04145368A - マンガン測定用試薬及びそれを用いる骨粗鬆症の測定方法 - Google Patents
マンガン測定用試薬及びそれを用いる骨粗鬆症の測定方法Info
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- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/521—Single-layer analytical elements
- G01N33/523—Single-layer analytical elements the element being adapted for a specific analyte
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
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- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
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- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(発明の背景)
(産業上の利用分野)
本発明は、マイクログラム/リットル濃度で体液中のマ
ンガンを検出するための簡単で且つ安価な液体又は乾性
試薬検定系を示す、さらに詳しくは、本発明のマンガン
検定は酸化還元指示薬の酸化といったような、マンガン
−ポルフィリン錯体によって触媒される色原体反応の光
学的検出を示す、飽和値に近い濃度の、又は空気を自由
に利用できる形態での十分量の酸素が存在しなければな
らない。
ンガンを検出するための簡単で且つ安価な液体又は乾性
試薬検定系を示す、さらに詳しくは、本発明のマンガン
検定は酸化還元指示薬の酸化といったような、マンガン
−ポルフィリン錯体によって触媒される色原体反応の光
学的検出を示す、飽和値に近い濃度の、又は空気を自由
に利用できる形態での十分量の酸素が存在しなければな
らない。
(従来の技術)
マンガンは、グリコジルトランスフェラーゼ(多糖類及
び糖蛋白質合成に必要な酵素)のようなある種の生化学
酵素系における補足因子であることが知られている。マ
ンガンはまた、コレステロール生合成にも関与するので
、したがってマンガン欠乏は血清コレステロールの低減
を引き起こし得る。
び糖蛋白質合成に必要な酵素)のようなある種の生化学
酵素系における補足因子であることが知られている。マ
ンガンはまた、コレステロール生合成にも関与するので
、したがってマンガン欠乏は血清コレステロールの低減
を引き起こし得る。
欠乏の臨床的証拠が存在するために、鉄、亜鉛及び銅は
不可欠であると考えられているけれども、マンガンは、
−射的にヒトにおける欠乏の直接的証拠に関してよりむ
しろ、マンガン依存性酵素において立証されたその役割
に基づいて、ヒトにとって不可欠であると解釈されてい
る。マンガンの補給は、マンガン欠乏実験用実験室動物
における血液凝固障害及び低コレステロール血症を軽減
するために時々必要である。マンガン依存性グリコジル
トランスフェラーゼ活性は、糖蛋白質である普通のプロ
トロンビンの合成に必要であるとされている。
不可欠であると考えられているけれども、マンガンは、
−射的にヒトにおける欠乏の直接的証拠に関してよりむ
しろ、マンガン依存性酵素において立証されたその役割
に基づいて、ヒトにとって不可欠であると解釈されてい
る。マンガンの補給は、マンガン欠乏実験用実験室動物
における血液凝固障害及び低コレステロール血症を軽減
するために時々必要である。マンガン依存性グリコジル
トランスフェラーゼ活性は、糖蛋白質である普通のプロ
トロンビンの合成に必要であるとされている。
マンガン金属酵素は+2価又は+3価状態でマンガンを
包含し、ピルビン酸カルボキシラーゼ及びスーパーオキ
シド・ジスムターゼを含む公知のマンガンによって活性
化される酵素としては、ヒドロラーゼ、キナーゼ、デカ
ルボキシラーゼ、及びトランスフェラーゼが挙げられる
。
包含し、ピルビン酸カルボキシラーゼ及びスーパーオキ
シド・ジスムターゼを含む公知のマンガンによって活性
化される酵素としては、ヒドロラーゼ、キナーゼ、デカ
ルボキシラーゼ、及びトランスフェラーゼが挙げられる
。
マンガンは、小腸で吸取されるが、しかし、その吸収は
、カルシウム、燐、クエン酸第二鉄、及び大豆蛋白質に
よって妨害され得る。マンガン欠乏は、食物中の欠乏に
より、あるいは銅、鉄及びマグネシウムのような金属イ
オン競争物質によっても引き起こされる。
、カルシウム、燐、クエン酸第二鉄、及び大豆蛋白質に
よって妨害され得る。マンガン欠乏は、食物中の欠乏に
より、あるいは銅、鉄及びマグネシウムのような金属イ
オン競争物質によっても引き起こされる。
しかしながら、マンガンのホメオスタシス(恒常性)は
腸からの吸収よりむしろ体内からの排出量の調整を通し
て調節されているように見える。
腸からの吸収よりむしろ体内からの排出量の調整を通し
て調節されているように見える。
肝臓は、通常、胆汁排出量を変えることによって体内の
マンガン量を調整することができる0食物からの平均マ
ンガン摂取量は、一般に、約2.5〜B、3tag/d
(ミリグラム7日)と変化する。適切且つ安全なマンガ
ン摂取量は、成人で約25〜5 、 0 mg/dと概
算される。
マンガン量を調整することができる0食物からの平均マ
ンガン摂取量は、一般に、約2.5〜B、3tag/d
(ミリグラム7日)と変化する。適切且つ安全なマンガ
ン摂取量は、成人で約25〜5 、 0 mg/dと概
算される。
慢性マンガン中毒は、坑夫、鋳物工、溶接工、並びに薬
品、陶器、セラミック、ガラス、フェス及び食品添加物
の製造工に発症している。その症状は、分裂病様の精神
医学的作用及び臨床的にパーキンソン病に類似した神経
学的障害である。
品、陶器、セラミック、ガラス、フェス及び食品添加物
の製造工に発症している。その症状は、分裂病様の精神
医学的作用及び臨床的にパーキンソン病に類似した神経
学的障害である。
マンガン中毒症とパーキンソン病との間の類似性によっ
て、マンガンとカテコールアミン代謝との結び付きが発
見された。線条体ドパミンの減少が両症候で歓楽され、
L−ドパ(ドパミンの前駆体)の投与はMn中毒の一般
的症状のいくつかを軽減するのに有効である。ヒトのマ
ンガン中毒の治療としては、呼吸器系症候に対する種々
の療法、及び生理学的負担を低減するためのEDTAの
ような金属キレート化剤の投与を挙げることができる。
て、マンガンとカテコールアミン代謝との結び付きが発
見された。線条体ドパミンの減少が両症候で歓楽され、
L−ドパ(ドパミンの前駆体)の投与はMn中毒の一般
的症状のいくつかを軽減するのに有効である。ヒトのマ
ンガン中毒の治療としては、呼吸器系症候に対する種々
の療法、及び生理学的負担を低減するためのEDTAの
ような金属キレート化剤の投与を挙げることができる。
血清マンガンレベルは、一般に、職業的被曝、急性肝炎
及び心筋梗塞後に増大する。マンガンレベルは、骨欠損
及び多数の他の生理学的問題に関連があることが示唆さ
れている。その結果、体液中のマンガンレベルを測定す
れば有益な医学的情報が提供されるし、確かに、このイ
オンの医学的意義がさらに分かれば、将来、有益な医学
的情報が提供されるものと思われる。
及び心筋梗塞後に増大する。マンガンレベルは、骨欠損
及び多数の他の生理学的問題に関連があることが示唆さ
れている。その結果、体液中のマンガンレベルを測定す
れば有益な医学的情報が提供されるし、確かに、このイ
オンの医学的意義がさらに分かれば、将来、有益な医学
的情報が提供されるものと思われる。
マンガンの測定
生物学的検体中のマンガンを測定する最も一般的な分析
方法は中性子放射化分析(NAA)、放射分光法(ES
)、及び原子吸収分光測光法(AAS)である、余り一
般的でない方法が、”Determination o
f Trace Metals inMarine B
iological Reference Mater
ialsby Inductively Couple
d Plasma MassSpectrometry
、 Anal、 Chew、 60. pp、 68
7−691(19881に記載されているがこの場合、
誘導結合プラズマ質量分光法(ICP−MS)が、金属
測定のための一方法として考察されている。さらに、別
の方法が、”Simultaneus Multiel
ementalAnalysis of Some E
nvironmental andBiologica
l Samples by Inductively
CoupledPlasma Atomic Emis
sion Spectrometry 、 Anal。
方法は中性子放射化分析(NAA)、放射分光法(ES
)、及び原子吸収分光測光法(AAS)である、余り一
般的でない方法が、”Determination o
f Trace Metals inMarine B
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ialsby Inductively Couple
d Plasma MassSpectrometry
、 Anal、 Chew、 60. pp、 68
7−691(19881に記載されているがこの場合、
誘導結合プラズマ質量分光法(ICP−MS)が、金属
測定のための一方法として考察されている。さらに、別
の方法が、”Simultaneus Multiel
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nvironmental andBiologica
l Samples by Inductively
CoupledPlasma Atomic Emis
sion Spectrometry 、 Anal。
Chew、 60. pp、 1033−1042(1
9881に記載されているが、これは試料調製のための
Parrボンベ法と、それに続く同時的誘発結合プラズ
マ原子放射分光法(ICP−AES)に関連がある。し
かしながら、臨床試験室用には、AAS法が最も一般的
なマンガン測定法である。事実、”AnAnalysi
s for Bood Manganese
Used to AssessEnvironme
ntal Exposure+、 by Hams a
nd Fabri。
9881に記載されているが、これは試料調製のための
Parrボンベ法と、それに続く同時的誘発結合プラズ
マ原子放射分光法(ICP−AES)に関連がある。し
かしながら、臨床試験室用には、AAS法が最も一般的
なマンガン測定法である。事実、”AnAnalysi
s for Bood Manganese
Used to AssessEnvironme
ntal Exposure+、 by Hams a
nd Fabri。
C11nical Chemistry、 34. N
o、6. pp、 1121−1123、 (198
81においては、血中マンガン濃度測定のための推奨方
法は、AAS法である。
o、6. pp、 1121−1123、 (198
81においては、血中マンガン濃度測定のための推奨方
法は、AAS法である。
上記いずれの方法を用いる分析も、熟練技師が操作しな
ければならない高価な器具を必要とする。複雑且つ精巧
な装置は故障し易く、一般に周期的検定及び保全修理を
要する。常用の技法による商業規模でのマンガン測定に
伴う費用は非常に高く、またこれには、装置の新設費、
装置を操作する熟練技師の費用、及び装置を維持するに
際してのサービス費用が含まれる。
ければならない高価な器具を必要とする。複雑且つ精巧
な装置は故障し易く、一般に周期的検定及び保全修理を
要する。常用の技法による商業規模でのマンガン測定に
伴う費用は非常に高く、またこれには、装置の新設費、
装置を操作する熟練技師の費用、及び装置を維持するに
際してのサービス費用が含まれる。
Hery、 et al、、 C11nical Ch
emistry、 Chapter19、 pp、 7
0B−712に記載されているFernandez法の
変法のような湿式化学法も有用であるけれども、これら
の湿式化学法は、一般に、時間がかかり、骨が折れ、多
くの工程を要する方法であって、イオンによる妨害を受
けやすく、イオンによる汚染を避けるために特別な処置
をとらねばならず、即ち、全てガラス製の蒸留装置内で
全ての水を再蒸留しなければならなかったり、同様の不
便な実験準備をしなければならないために、一般に非常
に不都合である。
emistry、 Chapter19、 pp、 7
0B−712に記載されているFernandez法の
変法のような湿式化学法も有用であるけれども、これら
の湿式化学法は、一般に、時間がかかり、骨が折れ、多
くの工程を要する方法であって、イオンによる妨害を受
けやすく、イオンによる汚染を避けるために特別な処置
をとらねばならず、即ち、全てガラス製の蒸留装置内で
全ての水を再蒸留しなければならなかったり、同様の不
便な実験準備をしなければならないために、一般に非常
に不都合である。
マンガン測定のための相対的に簡単な分析は、特定の指
示薬、即ちマンガン(II)と3;1で結合して錯体と
なり、それによって呈色する1−(2−ピリジルアゾ)
−2−ナフトール(PAN)、[金属キレート化剤の溶
剤抽出the 5olvent extraction
of metal chelates。
示薬、即ちマンガン(II)と3;1で結合して錯体と
なり、それによって呈色する1−(2−ピリジルアゾ)
−2−ナフトール(PAN)、[金属キレート化剤の溶
剤抽出the 5olvent extraction
of metal chelates。
Jiri 5tary、 Pergamon Pres
s、 New York、 1964゜1)、 129
.130 ]を用いることが判明している。しかしなが
ら、この”PAN”法は、低濃度のマンガンに感受性で
はない。
s、 New York、 1964゜1)、 129
.130 ]を用いることが判明している。しかしなが
ら、この”PAN”法は、低濃度のマンガンに感受性で
はない。
マンガン錯体の形成
マンガンをはじめとする多くの金属イオンは、電子対供
与体と反応して配位化合物又は錯イオンを形成する。供
与体積(配位子)は結合形成に有用な少なくとも1対の
非共有電子を有していなければならない、水、アンモニ
ア、及びハロゲン化物イオンが一般的な配位子である。
与体と反応して配位化合物又は錯イオンを形成する。供
与体積(配位子)は結合形成に有用な少なくとも1対の
非共有電子を有していなければならない、水、アンモニ
ア、及びハロゲン化物イオンが一般的な配位子である。
例外はあるけれども、特定の陽イオンは普通、最大2.
4又は6個までの配位結合を形成し、その配位数はこの
最大値を示したものである。配位の結果形成される種は
、電気的に陽性、中性又は陰性である。
4又は6個までの配位結合を形成し、その配位数はこの
最大値を示したものである。配位の結果形成される種は
、電気的に陽性、中性又は陰性である。
マンガンは、[5,10,15,20−テトラキス(2
,6−シメチルー3−スルホナトフェニル)ポルフィナ
トゴーマンガン(rrBの場合のようにポルフィリン(
ヘマチンの鉄を含まない分解生成物質に関連した一群の
化合物)と錯体を形成し得る。この特定のマンガンポル
フィリン錯体は、pH7,6〜12.1で、過酸化水素
の水及び酸素へのカタラーゼ様転換を引き起こすことが
示されている(−射的には、Balasubraman
ian、 etal、、 ”Catalase Mo
deling、 2. Dynamics ofRea
ction of a Water 5oluble
and Non −−Ox。
,6−シメチルー3−スルホナトフェニル)ポルフィナ
トゴーマンガン(rrBの場合のようにポルフィリン(
ヘマチンの鉄を含まない分解生成物質に関連した一群の
化合物)と錯体を形成し得る。この特定のマンガンポル
フィリン錯体は、pH7,6〜12.1で、過酸化水素
の水及び酸素へのカタラーゼ様転換を引き起こすことが
示されている(−射的には、Balasubraman
ian、 etal、、 ”Catalase Mo
deling、 2. Dynamics ofRea
ction of a Water 5oluble
and Non −−Ox。
Dimer Forming Manganese(I
I)Porphyrin withHydrogen
Peroxide″、 J、 Am、 Chem、 S
ac、 109゜pp、 7865〜7873 (19
87)参照)、シかしながら。
I)Porphyrin withHydrogen
Peroxide″、 J、 Am、 Chem、 S
ac、 109゜pp、 7865〜7873 (19
87)参照)、シかしながら。
Balasubramanianの論文は、Mn−ポル
フィリンのカタラーゼ型反応の動力学を示していて、マ
ンガン検定法に関するものではない。
フィリンのカタラーゼ型反応の動力学を示していて、マ
ンガン検定法に関するものではない。
Balasubramanian法は、短寿命着色物質
に必要な停止流(ストップ−フロー)装置を用いており
、Mn検定には使用できない方法である。また、非常に
高濃度(io−’〜10−’M)のマンガンポルフィリ
ンが用いられたことにも留意すべきである。生成された
色は何れも一通性で、非常に不安定であった。これは、
2.2′−アジノビス(3−エチルベンズチアゾリンス
ルホン酸)(ABTS)がアルカリ性pHで非常に不安
定なためである。8又はそれ以上のpiに関しては、A
BTSによって生じる青色は急速に褪色する。
に必要な停止流(ストップ−フロー)装置を用いており
、Mn検定には使用できない方法である。また、非常に
高濃度(io−’〜10−’M)のマンガンポルフィリ
ンが用いられたことにも留意すべきである。生成された
色は何れも一通性で、非常に不安定であった。これは、
2.2′−アジノビス(3−エチルベンズチアゾリンス
ルホン酸)(ABTS)がアルカリ性pHで非常に不安
定なためである。8又はそれ以上のpiに関しては、A
BTSによって生じる青色は急速に褪色する。
骨粗髪症
本発明のマンガン検定は、骨粗n症及びその他の骨障害
の診断及び治療に有用である。したがって、骨粗髪症に
ついての簡単な考察を以下に示す。
の診断及び治療に有用である。したがって、骨粗髪症に
ついての簡単な考察を以下に示す。
骨粗n症は、骨質量の減少を特徴とする生理学的症状で
ある1本疾病は、45歳以上の人に年間約130万件骨
折を引き起こし、その費用は少なくとも70〜100億
ドルである。閉経後の女性は、本疾病の影響を最も受は
易い集団の1つである。 The National
In5titute on Agingは、この症状が
45歳以上の女性約半数、そして75歳以上の女性90
%を悩ませていると見積っている。
ある1本疾病は、45歳以上の人に年間約130万件骨
折を引き起こし、その費用は少なくとも70〜100億
ドルである。閉経後の女性は、本疾病の影響を最も受は
易い集団の1つである。 The National
In5titute on Agingは、この症状が
45歳以上の女性約半数、そして75歳以上の女性90
%を悩ませていると見積っている。
目下、骨粗n症を診断するための広範に認知された血液
又は尿検査法はないが、しかし原発性骨粗鬆症を診断し
あるいはそれに関連した危険因子を確認する実験質的試
験法は存在する。男女両方における原発性骨粗鬆症の一
危険因子である性機能低下は4、黄体形成ホルモン、を
戸胞刺激ホルモン、並びに女性におけるエストラジオー
ルレベル及び男性の遊離テストステロンレベルの測定を
はじめとする、性腺機能を査定するいくつかの実験質的
試験法によって確認することができる。
又は尿検査法はないが、しかし原発性骨粗鬆症を診断し
あるいはそれに関連した危険因子を確認する実験質的試
験法は存在する。男女両方における原発性骨粗鬆症の一
危険因子である性機能低下は4、黄体形成ホルモン、を
戸胞刺激ホルモン、並びに女性におけるエストラジオー
ルレベル及び男性の遊離テストステロンレベルの測定を
はじめとする、性腺機能を査定するいくつかの実験質的
試験法によって確認することができる。
一般に、骨粗n症は、定量的コンピュータ断層撮影法、
及び単一又は二重フォトン吸光測光法を含めて、主とし
て放射線学的方法によって診断する。しかしながら、こ
れらの方法は、それが生じた後にのみ骨損失を明示する
にすぎないために、使用が限られていた。
及び単一又は二重フォトン吸光測光法を含めて、主とし
て放射線学的方法によって診断する。しかしながら、こ
れらの方法は、それが生じた後にのみ骨損失を明示する
にすぎないために、使用が限られていた。
骨粗鬆症症候を有する患者においても測定可能なその他
の化学的性質としては、血清カルシウム、無機燐酸塩及
びアルカリ性ホスファターゼレベルが挙げられる。カル
シウムレベルは一般に、原発性骨粗n症においては正常
であるため、異常は、骨粗鬆症症候を引き起こしている
他の疾患の進行を示している可能性がある。血清アルカ
リ性ホスファターゼレベルは骨芽細胞がアルカリ性ホス
ファターゼを含有するために、骨芽細胞・・・骨形成に
関与する細胞・・・の活性とある程度相関する。
の化学的性質としては、血清カルシウム、無機燐酸塩及
びアルカリ性ホスファターゼレベルが挙げられる。カル
シウムレベルは一般に、原発性骨粗n症においては正常
であるため、異常は、骨粗鬆症症候を引き起こしている
他の疾患の進行を示している可能性がある。血清アルカ
リ性ホスファターゼレベルは骨芽細胞がアルカリ性ホス
ファターゼを含有するために、骨芽細胞・・・骨形成に
関与する細胞・・・の活性とある程度相関する。
しかしながら、最近骨折したのでない限り、アルカリ性
ホスファターゼレベルは骨粗n症患者においては正常で
あるために、この試験は骨粗鬆症の診断に役立たない。
ホスファターゼレベルは骨粗n症患者においては正常で
あるために、この試験は骨粗鬆症の診断に役立たない。
オステオカルシンレベルは、小児及び青年において増加
するために、多少は、骨活性に伴って上下して測定され
る。しかしながら、これらのレベルも、骨粗n症患者に
おいては正常である傾向を示す。
するために、多少は、骨活性に伴って上下して測定され
る。しかしながら、これらのレベルも、骨粗n症患者に
おいては正常である傾向を示す。
蛋白質電気泳動は、骨粗U性症候が骨粗n症と同様の症
候を引き起こし得る多発性骨髄腫によるものであるか否
かを測定するために実施する。血清及び尿量白質電気泳
動により、多発性骨髄腫症例の約99%が明示される。
候を引き起こし得る多発性骨髄腫によるものであるか否
かを測定するために実施する。血清及び尿量白質電気泳
動により、多発性骨髄腫症例の約99%が明示される。
女性、痩型体格、早期閉経、及び白色人種を含む多数の
危険因子が骨粗鬆症に関連があるけれども、その正確な
因果関係は不明である。骨質量は、約30歳でピークで
あると確信されており、この年齢でカルシウムはそれが
置換されるよりも速く骨から失われ始め、骨の密度が低
くなる。
危険因子が骨粗鬆症に関連があるけれども、その正確な
因果関係は不明である。骨質量は、約30歳でピークで
あると確信されており、この年齢でカルシウムはそれが
置換されるよりも速く骨から失われ始め、骨の密度が低
くなる。
原発性骨粗髪症を診断するための実験室試験法の進展を
遅らせている鍵となる問題は、罹患者の骨が組織学的に
異常であるということで、これを示すためには骨生検が
必要である。
遅らせている鍵となる問題は、罹患者の骨が組織学的に
異常であるということで、これを示すためには骨生検が
必要である。
マンガンと骨代謝
発行済み文献”Role of Manganese
in BoneMetabolism 、 by 5
trause and Saltman。
in BoneMetabolism 、 by 5
trause and Saltman。
reprinted from AC:S Sympo
sium 5eries N。
sium 5eries N。
354、 ”Nutritional Bioava
ilability ofManganese 、 1
987において、著者は、血清中の低マンガン濃度は骨
粗n症及びおそらくはその他の前症゛状に関係があると
示唆している。その論文は、正常女性の血清マンガンレ
ベルは約0.04±0 、 03mg/L (ミリグラ
ム/リットル)、モして骨粗鬆症女性の値は約0.02
±0.004mg/Lであることを示している。
ilability ofManganese 、 1
987において、著者は、血清中の低マンガン濃度は骨
粗n症及びおそらくはその他の前症゛状に関係があると
示唆している。その論文は、正常女性の血清マンガンレ
ベルは約0.04±0 、 03mg/L (ミリグラ
ム/リットル)、モして骨粗鬆症女性の値は約0.02
±0.004mg/Lであることを示している。
しかしながら、血清中の正常マンガン値は、一般に、約
0.0017〜O,0005mg/L(Strause
の論文で示唆されている0、04±0.03mg/Lと
いうよりも)の範囲であると考えられており、正常血清
マンガン濃度に関して一般的に受容される値は骨粗n症
女性に関して5trauseが報告したマンガンレベル
(0,01n+g/L)と実質的に重なり合う、したが
って、5trauseの論文はマンガン血清濃度と骨粗
n症との相関を示唆しているけれども、さらにじっくり
その論文を見ると、臨床的に有意の相関は認められない
、 0.01mg/Lの血清マンガン濃度は、このマン
ガンレベルを示す人が骨粗U症を有しているか否かを測
定するのにほとんど役立たない。
0.0017〜O,0005mg/L(Strause
の論文で示唆されている0、04±0.03mg/Lと
いうよりも)の範囲であると考えられており、正常血清
マンガン濃度に関して一般的に受容される値は骨粗n症
女性に関して5trauseが報告したマンガンレベル
(0,01n+g/L)と実質的に重なり合う、したが
って、5trauseの論文はマンガン血清濃度と骨粗
n症との相関を示唆しているけれども、さらにじっくり
その論文を見ると、臨床的に有意の相関は認められない
、 0.01mg/Lの血清マンガン濃度は、このマン
ガンレベルを示す人が骨粗U症を有しているか否かを測
定するのにほとんど役立たない。
(発明の目的)
本発明の目的は、ミクログラム/リットル濃度のマンガ
ンに感受性の乾式又は液体(湿式)マンガン検定(試験
)系を提供することである。
ンに感受性の乾式又は液体(湿式)マンガン検定(試験
)系を提供することである。
本発明のさらなる目的は、使用し易く、信顆度が高く、
大規模に製造するのに安価であるマンガン検定系を提供
することである。
大規模に製造するのに安価であるマンガン検定系を提供
することである。
本発明のさらなる目的は、体液中のマンガンレベルを正
確に測定することができて、骨粗n症の診断及び治癒を
助ける高感度マンガン検定系を提供することである。
確に測定することができて、骨粗n症の診断及び治癒を
助ける高感度マンガン検定系を提供することである。
さらにまた本発明の目的は、環境中のマンガン測定のた
めの検定系を提供することである。
めの検定系を提供することである。
本発明のその他の目的及び特徴は、以下Φ明細書を読め
ば、当業者には明らかになる。
ば、当業者には明らかになる。
(好ましい実施例の詳しい説明)
本発明は、酸化還元又は同様の型の指示薬(1〜100
mM)の酸化を触媒するためにMn(nBポルフィリン
錯体[5nM(ナノモル)〜0.1mM(ミリモル)]
を用いる診断試験に関する。多くの従来の検定系とは異
なり、ヘモグロビンは1本発明の試薬系を有意に妨害し
ない0本発明においては検定試薬系によって生成される
過酸化物又はヒドロペルオキシドはない、酵素は、この
系においては酸化体として用いる。酸素濃度は、そうで
なければ反応がマンガンポルフィリンよりも酸素によっ
て限定されるために、反応に十分な量でなければならな
い、酸素濃度はほぼ飽和値であるべきであるか、もしく
は試薬は空気に触れる(ストリップ型式の場合にように
)必要がある。これは、その範囲が0.25 (空気)
〜1.25 (純酸素)ミリモルであることを意味する
。促進剤(例えばキノリン、ピリジン等)、緩衝液、阻
害剤(例えばアジ化物、シアン化物等)が系中に存在し
てもよい。
mM)の酸化を触媒するためにMn(nBポルフィリン
錯体[5nM(ナノモル)〜0.1mM(ミリモル)]
を用いる診断試験に関する。多くの従来の検定系とは異
なり、ヘモグロビンは1本発明の試薬系を有意に妨害し
ない0本発明においては検定試薬系によって生成される
過酸化物又はヒドロペルオキシドはない、酵素は、この
系においては酸化体として用いる。酸素濃度は、そうで
なければ反応がマンガンポルフィリンよりも酸素によっ
て限定されるために、反応に十分な量でなければならな
い、酸素濃度はほぼ飽和値であるべきであるか、もしく
は試薬は空気に触れる(ストリップ型式の場合にように
)必要がある。これは、その範囲が0.25 (空気)
〜1.25 (純酸素)ミリモルであることを意味する
。促進剤(例えばキノリン、ピリジン等)、緩衝液、阻
害剤(例えばアジ化物、シアン化物等)が系中に存在し
てもよい。
マンガンの存在下で、本発明の試薬系は呈色応答を生じ
る。マンガンはボルフィルンと錯体を形成し酸化還元指
示薬の酸化を触媒する0体液中に自然に生じるマンガン
・ポルフィリン錯体は同様に等しく検出され、合成ポル
フィリンにより錯体化する必要はない、マンガンは触媒
として作用するため、非常に少量(ミクログラム/リッ
トル濃度)で呈色反応を起こし、その結果、検定系は極
めて感受性型が高い、さらに、本発明の試薬系は、正確
であるのみならず高価な装置の使用も熟練技師も必要と
しない簡単な単一一工程試薬系である。
る。マンガンはボルフィルンと錯体を形成し酸化還元指
示薬の酸化を触媒する0体液中に自然に生じるマンガン
・ポルフィリン錯体は同様に等しく検出され、合成ポル
フィリンにより錯体化する必要はない、マンガンは触媒
として作用するため、非常に少量(ミクログラム/リッ
トル濃度)で呈色反応を起こし、その結果、検定系は極
めて感受性型が高い、さらに、本発明の試薬系は、正確
であるのみならず高価な装置の使用も熟練技師も必要と
しない簡単な単一一工程試薬系である。
当分析対象物、即ちマンガンは、次のようにポルフィリ
ンと錯体を形成する: Mn+ポルフィリン = Mn・ポルフィリンマンガ
ン触媒を反応を以下に示す: Mn・ポルフィリン+0゜ =Mn・ポルフィリン・02 2H“+Mn・ポルフィリン・0゜ −(ポルフィリン”) M n = 0 + H20(
ポルフィリン”1Mn=0 + 酸化還元指示薬 + 酸化された指示薬 + H20 検定範囲は、1,0〜50,000悶/してあることが
立証されている0種々の試料中のマンガンの期待値を次
に示す: i1立 水 50.OI4/L(許容レベル)血液 8.
0〜18.7属/L 尿 0. 1〜20.0[/L 血漬 0,54〜1.76属八 本発明に用い得るポリフィリンを次に示す:XftCH
*、CH! CH@、CHI CH、CH、、又はCa
H4であり: Yはcoz H,PO,H,、又はSO*Hであり: ZはH,CHs、CH* CHm、 CH、CH、CH、、C,H4、OCH,。
ンと錯体を形成する: Mn+ポルフィリン = Mn・ポルフィリンマンガ
ン触媒を反応を以下に示す: Mn・ポルフィリン+0゜ =Mn・ポルフィリン・02 2H“+Mn・ポルフィリン・0゜ −(ポルフィリン”) M n = 0 + H20(
ポルフィリン”1Mn=0 + 酸化還元指示薬 + 酸化された指示薬 + H20 検定範囲は、1,0〜50,000悶/してあることが
立証されている0種々の試料中のマンガンの期待値を次
に示す: i1立 水 50.OI4/L(許容レベル)血液 8.
0〜18.7属/L 尿 0. 1〜20.0[/L 血漬 0,54〜1.76属八 本発明に用い得るポリフィリンを次に示す:XftCH
*、CH! CH@、CHI CH、CH、、又はCa
H4であり: Yはcoz H,PO,H,、又はSO*Hであり: ZはH,CHs、CH* CHm、 CH、CH、CH、、C,H4、OCH,。
NO−、CO−H,NH禽、Cj2、Br、又はFI2
であり; WはNH,NCHm又はCHである)、もしくは、 (式中、各Rは、それぞれ、 CHs、CH2CH、、CH2CH、CH、、CHIC
H、Co、HlCH,CO,HlCHa CH* P
Os Ha 、 CHx CHI! S Os HlC
HICHtOH,CH,CH2NH2、CH,CH=C
H,、CHOHCf(、、CH=CHa CHI又はS
O,から選択される)。
であり; WはNH,NCHm又はCHである)、もしくは、 (式中、各Rは、それぞれ、 CHs、CH2CH、、CH2CH、CH、、CHIC
H、Co、HlCH,CO,HlCHa CH* P
Os Ha 、 CHx CHI! S Os HlC
HICHtOH,CH,CH2NH2、CH,CH=C
H,、CHOHCf(、、CH=CHa CHI又はS
O,から選択される)。
ポルフィリンは、試料マンガンより高いモル濃度で存在
しなければならない。下記の化合物I及び■が、利用可
能性、溶解性、及び感受性の点から好ましい。
しなければならない。下記の化合物I及び■が、利用可
能性、溶解性、及び感受性の点から好ましい。
■=ジアセチラデウテロボルフイリン■ジメチルエステ
ル 1’V=5.10,15.20−テトラキス(4−1・
リメチルアンモニノフェニル)−ボルフィリンーテトう
(トルエン−4−スルホネート) 概して、発色用に用い得る物質を以下に示す: 顕色剤(発色剤) 又は5゜ 5′ 2゜6:又は2.8 [式中、RはH,CH,、CHaCHs、CH,CH,
OH,C,H,、 CH,CH重CH1(又はこれらの任意の組み合わせで
ある)]。
ル 1’V=5.10,15.20−テトラキス(4−1・
リメチルアンモニノフェニル)−ボルフィリンーテトう
(トルエン−4−スルホネート) 概して、発色用に用い得る物質を以下に示す: 顕色剤(発色剤) 又は5゜ 5′ 2゜6:又は2.8 [式中、RはH,CH,、CHaCHs、CH,CH,
OH,C,H,、 CH,CH重CH1(又はこれらの任意の組み合わせで
ある)]。
さらに、芳香環は、任意数のX基[XはH2O2、Br
、I、Fn、CN、 CHs、CH、CH、、CH−C
Hs CHs、OCHs、OCHa CHs、C5Hi
(又はこれらを任意に組み合わセたもの)]で置換され
得る。
、I、Fn、CN、 CHs、CH、CH、、CH−C
Hs CHs、OCHs、OCHa CHs、C5Hi
(又はこれらを任意に組み合わセたもの)]で置換され
得る。
カップリング剤
(式中、YはCH,S、OヌはNであるが、環内の任意
の特定位置に限定されない、) さらに、芳香環は、任意の数のX基[XはHlCu、B
r、 I 、 F (2,CN、 CHs、CH、C
H*、CHx CH* CHs、OCHS、OCH2C
HI、5osH,C02H1P Os H、C−Hs
(又はこれらの任意の組み合わせ)〕で置換され得る。
の特定位置に限定されない、) さらに、芳香環は、任意の数のX基[XはHlCu、B
r、 I 、 F (2,CN、 CHs、CH、C
H*、CHx CH* CHs、OCHS、OCH2C
HI、5osH,C02H1P Os H、C−Hs
(又はこれらの任意の組み合わせ)〕で置換され得る。
要すれば、界面活性を加えて発色を増強してもよく、陽
イオン性界面活性剤が好ましい。
イオン性界面活性剤が好ましい。
試験片又は試験具に関しては、通常、このような試験片
又は試験具は、グルー又は接着剤を用いて試薬パッドを
支持体に付着させて作製する。試薬パッドは実行する測
定のための試薬の活性成分を含有する。
又は試験具は、グルー又は接着剤を用いて試薬パッドを
支持体に付着させて作製する。試薬パッドは実行する測
定のための試薬の活性成分を含有する。
支持体は、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレ
ン、ポリカーボネート等をはじめとする任意の適切な材
料から作製し得る。好ましくは、支持体は、製造を促進
するために可撓性である。
ン、ポリカーボネート等をはじめとする任意の適切な材
料から作製し得る。好ましくは、支持体は、製造を促進
するために可撓性である。
一般に、試験具は、試験具を分析中の試験液に浸漬又は
接触させる場合のハンドルとして支持体の一端を用いる
ことができるよう、長い支持体を有する。好ましい物質
はトリザイトTrycite (ポリスチレン、Dnw
Chemical Co+npany製)である。
接触させる場合のハンドルとして支持体の一端を用いる
ことができるよう、長い支持体を有する。好ましい物質
はトリザイトTrycite (ポリスチレン、Dnw
Chemical Co+npany製)である。
試薬パッドを支持体に結合するために用いるグルーヌは
接着剤は、パッドを支持体に結合し、異なる材料をとも
に容易に結合することができる任意の適切な材料であっ
てよい、3 M Companyから市販されているD
ouble−3tickとして公知の両面接着テープが
好ましい。
接着剤は、パッドを支持体に結合し、異なる材料をとも
に容易に結合することができる任意の適切な材料であっ
てよい、3 M Companyから市販されているD
ouble−3tickとして公知の両面接着テープが
好ましい。
試薬パッドは、任意の適切な材料から作製することがで
きる。米国特許第3.846.247号は、フェルト、
多孔質セラミック材、及びガラス繊維織物又はマット生
地の使用を教示している。
きる。米国特許第3.846.247号は、フェルト、
多孔質セラミック材、及びガラス繊維織物又はマット生
地の使用を教示している。
さらに、米国特許第3.552.928号は、木材、布
、スポンジ物質及び陶土質物質の使用を教示する。担体
マトリックスとしてガラス繊維フェルト中に合成樹脂フ
リースを用いることが、英国特許第1.369.139
号に示唆されている。
、スポンジ物質及び陶土質物質の使用を教示する。担体
マトリックスとしてガラス繊維フェルト中に合成樹脂フ
リースを用いることが、英国特許第1.369.139
号に示唆されている。
別の英国特許第1.349,623号は、下層紙マトリ
ックス用カバーとして細いフィラメントの光透過性網状
体の使用を提案している。ポリイミド繊維は仏国特許第
2.170.379号に教示されている。しかしながら
、これらの示唆にもかかわらず、試薬パッド用の担体マ
トリックスとして当業界で主に用いられる材料、並びに
本発明において特に有用である物質は、濾紙及び多孔質
親水性フィルムのような吸水性紙である。
ックス用カバーとして細いフィラメントの光透過性網状
体の使用を提案している。ポリイミド繊維は仏国特許第
2.170.379号に教示されている。しかしながら
、これらの示唆にもかかわらず、試薬パッド用の担体マ
トリックスとして当業界で主に用いられる材料、並びに
本発明において特に有用である物質は、濾紙及び多孔質
親水性フィルムのような吸水性紙である。
試薬パッドは、一般に、接着剤を用いて試薬パッドと支
持体とを結合する前に、試薬物質を含浸させる。
持体とを結合する前に、試薬物質を含浸させる。
夫五五ユ
A、乾式試薬形式
入墨
50n+L(ミリリットル) H2O
7,0g (グラム) 二塩基性燐酸カリウムpH10
,7に調節 l理 15mg ジアセチラデウテロボルフィルン■ジメチ
ルエステル 25mL DMF 」 0.88g テトラメチルベンジジン(TMB) 50IIIL ジメチルホルムアミド(DMF)A部
と0部を混合する。50mLのDMFを加え、その後B
部を加える。 Whatman 3MM濾紙をその溶液
に15秒間浸漬する。取り出して、20〜30℃、相対
湿度30〜80%の制御条件下で空気乾燥する。
,7に調節 l理 15mg ジアセチラデウテロボルフィルン■ジメチ
ルエステル 25mL DMF 」 0.88g テトラメチルベンジジン(TMB) 50IIIL ジメチルホルムアミド(DMF)A部
と0部を混合する。50mLのDMFを加え、その後B
部を加える。 Whatman 3MM濾紙をその溶液
に15秒間浸漬する。取り出して、20〜30℃、相対
湿度30〜80%の制御条件下で空気乾燥する。
B、試験溶液を、先ずマンガン■二酢酸水溶液を作るこ
とにより調製した。その溶液を、少量ずつ、ポルフィリ
ンの5000μg/L(ミクログラム/リットル)水溶
液と混合し、60℃で15分加熱した。5000JJ4
/L溶液を水で希釈して、2.074ル試験溶液を作っ
た。
とにより調製した。その溶液を、少量ずつ、ポルフィリ
ンの5000μg/L(ミクログラム/リットル)水溶
液と混合し、60℃で15分加熱した。5000JJ4
/L溶液を水で希釈して、2.074ル試験溶液を作っ
た。
C9乾式試薬紙を試験溶液に浸漬する。5分後、青色に
変わるのを眼で検出する。
変わるのを眼で検出する。
!血豊1
1)TMB指示薬
■=
エタノールに溶解した0、OIM(モル)DBH
エタノールに溶解した0、01Mテトラメチルベンジジ
ン 0、 IN NaOH 3X10−’Mマンガン5.10,15.20−テトラ
キス−(4−トリメチルアンセン−10−フェニル)ポ
ルフィリン−テトラ(トルエン−4−スルホネート) 反応混合液は、tooopt、NaOH+200pL
DBDH+200PL TMB+20pL マン
ガンポルフィリン(希釈)液を含んでいた。
ン 0、 IN NaOH 3X10−’Mマンガン5.10,15.20−テトラ
キス−(4−トリメチルアンセン−10−フェニル)ポ
ルフィリン−テトラ(トルエン−4−スルホネート) 反応混合液は、tooopt、NaOH+200pL
DBDH+200PL TMB+20pL マン
ガンポルフィリン(希釈)液を含んでいた。
反応の開始2分間、422nmで吸光度変化を測定した
。吸光度は、マンガン・ポリフィリン濃度に比例する。
。吸光度は、マンガン・ポリフィリン濃度に比例する。
0.0274/Lマンガンの溶液は、約0.02の吸光
度変化を示す。
度変化を示す。
2)ジメチル−p−フェニレンジアミン指示薬
′ajM:
エタノールに溶解した0、OIM DBDHO,OI
M N、N−ジメチル−p−フェニレンジアミン 0、OIMS−ヒドロキシ−キノリン 0、IN NaOH 3X10−’M マンガン5.10,15,20−テ
トラキス−(4−トリメチルアンモン−10−フェニル
)ボルフィリンーテト′5(トルエン−4−スルホネー
用−) 反応混合液は、1000pL NaOH+200pL
DBDH+200i 8−ヒドロキシギノリン+
200Pl−N、N−ジメチル−p−フェニレンジアミ
ン+20pL マンガン・ポルフィリン(希釈)溶液
を含んでいた。
M N、N−ジメチル−p−フェニレンジアミン 0、OIMS−ヒドロキシ−キノリン 0、IN NaOH 3X10−’M マンガン5.10,15,20−テ
トラキス−(4−トリメチルアンモン−10−フェニル
)ボルフィリンーテト′5(トルエン−4−スルホネー
用−) 反応混合液は、1000pL NaOH+200pL
DBDH+200i 8−ヒドロキシギノリン+
200Pl−N、N−ジメチル−p−フェニレンジアミ
ン+20pL マンガン・ポルフィリン(希釈)溶液
を含んでいた。
反応の開始2分間、620r+mで吸光度変化を測定し
l:二、吸光度は、マンガン・ポルフィリン濃度に比例
する。
l:二、吸光度は、マンガン・ポルフィリン濃度に比例
する。
夫里文旦
結合指示薬系
高pH値で安定色を呈して非常に申し分ないことが立証
されている指示薬は、ナフトール又はヒドロギシギノリ
ン系カップリング剤を伴うフェニレンジアミン発色剤で
ある。これらの化合物の中には、一定の好ましい組み合
わせがある。これを説明するl、−めに、多数のp−フ
ェニレンジアミンと共に、多数の置換l−ナフトールを
調べた。それらは、1%洗剤(エチルグア上18/25
メチルポリオキシエチレ二)(15)オクタデンルアン
モニウムクロリド)を含むO,LM NaOHに溶解
した指示薬の500マイクロモルi@液として評価され
た。5.10.15.20−テトラキス(2,6−シメ
チルー3−スルホナトフェニル)ポルフィンマノガンの
濃度は10−’Mであった。
されている指示薬は、ナフトール又はヒドロギシギノリ
ン系カップリング剤を伴うフェニレンジアミン発色剤で
ある。これらの化合物の中には、一定の好ましい組み合
わせがある。これを説明するl、−めに、多数のp−フ
ェニレンジアミンと共に、多数の置換l−ナフトールを
調べた。それらは、1%洗剤(エチルグア上18/25
メチルポリオキシエチレ二)(15)オクタデンルアン
モニウムクロリド)を含むO,LM NaOHに溶解
した指示薬の500マイクロモルi@液として評価され
た。5.10.15.20−テトラキス(2,6−シメ
チルー3−スルホナトフェニル)ポルフィンマノガンの
濃度は10−’Mであった。
吸光スベクl−ルは、試薬混合後、10分で測定した。
最大吸収波長は表1に示し、ブランクからの、試料を含
むポルフィリンの吸収の差は、発色剤とカップリング剤
の種々の組み合わせに関して表2に示す。
むポルフィリンの吸収の差は、発色剤とカップリング剤
の種々の組み合わせに関して表2に示す。
1 び2に・ る・
発色剤:
1=1.4−フェニレンジアミン
2=N、N−ジエチル−1,4−フェニレンジアミンス
ルフェート 3=2−クロロ−1,4−フェニレンジアミン 4=2−メトキシ−1,4−フェニレンジアミン 5=N、N−ジメチル−1,4−フェニレンジアミン 6=2.3,5.6−テトラメチル−1,4−フエニレ
ンジアミン 7=N−フェニル−1,4−フェニレンジアミン 8=N、N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,4−
フェニレンジアミン 9=4−N、N−ジエチル−2−メチルフェニレンジア
ミン 有意の反応性を示さない発色剤は: 2−ニトロー1.4−フェニレンジアミンN−4−メト
キシフェニル−1,4−フェニレンジアミン であった。
ルフェート 3=2−クロロ−1,4−フェニレンジアミン 4=2−メトキシ−1,4−フェニレンジアミン 5=N、N−ジメチル−1,4−フェニレンジアミン 6=2.3,5.6−テトラメチル−1,4−フエニレ
ンジアミン 7=N−フェニル−1,4−フェニレンジアミン 8=N、N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,4−
フェニレンジアミン 9=4−N、N−ジエチル−2−メチルフェニレンジア
ミン 有意の反応性を示さない発色剤は: 2−ニトロー1.4−フェニレンジアミンN−4−メト
キシフェニル−1,4−フェニレンジアミン であった。
カップリング剤:
A=1−ナフトール
B=1−ヒドロキシ−2−ナフトエ酸
C=2−メチルー1−ナフトール
D=1−ナフトール−3,6−ジスルホン酸E=4−メ
トキシ−1−ナフトール F=4−アミノー1−ナフトール G=4.5−ジヒドロキシナフタレン H=4−アミノ−5−ヒドロキシ−1−ナフタレンスル
ホン酸 I=5−アミノ−1−ナフトール J=4−クロロ−1−ナフトール に=1,5−ジヒドロキシナフタレン L=6−アミノ−4−ヒドロキシ−2−ナフタレンスル
ホン酸 M=1.6−ジヒドロキシナフタレン N=1.7−ジヒドロキシナフタレン 有意の反応性を示さないカップリング剤は:2−ニトロ
ソー1−ナフトール 2−ニトロ−1−ナフトール 1.3−ジヒドロキシナフタレン であった。
トキシ−1−ナフトール F=4−アミノー1−ナフトール G=4.5−ジヒドロキシナフタレン H=4−アミノ−5−ヒドロキシ−1−ナフタレンスル
ホン酸 I=5−アミノ−1−ナフトール J=4−クロロ−1−ナフトール に=1,5−ジヒドロキシナフタレン L=6−アミノ−4−ヒドロキシ−2−ナフタレンスル
ホン酸 M=1.6−ジヒドロキシナフタレン N=1.7−ジヒドロキシナフタレン 有意の反応性を示さないカップリング剤は:2−ニトロ
ソー1−ナフトール 2−ニトロ−1−ナフトール 1.3−ジヒドロキシナフタレン であった。
最大吸収波長及び吸光度の大きさがともに、フェニレン
ジアミン及びナフトールに依存することは、表1及び2
のデータから明らかである。ある組み合わせは、他のも
のより高い感受性を示す。
ジアミン及びナフトールに依存することは、表1及び2
のデータから明らかである。ある組み合わせは、他のも
のより高い感受性を示す。
1.4−フェニレンジアミンに加えて、1.2−フェニ
レンジアミンが良好な色を呈することが観察された。1
−ナフトールに加えて、2−ナフトール及びヒドロキシ
キノリンが良好に呈色することが観察された。
レンジアミンが良好な色を呈することが観察された。1
−ナフトールに加えて、2−ナフトール及びヒドロキシ
キノリンが良好に呈色することが観察された。
叉里ヨy
種々のポルフィリン
デウテロボルフィリン■2,4−ジスルホン酸ジメチル
エステル(A)、メソ−テトラ−(4−スルホナトフェ
ニル)−ポルフィン(B)、テトラ(N−メチル−4−
ピリジル)ポルフィンテトラトシレート (C)、5.
10,15.20−テトラキス(2,6−シメチルー3
−スルホナトフェニル)ポルフィン(D)、及びウロポ
ルフィリンニジヒドロクロリド(E)の水溶液を調製し
た。ポルフィリン及び酢酸マンガンの90マイクロモル
溶液を室温で、そして80℃で、24時間インキュベー
トした。吸収スペクトルを図1〜5に示す、実線は室温
試料で、初期混合液と同一であり、破線は80℃でイン
キュベートした試料である。マンガンイオンの添加によ
って生じたスペクトル変化が非常に明白である。
エステル(A)、メソ−テトラ−(4−スルホナトフェ
ニル)−ポルフィン(B)、テトラ(N−メチル−4−
ピリジル)ポルフィンテトラトシレート (C)、5.
10,15.20−テトラキス(2,6−シメチルー3
−スルホナトフェニル)ポルフィン(D)、及びウロポ
ルフィリンニジヒドロクロリド(E)の水溶液を調製し
た。ポルフィリン及び酢酸マンガンの90マイクロモル
溶液を室温で、そして80℃で、24時間インキュベー
トした。吸収スペクトルを図1〜5に示す、実線は室温
試料で、初期混合液と同一であり、破線は80℃でイン
キュベートした試料である。マンガンイオンの添加によ
って生じたスペクトル変化が非常に明白である。
触媒活性試験を次に示す、それらは、1%洗剤(エチル
クアド18/25メチルポリオキシエチレン(15)オ
クタデシルアンモニウムクロリド)を含むO,IM
NaOH中に溶解したN、N−ビス(2−ヒドロキシエ
チル)−1,4−フェニレンジアミンと2−メチル−1
−ナフトールの500マイクロモル溶液中で評価した。
クアド18/25メチルポリオキシエチレン(15)オ
クタデシルアンモニウムクロリド)を含むO,IM
NaOH中に溶解したN、N−ビス(2−ヒドロキシエ
チル)−1,4−フェニレンジアミンと2−メチル−1
−ナフトールの500マイクロモル溶液中で評価した。
マンガン−ポルフィリン濃度は10−”Mであった。反
応率は、606nm(ナノメータ)で測定された、45
秒で生じた吸光度変化から求めたものである6 表3 種々のポルフィリンの反応率 ポルフィリン反応率(吸光度7秒) ブランク 、0059 A 、0080 B 、0058 C,1472 D 、1585 E 、0092 ポルフィリンBは明らかな活性を示さず、ポルフィリン
A及びEは低反応性を示したが、一方ボルフィリンC及
びDが非常に高い活性を示した、ということは意外であ
る、さらに高濃度のポルフィリンBを用いた場合には、
その反応性は測定可能であるかもしれない。
応率は、606nm(ナノメータ)で測定された、45
秒で生じた吸光度変化から求めたものである6 表3 種々のポルフィリンの反応率 ポルフィリン反応率(吸光度7秒) ブランク 、0059 A 、0080 B 、0058 C,1472 D 、1585 E 、0092 ポルフィリンBは明らかな活性を示さず、ポルフィリン
A及びEは低反応性を示したが、一方ボルフィリンC及
びDが非常に高い活性を示した、ということは意外であ
る、さらに高濃度のポルフィリンBを用いた場合には、
その反応性は測定可能であるかもしれない。
支度豊ヱ
溶解血液対非溶解血液
非溶解血液を用いて反応性を比較すると、その反応は血
球によって触媒されるが、溶解血液で観察される活性の
約20%の活性を示した。
球によって触媒されるが、溶解血液で観察される活性の
約20%の活性を示した。
試料は、1%洗剤(エチルクア、ド18/25メチルポ
リオキシ−エチレン(15)−オクタデジルアンモニウ
ムクロリド)を含む0.1MNa、OHに溶解したN、
N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,4−フェニレ
ンジアミン及び2−メヂルー]−ナフトールの500ミ
リモル溶液として評価した。5マイクロリツトルの血液
試料を用いた。
リオキシ−エチレン(15)−オクタデジルアンモニウ
ムクロリド)を含む0.1MNa、OHに溶解したN、
N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,4−フェニレ
ンジアミン及び2−メヂルー]−ナフトールの500ミ
リモル溶液として評価した。5マイクロリツトルの血液
試料を用いた。
1立土玉
酸化体及びpHの効果
過酸化水素もヒドロペルオキシドも必要な試薬ではない
が、しかし空気からの酸素は申し分ない酸化体である、
ということが判明している。これは、以下の実験の結果
により立証される。
が、しかし空気からの酸素は申し分ない酸化体である、
ということが判明している。これは、以下の実験の結果
により立証される。
Chen+velope緩衝液(American 5
cientificProductslを用いて、pH
を10.11及び12にし、O,LM NaOHを用
いて、約pH13とし、IM NaOHは、約pH1
4にするために用いた0反応混合液は、5%メタノール
で変性したアルコールに溶解したlOミリモル酸化体1
00マイクロリットル、又は空気飽和実験用の3Aアル
コール100マイクロリツトルと5マイクロモル水性N
、N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,4−フェニ
レンジアミン及び5マイクロモルアルコール性2−メチ
ル−1−ナフトールの100マイクロリツトルとを、1
%洗剤(エチルクアド1 B/25メチルポリオキシエ
チレン(15)オクタデシルアンモニウムクロリド)を
含有する塩基又は緩衝液700マイクロリツトルととも
に混合して、調製した。5.10.15゜20−テトラ
キス(2,6−シメチルー3−スルホナトフェニル)ポ
ルフィンマンガンの濃度は、10″sMであった。
cientificProductslを用いて、pH
を10.11及び12にし、O,LM NaOHを用
いて、約pH13とし、IM NaOHは、約pH1
4にするために用いた0反応混合液は、5%メタノール
で変性したアルコールに溶解したlOミリモル酸化体1
00マイクロリットル、又は空気飽和実験用の3Aアル
コール100マイクロリツトルと5マイクロモル水性N
、N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,4−フェニ
レンジアミン及び5マイクロモルアルコール性2−メチ
ル−1−ナフトールの100マイクロリツトルとを、1
%洗剤(エチルクアド1 B/25メチルポリオキシエ
チレン(15)オクタデシルアンモニウムクロリド)を
含有する塩基又は緩衝液700マイクロリツトルととも
に混合して、調製した。5.10.15゜20−テトラ
キス(2,6−シメチルー3−スルホナトフェニル)ポ
ルフィンマンガンの濃度は、10″sMであった。
ブランク反応に関しては、データは、試薬混合後5分の
吸光度変化である。マンガン−ポルフィリンを有する試
料に関しては、データは、マンガンポリフィリンを有す
る試料(ブランクからの)に関して観察された吸光度変
化の差である。
吸光度変化である。マンガン−ポルフィリンを有する試
料に関しては、データは、マンガンポリフィリンを有す
る試料(ブランクからの)に関して観察された吸光度変
化の差である。
0.1M NaOHを用いた場合に、マンガンポルフ
ィリンに関する最高感受性が観察されることは、このデ
ータから明らかである。ブランク反応は、pHが低下し
た場合に増大する。過酸化水素は、ブランク反応性を低
下させる。酸化体は、反応混合液中に1ミリモルで存在
するが、一方酸素は、約0.25ミリモルの濃度で存在
する。酸化体を加えた場合は、反応性の劇的増大が期待
される。これは観察されなかった。
ィリンに関する最高感受性が観察されることは、このデ
ータから明らかである。ブランク反応は、pHが低下し
た場合に増大する。過酸化水素は、ブランク反応性を低
下させる。酸化体は、反応混合液中に1ミリモルで存在
するが、一方酸素は、約0.25ミリモルの濃度で存在
する。酸化体を加えた場合は、反応性の劇的増大が期待
される。これは観察されなかった。
夫立旦]
酸素の効果
酸素は、本反応の酸化の源であるため、酸素濃度依存性
が予期される。
が予期される。
空気及び酸素飽和溶液を、1%洗剤(エチルクアド18
/25メチルポリオキシエチレン(15)オクタデシル
アンモニウムクロリド)を含むO,IM NaOHに
溶解したN、N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,
4−フェニレンジアミン及び2−メチル−1−ナフトー
ルの500マイクロモル溶液で評価した。5.10゜1
5.20−テトラキス〔2,6−ジメチル−3−スルホ
ナトフェニル)ポルフィンマンガン濃房は、10−”M
であった。その溶液を酸素で飽和した場合、ブランク反
応率は2倍になったが、マユガンポルフィリン反応率は
本質的に変化しなか二た。したがって、これらの実験条
件下では、酸雲は反応率を制限しない。
/25メチルポリオキシエチレン(15)オクタデシル
アンモニウムクロリド)を含むO,IM NaOHに
溶解したN、N−ビス(2−ヒドロキシエチル)−1,
4−フェニレンジアミン及び2−メチル−1−ナフトー
ルの500マイクロモル溶液で評価した。5.10゜1
5.20−テトラキス〔2,6−ジメチル−3−スルホ
ナトフェニル)ポルフィンマンガン濃房は、10−”M
であった。その溶液を酸素で飽和した場合、ブランク反
応率は2倍になったが、マユガンポルフィリン反応率は
本質的に変化しなか二た。したがって、これらの実験条
件下では、酸雲は反応率を制限しない。
夫鑑五■
水溶液、尿及び血液試料の検定
水及び尿に酢酸マンガンを加えて、種々のマンガンレベ
ルにした。試料を等容量のテトラ(N−メチル−4−ピ
リジル)ポルフィンテトラシレートと混合して、80℃
で4時間インキュベートした。つぎに、1%洗剤(エチ
ルクアド18/25メチルポリオキシエチレン(15)
オクタデシルアンモニウムクロリド)を含む0.IM
NaOHに溶解したN、N−ビス(2−ヒドロキシエ
チル)−1,4−フェニレンジアミン及び2−メチル−
1−ナフトールの500マイクロモル溶液を用いて、ア
リコートを検定した。吸光度の変化が0.5を超える場
合は、吸光度変化が吸光度単位の半分より低くなるまで
、試料を希釈した。報告した吸光度は、45秒での吸光
度変化−ブランクの吸光度である。100g八以上のマ
ンガン濃度に関しては、少量試料を用い、吸光度変化は
、1oOuLの試料容量に対して予期される変化に対応
して度盛りした。
ルにした。試料を等容量のテトラ(N−メチル−4−ピ
リジル)ポルフィンテトラシレートと混合して、80℃
で4時間インキュベートした。つぎに、1%洗剤(エチ
ルクアド18/25メチルポリオキシエチレン(15)
オクタデシルアンモニウムクロリド)を含む0.IM
NaOHに溶解したN、N−ビス(2−ヒドロキシエ
チル)−1,4−フェニレンジアミン及び2−メチル−
1−ナフトールの500マイクロモル溶液を用いて、ア
リコートを検定した。吸光度の変化が0.5を超える場
合は、吸光度変化が吸光度単位の半分より低くなるまで
、試料を希釈した。報告した吸光度は、45秒での吸光
度変化−ブランクの吸光度である。100g八以上のマ
ンガン濃度に関しては、少量試料を用い、吸光度変化は
、1oOuLの試料容量に対して予期される変化に対応
して度盛りした。
表5 尿及び血液試料に関する反応
45秒でのマンガン濃度吸光度変化(us /L)−一
丞一一 −一里一一 3 0.0381 0.001810
0.077]5 0.01g?30 0.
2041 0.06875100 0.9
18 0.336550 4.13
1.1225500 14.7
16.5データは、吸光度変化のほぼ直線的なマンガン
濃度依存性を示す。
丞一一 −一里一一 3 0.0381 0.001810
0.077]5 0.01g?30 0.
2041 0.06875100 0.9
18 0.336550 4.13
1.1225500 14.7
16.5データは、吸光度変化のほぼ直線的なマンガン
濃度依存性を示す。
反復データから算出された標準偏差から、マンガン濃度
の標準偏差は、水に関しては1.74ル(マイクログラ
ム/リットル)、尿に関しては35ノyll/1.、で
、総マンガン濃度10ug/I、より低い7これは、単
一測定に関する検出限界の概算値を示す、 血清の300μI4アリコートを5.10.1520−
テトーラキス(2,6−シメチルー3−スルボナトフェ
ニル)ポルフィンの100マイクロモル溶液100pL
と混合し、酢酸マンガンを加えて、濃度を0.2マイク
ロモルとした。この混合液を80℃で24時間インキュ
ベートシた。つぎに100μm、アリコートを、1%洗
剤(エヂルクアド18 / 25メチルーポリオキシエ
チ1ノン(15)オクタデシルアンモニウムクロリド)
を含む0.IM NaOHに溶解したN、N−ビス(
2−ヒドロキシエチル)−1,4−フェニlノンジアミ
ン及び2−メチル−1−ナフトールの500マイクロモ
ル溶液を用いて検定した。2分インキュベー1・後の6
15ナノメータでの吸光度は0.2423であったが、
一方ブランクは0.0813の吸光度を示した。
の標準偏差は、水に関しては1.74ル(マイクログラ
ム/リットル)、尿に関しては35ノyll/1.、で
、総マンガン濃度10ug/I、より低い7これは、単
一測定に関する検出限界の概算値を示す、 血清の300μI4アリコートを5.10.1520−
テトーラキス(2,6−シメチルー3−スルボナトフェ
ニル)ポルフィンの100マイクロモル溶液100pL
と混合し、酢酸マンガンを加えて、濃度を0.2マイク
ロモルとした。この混合液を80℃で24時間インキュ
ベートシた。つぎに100μm、アリコートを、1%洗
剤(エヂルクアド18 / 25メチルーポリオキシエ
チ1ノン(15)オクタデシルアンモニウムクロリド)
を含む0.IM NaOHに溶解したN、N−ビス(
2−ヒドロキシエチル)−1,4−フェニlノンジアミ
ン及び2−メチル−1−ナフトールの500マイクロモ
ル溶液を用いて検定した。2分インキュベー1・後の6
15ナノメータでの吸光度は0.2423であったが、
一方ブランクは0.0813の吸光度を示した。
5.10.15.20−テトラキス(2,6−シメチル
ー3−スルポナl−フェニル)ポルフィンマンガンを用
いた検定により、濃度は0.09マイクロモルに相当す
ると算出された。実験は、血清中のマンガンがこの検定
系によって測定さね得ることを示している。同一実験の
反復した場合の標準偏差から、血清マンガンポルフィリ
ンに対する検定の感受性は1.2n/Lである。
ー3−スルポナl−フェニル)ポルフィンマンガンを用
いた検定により、濃度は0.09マイクロモルに相当す
ると算出された。実験は、血清中のマンガンがこの検定
系によって測定さね得ることを示している。同一実験の
反復した場合の標準偏差から、血清マンガンポルフィリ
ンに対する検定の感受性は1.2n/Lである。
K嵐豊旦
マンガンに関する血液検定
血液試料を、Ga1braith Laborat、o
ries Inc(Knoxville、 Tenne
ssec379211に、非火炎性原子吸収による検定
のために発送した。初期実験は、血清マンガンレベルが
実験室の検出限界以下であるが、赤血球凝固中のマンガ
ンは検定可能であることを示した。したがって、この実
験は、マンガンに関して血清を検定した5trause
及びSaltmanの報告とは異なっている。
ries Inc(Knoxville、 Tenne
ssec379211に、非火炎性原子吸収による検定
のために発送した。初期実験は、血清マンガンレベルが
実験室の検出限界以下であるが、赤血球凝固中のマンガ
ンは検定可能であることを示した。したがって、この実
験は、マンガンに関して血清を検定した5trause
及びSaltmanの報告とは異なっている。
骨粗n症を有していない女性からの20例の対照試料と
、骨粗n症の女性からの18例の試料は、C1evel
and Chemicから得られたものである。
、骨粗n症の女性からの18例の試料は、C1evel
and Chemicから得られたものである。
患者及び試料に関するデータを表6及び7に示ず9
対照試料中のマンガンは11.77(標準偏差3、 3
7) ug/l−であっt:。骨粗U症の平均は877
(標準偏差299)で25%低く、統計学的有意差が認
められる。結果は、マンガンが骨粗鬆症の方が低いとい
う主張を指示する。残念ながら、本研究に関しては年齢
適合対照試料が得られなかったために、2つの試料集団
は年齢において統計的に異なっている。マンガン濃度及
び患者年齢を、第6図にプロットする。しかしながら、
対照又は骨粗n症患者の間に、マンガン濃度の統計学的
に有意の患者年齢依存性は認められない、2集団のマン
ガンレベルがいくつか重なり合っているのがグラフにお
いて明らかであ表6 骨粗鬆症女性に関するデータ 110μ吋 152.3 150.0 160.8 149.3 160.3 152.2 161.9 152.0 163.3 156.5 156.2 152.3 147.1 161.9 154.2 −1Uニー 10.0 6.1 8.5 6.5 9.6. 9.4 く2 5.0 11.6 13.5.10.7 14.7 9.2 8.7 5.6 11.9 7.5 8.7 9.0 10.4 表7 骨粗鬆症を有していない女性に関する データ 屋1己μ蛙 154.5 167、6 170.2 172.7 147.3 168.9 159.6 167.6 162.5 166.4 165.1 162.6 172.1 170.3 166.3 166.2 体1山1− 68.8 86.2 66.7 72.6 54.4 57.6 63.5 61.3 80.3 71.2 52.2 64.9 95.3 72.5 54.4 一匹刀。
7) ug/l−であっt:。骨粗U症の平均は877
(標準偏差299)で25%低く、統計学的有意差が認
められる。結果は、マンガンが骨粗鬆症の方が低いとい
う主張を指示する。残念ながら、本研究に関しては年齢
適合対照試料が得られなかったために、2つの試料集団
は年齢において統計的に異なっている。マンガン濃度及
び患者年齢を、第6図にプロットする。しかしながら、
対照又は骨粗n症患者の間に、マンガン濃度の統計学的
に有意の患者年齢依存性は認められない、2集団のマン
ガンレベルがいくつか重なり合っているのがグラフにお
いて明らかであ表6 骨粗鬆症女性に関するデータ 110μ吋 152.3 150.0 160.8 149.3 160.3 152.2 161.9 152.0 163.3 156.5 156.2 152.3 147.1 161.9 154.2 −1Uニー 10.0 6.1 8.5 6.5 9.6. 9.4 く2 5.0 11.6 13.5.10.7 14.7 9.2 8.7 5.6 11.9 7.5 8.7 9.0 10.4 表7 骨粗鬆症を有していない女性に関する データ 屋1己μ蛙 154.5 167、6 170.2 172.7 147.3 168.9 159.6 167.6 162.5 166.4 165.1 162.6 172.1 170.3 166.3 166.2 体1山1− 68.8 86.2 66.7 72.6 54.4 57.6 63.5 61.3 80.3 71.2 52.2 64.9 95.3 72.5 54.4 一匹刀。
8.5
12.1
6.4
18.1
16.9
14.9
9.5
8.1
12.1
12.3
11.3
10.3
10.0
8.2
1O18
14,3
18,3
12,4
8,4
12,5
前記より、本発明は、明らかで且つ固有のその他の利点
とともに、本明細書に前記された全ての結果及び異論に
十分適合されることが判かる。
とともに、本明細書に前記された全ての結果及び異論に
十分適合されることが判かる。
本発明の精神及び範囲を逸脱しない限りにおいて、本明
細書に前述された本発明の多くの修正及び変更が可能で
あり、したがって1.特許請求の範囲に示されるような
制限のみが課せられているだけである。
細書に前述された本発明の多くの修正及び変更が可能で
あり、したがって1.特許請求の範囲に示されるような
制限のみが課せられているだけである。
本発明のその他のさらなる目的、利点及び特徴は、上記
の詳細な説明と添付の図面とから、当業者には明らかで
あると思われる。 第1〜5図は、実施例■に従って、吸収スペクトルを示
す。 第6図は、実施例■におけるデータに従って、マンガン
濃度及び患者年齢のプロットを示す。
の詳細な説明と添付の図面とから、当業者には明らかで
あると思われる。 第1〜5図は、実施例■に従って、吸収スペクトルを示
す。 第6図は、実施例■におけるデータに従って、マンガン
濃度及び患者年齢のプロットを示す。
Claims (10)
- (1)μg/l濃度に感受性のマンガン検定系であって
、次式: ▲数式、化学式、表等があります▼ (式中、Rは▲数式、化学式、表等があります▼であり
; XはCH_3、CH_2CH_3、CH_2CH_2C
H_3、又はC_6H_4であり; YはCO_2H、PO_3H_2、又はSO_3Hであ
り: ZはH、CH_3、CH_2CH_3、 CH_2CH_2CH_3、C_6H_4、OCH_2
、NO_2、CO_2H、NH_2、Cl、Br、又は
Flであり: WはNH、NCH_3又はCHである)、及び次式:▲
数式、化学式、表等があります▼(式中、各Rは、それ
ぞれ、 CH_3、CH_2CH_3、CH_2CH_2CH_
3、CH_2CH_2CO_2H、CH_2CH_2P
O_3H_2、CH_2CO_2H、CH_2CH_2
SO_3H、CH_2CH_2OH、CH_2CH_2
NH_2、CH_2CH=CH_2、CHOHCH_2
、CH=CH_2CH_3又はSO_3 から選択される)から成る群から選択される式を有する
ポルフィリン; 酸素で酸化された場合に検出可能な応答を示す酸化還元
指示薬;並びに pH11〜14のアルカリ状態を維持するための緩衝液
を含む検定系。 - (2)ポルフィリンが ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項1記載のマンガン検定系。
- (3)ポルフィリンが ▲数式、化学式、表等があります▼ である請求項1記載のマンガン検定系。
- (4)界面活性剤をも含む請求項1記載のマンガン検定
系。 - (5)酸素が0.25〜1.25ミリモルの量で存在す
る請求項1記載のマンガン検定系。 - (6)5nM〜0.1mMのMn(III)ポルフィリン
錯体が指示薬の酸化を触媒する請求項1記載のマンガン
検定系。 - (7)試薬パッド中に存在する請求項1記載のポルフィ
リン、指示薬及び緩衝液を有するマンガン用試薬試験具
。 - (8)ポルフィリンが、ジアセチラジュウテロポルフィ
リンIXジメチルエステルである請求項1記載のマンガン
検定系。 - (9)ポルフィリンが、5、10、15、20−テトラ
キス(4−トリメチルアンモニノフェニル)−ポルフィ
リン−テトラ(トルエン−4−スルホネート)である請
求項1記載のマンガン検定系。 - (10)骨粗鬆症の測定方法であって、その方法が: 血液試料から血球を分離する工程; 血球を溶解し、それによって試験試料を得る工程: 試験試料を請求項1記載のマンガン検定系と合わせて試
験試料中のマンガンレベルを測定し、検出可能な応答を
読み取る工程 を含むことを特徴とする方法。
Priority Applications (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/468,665 US5106753A (en) | 1989-01-26 | 1990-01-23 | Method for determining manganese level in blood using a porphyrin composition |
CA002024207A CA2024207A1 (en) | 1990-01-23 | 1990-08-29 | Agent for determining manganese and method relating thereto |
AU62196/90A AU634283B2 (en) | 1990-01-23 | 1990-09-05 | Agent for determining manganese and method relating thereto |
EP90118444A EP0477402A1 (en) | 1990-01-23 | 1990-09-26 | Agent for determining manganese and method relating thereto |
JP2257580A JPH04145368A (ja) | 1990-01-23 | 1990-09-28 | マンガン測定用試薬及びそれを用いる骨粗鬆症の測定方法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/468,665 US5106753A (en) | 1989-01-26 | 1990-01-23 | Method for determining manganese level in blood using a porphyrin composition |
AU62196/90A AU634283B2 (en) | 1990-01-23 | 1990-09-05 | Agent for determining manganese and method relating thereto |
EP90118444A EP0477402A1 (en) | 1990-01-23 | 1990-09-26 | Agent for determining manganese and method relating thereto |
JP2257580A JPH04145368A (ja) | 1990-01-23 | 1990-09-28 | マンガン測定用試薬及びそれを用いる骨粗鬆症の測定方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04145368A true JPH04145368A (ja) | 1992-05-19 |
Family
ID=27423608
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2257580A Pending JPH04145368A (ja) | 1989-01-26 | 1990-09-28 | マンガン測定用試薬及びそれを用いる骨粗鬆症の測定方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5106753A (ja) |
EP (1) | EP0477402A1 (ja) |
JP (1) | JPH04145368A (ja) |
AU (1) | AU634283B2 (ja) |
CA (1) | CA2024207A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013217896A (ja) * | 2012-09-24 | 2013-10-24 | Metallogenics Co Ltd | リチウム試薬組成物、リチウム試薬キット、及びリチウムイオン測定方法。 |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5493017A (en) * | 1992-08-14 | 1996-02-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Ring-metalated porphyrins |
US5817830A (en) * | 1992-08-14 | 1998-10-06 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Pyrrolic compounds |
US5599924A (en) * | 1992-08-14 | 1997-02-04 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Electron-deficient porphyrins and processes and intermediates for preparing same |
US5371199B1 (en) * | 1992-08-14 | 1995-12-26 | Univ Pennsylvania | Substituted porphyrins porphyrin-containing polymers and synthetic methods therefor |
CN1036614C (zh) * | 1992-08-22 | 1997-12-03 | 湖南省卫生防疫站 | 水中锰的检验方法 |
CA2249778A1 (en) * | 1997-12-15 | 1999-06-15 | Bayer Corporation | Competitive apo-peroxidase assay |
-
1990
- 1990-01-23 US US07/468,665 patent/US5106753A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-08-29 CA CA002024207A patent/CA2024207A1/en not_active Abandoned
- 1990-09-05 AU AU62196/90A patent/AU634283B2/en not_active Expired - Fee Related
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JP2013217896A (ja) * | 2012-09-24 | 2013-10-24 | Metallogenics Co Ltd | リチウム試薬組成物、リチウム試薬キット、及びリチウムイオン測定方法。 |
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