JPH04117395A - ペプチドの溶解および反応媒質、これを使用するペプチドの合成方法 - Google Patents
ペプチドの溶解および反応媒質、これを使用するペプチドの合成方法Info
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/02—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution
- C07K1/023—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length in solution using racemisation inhibiting agents
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はペプチド合成に使用する溶解および反応媒質、
ならびに、この媒質中でのペプチド合成方法に関する。
ならびに、この媒質中でのペプチド合成方法に関する。
ペプチドの液相合成方法は多数あるが、次の点で共通し
ている。
ている。
ペプチド合成の終りに分離できる保護基で、アミノ酸の
側鎖の官能基を保護してもよく、 アミノ酸縮合の後に分離できる保護基で、アミノ酸の官
能性（Ｎα）アミノ基を保護し、 アミノ酸の保護されている官能性カルボン酸基を活性化
し、末端官能基のＣが保護され、官能性アミノ基が、遊
離している。ヘプチドまたはアミノ酸と縮合させ、 すべてのアミノ酸を縮合させた後に、保護基をすべて分
離してペプチドを得る縮合反応は、たとえばＭｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ合成によって不均一相またば均一液相におい
て縮合させることができる。
側鎖の官能基を保護してもよく、 アミノ酸縮合の後に分離できる保護基で、アミノ酸の官
能性（Ｎα）アミノ基を保護し、 アミノ酸の保護されている官能性カルボン酸基を活性化
し、末端官能基のＣが保護され、官能性アミノ基が、遊
離している。ヘプチドまたはアミノ酸と縮合させ、 すべてのアミノ酸を縮合させた後に、保護基をすべて分
離してペプチドを得る縮合反応は、たとえばＭｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ合成によって不均一相またば均一液相におい
て縮合させることができる。
一般に、ペプチド合成には、アミノ酸の末端官能性カル
ボン酸基のＣをエステルの形で保護することが必要であ
る。
ボン酸基のＣをエステルの形で保護することが必要であ
る。
ペプチドの均一相合成の場合は、下詑のエステルを選ぶ
ことができる。
ことができる。
メチル、ベンジルまたはｔ−ブチルのエステル；有機溶
媒に可溶なポリマーのエステル、たとえばＭ、Ｍｕｔｔ
ｅｒらのＪｕｌｉｕｓ Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎｏ
ｌｅｎ ｄｅｒ Ｃｈｅｍｉｅ １９７５．ｐｐ
、９０１〜９１５に記載のポリエーテルのエステル；お
よび本出願人のフランス特許出願８９ ０６７００に特
許請求したＧＰＣエステルはさらに良好である。
媒に可溶なポリマーのエステル、たとえばＭ、Ｍｕｔｔ
ｅｒらのＪｕｌｉｕｓ Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎｏ
ｌｅｎ ｄｅｒ Ｃｈｅｍｉｅ １９７５．ｐｐ
、９０１〜９１５に記載のポリエーテルのエステル；お
よび本出願人のフランス特許出願８９ ０６７００に特
許請求したＧＰＣエステルはさらに良好である。
ペプチドの不均一相合成の場合は、有機溶剤に不溶なポ
リマーのエステルが特に好ましい。たとえば次のポリマ
ーを挙げることができる。
リマーのエステルが特に好ましい。たとえば次のポリマ
ーを挙げることができる。
Ｒ，Ｂ、 Ｍｅｒｒ ｉｆ ｉｅ ｌｄノＪ、 Ａ、
Ｃ，Ｓ、 ｐ、 ２１４９．２１５４ （１９６３）に
よって導入されたスチレンジビニルベンゼンコポリマー
；Ｅ、Ａｔｈｅｒｔｏｎ、Ｒ，Ｃ，５ｈｅｐｐａｒｄの
Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ、９７．ｐ６５８４．６５８５ （１９
７５）のポリジメチルアクリルアミド−ｃｏ−Ｂ。
Ｃ，Ｓ、 ｐ、 ２１４９．２１５４ （１９６３）に
よって導入されたスチレンジビニルベンゼンコポリマー
；Ｅ、Ａｔｈｅｒｔｏｎ、Ｒ，Ｃ，５ｈｅｐｐａｒｄの
Ｊ、Ａ、Ｃ，Ｓ、９７．ｐ６５８４．６５８５ （１９
７５）のポリジメチルアクリルアミド−ｃｏ−Ｂ。
Ｃ−β−Ａｌａ −Ｎ’ −アクロイリルーへキサメチ
レンジアミン；Ｔｒｅｇｅａｒらの米国特許３ ７００
６０９およびＣｈｅｍ、Ａｂｓ ｔ、７１ｐ５０８２
４１ （１９６９）；およびセルロース。
レンジアミン；Ｔｒｅｇｅａｒらの米国特許３ ７００
６０９およびＣｈｅｍ、Ａｂｓ ｔ、７１ｐ５０８２
４１ （１９６９）；およびセルロース。
ペプチドの不均一相合成は、撹拌機つき反応器、反応カ
ラム、または他の技術たとえば膜の使用によって実施す
ることができる・最終生成物の収率および純度は、各工
程の収率に依存する。これは、一方において損失の相果
的坩加、他方において副生物から所望の生成物を分離す
る問題にもとづく。この問題はアミノ酸の員数が増加す
ると、合成過程において大きな問題となる。
ラム、または他の技術たとえば膜の使用によって実施す
ることができる・最終生成物の収率および純度は、各工
程の収率に依存する。これは、一方において損失の相果
的坩加、他方において副生物から所望の生成物を分離す
る問題にもとづく。この問題はアミノ酸の員数が増加す
ると、合成過程において大きな問題となる。
その他、均一液相媒質において縮合を行う特殊な場合に
、これらすべての方法は、同一の欠点を伴なう：中間的
に保護されたアミノ酸またはペプチドの溶解度は小さい
ので、体積的生産性が低い。
、これらすべての方法は、同一の欠点を伴なう：中間的
に保護されたアミノ酸またはペプチドの溶解度は小さい
ので、体積的生産性が低い。
この欠点は次の多くの著者によって指摘されている、Ｍ
、Ｎａｒ ｉ ｔａ、Ｋ。
、Ｎａｒ ｉ ｔａ、Ｋ。
Ｉｓｈｉｋａｗａ、Ｊ、Ｙ、ＣｈｅｎおよびＹ、Ｋｉｍ
、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｏｓ、２４５８０ （１９８４）、Ｅ、Ｇｒｏｓｓお
よびＪ、Ｍｅｉｅｎｈｏ−ｆｅｒ、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ：ＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１゜４
５、 （１９７９）。
、Ｉｎｔ、Ｊ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｏｓ、２４５８０ （１９８４）、Ｅ、Ｇｒｏｓｓお
よびＪ、Ｍｅｉｅｎｈｏ−ｆｅｒ、Ｔｈｅ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ：ＡｎａｌｙｓｉｓＳｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１゜４
５、 （１９７９）。
Ｍ、ＭｕｔｔｅｒおよびＥ、Ｂａｙｅｒ、Ｔｈｅ Ｐ
ｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ、Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｒｎｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、２，２８８ （１９８０）。
ｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ、Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｒｎｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ、２，２８８ （１９８０）。
ＦｕｈｒｈｏｐおよびＰｅｎｚｃｉｎ、Ｏｒｇａｎｉｃ
５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。
５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。
Ｖｅｒｌａｇ Ｃｈｅｍｉｅ、４．１．２．Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ、２１９ （１９８４ａ）体積単位についての
生産性は、水不溶性溶剤たとえばクロロホルムまたは酢
酸エチルを使用するときに、特に低い。たとえばＮ−（
２−ニトロ−フェニルスルフェニル）−αベンジル−フ
ェニルアラニル−Ｎωニトロ−Ｌ−アルギニンの４−二
トロベンジルエステルは、クロロホルムを溶剤として１
１につき０．０１６モルを合成する：Ｅ、Ｗｕ”ｎ５ｃ
ｈ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ Ｏｒｇａｎｉｓｃ
ｈｅｍ Ｃｈｅｍｉｅ、ＸＶ−２，５ｙｎｔｈｅｓｅ
ｖｏｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｎ、Ｇｅｏｒｇ Ｃｈ
ｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ、１０８ （１９７４）また
ベンジルオキシカルボニル−し−プロピル−Ｌ−チロシ
ンのメチルエステルは、酢酸エチルを溶剤として１１に
つき０．０５０モルを合成する：Ｍ、Ｂ。
ｉｄｅｓ、２１９ （１９８４ａ）体積単位についての
生産性は、水不溶性溶剤たとえばクロロホルムまたは酢
酸エチルを使用するときに、特に低い。たとえばＮ−（
２−ニトロ−フェニルスルフェニル）−αベンジル−フ
ェニルアラニル−Ｎωニトロ−Ｌ−アルギニンの４−二
トロベンジルエステルは、クロロホルムを溶剤として１
１につき０．０１６モルを合成する：Ｅ、Ｗｕ”ｎ５ｃ
ｈ、Ｍｅｔｈｏｄｅｎ ｄｅｒ Ｏｒｇａｎｉｓｃ
ｈｅｍ Ｃｈｅｍｉｅ、ＸＶ−２，５ｙｎｔｈｅｓｅ
ｖｏｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｎ、Ｇｅｏｒｇ Ｃｈ
ｉｅｍｅ Ｖｅｒｌａｇ、１０８ （１９７４）また
ベンジルオキシカルボニル−し−プロピル−Ｌ−チロシ
ンのメチルエステルは、酢酸エチルを溶剤として１１に
つき０．０５０モルを合成する：Ｍ、Ｂ。
ｃｌａｎｓｋｙ、Ａ、Ｂｏｄａｎｓｋｙ、Ｔｈｅ Ｐ
ｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、１４
０ （１９８４）。
ｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎ
ｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、１４
０ （１９８４）。
水溶性溶剤は特に不便であって、はとんど利益がない。
実際、高濃度の媒質中でペプチド合成を行うときには、
水洗によって直接精製することができないが、精製は導
入された過剰の反応剤および副反応生成物を除去するた
めに必要である。
水洗によって直接精製することができないが、精製は導
入された過剰の反応剤および副反応生成物を除去するた
めに必要である。
そのため、水溶性溶剤を通常蒸留し、次に水不溶性溶剤
で置換えて洗浄する。
で置換えて洗浄する。
これは精製工程において大量の溶剤を必要とするので、
かきの問題と同じことになる。しかも反応物質の処理は
、蒸留および再溶解という操作が加わるのでさらに複雑
となる。
かきの問題と同じことになる。しかも反応物質の処理は
、蒸留および再溶解という操作が加わるのでさらに複雑
となる。
それ故テトラヒドロフラン中、２モル／ｌで調製したジ
ペプチドＺ−Ｃｙｓ（Ｓ−ＢＺ ｂ） −Ｔｙ ｒ
ＯＥ ｔは、水洗前に０．１モル／１として酢酸エチル
中に移す：Ｍ、Ｂｏｄａｎｓｋｙ、Ｔｈｅ Ｐｒａｃ
ｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、１２９ （
１９８４）。
ペプチドＺ−Ｃｙｓ（Ｓ−ＢＺ ｂ） −Ｔｙ ｒ
ＯＥ ｔは、水洗前に０．１モル／１として酢酸エチル
中に移す：Ｍ、Ｂｏｄａｎｓｋｙ、Ｔｈｅ Ｐｒａｃ
ｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ ５ｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、１２９ （
１９８４）。
保護されたジペプチドＺ−Ｌｙｓ （Ｚ）−ＧＩＶ−
○Ｅｔは、アセトニトリル中、０．１３／ｌで合成し、
最初の溶剤を酢酸エチル中、０．０５モル／１に置換え
た後精製した（同上文献１５０．１９８４）。同様にＺ
−Ａ ｌ ａ−Ｔｙ ｒ −０ＣＨ３は、ジメチルホル
ムアミド中、０．３モル／１で合成し、水洗精製の前に
酢酸エチル中に０．１モル／ｌとして移した（同上文献
１４８．１９８４）。
○Ｅｔは、アセトニトリル中、０．１３／ｌで合成し、
最初の溶剤を酢酸エチル中、０．０５モル／１に置換え
た後精製した（同上文献１５０．１９８４）。同様にＺ
−Ａ ｌ ａ−Ｔｙ ｒ −０ＣＨ３は、ジメチルホル
ムアミド中、０．３モル／１で合成し、水洗精製の前に
酢酸エチル中に０．１モル／ｌとして移した（同上文献
１４８．１９８４）。
一般に極性を有する水溶性溶剤の使用は、産業衛生上の
問題（ＤＭＳ○、ＨＭＰＴ）および化学的選択計面の問
題で、さらに不利を伴なう。一般に、極性溶剤は、活性
Ｎを保護されているアミノ酸のラセミ化に実際に好都合
である：Ｄ、ＳＫｅｍｐ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉｏｌｏｇｙ；１，
３５４−３５５．１９７９゜それ故、水不溶性の有機溶
剤中でペプチド中間体の濃度が高く、かつ工業的生産の
要求を満たす溶液を得ることは、いまだ解決されていな
い。
問題（ＤＭＳ○、ＨＭＰＴ）および化学的選択計面の問
題で、さらに不利を伴なう。一般に、極性溶剤は、活性
Ｎを保護されているアミノ酸のラセミ化に実際に好都合
である：Ｄ、ＳＫｅｍｐ、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、Ａｎａｌ
ｙｓｉｓ、５ｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｂｉｏｌｏｇｙ；１，
３５４−３５５．１９７９゜それ故、水不溶性の有機溶
剤中でペプチド中間体の濃度が高く、かつ工業的生産の
要求を満たす溶液を得ることは、いまだ解決されていな
い。
本発明の目的は、ペプチド縮合収率を向上させる反応媒
質を提供することである。また本発明の他の目的は、ペ
プチド、一般に２〜５０個のアミノ酸、特に３〜２０個
のアミノ酸からなるペプチドの合成および精製全容易に
行う反応媒質を見出すことである。
質を提供することである。また本発明の他の目的は、ペ
プチド、一般に２〜５０個のアミノ酸、特に３〜２０個
のアミノ酸からなるペプチドの合成および精製全容易に
行う反応媒質を見出すことである。
さらに他の目的は、高い濃度、たとえば少なくとも０．
１Ｍ、一般に０．２Ｍで均一媒質中でペプチドを合成で
きる反応媒質を提供することである。
１Ｍ、一般に０．２Ｍで均一媒質中でペプチドを合成で
きる反応媒質を提供することである。
これらの目的、および後に明かになる目的は水不溶性溶
剤の群から選ぶ希釈剤ＡとフェノールＢを含む、ペプチ
ドの合成および精製に使用する溶解および反応媒質によ
って達成することができる。
剤の群から選ぶ希釈剤ＡとフェノールＢを含む、ペプチ
ドの合成および精製に使用する溶解および反応媒質によ
って達成することができる。
フェノールＢの量は希釈剤Ａの少なくとも１／２００で
あることが好ましい。
あることが好ましい。
この上限は厳密なものではないので、希釈剤Ａなしに、
純粋または混合物のフェノールＢを使用することも、次
の条件において、本発明の範囲に含まれる：フェノール
Ｂは、融点が高くとも５０℃（本明細書において、特記
しない限りは数字のゼロは重要な意味を有しない）；フ
ェノールＢは、減圧することもできる蒸留によって反応
生成物から分離することができる； フェノールＢは、いかなる割合でも水と混合しない。
純粋または混合物のフェノールＢを使用することも、次
の条件において、本発明の範囲に含まれる：フェノール
Ｂは、融点が高くとも５０℃（本明細書において、特記
しない限りは数字のゼロは重要な意味を有しない）；フ
ェノールＢは、減圧することもできる蒸留によって反応
生成物から分離することができる； フェノールＢは、いかなる割合でも水と混合しない。
フェノールＢは、水洗によって副生物の除去全妨げる安
定な乳濁液全形成しない ハロゲン化フェノール、特にジクロロフェノールが有利
であり、モノクロロフェノールが好ましく、なおたとえ
ば低分子量のアルコールフェノールも上記条件に適合す
る。
定な乳濁液全形成しない ハロゲン化フェノール、特にジクロロフェノールが有利
であり、モノクロロフェノールが好ましく、なおたとえ
ば低分子量のアルコールフェノールも上記条件に適合す
る。
単独で使用することもできるが、上記条件を満足するフ
ェノールは、希釈剤Ａと混合して使用できる有用なフェ
ノール類を含むことができる。
ェノールは、希釈剤Ａと混合して使用できる有用なフェ
ノール類を含むことができる。
しかし、１つの希釈剤Ａと１つのフェノールＢを使用す
ることが好ましい。
ることが好ましい。
フェノールＢ対希釈剤Ａの重量比は、１／Ｚ００〜１．
１／２０〜１／２が好ましい。この重量比は、狭義のフ
ェノール（Ｃ６Ｈ５０Ｈ） または分子量がこれと著し
く相違しないフェノール類にも適用される。
１／２０〜１／２が好ましい。この重量比は、狭義のフ
ェノール（Ｃ６Ｈ５０Ｈ） または分子量がこれと著し
く相違しないフェノール類にも適用される。
高分子量のフェノール類には、モル／ｌの濃度を少なく
とも５１０ Ｍとし、領 １〜２Ｍが有利であり、０
．５〜１．５Ｍが好ましい。
とも５１０ Ｍとし、領 １〜２Ｍが有利であり、０
．５〜１．５Ｍが好ましい。
希釈剤ＡおよびフェノールＢは、すべての割合で混合し
ないときは、フェノール類含量の上限は、２つの限度、
すなわち上記限度および溶解度の限度より低いここで、
フェノールＢは、フェノール類およびその混合物を含む
ものとする。
ないときは、フェノール類含量の上限は、２つの限度、
すなわち上記限度および溶解度の限度より低いここで、
フェノールＢは、フェノール類およびその混合物を含む
ものとする。
希釈剤Ａは、フェノール（Ｃ６Ｈ５０Ｈ）の重量の少な
くとも１％、好ましくは少なくとも２％を溶解するのに
十分な極性を有し、かつ水と、すべての割合では混合し
ない十分な疎水性を有する有機溶剤である。
くとも１％、好ましくは少なくとも２％を溶解するのに
十分な極性を有し、かつ水と、すべての割合では混合し
ない十分な疎水性を有する有機溶剤である。
水は希釈剤Ａを多くとも１０重量％、さらに多くとも１
重量％を溶解しないことが好ましい。これは第３の溶剤
としてフェノールＢが存在するときも同様である。
重量％を溶解しないことが好ましい。これは第３の溶剤
としてフェノールＢが存在するときも同様である。
希釈剤Ａは石油留分を含む混合物でもよい。勿論、操作
条件において、希釈剤Ａばフェノール類およびペプチド
合成に使用する反応剤に対して不活性であることが必要
である。
条件において、希釈剤Ａばフェノール類およびペプチド
合成に使用する反応剤に対して不活性であることが必要
である。
好ましい希釈剤は、芳香族誘導体、エーテル、エステル
およびハロゲン化溶剤からなる群から選ぶ。
およびハロゲン化溶剤からなる群から選ぶ。
これらの希釈剤としては、ハロゲン化脂肪族誘導体とし
てジクロロメタン、１２−ジクロロエタン、１，１．１
−トリクロロエタン；芳香族誘導体としてトルエン；ハ
ロゲン化芳香族誘導体としてクロロベンゼン；エステル
として酢酸エチル、酢酸イソプロピル；エーテルとして
ｔ−ブチル−メチルエーテルおよびアニソールを挙げる
ことができる。
てジクロロメタン、１２−ジクロロエタン、１，１．１
−トリクロロエタン；芳香族誘導体としてトルエン；ハ
ロゲン化芳香族誘導体としてクロロベンゼン；エステル
として酢酸エチル、酢酸イソプロピル；エーテルとして
ｔ−ブチル−メチルエーテルおよびアニソールを挙げる
ことができる。
工業的経済の理由から、希釈剤Ａは大気圧で蒸留可能か
、または−次または二次の真空で蒸留できることが好ま
しい。
、または−次または二次の真空で蒸留できることが好ま
しい。
一般にフェノールＢは次の一般式（Ｉ）で示される化合
物およびそれらの混合物の群から選ぶ。
物およびそれらの混合物の群から選ぶ。
（Ｒ１） ｎＡｒ ＯＨ（■）
式中、Ａｒは単環もしくは多環の複素環または非複素環
の芳香族基を表し、置換基Ｒ１は、同一または相違して
いてもよく、次の原子または基を表す：ハロゲン、好ま
しくはふっ素、塩素、臭素；基−Ｚ−Ｒ２（Ｚは一重結
合または酸素を表し、Ｒ２は水素、ヒドロキシ化または
モノもしくはポリハロゲン化されていてもよい多くとも
８個の炭素原子を含むアリール基またはアルコール基を
表す）ｎは、ゼロまたは多くとも芳香族核の置換可能な
位置の数に等しい整数であるアルコール基は、ｌｅ
Ｄｉｃｔｉｏｎａｉｒｅ ｄｅ ｌａ Ｃｈｉｍ
ｉｅＤｕｖａｌ Ｐｒｅｓｓｅｓ ５ｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｑｕｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ Ｐ
ａｒ ｉｓ Ｖｉｅ、（１９５９）で定義されており
、多くとも６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖
の脂肪族残基またはアリール脂肪族残基であることがで
きる。
の芳香族基を表し、置換基Ｒ１は、同一または相違して
いてもよく、次の原子または基を表す：ハロゲン、好ま
しくはふっ素、塩素、臭素；基−Ｚ−Ｒ２（Ｚは一重結
合または酸素を表し、Ｒ２は水素、ヒドロキシ化または
モノもしくはポリハロゲン化されていてもよい多くとも
８個の炭素原子を含むアリール基またはアルコール基を
表す）ｎは、ゼロまたは多くとも芳香族核の置換可能な
位置の数に等しい整数であるアルコール基は、ｌｅ
Ｄｉｃｔｉｏｎａｉｒｅ ｄｅ ｌａ Ｃｈｉｍ
ｉｅＤｕｖａｌ Ｐｒｅｓｓｅｓ ５ｃｉｅｎｔｉ
ｆｉｑｕｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｅ Ｐ
ａｒ ｉｓ Ｖｉｅ、（１９５９）で定義されており
、多くとも６個の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖
の脂肪族残基またはアリール脂肪族残基であることがで
きる。
置換可能な位置の数は、当業者によって周知の単純な方
法によって容易に知ることができる。
法によって容易に知ることができる。
たとえば、Ａｒ＝フェニル〈５、
Ａｒ＝ピリジルく４、
Ａｒ＝ナフチルく７、
Ａｒ＝キノイルく６゜
フェノールＢの炭素原子は、多くとも３０個が有利であ
り、多くとも２０個が好ましい。
り、多くとも２０個が好ましい。
官能性フェノールの隣接位置が置換されていないか、ま
たは障害を与えない基で置換されていることが望ましい
。
たは障害を与えない基で置換されていることが望ましい
。
障害を与えない基としては、三次または二次の炭素によ
って、隣接位置の基に結合されている基と考えることが
できる。
って、隣接位置の基に結合されている基と考えることが
できる。
単環式化合物は、効果および価格の点でもっとも好まし
い化合物であり、六員環（ピリミジルまたはフェニル環
）を有するものが好ましい。
い化合物であり、六員環（ピリミジルまたはフェニル環
）を有するものが好ましい。
またＺ−Ｒ２ば、水酸基を３回、好ましくは２回より多
く表すことができない式（Ｉ）において基Ｒは、次の基
または原子から選ぶことが有利である。
く表すことができない式（Ｉ）において基Ｒは、次の基
または原子から選ぶことが有利である。
メチル、エチル、プロピル、ブチル、
トリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、メトキシ
、エトキシ、プロピロキシ、ブチロキシ、フェニル、ヒ
ドロキシフェニルおよびＡｒＯＨ。
、エトキシ、プロピロキシ、ブチロキシ、フェニル、ヒ
ドロキシフェニルおよびＡｒＯＨ。
フェノキシ、ヒドロキシフェノキシ、
ふっ素、塩素、臭素。
フェノールの分子量を高めないために、式（Ｉ）のｎは
、多くとも５とし、多くとも３とすることが好ましい。
、多くとも５とし、多くとも３とすることが好ましい。
良好な結果を与えるフェノールとして、次のフェノール
類を挙げることができる。
類を挙げることができる。
一置換されていてもよいヒドロキシピリジン、一置換さ
れていてもよいヒドロキシキノリン、モノハロゲノフェ
ノール、好ましくはモノロロフェノール、ポリハロゲノ
フェノール、好ましくはポリフルオロフェノール、炭素
原子１〜４個のアルキル基、炭素原子１〜４個のアルコ
キシ基、炭素原子１〜２のペルフルオロアルキル基、２
２．２−トリフルオロエチル基で一置換または二置換さ
れたフェノール、ジフェノール、 狭義のフェノール、 一置換または二置換されていてもよいナフトール。
れていてもよいヒドロキシキノリン、モノハロゲノフェ
ノール、好ましくはモノロロフェノール、ポリハロゲノ
フェノール、好ましくはポリフルオロフェノール、炭素
原子１〜４個のアルキル基、炭素原子１〜４個のアルコ
キシ基、炭素原子１〜２のペルフルオロアルキル基、２
２．２−トリフルオロエチル基で一置換または二置換さ
れたフェノール、ジフェノール、 狭義のフェノール、 一置換または二置換されていてもよいナフトール。
本発明の媒質は、保護されていてもよいアミノ酸を少な
くとも０．０５Ｍ濃度で溶解することができる。
くとも０．０５Ｍ濃度で溶解することができる。
アミノ酸はＣまたはＮを保護することができる。後者の
場合、たとえばアスパラギン酸の場合には、側鎖の官能
性酸基上で活性化することもできる。アミノ酸は天然ま
たは合成であることができる。本発明の媒質は、保護さ
れているペプチドと同様に、保護されていなイヘプチド
（ＨＣＩ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２：ＨＣＩ、Ｈｉ ５
−Ｔｒｐ ： ２ＨＣＩ、Ａｒ ｇ−Ｐｒ ｏ）も溶解
して、合成を行うことができる。
場合、たとえばアスパラギン酸の場合には、側鎖の官能
性酸基上で活性化することもできる。アミノ酸は天然ま
たは合成であることができる。本発明の媒質は、保護さ
れているペプチドと同様に、保護されていなイヘプチド
（ＨＣＩ、Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２：ＨＣＩ、Ｈｉ ５
−Ｔｒｐ ： ２ＨＣＩ、Ａｒ ｇ−Ｐｒ ｏ）も溶解
して、合成を行うことができる。
本発明の媒質は、アミノ酸、ペプチド、および保護化ま
たは活性化されている反応剤を同時に溶解できることに
よって、その場でアミノ酸を保護化または活性化するこ
とができる。そのように、本発明の媒質は、フェノール
Ｂおよび希釈剤Ａの他に、縮合していないアミノ酸も含
むペプチド、および／または保護化および／もしくは活
性化する反応剤も、同時にまたは順次導入して含むとき
に、反応剤の作用をすることができる。
たは活性化されている反応剤を同時に溶解できることに
よって、その場でアミノ酸を保護化または活性化するこ
とができる。そのように、本発明の媒質は、フェノール
Ｂおよび希釈剤Ａの他に、縮合していないアミノ酸も含
むペプチド、および／または保護化および／もしくは活
性化する反応剤も、同時にまたは順次導入して含むとき
に、反応剤の作用をすることができる。
ペプチドは、単位のアミノ酸を含めて、ＣまたはＮを保
護されていてもよい。
護されていてもよい。
後者の場合は酸は官能性酸基上で活性化されていること
ができる。
ができる。
勿論、アミノ酸の官能基は、合成において目的とする官
能性の酸基またはアミン基の他でも、もし必要であれば
当業者に慣用の技術によって同様に保護することができ
る。
能性の酸基またはアミン基の他でも、もし必要であれば
当業者に慣用の技術によって同様に保護することができ
る。
本発明の媒質は、有機相におけるペプチドの溶解度を特
に増加させることができる。
に増加させることができる。
一般に、フェノール性添加剤の存在なしに有機希釈剤Ａ
中のペプチドの溶解度をベースとして、溶解度を良好に
変えることができる。
中のペプチドの溶解度をベースとして、溶解度を良好に
変えることができる。
またこの媒質は、ペプチド合成の多様な工程にお′Ｖ）
で、良好な体積的収率を達成することができる。特に縮
合工程における生産性を向上させる。
で、良好な体積的収率を達成することができる。特に縮
合工程における生産性を向上させる。
本発明の媒質の多くの利点のうち、特にＮが保護され、
Ｃが活性化されているアミノ酸またはペプチドと、Ｃが
保護されていないアミノ酸またはペプチドとの縮合がこ
の媒質中で反応させるとき、極めて容易であることに注
意したい。これは、約２０員さらに５０員までのオリゴ
ペプチドの合成に極めて有用である。これは本発明の媒
質が同時または順次に導入する成分として次のものを含
み、反応剤の作用をするときに著しい。
Ｃが活性化されているアミノ酸またはペプチドと、Ｃが
保護されていないアミノ酸またはペプチドとの縮合がこ
の媒質中で反応させるとき、極めて容易であることに注
意したい。これは、約２０員さらに５０員までのオリゴ
ペプチドの合成に極めて有用である。これは本発明の媒
質が同時または順次に導入する成分として次のものを含
み、反応剤の作用をするときに著しい。
ａ）水に混合しない溶剤の群から選ぶ希釈剤Ａ；ｂ）フ
ェノールＢ； Ｃ）末端のＮもＣも保護されていないアミノ酸を１〜５
０個、好ましくは１〜２０個含むオリゴペプチド。
ェノールＢ； Ｃ）末端のＮもＣも保護されていないアミノ酸を１〜５
０個、好ましくは１〜２０個含むオリゴペプチド。
フェノールＢの量は、希釈剤Ａの少なくとも１／２００
とすることが好ましいこの上限は厳密なものではない。
とすることが好ましいこの上限は厳密なものではない。
フェノールＢ対希釈剤Ａの重量比は、１／２００〜１が
有利であり、１／２０〜１／２が好ましい。
有利であり、１／２０〜１／２が好ましい。
上記重量比は狭義のフェノール自身にも、また分子量が
Ｃ６Ｈ５０Ｈと比べて大きくは違わないフェノール類に
ついても適用される。
Ｃ６Ｈ５０Ｈと比べて大きくは違わないフェノール類に
ついても適用される。
分子量の大きいフェノールについて、モル／１で表す濃
度は、少なくとも５〜１０ Ｍとし、０．１〜２Ｍ
が有利であり、０．５〜１．５Ｍが好ましい。
度は、少なくとも５〜１０ Ｍとし、０．１〜２Ｍ
が有利であり、０．５〜１．５Ｍが好ましい。
希釈剤ＡとフェノールＢとがすべての割合では混合しな
いときフェノールの含量の上限は、上記の限度および溶
解限度より低い。
いときフェノールの含量の上限は、上記の限度および溶
解限度より低い。
オリゴペプチドの含量は、ここでは縮合していないアミ
ノ酸の場合を含み、その含量は少なくとも１０−２Ｍ、
好ましくは０．１Ｍとする。より高い濃度は溶解限度に
対応する。当業者が媒質中の溶解度を不十分と判断する
ならば、オリゴペプチドの懸濁液を使用できることを理
解されるであろう。
ノ酸の場合を含み、その含量は少なくとも１０−２Ｍ、
好ましくは０．１Ｍとする。より高い濃度は溶解限度に
対応する。当業者が媒質中の溶解度を不十分と判断する
ならば、オリゴペプチドの懸濁液を使用できることを理
解されるであろう。
また本発明は、保護されていてもよいペプチドを液体媒
質中で合成する方法に関し、官能性酸基が保護されてい
てもよい最初のアミノ酸またはペプチドを原料とし、こ
れに官能性酸基が活性化され、官能性アミン基が保護さ
れているアミノ酸を加え、これらの反応剤を本発明の媒
質に溶解する。
質中で合成する方法に関し、官能性酸基が保護されてい
てもよい最初のアミノ酸またはペプチドを原料とし、こ
れに官能性酸基が活性化され、官能性アミン基が保護さ
れているアミノ酸を加え、これらの反応剤を本発明の媒
質に溶解する。
同様に、本発明は保護されていてもよいペプチドを液体
媒質中で合成する方法を目的とし、最初のアミノ酸また
はペプチドを原料として、本発明によって溶解し、末端
官能性酸基のＣが活性化され、末端官能性アミン基のＮ
が保護されている他のペプチドを、本発明の媒質中に溶
解して縮合させる。
媒質中で合成する方法を目的とし、最初のアミノ酸また
はペプチドを原料として、本発明によって溶解し、末端
官能性酸基のＣが活性化され、末端官能性アミン基のＮ
が保護されている他のペプチドを、本発明の媒質中に溶
解して縮合させる。
たとえば官能性アミン基は、カルバメート基によって、
またはβジカルボニル化された化合物との反応によって
、保護される。
またはβジカルボニル化された化合物との反応によって
、保護される。
Ｎが保護された反応剤よの官能性酸基は有機酸または無
機酸の塩化物、クロロぎ酸アルキル、カルボジイミド、
またはこれらのカポニルジイミダゾールによって活性化
されたエステルまたはアシルイミダゾールによって活性
化される。
機酸の塩化物、クロロぎ酸アルキル、カルボジイミド、
またはこれらのカポニルジイミダゾールによって活性化
されたエステルまたはアシルイミダゾールによって活性
化される。
Ｎが保護されたアミノ酸またはペプチドを、最初のアミ
ノ酸またはペプチドと縮合させた後に、末端官能性アミ
ノ基のＮは、どの方法でも遊離させることができる力板
加水分解、または酸もしくは塩基による分解、または光
分解によって行うことが有利である。
ノ酸またはペプチドと縮合させた後に、末端官能性アミ
ノ基のＮは、どの方法でも遊離させることができる力板
加水分解、または酸もしくは塩基による分解、または光
分解によって行うことが有利である。
末端Ｃが保護された最初のアミノ酸またはペプチドは、
エステル化またはアミド化によって保護することが好ま
しい。一般にこれを反応媒質中に導入し、次に官能性酸
基または官能性ア、ミノ基が保護されたアミノ酸または
ペプチドを加える。反応剤の添加順序は限定しない。反
応が終ると、酸性、塩基性または中性溶液で水洗して副
生物および過剰の反応剤を有機相から除去する。次に官
能性アミノ基を遊離する。最後に官能性酸基が活性化さ
れ、官能性アミノ基が保護された新しいアミノ酸または
新しいペプチドを導入する。
エステル化またはアミド化によって保護することが好ま
しい。一般にこれを反応媒質中に導入し、次に官能性酸
基または官能性ア、ミノ基が保護されたアミノ酸または
ペプチドを加える。反応剤の添加順序は限定しない。反
応が終ると、酸性、塩基性または中性溶液で水洗して副
生物および過剰の反応剤を有機相から除去する。次に官
能性アミノ基を遊離する。最後に官能性酸基が活性化さ
れ、官能性アミノ基が保護された新しいアミノ酸または
新しいペプチドを導入する。
驚くべきことに、この媒質は、アミノ酸とペプチドの反
応性を向上させ、縮合反応速度を著しく改良する。
応性を向上させ、縮合反応速度を著しく改良する。
この方法の重要な利点は、濃厚な有機相から、過剰の反
応剤および縮合副生物を単なる水洗によって除去できる
ことであり、これはフェノールの乳濁化防止によって容
易に行うことができ、これらは本発明の研究中に達成す
ることができた。過剰の反応剤は、たとえばＣが活性化
されＮが保護されたアミノ酸またはペプチド、あるいは
Ｃが保護され、Ｎが活性化されたアミノ酸またはペプチ
ド、さらに縮合促進触媒たとえばヒドロキシベンゾトリ
アゾール、イミダゾール、Ｎ−ヒドロキシこはく酸アミ
ドなとである。
応剤および縮合副生物を単なる水洗によって除去できる
ことであり、これはフェノールの乳濁化防止によって容
易に行うことができ、これらは本発明の研究中に達成す
ることができた。過剰の反応剤は、たとえばＣが活性化
されＮが保護されたアミノ酸またはペプチド、あるいは
Ｃが保護され、Ｎが活性化されたアミノ酸またはペプチ
ド、さらに縮合促進触媒たとえばヒドロキシベンゾトリ
アゾール、イミダゾール、Ｎ−ヒドロキシこはく酸アミ
ドなとである。
本発明の媒質は、保護基を分離する工程で生産性を向上
することができる。なおたとえばｔ−ブチルオキシカル
ボニルのように酸に感応性を有する基を、通常の反応剤
、たとえばトリフルオロ酢酸または塩酸によって分離す
ることができ、また加水分解ができる基、たとえばベン
ジルオキシカルボニル、ベンジルのエーテルもしくはエ
ステル、またはアルギニンの側鎖のグアニジソ官能基を
保護するニトロ基を分離することができる。
することができる。なおたとえばｔ−ブチルオキシカル
ボニルのように酸に感応性を有する基を、通常の反応剤
、たとえばトリフルオロ酢酸または塩酸によって分離す
ることができ、また加水分解ができる基、たとえばベン
ジルオキシカルボニル、ベンジルのエーテルもしくはエ
ステル、またはアルギニンの側鎖のグアニジソ官能基を
保護するニトロ基を分離することができる。
この媒質は塩基遊離基、たとえばスルホフルオレニル−
メチル−オキシカルボニルを、通常使用される反応剤た
とえばジエチルアミンまたはピペリジンによって分離す
ることができる。また光分解可能な保護基の分離もでき
る。さらに電気化学的還元によって保護基を分離するこ
ともできる。
メチル−オキシカルボニルを、通常使用される反応剤た
とえばジエチルアミンまたはピペリジンによって分離す
ることができる。また光分解可能な保護基の分離もでき
る。さらに電気化学的還元によって保護基を分離するこ
ともできる。
この方法の重要な利点は、均一相において、単純な操作
で分離工程から触媒を除去できることである。カーボン
に吸着されたパラジウムのような加水分解触媒は濾過に
よって除去されるが、酸性または塩基性の触媒は水洗に
よって除去できる。ペプチドまたはペプチド中間体は濃
厚な有機溶液として残る。
で分離工程から触媒を除去できることである。カーボン
に吸着されたパラジウムのような加水分解触媒は濾過に
よって除去されるが、酸性または塩基性の触媒は水洗に
よって除去できる。ペプチドまたはペプチド中間体は濃
厚な有機溶液として残る。
この溶解方法の他の利点としては、ペプチド合成に必要
なすべての操作に適合しており、縮合の多様な工程を直
結連結することができ、またペプチドを分離しないでも
溶剤を変えずに水洗によって保護基の分離および精製を
行うことができる。
なすべての操作に適合しており、縮合の多様な工程を直
結連結することができ、またペプチドを分離しないでも
溶剤を変えずに水洗によって保護基の分離および精製を
行うことができる。
本発明の方法は、合成を反復して行うことができるので
、自動化した形態で有利に実施することができる。
、自動化した形態で有利に実施することができる。
この方法は有機溶剤に余り溶解しないペプチド、たとえ
ばグリシル、アルギニル、グルタミニル、アスパラギニ
ル、セリニル、トレオニルおよびプロリニルの基を含む
ペプチドの合成に特に有利である。
ばグリシル、アルギニル、グルタミニル、アスパラギニ
ル、セリニル、トレオニルおよびプロリニルの基を含む
ペプチドの合成に特に有利である。
この明細書で目的としないパラメータについても、本発
明の方法は、通常の条件で達成することができる。
明の方法は、通常の条件で達成することができる。
この合成によって生成したペプチドは医薬、ワクチン、
農業用成長剤または植物防疫剤の合成に使用することが
できる。
農業用成長剤または植物防疫剤の合成に使用することが
できる。
次に実施例によって本発明を説明する力板これは本発明
を限定するものではない。
を限定するものではない。
溶解試験の原型
ペプチド中間体の２５℃の溶解度を次のように測定した
。
。
精確に計量したペプチド中間体をパイレックス管内に入
れた。試験すべき溶剤またはその混合物を精密にピペッ
トで導入し、ペプチド重量対溶剤体積の比を８ｇ／１０
０ｃｍ３とした。
れた。試験すべき溶剤またはその混合物を精密にピペッ
トで導入し、ペプチド重量対溶剤体積の比を８ｇ／１０
０ｃｍ３とした。
管をスクリューストッパで閉じ、Ｈｅ ｉ ｄｏ １
ｐｈ、Ｔｏｐ−Ｍｉ ｘ型攪拌器に載せ、最高速度で６
０秒間振動させた。
ｐｈ、Ｔｏｐ−Ｍｉ ｘ型攪拌器に載せ、最高速度で６
０秒間振動させた。
固体が完全に溶解する場合は、溶解度が８ｇ７１００Ｃ
ｍ３であり、溶解しない場合は、溶剤を２倍量として上
記操作を反復する。
ｍ３であり、溶解しない場合は、溶剤を２倍量として上
記操作を反復する。
順次４回希釈しても、完全に溶解しない場合は、固体の
量を減らして測定を反復する。
量を減らして測定を反復する。
与えられた溶剤中の溶解度が０．０５ｇ／１００ｃｍ３
より小さい場合は、４０℃に加熱し、かつ付加的な攪拌
を４分間行っても、結果が変らないことを確めた。
より小さい場合は、４０℃に加熱し、かつ付加的な攪拌
を４分間行っても、結果が変らないことを確めた。
記；溶剤／添加剤の混合物の組成は重量比で表す。
７策なペプチドの溶解
伝↓ Ｌ−セリニル−し−チロシン、メチルエステル
塩酸塩（ＨＣＩ、５ｅｒ−〇ＣＨ３） 次の溶剤中の溶解度Ｓを測定した。
塩酸塩（ＨＣＩ、５ｅｒ−〇ＣＨ３） 次の溶剤中の溶解度Ｓを測定した。
ジクロロメタン： ｓｈｏ、０５ｇ／１００ｃｍ３ジク
ロロメタン／フェノールの４／１混合物： ８＞ｓ ＞
４ ｇ＞ １００ ｃｍ３例λ Ｌ−）リプトファニル
ーＬ−セリニル−Ｌ−チロシン メチルエステルトリフ
ルオロ酢酸塩（ＣＦ Ｃ０ＯＨ，Ｔｒｐ−３ｅｒ−Ｔ
ｙｒ−〇ＣＨ３）例１と同様にして次の溶剤中の溶解度
Ｓを測定した。
ロロメタン／フェノールの４／１混合物： ８＞ｓ ＞
４ ｇ＞ １００ ｃｍ３例λ Ｌ−）リプトファニル
ーＬ−セリニル−Ｌ−チロシン メチルエステルトリフ
ルオロ酢酸塩（ＣＦ Ｃ０ＯＨ，Ｔｒｐ−３ｅｒ−Ｔ
ｙｒ−〇ＣＨ３）例１と同様にして次の溶剤中の溶解度
Ｓを測定した。
ジク。。７タン： ｓｈｏ、０５ｇ７１００ｃｍ３００
０ｍ３ ジクロロメタン／フェノールの４／ １混合物： ８＞
ｓ＞４ｇ＞１９ｉ１３ Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−
セリニル−Ｌ−チロシンＴｒ ｐ−３ｅ ｒ−Ｔｙ ｒ
−○ＣＨ３）例１と同様にして溶解度Ｓを測定した。
０ｍ３ ジクロロメタン／フェノールの４／ １混合物： ８＞
ｓ＞４ｇ＞１９ｉ１３ Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−
セリニル−Ｌ−チロシンＴｒ ｐ−３ｅ ｒ−Ｔｙ ｒ
−○ＣＨ３）例１と同様にして溶解度Ｓを測定した。
ジクロロメタ：／：Ｓ＜領 ０５ ｇ ７１００ ｃ
ｍ ３ジクロロメタン／フエノールの４／１混合物；
ｓ＞８ｇ／ｌ ００ｃｍ３メチルエステル ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物：ｓ＞８ｇ／１００゜ｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメトキシフエノールの４／
１混合物：ｓ＞８ｇ７１０Ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメチルフエノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／１０ｏｍ３ ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物：ｓ〉８ｇ／１０ｏｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＞８ｇ７１００ｃジクロロメタン／２−メトキシ
フェノールの４ ／ １ 混合物： ｓ＞１６ｇ／１０
０゜ｍ３ ジクロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：ｓ＞８ｇ／ １００ ｃ ｍ ３ ジクロロメタン／２，３，４，５．６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物： ｓ＞８ ｇ／ １００ｃ
ｍ３ 酢酸エチル： ｓ＜０． ０５ ｇ７１００ ｃｍ３酢
酸エチル：フェノールの９／１混合物： ｓ＝８ｇ７１
００ｃｍ３例１と同様にして溶解度Ｓを測定した。
ｍ ３ジクロロメタン／フエノールの４／１混合物；
ｓ＞８ｇ／ｌ ００ｃｍ３メチルエステル ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混
合物：ｓ＞８ｇ／１００゜ｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメトキシフエノールの４／
１混合物：ｓ＞８ｇ７１０Ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメチルフエノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／１０ｏｍ３ ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物：ｓ〉８ｇ／１０ｏｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＞８ｇ７１００ｃジクロロメタン／２−メトキシ
フェノールの４ ／ １ 混合物： ｓ＞１６ｇ／１０
０゜ｍ３ ジクロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：ｓ＞８ｇ／ １００ ｃ ｍ ３ ジクロロメタン／２，３，４，５．６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物： ｓ＞８ ｇ／ １００ｃ
ｍ３ 酢酸エチル： ｓ＜０． ０５ ｇ７１００ ｃｍ３酢
酸エチル：フェノールの９／１混合物： ｓ＝８ｇ７１
００ｃｍ３例１と同様にして溶解度Ｓを測定した。
ジクロロメタン： ｓ＜０．０５ｇ７１００ｃｍ３ジク
ロロメタン／フエノールの４／１混合物： ｓ＝２ｇ７
１００ｃｍ３伝Σ：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
−ピログルタニル−Ｌ−ヒスチジン（Ｚ−ｐ Ｇ ｌ
ｕ −Ｈｉ ｓ）例１と同様にして溶解度Ｓを測定し
た。
ロロメタン／フエノールの４／１混合物： ｓ＝２ｇ７
１００ｃｍ３伝Σ：Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
−ピログルタニル−Ｌ−ヒスチジン（Ｚ−ｐ Ｇ ｌ
ｕ −Ｈｉ ｓ）例１と同様にして溶解度Ｓを測定し
た。
ジクロロメタン：Ｓ〈０．０５ｇ／１０１００Ｃジクロ
ロメタン／フェノールの４／１混合物： ８＞ｓ＞４ｇ
７１００ｃｍ３ジクロロメタン／４−メトキシフェノー
ルの４／１混合物：２〉ｓ〉１ｇ／１０ｏｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＝０．３ｇ／１０ｏｆｆ１３ ジクロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：８〉Ｓ〉４ｇ／１００ｃｍ３ ２−’７ＧＯ７エ／−）’ｖ： ８＞ｓ＞４ｇ／１００
ｃｍ３ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタンゐ４
／１混合物：８〉Ｓ〉４ｇ／１０ｃｍ３ 倒立 Ｌ−アルギニル−Ｌ−プロリン、二塩酸塩（２Ｈ
ＣＩ、Ａｒｇ−Ｐｒｏ）例１と同様にして溶解度Ｓを測
定した。
ロメタン／フェノールの４／１混合物： ８＞ｓ＞４ｇ
７１００ｃｍ３ジクロロメタン／４−メトキシフェノー
ルの４／１混合物：２〉ｓ〉１ｇ／１０ｏｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＝０．３ｇ／１０ｏｆｆ１３ ジクロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：８〉Ｓ〉４ｇ／１００ｃｍ３ ２−’７ＧＯ７エ／−）’ｖ： ８＞ｓ＞４ｇ／１００
ｃｍ３ペンタフルオロフェノール／ジクロロメタンゐ４
／１混合物：８〉Ｓ〉４ｇ／１０ｃｍ３ 倒立 Ｌ−アルギニル−Ｌ−プロリン、二塩酸塩（２Ｈ
ＣＩ、Ａｒｇ−Ｐｒｏ）例１と同様にして溶解度Ｓを測
定した。
ジクロロメタン： ｓ＜０．０５ｇ７１００ｃｍ３ジク
ロロメタン／フエノールの４／１混合物： ｓ＝２ ｇ
／ １００ ｃｍ３ジクロロメタン／２−クロロフェノ
ールの１／１混合物： ２＞ｓ＞１ ｇ／１００゜ｍ３ 伝Ｌ Ｌ−口イシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−プロリル−
グリシンアミド塩酸塩（ＨＣＩ、Ｌｅｕ＝Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２）例１と同様にして溶解度Ｓを測定
した。
ロロメタン／フエノールの４／１混合物： ｓ＝２ ｇ
／ １００ ｃｍ３ジクロロメタン／２−クロロフェノ
ールの１／１混合物： ２＞ｓ＞１ ｇ／１００゜ｍ３ 伝Ｌ Ｌ−口イシル−Ｌ−アルギニル−Ｌ−プロリル−
グリシンアミド塩酸塩（ＨＣＩ、Ｌｅｕ＝Ａｒｇ−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２）例１と同様にして溶解度Ｓを測定
した。
ジクロロメタン： ｓ＜０． ０５ ｇ／ １００ ｃ
ｒｎ３ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／
１混合物：Ｓ＝４ｇ／１００Ｃジクロロメタン／フェノ
ールの４／１混合物： ｓ＝４ ｇ７１００ ｃｍ３ジ
クロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの４
／１混合物−ｓ＝４ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−クロロフェノールの２／１混合物
：２＞ｓ＞１ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，３，４，５．６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：４＞ｓ＞２ｇ／１００ｃｍ
３ ２−クロロフェノール：４〉Ｓ〉２ｇ／１０１００Ｃジ
クロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混合
物：１＞ｓ＞０．５ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＝１ｇ７１００ｃｍ３ 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試、験した。
ｒｎ３ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４／
１混合物：Ｓ＝４ｇ／１００Ｃジクロロメタン／フェノ
ールの４／１混合物： ｓ＝４ ｇ７１００ ｃｍ３ジ
クロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの４
／１混合物−ｓ＝４ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−クロロフェノールの２／１混合物
：２＞ｓ＞１ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，３，４，５．６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物：４＞ｓ＞２ｇ／１００ｃｍ
３ ２−クロロフェノール：４〉Ｓ〉２ｇ／１０１００Ｃジ
クロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混合
物：１＞ｓ＞０．５ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＝１ｇ７１００ｃｍ３ 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試、験した。
ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの４／１混合物
：ｓ＜０．５ｇ／１００ｃｒｎ３ 例８Ｌ−プロリルーグリシンアミド塩酸塩（ＨＣＩ、Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２例１と同様に溶解度Ｓを測定した ジクロロメタン： ｓ＜０．０５ｇ７１００ｃｍ３ジク
ロロメタ：／ ／ ７ ｘ ／−ルの４／１混合物：
ｓ＞１６ｇ７１００ｃｍ３ジクロロメタン／４−メトキ
シフェノールの４／１混合物：８＞ｓ ＞４ ｇ ／
１００ ｃｍ３ジクロロメタン／２−クロロフェノール
の２ ／ １ 混合物：２＞ｓ＞１ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：４＞ｓ＞２ｇ／１００ ｃ ｍ ３ 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試、験した。
：ｓ＜０．５ｇ／１００ｃｒｎ３ 例８Ｌ−プロリルーグリシンアミド塩酸塩（ＨＣＩ、Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ２例１と同様に溶解度Ｓを測定した ジクロロメタン： ｓ＜０．０５ｇ７１００ｃｍ３ジク
ロロメタ：／ ／ ７ ｘ ／−ルの４／１混合物：
ｓ＞１６ｇ７１００ｃｍ３ジクロロメタン／４−メトキ
シフェノールの４／１混合物：８＞ｓ ＞４ ｇ ／
１００ ｃｍ３ジクロロメタン／２−クロロフェノール
の２ ／ １ 混合物：２＞ｓ＞１ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：４＞ｓ＞２ｇ／１００ ｃ ｍ ３ 比較のために、本発明でない添加剤のジメチルホルムア
ミドを試、験した。
ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの４／１混合物
：ｓ＜０．５ ｇ ７１００ ｃｍ３ （Ｍ９ Ｎ−ε−トリフルオロアセチル−し−リシル
−Ｌ−プロリン（Ｌｙｓ（Ｔ ＦＡ）−Ｐｒ ｏ） 例１と同様にして溶解度を測定した。
：ｓ＜０．５ ｇ ７１００ ｃｍ３ （Ｍ９ Ｎ−ε−トリフルオロアセチル−し−リシル
−Ｌ−プロリン（Ｌｙｓ（Ｔ ＦＡ）−Ｐｒ ｏ） 例１と同様にして溶解度を測定した。
ジ’ｙＵＯメタンニｓ＜０．０５ｇ７１００ｃｍ３酢酸
エチル： ｓ＜０．０５ ｇ７１００ ｃｍ３ジクロロ
メタン／フェノールの４／１混合物： ｓ＞２０ｇ／１
００ｃｍ３ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノール
の４／１混合物：ｓ〉８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメトキシフエノールの４／
１混合物；ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメチルフエノールの４／１
混合物：ｓ＝８ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−メトキシフェノールの４７１混合
物：ｓ＞８ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：ｓ＞８ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合物
：ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，３，４，５．６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物： ｓ＞８ ｇ７１００ｃｍ
３ 酢酸エチ）’ｖ／ ７ 工／ −）’ｖ（７） ９ ／
１混合物ｓ＝８ｇ７１００ｃｍ３伝よ０Ｎ−ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル−ペンタグリシンメチルエステル（
Ｂｏ ｃ −Ｇ １ ｙ−Ｇ ｌ ｙ−Ｇ ｌ ｙ−Ｇ
ｌ ｙ−Ｇ ｌ ｙ−ＯＣＨ３）： （Ｂｏｃ Ｇ
ｌｙ５−ＯＣＨ３） ジクロロメタン中の溶解度は、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ −０
ＣＨ３飽和溶液として、外部標準を使用してＨＰＬＣに
より測定した。
エチル： ｓ＜０．０５ ｇ７１００ ｃｍ３ジクロロ
メタン／フェノールの４／１混合物： ｓ＞２０ｇ／１
００ｃｍ３ジクロロメタン／４−ｔ−ブチルフェノール
の４／１混合物：ｓ〉８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメトキシフエノールの４／
１混合物；ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−シメチルフエノールの４／１
混合物：ｓ＝８ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−ヒドロキシピリジンの５／１混合
物：ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，６−ジクロロフェノールの４／１
混合物：ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−メトキシフェノールの４７１混合
物：ｓ＞８ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／３−）リフルオロメチルフェノールの
４／１混合物：ｓ＞８ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合物
：ｓ＞８ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／２，３，４，５．６−ペンタフルオロ
フェノールの４／１混合物： ｓ＞８ ｇ７１００ｃｍ
３ 酢酸エチ）’ｖ／ ７ 工／ −）’ｖ（７） ９ ／
１混合物ｓ＝８ｇ７１００ｃｍ３伝よ０Ｎ−ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル−ペンタグリシンメチルエステル（
Ｂｏ ｃ −Ｇ １ ｙ−Ｇ ｌ ｙ−Ｇ ｌ ｙ−Ｇ
ｌ ｙ−Ｇ ｌ ｙ−ＯＣＨ３）： （Ｂｏｃ Ｇ
ｌｙ５−ＯＣＨ３） ジクロロメタン中の溶解度は、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ −０
ＣＨ３飽和溶液として、外部標準を使用してＨＰＬＣに
より測定した。
他の溶解度は例１と同様にして測定した。
ジクロロメタ：／： ｓ＝０．３３ｇ／１００ｃｍ３ジ
クロロメタン／フェノールの２０／１混合物：Ｓ＝領５
ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝４ｇ
／１００ｃｍ３ アニソール：ｓ＜０．０５ｇ／１００ｃｍ３アニソール
／フェノールの４／１混合物：ｓ＝４ｇ／１００ｃｍ３ ２−クロロフェノール： ｓ＞８ｇ７１００ｃｍ３ジク
ロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合物：２
＞ｓ＞１ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４ ／ １
混合物：４＞ｓ＞２ｇ／１０ｏｒｎ３ 例１１Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−ペンタグリシ
ン ベンジルエステル（Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−○−ＣＨ２−Ｐｈ）ジクロロメタ
ン中の溶解度は、飽和溶液の上澄液にいき外部標準を使
用してＨＰＬＣにより測定した。他の溶解度は例１と同
様にして測定した。
クロロメタン／フェノールの２０／１混合物：Ｓ＝領５
ｇ／１００ｃｍ３ ジクロロメタン／フェノールの４／１混合物：ｓ＝４ｇ
／１００ｃｍ３ アニソール：ｓ＜０．０５ｇ／１００ｃｍ３アニソール
／フェノールの４／１混合物：ｓ＝４ｇ／１００ｃｍ３ ２−クロロフェノール： ｓ＞８ｇ７１００ｃｍ３ジク
ロロメタン／２−クロロフェノールの４／１混合物：２
＞ｓ＞１ｇ７１００ｃｍ３ ジクロロメタン／４−メトキシフェノールの４ ／ １
混合物：４＞ｓ＞２ｇ／１０ｏｒｎ３ 例１１Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−ペンタグリシ
ン ベンジルエステル（Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−○−ＣＨ２−Ｐｈ）ジクロロメタ
ン中の溶解度は、飽和溶液の上澄液にいき外部標準を使
用してＨＰＬＣにより測定した。他の溶解度は例１と同
様にして測定した。
ジクロロメタン：ｓ＝０．０７ｇ７１００ｃｍ３ジクロ
ロメタン／フエノールの９／１混合物：ｓ ＞５ ｇ７
１００ ｃｍ３ 比較のために、本発明でない添加剤を試、験した。
ロメタン／フエノールの９／１混合物：ｓ ＞５ ｇ７
１００ ｃｍ３ 比較のために、本発明でない添加剤を試、験した。
ジクロロメタン／トリフルオロエタノールの９／１混合
物：ｓく２ｇ／１００ｃｍ３＊ ジクロロメタン／２−オクタツールの９／１混合物：Ｓ
く２ｇ／１０１００Ｃ＊ ジクロロメタン／ピバル酸の９／１混合物：Ｓく２ｇ／
１００ｃｍ３＊ ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの９７１混合物
： ｓ＜２ｇ７１００ｃｍ３＊ ＬｉＣ１飽和ジクロロメタン：Ｓく２ｇ／１０１００Ｃ
＊＊２ｇ７１００ｃｍ３以下の濃度は試験しなかった。
物：ｓく２ｇ／１００ｃｍ３＊ ジクロロメタン／２−オクタツールの９／１混合物：Ｓ
く２ｇ／１０１００Ｃ＊ ジクロロメタン／ピバル酸の９／１混合物：Ｓく２ｇ／
１００ｃｍ３＊ ジクロロメタン／ジメチルホルムアミドの９７１混合物
： ｓ＜２ｇ７１００ｃｍ３＊ ＬｉＣ１飽和ジクロロメタン：Ｓく２ｇ／１０１００Ｃ
＊＊２ｇ７１００ｃｍ３以下の濃度は試験しなかった。
例１２ Ｎ−ベンジルオキシ−カルボニル−β−ベン
ジル−Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプロパンカ
ルボン酸 メチルエステル（Ｚ−Ａｓｐ−（○Ｂ ２１
） Ａ ｃ ｃ ＯＣＨ３）例１と同様にして溶
解度を測定した。
ジル−Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプロパンカ
ルボン酸 メチルエステル（Ｚ−Ａｓｐ−（○Ｂ ２１
） Ａ ｃ ｃ ＯＣＨ３）例１と同様にして溶
解度を測定した。
ｔ−ブチルメチル−Ｔ−−−ｒル： ｓ＜０．５ｇ７１
００ｃｍ３ｔ−ブチルメチルエーテル／４−ｔ−ブチル
フェノールの６／１混合物：Ｓ〉１２ ｇ７１００ ｃ
ｍ３ クロロヘンゼン： ｓ＜１．５ｇ／１００ｃｍ３クロロ
ベンセン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混合物：
ｓ＞２０ｇ／１０ｏｍ３ アニソール：ｓ＞２．５ｇ／１００ｃｍ３アニソール／
４−ｔ−ブチルフェノールの４：１混合物： ｓ＞２５
ｇ７１００ｃ酢酸エチ７１／ ： Ｓ＝２． ５ ｇ
／ １００ ｃｍ３酢酸エチル／２−ヒドロキシピリジ
ン飽和溶液：１０＞ｓ＞５ｇ７１００ｃｍ３ ペプチドの合成 例１３ Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプロパ
ン−カルボン酸プロピルエステル（Ａｓｐ−Ａｃｃ−〇
ｐｒ） 記：このジペプチドエステルは、Ｃ，Ｍａｐｅ ｌ ｌ
ｉ、Ｍ、Ｇａｒｙ Ｎｅｗｔｏｎ、Ｃ，Ｅ、Ｒｉｎ
ｇｏｌｄおよびＣ，Ｈ，Ｓ ｔ ａｍｍｅ ｒノＩ ｎ
ｔ、 Ｇ、 Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅ
ｓ、 ３０．４９８−５１０ （１９８７）によれば、
蔗糖の２００倍の甘味を有する。
００ｃｍ３ｔ−ブチルメチルエーテル／４−ｔ−ブチル
フェノールの６／１混合物：Ｓ〉１２ ｇ７１００ ｃ
ｍ３ クロロヘンゼン： ｓ＜１．５ｇ／１００ｃｍ３クロロ
ベンセン／４−ｔ−ブチルフェノールの４／１混合物：
ｓ＞２０ｇ／１０ｏｍ３ アニソール：ｓ＞２．５ｇ／１００ｃｍ３アニソール／
４−ｔ−ブチルフェノールの４：１混合物： ｓ＞２５
ｇ７１００ｃ酢酸エチ７１／ ： Ｓ＝２． ５ ｇ
／ １００ ｃｍ３酢酸エチル／２−ヒドロキシピリジ
ン飽和溶液：１０＞ｓ＞５ｇ７１００ｃｍ３ ペプチドの合成 例１３ Ｌ−アスパルチル−１−アミノシクロプロパ
ン−カルボン酸プロピルエステル（Ａｓｐ−Ａｃｃ−〇
ｐｒ） 記：このジペプチドエステルは、Ｃ，Ｍａｐｅ ｌ ｌ
ｉ、Ｍ、Ｇａｒｙ Ｎｅｗｔｏｎ、Ｃ，Ｅ、Ｒｉｎ
ｇｏｌｄおよびＣ，Ｈ，Ｓ ｔ ａｍｍｅ ｒノＩ ｎ
ｔ、 Ｇ、 Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅ
ｓ、 ３０．４９８−５１０ （１９８７）によれば、
蔗糖の２００倍の甘味を有する。
３の三ロパイレックス反応器を乾燥窒素流で不活性とし
、１７℃の水で冷却し、アニソール３７．５ｃｍ３の攪
拌床に、下記を順次導入した。
、１７℃の水で冷却し、アニソール３７．５ｃｍ３の攪
拌床に、下記を順次導入した。
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−β−ベンジル−アスパ
ラギン酸（２５ミリモル）Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３０ミ
リモル）およびヒドロキシピリジン（４２，５ミリモル
）。
ラギン酸（２５ミリモル）Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（３０ミ
リモル）およびヒドロキシピリジン（４２，５ミリモル
）。
懸濁液は急速に溶液となり、１５分の終りに交互に下記
を溶液に加えた。
を溶液に加えた。
１−アミノシクロプロパンカルボン酸プロピルエステル
（３０ミリモル）および４−ｔ−ブチルフェノール（５
ｇ） １夜攪拌した後３０℃において反応混合物を２Ｎ塩酸２
５０ｍ３で洗浄し、無機物を除去した水１０ｃｍ お
よびＮａＣｌ飽和塩水３０ｍ３からなる水溶液１工程２
縮合工程に連続して保護基の加水分解有機相４０ｃｍ
を、予め蒸留水１０００ｍ３ およびカーボンに３
％吸着させたパラジウム２．８ｇを入れ、窒素で不活性
とした２０００ｍ３の三ロパイレックス反応器に移した
。
（３０ミリモル）および４−ｔ−ブチルフェノール（５
ｇ） １夜攪拌した後３０℃において反応混合物を２Ｎ塩酸２
５０ｍ３で洗浄し、無機物を除去した水１０ｃｍ お
よびＮａＣｌ飽和塩水３０ｍ３からなる水溶液１工程２
縮合工程に連続して保護基の加水分解有機相４０ｃｍ
を、予め蒸留水１０００ｍ３ およびカーボンに３
％吸着させたパラジウム２．８ｇを入れ、窒素で不活性
とした２０００ｍ３の三ロパイレックス反応器に移した
。
混合物を５５℃とし、常圧の水素気流を４時間通した。
工程３ ペプチドの分離
反応混合物をミリポア５Ａのフィルタで濾過し、触媒は
フィルタ上で３５℃の水１００ｍ３で２回洗浄した。有
機相は沈降分離して除去した。
フィルタ上で３５℃の水１００ｍ３で２回洗浄した。有
機相は沈降分離して除去した。
液相を酢酸エチル３００ｍ３で３回洗浄した後、真空蒸
留して、残渣６０ｇを得た。
留して、残渣６０ｇを得た。
これは自然に結晶しな。
懸濁液にアセトン２４０ｃｍ３を加えて、多孔率Ｎｏ、
４のガラスフィルタで濾過した。
４のガラスフィルタで濾過した。
固体はアセトンで洗浄し、４．４１ｇの定量になるまで
乾燥した。濾液は乾燥するまで濃縮し、水１１０ｍ３に
溶解した。
乾燥した。濾液は乾燥するまで濃縮し、水１１０ｍ３に
溶解した。
アセトン６６Ｃｍ３を加えて第２の固体を分離し、これ
は真空乾燥後１．５２ｇであった。
は真空乾燥後１．５２ｇであった。
結果
Ｌ−アスパルチル−１−アミノ−シクロプロパン−カル
ボン酸プロピルエステル−水和物を収率８６％で得、こ
れは融点１７９℃の白色固体であった。
ボン酸プロピルエステル−水和物を収率８６％で得、こ
れは融点１７９℃の白色固体であった。
ＤＭＳＯ中の溶液として、ＲＭＮ ＩＨスペクトルは３
６０Ｍｈｚを示シた。
６０Ｍｈｚを示シた。
元素分析：Ｃ１１，Ｈ２Ｓ、Ｎ２．０５．ＩＨ２０計算
値：Ｃ４７，８３，Ｈ７，３，ＮＩｏ、１４，０３４．
７６実験値：Ｃ４７，，６９，Ｈ７，１，ＮＩｏ、０１
，０３４．８１含水量（Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ）
：６．４８％電位差計測定 官能性アミン基：１０２％ 官能性酸基：９８％ 例１４ 比較のために例１３の試験において、４−ｔ−ブチルフ
ェノールの添加および２−ヒドロキシピリジンの添加を
省いたが、急速に攪拌不能な反応混合物となった。
値：Ｃ４７，８３，Ｈ７，３，ＮＩｏ、１４，０３４．
７６実験値：Ｃ４７，，６９，Ｈ７，１，ＮＩｏ、０１
，０３４．８１含水量（Ｋａｒｌ Ｆｉｓｃｈｅｒ）
：６．４８％電位差計測定 官能性アミン基：１０２％ 官能性酸基：９８％ 例１４ 比較のために例１３の試験において、４−ｔ−ブチルフ
ェノールの添加および２−ヒドロキシピリジンの添加を
省いたが、急速に攪拌不能な反応混合物となった。
液−抽出によるペプチドの精製
例１５ グリシル−グリシル−Ｌ−フェニルアラニル−
Ｌ−ロイシン ベンジルエステル （Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＢｚ１）このテトラペプチドを合成
した後に、水洗して精製するために、このテトラペプチ
ドのジクロロメタンと水との間の分配を次に試験した。
Ｌ−ロイシン ベンジルエステル （Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−
Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＢｚ１）このテトラペプチドを合成
した後に、水洗して精製するために、このテトラペプチ
ドのジクロロメタンと水との間の分配を次に試験した。
ジクロロメタン１２ｃｍ３中のＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ
−Ｌｅｕ−ＯＢｚ ｌ塩酸塩０．９ミリモルの溶液を、
２Ｎ ＫＨＣ○３水溶液３ｃｍ の存在で強く攪拌
した。この混合物は乳濁液とな′す、多数日間安定であ
った。フェノールの存在で比較試、験を行った。
−Ｌｅｕ−ＯＢｚ ｌ塩酸塩０．９ミリモルの溶液を、
２Ｎ ＫＨＣ○３水溶液３ｃｍ の存在で強く攪拌
した。この混合物は乳濁液とな′す、多数日間安定であ
った。フェノールの存在で比較試、験を行った。
例１６ フェノール３．９ｇを有機溶媒に加えた後に、
例１５と同様に分配試験を行った。同様に攪拌した後に
２つの脂質液相を得、少なくとも１５分間これを沈降分
離した。ＨＰＬＣ分析の結果、水相は使用したテトラペ
プチドの僅か０゜４％を含んだ。
例１５と同様に分配試験を行った。同様に攪拌した後に
２つの脂質液相を得、少なくとも１５分間これを沈降分
離した。ＨＰＬＣ分析の結果、水相は使用したテトラペ
プチドの僅か０゜４％を含んだ。
例１７Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−フェニル
アラニル−Ｌ−バリンベンジルエステル（Ｂｏｃ−Ｐｈ
ｅ−Ｖａ ｌ−０５ｚ ｌ）５００ｍ３のパイレックス
反応器に順次下記を常温で導入した。
アラニル−Ｌ−バリンベンジルエステル（Ｂｏｃ−Ｐｈ
ｅ−Ｖａ ｌ−０５ｚ ｌ）５００ｍ３のパイレックス
反応器に順次下記を常温で導入した。
Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−し−フェニルアラニ
ンの２−ヒドロキシピリジンエステル３．６ミリモル、
１．２３ｇ、バリン ベンジルエステル塩酸塩３ミリモ
ル、０．７３ｇ。
ンの２−ヒドロキシピリジンエステル３．６ミリモル、
１．２３ｇ、バリン ベンジルエステル塩酸塩３ミリモ
ル、０．７３ｇ。
液を形成した。
これに対して、反応溶剤としてジクロロメタン／フェノ
ールの９／１混合物を使用したときは、すべての洗浄は
困難なく行われ、どの場合も沈降分離は急速に行われた
。
ールの９／１混合物を使用したときは、すべての洗浄は
困難なく行われ、どの場合も沈降分離は急速に行われた
。
例１８
旦他 ペプチド縮合工程におけるフェノールの影響を検
討する。
討する。
検肘赳な締金
Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−０−Ｐｙ＋ＨＣ１，Ｖａ １−ＯＢｚ
ｌ＋ＮＭＭＣＨ２Ｃ１２（フェノールありおよびなし
）Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ ０Ｂｚｌ＋ＨＣ１，ＮＭ
Ｍ操作 縮合は還流塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシ−
し−フェニルアラニン−２−ヒドロキシピリジンエステ
ル（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−〇ＰＹ）１．２当量と、バリンベ
ンジルエステル（Ｖａｌ ０Ｂｚｌ）塩酸塩１当量と
を、Ｎメチルモルホリン（ＮＭＭ）の存在で接触させた
。
ｌ＋ＮＭＭＣＨ２Ｃ１２（フェノールありおよびなし
）Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ ０Ｂｚｌ＋ＨＣ１，ＮＭ
Ｍ操作 縮合は還流塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシ−
し−フェニルアラニン−２−ヒドロキシピリジンエステ
ル（Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−〇ＰＹ）１．２当量と、バリンベ
ンジルエステル（Ｖａｌ ０Ｂｚｌ）塩酸塩１当量と
を、Ｎメチルモルホリン（ＮＭＭ）の存在で接触させた
。
Ｖａｌ ０Ｂｚｌの消失および上記ペプチドの出現が
認められた。相関関係は測定の正確の限度で完全であっ
た。
認められた。相関関係は測定の正確の限度で完全であっ
た。
表１にペプチドの縮合収率を示す。これによれば活性化
および反応速度、Ｖａｌ ０Ｂｚｌ残留率に対する溶剤
の顕著な影響がわかる。
および反応速度、Ｖａｌ ０Ｂｚｌ残留率に対する溶剤
の顕著な影響がわかる。
２つの試験は完全な均一相媒質で行った。１つはフェノ
ールＣ６Ｈ５０Ｈの１０重量％の塩化メチレン中で、他
はフェノールなしの塩化メチレン中で縮合させる。
ールＣ６Ｈ５０Ｈの１０重量％の塩化メチレン中で、他
はフェノールなしの塩化メチレン中で縮合させる。
特に反応速度に顕著な差があり、ペプチドの収率９０％
は、塩化メチレン単独では２時間を要しフェノール１０
重量％を含む塩化メチレン中では２０分で達成した。
は、塩化メチレン単独では２時間を要しフェノール１０
重量％を含む塩化メチレン中では２０分で達成した。
表１
縮合収率とＶａｉ ０Ｂｚｌ残留率に対するフェノール
の影響例１９ヘフチド縮合速度に対する○−クレソール
の９５８反応 ＣＨ２Ｃ１□ ＢｏｃＰｈｅＯ３ｕ −’： ＬｅｕＯＨ＋
ＤＩＰＥＡｏ−クレゾール １．２当量 １当量 １当量 ７
．２当量またはなしＢｏｃＰｈｅＬｅｕＯＨ＋ ＨＯ
３ｕ、 ＤＩＰＥＡ操作 塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−
Ｌ−フェニルアラニンのヒドロキシこはく酸エステル（
Ｂｏｃ Ｐｈｅ ０３ｕ）１．２当量と、遊離のロ
イシン（Ｌｅｕ ０Ｈ）１”Ｊ量とを、ジイソプロピ
ルエチルアミン（Ｄ Ｉ ＰＥＡ）１当量の存在で常温
で反応させた。
の影響例１９ヘフチド縮合速度に対する○−クレソール
の９５８反応 ＣＨ２Ｃ１□ ＢｏｃＰｈｅＯ３ｕ −’： ＬｅｕＯＨ＋
ＤＩＰＥＡｏ−クレゾール １．２当量 １当量 １当量 ７
．２当量またはなしＢｏｃＰｈｅＬｅｕＯＨ＋ ＨＯ
３ｕ、 ＤＩＰＥＡ操作 塩化メチレン中で、Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−
Ｌ−フェニルアラニンのヒドロキシこはく酸エステル（
Ｂｏｃ Ｐｈｅ ０３ｕ）１．２当量と、遊離のロ
イシン（Ｌｅｕ ０Ｈ）１”Ｊ量とを、ジイソプロピ
ルエチルアミン（Ｄ Ｉ ＰＥＡ）１当量の存在で常温
で反応させた。
ロイシンは不溶性であるので、不均一相媒質で２つの試
験を行った。１つは〇−クレゾール７．２当量を加え、
他はこれを加えなかった。
験を行った。１つは〇−クレゾール７．２当量を加え、
他はこれを加えなかった。
ジペプチドＢｏｃ Ｐｈｅ Ｌｅｕ ＯＨのロイ
シンに対する収率を時間を変えて測定した。
シンに対する収率を時間を変えて測定した。
表２に示すように、Ｏ−クレゾールは縮合反応速度に顕
著な効果を与える。反応１時間で収率を比較すると、０
−クレゾールを加えた場合は、加えない場合の６倍に達
した。
著な効果を与える。反応１時間で収率を比較すると、０
−クレゾールを加えた場合は、加えない場合の６倍に達
した。
表２
Ｂｏｃ
ｈｅ
ｅｕ
ＯＨ／ロイシン縮合収
率に対するＯ−クレゾールの影響
Claims (25)
- 【請求項１】ペプチドの合成および／または精製に使用
する溶解および反応媒質であって、水と混合しない溶剤
の群から選ばれた希釈剤ＡとフェノールＢを含むことを
特徴とする媒質。 - 【請求項２】フェノールＢ対希釈剤Ａとの重量比は、１
／２００〜１である、請求項１記載の媒質。 - 【請求項３】希釈剤は、芳香族、エーテル、エステルお
よびハロゲン化された溶剤の群から選ばれている、請求
項１記載の媒質。 - 【請求項４】フェノールＢは次の一般式（ I ）（Ｒ＿
１）＿ｎ−Ａｒ−Ｏ−Ｈ（ I ） （式中、Ａｒは単環もしくは多環の複素環または非複素
環の芳香族基を表し、置換基Ｒ＿１は同一でも相違して
いてもよく、ハロゲン原子；基−Ｚ−Ｒ＿２（Ｚは一重
結合または酸素原子であることができ、Ｒ＿２は水素；
ヒドロキシ化またはモノもしくはポリハロゲン化されて
いてもよい、多くとも８個の炭素原子を含むアルコール
またはアリール基）を表し、ｎは、ゼロまたは多くとも
芳香族核の置換可能な位置の数に等しい整数であるで示
される化合物およびそれらの混合物の群から選ばれてい
る、請求項１〜３のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項５】フェノールＢは多くとも３０個の炭素原子
を有する、請求項１〜４のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項６】フェノールの隣接位置の官能基は置換され
ていないか、または障害とならない基で占められている
、請求項１〜５のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項７】基−Ａｒは単環式芳香族である請求項４〜
６のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項８】式（ I ）において、基Ｒは次の基または
原子：メチル、エチル、プロピルおよびブチル； トリフルオロメチルおよびペンタフルオロメチル；メト
キシ、エトキシ、プロピロキシおよびブチロキシ；フェ
ニル、ヒドロキシフェニルおよびＡｒＯＨ；オキシフェ
ニルおよびヒドロキシオキシフェニル；ふっ素、塩素お
よび臭素 の群から選ばれている、請求項４〜７のいずれかに記載
の媒質。 - 【請求項９】式（ I ）において、ｎは多くとも５に等
しい、請求項４〜８のいずれかに記載の媒質。 - 【請求項１０】フェノールＡは、 一置換されていてもよいヒドロキシピリジン、一置換さ
れていてもよいヒドロキシキノリン、モノハロゲン化フ
ェノール、 ポリハロゲン化フェノール、 炭素原子１〜４個のアルキル基、炭素原子１〜４個のア
ルコキシ基、炭素原子１〜２個のペルフルオロアルキル
基または２，２，２−トリフルオロエチル基で一置換ま
たは二置換されたフェノール、 ジフェノール、 狭義のフェノール、 一置換または二置換されていてもよいナフトールから選
ばれている、請求項１〜６，８および９のいずれかに記
載の媒質。 - 【請求項１１】縮合していないアミノ酸も含み、１〜５
０員のペプチドをさらに含む、請求項１〜１０のいずれ
かに記載の媒質。 - 【請求項１２】ペプチドは、Ｃが保護されている、請求
項１１記載の媒質。 - 【請求項１３】アミン化されたペプチドは、Ｎが保護さ
れている、請求項１１記載の媒質。 - 【請求項１４】アミン化されたペプチドは、官能性酸基
上で活性化されている、請求項１３記載の媒質。 - 【請求項１５】末端のＣもＮも保護されていないペプチ
ドをさらに含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の媒
質。 - 【請求項１６】前記ペプチドの濃度は少なくとも１０＾
−＾２Ｍである、請求項１５記載の媒質。 - 【請求項１７】前記ペプチドは、アミノ酸である、請求
項１５記載の媒質。 - 【請求項１８】保護されていてもよいペプチドを、末端
のＣもＮも官能性酸基上で保護されていない最初のアミ
ノ酸またはペプチドを原料とし、官能性酸基上で活性化
され、かつ官能性アミン基上で保護されているアミノ酸
を加えて、保護されていてもよいペプチドを液体媒質中
で合成する方法であって、反応剤を請求項１〜１０のい
ずれかに記載の媒質に溶解することを特徴とする方法。 - 【請求項１９】官能性酸基上で保護されている最初のア
ミノ酸またはペプチドを原料とし、官能性酸基上で活性
化され、かつ官能性アミン基上で保護されているアミノ
酸を加えて、保護されていてもよいペプチドを液体媒質
中で合成する方法であって、 請求項１〜１０のいずれかに記載の媒質中に反応剤を溶
解することを特徴とする方法。 - 【請求項２０】請求項１によって溶解された最初のアミ
ノ酸またはペプチドを原料とし、末端の官能性酸基のＣ
が活性化され、末端の官能性アミン基のＮが保護されて
いる他のペプチドを、液体媒質中で縮合させて、保護さ
れていてもよいペプチドを合成する方法であって、反応
剤を請求項１〜１０のいずれかに記載の媒質に溶解する
ことを特徴とする方法。 - 【請求項２１】官能性アミン基がカルバメート基によっ
て、またはβジカルボニル化された化合物との反応によ
って保護されている、請求項１８〜２０のいずれかに記
載の方法。 - 【請求項２２】最初のアミノ酸またはペプチ
ドの末端の官能性酸基のＣは、エステル化またはアミド
化によって保護されている、請求項１９〜２１のいずれ
かに記載の方法。 - 【請求項２３】Ｎが保護されている反応剤の官能性酸基
を、有機酸または無機酸の塩化物、クロロぎ酸アルキル
、カルボジイミド、活性化されたエステル、またはアシ
ルイミダゾールによって活性化する、請求項１８〜２１
のいずれかに記載の方法。 - 【請求項２４】末端のＮが保護されているアミノ酸また
はペプチドを、最初のアミノ酸またはペプチドと縮合さ
せた後に、末端の官能性アミン基のＮを加水分解、酸性
分解または塩基性分解によって遊離させる、請求項１８
〜２１のいずれかに記載の方法。 - 【請求項２５】末端のＣが保護されているか、もしくは
保護されていないアミノ酸またはペプチドを反応媒質に
導入し、次に官能性酸基上で活性化され、かつ官能性ア
ミン基上で保護されているペプチドまたはアミノ酸を加
え、この導入順はどちらでもよく、 反応終了後に、酸性、塩基性または中性の水溶液で有機
相を洗浄して、過剰の反応剤および副生物を除去し、次
に官能性アミン基を遊離させ、最後に、官能性酸基上で
活性化され、かつ官能性アミン基上で保護されている新
しいアミノ酸または新しいペプチドを導入する、請求項
１８〜２４のいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8915957A FR2655348B1 (fr) | 1989-12-04 | 1989-12-04 | Milieu reactionnel et solubilisant de peptides et procede de synthese de peptides utilisant ce milieu. |
| FR89/15957 | 1990-07-06 | ||
| FR9008593A FR2664278B1 (fr) | 1990-07-06 | 1990-07-06 | Milieu reactionnel et solubilisant de peptides et procede de synthese de peptides utilisant ce milieu. |
| FR90/08593 | 1990-07-06 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04117395A true JPH04117395A (ja) | 1992-04-17 |
| JP2608345B2 JP2608345B2 (ja) | 1997-05-07 |
Family
ID=26227706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2413572A Expired - Fee Related JP2608345B2 (ja) | 1989-12-04 | 1990-12-04 | ペプチドの溶解および反応媒質、これを使用するペプチドの合成方法 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5798443A (ja) |
| EP (1) | EP0432022B1 (ja) |
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| AT (1) | ATE144528T1 (ja) |
| AU (1) | AU648764B2 (ja) |
| CA (1) | CA2031484C (ja) |
| DE (1) | DE69028977T2 (ja) |
| DK (1) | DK0432022T3 (ja) |
| ES (1) | ES2097139T3 (ja) |
| GR (1) | GR3022118T3 (ja) |
| IE (1) | IE904349A1 (ja) |
| IL (1) | IL96537A (ja) |
| PT (1) | PT96062B (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2682376B1 (fr) * | 1991-10-11 | 1994-09-23 | Rhone Poulenc Chimie | Reactif utile pour le clivage et procede d'utilisation de ce reactif d'un groupe protecteur. |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1172768A (en) * | 1966-04-26 | 1969-12-03 | Ici Australia Ltd | New Graft Copolymers |
| DE1543610A1 (de) * | 1966-08-27 | 1969-07-31 | Hoechst Ag | Verfahren zur Herstellung von Aminosaeuren und Peptiden und deren Derivaten |
| BE785933A (fr) * | 1971-07-07 | 1973-01-08 | Ciba Geigy | Procede de preparation de peptides contenant de la cystine |
| DE2258662A1 (de) * | 1972-11-30 | 1974-06-06 | Hoechst Ag | Neue tertiaere phosphinoxyde und verfahren zu ihrer herstellung |
| US3860631A (en) * | 1973-12-06 | 1975-01-14 | Smithkline Corp | Process for the preparation of n-acyl-2- and 4-hydroxyphenylglycines |
| US4638000A (en) * | 1983-08-12 | 1987-01-20 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Condensed seven-membered ring compounds, their production and use |
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